Varíola

Múmia de Ramsés V com marcas sugestivas de varíola

Varíola: a primeira arma biológica ?

Hernan Cortez(1485-1547)

Londres, 1844

POXVIRIDAE

- os maiores vírus conhecidos (~ 300 nm)- simetria complexa- DNA duplo (codifica > 100 prots)- multiplicação intracitoplásmica

VaríolaMolusco contagiosoEctima dos ovinosVários outros poxvírus

HISTÓRICO-Edward Jenner (1749-1823)

pai da vacinação

PRIMEIRA VACINAÇÃO:1798

VARÍOLA

VARÍOLA x VARICELA

-OMS (1980): Declara erradicada a varíola

O que é uma vacina?

-Visa induzir resposta imune (imunógeno)- capaz de proteger o indivíduo frente a uma agressão

- Nem todos antígenos são bons imunógenos;

- Para uma boa vacina, muitas vezes sãonecessários adjuvantes (ex. adj. Freund).

Resposta IMUNE

Resposta imune ativa:

- Naturalmente adquirida (infecção)- Artificialmente adquirida (vacina)

Resposta imune passiva

Naturalmente adquirida:- placenta - colostro

Artificialmente adquirida- soros (preparados contendo anticorpos policlonais)- anticorpos monoclonais

Imunidade humoral adquirida

B

Vírus neutralizado

Célula infectadacom vírus

Anticorpo reconhecidopor LT com receptor Fc

Imunidade celular

CD8

CD4

perforinas

Gatilho daApoptose

citocinas

Vírus eliminado

necrose

apoptose

PROPRIEDADES DA VACINA IDEAL:

1- IMUNOGÊNICA

2- INÓCUA

3- ESTÁVEL

4- ECONÔMICA

Tipos de Vacinas:Inativadas:

Vacinas “mortas” ou inativadas (microrganismos inativ ados).

Vacinas c/ microrganismos Vacinas de subunidades

inteiros (convencionais ou

recombinantes)

INATIVANTES

Proteotrópicos: ex: formalina

Nucleotrópicos: ex: beta-propiolactona, AEI , BEI

Universais: ex: raios X, gama, UV.

Tipos de Vacinas:

Vivas:

Atenuadas: - microrganismos atenuados por passagens em cultivo ou animais de laboratório. -- capacidade de causar doença eliminada ou reduzida

-capazes de multiplicarem-se no organismo

- não necessitam grandes quantidades de antígeno

Vacinas produzidas por Engenharia Genética :

1- Vacinas geneticamente modificadas:

- Genes excluidos (ou incluidos) com vistas à atenuaç ão ou aumento da resposta imune

- podem ser atenuadas ou inativadas. ex: vacina diferencial gE-negativa

2- Vacinas com Vetores vacinais:

- microrganismos manipulados para produzir antígenos que desencadeiam a produção de anticorpos protetores.

3- Vacinas de DNA: DNA de interesse administrado ao hospedeiro. (ainda experimental)

Vacinas produzidas por Engenharia Genética :

4- Vacinas em plantas/alimentos: plantas com genes de interesse introduzidos no genoma

capazes de sintetizar a proteína e produzir anticorpos em animais que ingerem a planta.

5- Vacinas sintéticas: antígenos sintetizados artifi cialmente. Geralmente baixo poder imunogenico

em função da conformação do antígeno

Uma amostra vacinal recombinante Uma amostra vacinal recombinante

brasileira: brasileira:

Vacina diferencial gEVacina diferencial gE--

A. C. Franco et al.

Infectadosvacinados

gI gE US9

UL US

PstI PstI

P1 P3P2 P4

Co-transfecção com o DNA viralem células Ebtr

Detecção do vírus recombinante por imunoperoxidase sobre células infectadas

pCR2.1

a)

b)

c)

d)

EstratEstratéégiagia de de deledeleççãoãoda gE da gE

1100 1100 bpbp 750 750 bpbp

ELISA DIFERENCIAL BHV-1

gE - (Vacinado)

gE + (Infectado)

Em andamento: Em andamento:

VVíírus vacinal gErus vacinal gE-- contendo o contendo o

gene imunodominantegene imunodominante

do vdo víírus rrus ráábico (gene bico (gene ““ GG”” ) )

Infectadosvacinados

Vacinas inativadas x atenuadas:

Inativadas:

- não se multiplicam no organismo- maior massa antigênica- mais caras - adjuvantes- imunizações freqüentes

Atenuadas / vírus vivo modificado

- vírus se multiplica no organismo- melhor imunidade- menor massa antigênica- mais baratas

Vacinas Atenuadas x inativadas

Vacina Vantagens Desvantagens

Atenuada(viva/modificada)

Inativadamorta,subunidade

Mimetiza infecçãonatural Imunidade duradouraMelhor imun. celularAltas taxas de soro-

conversãoTítulos mais altos

LábilPode causar doençaou efeitos adversos

Estável, seguraImunidade curtaPode requerer reforçosfreqüentesMassa antigênica grande

Nível deanticorpos

1a

2a 3a 4a

Efeito da vacinação e doses de reforço nos níveis de anticorpos

Efeito da vacinaEfeito da vacinaçção e doses de reforão e doses de reforçço o nos nnos nííveis de anticorposveis de anticorpos

tempo

POLIOMIELITE Três tipos de vírus: 1, 2, 3Paralisia progressiva ascendenteMuitas degenerações neurológicas permanentesMembro mais movimentado mais afetadoMorte por paralisia respiratória

Vacina inativada intramuscular ( vacina tipo Salk)

- vírus inativado com formalina (3 sorotipos). - induz anticorpos séricos, não induz imunidade local e assim não- previne infecção local no intestino. - previne a poliomielite paralisante pois a viremia não ocorre.- casos de síndrome de Guillain-Barré

Vacina Oral ( vacina Sabin)

- amostras de vírus dos 3 sorotipos, atenuadas. - induz imunidade local no intestino com produção de IgA,

assim como boa imunidade sistêmica. - raramente pode causar poliomielite paralítica

(~ 1 caso em 3 milhões de doses).

Vacinas contra a poliomielite

Albumina

CascCascaa

Gema

Inoculação na membrana corioalantóica

Membrana da cascaSaco aéreo

Inoculação amniótica

Inoculação na gema

Inoculação alantóica

Membrana corioalantóicaCavidade alantóica

Cavidade amniótica

Produção de vacina para Influenza:

Inoculação em ovos embrionados

Influenza - HA

Toxóides:

- São toxinas cuja toxicidade é eliminada

- Retém a capacidade antigênica

Ex: toxóide tetânico

Adjuvantes

São substâncias adicionadas à vacina com o objetivo de aumentar a resposta imune.

Ex:

Hidróxido de alumínio (alúmem)SaponinasAdjuvante de Freund (completo / incompleto)Adjuvantes oleosos sintéticos ( Marcol

Adjuvantes do futuro:Seqüências de nucleotídeosInterleucinas, Interferon gamaGenes de estimuladores de IL e outras citocinasLipossomos

D.O. % - Ig G 1

0

50

100

150

200

250

300

350

400

0 15 30 45 60 75 90 105 120 135 150 165 180

DIAS

D.O

. %

CONTROLE

BHV-1

EXT. AQ. CASCAS

EXT. AQ. FOLHAS

EXT. AQ. RAMOS

QB-90

ALUMÍNIO

QUIL-A

ÓLEO

O que é um “soro”?

Soro sangüineo contendo uma grande variedade de anticorpos policlonais, usualmente obtido de animais hiperimunizados com o(s) antígeno (s)de interesse.

- homólogo - heterólogo.

Soro Heterólogo:

- Produzido em indivíduos de espécies diferentes da espécie -alvo

Ex.: cavalos contra o tétano: soro anti-tetânico

- Não transmite infecções aos humanos

- Pode causar reações de hipersensibilidade. Podem ser submetidos à

digestão péptica para separar a região Fc da região Fab do anticorpo.

- Mais baratos.

- Pode levar a um excesso de formação de imunocomplexos

depósitos nas paredes internas dos vasos => reações inflamatórias sistêmicas.

Tipos de Soros Hiperimunes:

Soro Homólogo:

Produzido na mesma espécie-alvo.

- Risco de transmissão de doenças (AIDS, Hepatites)

- Menor chance de reações de hipersensibilidade.

- Mais caros.

Anticorpos monoclonais:

- Anticorpos derivados de um único linfócito produzidos em

camundongos.

- Produzidos usualmente em camundongos em linhagens singenéicas

ex. BALB-C

- podem ser “humanizados” pela introdução de células humanas em

camundongos irradiados

- Já utilizados para hepatite B e Vírus Resp. Sincicial Humano (HRSV)

Ana Cláudia Franco

Eber A S Oliveira

Fernando Spilki

Helena B. R. Batista

Paulo A Esteves

Alessandra D’Ávila

Rejane Schaefer

Tamahine Schmidt

Silvia Hübner

Eduardo Caldas

Marcelo Maronna Dias

Equipe de

virologia

EVI

LABVIR

DM/ICBS

Obrigado por sua atenção!

www.virologiaipvdf.cjb.net

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Detecção do vírus recombinante emcélulas infectadas por imunoperoxidase

gI gE US9

UL US

PstI PstI

P1 P3P2 P4

Co-transfecção com DNA do vírus originalem células de bovino

Construção do vírus vacinal recombinante

Efeito citopático

HerpesvHerpesvíírus (colorarus (coloraçção por imunoperoxidase)ão por imunoperoxidase)

TTíípica resposta sorolpica resposta sorolóógicagica

0 30 60 90 Dias

AnticorposAnticorpos IgG

Nível deAnticorpos

IgM IgGDoença

Interferência por anticorposmaternos

2 4 6 8 10 12

**

**

*

*

antic

orpo

s pa

ssiv

os

semanas após o nascimento

Nível mínimo para proteção

interfere comvacinação

“janela” desuscetibilidade

EFEITO CITOPÁTICO