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Compartimentos intracelulares e transporte
Profa. Ana Paula FFI0710- Biologia Molecular e Celular II
IFSC, 2013
Clula endotelial bovina corada: verde, membranas do RE; em laranja, mitocndrias
Viso geral da principal via de distribuio de protenas em clulas eucariticas
Mecanismos de importao pelas organelas
O destino de uma protena sintetizada no citosol depende
de sua seqncia de aminocidos;
Sinal de distribuio
Se no h sinal: residem no citosol; Sinais diferentes podem direcionar p/:
ncleo, mitocndrias, cloroplastos, peroxissomos ou RE.
Como a protena pode ser importada ?
1. Transporte mediado: as protenas se movimentam importao entre o citosol e o ncleo por meio dos poros nucleares (funcionam como portes seletivos).
2. Transporte transmembrana: protenas translocadoras transmembrana transportam diretamente protenas entre citosol-organelas.
3. Transporte vesicular: carregam protenas a partir do RE.
Todos requerem energia!
Qual o compartimento destino?
Seqncia sinalizadora (15 a 60 aminocidos)
Sinal de distribuio tpico.
Freqentemente removido aps a sntese
As seqncias-sinal que especificam o mesmo destino podem variar.
Propriedades fsicas mais importantes
que a seqncia exata.
Regio sinalizadora
Arranjo especfico tridimensional de tomos na superfcie protica. Persistem aps a sntese.
Podem direcionar para o ncleo e
lisossomos, p.e.
Transporte mediado: citosol-ncleo
Envelope nuclear: 2 membranas concntricas.
O envelope nuclear perfurado por POROS NUCLEARES
Formam canais para o trnsito de macromolculas
Entram: protenas nucleares Saem: RNAm maduro (mRNPs= complexo mRNA+protenas) e
subunidades ribossomais, tRNAs
Seqncia-sinal = 1 ou 2 seq. curtas contendo vrias K ou R Sinal de localizao nuclear
Micrografia eletrnica de varredura (criofratuta) de uma ponta de raiz de cebola mostrando o ncleo e
os poros nucleares.
Fonte:http://www.bioweb.wku.edu
Complexos de poro nuclear (NPCs) (~125 milhes de Daltons; 30 diferentes protenas em mltiplas cpias)
www.scripps.edu/~stoffler/proj/NPC/npc.html
Anel distal
Cesta nuclear
Fibrilas citoplasmticas
Anel nuclear
Domnio luminal
Membrana int.
Membrana ext. Anel citoplasmtico
Membrana nuclear externa
Membrana nuclear interna Espao perinuclear RE
Complexo poro nuclear
Antonin, W. Dont get stuck in the pore". The EMBO Journal (2013) 32, 173 - 175 doi:10.1038/emboj.2012.338
Complexo poro nuclear
Acima: microscopia-eletrnica de uma fina fatia do envelope nuclear (250 nm), no fixada e no corada revelando complexos poro- nucleares individuais. Abaixo: mudanas estruturais reversveis mediadas por clcio visualizados por AFM. O anel distal (seta) pode agir como um diafragma, abrindo aps a adio de quantidades milimolares de clcio e fechando aps a remoo de clcio.
Destino: ncleo
A interao de uma protena direcionada ao ncleo com o poro nuclear requer auxlio de
Receptores de importao nuclear (importinas)
Ligam-se ao sinal de localizao nuclear Receptores ajudam a direcionar a protena
por interao com as fibrilas dos poros.
A transferncia utiliza energia da hidrlise do GTP
Transporte ncleo-citoplasmtico
Volume 11, Issue 12, 2001, Pages 497503
Mudanas conformacionais da
importina-
Structure, Vol. 16, Issue 6, Pages 906915, 2008.
Como a protena pode ser importada para organelas?
1. Transporte mediado: citosol-ncleo atravs dos poros nucleares que funcionam como portes seletivos.
2. Translocadores proticos: protenas translocadoras transmembrana transportam diretamente protenas entre citosol-organelas.
3. Transporte vesicular: carregam
protenas a partir do RE.
Receptor de importao
Espao intermembranas
citosol
Matriz mitocondrial
Poro principal de importao
Protena precurssora
Hsp 70 citoslica
Seqncia de direcionamento p/ a matriz
Seqncia de direcionamento
clivada protena
ativa
Stio de contato
Importao de protenas para o interior da matriz mitocondrial
Protease de processamento da matriz
As protenas esto desdobradas para entrar;
possuem uma seq.-sinal, geralmente clivada aps a translocao;
O transporte a um stio especfico na organela requer outra seqncia-sinal;
Destino: mitocndria e cloroplastos
Hsp70 da mitocondrial
Setas identificam locais de contato entre a membrana externa e interna na
mitocndria
Destino: Retculo Endoplasmtico (RE)
Porta de entrada p/ : Golgi, endossomos, lisossomos e secreo;
Recebe 2 tipos de protenas do citosol:
Hidrossolveis, que so completamente translocadas pela membrana do RE e liberadas no lmen.
Transmembrnicas, que so parcialmente translocadas pela membrana do RE e tornam-se embebidas nela.
As protenas geralmente entram enquanto so sintetizadas...
A seqncia-sinal guiada
1. Por uma partcula
reconhecedora de sinal (PRS ou SRP) presente no citosol, liga-se sequncia-sinal de RE exposta
2. Pelo receptor de SRP,
embebido na membrana do RE.
H stios moleculares de posicionamento conectando os ribossomos que esto sintetizando protenas aos canais de translocao disponveis.
Sntese de protenas solveis e seu transporte co-traducional atravs da membrana do RE
(Partcula reconhecedora de sinal)
Seqncia sinal
citosol
Mammalian Sec61 Complex in: Science. 2009; 326(5958): 13691373.
doi: 10.1126/science.1178535
Experimentos com microssomos
Sntese de protenas transmembranas na bicamada lipdica do RE
Nem todas as protenas que entram no RE so liberadas no lmen... Algumas permanecem na membrana do RE (ou outras organelas)
unipasso multipasso
Sntese e insero na membrana do RE das protenas unipasso do tipo I
citosol
Lmen do ER
Translocon aberto
Peptidase sinal
Seqncia sinal clivada
Sequncia de finalizao de transferncia
Sntese e insero na membrana do RE das protenas unipasso do tipo II
citosol
Sequncia sinal-ncora interna
Lmen do ER
Arranjo das sequncias topognicas nas protenas de membrana unipasso e multipasso inseridas na membrana do RE
Algumas protenas so presas membrana por uma ncora fosfolipdica
Glicosilfosfatidilinositol
(GPI)
Transporte vesicular: viso geral das vias
secretora e endoctica de distribuio de
protenas
Qual o caminho das protenas a partir do
RE? Como so carregadas?