Profa. Lívia Caroline

O que é calibração?

Calibração, de acordo com o INMETRO, é o conjunto de operações que estabelece, sob condições especificadas, a relação entre os valores indicados por um instrumento de medição ou sistemas de medição ou valores representados por uma medida materializada ou material de referência, e os valores correspondentes das grandezas estabelecidas por padrões.

O que é calibração?

Calibração: • Calibrar significa colocar um instrumento de medição em condições de utilização, por meio da comparação dos valores das medições fornecidos pelo instrumento, com os valores padrão, aplicando-se quando necessário, o ajuste ou regulagem

•É um processo que visa verificar se a medida obtida por um instrumento é compatível com o esperado e se ele está adequado ao uso;

Métodos de calibração

• Envolve a calibração da vidraria e de algum instrumento.

• Calibração passo a passo: a resposta será diretamente proporcional à medida de analito de interesse.

• Calibração com uso de padrão: é o uso de uma quantidade conhecida de um analito em relação a uma amostra a ser analisada.

É uma amostra de referência que contém o analito de interesse.

Calibração passo a passo

• É o método mais confiável para calibrar um sistema analítico.

• A calibração é feita analisando-se sequencialmente várias amostras preparadas ao longo da faixa de concentração desejada.

• Construção de curva de calibração

Desvantagens:

• (i) o processo poderá consumir muito tempo;

• (ii) as amostras preparadas não representam as amostras “reais” e, portanto, podem não apresentar interferências.

Curva de Calibração

• A forma mais usual de se executar a calibração de um instrumento é através da curva analítica (ou curva de calibração),

• Consiste em preparar padrões com concentrações conhecidas do analito o mais próximo da realidade da amostra em estudo.

• Na maioria das vezes, existirá uma relação linear entre concentração do analito e sinal de resposta do equipamento.

Curva de Calibração

Calibração com uso de padrão

• Para muitos tipos de análises, a resposta para o procedimento analítico deve ser avaliado para quantidades conhecidas de constituintes (chamados padrões), de forma que a resposta para uma quantidade desconhecida possa ser interpretada.

Métodos de calibração Amostra padrão É uma amostra de referência que contém o analito de interesse.

• Solução padrão – é o analito purificado, ou seja, a substância que será testada, dissolvida em água ou álcool Ele geralmente acompanha o kit que o laboratório compra. As propriedades físico-químicas são muito diferentes da amostra humana.

• Soro calibrador - Ao contrário da solução padrão, que tem as propriedades físico-químicas bem diferentes do soro/plasma humano, o soro calibrador provém de materiais biológicos estabilizados com conservantes.

– Utilizado quando for preciso indicar o efeito de interferências.

Métodos de calibração

Branco Os brancos indicam a interferência de outras

espécies na amostra e os traços de analito encontrados nos reagentes usados na preservação, preparação e análise.

Permite detectar se analitos provenientes de amostras previamente analisadas estão contaminando as novas análises, por estarem aderidos aos recipientes ou aos instrumentos.

Métodos de Calibração

• Exemplo • Vamos supor que você está fazendo a dosagem de uma glicemia de jejum em

aparelho manual (espectrofotômetro).

• A solução padrão que veio com o kit, nesse caso, já está dissolvida em água contento 100 mg/dL de glicose.

• Você terá que pipetar em três tubos: um para o branco (B), um para o teste (T) e um para o padrão (P).

Métodos de calibração

• Então, faz-se a incubação e leitura no aparelho, anotando os resultados em um papel. Agora precisamos calcular o resultado.

• A fórmula da glicose, para esse kit, é a seguinte:

O número 100 não veio do além. Ele é o valor da concentração da solução padrão.

Calibração de equipamentos volumétricos

• A vidraria volumétrica é calibrada medindo-se a massa de um líquido que pode preencher o equipamento volumétrico (geralmente água destilada). O líquido usado deve ter densidade conhecida na temperatura ambiente. Seu volume corrigido é resultado da divisão da massa de água obtida por sua densidade na referida temperatura.

d =m/V

Conduta geral nos procedimentos de calibração

Antes da calibração:

• Toda a vidraria volumétrica deve estar rigorosamente limpa;

• Buretas e pipetas não precisam estar secas;

• Os balões volumétricos devem ser drenados e secos à temperatura ambiente;

• A água usada para a calibração em equilíbrio térmico com o ambiente;

• Frascos comuns de pesagem ou mesmo pequenos erlenmeyers podem ser usados como receptores para o líquido de calibração.

Conduta geral nos procedimentos de calibração

Calibração de uma pipeta volumétrica

• 1º passo: determinar a massa do recipiente vazio até a casa de miligramas (o recipiente pode ser um erlenmeyer);

• 2º passo: transfira uma porção de água (equilibrada com a temperatura ambiente) para o frasco receptor (erlenmeyer) com a pipeta;

• 3º passo: pese novamente com precisão em miligramas;

• 4º passo: calcule a massa de água por diferença entre duas massas obtidas

Calibração de uma pipeta volumétrica

• 5º passo: determinar o volume dispensado da pipeta usando sua densidade em função da temperatura em que se encontra. Repita a calibração várias vezes. Calcule o volume médio.

Calibração de uma balão volumétrico

Procedimentos recomendados:

1. Pesar o balão seco até a precisão de miligrama;

2. Preenchê-lo até a sua marca de calibração com água equilibrada termicamente com o ambiente e repese-o.

3. Calcular novamente o volume do balão;

4. O ideal é não ter contato manual direto com o balão durante as pesagens para que a gordura das mãos não interfira.

Exercício

1) Um balão volumétrico de 250 mL apresentou os seguintes resultados de calibração. Calcule o volume real obtido na temperatura de 24 ◦C, e avalie a qualidade desta vidraria

Medida Balão vazio (g)

Balão + água (g)

T (◦C) Densidade da água

Volume (mL)

1 110,56 359,98 24 1g/mL

2 110,59 359,97 24 1g/mL

3 110,53 359,98 24 1g/mL

Exercício

2) Uma pipeta volumétrica de 50mL apresentou os seguintes resultados de calibração. Calcule o volume real obtido na temperatura de 25ºC, e avalie a qualidade desta vidraria:

Medida Recipiente vazio (g)

Recipiente + água (g)

T (◦C) Densidade da água

Volume (mL)

1 33,2136 83,0033 25 1g/mL

2 33,2186 83,0178 25 1g/mL

3 33,2153 83,0077 25 1g/mL

3) O certificado de calibração de um balão volumétrico de 1,0 l apresentou os seguintes resultados:

Volume = 999,98 ml Incerteza = ± 0,05 ml

Sabendo-se que a especificação para o balão de 1,0 l tem uma tolerância máxima de ± 0,30 ml, qual seria a sua avaliação a respeito desta vidraria? Explique sua resposta.

Exercício

4) O certificado de calibração de uma pipeta volumétrica de 25,0 ml apresentou os seguintes resultados:

Volume = 25,03 ml Incerteza = ± 0,02 ml

Sabendo-se que a especificação para pipeta volumétrica de 25,0 ml tem uma tolerância máxima de ± 0,03 ml, qual seria a sua avaliação a respeito desta vidraria? Explique sua resposta.

Exercício

Exercício

5) Diferencie calibração passo a passo de calibração com o uso de padrão.

6) Diferencie solução padrão de soro calibrador.

7) Qual a função do branco na calibração?