Interações Antígeno-Anticorpo Ana Cláudia Carvalho Gouveia

Interações Antígeno-Anticorpo

Ana Cláudia Carvalho Gouveia

Interações Ag - Ac

Ligações não covalentesLigações não covalentes ReversíveisReversíveis

Características das interações Ag-AcAfinidade

Força de interação entre um único sítio de ligação Ag-Ac (em um único epítopo).

Características das interações Ag-Ac

Avidez

- Força de interações total entre Ac e Ag. - Soma das afinidades de todos epítopos envolvidos

Especificidade

- Capacidade do Ac distinguir seu imunógeno de outros Ags.

Características das interações Ag-Ac

Reação cruzada

- Dois Ag diferentes apresentam epítopos estruturalmente semelhantes

- Ac específicos para um epítopo se ligam a um epítopo não relacionado, mas com propriedades químicas similares.

Métodos

Reagentes não marcados(A ligação do Ac altera o estado físico do Ag)

Reação de aglutinação Reação de precipitação

Reagentes marcados RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

Reação de aglutinação

Direta eritrócitos (hemaglutinação), bactérias, fungos

Passiva látex

(Ag insolúvel)

Qualitativos

Semi-quantitativos

Ex.: classificação sanguinea Ex.: detectar infecções

Inibição da Aglutinação

- Quantidades de Ag solúvel são adicionadas a uma quantidade fixa de soro contendo o Ac.

Precipitado visível

Reação de precipitação

- A medida que a quantidade de Ag aumenta, a quantidade de precipitado também aumenta até um máximo, para depois diminuir.

Precipitação em solução

Precipitação em gel

Imunodifusão Radial

Precipitação em gel

Imunodifusão Dupla

Reagentes marcados

- Enzimas, fluorocromos, isótopos- Tipos:

RIA ELISA IF, citometria de fluxo Western Blotting

Radioimunoensaios Utilizam Ac conjugados com

radioisótopos para quantificar os ensaios.

• Vantagens:– Alta sensibilidade– Permite medidas rápidas e precisas

• Desvantagens:– Custo– Vida média dos reagentes– Risco operacional (radiação)

ELISA (Enzyme Linked Immunosorbent Assay)- Baseia-se na quantificação de uma reação enzimática associada com complexos imunes.

Imunofluorescência- Utilizam-se Ac ou Ag conjugados a moléculas reveladoraschamadas fluorocromos.

- Visualização em microscópio de fluorescência

Isotiocianato de fluoresceína (FITC) VERDE Ficoeritrina (FE) VERMELHA

Imunofluorescência Direta

Aplicações:

- Detecção direta de

microrganismos

(secreções, urina, cortes de

tecidos);

- Identificação de subpopulações

de linfócitos;

- Fenotipagem de células

tumoraisEx.: Detecção de Chlamydia trachomatis em secreção uretral

Ex.: Detecção de Ac anti- T. cruzi

Aplicações:

- Detecção de anticorpos específicos

contra

diversos microrganismos;

- Diagnóstico de doenças auto-

imunes;

Detecção de Ac anti-nuclear

Imunofluorescência Indireta

Citometria de fluxo

- Detecta, separa e quantifica células contendo um antígeno particular, marcadas com um fluorocromo; - Cada anticorpo é marcado com um fluorocromo diferente; - As células são então analizadas no citômetro de fluxo.

- As células saem de uma célula de fluxo e são iluminadas por um raio laser;

Citometria de fluxo

- A quantidade de raios laser que é dispersa para fora das células durante a passagem das mesmas pelo laser pode ser medida, o que proporciona informação a respeito do tamanho das células.

- O laser pode também excitar o fluorocromo nas células e a luz fluorescente emitida pode ser medida por um ou mais detectores.

Aplicações:

-Caracterização de populações celulares;

- Contagem de microrganismos;

- Separação de populações celulares de acordo com a densidade dos antígenos, tamanho e granulosidade das células;

- Análise de proliferação celular.

CD4

CD8

CD19

Western Blot

Ensaios imunocromatográficos

Teste rápido de HIV(Ac anti-HIV)

Diagnóstico de gravidez( detecção de beta HCG)

Técnicas de Biologia Molecular

Reação da Polimerase em Cadeia

Amostra + Reagentes

RT-PCR (Reverse Transcriptase – Polymerase Chain

Reaction)

Termociclador

Detecção da Amplificação

Produto (PCR ou RT-PCR)

Eletroforese em gel de

poliacrilamida

1. Qual a principal diferença entre os métodos de ELISA e imunofluorescência?

2. Em uma tipagem sanguínea houve aglutinação ao se misturar o sangue pesquisado e os soros anti-AB e anti-Rh. Determine o tipo sanguíneo e faça um esquema explicando a reação ocorrida.

3. Quais as características do anticorpo que podem influenciar a sua ligação ao antígeno?

4. Ao realizar os exames pré-natais, a gestante J.A.C, 26 anos, apresentou teste ELISA positivo para HIV. Como você interpreta este resultado? Descreva suscintamente a reação ocorrida.

5. Qual imunoensaio você escolheria para o acompanhar o prognóstico de um paciente com linfoma? Justifique sua resposta.

Relatório