Aberrações cromossômicas e infertilidade

Universidade Federal do Triângulo MineiroInstituto de Ciências Biológicas e Naturais (ICBN)

Disciplina de Citogenética

Professoras Roseane Lopes da Silva Grecco e Marly Aparecida Spadotto Balarin

ABERRAÇÕES CROMOSSÔMICAS E

INFERTILIDADE

Juliana de Morais Palmieri da Silva&

Lais de Melo Valente Curso de Biomedicina

Uberaba - MGNovembro/2014

Alterações no cariótipo que podem gerar

infertilidade ou abortamento de repetição

Artigo Original

Introdução

O que é citogenética ?

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“Era do Bandamento”

Técnica que produz bandas horizontais com diferentesintensidades de coloração.

O padrão de bandas é individualmente específico docromossomo e permitiu a identificação de cada cromossomo.

Tornou-se possível o reconhecimento de anormalidadesestruturais associadas a síndromes genéticas específicas.

IntroduçãoA

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Investigação pré-natal de doenças genéticas

Detecção de anormalidades cromossômicas emindivíduos que apresentam alterações clínicasindicativas de doenças genéticas

Problemas de fertilidade e aborto habitual

Tumoral

Introdução

Para a realização do estudo citogenético AL

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Fazer uma revisão da literatura apresentando os aspectos importantes

e controversos da citogenética na infertilidade.

Objetivo

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Metodologia

Revisão bibliográfica a partir dos dados PubMed, Medline eEnsembl;

Foram utilizados os seguintes termos: infertilidade,abortamento de repetição, heterocromatina e cromossomos;

Não existiu um critério relevante para o período em que asbuscas foram realizadas;

Foram selecionados aqueles que possuíam um título e resumorelevantes com o contexto do trabalho;

Foram consultadas as diretrizes da Sociedade Americana deMedicina Reprodutiva.

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Heterocromatina

Heterocromatina constitutiva

Heterocromatina facultativa

MetodologiaA

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Figura 1 – Ideograma dos cromossomos humanos pelo bandamento G.

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InfertilidadeÉ a incapacidade de conseguir uma gravidez

dentro de um determinado período de tempo ou

a falha repetida de levar uma gravidez a termo

Primária

Secundária

Metodologia

Dentre as principais causas de infertilidade

o decréscimo na produção de espermatozoides,

a obstrução ductal;

a incapacidade de depositar o esperma na vagina,

o sêmen anormal;

fatores imunológicos.

Fatores femininos

(cerca de 50%)

a patologia das trompas de Falópio;

amenorreia e anovulação;

distúrbios ovulatórios menores;

fatores uterinos e cervicais;

fatores vaginais;

fatores imunológicos;

fatores metabólicos e nutricionais.

Idiopática ou desconhecida (em menos de 10%).

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OMetodologia

Fatores masculinos

(cerca de 40%)

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OMetodologia

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50% translocações equilibradas;

24% a translocações Robertsonianas;

12% a mosaicismo de alterações nos cromossomos

sexuais

E as demais consistiam em inversões e outras alterações

esporádicas.

Alterações cromossômicas em casais com

abortamento habitual

MetodologiaA

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Quando são examinadas grandes amostras de indivíduos da mesma

espécie, é comum observar a presença de variações nos blocos de

heterocromatina constitutiva. Essas variações são consideradas normais e

podem ser observadas em até 30% da população.

A inversão pericêntrica da região de heterocromatina constitutiva do

cromossomo 9 é considerada uma variação da normalidade dentro da

população, uma vez que raramente produz alterações fenotípicas em seus

portadores.

As inversões pericêntricas envolvendo o cromossomo 9 são as mais

frequentes, correspondendo a mais de 30% de todas as inversões

cromossômicas encontradas, sendo que apenas aquelas de grandes blocos

desse cromossomo poderiam apresentar efeitos patológicos como

infertilidade, abortos recorrentes e malformações congênitas.

A inversão do cromossomo 1 corresponde a cerca de 5% das inversões

encontradas e a do cromossomo 16 a 0,5%, sendo esta última patológica

e encontrada em casos de leucemia mieloide aguda.

Discussão

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A heterocromatina constitutiva apresenta o mais notávelheteromorfismo cromossômico devido a variações em seucomprimento.

Muitos estudos foram realizados com o intuito de relacionar essasvariações a alterações fenotípicas, ao surgimento de neoplasias, aoaumento da incidência de aberrações cromossômicas, a malformaçõescongênitas e aos atrasos no desenvolvimento físico e mental,produzindo informações contraditórias e mantendo o assunto sem umadefinição precisa.

O mecanismo de origem da inversão do cromossomo 9 é altamentecomplexo28. Sugere-se, então, que tal inversão teria efeitointercromossômico, ocasionando uma alta incidência de erros mitóticose aneuploidias, como, por exemplo, a trissomia 21.

Com a crescente busca de assistência médica para a identificação ecorreção de problemas de fertilidade, muitos são submetidos ao examecitogenético para a avaliação das alterações cromossômicas, e dadossobre a relevância dos polimorfismos cromossômicos das regiões deheterocromatina constitutiva, consideradas variações normais napopulação, podem ser decisivos para a determinação causal da

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Conclusão

Mosaicismo incomum de isodissomia uniparentalmaterna do cromossomo X com rearranjo

assimétrico do cromossomo Y

Conceitos Básicos

Isodissomia: é um dos dois tipos de dissomia (heterodissomia ouisodissomia), na qual o par de cromossomos possui uma mesmaorigem, ou seja, é herdado apenas de um dos pais. Na isodissomia eleé originado de uma duplicação de apenas um dos cromossomos de umdos pais;

Azoospermia: trata-se da ausência/não detecção deespermatozoides no sêmen. Pode ser diagnosticada mediante arealização de um espermograma;

Oligoastenoteratozoospermia: alteração de três variáveis nosêmen:

Teratospermia é a presença de menos de 4% deespermatozoides com morfologia normal;

Astenospermia é motilidade menor do que 50% deespermatozoides progressivos;

Oligospermia trata-se de baixa quantidade deespermatozoides no sêmen.

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Objetivos do artigo

Verificar o mosaicismo complexo de cromossomos sexuais;

Sugerir hipóteses para explicar a ocorrência do cromossomo Y

derivativo e da geração de uma linhagem celular mosaica.

-OBS.: trata-se do primeiro estudo

confirmatório para verificar a

origem de um mosaicismo de

cromossomos sexuais (cromossomos

X isodissômicos), 46,XX e 45,X com

um cromossomo Y rearranjado.

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http://hereditas.com..br

Introdução

Causas genéticas de infertilidade masculina:

Anormalidades cromossômicas em 6% dos casos;

Microdeleções no cromossomo Y: responsáveis por falhas naespermatogênese em 5 a 20% dos homens com azoospermia;

Anomalias estruturais no cromossomo Y têm sido observadasem 10 a 20% dos homens com infertilidade por azoospermia nãoobstrutiva, sendo as mais comuns:

Cromossomo Y isodicêntrico (Yidic);

Isocromossomo Y (duplicações em Yp e deleções em Yq ouvice-versa);

Homens inférteis com azoospermia comumente apresentam:

Microdeleções associadas à região do fator de azoospermia(AZF), localizado no cromossomo Y;

Mosaicismo dos cromossomos sexuais;

Rearranjo dos cromossomos sexuais;

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Mosaicismos dos cromossomos sexuais como 45,X, 47,XXY e/ou46,XY são frequentemente observados em conjunto com anomalias docromossomo Y, podendo ser originados:

Durante a meiose de bivalentes X-Y anormais;

Ou como resultado de um erro pós-zigótico

- OBS.: o cromossomo Y é estruturalmente instável durante adivisão celular;

Assim, fenótipos clinicamente diferentes são observados como:

Síndrome de Turner;

Síndrome de Klinefelter;

Genitália ambígua;

Reversão sexual;

Disgenesia gonadal mista;

Insuficiência espermatogênica;

Fenótipos masculino ou feminino normais.

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YIntrodução

Paciente do sexo masculino, de 35 anos de idade, 1,76 m de altura,76 kg e IMC de 24,5 kg/m², com fenótipo e inteligência normais;

Avaliação hormonal:

Níveis ⇧ de FSH e LH;

Níveis séricos de testosterona e estradiol normais;

Avaliação andrológica:

Volume testicular, em ambos os lados, reduzido para 10 mLno TE e 12 mL no TD;

O mosaicismo descrito nesse estudo é incomum (mosaicismocomplexo de cromossomos sexuais) e envolve linhagens celulares46,XX (isodissômica e predominante) e 45,X com um rearranjo rarodo cromossomo Y (duplicação-deleção assimétrica);

O cariótipo (“definitivo”) do paciente estudado foi 46,XX[50]/

45,X[25]/46,X,der(Y)(pter→q11.222::p11.2→pter)[25];

O rearranjo raro gerou um cromossomo Y derivativo, com umadeleção na região Yq11.222 e uma duplicação na região Yp11.2

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Y

Estudo do caso - paciente

Cariótipo “inicial” do paciente: 46,XX [15]/ 45,X [3]/ 46,XY [12].

OBS.: o sexo fenotípico e o desenvolvimento sexual dos pacientes

com mosaicismo de cromossomos sexuais dependem da presença do

cromossomo Y.

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Yhttp://fabiologicamente.blogspot.com.br/

Estudo do caso - paciente

Materiais & Métodos + Resultados

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Y

1) ANÁLISE CITOGENÉTICA

Foram preparados cromossomos de alta resolução (nível de 700

bandas) a partir de culturas de células sanguíneas;

Foram analisadas 100 metáfases do paciente e 20 metáfases de seus

pais;

Técnicas-padrão (convencionais) utilizadas:

Bandamento C;

Coloração Da/DAPI;

Técnica de hibridização fluorescente in situ (FISH)

Utilizada em 20 metáfases mediante sondas específicas para o

cromossomo Y

CEP Y Sat III Spectrum Green/ CEP Y Alpha Spectrum

Orange

LSI SRY Spectrum Orange/ CEP X Spectrum Green

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Análise Citogenética - RESULTADOS

Determinação do cariótipo real do paciente (46,XX[50]/45,X [25]/

46,X,der(Y)(pter→q11.222::p11.2→pter)[25]) mediante a utilização

de bandamento GTL;

Características do cromossomo Y derivativo:

Monocêntrico;

Sem a região de heterocromatina Yq12;

Utilização de sonda de FISH específica para o gene SRY ⇨ sinais

fluorescentes em ambas as extremidades finais do cromossomo Y

derivativo = duplicação do gene SRY.

- OBS.: os cariótipos de ambos os pais do paciente foram normais.

Materiais & Métodos + Resultados

Fig. 1. Cariótipo citogenético parcial, com bandas C, e análise por FISH. A Idiogramado cromossomo Y normal (à esquerda), cromossomo Y derivativo do paciente combandeamento GTL (no meio) e o idiograma reorganizado (à direita) mostrando a regiãoYp11.2 duplicada e a deleção abaixo da região Yq11.222. B Bandeamento G e Cbandeamento C, ambos mostrando a localização do centrômero do cromossomo Yderivativo (der(Y)) e uma deficiência de heterocromatina no braço longo docromossomo Y (Yq). D Análise por FISH mostrando que o der(Y) possui ummonocentrômero com sinais vermelhos e uma região Yq12 deletada sem a marcaçãopelo sinal verde (CEP Y Alpha Spectrum Orange/CEP Y Sat II Spectrum Green[sondas]). E O cromossomo derivativo Y apresentou o gene SRY duplicado, mostradopelos sinais fluorescentes vermelhos (seta vermelha, LSI SRY Spectrum Orange/CEP XSpectrum Green).

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YMateriais & Métodos + Resultados

Bandeamento GTL

O bandeamento GTL é um bandeamento G obtido através de

tratamento com tripsina e coloração com Leishman.

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YMateriais & Métodos + Resultados

2) ANÁLISE ALÉLICA DOS CROMOSSOMOS X

Amostras: DNA genômico extraído de sangue periférico do

paciente e de seus pais;

Foram amplificados produtos de 18 loci dos cromossomos sexuais

e 12 loci dos cromossomos 13, 18 e 21 ⇨ marcadores de pequenas

sequências em repetição (STR: short tandem repeat);

Utilizou-se eletroforese por capilaridade para realizar tal análise.

Objetivo da técnica: esclarecer a origem da linhagem celular

mosaica 46,XX;

Resultados

Detectou-se a isodissomia materna dos cromossomos X;

Dos 18 loci de CS, todos os alelos relacionados ao cromossomoX do paciente eram concordantes com os alelos maternos;

Dentre esses, 4 marcadores de sequências STR com certezatinham origem materna;

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YMateriais & Métodos + Resultados

Tab.2. Comparação do tamanho dos alelos (em pares de bases) entre o paciente e seus pais, examinados por QF-PCR utilizando os produtos de marcadores de microssatélites nos cromossomos 13, 18, 21, X e Y.

Os marcadores STR em negrito mostram alelos isodissômicos que claramente possuem origem materna.

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3) ANÁLISE de MICRODELEÇÕES do CROMOSSOMO Y

Quatro rodadas de PCR-multiplex: DNA do paciente + controle

positivo normal do sexo masculino + controle negativo normal do

sexo feminino;

Condições de ciclo da PCR:

Desnaturação inicial a 95ºC, por 10 minutos;

35 ciclos a 95ºC, por 10 minutos;

35 ciclos a 62ºC, por 90 segundos;

35 ciclos a 65ºC, por 90 segundos;

Extensão final a 65ºC, por 10 minutos

Eletroforese em gel de agarose NuSieve® a 3% + iluminação UV

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YMateriais & Métodos + Resultados

Tabela 1. Resumo de informações dos marcadores das sequências STS (sequence-tagged site)

e dos primers utilizados para a análise de microdeleções nas regiões do fator de azoospermia

(AZF).

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Análise de Microdeleção do Cromossomo Y - RESULTADOS

Dos 18 loci de CS: 15 eram marcadores de sequências STR nocromossomo Y;

Dessas 15, 12 loci não detectados nas regiões AZFb e AZFc

Indicação: deleção completa desde Yq11.222 até Yq11.223,incluindo:

O loci para o gene SRY (sY14);

Região do fator a de azoospermia (AZFa) (sY86 e sY84);

O estabelecimento do real cariótipo do paciente só foi possívelmediante a união de:

Resultados de citogenética;

Citogenética molecular;

Análise de localização dos loci STS deletados

Materiais & Métodos + Resultados

Fig.2. Análise de PCR-multiplex com os marcadores das sequências STR para

microdeleções na região do

fator de azoospermia (AZF).

A amostra do paciente

apresentou a eliminação com-

pleta das regiões dos fatores b

e c de azoospermia (AZFb e

AZFc). A amostra do pai do

paciente não apresentou

microdeleções para nenhum

dos sítios/locus testados. Paraa

localização dos diferentes

marcadores da sequênciaSTS, consulte a tabela 1.

L: escala de DNA (marcadores); B: branco; Fe: controle negativo feminino ; M:controle positivo masculino; P: paciente; Fa: pai do paciente; ZFX: motivoproteico dedo de zinco do cromossomo X.

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YMateriais & Métodos + Resultados

4) ANÁLISE por HIBRIDIZAÇÃO GENÔMICA COMPARATIVA

BASEADA em ARRANJO (aCGH ou CGHarray)

Essa técnica permite a identificação de alterações cromossômicas

desbalanceadas por meio da análise de todo o genoma;

Objetivo da técnica: regiões duplicadas e deletadas no cromossomo

Y derivativo rearranjado.

Resultados

⇧ relativo da proporção de cromossomos X (devido à linhagem46,XX);

Perda parcial de material do cromossomo Y;

Conclusões a respeito do Y(der):

Duplicação a partir da região Yp terminal até Yp11.2 -~5,65 Mb;

Deleção a partir de Yq11.222 até Yq terminal - ~41,95Mb

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YMateriais & Métodos + Resultados

Fig. 3. O perfil de CGH para o paciente apresenta médias de dados

altamente combinados e um

elevado sinal na proporção

log2 (0-1.0) no eixo Y para o

cromossomo X devido à alta

proporção de células da linha-

gem 46,XX (50%) (painéis

superior e central,setas verme-

lhas). O perfil para o cromos-

somo Y derivativo mostra um

sinal deletado/excluído, exibi-

do como <0 na trama da pro-

porção log2, localizado abaixo

da região Yq11.222 e contendo aproximadamente 41,95 Mb de tamanho

(41.950 pb) (painéis central e inferior, setas verdes).

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YMateriais & Métodos + Resultados

Discussão + Conclusão

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Nenhuma doença complexa foi detectada, exceto a azoospermia;

Cromossomo Y derivativo

Duplicação parcial da região Yp;

Duas cópias do gene SRY;

Deleção das regiões de AZFb e AZFc inteiras

Três linhagens celulares

46,XX

45,X

46,X,der(Y)

Mecanismos do cromossomo Y isodicêntrico e isocromossomo Y

Envolvidos na ativação de cruzamento (crossover)

intracromátides ou intercromátides e em vias de não

cruzamento (não-crossover), sendo a transmissão dessa via por

meio de genes palíndromos

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YDiscussão + Conclusão

A repetição de sequências palindrômicas entre cromátides irmãs oucromátides do cromossomo Y derivativo poderia causar:

Sinapses

Recombinação durante a prófase da meiose I paterna

Recombinação somática inadequada na mitose pós-zigótica

A dissomia uniparental (DUP) pode resultar de

Resgate da trissomia

Duplicação da monossomia

Complementação gamética

Formação do zigoto com isodissomia do cromossomo X

Quatro conceptos possíveis

46,XY

46,X,der(Y)

47,XXY

47,XX,der(Y)

Fig.4. Representação esquemática da geraçãodo cromossomo Y derivativo e da formação deuma linhagem celular mosaica. Para o gametapaterno, o cromossomo Y derivativo poderiaser gerado por meio da sinapse pararecombinação homóloga entre cromátidesirmãs ou pela recombinação intracromátidedurante a prófase da meiose I paterna. A trocade cromátides desiguais pode resultar nogameta paterno apresentando a duplicaçãosegmentar do braço curto do cromossomo Y(Yp) e deleção no braço longo do cromossomoY (Yq) (A) Alternativamente, a recombinaçãoinadequada pode ocorrer em um zigoto normaldurante a mitose pós-zigótica, durante odesenvolvimento embrionário precoce (C, D).Para os gametas maternos, uma não disjunçãona meiose materna pode resultar em gametas23,X ou 24,XX (com dissomia), e assimlinhagens 46,XX e 45,X podem se originar deum zigoto 47,XXY durante a divisão celularpós-zigótica. (B, C). Outro mecanismopossível é a derivação de um zigoto46,X,der(Y) a partir das linhagens 45,X e46,XX, após a fertilização (D).

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Y

Cromossomo X fruto da dissomia uniparental materna ⇨ provável

origem do efeito de imprinting genômico (certos genes são expressos

por apenas um do alelos) em mulheres normais;

Há possibilidade de alenos menos expressos estarem escondidos

para os marcadores das sequências STR do cromossomo X;

Mecanismo mais plausível para o cariótipo desse paciente

Produção do cromossomo Y derivativo na meiose I paterna ou

no início da embriogênese

Seguida da gerãção de uma linhagem 45,X

Resultando em uma linhagem 46,XX devido à duplicação

monossômica ou a uma não disjunção mitótica

A expressão do gene SRY duplicado poderia afetar o

desenvolvimento urológico masculino;

A linhagem 46,XX teria menos efeito pois foi gerada em divisões

pós-zigóticas tardias (após a determinação do sexo genotípico)

Correlações possíveis

Manifestações clínicas ⇨ proporção de células 45,X

Possibilidade de isodissomia do cromossomo X ⇨ cariótipo46,XX

- OBS.: a linhagem 45,X deveria elucidar mosaicismo,quimerismo e dissomia uniparental (DUP) em casos de MCS46,XX

Proposta

Técnica de análise dos fragmentos alélicos ⇨ melhorar aconfiabilidade da rotina clínica do diagnóstico citogenético

Conclusão final

Rotina citogenética + técnicas moleculares ⇨ determinação daorigem desse mosaicismo + rearranjo cromossômico

Utilidade: reduzir erros diagnósticos durante oaconselhamento genético

Discussão + Conclusão MO

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Referências Bibliográficas

Disponível em

<http://professor.ucg.br/siteDocente/admin/arquivosUpload/3989/material/Ci

togen%C3%A9tica%20PdC.pdf>. Acesso em 20/11/2014, 16h49min;;

Disponível em

<http://www.medicinenet.com/script/main/art.asp?articlekey=5464>. Acesso

em 20/11/2014, às 17h41min;

Disponível em

<http://repositorio.utad.pt/bitstream/10348/2917/1/msc_jopinho.pdf>. Acesso

em 20/11/2014, às 18h20min ;

Disponível em

<http://www.vidafertil.com.br/index.php?mact=Glossary,cntnt01,show,0&cn

tnt01term_count=15&cntnt01start=&cntnt01cat=glossario&cntnt01tid=14&c

ntnt01returnid=57>. Acesso em 22/11/2014, às 18h06min;

Disponível em <

http://www.teses.usp.br/teses/disponiveis/.../DoutoradoAnaCarolinaLaus.pdf

>. Acesso em 22/11/2014, às 18h33min;

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Referências Bibliográficas

Disponível em <

http://books.google.com.br/books?id=tC9VdBFW0wsC&pg=PA137&lpg=P

A137&dq=complementa%C3%A7%C3%A3o+de+gameta&source=bl&ots=

yoyhKr_RcI&sig=LHjjwY_8q20GZ1Kbv3Pi3tbAJ5I&hl=pt-

BR&sa=X&ei=oPNwVMGhIILksAS14oBQ&ved=0CCMQ6AEwAQ#v=on

epage&q=complementa%C3%A7%C3%A3o%20de%20gameta&f=false>.A

cesso em 22/11/2014, às 18h36min;

Disponível em <http://files.bvs.br/upload/S/0100-

7254/2011/v39n2/a2418.pdf> . Acesso em 23/11/2014, às 15h37min;

Disponível em < http://books.google.com.br/books?id=w6U-

SgjuTH8C&pg=PT179&lpg=PT179&dq=isodissomia&source=bl&ots=OLn

csNPI51&sig=6AJMcU0xlgJ6kZ0iz-fRRI0W-UY&hl=pt-

BR&sa=X&ei=wUhyVOTAJM7ksASa24HgBw&ved=0CB0Q6AEwAA#v=

onepage&q=isodissomia&f=false>. Acesso em 23/11/2014, às 18h53min;

Disponível em < http://www.orpha.net/consor/cgi-

bin/OC_Exp.php?Lng=PT&Expert=1772> Acesso em 23/11/2014, às

19h07min

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