UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTAS CENTRO DE DESENVOLVIMENTO E TECNOLOGIA GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIA...

UNIVERSIDADE FEDERAL DE PELOTASCENTRO DE DESENVOLVIMENTO E TECNOLOGIA

GRADUAÇÃO EM BIOTECNOLOGIADISCIPLINA DE ENGENHARIA TECIDUAL

PROFESSORA FERNANDA NEDEL

CLONAGEM

FERNANDO LOPEZ ALVEZVICTOR FONSECA

Pelotas, 2011

CLONAGEM

É um processo de reprodução assexuada que resulta na obtenção de cópias geneticamente

idênticas de um mesmo ser vivo. Microorganismo, vegetal ou animal.

CLONAGEM

Natural

Induzida

CLONAGEM

Natural

CLONAGEM

Induzida: Celular (Terapêutica) Reprodutiva (Organismos)

CLONAGEM INDUZIDA

CLONAGEM INDUZIDA

Terapêutica Técnica de SCNT; Isolamento das células no estágio de blastocisto; Cultivo das células tronco embrionárias;

Utilização: Desenvolvimento de estudos humanos; Tratamento de doenças.

CLONAGEM INDUZIDA

Terapêutica

Blastocisto Humano Colônia de células tronco embrionárias de humano, em feeder layer de fibroblasto embrionário de camundongo

CLONAGEM INDUZIDA

Reprodutiva SCNT; Eletrofusão; Formação do embrião; TE (Transferência de Embrião); Taxa de nascimento 2,5%;

Bipartição de embrião (estágio 6-8 células).

CLONAGEM REPRODUTIVA

CLONAGEM REPRODUTIVA

Dolly Primeiro mamífero clonado a partir de uma célula

adulta; Roslin Institute – Escócia; Importância na reprogramação; 237 oócitos – 29 embriões – 3 cordeiros – Dolly; DNA mitocondrial (incompatibilidade); Telômeros; Morte da Dolly devido à infecção respiratória.

CLONAGEM REPRODUTIVA

Dolly

CLONAGEM REPRODUTIVA

Lista de Animais Clonados

Girino 1952

Carpa 1963

Camundongo 1986

Ovelha 1996

Macaco Rhesus 2000

Gaur (Boi Selvagem) 2001

Vaca 2001 / 2005 (Brasil)

Gato 2001

Rato 2003

Mula 2003

Égua 2003

Cão 2005

Búfalo 2009

Camelo 2009

REPROGRAMAÇÃO

A célula doadora deve adotar os parametros de ciclo celular de um zigoto, como:

A. Replicação do DNA;

B. Condensação cromossômica;

C. Padrões embriônicos de replicação e transcrição de DNA.

FATORES QUE AFETAM REPROGRAMAÇÃO

Trichostatina A (TSA) é um composto orgânico que inibir seletivamente as deacetilases I e II de histonas mamíferas (HDAC).

A. Sincronia do ciclo celular da célula doadora com as celulas receptoras.

B. Origem tecidual da célula doadora, o número de passgens e as condições do meio de cultura.

C. Transferência de células com baixo nível de marcadores epigenéticos.

D. Modificando marcadores epigenéticos com drogas.

SERUM STARVATION

Diminuição de soro no meio de cultura – ou sua ausência – induzem quiescência das células e obriga elas a pararem no estágio de G0.

Alguns autores discutem a necessidade de indução para G0, pois células em estpagio G1 produziram animais.

TIPOS DE CÉLULAS DOADORAS

A. Células epiteliais mamárias;

B. Células do cumulus;

C. Fibroblasto da pele e outros tecidos;

D. Células de Sertoli.

Todavia não há um consenso de qual seria a célula doadora ideal para realizar-se a técnica.

EFEITO DE PASSAGENS

Células que sofreram passagens – até 15 – puderam ser utilizadas para produção de clones.

Células de fetos ou animais jovens são mais eficientes para transferência nuclear.

BENEFÍCIOS

A. Produção de transgênicos;

B. Proteção de espécies ameaçadas de extinção;

C. Produção de tecidos para xenotransplante.

OBRIGADO.