Metodos Imunologicos Curso de Verao

Métodos Imunológicos III Curso de Férias em Imunologia e Biologia Molecular

Nicole Menezes de Souza Florianópolis, 2010

IMUNOCOMPLEXO

  Imunocomplexo: Ag Ac

Anticorpos: contra praticamente qualquer tipo de molécula química, de grande e pequeno porte;

Técnicas praticamente qualquer tipo de molécula em solução ou em células.

IMUNOCOMPLEXO

  Molécula simétrica;

  Amino-terminal (V): reconhecimento do antígeno;

  Carboxi-terminal (C): funções efetoras.

ANTICORPO POLICLONAL

  Mistura de moléculas de imunoglobulinas secretadas contra um antígeno específico, cada uma reconhecendo um epítopo diferente.

ANTICORPO MONOCLONAL

  Alta especificidade e afinidade;

  Um só epítopo de um antígeno;

  Ausência de anticorpos não específicos;

  Maior facilidade de caracterização.

ANTICORPO MONOCLONAL

ANTICORPO MONOCLONAL

  Purificação e seleção para identificação e isolamento de clones que secretam um anticorpo que interage com o antígeno desejado;

  Determinado anticorpo monoclonal por técnicas imunoquímicas (ELISA).

MÉTODOS IMUNOLÓGICOS

  Métodos imunológicos tornaram-se padrão para as técnicas de pesquisa e aplicações clínicas.

  Baseiam-se em um reagente e um analito que pode ser medido por uma molécula indicadora.

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche Indireto”

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Fase sólida   Reagente   Analito   Anticorpo marcado com enzima (Horseradish peroxidase –

HRP)   Substrato para a enzima   Leitor de placas de ELISA (D.O.)

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072556781/student_view0/chapter33/animation_quiz_1.html

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072556781/student_view0/chapter33/animation_quiz_1.html

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072556781/student_view0/chapter33/animation_quiz_1.html

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

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ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

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ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

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ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

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ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

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ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Ensaio “Sanduíche”

http://highered.mcgraw-hill.com/sites/0072556781/student_view0/chapter33/animation_quiz_1.html

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Avaliação do resultado:

ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

  Avaliação do resultado:

IMUNOFLUORESCÊNCIA

  Fase sólida   Substrato (p.ex. Tripanossoma cruzi)   Amostra   Anticorpo Fluorescente   Micróscopio de Fluorescência

IMUNOFLUORESCÊNCIA

  Anticorpo secundário ligado a uma molécula fluorescente (Isotiocianato de fluoresceína - FITC);

  Fluorescência direta e indireta;

IMUNOFLUORESCÊNCIA

  Molécula Fluorescente   FITC:

http://www.invitrogen.com/site/us/en/home/support/Tutorials.html

IMUNOFLUORESCÊNCIA

  Molécula Fluorescente   FITC:

IMUNOFLUORESCÊNCIA

http://www.microscopyu.com/articles/flurescence/fluorescenceintro.html

IMUNOFLUORESCÊNCIA

  Donça de Chagas:   Imunofluorescência   Hemaglutinação   ELISA

  Fluorescência indireta:

OBRIGADA!!!