BR PI0405418A I

(11)(21) Pl 0405418-0 A

República Federativa do Brasil Ministério do Desenvolvimento, Indústria

e do Comércio Exterior

(22) Data de Depósito: 02/09/2004 (43) Data de Publicação: 02/05/2006 (RPI1843)

(51) lnt. Cl7.:

C07D 403/14 A61 K 31/496 A61 K 31/53 A61 P 25/18 A61 P 15/1 O

Instituto Nacional da Propriedade Industrial

(54) Título: USO DE DERIVADOS NFENILPERAZÍNICOS E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO OS MESMOS

(66) Dados da Prioridade Interna: PI0303465-8 05/09/2003

(71) Depositante(s): Universidade Federal do Rio de JaneiroUFRJ (BR/RJ) , Universidade Federal do Rio Grande do Sul- UFRGS (BR/RS)

(72) lnventor(es): Eliezer Jesus de Lacerda Barreiro, Stela Maris Kuze Rales, Gilda Angela Neves, Teresa Cristina Tavares Dalla Costa, Leandro Tasso, Carlos Alberto Manssour Fraga

(74) Procurador: Alves, Vieira, Lopes & Atem Advogados

(57) Resumo: "USO DE DERIVADOS N-FENILPIPERAZÍNICOS E COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO OS MESMOS", A presente invenção proporciona novos derivados N-fenilpiperazínicos e composições farmacêuticas compreendendo os mesmos, sendo estes novos derivados estruturais da clozapina capazes de atuar em vias dopaminérgicas e/ou serotoninérgicas de ação central; estes compostos demonstraram-se úteis no tratamento de disfunção erétil e também úteis como antipsicóticos, com as vantagens de não acarretarem os efeitos colaterais típicos da clozapina; proporcionarem menor incidência de catatonia quando comparados com outro agente antipsicótico, o haloperidol, e não apresentarem efeito depressor do sistema nervoso central; as moléculas também apresentam efeito hipotérmico, que pode ser útil no tratamento de quadros que apresentem hipertermia,

,,

5

1154

Relatório Descritivo

... . . . . ... . . . . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..... . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

USO DE DERIVADOS N-FENILPIPERAZINICOS E

COMPOSIÇOES FARMACt::UTICAS CONTENDO OS MESMOS

CAMPO DA INVENÇÃO

A presente invenção se refere a novas moléculas ativas sobre o sistema

nervoso central, em sistemas neurotransmissores envolvidos na gênese de

desordens neuropsiquiátricas e disfunções sexuais. Mais especificamente, as

1 O moléculas da presente invenção referem-se a novos derivados n

fenilpiperazínicos concomitantemente úteis no tratamento da esquizofrenia e da

disfunção erétil.

ANTECEDENTES DA INVENÇÃO

15 A dopamina, uma importante amina biogênica, somente teve seu papel

como importante neurotransmissor reconhecido a partir da metade da década

de 50, quando a idéia de que esta era somente um intermediário na biossíntese

de outras catecolaminas, como adrenalina e noradrenalina, foi derrubada

através de estudos que demonstraram a presença de quantidades de

20 dopamina no cérebro de mamíferos semelhantes àquelas encontradas de

noradrenalina, além de uma marcada diferença na distribuição regional destas

duas catecolaminas (COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.; ROTH, R.H. The

Biochemical Basis of Neuropharmacology. Nova York: Oxford University Press,

1996).

25 As vias dopaminérgicas cerebrais principais são:

• via mesolímbica, a qual é atribuída uma importante função no controle

das emoções e motivações;

• via mesocortical, a qual está envolvida em funções cognitivas e parece

estar ligada a processos de aprendizagem e memória;

30 • via nigroestriatal, pertencente ao sistema extrapiramidal, a qual é

associada ao controle das funções motoras; e

. .. . . . . . . . . . . . . . . .. . .

2 I 54 .. . . . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . : .. · :: ::.:.: :···.:.:. : .:. . .. . : . .. . . .. . :

• via tuberoinfundibular, a qual libera dopamina no sistema porta do eixo

hipotálamo-hipófise, sendo a dopamina liberada responsável pela

inibição tônica da secreção de prolactina (MOORE, K. E. &

LOOKINGLAND, K.J. Dopaminergic neuronal systems in the

5 hypothalamus. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.)

Psychopharmacology- The Fourth Generation of Progress. Nova York:

Raven Press Ltda, 1995; WILSON, J.M.; SANYAL, S.; VAN TOL, H.H.M.

Dopamine D2 and D4 receptor ligands: relation to antipsychotic action.

European Journal of Pharmacology 351: 273-86, 1998; STAHL, S.M.

1 O Essential Psychopharmacology - Neuroscientific Basis and Practical

Applications. 2 ed. Nova York: Cambridge University Press, 2000;

VALLONE, D.; PICETTI, R; BORRELLI, E. Structure and function of

dopamine receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32,

2000).

15 Embora a tuberoinfundibular seja a via dopaminérgica diencefálica mais

bem estudada, as células que a compõem representam a minoria dos

neurônios dopaminérgicos encontrados no diencéfalo. Outras projeções

dopaminérgicas hipotalãmicas já foram identificadas, entre elas a

periventricular e incertohipotalãmica, as quais acredita-se que possuam um

20 importante papel na regulação do comportamento sexual (MOORE, K. E. &

LOOKINGLAND, K.J. Dopaminergic neuronal systems in the hypothalamus. In:

BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth

Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995).

Até a década de 80 haviam sido identificados apenas dois tipos de

25 receptores dopaminérgicos, denominados D1 e D2, diferenciados por suas

propriedades farmacológicas, biológicas, fisiológicas e por sua distribuição

anatômica. Durante cerca de 1 O anos estes dois receptores foram associados à

maioria dos efeitos atribuídos ao sistema dopaminérgico. Porém, o advento das

técnicas de biologia molecular levou a uma modificação desta classificação. A

30 clonagem do receptor 02, em 1988, levou a subsequente identificação de

outros subtipos de receptores, classificados de D1 a 05. Esta descoberta

. .. . . . . . .. . . . . . . . . . ..

3 I 54 ... ... .. . .. ····· . . . . . . . . . . : .. · :: ::.:.: :···.:.:. . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

alterou profundamente o entendimento da distribuição anatômica dos

receptores e da farmacologia do sistema dopaminérgico (CIVELLI, O.

Molecular biology of the dopamine receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. &

KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

5 Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; MANSOUR, A. & WATSON,

S.J. Oopamine receptor expression in the central nervous system. In: BLOOM,

F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995).

Levando em consideração a seqüência primária de aminoácidos, sua

I O organização genômica e, ao menos em parte, sua atividade biológica, os

diferentes subtipos de receptores dopaminérgicos podem ser divididos em dois

grupos: 01-like (incluindo os subtipos 01 e 05) e 02-/ike (incluindo os subtipos

D2, 0 3 e 04) (CIVELLI, O. Molecular biology of the dopamine receptor subtypes.

In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth

15 Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995).

Todos os cinco receptores dopaminérgicos conhecidos exercem sua

ação biológica através da ligação e ativação de diferentes proteínas G e, assim

como os demais receptores metabotrópicos, possuem em sua estrutura sete

segmentos hidrofóbicos transmembranares rodeados por três alças

20 extracelulares e três intracelulares (CIVELLI, O. Molecular biology of the

dopamine receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.)

Psychopharmacology- The Fourth Generation of Progress. Nova York: Raven

Press Ltda, 1995). Ambas as famílias de receptores possuem em sua cadeia

C-terminal sítios de fosforilação ou de adição de palmitato que parecem estar

25 envolvidos na dessensibilização agonista-dependente destes receptores

(VALLONE, 0.; PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and function of dopamine

receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000).

Em termos de atividade biológica, os receptores 01-like interagem com o

complexo protéico G5 , que ativa a enzima adenilato ciclase e,

30 consequentemente, aumenta a síntese de adenosina monofosfato cíclico

(AMPc). Esta estimulação leva a ativação da proteína quinase A (PKA)

. .. . . . . . .. . . . . . . . . . ..

4 I 54 ... . . . . ... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . ... . . . . . ..... . ..... . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

resultando, entre outros efeitos, em alterações nas correntes neuronais de

cálcio e também na mobilização do cálcio armazenado no meio intracelular. Os

dados quanto a influência destes receptores sobre o efluxo de potássio são, até

o momento, conflitantes. Um efeito inibitório da síntese de ácido araquidônico

5 mediado pela ativação de receptores do subtipo 0 1 foi demonstrado em células

de estriado de ratos (CIVELLI, O. Molecular biology of the dopamine receptor

subtypes. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.) Psychopharmacology- The

Fourth Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995;

VALLONE, 0.; PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and function of dopamine

10 receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000; HIROI, N.;

MARTIN, A.B.; GRANDE, C.; ALBERTI, 1.; RIVERA, A; MORATALLA, R.

Molecular dissection of dopamine receptor signaling. Journal of Chemical

Neuroanatomy 23: 237-42, 2002). Assim como a maioria dos receptores

metabotrópicos, os genes que codificam os receptores D1-like não possuem

15 íntrons (CIVELLI, O. Molecular biology of the dopamine receptor subtypes. In:


Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; EMILIEN, G.;

MALOTEAUX, J.; GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.; CRAGG, S. Dopamine

receptors - Physiological understanding to therapeutic intervential potential.

20 Pharmacology and Therapeutics 84: 133-56, 1999).

Até o momento não foi identificado um ligante seletivo que consiga

diferenciar os receptores D1 e 0 5. Porém, uma diferença importante entre eles

reside no fato de que o receptor 0 5 possui uma afinidade cerca de 1 O vezes

superior ao ligante endógeno, dopamina (CIVELLI, O. Molecular biology of the

25 dopamine receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.)


Press Ltda, 1995; SEEMAN, P. Dopamine receptors - Clinicai correlates. In:


Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; COOPER, J.R.;

30 BLOOM, F.E.; ROTH, R.H. The Biochemical Basis of Neuropharmacology.

Nova York: Oxford University Press, 1996; HRIB, N.J. The dopamine 04

. .. .. . . . .. . . . . . . ... . .

5 I 54 ... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . :.. . . . . . . . . ..... . :: :··:·: :. :··:· . ... .. . .. .. .

receptor: a controversial therapeutic target. Orugs of the Future 25 (6): 587-611,

2000).

O receptor 01 é o mais amplamente distribuído dos receptores

dopaminérgicos e expresso em maiores níveis que os demais. É encontrado

5 principalmente no estriado, núcleo accumbens, tubérculo olfatório, córtex

cerebral e amígdala (CIVELLI, O. Molecular biology of the dopamine receptor

subtypes. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology- The

Fourth Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995;

MANSOUR, A. & WATSON, S.J. Oopamine receptor expression in the central

10 nervous system. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology

- The Fourth Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995;

EMILIEN, G.; MALOTEAUX, J.; GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.; CRAGG, S.

Oopamine receptors - Physiological understanding to therapeutic intervential

potential. Pharmacology and Therapeutics 84: 133-56, 1999; VALLONE, 0.;

15 PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and function of dopamine receptors.

Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000; HURO, Y.L.;

SUZUKI, M.; SEOVALL, G.C. 01 and 02 dopamine receptor mRNA expression

in whole hemisphere sections of the human brain. Journal of Chemical

Neuroanatomy 22: 127-37, 2001).

20 O receptor Os possui um padrão de expressão muito mais restrito que o

receptor 01. Sua presença foi detectada no hipocampo, núcleo mamilar lateral

e no núcleo parafascicular do tálamo (CIVELLI, O. Molecular biology of the

dopamine receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.}


25 Press Ltda, 1995; VALLONE, 0.; PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and

function of dopamine receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews 24:

125-32, 2000). Suas funções permanecem não muito claras, principalmente

devido a ausência de um ligante seletivo que permita sua diferenciação do

receptor 01 (EMILIEN, G.; MALOTEAUX, J.; GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.;

30 CRAGG, S. Oopamine receptors - Physiological understanding to therapeutic

intervential potential. Pharmacology and Therapeutics 84: 133-56, 1999).

. .. .. . . . .. . . . . . . .....

6 I 54 . . . . . .. . . . . .... . . . . . . . . . . .. .. · :: ::.:.: :···.:.:. ·: · .. · . . . . . . . . . . . . ... .. . . . .. . . : .....

A ligação de agonistas aos receptores D2-like resulta na ativação de uma

proteína Gi ou G0 , exercendo uma influência negativa s~bre a atividade da

adenilato ciclase e, consequentemente, inibindo a síntese de AMPc (CIVELLI,

O. Molecular biology of the dopamine receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. &

5 KUPFER, D.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.;

ROTH, R.H. The Biochemical Basis of Neuropharmacology. Nova York: Oxford

University Press, 1996). A estimulação do subtipo de receptor D2 ainda pode

levar à modulação de outros mecanismos intracelulares, que não a inibição da

1 O atividade da adenilato ciclase. Entre eles pode-se incluir efeitos diretos

estimulando canais de potássio e inibindo canais de cálcio, bem como

modulação da produção de fosfatidilinositol e aumento da síntese de ácido

araquidônico. (COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.; ROTH, R.H. The Biochemical

Basis of Neuropharmacology. Nova York: Oxford University Press, 1996; OAK,

15 J.N.; OLDENHOF, J.; VAN TOL, H.H.M. The dopamine 04 receptor: one

decade of research. European Journal of Pharmacology 405: 303-327, 2000;


receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000; HIROI, N.;

MARTIN, A.B.; GRANDE, C.; ALBERTI, 1.; RIVERA, A.; MORATALLA, R.

20 Molecular dissection of dopamine receptor signaling. Journal of Chemical

Neuroanatomy 23: 237-42, 2002). Compostos capazes de ligarem-se

seletivamente a subtipos de receptores 0 2-/ike já foram identificados (CIVELLI,

O. Molecular biology of the dopamine receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. &

KUPFER, D.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

25 Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; SEEMAN, P. Dopamine

receptors - Clinicai correlates. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.)


Press Ltda, 1995; COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.; ROTH, R.H. The Biochemical

Basis of Neuropharmacology. Nova York: Oxford University Press, 1996.; HRIB,

30 N.J. The dopamine 0 4 receptor: a controversial therapeutic target. Drugs of the

Future 25 (6): 587-611, 2000).

7 I 54 \... . .... t ••• • : .··.:···: ... . . . . . . . . .. . . . l. • • • • ••• • • ••••• . . . . . . . . . \ .4. .. . . . .. .

Os genes que codificam os receptores 0 2-like são interrompidos por

íntrons. Até o momento foram identificadas duas variantes do receptor 02,

denominadas 02(414) ou 02s (do inglês short ou curto) e 0 2(443) 02L (do inglês

long ou longo), que diferem entre si por uma seqüência de 29 aminoácidos na

5 terceira alça citoplasmática (CIVELLI, O. Molecular biology of the dopamine

receptor subtypes. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.)


Press Ltda, 1995; MANSOUR, A. & WATSON, S.J. Oopamine receptor

expression in the central nervous system. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J.

10 (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of Progress. Nova York:

Raven Press Ltda, 1995; SEEMAN, P. Oopamine receptors - Clinicai

correlates. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology- The

Fourth Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995). Tais

isoformas do receptor possuem expressão um pouco diferenciada, porém o 02L

15 é geralmente encontrado em maior quantidade. Embora demonstrem

características farmacológicas similares, o receptor 02L possui uma afinidade

aumentada pela subunidade alfa do complexo G, sugerindo diferentes funções

fisiológicas para estes receptores. As isoformas 02L e 02s possuem efeitos

diferenciados na inibição de correntes de cálcio e na direta modulação de

20 correntes de potássio, provavelmente via interação com diferentes proteínas G

(EMILIEN, G.; MALOTEAUX, J.; GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.; CRAGG,

S. Oopamine receptors- Physiological understanding to therapeutic intervential

potential. Pharmacology and Therapeutics 84: 133-56, 1999; VALLONE, 0.;

PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and function of dopamine receptors.

25 Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000).

O gene que codifica o receptor do subtipo 0 4 apresenta cinco exons e se

caracteriza por apresentar um alto grau de polimorfismo. Na mais bem

caracterizada forma de polimorfismo, cada variante do receptor possui um

número diferente de uma unidade de repetição de 48 pares de base no terceiro

30 exon, responsável pela codificação de uma seqüência de aminoácidos da

terceira alça citoplasmática. Já foram identificadas cerca de oito variantes

. . . .. . . . .. . . . . . . . . . ..

8 I 54

~ ~·· ~ . . . ... . •

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polimórficas em humanos, sendo a forma 04.7 a mais prevalente (70%),

seguida pelas formas 04.2 e 04.4 (1 0-20%). Até o momento não foi demonstrada

nenhuma diferença farmacológica entre as variantes polimórficas do receptor

D4 (SEEMAN, P. Dopamine receptors- Clinicai correlates. In: BLOOM, F.E. &

5 KUPFER, D.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; EMILIEN, G.; MALOTEAUX, J.;

GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.; CRAGG, S. Dopamine receptors -

Physiological understanding to therapeutic intervential potential. Pharmacology

and Therapeutics 84: 133-56, 1999; HRIB, N.J. The dopamine D4 receptor: a

1 O controversial therapeutic target. Drugs of the Future 25 (6): 587-611, 2000;

OAK, J.N.; OLDENHOF, J.; VAN TOL, H.H.M. The dopamine 04 receptor: one

decade of research. European Journal of Pharmacology 405: 303-327, 2000;

VALLONE, D.; PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and function of dopamine


15 O receptor D2 tem expressão predominante em áreas cerebrais como o

estriado, tubérculo citatório e núcleo accumbens. Diferente do receptor D1, é

abundante em regiões do hipotálamo que enervam a pituitária. Porém, este

receptor também pode ser localizado em regiões como a parte compacta da

substância negra e na área tegmentar ventral, sugerindo uma localização pré-

20 sináptica (MANSOUR, A & WATSON, S.J. Dopamine receptor expression in

the central nervous system. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J. (Ed.)


Press Ltda, 1995; EMILIEN, G.; MALOTEAUX, J.; GEURTS, M.;

HOOGENBERG, K.; CRAGG, S. Dopamine receptors - Physiological

25 understanding to therapeutic intervential potential. Pharmacology and

Therapeutics 84: 133-56, 1999; VALLONE, D.; PICETTI, R.; BORRELLI, E.

Structure and function of dopamine receptors. Neuroscience and Behavioural

Reviews 24: 125-32, 2000; HURD, Y.L.; SUZUKI, M.; SEDVALL, G.C. D1 and

D2 dopamine receptor mRNA expression in whole hemisphere sections of the

30 human brain. Journal ofChemical Neuroanatomy 22: 127-37, 2001).

. .. .. . . . .. . . . • • • . .. . .

9/54 ... ... .. . . ...... . • • • • • • • • • • • •• . . . . . . . . . ... . . ·: .... :·· : : : ··:·: :. : ··:· . . . . ... .. . .. ~· .. :.· .. ·

A distribuição neuroanatômica do receptor 0 3 é restrita a poucas regiões

cerebrais, como as ilhas de Calleja, alguns núcleos septais, hipotálamo e

regiões distintas do tálamo e do cerebelo. Este subtipo de receptor também é

encontrado na região compacta da substância negra, o que sugere uma

5 possível localização pré-sináptica (MANSOUR, A. & WATSON, S.J. Oopamine

receptor expression in the central nervous system. In: BLOOM, F.E. &

KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; VALLONE, 0.; PICETTI, R.;

BORRELLI, E. Structure and function of dopamine receptors. Neuroscience and

10 Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000).

A ocorrência do receptor 04 parece ser cerca de 1 O a 100 vezes menor

que a dos receptores 01 e 02, possuindo expressão predominante no córtex

frontal, amígdala, tubérculo olfatório, hipocampo, giro para-hipocampal (córtex

entorrinal), hipotálamo (principalmente na área preóptica mediai - MPOA) e

15 mesencéfalo. Níveis relativamente baixos de mRNA deste subtipo de receptor

são encontrados na via nigroestrital em comparação ao sistema mesolímbico

(MANSOUR, A. & WATSON, S.J. Oopamine receptor expression in the central

nervous system. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology


20 PRIMUS, R.J.; THURKAUF, A.; XU, J.; YEVICH, E.; MCINERNEY, S.; SHAW,

K.; TALLMAN, J.F.; GALLAGER, O.W. 11. Localization and characterization of

dopamine 0 4 binding sites in rat and human brain by use of the novel, 04

receptor-selective ligand [3H]NGO 94-1. The Journal of Pharmacology and

Experimental Therapeutics 282 (2): 1020-7, 1997; EMILIEN, G.; MALOTEAUX,

25 J.; GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.; CRAGG, S. Oopamine receptors -

Physiological understanding to therapeutic intervential potential. Pharmacology

and Therapeutics 84: 133-56, 1999; HRIB, N.J. The dopamine 04 receptor: a

controversial therapeutic target. Orugs of the Future 25 (6): 587-611, 2000;

OAK, J.N.; OLOENHOF, J.; VAN TOL, H.H.M. The dopamine 04 receptor: one

30 decade of research. European Journal of Pharmacology 405: 303-327, 2000;

10 I 54

. .. . . . . . . .. . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . .. . . .



Já foram identificados neurônios que expressam simultaneamente

receptores 01-/ike e 02-like. Esta colocalização é restrita a algumas regiões do

5 cérebro, como a amígdala, o estriado, o hipotálamo e o bulbo olfatório. Porém,

estes receptores apresentam predominantemente uma distribuição anatômica

diferenciada (MALTAIS, S.; CÓTÉ, S.; OROLET, G.; FALAROEAU, P. Cellular

colocalization of dopamine 01 mRNA and 02 receptor in rat brain using a 02

dopamine receptor specific polyclonal antibody. Progress in Neuro-

10 Psychopharmacology & Biological Psychiatry 24: 1127-49, 2000; GLICKSTEIN,

S. B. & SCHMAUSS, C. Oopamine receptor functions: lessons from knockout

mice. Pharmacology & Therapeutics 91:63-83, 2001; HURO, Y.L.; SUZUKI, M.;

SEOVALL, G.C. 01 and 02 dopamine receptor mRNA expression in whole

hemisphere sections of the human brain. Journal of Chemical Neuroanatomy

15 22: 127-37, 2001; LIN, J.Y.; OUBEY, R.; FUNK, G.O.; LIPSKI, J. Receptor

subtype-specific modulation by dopamine of glutamatergic responses in striatal

medium spiny neurons. Brain Research, 959: 251-62, 2003).

Estudos anatômicos demonstram que neurônios dopaminérgicos

apresentam receptores para dopamina de localização pré-sináptica, que

20 funcionam como autoreceptores, modulando a atividade do próprio neurônio no

qual eles se encontram. Estes receptores podem estar localizados no corpo

celular, dentritos e axônios terminais. A estimulação dos receptores

somatodentríticos acarreta diminuição da freqüência de disparos dos neurônios

dopaminérgicos, sendo classificados como autoreceptores moduladores de

25 impulso. A estimulação dos autoreceptores presentes nos terminais nervosos

inibem a síntese e a liberação de dopamina, sendo denominados

autoreceptores moduladores de síntese e autoreceptores moduladores de

liberação, respectivamente (CHIOOO, L.A.; FREEMAN, AS.; BUNNEY, B.S.

Oopamine autoreceptor signal transduction and regulation. In: BLOOM, F.E. &

30 KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of

Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.;

... ... .. . . . ..... . . . . . . . . . 11 I 54

. . . . . . . . . ... . . . ... . . ...... . ..... . . . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. . . ..

ROTH, R.H. The Biochemical Basis of Neuropharmacology. Nova York: Oxford

University Press, 1996).

A principal diferença entre os autoreceptores e os receptores

dopaminérgicos pós-sinápticos reside no fato de que os primeiros são de 5 a

5 1 O vezes mais sensíveis à ação da dopamina. Isto significa que em baixas

concentrações de agonistas, os efeitos mediados pelos autoreceptores serão

predominantes, resultando em uma diminuição da neurotransmissão

dopaminérgica (COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.; ROTH, R.H. The Biochemical

Basis of Neuropharmacology. Nova York: Oxford University Press, 1996.).

I O Tanto autoreceptores somatodentríticos quanto terminais podem ser

classificados como 0 2-/ike, por exibirem propriedades farmacológicas similares

a estes (COOPER, J.R.; BLOOM, F.E.; ROTH, R.H. The Biochemical Basis of

Neuropharmacology. Nova York: Oxford University Press, 1996.). Estudos de

hibridização in situ sugerem que o receptor do subtipo 02 é o mais provável

15 candidato a atuar como autoreceptor dopaminérgico, devido a sua expressão

em neurônios dopaminérgicos da substância negra e área tegmentar ventral

(MANSOUR, A. & WATSON, S.J. Oopamine receptor expression in the central

nervous system. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, O.J. (Ed.) Psychopharmacology


20 VALLONE, 0.; PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure and function of dopamine

receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews 24: 125-32, 2000). A

expressão diferenciada das diferentes isoformas do subtipo 02 de receptor

indica que o 028 seria o autoreceptor nas principais vias dopaminérgicas

centrais, enquanto o receptor 02L teria uma localização predominantemente

25 pós-sináptica. Somam-se a isto alguns estudos com camundongos knockout

para o receptor 0 2L que demonstram a manutenção completa de todas as

funções exercidas por autoreceptores dopaminérgicos em camundongos

normais (EMILIEN, G.; MALOTEAUX, J.; GEURTS, M.; HOOGENBERG, K.;

CRAGG, S. Oopamine receptors - Physiological understanding to therapeutic

30 intervential potential. Pharmacology and Therapeutics 84: 133-56, 1999;

. . .. . . . . ..

12 I 54

.. . . . . . . . . . . .... . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . .. . . . .. .. . . . . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .. . . .. ..

GLICKSTEIN, S.B. & SCHMAUSS, C. Dopamine receptor functions: lessons

from knockout mice. Pharmacology & Therapeutics 91: 63-83, 2001).

Alguns estudos de distribuição anatômica e com camundongos

geneticamente modificados também apontam para uma provável localização

5 pré-sináptica do receptor 0 3, com uma participação principalmente na

regulação da liberação de dopamina, mas não da síntese nem dos impulsos

neuronais no estriado (MANSOUR, A. & WATSON, S.J. Dopamine receptor

expression in the central nervous system. In: BLOOM, F.E. & KUPFER, D.J.

(Ed.) Psychopharmacology - The Fourth Generation of Progress. Nova York:

10 Raven Press Ltda, 1995; VALLONE, D.; PICETTI, R.; BORRELLI, E. Structure

and function of dopamine receptors. Neuroscience and Behavioural Reviews

24: 125-32, 2000; GLICKSTEIN, S.B. & SCHMAUSS, C. Dopamine receptor

functions: lessons from knockout mice. Pharmacology & Therapeutics 91: 63-

83, 2001; JOSEPH, J.D.; WANG, Y.M.; MILES, P.R.; BUDYGIN, E.A.; PICETTI,

15 R.; GAINETDINOV, R.R.; CARON, M.G.; WIGHTMAN, R.M. Dopamine

autoreceptor regulation of release and uptake in mouse brain slices in the

absence of 0 3 receptors. Neuroscience 112 (1 ): 39-49, 2002).

O sistema dopaminérgico possui um papel fortemente estabelecido em

vários distúrbios neurológicos e psiquiátricos, como o uso abusivo de drogas

20 estimulantes, como a cocaína e a anfetamina, mal de Parkinson, esquizofrenia,

entre outros (BANNON, M.J.; GRANNEMAN, J.G.; KAPATOS, G. The

dopamine transporter- Potential involvement in neuropsychiatric disorders. In:


Generation of Progress. Nova York: Raven Press Ltda, 1995; STAHL, S.M.

25 Essential Psychopharmacology - Neuroscientific Basis and Practical

Applications. 2 ed. Nova York: Cambridge University Press, 2000). Diversos

fármacos que atuam através da modulação da neurotransmissão

dopaminérgica são empregados no tratamento destes e outros quadros. Entre

eles, podemos destacar os utilizados no tratamento da doença de Parkinson,

30 alguns antidepressivos, fármacos anti-enxaqueca, moduladores do apetite,

antieméticos, procinéticos e, mais recentemente, fármacos úteis no tratamento

. . . .. . . . . . . . .... . . . . . . . . . . 13 I 54

. .. . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... . . . . . .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . .. . .

da disfunção erétil (DE) (GUIMARÃES, F.S. Medicamentos antidepressivos e

estabilizadores do humor. In: GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.)

Fundamentos de Psicofarmacologia. São Paulo: Ateneu, 1999; LOBO, B.L.;

COOKE, S. C.; LANDY, S. H. Symptomatic pharmacoterapy of migraine. Clinicai

5 Therapeutics 21 (7): 1118-30, 1999; HOFFMAN, B. B. Catecholamines,

sympathomimetic drugs and adrenergic receptor antagonists. In: HARDMAN,

J.G & LIMBIRD, L.E. (Ed.). Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of

Therapeutics. 1 O ed. Nova York: McGraw-Hill, 2001; PASRICHA, P.J.

Prokinetic agents, antiemetics and agents used in irritable bowel syndrome. In:

10 HARDMAN, J.G & LIMBIRD, L.E. (Ed.) Goodman & Gilman's The

Pharmacological Basis of Therapeutics. 1 O ed. Nova York: McGraw-Hill, 2001;

STANDAERT, D.G. & YOUNG, A.B. Treatment of central nervous system

degenerative disorders. In: HARDMAN, J.G & LIMBIRD, L.E. (Ed.). Goodman &

Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics. 10 ed. Nova York:

15 McGraw-Hill, 2001; BROCK, G. Oral agents: First-line therapy for erectile

dysfunction. European Urology Supplements. 1: 12-18, 2002). Contudo, os

fármacos dopaminérgicos mais empregados no arsenal terapêutico atual ainda

são antipsicóticos, utilizados para o tratamento da esquizofrenia.

A esquizofrenia é um transtorno psiquiátrico crônico e incapacitante,

20 uma doença degenerativa de natureza complexa, com manifestações múltiplas

e quadros variados. Cerca de 1% da população desenvolve esta doença ao

longo da vida, sendo a incidência semelhante em homens e mulheres.

Usualmente, este transtorno inicia-se com um episódio agudo, caracterizado

por manifestações psicóticas conhecidas como sintomas positivos, como

25 delírios, alucinações, fala e comportamento desorganizados e agitação motora.

Metade de todos os pacientes esquizofrênicos apresenta uma sucessão de

episódios agudos ao longo de vários anos, intercalados com fases de relativa

normalidade (GRAEFF, F.G.; GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI, A.W. Medicamentos

antipsicóticos. In: GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de

30 Psicofarmacologia. São Paulo: Ateneu, 1999; STAHL, S.M. Essential

. . . . .. . . . . . . .... . .. 14 I 54

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . .. . . . . . . .. . . . . .

Psychopharmacology - Neuroscientific Basis and Practical Applications. 2 ed.

Nova York: Cambridge University Press, 2000).

Os chamados sintomas negativos (embotamento afetivo, falta de

iniciativa, isolamento social, pensamento estereotipado, anedonia, desatenção,

5 entre outros) tendem a surgir tardiamente e a agravar-se com a progressão da

doença. Quando não tratados, os pacientes ficam cada vez mais deteriorados e

podem desenvolver um quadro de demência grave (GRAEFF, F.G.;

GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI, A.W. Medicamentos antipsicóticos. In: GRAEFF,

F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de Psicofarmacologia. São

10 Paulo: Ateneu, 1999; STAHL, S.M. Essential Psychopharmacology -

Neuroscientific Basis and Practical Applications. 2 ed. Nova York: Cambridge

University Press, 2000).

Com o advento dos medicamentos antipsicóticos, tanto o tratamento

como a compreensão das bases neurais da esquizofrenia sofreram uma

15 fundamental transformação. Os antipsicóticos clássicos podem ser divididos

em três principais grupos químicos: os fenotiazínicos (tendo como principal

representante a clorpromazina), os tioxantênicos (clorprotixeno) e as

butirofenonas (haloperidol) (BALDESSARINI, R.J. & TARAZI, F.l. Drugs and

the treatment of psychiatric disorders: Psychosis and mania. In: HARDMAN,

20 J.G & LIMBIRD, L.E. (Ed.). Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of

Therapeutics. 1 O ed. Nova York: McGraw-Hill, 2001 ). Apesar do grande número

de fármacos existentes, ensaios realizados não indicam maior eficácia

antipsicótica de um em relação aos outros. Diferem, contudo, quanto à

potência, farmacocinética e perfil de efeitos adversos (GRAEFF, F.G.;

25 GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI, A.W. Medicamentos antipsicóticos. In: GRAEFF,

F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de Psicofarmacologia. São

Paulo: Ateneu, 1999).

Centenas de ensaios clínicos demonstram que estes medicamentos

suprimem ou atenuam manifestações psicóticas agudas e reduzem a

30 freqüência de recidivas. Em conseqüência, reduzem o número e o tempo de

hospitalizações e viabilizam outras formas de tratamento. Embora úteis para

. .. . . . . .. .. . . . . .... . . . . . . . . . . .. . . 15 I 54

. . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . • •• . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .. . . . .. . . .

aliviar os chamados sintomas positivos da esquizofrenia, são pouco eficazes no

alívio dos sintomas negativos, além de uma percentagem de pacientes

responderem pouco ou nada a essa medicação (GRAEFF, F.G.; GUIMARÃES,

F.S.; ZUARDI, A.W. Medicamentos antipsicóticos. In: GRAEFF, F.G. &

5 GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de Psicofarmacologia. São Paulo:

Ateneu, 1999; BALDESSARINI, R.J. & TARAZI, F.l. Drugs and the treatment of

psychiatric disorders: Psychosis and mania. In: HAROMAN, J.G & LIMBIRO,

L.E. (Ed.). Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of Therapeutics.

10 ed. Nova York: McGraw-Hill, 2001).

10 A observação de que esta classe de fármacos atua como antagonista de

receptores de dopamina e que sua potência clínica está diretamente ligada a

sua afinidade pelo receptor do subtipo D2, bem como a constatação de que

compostos que estimulam a neurotransmissão dopaminérgica podem induzir o

desenvolvimento de sintomas psicóticos levaram a formulação da hipótese

15 dopaminérgica para a patofisiologia da esquizofrenia. A visão mais moderna

desta hipótese postula que uma hiperatividade de neurônios dopaminérgicos

da via mesolímbica seria responsável pelo aparecimento dos sintomas

positivos, e que os sintomas negativos seriam decorrentes de uma falta de

dopamina em certas áreas de projeção da via mesocortical (CRISMON, M.L. &

20 OORSON, P.G. Schizophrenia. In: OIPIRO, J.T. et a/. (Ed.) Pharmacotherapy

A Pathophysiologic Approach. 3.ed. Stamford: Appleton Lange, 1997; WILSON,

J.M.; SANYAL, S.; VAN TOL, H.H.M. Oopamine 0 2 and 04 receptor ligands:

relation to antipsychotic action. European Journal of Pharmacology 351: 273-

86, 1998.; GRAEFF, F.G.; GUIMARÃES, F.S.; ZUAROI, A.W. Medicamentos

25 antipsicóticos. In: GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de

Psicofarmacologia. São Paulo: Ateneu, 1999; STAHL, S.M. Essential



Porém, os antipsicóticos clássicos ainda apresentam uma gama de

30 importantes efeitos colaterais indesejáveis. Os chamados efeitos

extrapiramidais estão diretamente ligados ao bloqueio dos receptores

16 I 54 ... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . . . . . . . . . . . . . .. .. . .. .. .

dopaminérgicos na via nigroestriatal. Os pacientes podem apresentar quadros

de distonia muscular, acatisia, podendo desenvolver Parkinson farmacológico

e, com o decorrer do tratamento, discinesia tardia. O aparecimento destes

sintomas é a principal causa de abandono do tratamento por parte dos

5 pacientes. O bloqueio de receptores dopaminérgicos na via tuberoinfundibular

acarreta num aumento dos níveis séricos de prolactina, com conseqüente

aumento de tamanho e sensibilidade das glândulas mamárias, diminuição da

libido, amenorréia e galactorréia (CRISMON, M.L. & DORSON, P.G.

Schizophrenia. In: DIPIRO, J.T. et ai. (Ed.) Pharmacotherapy - A

10 Pathophysiologic Approach. 3.ed. Stamford: Appleton Lange, 1997; GRAEFF,

F.G.; GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI, A.W. Medicamentos antipsicóticos. In:

GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de Psicofarmacologia.

São Paulo: Ateneu, 1999; BALDESSARINI, R.J. & TARAZI, F.l. Drugs and the

treatment of psychiatric disorders: Psychosis and mania. In: HARDMAN, J.G &

15 LIMBIRD, L.E. (Ed.). Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of

Therapeutics. 10 ed. Nova York: McGraw-Hill, 2001 ).

A procura de substâncias que superassem as limitações dos fármacos

existentes no mercado conduziu ao desenvolvimento dos chamados

antipsicóticos atípicos. Não existe uma definição universal para inclusão de

20 uma substância neste grupo de compostos. A conceituação mais simples utiliza

apenas um critério de inclusão, que é o de produzir o efeito antipsicótico na

maioria dos pacientes, com doses que não causam efeitos extrapiramidais

importantes. Outros atributos que vêm sendo descritos incluem uma maior

eficácia em relação aos sintomas negativos e a não alteração dos níveis

25 séricos de prolactina. Os principais representantes deste grupo são a clozapina

e a risperidona (CRISMON, M.L. & DORSON, P.G. Schizophrenia. In: DIPIRO,

J.T. et ai. (Ed.) Pharmacotherapy - A Pathophysiologic Approach. 3.ed.

Stamford: Appleton Lange, 1997; GRAEFF, F.G.; GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI,

A.W. Medicamentos antipsicóticos. In: GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S.

30 (Ed.) Fundamentos de Psicofarmacologia. São Paulo: Ateneu, 1999).

. .. .. . . . .. . . . . . . •••••

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . 17 I 54

. . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . . . . . . . . . . . • ••• •• • •• •• •

A clozapina é o único antipsicótico atípico que, até o momento, parece

cumprir todos os critérios acima descritos. Além de apresentar efeito de

melhoria tanto de sintomas positivos como negativos, 60% dos pacientes que

não respondem ao tratamento com antipsicóticos clássicos podem apresentar

5 melhora com o uso da clozapina. Em relação ao seu mecanismo de ação,

apresenta seletividade funcional frente aos receptores dopaminérgicos, com

uma maior afinidade pelo subtipo D4, além de efeito bloqueador de receptores

serotoninérgicos do tipo 5-HT 2A (CRISMON, M.L. & DORSON, P.G.

Schizophrenia. In: DIPIRO, J.T. et ai. (Ed.) Pharmacotherapy - A

10 Pathophysiologic Approach. 3.ed. Stamford: Appleton Lange, 1997; GRAEFF,

F.G.; GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI, A.W. Medicamentos antipsicóticos. In:

GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.) Fundamentos de Psicofarmacologia.

São Paulo: Ateneu, 1999).

O antagonismo de receptores 5-HT2A é a uma característica comum a

15 maioria dos antipsicóticos atípicos utilizados atualmente na terapêutica. É

amplamente relatada na literatura a importante influencia do sistema

serotoninérgico sobre o sistema dopaminérgico. Sabe-se que a serotonina,

através da ativação de receptores 5-HT 2A, é capaz de inibir a liberação de

dopamina dos terminais axonais de forma diferenciada nas quatro principais

20 vias dopaminérgicas centrais. Conseqüentemente, o antagonismo de

receptores 5-HT2A leva a um aumento na liberação de dopamina nestes

terminais. Diversos estudos demonstram que a modulação diferenciada da

neurotransmissão dopaminérgica nas diferentes vias centrais através desta

ação sobre o sistema serotoninérgico seria a responsável pelo perfil atípico de

25 fármacos como a clozapina (STAHL, S.M. Essential Psychopharmacology -


University Press, 2000; BALDESSARINI, R.J. & TARAZI, F.l. Drugs and the

treatment of psychiatric disorders: Psychosis and mania. In: HARDMAN, J.G &

LIMBIRD, L.E. (Ed.). Goodman & Gilman's The Pharmacological Basis of

30 Therapeutics. 1 O ed. Nova York: McGraw-Hill, 2001 ).

. .. .. . . . .. . . . • • • •••••

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . 18 I 54

. . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . . . . . . . . . . • ••• •• • •• ••

. .. .. . . . .. . . . . . . • ••••

Neurônios serotoninérgicos provenientes dos núcleos da rafe enervam .

os corpos neuronais dopaminérgicos presentes na substância negra e também =- --=-

se projetam ao estriado, onde as porções terminais de seus axônios se

encontram extremamente próximas a sinapses dopaminérgicas. Esta

5 característica anatômica aponta para um duplo controle da serotonina sobre

funções dopaminérgicas na via nigroestriatal. Tanto na substância negra

quanto no estriado, a serotonina liberada se liga a receptores S-HT2A presentes

em neurônios dopaminérgicos, inibindo a liberação de dopamina no estriado

{STAHL, S.M. Essential Psychopharmacology - Neuroscientific Basis and

10 Practical Applications. 2 ed. Nova York: Cambridge University Press, 2000).

Portanto, na ação dos antipsicóticos atípicos, o aumento na liberação de

dopamina no estriado via bloqueio de receptores serotoninérgicos competiria

com o mecanismo inibitório da neurotransmissão dopaminérgica, levando a

uma menor propensão ao desenvolvimento de sintomas extrapiramidais.

15 O antagonismo de receptores 5-HT 2A leva a um aumento na

neurotransmissão dopaminérgica também na via mesocortical. Diferentemente

do estriado, o córtex pré-frontal é uma região extremamente rica em receptores

serotoninérgicos, o que faz com que uma ação sobre estes receptores se

sobressaia a uma atividade sobre receptores dopaminérgicos. Então, a ação

20 estimulatória indireta sobre a neurotransmissão dopaminérgica seria a

predominante no córtex pré-frontal, levando à eficácia no tratamento dos

sintomas negativos da esquizofrenia, que também é característica dos

antipsicóticos atípicos (STAHL, S.M. Essential Psychopharmacology -


25 University Press, 2000).

Entretanto, o maior problema com a utilização da clozapina é o

aparecimento eventual de agranulocitose (cerca de 1 a 2% dos pacientes).

Dada a gravidade e a potencial letalidade deste quadro (em torno de 19%), o

uso deste fármaco é restrito na prática clínica a casos refratários aos

30 tratamentos convencionais (GRAEFF, F.G.; GUIMARÃES, F.S.; ZUARDI, A.W.

19 I 54 ... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . ... . . . ..... . ..... . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

Medicamentos antipsicóticos. In: GRAEFF, F.G. & GUIMARÃES, F.S. (Ed.)

Fundamentos de Psicofarmacologia. São Paulo: Ateneu, 1999).

Considerando que os agentes anfTpsicóticos atualmente disponíveis não

curam a esquizofrenia e produzem efeitos adversos importantes, a busca por

5 novas moléculas potencialmente ativas neste quadro psiquiátrico permanece

fundamental e continua sendo amplamente realizada.

Além disso, moléculas com ação dopaminérgica têm sido também

bastante investigadas na busca de tratamentos eficazes para outros distúrbios.

Uma ação interessante e ainda pouco explorada de agentes dopaminérgicos é

1 O a sua potencial utilização no tratamento de disfunções sexuais que acometem

ambos os sexos, como anorgasmia feminina, vaginismo, obstrução vaginal

dispareunia, insuficiência erétil do clitóris, ejaculação precoce e,

principalmente, a disfunção erétil (BRIONI, J.D.; KOLASA, T.; HSIEH, G.;

NELL Y-ROBERTS, D.L. The use of selective dopamine D4 agonists for treating

15 sexual dysfunction. WO 02/41894 A2, 2002).

A disfunção erétil (DE), também conhecida como impotência sexual

masculina, é definida como a inabilidade persistente (por no mínimo 6 meses)

de obter e manter uma ereção firme o suficiente para permitir uma performance

sexual satisfatória (WESPES, E.; AMAR, A.; HATZICHRISTOU, D.;

20 MONTORSI, F.; PRYOR, J.; VARDI, Y. Guidelines on erectile dysfunction.

European Urology 41 (1 ): 1-5, 2002). Os casos de DE são geralmente

classificados em quatro diferentes tipos de acordo com sua etiologia:

psicogênicos, vasculogênicos ou orgânicos, neurológicos e endócrinos. Por

muitos anos acreditou-se que os fatores psicológicos eram os principais

25 causadores deste distúrbio. Porém, sabe-se hoje que a DE originária de

problemas vasculares é responsável pela grande maioria dos casos relatados,

enquanto o hipogonadismo e os fatores psicológicos contribuem em menor

escala (ANDERSSON, K.E. Pharmacology of penile erection. Pharmacological

Reviews 53 (9): 417-50, 2001). A idade avançada é o principal fator de risco

30 para o desenvolvimento de DE. Também são fortemente relacionados ao

desenvolvimento de DE a preexistência de doenças cardíacas, hipertensão,

. .. •• • • . .. • • • . . .. .....

20 I 54 • •• • • • e e 1 •• • ••• • . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . ... . . . .. .. . . ..... . . . . . . . . . . ... ... . .. ..

níveis altos de colesterol e triglicerídeos plasmáticos, ateroesclerose, Diabetes

mellitus, depressão, hiperprolactinemia e tabagismo (MOREIRA, E.D.; ABDO,

C.H.N.; TORRES, E.B.; LOBO, C.F.L.; FITTIPALDI, J.A.S. Prevalence and

correlates of erectile dysfunction: Results of the Brazilian study of sexual

5 behavior. Adult Urology 58 (4): 583-8, 2001; ANDERSSON, K.E. Pharmacology

of penile erection. Pharmacological Reviews 53 (9): 417-50, 2001; THOMAS,

J.A. Pharmacological aspects of erectile dysfunction. Japanese Journal of

Pharmacology 89: 101-12, 2002). Outro fator que pode desencadear o

desenvolvimento de DE é o tratamento contínuo com antihipertensivos como [3-

1 O bloqueadores e diuréticos tiazídicos, antidepressivos, antipsicóticos e fármacos

com atividade hormonal (THOMAS, J.A. Pharmacological aspects of erectile

dysfunction. Japanese Journal of Pharmacology 89: 101-12, 2002; WIRSHING,

D.A.; PIERRE, J.M.; MARDER, S.R.; SAUNDERS, C.S.; WIRSHING, W.C.

Sexual side effects of novel antipsychotic medications. Schizophrenia Research

15 56: 25-30, 2002).

A crescente elucidação das bases fisiológicas e bioquímicas da função

erétil, nos últimos anos, possibilitou a evolução das opções de tratamento da

DE. Heaton e colaboradores (HEATON, J.P.W. Central neuropharmacological

agents and mechanisms in erectile dysfunction: the role of dopamine.

20 Neuroscience and Biobehavioral Reviews 24: 561-9, 2000) classificaram os

agentes utilizados no tratamento da disfunção erétil de acordo com seu

mecanismo e local de ação. Esta classificação engloba cinco diferentes

categorias e pode ser visualizada na tabela 1.

25

30

. .. .. . . . .. . . . . . . ... ..

5

21 I 54 .. . ... . . . . . . .... ' . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... . . .. . . . . . ... . . ..... . . . . . . . . . . . .. .. . . . ..

Tabela 1: Classificação por modo e local de ação dos tratamentos para disfunção erétil.

Classe

11

111

IV

v

Denominação

Iniciador central

Iniciador periférico

Condicionador central

Condicionador periférico

Outros

Definição Agentes que têm como seu local de ação primário o SNC e agem através da ativação de eventos neurais

que resultam em ereção peniana Agentes que têm como seu local de ação primário

estruturas periféricas e agem através da ativação de diferentes mecanismos periféricos que resultam em

ereção peniana Agentes que atuam deslocando o equilíbrio dos fatores presentes no SNC em favor de estímulos

pró-eréteis, sem induzir uma ereção per se Agentes que atuam deslocando o equilíbrio dos

fatores presentes em estruturas periféricas em favor de estímulos pró-eréteis, sem induzir uma ereção

per se Outros métodos utilizados para promover a rigidez

do pênis, incluindo próteses e procedimentos cirúrgicos

No mercado, são atualmente encontradas formas farmacêuticas de

aplicação local e de administração oral. A administração oral é fácil, não

invasiva, facilmente reversível e bem tolerada tanto pelo paciente quanto por

sua parceira. Assim, os fármacos de administração oral tornaram-se a terapia

I o de primeira escolha para os mais diversos casos de DE, destacando-se entre

eles o sildenafil (Viagra®) (BROCK, G. Oral agents: First-line therapy for erectile

dysfunction. European Urology Supplements. 1: 12-18, 2002), o qual é um

inibidor seletivo da isoforma 5 da enzima fosfosdiesterase (PDE 5), classificado

como um agente condicionador da ereção peniana de ação periférica (Classe

15 IV). Outros inibidores de PDE 5 foram sintetizados buscando uma maior

seletividade frente às outras isoformas da enzima tendo sido o vardenafil

(Levitra®) e o taladafil (Cialis®) recentemente introduzidos no mercado

farmacêutico.

Por outro lado, é de extrema importância o desenvolvimento de

20 fármacos com diferentes mecanismos de ação, que possam beneficiar

. .. . ., . . . .. . . . . . . ... ..

22 I 54 ••• ••• a• • •• •• •• • • • • • • • • • • • . . . . . . . . . ..... ••• • • • • ••• • • ••••• . . . . . . . ~ . . ... .. . .. ..

pacientes até o momento não atendidos pelas terapias atuais. Além disso,

diferentes mecanismos de ação podem viabilizar o uso concomitante de dois

fármacos, buscando um efeito sinérgico e uma melhor resposta em pacientes

não responsivos às terapias isoladas (FRICKER, J. The rise and fali of viagra.

5 Drug Discovery Today 6 (14): 704-6, 2001 ). Entre os possíveis mecanismos

diferenciados destaca-se a utilização de agentes dopaminérgicos.

De uma forma bastante simplificada, o comportamento sexual masculino

pode ser dividido em três principais etapas. O primeiro estágio, a libido, está

relacionado ao desejo sexual. O segundo estágio é o da excitação, quando são

1 O ativados os mecanismos pró-eréteis preparando a genitália para a relação

sexual. O terceiro e último estágio é o orgasmo acompanhado da ejaculação

(STAHL, S.M. Essential Psychopharmacology - Neuroscientific Basis and

Practical Applications. 2 ed. Nova York: Cambridge University Press, 2000).

O estágio da libido é extremamente relacionado ao desejo por sexo e é

15 considerado um fenômeno mediado pelas vias dopaminérgicas centrais ligadas

aos mecanismos de recompensa. Acredita-se que esta via, a via mesolímbica,

media não somente os mecanismos do desejo sexual, mas também o orgasmo.

Uma influência negativa à libido é exercida pela prolactina. Apesar dos relatos

de diversos casos de DE diretamente ligada à hiperprolactinemia, a relação

20 entre a prolactina e a função sexual masculina é pouco compreendida (STAHL,

S.M. Essential Psychopharmacology - Neuroscientific Basis and Practical

Applications. 2 ed. Nova York: Cambridge University Press, 2000).

O segundo estágio da resposta sexual é a ereção. A mensagem

neuroquímica que resulta na preparação do pênis para a relação sexual se

25 inicia no cérebro, segue caminhos descendentes através da medula espinhal e

é conduzida por fibras autonômicas periféricas simpáticas e parasimpáticas aos

tecidos vasculares e à genitália. Os dois principais neurotransmissores pró

eréteis são acetilcolina e o NO (STAHL, S.M. Essential Psychopharmacology


30 University Press, 2000). Os mecanismos que levam à ereção peniana serão

discutidos mais detalhadamente a seguir.

• •• .. . . . .. • • • • • • •• • ••

23 I 54 ••• ••• •• • • •••••• • • • • • • • • • • • • • • • • • • • ••••• ••• • • • ••••• • ••••• • • • • • • • • • • • ••• •• • •• •• •

O último estágio da função sexual masculina é o orgasmo,

acompanhado de ejaculação. Fibras serotonérgicas que descem através da

coluna espinhal exercem uma função inibitória sobre este comportamento via

ativação de receptores 5-HT 2A. enquanto fibras descendentes noradrenérgicas

5 facilitam tanto a ejaculação quanto o orgasmo (STAHL, S.M. Essential



A ereção peniana é um fenômeno neurovascular modulado por fatores

psicológicos e hormonais, cujo resultado final é o relaxamento da musculatura

1 O lisa do pênis. Este fenômeno envolve uma complexa interação entre o sistema

nervoso central (SNC) e estímulos loca~s. É basicamente mediado por reflexos

espinhais, pelo processamento de informações no hipotálamo e pela integração

de estímulos táteis, visuais, olfatórios, auditivos e imaginários.

Anatomicamente, o corpo cavernoso, principal músculo envolvido no processo

15 da ereção, é enervado por pelo menos três vias neuroefetoras responsáveis

pela modulação de seu tônus: uma via adrenérgica, uma colinérgica e uma

terceira denominada não-adrenérgica e não-colinérgica (NANC). O processo de

ereção e detumescência consiste de uma série de complexas interações

envolvendo o sistema nervoso autônomo e a subseqüente variação no fluxo

20 sangüíneo local, que pode ser dividido em 7 fases, demonstradas na tabela 2

(ANDERSSON, K.E. Pharmacology of penile erection. Pharmacological

Reviews 53 (9): 417-50, 2001; THOMAS, J.A. Pharmacological aspects o f

erectile dysfunction. Japanese Journal of Pharmacology 89: 101-12, 2002).

• •• •• • • • •• • • • • • • •••••

24 I 54

. . . . . . . . . .. . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . ..

Tabela 2: Caracterização das fases componentes do processo de ereção e detumescência.

Fase

o

1

2

3

4

5

6

7

Características

Fase f/ácida- domínio do sistema nervoso simpático

Fase latente ou de preenchimento- após um estímulo sexual, diminuição da neurotransmissão simpática e crescente domínio da enervação parassimpática

Tumescência - alterações hemodinâmicas resultantes de um pequeno aumento do fluxo sangüíneo local

Ereção completa - alterações hemodinâmicas resultantes do crescente aumento do fluxo sangüíneo local

Ereção rígida - alterações hemodinâmicas resultantes do preenchimento total dos sinusóides cavernosos

Fase de transição- já revela um aumento da neurotransmissão simpática indicando o início do retorno ao estado inicial

Detumescência inicial- início da diminuição da pressão intracavernosa

Detumescência rápida - queda da pressão intracavernosa e inativação dos mecanismos venooclusivos

5 A contração do corpo cavernoso e da musculatura vascular local é

mediada por um estímulo a receptores a1-adrenérgicos, limitando o fluxo

sangüíneo local e mantendo o estado flácido usual do pênis. A ereção ocorre

quando um estímulo erótico, recebido por qualquer um dos cinco sentidos e

processado no hipotálamo, resulta na inibição do tônus simpático, no aumento

1 o da neurotransmissão parassimpática e na liberação de NO pelas vias NANC e

por células endoteliais das arteríolas do pênis. O NO é considerado,

atualmente, o principal modulador bioquímica da ereção peniana (THOMAS,

J.A. Pharmacological aspects of erectile dysfunction. Japanese Journal of

Pharmacology 89: 101-12, 2002). O NO ativa a enzima guanilato ciclase,

15 responsável pela síntese de guanosina monofosfato cíclica (GMPc). A

presença de GMPc na musculatura vascular e do corpo cavernoso resulta, em

última instância, na diminuição do influxo de cálcio nestes tecidos, induzindo o

25 I 54

. . . . . . . . . .. . .... . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . ... . . . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . .. . .

relaxamento muscular. Este efeito permite a entrada de sangue nos sinusóides

cavernosos, produzindo a ereção. Igualmente importante ao aumento de fluxo

sangüíneo no corpo cavernoso é a inibição do defluxo venoso, fenômeno este

que ocorre passivamente através da compressão do plexo venoso pelos

5 sinusóides cavernosos distendidos. No retorno ao estado flácido, o GMPc

formado é hidrolisado a GMP (guanosina monofosfato) pela enzima

fosfodiesterase tipo 5 (PDE 5), a isoforma predominante no pênis. Nesta etapa

é que atuam os inibidores de PDE 5 (sildenafil, vardenafil e taladafil), inibindo a

hidrólise do GMPc e conferindo uma ereção mais duradoura (ZARRINDAST,

10 M.; SHOKRAVI, S.; SAMINI, M. Opposite influences of dopaminergic receptor

subtypes on penile erection. General Pharmacology. 23 (4):671-5, 1992;

MARKOWISKI, V.P.; EATON, R.C.; LUMLEY, L.A.; MOSES, J.; HULL, E.M. A

D1 agonist in the MPOA facilitates copulation in male rats. Pharmacology,

Biochemitry and Behavior. 47 (3): 483-86, 1994).

15 Além de NO, as vias NANC são responsáveis pela liberação de diversos

outros mediadores que levam ao relaxamento da musculatura lisa do pênis.

Entre eles podemos citar neuropeptídeos, como o peptídeo vasoativo intestinal,

peptídeo relacionado ao gene da calcitonina, substãncia P, purinas, como

adenosina trifosfato (ATP), aminoácidos descarboxilados, bem como agentes

20 parácrinos como prostaglandinas, bradicinina e fatores endoteliais. Entre os

moduladores anti-eréteis podemos mencionar, além da noradrenalina, o

neuropeptídeo Y e agentes parácrinos como tromboxano, histamina, endotelina

e angiotensina 11 (BURNETT, A. L. Oral pharmacotherapy for erectile

dysfunction: Current perspectives. Urology. 54: 392-400, 1999).

25 Contudo, apesar de toda ação periférica coordenada necessária para a

obtenção de uma ereção, quem comanda a ocorrência da mesma é o cérebro.

A visão de que este apenas controla os mecanismos responsáveis pelos

reflexos pró-eréteis na medula espinhal é hoje considerada muito simplista.

Fortes evidências experimentais demonstram que estruturas supra-espinhais

30 são capazes, por si próprias, de iniciar uma ereção, muito provavelmente via

projeções diretas aos núcleos espinhais (WIRSHING, D.A.; PIERRE, J.M.;

26 I 54

.. .. . . . . .. . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .. . . . ..... . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .

MARDER, S.R.; SAUNDERS, C.S.; WIRSHING, W.C. Sexual side effects of

novel antipsychotic medications. Schizophrenia Research 56: 25-30, 2002).

O hipotálamo é, sem dúvida, a principal estrutura supra-espinhal

envolvida no controle e modulação dos mecanismos que levam a ereção.

5 Dentro deste, pode-se destacar duas áreas principais: o núcleo paraventricular

(PVN) e a área preóptica mediai (MPOA). Porém, outras regiões centrais

também estão envolvidas nos mecanismos pró-eréteis, como o núcleo mediai

dorsal do tálamo, o hipocampo e algumas áreas corticais (GIULIANO, F. &

RAMPIN, O. Central neural regulation of penile erection. Neuroscience and

1 o Biobehavioral Reviews 24: 517-33, 2000). A MPOA é a mais forte candidata ao

papel de centro integrativo supraespinhal, possuindo função tanto na motivação

frente a estímulos sexuais, quanto na coordenação dos reflexos genitais

necessários à ereção e à ejaculação, e na coordenação dos movimentos

específicos de cada espécie necessários à consumação da cópula (HULL,

15 E.M.; LORRAIN, D.S.; OU, J.; MATUSZEWICH, L.; LUMLEY, L.A; PUTNAM,

S.K.; MOSES, J. Hormone-neurotransmitter interactions in the control of sexual

behavior. Behavioural Brain Research 105: 105-16, 1999; MEUS, M.R. &

ARGIOLAS, A Dopamine and sexual behavior. Neuroscience and

Biobehavioral Reviews 19 (1): 19-38, 1995). Esta região é responsável por

20 receber informações hormonais, sensoriais e de mais uma variedade de

origens, processá-las e redistribuí-las a estruturas mais diretamente

conectadas com os núcleos espinhais que controlam a ereção, como é o caso

do PVN. O PVN contém neurônios pré-motores que se projetam diretamente à

medula espinhal e diversos dados experimentais sugerem que esta região seja

25 o centro supra-espinhal dos estímulos pró-eréteis (AGMO, A; PAREDES, R.G.;

RAMOS, J.l.; CONTRERAS, J.L. Dopamine and sexual behavior in the male

rabbit. Pharmacology, Biochemistry and Behavior 55 (2): 289-95, 1996).

Diversos neurotransmissores e neuropeptídeos estão envolvidos no

controle dos estímulos pró-eréteis nas diversas regiões centrais envolvidas. Um

30 corpo crescente de evidências tem apontado para um papel fundamental de

neuromoduladores como NO, serotonina, ocitocina e dopamina. Esta última

27 I 54

. . . . . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .. . . . . ... . . . .. .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . .. . .. . . .

tem se mostrado fundamental na mediação das respostas eréteis em roedores,

não roedores, primatas não humanos e homens (HEATON, J.P.W. Central

neuropharmacological agents and mechanisms in erectile dysfunction: the role

of dopamine. Neuroscience and Biobehavioral Reviews 24: 561-9, 2000; HULL,

5 E.M.; LORRAIN, D.S.; DU, J.; MATUSZEWICH, L.; LUMLEY, L.A.; PUTNAM,

S.K.; MOSES, J. Hormone-neurotransmitter interactions in the contrai of sexual

behavior. Behavioural Brain Research 105: 105-16, 1999; AGMO, A.;

PAREDES, R.G.; RAMOS, J.l.; CONTRERAS, J.L. Dopamine and sexual

behavior in the male rabbit. Pharmacology, Biochemistry and Behavior 55 (2):

1 o 289-95, 1996).

São três as principais vias dopaminérgicas responsáveis pelo controle

da motivação sexual e das respostas genitais e motoras em ratos machos. A

ativação da via nigroestriatal está relacionada à resposta a estímulos sexuais,

bem como aos aspectos motores necessários a consumação da cópula. A via

15 mesolímbica está estreitamente relacionada a fatores de apetite sexual, como a

motivação, a libido e a sensação de recompensa. A via dopaminérgica

incertohipotalâmica é a responsável pela liberação de dopamina tanto na

MPOA quanto no PVN, sendo esta a via diretamente ligada aos efeitos pró

eréteis de agentes dopaminérgicos (HULL, E.M.; LORRAIN, D.S.; DU, J.;

20 MATUSZEWICH, L.; LUMLEY, L.A.; PUTNAM, S.K.; MOSES, J. Hormone

neurotransmitter interactions in the contrai of sexual behavior. Behavioural

Brain Research 105: 105-16, 1999; MEUS, M.R. & ARGIOLAS, A. Dópamine

and sexual behavior. Neuroscience and Biobehavioral Reviews 19 (1): 19-38,

1995).

25 A habilidade de agonistas dopaminérgicos em induzir ereções penianas

é descrita desde 1975 e foi sucessivamente confirmada por um grande número

de estudos. Esta investigação teve início a partir da observação do efeito

erectogênico da apomorfina (D'AQUILA, P.S.; PANIN, F.; COSSU, M.; PEANA,

A.T.; SERRA, G. Dopamine 0 1 receptor agonists induce penile erections in rats.

30 European Journal of Pharmacology 460: 71-4, 2003). A apomorfina é um

agonista dopaminérgico não seletivo com uma afinidade um pouco maior por

28 I 54 ... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... . ... . . . . . .. . . .... . . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

. . . . . .. . . . . . . . . . . .

receptores 02-like. A administração sistêmica de baixas doses deste composto

é capaz de induzir ereções ex-cópula em ratos e camundongos. Este efeito é

inibido por baixas doses de antagonistas 0 2 centrais mas não pela

administração de domperidona, um antagonista 02 periférico, incapaz de

5 ultrapassar a barreira hematoencefálica, confirmando o SNC como o local de

ação primário da apomorfina (RAMPIN, 0.; JÉRÓME, N.; SUAUOEAU, C.;

Proerectile effects of apomorphine in mice. Life Sciences 72: 2329-36, 2003;

MEUS, M.R. & ARGIOLAS, A. Oopamine and sexual behavior. Neuroscience

and Biobehavioral Reviews 19 (1): 19-38, 1995).

1 O Inúmeros estudos demonstram o efeito erectogênico da administração

sistêmica de baixas doses de agonistas 02 seletivos, como quinpirol,

quinorelano e bromocriptina. Porém, os dados referentes a administração

sistêmica de agonistas 01 são conflitantes. Primeiramente acreditava-se que os

mesmo não possuíam efeito sobre os mecanismos pró-eréteis quando

15 administrados sistemicamente. Mais recentemente, com o desenvolvimento de

agonistas plenos de receptores 0 1 foi demonstrada a participação deste tipo de

receptores no efeito erectogênico da dopamina em roedores (O'AQUILA, P.S.;

PANIN, F.; COSSU, M.; PEANA, A.T.; SERRA, G. Oopamine 01 receptor

agonists induce penile erections in rats. European Journal of Pharmacology

20 460: 71-4, 2003). Evidências sugerem que um pequeno aumento na

quantidade de dopamina liberada na MPOA leva à ativação de receptores 01-

/ike, facilitando o desenvolvimento de ereções mediadas pelo sistema nervoso

parassimpático (ZARRINOAST, M.; SHOKRAVI, S.; SAMINI, M. Opposite

influences of dopaminergic receptor subtypes on penile erection. General

25 Pharmacology. 23 (4): 671-5, 1992). Por outro lado, altos níveis de dopamina

nesta região resultam na ativação de receptores D2-like favorecendo os efeitos

simpáticos, como a detumescência e a ejaculação (HULL, E.M.; LORRAIN,

O.S.; OU, J.; MATUSZEWICH, L.; LUMLEY, LA.; PUTNAM, S.K.; MOSES, J.

Hormone-neurotransmitter interactions in the contrai of sexual behavior.

30 Behavioural Brain Research 105: 105-16, 1999). A natureza oposta da ação

das duas famílias de receptores dopaminérgicos nesta região é confirmada

29 I 54 ... . . . . ... . .

... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . .... . . . . ..... . .... . . . . . . . . . . ... .. . .. .. . . .. .. . . . .. . . . . . . . ....

pelo fato de que a ativação de receptores D1-like provoca a inibição da emissão

de sêmen, provavelmente prevenindo a ejaculação precoce; enquanto altas

doses de agonistas de receptores 02-/ike inibem os mecanismos eréteis e

diminuem a duração da cópula (HULL, E.M.; EATON, R.C.; MARKOWSKI,

5 V.P.; MOSES, J.; LUMLEY, LA; LOUCKS, J.A Opposite influence of mediai

preoptic D1 and D2 receptors on genital reflexes: lmplications for copulation. Life

Sciences. 51: 1705-13, 1992). Estes indícios apontam para uma regulação dos

diversos estágios do comportamento sexual masculino através do aumento dos

níveis extracelulares de dopamina, mediante a ativação de diferentes famílias

1 O de receptores nesta região.

Experimentos semelhantes demonstraram que, ao contrário da MPOA,

no PVN a ativação de receptores D2-like possui um papel facilitatório sobre os

mecanismos eréteis. Em baixas doses, a microinjeção de tanto de apomorfina

quanto de agonistas seletivos de receptores 02 como a lisurida, o quinpirol e o

15 quinorelano no PVN aumenta o número de ereções, enquanto em doses mais

altas ocorre um aumento da emissão de sêmen e uma diminuição nos reflexos

penianos (EATON, R.C.; MARKOWSKI, V.P.; LUMLEY, LA; THOMPSON,

J.T.; MOSES, J.; HULL, E.M. D2 receptors in the paraventricular nucleus

regulate genital responses and copulation in male rats. Pharmacology,

20 Biochemestry and Behavior. 39: 177-81, 1991; CHEN, K.K.; CHAN, J.Y.;

CHANG, LS. Dopaminergic neurotransmission at the paraventricular nucleus of

hypothalamus in central regulation of penile erection in the rat. The Journal of

Urology. 162 (1): 237-42, 1999). A microinjeção de agonistas 0 1 nesta área não

teve nenhum efeito sobre o número de ereções, porém a administração de um

25 antagonista D1 resulta no aumento do número de ejaculações, sugerindo

papéis antagônicos das famílias de receptores dopaminérgicos também no

PVN. Dados experimentais apontam para o PVN como o local de ação primário

da apomorfina na indução da ereção. A administração de apomorfina no PVN,

em doses capazes de induzir ereções penianas, leva a um aumento de cerca

30 de 4 a 5 vezes na concentração dos metabólitos do NO nesta região. A pré

administração tanto de haloperidol quanto de L-NAME, um inibidor da enzima

30 I 54

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. . . .. .. . . . .. . . . . . . . ....

óxido nítrico sintetase - NOS, foi capaz de inibir este aumento na produção de

NO, bem como o efeito pró-erétil da apomorfina. O mesmo não foi observado

quando da pré-administração de um antagonista seletivo D1 (MEUS, M.R. &

ARGIOLAS, A. Role of central nitric oxide in the contrai of penile erection and

5 yawning. Progress in Neuro-Pharmacology & Biological Psychiatry. 21: 899-

922, 1997). O PVN também é uma região rica em neurônios que sintetizam

ocitocina e se projetam aos núcleos espinhais da região sacrolombar. Em

ratos, a administração intracerebroventricular de ocitocina e apomorfina resulta

em respostas similares, caracterizadas pela indução de ereções penianas,

1 O ambas bloqueadas pelo pré-tratamento sistêmico com um antagonista de

receptores de ocitocina. Assim, a principal hipótese para o mecanismo da ação

pró-erétil da apomorfina é que a administração desta leva à estimulação de

receptores D2-like no PVN, a qual dispara uma cascata de eventos bioquímicas

intracelulares que levam à ativação da enzima NOS e o conseqüente aumento

15 na síntese de NO. O aumento da concentração de NO intracelular, por sua vez,

estimula a liberação de ocitocina em outras regiões do SNC, como o

hipocampo e a medula espinhal, resultando na promoção da ereção peniana

(MEUS, M.R. & ARGIOLAS, A. Role of central nitric oxide in the contrai of

penile erection and yawning. Progress in Neuro-Pharmacology & Biological

20 Psychiatry. 21: 899-922, 1997).

A procura por uma terapia farmacológica ideal para o tratamento da DE

tem buscado satisfazer características como eficácia, fácil administração,

redução da toxicidade e efeitos adversos, bem como oferecer uma latência e

duração de efeito adequadas ao quadro, visando sempre a melhor aceitação

25 do tratamento pelo paciente e sua parceira, bem como a melhoria na qualidade

de vida de ambos. O avanço no conhecimento das bases fisiológicas e

bioquímicas da ereção peniana e da própria DE abriu novas perspectivas para

o desenvolvimento de fármacos pró-eréteis. A observação de que

medicamentos corriqueiramente utilizados no tratamento de distúrbios

30 neuropsiquiátricos podem causar ou agravar uma disfunção sexual levou à

percepção de que fármacos de ação central também poderiam ser utilizados

31 I 54

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... . . ... . . . .. $.. . ..... . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. . . .. .. . . . .. . . . . . . . ....

para reverter este quadro. Atualmente, a apomorfina pode ser considerada o

protótipo farmacológico de uma nova série de fármacos dopaminérgicos de

ação central eficazes no tratamento da DE que está prestes a surgir.

Poucos estudos clínicos são disponíveis sobre o efeito de outros

5 agentes dopaminérgicos nos mecanismos eréteis e no tratamento da DE. É

relatado que a administração de L-DOPA, um precursor da biossíntese de

dopamina, é capaz de induzir ereções em pacientes que sofrem da doença de

Parkinson (JIMÉNEZ-JIMÉNEZ, F.J.; TALLÓN-BARRANCO, A.; CABRERA

VALDIVIA, F.; GASALLA, T.; ORTI-PAREJA, M.; ZURDO, M. Fluctuating penile

I O erection related with levodopa therapy. Neurology 52 ( 1): 21 O, 1999;

ANDERSSON, K. E. Pharmacology of penile erection. Pharmacological Reviews

53 (9): 417-50, 2001 ). O quinorelano é um agonista seletivo de receptores do

subtipo D2 eficaz na indução de ereções em modelos animais. Porém, os

estudos clínicos com esta droga foram descontinuados prematuramente antes

15 que sua eficácia pudesse ser comprovada (ANDERSSON, K.E. Pharmacology

of penile erection. Pharmacological Reviews 53 (9): 417-50, 2001).

A bromocriptina é um alcalóide do ergot com ação agonista de

receptores D2-like. Alguns relatos apontam para uma potencial utilização deste

fármaco no tratamento da DE causada por hiperprolactinemia (LOPEZ-

20 CUBILLANA, P; HITA-ROSINO, E.; ASENSIO-EGEA, L.; RIGABERT

MONTIEL, M.; HITA-VILLAPLANA, G.; SERVER-PASTOR, G.; SERVER

FALGAS, G. Bromocriptine monotherapy of a prolactinoma causing erectile

dysfunction. Archives Espano! de Urologia. 50 (5): 526-8, 1997). Um estudo

realizado com 17 pacientes que obtiveram sucesso no tratamento com

25 apomorfina aponta para uma potencial ação pró-erétil deste fármaco, uma vez

que oito destes pacientes apresentaram melhora após o tratamento com

bromocriptina (LAL, S.; KIELY, M.E.; THAVUNDAYIL, J.X.; STEWART, J.D.;

ASSALIAN, P.; ACKMAN, C.F. Effect of bromocriptine in patients with

apomorphine-responsive erectile impotence: an open study. Journal of

30 Psychiatry and Neuroscience 16 (5): 262-5, 1991). Porém, ainda existe a

32 I 54 ... ... .. . .. ····· . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . • • • • • • • • • • . . .. .. . . . .. .

. .. .. . . . .. . . . . . . . ....

necessidade da realização de estudos complementares que possam confirmar

os efeitos benéficos deste fármaco.

A possibilidade de utilização da bupropiona no tratamento da DE

também vem sendo discutida. A bupropiona é um fármaco antidepressivo

5 inibidor da recaptação de aminas bioativas, com uma afinidade muito maior

pelo transportador de dopamina (DAT) que de noradrenalina (NAT) e

serotonina (5-HTT). Uma das abordagens que vem sendo investigada é a

utilização de uma forma de liberação controlada deste fármaco para o

tratamento da DE induzida por antidepressivos inibidores seletivos da

1 O recaptação de serotonina (ISRS), como a fluoxetina. Diversos estudos relatam

a melhoria da performance sexual de pacientes deprimidos em tratamento com

ISRS, bem como o aumento do desejo sexual e da freqüência de relações dos

mesmos (ASHTON, A.K.; MASAND, P.S.; GUPTA, S.; FRANK, B. Bupropion

and sexual dysfunction. The American Journal of Psychiatry. 159 (4): 677-8,

15 2002).

Finalmente, o planejamento racional de novas moléculas que sejam

ligantes seletivos de receptores dopaminérgicos não relacionados aos efeitos

adversos da apomorfina e que mantenham o efeito pró-erétil desejado é uma

estratégia que vem sendo buscada pela indústria farmacêutica. Além desta,

20 outras estratégias como a combinação de diversos agentes pro-eréteis e novos

alvos relacionados à disfunção erétil também estão atraindo a atenção de

grandes companhias farmacêuticas e centros de pesquisa, e esse crescente

interesse pode ser evidenciado pelas diversas patentes concedidas e novos

pedidos depositados.

25 Agentes pro-eréteis, como, por exemplo, inibidores da PDE5 e doadores

de NO, e seu uso em conjunto com outros agentes, como por exemplo,

agentes dopaminérgicos são objeto de muitas patentes e pedidos de patentes

como, por exemplo, EP 1092718, US 6, 143,757, WO 00/54773, US

2003/0004170.

30 O uso concomitante de agentes dopaminérgicos e de outros agentes

também produziu inúmeras patentes. A patente norte-americana US 6,530, 773

33 I 54

... ... .. . ...... . . . . . . . . . . . • • • • • • • • • ••• • • ••• ti • • ••••• • ••••• . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. . . .. .. . . . .. . . . . . . . ....

descreve composições contendo agentes dopaminérgicos, como clozapina e

haloperidol em conjunto com (S)-2-(benzilamino-metil)-2,3,8,9-tetrahidro 7H-

1 ,4-dioxino{2,3-E}indol-8-ona, um agonista parcial dos receptores 02 e 0 3 no

tratamento de desordens psicóticas. Por outro lado, o uso de agentes

5 dopaminérgicos pode ser exemplificado pelos documentos a seguir. A patente

norte-americana US 6,432,943 descreve derivados benzodiazepínicos, ativos

não só em receptores colinérgicos muscarínicos como também em receptores

dopaminérgicos, úteis no tratamento de disfunções sexuais. O pedido de

patente US 2002/0103198 descreve novos derivados de acilamino ciclopropano

1 O eficazes no tratamento da disfunção erétil por atuarem nos receptores

dopaminérgicos 0 3. O documento US 2002/013105 descreve novos agonistas

dopaminérgicos seletivos para os receptores 04, agonistas estes diferentes da

apomorfina para o tratamento de disfunção sexual, incluindo a disfunção erétil.

O pedido de patente US 2001/0056101 revela o uso de uma combinação de

15 antagonistas e agonistas parciais dopaminérgicos no tratamento de desordens

do sistema nervoso relacionadas a disfunção do sistema dopaminérgico. O

documento WO 02/088093 descreve novos derivados benzimidazólicos úteis

no tratamento da disfunção erétil. O documento WO 00/23056 descreve o uso

de agentes dopaminérgicos, mais especificamente o uso de ropirinol ou

20 pramipexol, no tratamento da disfunção erétil.

Além do uso de agentes dopaminérgicos, novas abordagens para o

tratamento da disfunção erétil estão sendo criadas. O pedido de patente US

2003/0119714 descreve o uso de inibidores do neuropeptídeo Y como agentes

pró-eréteis. O documento W002/069973 descreve o uso de ligantes

25 piperidínicos-piperazínicos em receptores e/ou transportadores muscarínicos,

dopaminérgicos e/ou serotoninérgicos para tratamento de diversas condições e

doenças, dentre elas a disfunção erétil. O documento US 2003/0008858

descreve o uso de inibidores de P-lactamases como agentes pro-eréteis. O

documento WO 02/17963 descreve o uso de uma composição farmacêutica

30 capaz de modular a atividade de um canal de K+ ativado por Ca2+ (IKca) na

genitália.

... . . . . . . .. . ·--.. • • • • • • • • • • 34 I 54

. . . . . . . . . . . . . . ... . . . . .,... . ..... • • • • • • • • • • . . . . .. . . . .. .

. .. . . . . . .. . . . • • • . .. ..

Apesar destas inúmeras abordagens, até o momento não é conhecido

relato do uso de derivados da clozapina como agentes dopaminérgicos e/ou

serotoninérgicos concomitantemente úteis no tratamento da esquizofrenia e no

tratamento de disfunções sexuais e que não apresentem as desvantagens das

5 respectivas drogas disponíveis.

SUMÁRIO DA INVENÇÃO

É um objeto da presente invenção fornecer novas moléculas capazes de

atuar em vias dopaminérgicas e/ou serotoninérgicas de ação central e

1 O composições farmacêuticas compreendendo as mesmas.

Em um aspecto, as moléculas da presente invenção são ativas em

modelos animais preditivos de atividade neuroléptica. É, portanto, um objeto da

presente invenção proporcionar novas moléculas úteis no tratamento da

esquizofrenia ou de outras manifestações clínicas que requeiram o uso de

15 antipsicóticos e composições farmacêuticas contendo as mesmas.

Em um outro aspecto, as moléculas da presente invenção são derivadas

estruturais da clozapina, nas quais não são observados os efeitos colaterais da

mesma, como a agranulocitose. É, portanto, um outro objeto da presente

invenção proporcionar novas moléculas capazes de atuar em vias

20 dopaminérgicas e/ou serotoninérgicas de ação central e que não apresentem

os efeitos colaterais típicos da clozapina e composições farmacêuticas

compreendendo as mesmas.

Em um outro aspecto, as moléculas da presente invenção proporcionam

menor indução de catatonia quando comparadas ao antipsicótico clássico

25 haloperidol. É, portanto, um outro objeto da presente invenção proporcionar

novas moléculas e composições farmacêuticas contendo as mesmas que não

acarretem os efeitos extrapiramidais típicos de outros neurolépticos, como o

haloperidol.

Em um outro aspecto, as moléculas da presente invenção não

30 potenciaram o tempo de sono barbitúrico. É, portanto, um outro objeto da

presente invenção proporcionar novas moléculas e composições farmacêuticas

35 I 54

... .. . . . . . . . .... • • • • • • • • • • . . . . . . . . . . .. . . ... . . . ..... . ..... • • • • • • • • • • . ... .. . .. .. .

. .. .. . . . . . . . . • • • . ....

contendo as mesmas, que não acarretem os efeitos sedativos típicos de outros

neurolépticos, como o haloperidol e a clorpromazina.

Em um adicional aspecto, as moléculas da presente invenção revelaram

se capazes de induzir ejaculações e ereções em roedores. É, portanto, um

5 adicional objeto da presente invenção proporcionar novas moléculas e

composições farmacêuticas contendo as mesmas, para o tratamento da

disfunção erétil e outras disfunções sexuais, como ejaculação precoce,

anorgasmia feminina, vaginismo, obstrução vaginal, dispareunia, insuficiência

erétil do clitóris.

1 O Em ainda outro aspecto, as moléculas da presente invenção são

capazes de causar hipotermia. É, portanto, um outro objeto da presente

invenção proporcionar composições farmacêuticas capazes de causar

hipotermia e concomitantemente proporcionar os efeitos benéficos descritos

acima.

15 Finalmente, há indícios de que os efeitos destes derivados sejam

também relacionados direta ou indiretamente ao sistema serotonérgico, visto

que a administração de uma agonista 5HT2 é capaz de inibir o efeito

hipotérmico destas moléculas e que estas são capazes de inibir os

comportamentos estereotipados induzidos por um agonista 5HT2 em

20 camundongos. É, portanto objeto da presente invenção proporcionar

composições farmacêuticas capazes de inibir o efeito hipertérmico resultante

da ativação do sistema serotonérgico e de exercer efeitos terapêuticos

benéficos resultantes do antagonismo de receptores 5HT2, como, por exemplo,

efeito sobre distúrbios afetivos.

25

DESCRIÇÃO DAS FIGURAS

A Figura 1 mostra o perfil farmacocinético plasmático do composto

LASSBio-581 obtido após a administração da dose de 10 mg/kg i.v. a ratos

30 Wistar (n = 9). Média ± DP

36 I 54 ••• ••• •• • • •••••• • • • • • • • • • • • • • • • • • • • ••••• ••• • • • ••••• • ••••• • • • • • • • • • • • ••• •• • •• •• •

• •• •• • • • •• • • • • • • • ••••

A Figura 2 mostra o perfil farmacocinético plasmático do composto

LASSBio-581 obtido após a administração das doses de 30 mg/kg i.p. ( •) (n =

8) e 30 mg/kg p.o ( ... ) (n = 9) a ratos Wistar. Média± DP

A Figura 3 mostra os perfis de concentração versus tempo do composto

5 LASSBio-581 após administração i.v. bolus da dose de 10 mg/kg, sendo

cérebro (A), baço (B}, coração (C), fígado (D}, rins (E) e pulmões (F), e onde n

= 3/tempo d.e amostragem.

A Figura 4 mostra o efeito de LASSBio579 e LASSBio581 sobre a

temperatura corporal de camundongos. Tratamentos: SAL (salina +

10 polissorbato 80 1% 1 mU100g i.p., n=20), 579 (LASSBio579 30 mg/kg i.p.,

n=17), 581 (LASSBio581 30 mg/kg i.p., n=15), APO (apomorfina 1 mg/kg i.p.,

n=14). Os resultados são expresso em medias ± erro padrão (*diferença

significativa em relação ao grupo SAL no mesmo intervalo de tempo. ANOVA

de duas vias com medidas repetidas, p<0,001 ).

15

DESCRIÇÃO DETALHADA DA INVENÇÃO

Para efeito desta invenção, por "composições farmacêuticas" entende-se

toda e qualquer composição que contenha um princípio ativo, com fins

profiláticos, paliativos e/ou curativos, atuando de forma a manter e/ou restaurar

20 a homeostase, podendo ser administrada de forma tópica, parenteral, enteral

e/ou intratecal. Por "princípio ativo" entende-se todos ou quaisquer compostos

de fórmula (I) ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

25

Os novos compostos de que trata esta invenção pertencem à classe dos

derivados N-fenilpiperazínicos, e seus isósteros, de estrutura geral (1):

onde:

X e Z correspondem, independentemente, a N ou CH.

37 I 54

... . . . . ... • .

. . . . . . .. . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

Y e W correspondem, independentemente, a H, F, Cl, Br, I, OH, OMe,

OCF3, N02, NH2, NHAc, N(CH3}2, S02NH2, S02Me, C1-C3 alquila, fenila

Compostos preferenciais da presente invenção são compostos onde Y

corresponde a Cl, X corresponde a N ou CH, Z corresponde a CH, W

5 corresponde a H.

A avaliação farmacológica dos novos compostos da presente invenção

foi realizada em duas etapas, compreendendo uma etapa de avaliação do perfil

farmacodinâmico e outra de avaliação do perfil farmacocinético. Para tanto, são

1 O apresentados a seguir, e a título de exemplo, sem com isso limitar o escopo

das reivindicações anexas, os resultados de testes com os novos derivados N

fenilpiperazínicos: 1-[1-(4-clorofenil)-1 H-pirazol-4-ilmetil]-4-fenil-piperazina,

denominado, para efeito da presente invenção, de LASSBio579; e 1-[1-(4-

clorofenil)-1 H-1 ,2,3-triazol-4-ilmetil]-4-fenil-piperazina, denominado, para efeito

15 da presente invenção, de LASSBio581.

A) Perfil Farmacodinâmico

1- Animais

20 Foram utilizados ratos Wistar machos adultos pesando entre 200 e 300g

e camundongos Swiss CF1 machos adultos pesando de 20 a 30g, ambos

provenientes da colônia da Fundação Estadual de Produção e Pesquisa em

Saúde - FEPPS. Antes dos experimentos, os animais foram adaptados por um

período mínimo de 72h no biotério de passagem da Faculdade de Farmácia-

25 UFRGS. Os ratos foram mantidos em caixas plásticas de 28x42x16 em em

grupos de no máximo 5 animais. Os camundongos foram mantidos em caixas

plásticas menores (17x28x13 em) com no máximo 10 animais em cada. A

temperatura ambiente foi mantida em 23 ± 2°C, ciclo claro-escuro de 12 horas.

Todos os animais tiveram livre acesso a água e alimentação (ração certificada

30 Nuvilab CR1®), exceto quando diferentes condições foram especificadas para

cada ensaio.

. . . . . .. . .. . .

38 I 54

2- Ensaios de Toxicidade

. . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . .

2.1 - Determinação da dose letal mediana (Dlso) (TURNER, R.A. Screening

Methods in Pharmacology. Nova York e Londres: Academic Press, 1965).

5 Para a determinação da dose letal mediana das substâncias, doses

compreendidas entre 2,5 e 1500 mg/kg foram administradas a grupos de três

camundongos, a fim de selecionar a faixa de dose mais adequada para o

cálculo. Após selecionadas cinco doses entre os limites máximo (dose possível

de ser administrada que causou o maior número de mortes) e mínimo (maior

1 O dose que não causou nenhuma morte) de toxicidade de cada substância, estas

foram administradas a cinco diferentes grupos de 8 camundongos cada. Os

animais foram observados por até 48 horas, sendo computada a freqüência de

mortes com ênfase nos intervalos de 1, 2, 6, 12 e 48 horas após a injeção.

Para o cálculo da DL50 foi realizada a retificação da curva de mortalidade pelo

15 método dos probitos. O desvio padrão foi calculado de acordo com a fórmula

expressa abaixo.

20 onde:

O significa desvio padrão,

n número de animais por dose,

2s (diferença entre os valores dos probitos 6 e 4).

25 O composto LASSBio579 obteve um resultado correspondente a 1409 ± 178

mg/kg, enquanto o composto LASSBio581 obteve um resultado correspondente

a 708 ± 248 mg/kg.

2.2 - Ensaio piloto de toxicidade sangüínea

30 Os ratos foram divididos em diferentes grupos com cinco animais cada,

tratados ou com veículo (solução de polissorbato 80 3% em salina 1 mllkg) ou

com algumas das substâncias na dose de 30 mg/kg, sempre pela via

39 I 54

.. . .. . .. . .. . .... . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . .. . . . .. . . . . . . .. .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .. . .. .. . .. . ..

intraperitoneal durante 14 dias (dias 1 a 14). Nos dias 2 (24 horas após o

primeiro tratamento) e 15 (após 14 dias de tratamento) os animais foram

anestesiados com éter etílico e foi retirada de cada um uma amostra de cerca

de 1,5 mL sangue do sinus retro orbital (LAROCHE, M.J. & ROUSSELET, F.

5 Lex Animaux de Laboratoire - Éthique et Bonnes Pratiques. Paris: Masson,

1990}, com posterior reposição de volume (1,5 mL de solução salina i.p.). As

amostras foram acondicionadas em tubos contendo EDTA, mantidas sob

refrigeração e imediatamente encaminhadas ao Laboratório de Análises

Clínicas Veterinárias da Faculdade de Veterinária (UFRGS) para realização de

1 o hemogramas.

No 16° dia os animais foram sacrificados por atordoamento com vapores

de éter etílico seguido de deslocamento cervical para retirada do fêmur direito e

de duas costelas. Os ossos foram conservados em solução isotônica de formol

e encaminhados ao Laboratório de Patologia Veterinária da Faculdade de

15 Veterinária (UFRGS). O material foi descalcificado com solução de ácido nítrico

a 5% durante 12 horas a temperatura ambiente, lavado com água destilada e

~rocessado de forma convencional para exame histológico (PROPHET, E.B.;

MILLS, B.; ARRINGTON, J.B.; SOBIN, L.H. Laboratory Methods in

Histotechnology. Washington: Armed Forces lnstitute of Pathology, American

20 Registry of Pathology, 1992). As medulas ósseas foram analisadas quanto ao

desaparecimento da matriz mielóide.

Os resultados dos hemogramas encontram-se nas Tabelas 3 e 4. Foi

denominada de coleta A aquela realizada 24 horas após o primeiro tratamento,

e coleta B aquela realizada após os 14 dias de tratamento. As variações

25 encontradas nos valores de hematócrito, concentração de hemoglobina e

contagem diferencial de leucócitos, tanto intra quanto intergrupos, encontram

se dentro de valores considerados normais para ratos adultos (JAIN, N.C.

Essentials of Veterinary Hematology. 5 ed. Filadelfia: Lippincott Williams &

Wilkins, 1993).

30

5

40 I 54

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . .. . . . . .. .. . . ..... . . . . . . . . . . . . .. .. . .. .. .

Tabela 3: Valores de hematócrito e dosagem de hemoglobina de amostras de sangue

retiradas de ratos após 24 horas (coleta A) ou 14 dias (coleta B) de tratamento com

LASSBio579 e LASSBio581 30 mg/kg i.p .. Grupo controle: SAL (salina+ polissorbato

80 3%, 1 mUkg i.p.). Resultados expressos em média± desvio padrão.

Parâmetro Coleta A Coleta B Coleta A Coleta B Coleta A Coleta B

Hematócrito (%) 47,0 ± 1,9 46,6 ± 2,1 46,4 ± 1,5 41,3 ± 1,5 45,8 ± 0,5 45,2 ± 0,8

Hemoglobina 17,1 ± 0,3 17,3 ± 1,2 17,6 ± 0,8 15,6 ± 0,4 16,1 ± 1,4 16,7 ± 0,4 (g/dL)

I O Tabela 4: Contagem diferencial de leucócitos de amostras de sangue retiradas de ratos após 24 horas (coleta A) ou 14 dias (coleta 8) de tratamento com LASSBio579 e LASSBio581 30 mg/kg i.p .. Grupo controle: SAL (salina+ polissorbato 80 3%, 1 mL/kg i.p.). Resultados expressos em média± desvio padrão.

15

Contagem Diferencial de Leucócitos (%)

Neutrófilos basto nados

Neutrófilos segmentados

Eosinófilos

Basófilos

Monócitos

Total

Coleta A Coleta B

0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0

38,4 ± 2,6 24,2 ± 8,5

1,0 ± 0,7 0,6 ± 1,3

0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0

5,8 ± 2,3 2,4 ± 1,3

100,0 100,0

Coleta A

0,0 ± 0,0

24,0 ± 3,4

0,6 ± 0,6

0,0 ± 0,0

3,4 ± 2,1

100,0

Coleta B Coleta A Coleta B

0,0 ± 0,0 0,8 ± 1,1 0,0 ± 0,0

28,0 ± 9,5 31,4 ± 8,8 29,6 ± 10,2

0,8 ± 1,0 0,8 ± 0,8 1,2 ± 1,1

0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0 0,0 ± 0,0

3,3 ± 3,0 4,6 ± 0,9 2,8 ± 1 ,8

100,0 100,0 100,0

O exame histopatológico da medula óssea do fêmur e das costelas dos

animais sacrificados após os 14 dias de tratamento não revelou diferenças

significativas entre animais tratados e controles. Considerando ambos os

20 resultados, pode-se concluir que o tratamento por 14 dias com as substâncias

não apresenta indícios de desenvolvimento de discrasias sangüíneas.

. .. .. . . . .. • • • . .. . . ....

41 I 54

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . ... . . ... . . . ..... . ..... . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

3 - Bloqueio da estereotipia anfetamínica (CARLINI, E.A. Farmacologia

Prática Sem Aparelhagens. São Paulo: Sarvier, 1973).

O teste de bloqueio da estereotipa anfetamínica é um modelo animal

baseado na indução de um estado hiper-dopaminérgico. A anfetamina é um

5 potente agente que atua aumentando a liberação de dopamina nos terminais

sinápticos. Quando administrada em altas doses em roedores faz com que

esses animais desenvolvam um tipo de comportamento estereotipado

caracterizado por movimentos repetitivos de balançar a cabeça, cheirar, lamber

e morder (LEMBERGER, L.; WITT, E.D.; DAVIS, J.M.; KOPIN, I.J. The effects

1 O of haloperidol and chlorpromazine on amphetamine metabolism and

amphetamine stereotyped behavior in the rat. The Journal of Pharmacology and

Experimental Therapeutics 174 (3): 428-33, 1970; FELDMAN, D.J.; FRANK,

R.A.; KEHNE, J.H.; FLANNERY, R.; BROWN, D.; SONI, S.; BYRD, G.; SHAH,

S. Mixed 02/5-HT 2 antagonism differentially affects apomorphine- and

15 amphetamine-induced stereotyped behavior. Pharmacology, Biochemistry and

Behavior 58 (2): 565-72, 1997; ROFFMAN, J.L. & RASKIN, L.A. Stereotyped

behavior: Effects of d-amphetamine and methylphenidate in the young rat.

Pharmacology, Biochemistry and Behavior 53 (4): 1095-102, 1997). Ratos

foram tratados com as substâncias testes e 30 min após receberam a injeção

20 de um segundo tratamento, que pode ter sido sulfato de anfetamina 30 mg/kg

i.p. (ANF) ou solução salina 1 mllkg i.p. (SAL), sendo, então, isolados dos

demais por um período 30 min. Após este período, os animais foram colocados

individualmente em gaiolas de metal e o desenvolvimento de movimentos

estereotipados observado durante 15 min. A intensidade da estereotipia foi

25 avaliada na forma de graus, de acordo com a escala proposta por Carlini

(CARLINI, E.A. Farmacologia Prática Sem Aparelhagens. São Paulo: Sarvier,

1973): grau O - o animal não apresenta nenhum comportamento estereotipado;

grau 1 - apresenta discreta e intermitente atividade de cheirar, mastigar,

lamber ou morder; grau 2 - apresenta moderada intensidade de cheirar,

30 mastigar, lamber ou morder; e grau 3 - o animal não responde mais a

estímulos, apresentando grande e contínua intensidade de cheirar, mastigar,

. .. .. . . . .. . . . • • • .....

... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . 42 I 54

. . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . • • • • • • • • • • . ... .. . . . .. .

lamber ou morder. Os tratamentos utilizados foram solução de polissorbato 80

a 3% em salina 1 mUkg i.p., LASSBio579 30 mg/kg i.p. e haloperidol 0,5 mg/kg

i.p. Os resultados encontram-se na tabela 5.

5 Tabela 5: Efeito de LASSBio579 no bloqueio da estereotipia anfetamínica. Tratamentos: SAL (salina + polissorbato 80 3% 1 mUkg i.p.), 579 (LASSBio579 30 mg/kg i.p.), HAL (haloperidol 0,5 mg/kg i.p.) e ANF (sulfato de anfetamina 30 mg/kg i.p.). Resultados expressos em mediana e intervalos interquartis.

Tratamento 1 Tratamento 2 Grau de Estereotipia SAL (n = 14) ANF 2,0 (2,0- 2,0) 579 (n = 08) SAL 0,0 (0,0- 0,0)* 579 (n = 12) ANF 1 ,O (1 ,O- 1 ,0)* HAL (n = 14) ANF 0,0 (0,0- 2,0}*

1 O *diferença significativa em relação ao grupo SAL +ANF (Kruskai-Wallis: H=20,793; p<0,001 ).

4 - Ensaio de indução de catatonia (CARLINI, E.A. Farmacologia Prática

Sem Aparelhagens. São Paulo: Sarvier, 1973).

A indução farmacológica de catatonia representa mais uma ferramenta

15 comportamental na avaliação e identificação de neurolépticos. Trata-se de um

modelo animal de estudo de funções extrapiramidais amplamente utilizado para

avaliar o potencial de drogas em causar efeitos motores indesejados

(SANBERG, P.R.; BUNSOY, M.D.; GIORDANO, M.; NORMAN, A The

catalepsy test: lts ups and downs. Behavioural Neuroscience 102: 7 48-59,

20 1988; WEISS, J.M. & KILTS, C.D. Animal models of depression and

schizophrenia. In: SCHATZBERG, A.F. & NEMEROFF, C.B. Textbook of

Psychopharmacology 2.ed. Washington: American Psychiatric Press, 1998). A

ausência de desenvolvimento de catatonia também é uma observação valiosa

na identificação de bloqueadores dopaminérgicos pouco ativos na via

25 nigroestriatal (MOORE, N.C. & GERSHON, S. Which atypical antipsychotics

are identified by screening tests? Clinicai Neuropharmacology 12 (3): 167-84,

1989). Camundongos foram delicadamente posicionados sobre uma barra de

madeira elevada 6,5 em do chão, apoiados apenas pelas patas dianteira. Foi

mensurado o tempo (s) de permanência dos animais nesta posição incômoda

30 nos intervalos de 30 e 60 após o tratamento com as substâncias teste. Os

. .. .. . . . .. . . . • • • . ....

5

10

15

... ... .. . . ..... . 43 I 54

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . • • • • • • • • • • . ... .. . .. .. .

tratamentos utilizados foram solução de polissorbato 80 a 1% 1 ml/1 00 g i.p.,

LASSBio579 40 mg/kg i.p., LASSBio581 40 mg/kg i.p. e haloperidol 4 mg/kg

i.p .. Os resultados estão demonstrados na tabela 6.

Tabela 6: Efeito de LASSBio579 e LASSBio581 no teste de indução de catatonia. Tratamentos: SAL (salina+ polissorbato 80 1%, 1 mU100g í.p.), 579 (LASSBio579 40 mg/kg í.p.), 581 (LASSBio581 40 mg/kg í.p.), HAL (haloperidol 4 mg/kg i.p.). Resultados expressos em mediana e intervalos interquartis.

Tratamentos Indução de Catatonia 30 min (s) 60 min (s)

SAL (n=14) 1, 7 (0,6- 3,3) 6,6 (2,9- 15,2) 579 (n=12) 16,7 {7,5- 34,0)* 19,7 (6,3- 30,3) 581 (n=12) 16,4 (9,4- 23,2)* 29,6 (15, 1- 73,8)** HAL (n=14) 26,8 (11 ,9- 77,0)* 70,9 (45, 7- 120,0)** *diferença significativa em relação ao grupo SAL no mesmo intervalo de tempo (Kruskai-Wallis, H= 29,64; p<0,001); **diferença significativa em relação ao grupo SAL no mesmo intervalo de tempo (Kruskai-Wallis: H= 27,56; p=0,001).

5- Teste de potenciação do sono barbitúrico (WILLIANSON, E.; OKPAKO,

D.; EVANS, F.J. Selection, Preparation and Pharmacological Evaluation of

Plant Material. Chichester: John Wiley & Sons, 1996)

Camundongos foram tratados com as substâncias teste e 30 minutos

20 após receberam uma injeção de pentobarbital sádico 40 mg/kg pela via

intraperitoneal. Foram avaliados os parâmetros latência e duração do sono

barbitúrico em minutos, determinados pela perda e retomada do reflexo

postura!. Foi estabelecido como valor máximo de duração do sono 240 min. Os

tratamentos utilizados foram solução de polissorbato 80 a 1%, 1 ml/1 OOg i.p.,

25 LASSBio579 30 mg/kg i.p., LASSBio581 30 mg/kg i.p. e diazepam 1 mg/kg i.p ..

Os resultados podem ser visualizados na tabela 7.

Tabela 7: Efeito de LASSBio579 e LASSBio581 no teste de potenciação do sono barbitúrico. Tratamentos: SAL (salina + polissorbato 80 1% 1 mU100g i.p.), 579

30 (LASSBio579 30 mg/kg í.p.), 581 (LASSBio581 30 mg/kg) e DZP (diazepam 1 mg/kg i.p.). Resultados expressos em mediana e intervalos interquartis.

. .. .. . . . .. . . . • • • .....

44 I 54

... ... .. . . ..... . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . .... . ... . . . ..... . .... . . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

Tratamentos Latência (min) Duração (min) SAL (n = 22) 4,0 (3,0- 5,0) 35,0 (16,0- 50,0) 579 (n = 12) 3,0 (2,5- 4,0) 49,0 (18,5- 74,5) 581 (n = 12) 3,0 (3,0- 4,0) 78,0 (41 ,5- 90,5) DZP (n = 25) 3,0 {2,0- 3,0)* 144,0 (109,3- 184,3)** *diferença significativa em relação ao grupo SAL (Kruskai-Wallis: H=25,416; p<0,001) **diferença significativa em relação ao grupo SAL (Kruskai-Wallis: H=49, 194; p<0,001 ).

6 - Observação preliminar da potenciação de ejaculações induzidas por

5 anfetamina em ratos

Ratos foram tratados com as substâncias testes e 30 min após

receberam uma injeção de sulfato de anfetamina 30 mg/kg i.p., sendo então

isolados dos demais por um período 30 min. Após este período, os animais

foram colocados individualmente em gaiolas de metal, onde foi observada a

1 O ocorrência de ejaculações por um período de 15 min. Os tratamentos utilizados

foram solução de polissorbato 80 a 3%, 1 mllkg i.p., haloperidol 0,5 mg/kg i.p.,

LASSBio579 60 mg/kg i.p .. Os resultados são demonstrados na tabela 8,

mostrada a seguir.

15 Tabela 8: Incidência de ejaculações em ratos. Tratamentos: SAL (salina+ polissorbato 80 3% i.p.); 579 (LASSBio579 60 mg/kg i.p.); HAL (haloperidol 0,5 mg/kg i.p.); ANF (sulfato de anfetamina 30 mg/kg i.p.). Resultados expressos em porcentagem de animais que ejacularam.

20

Tratamentos

SAL +ANF (n = 14)

579+ANF (n = 12)

HAL +ANF (n = 14)

Incidência de Ejaculações

43%

58%

29%

7- Avaliação do efeito pró-erétil em camundongos (RAMPIN, 0.; JÉROME,

N.; SUAUDEAU, C.; Proerectile effects of apomorphine in mice. Life Sciences

72: 2329-36, 2003)

25 Camundongos foram adaptados à sala e à câmara de observação

durante a semana anterior do teste, permanecendo uma hora/dia no recipiente.

A câmara de observação consiste de um cilindro de vidro com 14 em de

. .. .. . . . .. . . . . . . . ....

45 I 54 ••• ••• •• • e e •••ti • • • • • ti. • • • • . . . . . . . . . ... . . ••• • • • •••• ti • • •••• . . . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

diâmetro e 15 em de altura, apresentando perfurações em sua extremidade

superior que permitem a troca de ar. No dia dos experimentos os animais foram

colocados por 5 min nas câmaras de observação e então receberam os

tratamentos com as substâncias teste. Imediatamente após os tratamentos, os

5 camundongos foram recolocados nas câmaras e observados durante 60 min.

10

15

Foram avaliados os parâmetros: número de animais que apresentaram ereções

e número de ereções por animal. Os tratamentos utilizados foram solução de

polissorbato 80 a 1%, 1 ml/100g v.o., apomorfina 1,5J.!glkg s.c. e LASSBio579

30 mg/kg v. o. Os resultados são demonstrados na tabela 9, mostrada a seguir.

Tabela 9: Avaliação do efeito pró-erétil de LASSBio579 em camundongos. Tratamentos: SAL (salina+ polissorbato 80 1% v.o.), 579 (LASSBio579 30 mg/kg v.o.) e APO (apomorfina 1,5 1-!g/kg s.c.). Resultados expressos em porcentagem para incidência; e média ±erro padrão para número de ereções por animal.

Tratamentos

SAL (n = 13)

579 (n = 10)

Incidência de Ereções

54%

80%

Número de Ereções por Animal

0,8 ± 0,2

1,8 ± 0,4**

APO (n = 17) 94%* 2,2 ± 0,3** *diferença significativa em relação ao grupo SAL (Teste Exato de Fischer, p - 0,025). **diferença significativa em relação ao grupo SAL (ANOVA, p < 0,001).

20 8- Ensaio de aferição da temperatura corporal (SALMI, P.; JIMENEZ, P.;

AHLENIUS, S. Evidence for specific involvement of dopamine 01 and 02

receptors in the regulation of body temperature in the rat. European Journal of

Pharmacology 236: 395-400, 1993; VERMA, A. & KULKARNI, S.K. Oifferential

role of dopamine receptor subtypes in thermoregulation and stereotypic

25 behavior in naive and reserpinized rats. Archives in Pharmacodynamics 324:

17-32, 1993).

A temperatura retal (0 C) de camundongos foi determinada por um

termômetro digital (ProCheck®), inserido delicadamente cerca de 1,5 em no

. .. .. . . . .. . . . . . . . ....

5e • • •• •• • •• • • •• • • • 11 • • • • • • •

46 I 54 . . . ., . . . . . . .. . . •• • • • • •• •• • • • e..: •• • • e • • • ~ • • • • •"' • •• • •• •• e

reto dos animais com auxílio de vaselina líquida. Após esse procedimento, dois

protocolos distintos foram seguidos:

Protocolo 1: Imediatamente após a medida da temperatura basal os

animais receberam os tratamentos com as substâncias teste. As medidas

5 posteriores da temperatura foram realizadas 15, 30, 45 e 60 minutos após a

administração dos compostos. Os tratamentos utilizados foram solução de

polissorbato 80 a 1% em salina 1 ml/1 OOg i.p., LASSBio579 30 mg/kg i.p.,

LASS8io581 30 mg/kg i.p. e apomorfina 1 mg/kg i.p. Os resultados podem ser

visualizados na figura 4.

10 Protocolo 2: Imediatamente após a medida da temperatura basal (TO) os

animais receberam dois diferentes tratamentos com intervalo de 30 min entre

si. As medidas posteriores da temperatura foram realizadas 45 e 60 minutos

após a administração do primeiro tratamento (T45 e T60, respectivamente). Os

tratamentos utilizados foram: SAL (solução de polissorbato 80 a 1% em salina

15 1 ml/100g i.p.), 579 (LASSBio579 30 mg/kg i.p.), HAL-A (haloperidol 0,5 mg/kg

i.p.) e HAL-8 (haloperidol 4 mg/kg i.p. ). Os resultados podem ser visualizados

na tabela 1 O.

20 Tabela 10: Efeito da pré-administração de haloperidol 0,5 mg/kg i.p. (HAL-A) e 4 mg/kg i.p. (HAL-8) sobre o efeito hipotérmico de LASSBio579 e LASSBio581 30 mg/kg i.p. Resultados expressos em média ± desvio padrão.

Tratamentos TO T45 T60 SAL +SAL (n= 12) 38,2 ± 0,4 38,0 ± 0,8 38,2 ± 0,7 HAL-A+SAL (n=12) 38,4 ± 0,3 38,1 ± 0,3 38,1 ± 0,3 HAL-8+SAL (n=14) 37,9 ± 0,7 37,7 ± 0,7 37,4 ± 0,6* SAL +579 (n=17) 38,0 ± 0,5 37,1 ± 0,6*& 36,5 ± 0,8*& HAL-A+579 (n=16) 38,3 ± 0,6 36,8 ± 0,5*#§ 36,6 ±O, 7*#§ HAL-8+579 (n=12) 38,0 ± 0,6 36,2 ± 0,8*#& 35,7 ± 1 ,2*#& *diferença significativa em relação ao grupo SAL +SAL no mesmo intervalo de tempo; diferença

25 significativa em relação ao grupo HAL +SAL no mesmo intervalo de tempo; §diferença significativa de TO dentro do mesmo grupo; &diferença significativa dos demais tempos dentro do mesmo grupo (ANOVA de duas vias com medidas repetidas, p<0,001).

. .. .. . ~ . . . . . . . . . . . . ..

. . . , .. • •

... ,_ .. . . . . .... • • • • • • • • .. . . 47 I 54

. . . . .. . . .... . . . . ..... . .... . • • • • • • • • • • •• . . . • • •

• • ••• . . ••• •• • •• •• • . .. ~·

9 - Investigação do Envolvimento do Sistema Serotoninérgico no Efeito

Hipotérmico Induzido por LASSBio579

A temperatura retal (0 C} de camundongos Swiss CF1 machos adultos foi

determinada por um termômetro digital inserido cerca de 1,5 em no reto dos

5 animais, com auxílio de vaselina líquida. Imediatamente após a aferição da

temperatura basal (TO), os animais receberam dois diferentes tratamentos (pré

e pós-tratamento) com intervalo de 30 min entre si. As medidas posteriores da

temperatura foram realizadas 45 e 60 min após a administração do pré

tratamento (T45 e T60, respectivamente).

1 o Descrição dos tratamentos: SAL (solução de polissorbato 80 a 1% em

salina, 1 ml/100g i.p.); DOI ((±)-DOI - agonista 5-HT2 - 0,5 mg/kg i.p.), 579

(LASSBio579 30 mg/kg i.p.).

Tabela 11: Efeito da pré-administração de (±)-DOI na hipotermia induzida por

15 LASSBio579 30 mg/kg i.p. Resultados expressos em média± erro padrão.

20

Pré-tratamento Pós-tratamento TO T45 T60

SAL SAL 38,2 ± 0,08 37,8 ± 0,24 37,8 ± 0,22

DOI SAL 38,1 ± 0,13 38,2 ± 0,17 38,2 ± 0,20

SAL 579 38,0 ± 0,11 37,2±0,19# 36,7 ± 0,22*#

DOI 579 38,2 ± 0,20 38,2 ± 0,23 37,8 ± 0,26

*diferença significativa em relação ao grupo SAL +SAL no mesmo intervalo de tempo; #diferença significativa em relação a TO dentro do mesmo grupo (ANOVA de duas vias com medidas repetidas: fator tratamento F5.203=12,474 p<0,001; fator tempo F2.2o3=49,682 p<0,001; interação tempo x tratamento F10,2o3=25,470 p<0,001).

10- Bloqueio de Comportamentos Induzidos por (±)-DOI, um agonista 5-

HT2

Inicialmente, camundongos Swiss CF1 machos adultos receberam um

25 pré-tratamento e foram imediatamente colocados nas câmaras de observação

para adaptação. Sessenta minutos após, receberam o pós-tratamento, sendo

imediatamente recolocados nas câmaras e observados durante trinta minutos.

5

48 I 54 ••• ••• •• • • •••••• • • • • • • • • • • • • • • • • • • • ••••• ••• • • • ••••• • ••••• • • • • • • • • • • • ••• •• • •• •• •

Foram avaliados durante o período de observação o número de head-twiches

(movimentos repentinos com a cabeça completamente distintos da

movimentação natural do comportamento exploratório do animal) e ear

scratches (ato de coçar a orelha com uma das patas traseiras).

Descrição dos tratamentos: SAL (solução de polissorbato 80 a 1% em salina, 1

mU100g i.p.); DOI ((±)-DOI 2,5 mg/kg i.p.), 579 (LASSBio579 60 mg/kg i.p.).

Tabela 12: Efeito da pré-administração de LASSBio579 no número de head-twiches

I O (HT) e ear-scratches (ES) induzidos por (±)-DOI. Resultados expressos em mediana e

intervalos interquartis.

Pré-tratamento Pós-tratamento HT ES

SAL SAL 1,5 (O, O - 3,0) 9,5 (6,0- 15,0)

• •• •• • • • •• • • • • • • • ••••

SAL DOI 21 ,O (16,0- 23,8)* 100,0 (53,0- 136,3)**

15

579 SAL 0,0 (0,0 - 1 ,0) 5,5 (2,0 - 11 ,0)

579 DOI 14,0 (4,0- 19,0) 34,0 (17,0- 53,0)

*diferença significativa em relação ao grupo SAL +SAL (Kruskai-Wallis: H=55,345 p<0,001 ); **diferença significativa em relação ao grupo SAL+SAL (Kruskai-Wallis: H=47,492 p<0,001).

A pré-administração de haloperidol (0,5 mg/kg i.p.) não alterou o efeito

hipotérmico da substância testada, indicando que este não estaria sendo

mediado pela ativação de receptores D2/D3. Porém, na dose de 4 mg/kg (i.p.), a

20 pré-administração de haloperidol levou a uma potenciação do efeito

hipotérmico de LASSBio579 em na dose testada. Além disso, o haloperidol

nesta maior dose induziu uma redução na temperatura dos animais per se.

Este efeito hipotérmico do haloperidol bem como sua reversão pela pré

administração de agonistas de receptores 5-HT2 são relatados na literatura

25 (YAMADA, J.; SUGIMOTO, Y.; HORISAKA, K. Serotonin2 (5-HT2) receptor

agonist 1-(2,5-dimethoxy-4-iodophenyl)-2-aminopropane (DOI) inhibits

chlorpromazine- and haloperidol-induced hypothermia in mice. Biological and

Pharmaceutical Bulletin 18 (11): 1580-3, 1995). Já é bem estabelecido o

49 I 54

. . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .. .

envolvimento de mecanismos serotoninérgicos centrais no controle da

temperatura corporal em roedores. A administração sistêmica tanto de

serotonina quanto de agonistas 5-HT 1A levam a uma diminuição na temperatura '

corporal, enquanto a estimulação de receptores 5-HT2AJc produz um efeito

5 hipertérmico. Ainda é relatada a facilitação do efeito hipertérmico de agonistas

5-HT2 pela co-administração de antagonistas 5-HT1A (NASH, J.F.; MELTZER,

H.Y.; GUDELSKY, G.A. Antagonism of serotonin receptor mediated

neuroendocrine and temperature responses by atypical neuroleptics in the rat.

European Journal of Pharmacology 151:463-9, 1988; SALMI, P. & AHLENIUS,

10 S. Evidence for functional interactions between 5-HT1A and 5-HT2A receptors in

rat thermoregulatory mechanisms. Pharmacology and Toxicology 82: 122-7,

1998). A clozapina, que possui uma alta afinidade por receptores 5-HT2,

apresenta a capacidade de bloquear a resposta hipertérmica induzida pela

administração de agonistas 5-HT2 (NASH, J.F.; MELTZER, H.Y.; GUDELSKY,

15 G.A. Antagonism of serotonin receptor mediated neuroendocrine and

temperature responses by atypical neuroleptics in the rat. European Journal of

Pharmacology 151: 463-9, 1988; SALMI, P.; KARLSSON, T.; AHLENIUS, S.

Antagonism by SCH 23390 of clozapine-induced hypothermia in the rat.

European Journal of Pharmacology 253: 67-73, 1994).

20 Os resultados aqui descritos demonstram que a administração de (±)-

DOI previne a hipotermia causada por LASSBio 579, o qual, por sua vez, inibe

os comportamentos estereotipados induzidos pelo (±)-DOI em camundongos,

indicando que o mecanismo de ação central dos derivados N-fenil

piperazínicos, em especial o LASSBio579, está relacionado ao sistema

25 serotonérgico, possivelmente por bloqueio de receptores 5HT2. Este bloqueio

pode levar à estimulação da liberação de dopamina no córtex frontal. Além

disso, a hipótese de ação agonista destes derivados sobre receptores 5HT1A

não pode ser descartada e deverá ser confirmada em experimentos

posteriores.

30

50 I 54

B) Perfil Farmacocinético

... . . . . ... . . . . . . . . . . . .... . . . . . . . . . . . . . . . .. . . . . . . . . . . . . ..... . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

1 - Determinação dos parâmetros farmacocinéticos de LASSBio581

As doses utilizadas no estudo farmacocinético com o composto

5 LASSBio581 em ratos Wistar machos (200 a 300 g) foram de 10 mg/kg i.v.

bolus (solução, n = 9), 30 mg/kg i.p. e (suspensão, n = 8) 30 mg/kg p.o.

(suspensão, n = 9), sendo a administração i.v. feita na veia lateral caudal. As

suspensões para administração i.p. e p.o. foram preparadas com 100 !JL de

tensoativo polissorbato 80 em solução fisiológica 0,9%. Para administração i.v.

1 O utilizou-se o cloridrato do composto preparado em solução de glicose a 5%. As

amostras de sangue foram coletadas da veia caudal com os animais não

anestesiados, em tempos pré-determinados utilizando-se frascos

heparinizados. O plasma, separado por centrifugação, foi congelado a -20 oc até posterior análise por HPLC. No momento da análise, as amostras foram

15 submetidas à precipitação de proteínas com metanol e analisadas através de

metodologia validada por cromatografia líquida de alta eficiência (TASSO, L. et

ai. Validated HPLC method for determination of LASSBio581, a new

heterocyclic N-phenylpiperazine derivative, in rat plasma. Journal of

Pharmaceutical and Biomedical Analysis, 2003 (aceito para publicação em

20 julho de 2003). Esta metodologia validada poderá ser aplicada na determinação

dos outros componentes da série em amostras biológicas.

Dos perfis de concentração plasmática total por tempo foram

determinados os parâmetros farmacocinéticos do composto LASSBio581,

utilizando abordagem não-compartimental (GIBALDI, M. e PERRIER, O.

25 Pharmacokinetics. 2a ed. New York: Mareei Dekker, 1982), com auxílio do

programa de computador Excel® 2000 (Microsoft).

A Tabela 11 mostra os resultados dos parâmetros farmacocinéticos

obtidos para as três doses investigadas. As Figuras 1 e 2 mostram os perfis

plasmáticos médios obtidos após a administração da dose de 1 O mg/kg i. v. e

30 da dose de 30 mg/kg i.p. e p.o., respectivamente.

. . . . . . . . . . . . . . . . . . . . .

(. 5

... ... .. . .. . .... . . . . .. . . . . . . . . .. . . . . .. . . 51 I 54 ... . . . . . .. . . ..... . . . . • • . . . • . ... .. . .. .. .

Tabela 13. Parâmetros farmacocinéticos obtidos por análise não-compartimental dos perfis de concentração plasmática individuais após a administração do composto LASSBio581 nas doses de 10 mg/kg i.v. (n = 9), 30 mg/kg i.p. (n = 8) e 30 mg/kg p.o. (n = 9) a ratos Wistar machos (média± dp)

Parâmetros 10 mg/kg i.v. 30 mg/kg i.p. 30 mg/kg p.o.

ke (h"1) 0,61 +0,19* 0,14 + 0,06 0,19 + 0,09

tY2 (h) 1,2 + 0,4* 5,8 + 2,3 4,6 + 2,7

Vdss (Ukg) 0,8 + 0,4* 4,4 + 0,9 3,2 + 1,4

Cltot (Uh/kg) 0,6 + 0,2 0,7 + 0,4 0,6 + 0,2

MRT (h) 1,3 + 0,5* 7,5 + 2,8 5,8 + 2,8

ASC o-oo (IJg/mUh) 18,0 + 9,0* 26,5 + 13,2** 13,0 + 3,9

Biodisponibilidade (%) 49 24 * diferença significativa em relação às outras doses para p < 0.05. ** diferença significativa em relação à dose de 30 mg/kg p.o. para p < 0.05.

Os resultados mostram que não há diferença significativa nos

1 O parâmetros farmacocinéticos (volume de distribuição, depuração ou clearance

e tempo de meia-vida) determinados a partir dos dados de administração oral e

intraperitoneal. A administração i.v. resultou em um volume de distribuição

significativamente inferior ao observados para as outras vias, levando a

significativa redução da meia-vida de eliminação do fármaco. Como os níveis

15 plasmáticos obtidos após a dose i.v. foram muito superiores aos observados

após as doses não sistêmicas, pode-se supor que o composto se distribui do

leito vascular para os espaços intersticial por transporte ativo, o qual é saturado

com concentrações elevadas, fazendo com que uma maior quantidade do

composto no sangue, reduzindo o volume aparente de distribuição do mesmo.

20 Os resultados mostraram que a biodisponibilidade do composto

administrado por via oral é 24% e, quando sua administração é feita pela via

i.p., a biodisponibilidade relativa é dobrada (49%). Estes resultados indicam

possível efeito de primeira passagem (metabolização pré-sistêmica) do

composto. Como a biodisponibilidade p.o. é a metade da observada pela via

25 i.p., outros mecanismos de perda da dose administrada devem estar presentes

na administração p.o.

. .. .. . . . .. . . . . . .

... .. . . ..... . . .. ... . . . . ... : : :: . : : : .. : . . . . ..... . ..... . . . . . . . . . .. . . . .. . . . • • • 52 I 54 ... .. . .. .. . .....

2 - ligação a Proteínas Plasmáticas (WRIGHT, J.D.; BOUDINOT, F.D.;

UJHEL Yl, M.R. Measurement and analysis of unbound drug concentrations.

Clinicai Pharmacokinetics, v. 30, n. 6, p. 445-462, 1996)

A ligação do composto LASSBio581 a proteínas plasmáticas foi

5 determinada por ultrafiltração em UL TRAFREE (Millipore®) para diferentes

concentrações na faixa de 5,0 a 40,0 j.Jg/ml. Alíquotas de plasma e ultrafiltrado,

depois de processadas, foram analisadas por HPLC. O experimento foi

realizado em duplicata.

lO

15

A fração livre no plasma fu, foi calculada a partir da seguinte equação:

onde:

Cu é a concentração não ligada a proteínas; e

C T é a concentração plasmática total

A afinidade do composto LASSBio581 pela membrana de filtração foi

investigada utilizando-se a mesma metodologia empregada com as amostras

de plasma, contudo utilizando solução aquosa do composto nas concentrações

de 20,0 e 40,0 j.Jg/ml.

20 A fração livre do composto LASSBio581 no plasma de ratos foi de 29 ±

4%, não sendo observada ligação concentração dependente na faixa de

concentração investigada.

A ligação do composto LASSBio581 às membranas dos filtros utilizados

na ultrafiltração foi de 20%, tanto para concentração de 20,0 j.Jg/ml quanto

25 para a de 40,0 j.Jg/ml. Deste modo, o resultado da fração livre do composto

LASSBio-581 em plasma correspondeu à fração livre determinada, acrescida

da fração aderida na membrana de filtração.

5

53 I 54

... . . . . ... . . ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . .... . . . . ..... . .... . • • • • • • • • • ... .. . .. .. .

. .. .. . . . .. . . . . . . . ....

3 - Distribuição Tecidual do LASSBio-581 (NIX, D.E. et a/. Antibiotic tissue

penetration and its relevance: models of tissue penetration and their meaning.

Antimicrobial Agents and Chemotherapy, v. 35, n. 10, p.1947-1952, 1991)

O estudo de distribuição tecidual do composto LASSBio-581 foi realizado

com a administração intravenosa bolus da dose de 1 O mg/kg a um grupo de 15

ratos Wistar machos (225 a 275 g). Três animais foram sacrificados a cada

tempo pré-determinado (15, 30, 45, 60, 120 e 240 min) e foram removidos o

cérebro, o fígado, o coração, os pulmões, o baço e os rins. Os órgãos

excicados foram cuidadosamente secos em papel absorvente, a fim de retirar o

1 O excesso de sangue superficial. Em seguida, os mesmos foram colocados em

envelopes de papel alumínio e pesados. As amostras foram congeladas em

nitrogênio líquido a - 193 °C até análise, que ocorreu em tempo não superior a

7 dias. Para análise, os órgãos foram pesados e homogeneizados em solução

salina com auxílio de um homogeneizador de tecidos (PowerGen 125). Após

15 precipitação das proteínas de alíquotas do homogeneizado, procedeu-se à

determinação do composto por HPLC utilizando metodologia previamente

validada.

Os resultados da avaliação da penetração tecidual do LASSBio581

podem ser visualizados na Tabela 12. Os perfis médios teciduais podem ser

20 observados na Figura 3.

Tabela 14. Parâmetros farmacocinéticos teciduais do composto LASSBio581 após a administração de 10 mg/kg i.v. bolus a ratos machos Wistar (n = 15).

Tecido ASC0 _00

Ímax (h) Cmax (JJg/g) tW(h) MRT0 _ 00 ftecidual

relativa b(%)

(JJg.h/g~ (hl

Cérebro 3,85 0,75 3,01 1,9 2,49 39,2

Coração 1 ,soe 0,75 4,00 NC NC 24,8d

Fígado 3,41 0,75 5,49 0,6 0,80 34,7

Rins 2,00c 0,75 4,33 NC NC 27,7d

Baço 2,01 0,75 3,20 0,6 0,86 20,5

Pulmões 5,00 0,75 8,46 0,6 0,99 51,0 25 NC - não calculado devido à insuficiência de pontos amostrais;

. .. ... . . . . ... ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . .... . . . . ..... . .... . .. . . . .. . . . • • • 54 I 54 • • • • • • • • • ... .. . .. .. . .....

5

8calculado a partir da inclinação da fase de eliminação;

bfração tecidual relativa calculada como (ASC0 _00

tecidual I ASC0 _00

plasmática).100;

c ASC0

_t, onde t = 1 h;

dcalculada como (ASC0 _t tecidual/ ASC0

_ 1plasmática).100;

Os resultados mostraram que o composto LASSBio581 apresenta um

tempo de meia-vida médio em torno de três vezes superior no cérebro do que

nos outros tecidos investigados, com uma penetração tecidual, determinada

1 O pela fração tecidual relativa, maior no pulmão (51 ,O %), seguido do cérebro

(39,2 %) e do fígado (34,7 %).

Sabe-se que a presença de sangue nos diferentes órgãos influencia nos

resultados de penetração tecidual utilizando homogeneizados de tecido. Foi

demonstrado que o maior % de sangue por tecido (p/p) é observado no

15 pulmão, seguido do fígado e do rim. O cérebro, porém, apresenta o menor

percentual sangüíneo/grama de tecido, considerando ratos pesando entre 225-

275 gramas (TRIPLLET, J.W. et a/. Determination of gallium concentration in

blood free tissues using radiolabelled blood marker. Journal of Pharmaceutical

Sciences, v. 74, n. 9, p. 107-1009, 1985), mesma faixa de peso utilizado em

20 nossos estudos. Portanto, a quantidade de sangue presente no pulmão e no

fígado dos animais envolvidos neste trabalho pode ter contribuído para elevar

as concentrações do composto LASSBio581 nestes locais, tendo o cérebro

sofrido a menor influência por contaminação sangüínea nas análises

realizadas. Considerando o exposto, os resultados mostram que o composto

25 LASSBio-581 tem penetração cerebral importante, permanecendo por mais

tempo neste tecido. Estes resultados corroboram os obtidos nos estudos

farmacodinâmicos realizados.

5

10

I I 3

Reivindicações

... • • • • ••• • •

... .. . . ..... . • • • • • • • • : : ::.:.: :···.:.:,. • • • • • • • • • ••• •• • •• •• •

USO DE DERIVADOS N-FENILPIPERAZINICOS E

COMPOSIÇOES FARMACÊUTICAS CONTENDO OS MESMOS

. .. •• • • • •• . . . . . . . ....

1- Derivados N-fenilpiperazínicos, caracterizados por apresentar fórmula

geral (1):

onde:



OCF3, N02, NH2, NHAc, N(CH3)2, S02NH2, S02Me, C1-C3 alquila, fenila;

I 5 ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos.

2- Derivados N-fenilpiperazínicos, de acordo com a reivindicação 1,

caracterizados por ser 1-[ 1-( 4-clorofenil)-1 H-pirazol-4-il metil]-4-fenil

piperazina ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

3- Derivados N-fenilpiperazinicos, de acordo com a reivindicação 1,

20 caracterizados por ser 1-[1-( 4-clorofenil)-1 H-1 ,2 ,3-triazol-4-ilmetil]-4-fenil

piperazina ou sais farmaceuticamente aceitáveis do mesmo.

4- Derivados N-fenilpiperazínicos, de acordo com as reivindicações 1 a 3,

Derivados derivados N-fenilpiperazínicos, de acordo com a

reivindicações 2 a 4, caracterizados por serem antagonistas dos

25 receptores D2.

5- Derivados N-fenilpiperazinicos, de acordo com as reivindicações 1 a 3,

caracterizados por serem antagonistas de receptores serotoninérgicos.

6- Derivados N-fenilpiperazínicos, de acordo com a reivindicação 6,

caracterizados por serem antagonistas dos receptores 5-HT2.

30 7- Composição farmacêutica para o tratamento de doenças associadas a

disfunções do sistema dopaminérgico e/ou serotoninérgico caracterizada

5

2/3

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. .. .. . . . .. . . . • • • .....

por compreender um veículo farmaceuticamente aceitável e pelo menos

um derivados N-fenilpiperazínico de fórmula geral (1):

onde:




1 O ou sais farmaceuticamente aceitáveis dos mesmos

8- Composição, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato

de os referidos derivados n-fenilpiperazínicos serem antagonistas de

receptores dopaminérgicos.

9- Composição, de acordo com a reivindicação 7 e 8, caracterizada pelo

15 fato de os referidos derivados n-fenilpiperazínicos serem antagonistas

dos receptores D2.

10-Composição, de acordo com a reivindicação 7, caracterizada pelo fato

de os referidos derivados n-fenilpiperazínicos serem antagonistas de

receptores serotoninérgicos.

20 11-Composição, de acordo com a reivindicação 7 e 10, caracterizada pelo

fato de os referidos derivados n-fenilpiperazínicos serem antagonistas

dos receptores 5-HT 2·

12- Uso na preparação de um medicamento destinado ao tratamento de

doenças associadas a disfunções do sistema dopaminérgico e/ou

25 serotoninérgico de uma substância caracterizada por possuir estrutura

de acordo com a fórmula geral (1):

v-Q-~~{~)--()-w N-X z (I)

onde:


3/3

... .. . . . ... . . ... .. . . ..... . . . . . . . . . . . . . . . . .... . . . . ..... . .... . . . . . . . . . . ... .. . .. .. .

. .. .. . . . .. . . . . . . . .... Y e W correspondem, independentemente, a H, F, Cl, Br, I, OH, OMe,


ou seus sais, derivados e/ou solvatos farmaceuticamente aceitáveis.

13- Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pela disfunção do

5 sistema dopaminérgico compreender a disfunção erétil.

14-Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pela disfunção do

sistema serotoninérgico compreender esquizofrenia e/ou distúrbios

afetivos.

35

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Figura 3

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Figura 4

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5

• ••• •• • •• •• •

Resumo

li USO DE DERIVADOS N-FENILPIPERAZÍNICOS E

COMPOSIÇOES FARMAC~UTICAS CONTENDO OS MESMOS\\

• ••••

A presente invenção proporciona novos derivados N-fenilpiperazínicos e

composições farmacêuticas compreendendo os mesmos, sendo estes novos

derivados estruturais da clozapina capazes de atuar em vias dopaminérgicas

e/ou serotoninérgicas de ação central; estes compostos demonstraram-se úteis

1 O no tratamento de disfunção erétil e também úteis como antipsicóticos, com as

vantagens de não acarretarem os efeitos colaterais típicos da clozapina;

proporcionarem menor incidência de catatonia quando comparados com outro

agente antipsicótico, o haloperidol, e não apresentarem efeito depressor do

sistema nervoso central; as moléculas também apresentam efeito hipotérmico,

15 que pode ser útil no tratamento de quadros que apresentem hipertermia.

Documents

BR PI0405418A I