3. Cálculos

Os resultados obtidos e dispostos nas tabelas do relatório foram feitos da seguinte forma:

3.1. [S] na reação:

C1 V1=C2 V2

Por exemplo, para S1:

C1 V1 = C2 V2 ⇒ (0,02 ) . (5 ) = C2 . (15 ) ⇒ C2 = 6,67× 10-3 mol L-1

3.2. Velocidade:

Foi calculado no Excel. A partir da planilha em anexo, para S1 quando [E] = 40 mg%, a fórmula usada foi:

B15=(SOMA(B5:B12))/(SOMA(A5:A12))

Para essa fórmula foi considerada apenas a faixa linear de [P] formado, ou seja, a faixa onde a taxa de formação de produto foi aproximadamente constante. Esta faixa foi destacada na planilha com a cor amarela. Em termos gerais a fórmula utilizada foi:

v = ∑ [P]

∑ t

3.3. 1/[S] e 1/v:

Bastou inverter os valores de velocidade e de [S]. Por exemplo, para S1 quando [E] = 20 mg%:

1[S]

= 10,00667

= 150 L mol -1

1v

= 10,259

= 3,87 min L mol -1

3.4. Atividade total e específica:

Inicialmente, foi definido como 1 U a quantidade de enzima que catalisa a formação de 1 mol de produto por minuto.

A atividade total (U) foi calculada pela seguinte fórmula:

AT = v . V reação

Onde AT é a atividade total, v é a velocidade da reação enzimática e Vreação é o volume total da reação (sempre 15 mL).

Para a atividade específica (U mg-1) usou-se a seguinte fórmula:

Aespec = AT

menzima

Onde Aespec é a atividade específica, AT é a atividade total e menzima é a massa de enzima usada na reação (para [E] = 20 mg%, menzima = 0,40 mg e para [E] = 40 mg%, menzima = 0,80 mg%)

Na planilha em anexo, por exemplo, para [E] = 20 mg% e S1 usou-se as seguintes fórmulas:

(Atividade total) F19 = F15*15(Atividade específica) F20 = F19/0,4

Para [E] = 40 mg% e S1 usou-se as seguintes fórmulas:

(Atividade total) B19 = B15*15 (Atividade específica) B20 = B19/0,8

3.5. KM e vMAX graficamente.

Foram determinados via equação da reta dos gráficos de Lineweaver-Burk. Para [E] = 40 mg%:

1vMAX

= b (coef .linear da eq.da reta) = 0,2022 ⟹ vMAX = 4,95 mol L-1 min-1

KM

vMAX

= m( coef.angular da eq.da reta) = 0,0154 ⟹ KM

4,95 = 0,0154 ⟹ KM = 0,0762 mol L-1

Para [E] = 20 mg%:

1vMAX

= b (coef .linear da eq.da reta) = 0,0473 ⟹ vMAX = 21,14 mol L-1 min-1

KM

vMAX

= m( coef.angular da eq.da reta) = 0,0 252 ⟹ KM

21,14 = 0,0252 ⟹ KM = 0,533 mol L-1

4. Discussão

O comportamento da enzima sob diferentes concentrações dela mesma e de substrato foi determinando nas condições ótimas dela, ou seja, nas condições de temperatura e pH onde ela teve sua maior estabilidade. Cada gráfico pôde ser analisado a seguir.

1. Gráficos Velocidade X [S]: esses gráficos mostraram de que forma a velocidade variou em função das concentrações de substrato. Observou-se que em um determinado momento (o que foi visto de forma mais acentuada quando [E] = 20 mg%) a velocidade da enzima estava tendendo a ser “constante”. Isso indicou que naquela concentração de substrato, entre 0,025 e 0,030 mol L-1, a enzima apresentou-se saturada por ele. Além disso, ao dobrar a concentração de enzima, pôde-se observar um aumento significativo na velocidade máxima da enzima, que não foi detectada por ter ultrapassado o limite de detecção do aparelho.

2. Gráficos 1/Vel X 1/[S]: esses gráficos de Lineweaver-Burk tiveram como importância o cálculo de KM e vMAX. O gráfico foi obtido invertendo-se as velocidades e as concentrações de substrato.

3. Gráfico [P] X Tempo, quando [E] = 20 mg%: foram obtidas quatro curvas. Foi possível pensar que a quantidade de substrato convertido foi diretamente

proporcional ao tempo de ação da enzima, porém até certo limite. Isto foi devido a fatores como a diminuição da concentração do substrato, e conseqüentemente a formação de produtos que muitas vezes inibem a enzima e inativação da mesma. Além disso, o gráfico que apresentou as maiores concentrações de produtos formadas foi o de maior concentração de substrato, o que foi lógico, uma vez que no meio havia mais substrato que nos outros para ser convertido a produto.

4. Gráfico [P] X Tempo, quando [E] = 40 mg%: a análise foi semelhante à quando [E] = 20 mg %.

5. Conclusão:

Quando [E] = 40 mg% foi obtido vmax = 4,95 mol L-1 min-1 e Km

= 0,0762 mol L-1 e quando [E] = 20 mg% vmax =21,14 mol L-1 min -1 e Km = 0, 533 mol L-1. Foram obtidas atividades totais para cada concentração de substrato. Para [E] = 40 mg%, a atividade em S1 = 5,96 U e em S3 = 13,31 U. Para [E] = 20 mg%, S = 3,88 U, S2 = 7,76 U, S3 = 10,7 U e S4 = 13,3 U.