COMUNICAÇÕES LIVRES - fmv.ulisboa.pt · Um dos autores desenvolveu um índice de capacidade do processo (CpK) que permite avaliar a consistência da qualidade do leite produzido

Congresso de Ciências Veterinárias [Proceedings of the Veterinary Sciences Congress, 2002], SPCV, Oeiras, 10-12 Out.

COMUNICAÇÕES LIVRES Ruminantes pp. 363 - 400

72. O método de inclusão, baseado em genótipos multilocus, na alocação de indivíduos de algumas raças bovinas

autóctones do noroeste de Portugal [The inclusion method, based on multilocus genotypes, in the individual assignment of several indigenous cattle of north-western Portugal] - Brito, N.V.; Arranz, J.J.; Bayón, Y.; Colaço, J; San Primitivo, F.

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73. Novas Tecnologias de Identificação Animal [New technologies of animal identification] - Fonseca, P.; Pinheiro, P.; Roquete, C.; Barbosa, E.; Carreira, P.; Prata, T.

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74. Listeria monocytogenes em ensilagens: prevalência e ecologia [Listeria monocytogenes in ensilages: prevalence and ecology] - Guerra, M.M.; Andrade, G.R.; Saraiva Lima, M.; Bernardo, F.

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75. Avaliação da eficácia e duração dos efeitos resultantes da administração de dois corticosteróides (prednisolona e dexametasona) em vários parâmetros sanguíneos (glucose, iões, leucócitos) e na produção em vacas leiteiras [Duration of the effects of two glucocorticoids (prednisolone and dexamethasone) on several blood parameters (glucose, ions, leucocytes) and milk yield on dairy cows] - Stilwell, G.; Capitão, E.; Esteves, G.F.; Lima, M.S.

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76. Análise filogenética de isolados nacionais do vírus da diarreia viral bovina (BVDV) [Phylogenetic analysis of Portuguese isolates of bovine viral diarrhea virus (BVDV)] - Ramos, F.; Thompson, G.; Barros, S.; Nú, T.; Fevereiro, M.

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77. Aplicação da reacção de polimerização em cadeia na detecção de rotina de infecções pelo vírus da Diarreia Viral dos Bovinos [Application of the Polymerase Chain Reaction to the routine detection of the Bovine Viral Diarrhea Virus Infections in Cattle] - Souto, R.N.; Kim, S.; Thompson, G.; Dubovi, E.

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78. Caracterização molecular de amostras do vírus da Diarreia Viral dos Bovinos (VDVB) isolados em Portugal [Molecular characterization of Bovine Viral Diarrhea Virus isolates from Portugal] - Paupério, S.; Souto, R.N.; Silva, E.; Kim, S.; Dubovi, E.; Fevereiro, M.; Thompson, G.

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79. Recomendação para a actualização da classificação histopatológica de lesões vesicais em bovinos com hematúria enzoótica bovina [Recommendation for the update of the histological classification of urinary bladder lesions in bovine enzootic haematuria] - Carvalho, T.; Pinto, C.; Peleteiro, M.C.

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80. Lesões neoplásicas observadas durante a inspecção post mortem de bovinos [Neoplastic lesions detected at post mortem examination of cattle] - Saraiva, C.; Esteves, A.; Alves, A.; Ribeiro, S.; Martins, C.

379

81. Papilomatose vulvar em bovinos de Raça Alentejana [Papillomatosis in cattle of Alentejano breed] - Bettencourt, E.M.V.; Barata, S.M.S.B.; Romão, R.J.; Lavrador, C.F.T.V.B.; Martinho, C.; Calisto, S.; Soudo, A.; Galhoz, S.

381

82. Isolamento de Prototheca zopfii como agente etiológico de mastite subclínica em bovinos [Isolation of Prototheca zopfii as aethiological agent of bovine subclinical mastitis] - Bexiga, R.; Cavaco, L.; Vilela, C. L.

383

83. Pitomicotoxicose (eczema facial) em ruminantes dos Açores [Pithomycotoxicosis (facial eczema) of ruminants, in the Azores, Portugal] - Pinto, C.; Santos, V.M.; Dinis, J.; Peleteiro, M.C.; Smith, B.L.

385

84. Besnoitiose bovina, aspectos da sua epidemiologia actual em Portugal e perspectivas [Bovine besnoitiosis, its epidemiological aspects in Portugal and perspectives] - Cortes, H.; Nóbrega, F.; Vidal, R.; Ferreira, M.L.F.; Caeiro, V.

387

85. Vacina de DNA experimental contra o vírus Maedi-Visna dos ovinos [DNA Vaccine candidate against Maedi-Visna Virus] - Henriques, A.M.; Fevereiro, M.; Prazeres, D.M.F.; Monteiro, G.A.

389

86. Sequência genómica integral do primeiro lentivírus de ovino isolado em Portugal [Complete genome sequence of the first Portuguese isolate of ovine lentivirus ] - Barros, S.; Fevereiro, M.

391

87. Carcinoma de células escamosas com localização ocular em ovinos na região do Alto Alentejo [Squamous cell carcinoma with ocular localization in sheep, in Alto Alentejo -Portugal] - Barata, S.M.S.B.; Bettencourt, E.M.V.; Romão, R.J.

393

88. Isolamento dos primeiros vírus nacionais da artrite encefalite caprina (CAEV) [Isolation of the first Portuguese caprine arthritis encephalitis viruses (CAEV)] - Fevereiro, M.; Ramos, F.; Barros, S.; Fagulha, T.; Mengas, R.

395

89. Respostas de adaptação à infecção por Haemonchus spp em caprinos das ilhas Terceira (Açores) e Santiago (Cabo Verde) [Adaptation responses to Haemonchus spp infection in goats from Terceira (Azores) and Santiago (Cape Verde) Islands] - Lucena, S.; Ferreira, M.L.; Pinho, M.; Afonso-Roque, M.M.

397

90. Um caso de síndrome de persistência dos derivados dos ductos de Müller num cabrito (Capra hircus) - [A case of persistent müllerian duct syndrome in a caprine (Capra hircus)] - Silva, J.F.; Correia, J.J.

399


159. Avaliação preliminar de resultados de um programa de controlo de Streptococcus agalactiae em explorações leiteiras. Niza Ribeiro, J.; Madeira, M.H.; Lima, M.

Supl


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Ruminantes (Supl.)

Avaliação preliminar de resultados de um programa de controlo de

Streptococcus agalactiae em explorações leiteiras

Niza Ribeiro, J.; Madeira, M.H.; Lima, M. Laboratório de Sanidade Animal - AGROS

As explorações leiteiras infectadas por Streptococcus agalactiae apresentam frequentemente

médias anuais de células somáticas acima dos limites legais e também variações importantes deste parâmetro ao longo do tempo. Um dos autores desenvolveu um índice de capacidade do processo (CpK) que permite avaliar a consistência da qualidade do leite produzido numa exploração. Este autor demonstra que a proporção de infecções está inversamente relacionada com o valor CpK da exploração e que este apresenta um mau comportamento em todas as explorações onde se isolou este agente patogénico. Verificou também que as explorações com mais de 40 % de prevalência de mastite por esta bactéria têm um risco 17 vezes maior de apresentarem uma amplitude média anual maior que 400.000 células somáticas/ml, do que as que não têm este agente. Através de uma avaliação sistemáticas ao leite da totalidade das explorações concluiu-se que a prevalência de explorações infectadas por este agente, na região de Entre-Douro e Minho, é 10.3 % (n= 2259). Estes resultados demonstram que a presença de Streptococcus agalactiae, compromete seriamente a qualidade de leite produzido nestas explorações.

Partindo desta situação entendeu-se que seria importante conceber e levar a cabo um plano sistemático de levantamento e controlo do Streptococcus agalactiae ao longo de 2001. Os autores durante o ano de 2001 no Laboratório de Sanidade Animal da AGROS desenvolveram um programa para controlo de Streptococcus agalactiae nas explorações leiteiras que se desenrola em cinco fases de intervenção:

I. identificação das explorações através de diagnóstico bacteriológico de amostra do tanque de leite;

II. identificação dos animais infectados na exploração; III. terapêutica antimicrobiana a todos os animais positivos ao agente patogénico; IV. confirmação de cura bacteriológica a partir de cultura do leite dos animais tratados; V. monitorização da exploração ao longo de ano, utilizando diagnóstico bacteriológico, carta de

controlo da exploração e contraste leiteiro, para confirmar a erradicação ou o controlo.

O programa encontra-se actualmente implementado em 51 explorações leiteiras, com efectivo médio de 30.8 vacas em lactação (10 a 150). A proporção média de animais infectados por exploração é 31.9 %; A cura bacteriológica obtida no primeiro tratamento é 84.7%. O impacto imediato da intervenção na exploração reduz em média 1.7 vezes a contagem de células somáticas no leite do tanque.


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Ruminantes

O método de inclusão, baseado em genótipos multilocus, na alocação de indivíduos de algumas raças bovinas autóctones do noroeste de Portugal [The inclusion method, based on multilocus genotypes, in the individual

assignment of several indigenous cattle of north-western Portugal]

N.V.Brito1, J.J.Arranz2, Y.Bayón2, J.Colaço3 e F.San Primitivo2

1 Instituto Politécnico de Viana do Castelo, Escola Superior Agrária de Ponte de Lima, Refoíos 4990 Ponte de Lima, Portugal; 2 Departamento de Producción Animal, Universidad de León E-

24071 León, España; 3 Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, Vila Real, Portugal

Resumo

A tecnologia molecular providencia elevado número de marcadores altamente variáveis disponíveis para analisar a variabilidade genética da população bem como a estrutura evolutiva da espécie. A imigração e o mestiçamento são movimentos importantes que podem ser identificados por métodos estatísticos baseados em genotipos multilocus, permitindo assinalar/alocar um indivíduo numa determinada população ou raça. Estuda-se, segundo o método Bayesiano e recorrendo ao programa estatístico GENECLASS, uma amostragem de 187 indivíduos, pertencentes às raças bovinas Arouquesa, Barrosã, Cachena e Frísia.

Os resultados permitiram constatar uma correcta alocação de todos os indivíduos das raças Cachena e Frísia e valores bastante elevados na identificação dos de raça Arouquesa (95,7%) e Barrosã (91,3%), confirmando a elevada potencialidade deste método em estudos de diversidade genética e análise filogenética.

Summary

Molecular technology provides a large number of highly variable markers available for the analysis of population genetic variability as well as species evolutionary patterns. Immigration and crossbreeding are the most important processes that may be detected through the statistical analysis of multilocus genotypes, which allows for the assignment of an individual to a particular population or breed. The Bayesian method was applied using the GENECLASS program to study a sample of 187 individuals belonging to Arouquesa, Barrosã, Cachena and Friesian cattle.

The results indicated a correct assignment of all individuals from cachena and friesian cattle and considerably high identification values for arouquesa (95.7%) and barrosã cattle (91.3%), supporting the high potentiality of the method in genetic diversity studies and phylogenetic analyses.


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Ruminantes

Novas tecnologias de identificação animal

Paulo Fonseca12, Patrícia Pinheiro2, Carlos Roquete12, Eduardo Barbosa2, Paulo Carreira2 e Tiago Prata2

1 Universidade de Évora - Departamento Zootecnia; 2 Universidade de Évora - Gabinete Técnico-

Científico do Projecto IDEA

O Projecto IDEA constitui uma experiência de Identificação Electrónica (IE) de animais em

larga escala, durante a qual foram identificados na União Europeia (Alemanha, Espanha, França, Holanda, Itália e Portugal) cerca de um milhão de pequenos e grandes ruminantes, a fim de recolher informações que validem o sistema no que respeita aos aspectos tecnológicos e administrativos de produção, registo e gestão da informação produzida.

A vertente técnica da identificação electrónica de animais de espécies pecuárias é baseada no princípio da identificação por rádio-frequência (normas ISO/DIS 11785 e ISO 11784). Em Portugal, o Projecto IDEA baseou-se unicamente na IE através da utilização de bolos reticulares. Na execução do Projecto IDEA-Portugal estiveram envolvidas, entre outros, mais de 750 unidades de produção pecuárias, 651 das quais exploram os animais em regime extensivo tradicional, pertencentes a associados da: ACOS, ACBRA, ACBM e APCRS.

O nível geral de execução do Projecto ultrapassou os 100%, tendo sido identificados um total de 157.818 animais (132.886 ovinos; 18.659 bovinos e 6.273 caprinos). As perdas de identificadores cifra em termos gerais em apenas 0,13% (ovinos 0,10%; bovinos 0,17% e caprinos 0,72%). As eficiências de leituras, estáticas e dinâmicas, atingiram os 100%. A recuperação de bolos de animais mortos no campo e matadouro cifraram-se em 85,34% e 99,71% respectivamente. O controlo da movimentação dos animais (traçabilidade) foi garantido com o registo de 91.630 movimentações de vários tipos.

Os resultados confirmam as expectativas criadas, o que representa uma vantagem substancial em comparação com os sistemas de identificação tradicionais.


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New technologies of animal identification

Paulo Fonseca12, Patrícia Pinheiro2, Carlos Roquete12, Eduardo Barbosa2, Paulo Carreira2 e Tiago Prata1

1 Universidade de Évora - Departamento Zootecnia; 2 Universidade de Évora - Gabinete Técnico-Científico do Projecto IDEA

IDEA Project constitutes an experience on Electronic Identification (IE) of animals in wide

scale, during which they had been identified in the European Union (Germany, Spain, France, Holland, Italy and Portugal) about a million of small and big ruminants, in order to collect information that validate the system in that it respects to the technological and administrative aspects of data, register and management of the produced information.

The source technique of the electronic Identification of ruminants is based on the principle of the identification for radio-frequency (norms ISO/DIS 11785 and ISO 11784). On Portugal, IDEA Project was based solely on the IE through the reticular bolus use. In the execution of the IDEA Project- Portugal had been involved, among others, more than 750 units of production, 651 of which explore the animals in traditional extensive regimen, pertaining the associates of: ACOS, ACBRA, ACBM and APCRS.

The general level of execution of the Project exceeded the 100%, having been identified to a total of 157.818 animals (132,886 sheeps; 18,659 cattle and 6,273 goats). The identification losses in general terms were only 0.13% (sheeps 0,10%; cattle 0.17% and goats 0.72%). The efficiencies of readings, static and dynamic, had reached the 100%. The bolus recovery of animals died in the field and slaughterhouse had been respectively in 85,34% and 99,71%. The control of the movement of the animals (traceability) was guaranteed with the register of 91.630 movements of different types.

The results confirm the initial expectations, representing a substantial advantage in comparison with the traditional systems of identification.


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Ruminantes

Listeria monocytogenes em ensilagens: prevalência e ecologia

M. Manuela Guerra, G. R. Andrade, M. Saraiva Lima e F. Bernardo

CIISA/ Faculdade de Medicina Veterinária/ UTL, Polo Universitário da Ajuda, 1300-477 Lisboa

As ensilagens são apontadas como um dos mais relevantes veículos de Listeria monocytogenes nas explorações leiteiras. Esta bactéria é responsável pelo desencadeamento de situações mórbidas graves, do foro das patologias reprodutiva e neurológica em espécies de produção, e com grande impacto em Saúde Pública. Embora ubíqua, L. monocytogenes é, em termos ecológicos, um germe próximo das bactérias lácticas, adaptando-se bem e multiplicando-se activamente no ambiente das fermentações e maturações dos alimentos, pelo que, nas ensilagens, encontram condições adequadas ao seu desenvolvimento.

Para se avaliar o eventual impacto das ensilagens na veiculação de L. monocytogenes, efectuou-se um estudo preliminar com 71 amostras, processadas por método de pesquisa bacteriológica convencional, previamente optimizado e validado. Verificou-se que 20 amostras estavam contaminadas (28%): 10 por L. monocytogenes (14%) e 10 por L. innocua (14%). Os isolados de L. monocytogenes aglutinaram o soro Bacto-Listeria O poly-serotipos 1,4. Nas amostras em que foi possível determinar o teor de Listeria (43), isolou-se unicamente L. innocua. Em 2 amostras, verificou-se um teor de L. innocua de 1x106 UFC/g.

Estes resultados confirmam que algumas ensilagens constituem, de facto, um risco importante para a transmissão da listeriose, justificando a necessidade de se prosseguirem trabalhos no domínio do estudo da qualidade higio-sanitária das ensilagens em Portugal, nomeadamente nos aspectos que respeitam ao benefício biológico potencial decorrente da utilização de microfloras de fermentação dotadas de capacidade inibidora da Listeria, como forma de garantir a inocuidade e bio-segurança deste tipo de alimento para animais.


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Listeria monocytogenes in ensilages: prevalence and ecology

M. Manuela Guerra, G. R. Andrade, M. Saraiva Lima e F. Bernardo

CIISA/ Faculdade de Medicina Veterinária/ UTL, Polo Universitário da Ajuda, 1300 -477 Lisboa

Ensilages are generally considered as one of the most important source for introduction of Listeria monocytogenes in dairy exploitations. This bacteria is responsible for severe reproductive and neurological pathologies in livestock, and it has a very important impact in Public Health. Althought ubiquitous, L. monocytogenes is, in ecological thermos, a germ related with lactic acid bacteria, surviving and multiplying actively in fermentation and maturation conditions of foods and feeds, and that is the reason why ensilages are an appropriated behaviour for their development.

To evaluate the eventual impact of ensilages on L. monocytogenes transmission, a preliminary study were performed, with 71 samples, processed with a conventional bacteriological method, previously optimised and validated.

Twenty samples revealed to be contaminated (28%): 10 with L. monocytogenes (14%) and 10 with L. innocua (14%). All L. monocytogenes isolates agglutinated with Bacto-Listeria O poly-serotypes 1,4. In the samples were the level of Listeria contamination was determined, only L. innocua has been isolated. In two samples, L. innocua level was about 106 cfu / g.

These results confirm that some ensilages are, in fact, an important source for Listeria transmission. Assuming this, it seems to be relevant to pursuit researching in this field, attending to the necessity of providing hygio-sanitary quality to ensilages in Portugal, namely in aspects concerning the eventual biological benefit of using special lactic acid microflora able to compete and inhibit Listeria, as a tool to naturally achieve the safety statement of this type of feed stuffs.


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Ruminantes

Avaliação da eficácia e duração dos efeitos resultantes da administração de dois corticosteróides (prednisolona e dexametasona) em vários parâmetros sanguíneos (glucose, iões, leucócitos) e na produção em vacas leiteiras

G. Stilwell, E. Capitão, G.F. Esteves e M.S.Lima

DEMOC, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Rua Prof. Cid dos Santos, Alto da AjudaLisboa

O objectivo do nosso estudo consistiu em avaliar o efeito e a duração resultante da administração por via intramuscular única de dois corticosteróides (prednisolona, 250 mg e dexametasona, 36 mg) a quatro vacas leiteiras em produção nalguns parametros sanguíneos (glucose, iões, leucócitos) e o seu impacto na produção de leite.

Os resultados obtidos podem ser assim resumidos:

1 – Verificou-se um aumento da glicémia com ambos os corticóides mas muito mais marcado após a administração de dexametasona. O pico da glicémia ocorreu 24 horas após a administração de ambas as drogas.

2 – Não se verificaram quaisquer alterações nos níveis sanguíneos de Na, K e Cl com qualquer dos corticosteróides administrados.

3 – A administração de dexametasona provocou uma leucocitose, neutrofilia e inversão do quociente neutrófilos/linfócitos com um pico às 24 horas mas que ainda estava presente 96 horas depois da sua administração. Os valores mínimos de linfocitos ocorreram ao fim de 48 horas.

4 – A administração de prednisolona provocou uma leucocitose com neutrofilia mais marcada 6 horas após a sua administração. Não houve alterações significativas nos valores sanguíneos de linfocitos.

5 – A queda da produção de leite não foi muito marcada com a administração de qualquer dos corticóides (25% para a dexametaxona, 12,5% para a prednisolona).


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Duration of the effects of two glucocorticoids (prednisolone and dexamethasone) on several blood parameters (glucose, ions, leucocytes) and milk yield on dairy

cows

G. Stilwell, E. Capitão, G.F. Esteves e M.S.Lima

DEMOC, CIISA, Faculdade de Medicina Veterinária, Rua Prof. Cid dos Santos, Alto da Ajuda, Lisboa

The objective of your study was to evaluate the effect and its duration of the administration of two corticosteroids (prednisolone, 250 mg and dexamethasone, 36 mg) to four dairy cows in several blood parameters (glucose, ions, leucocytes) and milk yield on dairy cows

The results obtained can be summarized as follows:

1 – There was an increase in the glycemia after the administration of both corticoids, although the increase was larger after dexamethasone. The hightest value occurred 24 hours after the administration of both corticoids

2 – There were no changes in the blood levels of Na, K and Cl after the administration of both compounds

3 – After the administration of dexamethasone there was a leucocytosis, neutrophilia and inversion of the neutrophil /limphocyte ratio, with the highest value occurring at 24 hours but still present 96 hours after its administration and the lowest levels of limphocytes occurring 48 hours after.

4 – After the administration of prednisolone there was a leucocytosis, with neutrophilia more evident 6 hours after the administration. No changes were seen in the limphocytes levels.

5 – The drop in milk yield was not dramatic for both corticosteroids (25% for dexamethasone and 12,5 for prednisolone).


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Ruminantes

Análise filogenética de isolados nacionais do vírus da diarreia viral bovina (BVDV) [Phylogenetic analysis of Portuguese isolates of bovine viral diarrhea

virus (BVDV)]

Fernanda Ramos1, Gertrude Thompson2, Sílvia Barros1 e Teresa Nú1 and Miguel Fevereiro1

1Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Lisboa 2Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar, UP

Resumo As infecções pelo BVDV são uma importante causa de morbilidade e mortalidade nos

bovinos de carne e de leite. Existem dois biotipos distintos de BVDV; vírus citopatogénicos (cp) e não citopatogénicos (ncp). O biotipo cp é responsável pelo desenvolvimento de uma forma clínica grave conhecida por Doença das Mucosas. O biotipo nc origina infecções persistentes, com evolução clínica variável. Com base nas sequências nucleotídicas da região genómica não traduzida (5’-UTR), os diferentes isolados de BVDV são geneticamente classificados em tipo I e tipo II.

A região 5’-UTR de seis isolados nacionais de BVDV foi parcialmente amplificada por RT-PCR a partir de RNA total extraído directamente do baço, gânglios linfáticos ou sangue de animais suspeitos. Os fragmentos de 239 pb resultantes da amplificação foram clonados e sequenciados. As sequências obtidas foram comparadas com as sequências publicadas de BVDV, vírus da peste suína clássica (CSFV) e vírus da doença de fronteira dos ovinos (BD. A análise filogenética revelou que três dos isolados agora analisados pertencem ao genótipo 1a e 1b do BVDV tipo I (Pestivirus tipo 1), os restantes isolados ao tipo II (Pestivirus tipo 4). O conhecimento dos diferentes tipos de BVDV circulantes nas explorações poderá contribuir para um melhor conhecimento da epidemiologia e patogenia da infecção bem como, servir de base ao desenvolvimento de vacinas mais eficazes no controlo da doença.

Summary BVDV infections are an important cause of morbidity and mortality worldwide in dairy and

beef cattle. Strains are classified as cytopathogenic (cp-BVDV) or non-cytopathogenic (nc-BVDV) according to their effects in tissue cultures. nc-BVDV is the most common biotype isolated. It causes persistent infections or acute infections with various clinical outcomes. cp-BVDV is most important in the pathogenesis of mucosal disease. Based on nucleotide differences in the sequence of the 5’-untranslated region (5’-UTR) of the genome, BVDV strains have been also classified as type I and type II.

The 5’-UTR region of six Portuguese isolates of BVDV was partially amplified by RT-PCR using total RNA extracted directly from spleen, lymph nodes and blood of suspected animals. The resulting 239 bp amplicons were cloned, sequenced and compared with published sequences of BVDV and of classical swine fever virus (CSFV) and border disease virus (BD) of sheep. The phylogenetic analysis revealed that three isolates belong to the genotypes 1a and 1b of BVDV type I (Pestivirus type 1) and the other three isolates were included in BVDV type II (Pestivirus type 4). The identification of the BVDV genotypes circulating in the farms may contribute for a better understanding of the epidemiology and pathogenesis of BVDV infections, and to the development of new vaccines.


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Ruminantes

Aplicação da reacção de polimerização em cadeia na detecção de rotina de infecções pelo vírus da Diarreia Viral dos Bovinos [Application of the

Polymerase Chain Reaction to the routine detection of the Bovine Viral Diarrhea Virus infections in Cattle]

Souto, R. N.1, S. Kim2, G. Thompson1,3, E. Dubovi2

1 Instituto de Ciências Biomédicas de Abel Salazar – UP; 2 Diagnostic Laboratory, Cornell

University, USA; 3 Centro de Estudos de Ciência Animal – ICETA, UP

Sumário O ensaio que utiliza um tubo único marcado da reacção de transcriptase reversa da reacção

de polimerização em cadeia, método quantitativo, baseado no TaqMan, é actualmente utilizado para a detecção de rotina do vírus da Diarreia Viral dos Bovinos (VDVB) no laboratório de Diagnóstico de Veterinária da Universidade de Cornell nos EUA. O TaqMan qRT-PCR foi optimizado para quantificar o vírus da DVB utilizando o sistema de detecção de sequências e sondas marcadas, ABI PRISM 7700.

Num período de 2 meses (Março a Abril de 2002), 2624 amostras foram analisadas, das quais 41 resultaram positivas ao VDVB.

A influência do tempo e condições de armazenamento, na concentração de vírus no plasma foi avaliado pelo estudo de quatro amostras de plasma de animais infectados com o vírus. Os resultados obtidos demonstram que a concentração do vírus na amostra não parece ser influenciada desde a sua entrada até 6 semanas após a sua chegada ao laboratório. Estes resultados indicam que o vírus DVB no plasma possui estabilidade a longo prazo em termos de concentração viral.

Summary A single tube fluorogenic quantitative RT-PCR based TaqMan assay is used for the routine

detection of bovine viral diarrhea virus (BVDV) in the Diagnostic Laboratory of Cornell University. TaqMan qRT-PCR was optimized to quantify BVD virus using the ABI PRISM 7700 sequence detection system and labeled fluorogenic probes.

In a 2 months period (March and April 2002), 2624 samples were tested, from which 41 were positive to BVDV.

The influence of time and storage conditions on plasma BVDV viral load measurements was assessed by testing four plasma samples from BVDV infected animals. Herein, it is demonstrated that results obtained after testing plasma when the sample arrives or deferring the testing until six weeks after the sample arrival, does not appear to influence viral load. These results indicate that BVD virus in plasma possesses a long-term stability in terms of viral load.


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Ruminantes

Caracterização molecular de amostras do vírus da Diarreia Viral dos Bovinos (VDVB) isolados em Portugal [Molecular characterization of Bovine Viral

Diarrhea Virus isolates from Portugal]

Paupério, S.1, R. N. Souto2, E. Silva2, S. Kim3, E. Dubovi3, M. Fevereiro4, G. Thompson1,2

1 Centro de Estudos de Ciência Animal – ICETA, UP; 2 Instituto de Ciências Biomédicas de Abel

Salazar – UP; 3 Diagnostic Laboratory, Cornell University, USA; 4 Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Benfica

Resumo Neste trabalho são apresentados os resultados da caracterização molecular de algumas

amostras do vírus da Diarreia Viral dos Bovinos de gado leiteiro em Portugal. As amostras foram estudadas utilizando a técnica de RT –duplex PCR que utiliza o método de uma fase em tubo único com um controlo interno, o qual foi demonstrado possuir grande sensibilidade na detecção do vírus DVB.

As amostras foram diferenciadas entre os tipos I e II do VDBV, em tipo Ia e Ib dentro do tipo I utilizando o RT-PCR, “nested” PCR e também pela comparação da sequência de nucleótideos de parte da região não traduzida 5´(5´UTR) do genoma viral. A região alvo foi amplificada por transcrição reversa e reacção de polimerização em cadeia (RT-PCR). O DNA foi em seguida purificado a partir do gel de agarose e sequenciado directamente. A sequência de nucleotídeos de 239 pares de bases (pb), originadas da 5´UTR, foram alinhadas e comparadas a posições correspondentes de sequências conhecidas das estirpes de VDVB tipo Ia, Ib e II e ainda dos vírus da Peste Suína Clássica e Doença das Fronteiras. Os resultados identificam as amostras estudadas como pertencentes ao genótipo I.

Summary Results of the molecular characterization of some field isolates of bovine viral diarrhea virus

(BVDV), obtained from dairy cattle in Portugal are presented. Samples have been characterized using a one-step single-tube RT –duplex PCR with an internal control proved to have a high sensitivity in the detection of BVD viruses. The isolates were differentiated between type I and II and within type Ia and Ib using a RT-PCR, nested PCR and by comparative nucleotide sequence analysis of part of the 5' untranslated region (5' UTR) of the viral genome. The target region was amplified by reverse transcription-polymerase chain reaction (RT-PCR), DNA was purified from agarose gel and directly sequenced. The 239 base pair (bp) nucleotide sequences, derived from the 5’ UTR, were aligned and compared to the corresponding positions of published sequences of BVDV type Ia, Ib and II strains and of classical swine fever virus (CSFV) and border disease virus (BDV). After nucleotide sequencing and multiple sequence alignment analysis, all BVD virus field isolates were identified as belonging to the genotype I.


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Ruminantes

Recomendação para a actualização da classificação histopatológica de lesões vesicais em bovinos com hematúria enzoótica bovina

T. Carvalho1, C. Pinto2, C. Peleteiro1

1 Centro Interdisciplinar de Investigação em Sanidade Animal. Faculdade de Medicina Veterinária.

Lisboa; Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Rua Professor Cid dos Santos, Lisboa; 2 Serviço de Desenvolvimento Agrário, Direcção Regional de Desenvolvimento Agrário, S. Miguel, Açores.

As neoplasias da bexiga são a principal causa de rejeição de carcaças de bovino por neoplasia no matadouro de Ponta Delgada, representando cerca de 87,6% das rejeições no passado ano 2000. Estas lesões apresentam-se como a mais séria manifestação da Hematúria Enzoótica Bovina (BEH). Torna-se por isso indispensável dispor de classificação sistemática com base em critérios bem definidos.

Foram colhidas cerca de 572 amostras a partir de 372 bovinos. O material foi fixado em formalina tamponada a 10%. Foram diagnosticadas as seguintes alterações: lesões inflamatórias em 7,8% dos casos, lesões pré-neoplásicas em 8,2%, lesões neoplásicas benignas em 37,5% e malignas em 45,1%. Algumas das lesões neoplásicas, representando cerca de 1,9% dos casos, não se enquadravam dentro das lesões benignas ou malignas, tendo sido diagnosticados como neoplasia benigna do epitélio de transição de baixa malignidade, com base na classificação da OMS (1999) para os tumores de bexiga humanos. As anomalias epiteliais mais frequentes foram a formação de ninhos de Von Brunn, cisitte quística e metaplasia glandular. Os tumores benignos mais frequentemente diagnosticados foram papilomas, adenomas e hemangiomas. Nos tumores malignos foram diagnosticadas todas as variantes do carcinoma do epitélio de transição (papilífero, infiltrativo e in situ), carcinoma de células escamosas, adenocarcinoma, carcinoma anaplásico e hemangiosarcoma. Verificou-se a ocorrência, em simultâneo, de mais de um tipo de lesão na mesma bexiga, neoplásica e não neoplásica.

Em conclusão, é opinião dos autores, que se torna necessário actualizar a actual classificação de neoplasias de bexiga em medicina veterinária, de forma a incluir todas as anomalias epiteliais observadas e mesmo algumas neoplasias até agora não consideradas como o papiloma ou carcinoma invertido e a neoplasia papilífera do epitélio de transição de baixa malignidade.


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Recommendation for the update of the histological classification of urinary bladder lesions in bovine enzootic haematuria

T. Carvalho1, C. Pinto2, C. Peleteiro1

1 Centro Interdisciplinar de Investigação em Sanidade Animal. Faculdade de Medicina Veterinária. Lisboa; Pólo Universitário do Alto da Ajuda, Rua Professor Cid dos Santos, Lisboa; 2 Serviço de

Desenvolvimento Agrário, Direcção Regional de Desenvolvimento Agrário, S. Miguel, Açores.

Urinary bladder tumours are the most frequent cause of rejection for neoplasia in the Ponta Delgada slaughterhouse, standing for 87,6% in the year 2000. These lesions represent the more serious manifestation of Bovine Enzootic Haematuria (BEH). An accurate and generally accepted classification for the various tumour and tumour like situations is therefore crucial.

72 specimens of urinary bladder tumours were collected from 372 bovine. Material was fixed in 10% buffered formalin, embedded in paraffin and stained for routine histopathological diagnosis for tumour classification.

Inflammatory lesions were diagnosed in 7,8% of the specimens; pre-neoplastic lesions, mostly epithelial abnormalities, in 8,2%; benign lesions in 37,5% and malignant ones in 45,1%. Some tumours with specific characteristics, representing 1,9%, did not fit neither in benign nor in malignant lesions. For these, the 1999 WHO histological typing of human urinary bladder tumours, created an intermediate category named papillary transitional cell neoplasm of low malignant potential. In the epithelial abnormalities group the most common were Von Brunn nests, cystitis cystica and glandular metaplasia. In the benign group the following types were diagnosed: papilloma, adenoma, hemangioma, mixed tumours being also very common. In malignant tumours all the variants of the transitional cell carcinoma (papillary, infiltrating and in situ), squamous cell carcinoma, adenocarcinoma, anaplastic carcinoma and haemangiosarcoma were identified. One of the most interesting characteristics of BEH is the presence of multiple different lesions in the same bladder.

In sumary, WHO classification for veterinary medicine, 1974, does not fully cover the whole variety of neoplastic and pre-neoplastic lesions that may be found in cattle. Revised classification should include more clear descriptions of epithelial abnormalities, of all epithelial tumours, including inverted papilloma, and the creation of a low malignant potential pappilary neoplasm category.


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Ruminantes

Lesões neoplásicas observadas durante a inspecção post mortem de bovinos

C. Saraiva*, A. Esteves*, A. Alves*, S. Ribeiro** & C. Martins*

* Universidade de Trás-os-Montes e Alto Douro, apart. 1013, 5001-911 Vila Real Codex

** Inspector Sanitário - Direcção Regional de Agricultura de Entre Douro e Minho

As lesões neoplásicas em bovinos são um tema pouco abordado. Para tal contribui a escassez de dados sobre a sua ocorrência em matadouro relacionada com o facto das lesões neoplásicas poderem passar despercebidas e não se estabelecer muitas vezes um diagnóstico definitivo (laboratorial).

Uma vez que, de acordo com a legislação actual, carcaças e vísceras que apresentem um único tumor podem seguir para consumo após rejeição da parte afectada e, considerando que, agentes carcinogéneos, promotores e lesões histológicas são comuns aos animais e ao Homem, informações relativas às neoplasias animais são de considerar.

De 9049 bovinos inspeccionados, 14 apresentavam lesões de carácter neoplásico, confirmadas por exame histopatológico. Todos os casos foram observados em animais adultos (13 fêmeas e um macho); um detectado em regime normal de abate e os outros detectados em animais submetidos a abate sanitário. Cada animal apresentava apenas um tipo de tumor com a seguinte distribuição: útero (2 leiomiomas); intestino delgado (2 adenocarcinomas, ambos com metastização ganglionar); fígado (2 carcinomas hepatocelulares e 2 colangiocarcinomas); vesícula biliar (1 adenocarcinoma); rim (2 carcinomas e 1 nefroblastoma) e bexiga (2 carcinomas do urotélio).

De acordo com a legislação em vigor (alínea a, artigo 5º, da Portaria nº 971/94 de 29 de Outubro) são consideradas impróprias para consumo humano as carnes que apresentem tumores múltiplos.

De acordo com os presentes dados, apenas 0,15% dos animais inspeccionados apresentavam neoplasias. A possibilidade do Inspector Sanitário reprovar estas carcaças está prevista na legislação, no entanto não existem linhas objectivas de actuação nestes casos. Apesar da aparente pequena incidência destas patologias, seria interessante definir procedimentos mais concisos.


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Neoplastic lesions detected at post mortem examination of cattle

C. Saraiva*, A. Esteves*, A. Alves*, S. Ribeiro** & C. Martins*

* Trás-os-Montes e Alto Douro University, apart. 1013, 5001-911 Vila Real Codex

** Veterinary Inspector- Direcção Regional de Agricultura de Entre Douro e Minho

Neoplastic lesions in cattle is not a frequently discussed subject. This situation can be

partially explained by the lack of data related to its occurrence in slaughterhouse due to the possibility of these lesions can be unnoticed or to the absence of laboratorial confirmation.

Once, according to actual regulation, meat from carcasses presenting only one neoplasm can follow to normal market circuit after ablation of the affected part, and considering that carcinogenic agents, promoting conditions and histological lesions are identical both in animal and men, information concerning animal neoplasms should be considered.

Among 9049 post mortem inspected bovines, 14 presented neoplastic lesions that were submitted to histopathological confirmation. All the cases were observed in adult animals (13 female; 1 male), one was from a normal slaughter and the others from sanitary ones; each animal presented only one neoplasm: uterus (2 leiomyomas); small intestine (2 adenocarcinomas, both with ganglionar metastasis); liver (2 hepatocellular carcinomas, 2 cholangiocellular carcinomas); gallbladder (1 adenocarcinoma); kidney (2 carcinomas, 1 nephroblastoma); urinary bladder (2 transitional cell carcinomas).

According to the applicable legislation (Portaria nº 971/94 of 29/10) carcasses presenting multiple neoplastic lesions should not be considered able for consumption.

According to the present results, only 0,15% of the inspected animals presented neoplasms. The possibility of sanitary inspector to reprove these carcasses is previewed in law, however, there are no objective guidelines to act in these cases. Face to the apparent small incidence of that pathology, it could be interesting define more concise procedures.


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Ruminantes

Papilomatose vulvar em bovinos de Raça Alentejana [Papillomatosis in cattle of Alentejano breed]

Bettencourt, Elisa M. V.*;Barata, Sandra M.S. B.*; Romão, Ricardo, J.C.T.P.**, Lavrador, Catarina, F.T.V.B.*; Martinho, Cristeta***; Calisto, Sílvia***; Soudo, Ana***; Galhoz, Susana***

*Departamento de Sanidade Animal e Vegetal Universidade de Évora; **Departamento de Zootécnia - Universidade de Évora; *** Aluna do 4ª ano da licenciatura em Medicina Veterinária

da Universidade de Évora

Resumo

No presente trabalho descrevem-se dois casos de papilomatose vulvar em bovinos de raça Alentejana. Os animais em questão estavam envolvidos num programa de engorda numa exploração na região de Évora. A papilomatose vulvar é uma neoplasia benigna transmíssivel causada pelo vírus do papiloma bovino. Este vírus afecta geralmente a pele e pode também causar lesões nas mucosas. A forma genital é geralmente associada ao tipo 2 do vírus do papiloma bovino (BPV2) e ocorre mais frequentemente em animais jovens. A sua ocorrência tem sido descrita em várias raças. Na medida em que é uma neoplasia transmíssivel por contacto directo e que o vírus pode persistir no meio ambiente, optou-se por efectuar a sua excisão cirúrgica para confirmação do diagnóstico por exame histopatológico.

Palavras chave: papilomatose, vulva, raça Alentejana

Summary

In this report we describe two cases of vulvar papillomatosis in Portuguese breed of cattle Alentejano. These animals were in raised in a feedlot farm in southern Portugal. The vulvar papillomatosis is a transmissible benign neoplasia induced by the bovine papillomavirus. This virus infects primarily the skin but can also involve the mucosa. The genital form of the disease is generally associated with the bovine papillomavirus type 2 (BPV2) and occurs frequently in young animals. It has been described in various breeds of cattle. As it is a transmissible neoplasia and the virus can also persist in environment, it was decided to excise it and to confirm the diagnostic with histopathologic examination

Key words: papillomatosis, vulva, Alentejano breed


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Ruminantes

Isolamento de Prototheca zopfii como agente etiológico de mastite subclínica em bovinos

Bexiga, R., Cavaco, L., Vilela, C. L.

Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa. R. Prof. Cid dos Santos, Polo Universitário – Alto da Ajuda,

1300-477 Lisboa, Portugal

Prototheca spp. são algas unicelulares, sem clorofila, de distribuição universal, responsáveis por diversas patologias em animais domésticos, podendo igualmente afectar humanos. Em vacas leiteiras, a sua infecção pode provocar mastite clínica ou, mais frequentemente, subclínica, com todas as implicações produtivas consequentes a este tipo de mastite.

Conhecem-se 5 espécies de Prototheca, mas apenas P. zopfii e P. wickerhamii foram descritas como patogénicas. Neste trabalho, descrevemos o isolamento e identificação de Prototheca zopfii em 3 amostras de leite provenientes de 2 vacas com mastite subclínica, comprovada pela realização de Teste Californiano de Mastites. Tanto quanto sabemos, em Portugal apenas foi descrito o isolamento deste microrganismo, como causa de mastite, nos Açores.

No teste de sensibilidade a agentes quimioterápicos por nós realizado, em que foram testados os agentes terapêuticos disponíveis comercialmente em Portugal para uso intra-mamário, os isolados apenas mostraram ser sensíveis à Aminosidina.

Prototheca zopfii é normalmente resistente ao tratamento por antibióticos, mas sensível a alguns antimicóticos, sendo a melhor forma de controlar a afecção, no entanto, a separação e refugo dos animais infectados. A vacaria de origem dos animais, situada no litoral-centro de Portugal, tem boas práticas de maneio e de higiene. O isolamento de P. zopfii associada a casos de mastite subclínica merece particular atenção, por requerer uma abordagem terapêutica e de maneio adequadas.


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Isolation of Prototheca zopfii as aethiological agent of bovine subclinical mastitis

Bexiga, R., Cavaco, L., Vilela, C. L.

Centro de Investigação Interdisciplinar em Sanidade Animal, Faculdade de Medicina Veterinária, Universidade Técnica de Lisboa. R. Prof. Cid dos Santos, Polo Universitário – Alto da Ajuda,

1300-477 Lisboa, Portugal

Prototheca spp. are achloric unicellular algae with worldwide distribuition, responsible for several pathologies in both domestic animals and humans. In dairy cattle, it may cause clinical mastitis or, more frequently, subclinical mastitis, with the impairement of productive parameters associated with this type of mastitis.

There are 5 species of Prototheca, but only Prototheca zopfii and Prototheca wickerhamii have been described as pathogenic. In the present work, isolation and identification Prototheca zopfii is described in 3 milk samples from 2 cows with subclinical mastitis, detected by Californian Mastitis Test. As far as we are aware, the isolation of this microrganism as cause of mastitis as only been described before in Portugal in Azores.

In the sensitivity test for chemotherapeutic agents, which was performed with the commercially available drugs for intramammary use in Portugal, isolates were only sensitive to Aminosidine.

Prototheca zopfii is usually resistant to treatment with antibiotics, but sensitive to treatment with a few antimycotic agents, but the most efficient way of infection control is to segregate and cull infected animals. The dairy farm from where these infected animals originated, situated on the west coast of Portugal, has good husbandry and hygiene practices. The isolation of P. zopfii associated with subclinical mastitis deserves particular attention, as adequate therapeutic and husbandry measures are required.


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Ruminantes

Pitomicotoxicose (eczema facial) em ruminantes dos Açores

C Pinto1, V M Santos 2, J Dinis3, MC Peleteiro4, B L Smith5

1 Serviço de Desenvolvimento Agrário de São Miguel, 9504-541 Ponta Delgada, Açores;

2 Laboratório Regional de Veterinária, Angra do Heroísmo, Açores; 3 União de Cooperativas de Lacticínios da Ilha Terceira, Açores; 4 Departamento de Morfologia e Clínica, Faculdade de

Medicina Veterinária, Pólo Universitário do Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa; 5 Toxinology & Food Safety Research Group, AgResearch, Ruakura Research Centre, Hamilton, New Zealand.

Foram identificados nos Açores, diversos surtos de pitomicotoxicose (eczema facial), um tipo de fotossensibilidade hepatogénica provocada pela micotoxina esporidesmina, que afecta ruminantes em várias regiões do globo com clima temperado.

Os surtos observados da doença ocorreram na sequência de períodos quentes e húmidos (>16º de temperatura mínima e humidade relativa > 90%) particularmente no final do Verão e início do Outono. Os sinais clínicos incluíram quebras na produção de leite, perda de peso, fotossensibilidade e suas sequelas, incluindo a morte. No soro registaram-se valores elevados de gama glutamil - transferase. As observações post-mortem revelaram icterícia e lesões hepáticas graves, incluindo hiperplasia dos ductos biliares e fibrose.

Na erva da pastagem foram identificados esporos característicos do fungo saprófita Pithomyces chartarum, tendo sido possível obter contagens superiores a 200 000 esporos por grama de erva.

Registaram-se 23 surtos no período compreendido entre Setembro de 1999 e Outubro de 2001, afectando uma média de 11,4% de bovinos (com um máximo de 40% de morbilidade e 16,7% de mortalidade), tendo-se ainda registado mais de 20% de casos mortais num rebanho de 240 ovinos. Os surtos observados foram associados a pastagens viradas a Sul, mais quentes e a pastoreio intensivo.

Estão a ser iniciadas medidas de controlo pelo reconhecimento das áreas e dos períodos de risco, através de observações meteorológicas e contagem de esporos, promovendo as necessárias alterações do maneio alimentar durante estes períodos. Nas explorações onde o risco é mais elevado foi iniciada a profilaxia com bolos de zinco.


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Pithomycotoxicosis (facial eczema) of ruminants, in the Azores, Portugal

C. Pinto 1, V.M. Santos 2, J. Dinis 3, M.C. Peleteiro 4, B.L. Smith 5

1 Serviço de Desenvolvimento Agrário de São Miguel, 9504-541 Ponta Delgada, Açores;

2 Laboratório Regional de Veterinária, Angra do Heroísmo, Açores; 3 União de Cooperativas de Lacticínios da Ilha Terceira, Açores; 4 Departamento de Morfologia e Clínica, Faculdade de

Medicina Veterinária, Pólo Universitário do Alto da Ajuda, 1300-477 Lisboa; 5 Toxinology & Food Safety Research Group, AgResearch, Ruakura Research Centre, Hamilton, New Zealand.

Pithomycotoxicosis (facial eczema), an hepatogenous photosensitization caused by the

mycotoxin, sporidesmin which afflicts ruminants in many warm temperature regions of the world, has been recognised in the Azores Islands of Portugal.

The disease outbreaks were seen following warm humid periods (>16ºC minimum temperature; >90% relative humidity) during late summer and autumn. Clinical signs included drops in milk production, weight loss, photosensitization and its sequellae including death. High levels of gamma glutamyl- transferase have been found in serum. Post-mortem examination has shown icterus and severe liver disease, including biliary hyperplasia and fibrosis. Other causes of hepatopathy have been excluded.

The characteristic spores of the toxigenic saprophytic fungus, Pithomyces chartarum have been recognised on grass. Pasture counts of over than 200 000 per gram of fresh pasture have been obtained.

Both cattle and sheep have been affected. 23 outbreaks were recorded between 1999 and 2001, affecting an average of 11,4% of cattle (up to 40% of clinicals and up to 16,7% of deaths) and more than 20% of deaths in one flock of 240 sheep. The outbreaks have been associated mainly with the grazing of south facing (warmer) pastures and close grazing of these pastures.

Control methods include the recognition of high-risk pastures and periods (through weather observation and spore counting) and animal management during these periods. On farms of greatest risk, prophylaxis using a zinc bolus is being initiated.


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Ruminantes

Besnoitiose bovina, aspectos da sua epidemiologia actual em Portugal e

perspectivas

Cortes, H.*a, Nóbrega, F.b, Vidal, R.c Ferreira, M.L.F.d & Caeiro, V.a

a Laboratório de Parasitologia. Polo da Mitra. Universidade de Évora; b Estação Florestal

Nacional; c Faculdade de Farmácia (Laboratório de Engenharia Genética), Universidade de Lisboa; d Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa. Universidade Técnica de Lisboa.

* Autor correspondente: e-mail, [email protected]

A besnoitiose bovina, patologia de etiologia parasitária causada pelo protozoário Besnoitia besnoiti (Marotel, 1912) que, a partir de meados da década de 80, foi novamente detectada em Portugal, constitui hoje em dia um problema para um número cada vez maior de explorações pecuárias localizadas a Sul do Tejo. É responsável por doença crónica, de elevada morbilidade em muitos bovinos embora, por vezes, conduza também à morte num número significativo dos animais infectados por B. besnoiti. Nos machos, esta patologia desencadeia esterilidade total o que se traduz em prejuízos avultados para as explorações, tanto mais agravados não só pela ocorrência de animais assintomáticos, com besnoitiose, como também pela inexistência de quaisquer métodos eficazes de profilaxia ou de tratamento desta parasitose. Disto resulta a eutanásia dos animais visivelmente atingidos e o consequente acréscimo da importância da besnoitiose bovina.

Assim, tendo em vista, por um lado, o estabelecimento de um método eficaz, específico e de elevada sensibilidade para diagnóstico precoce desta doença e, por outro, a determinação da amplitude epidemiológica da besnoitiose bovina em Portugal, foram ensaiados fragmentos iniciadores de DNA (“primers”) eventualmente úteis para a detecção de B besnoiti.

Os resultados encontrados demonstraram a elevada especificidade dos “primers” utilizados, permitindo a amplificação por PCR de regiões genómicas de B. besnoiti mas não as de protozoários filogeneticamente muito próximos. Estes resultados são brevemente discutidos, nomeadamente quanto à aplicação deste método de dianóstico no estudo epidemiológico de B. Besnoiti.


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Bovine besnoitiosis, its epidemiological aspects in Portugal and perspectives

Cortes, H.*a, Nóbrega, F.b, Vidal, R.c Ferreira, M.L.F.d & Caeiro, V.a

a Laboratório de Parasitologia. Polo da Mitra. Universidade de Évora; b Estação Florestal

Nacional; c Faculdade de Farmácia (Laboratório de Engenharia Genética), Universidade de Lisboa; d Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa. Universidade Técnica de Lisboa.

* Autor correspondente: e-mail, [email protected]

Bovine besnoitiosis is a parasitic disease which etiological agent is the protozoan Besnoitia besnoiti (Marotel, 1912) that, since after the middle of eighty decade, has been again detected in Portugal. Nowadays it becomes a problem for a higher number of herds located in at the south of Tagus. It causes a chronic disease with high morbility and high mortality. In males, besnoitiosis leads to a full sterility, being so responsible for considerable losses to the farms. In infected herd basis there is a considerable number of ansymptomatc infected animals, and there are not known any treatments or prophylactic measures for this parasitosis. As a consequence, the ill animals are euthanised, which also increases the importance of this disease.

Therefore, in order to establish, on the one hand, an efficient, specific and high sensibility method for the precocious diagnosis of the bovine besnoitiosis and, on the other hand, to determine its epidemiological amplitude in Portugal, DNA primers eventually useful to the B. besnoiti detection have been used.

The results have demonstrated an high specificity of those primers, allowing the PCR amplification of B. besnoiti genomic regions but not of philogenetically related protozoan. These results are briefly discussed, mainly about the application of this diagnostic technique on the epidemiological study of B. besnoiti.


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Ruminantes

Vacina de DNA experimental contra o vírus Maedi-Visna dos ovinos

A.M. Henriques1,2, M. Fevereiro2, D.M.F. Prazeres1, G.A. Monteiro1

1Centro de Engenharia Biológica e Química, Instituto Superior Técnico, Av. Rovisco Pais,

1049-001 Lisboa, Portugal; 2Laboratório Nacional de Investigação Veterinária, Estrada de Benfica 701, 1549-011 Lisboa, Portugal

O vírus Maedi-Visna (MVV) dos ovinos é um lentivirus, originalmente isolado na Islândia, que provoca pneumonia (Maedi) e paralisia (Visna) nas ovelhas.

Em Portugal, o número de animais infectados foi 34.4% em 1995, enquanto a prevalência da infecção nos rebanhos quase alcançou os 82%. Deste modo, torna-se urgente controlar as infecções causadas por este vírus. As vacinas convencionais falharam na indução de uma resposta imune, pelo que se propõe o desenvolvimento de uma vacina de DNA.

O genoma do vírus MVV é constituído por três genes principais, gag, pol, e env, que codificam as proteínas estruturais do vírus. As proteínas do núcleo p14, p24, e p11 são codificadas pelo gene gag, enquanto pol codifica a polimerase do vírus, e env codifica as glicoproteínas do envelope gp41 (TM) e gp135 (SU).

A vacina de DNA foi construída sob o controlo do promotor CMV, utilizando os plasmídeos pVAX1 and pVAX1lacZ (Invitrogen) como vectores, e dois isolados de MVV nacionais, P1OLV e 3951. A sequência nucleotídica do gene clonado foi confirmada por sequenciação automática.

Para testar a expressão da proteína in vitro, foram transfectadas células CHO, tendo os plasmídeos contendo o gene lacZ fundido sido utilizados como controle. Foi detectada actividade da β-Galactosidase nas células transfectadas, o que indica que todos os plasmídeos que contêm o gene clonado a montante do gene lacZ foram correctamente construídos.

As experiências in vivo foram efectuadas inoculando ratinhos BALB/c com 50 µg de diversos plasmídeos por diversas vias de administração. A resposta imune foi monitorizada por ELISA.


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DNA vaccine candidate against Maedi-Visna virus

A.M. Henriques1,2, M. Fevereiro2, D.M.F. Prazeres1, G.A. Monteiro1

1Centro de Engenharia Biológica e Química, Instituto Superior Técnico, Av. Rovisco Pais, 1049-001 Lisboa, Portugal; 2Laboratório Nacional de Investigação Veterinária – Deptº de

Virologia, Estrada de Benfica 701, 1549-011 Lisboa, Portugal

Maedi-Visna is a chronic, slowly progressive disease of sheep caused by a Lentivirus. The virus was originally isolated in Iceland and causes pneumonia (Maedi), paralysis and wasting (Visna) in sheep.

In Portugal, the number of infected animals was 34.4% in 1995, while the prevalence of the infection in the flocks almost reached 82%. Therefore, measures aiming at the control of Maedi-Visna virus (MVV) infection are necessary. Since conventional vaccines have failed in inducing an effective immune response in sheep, we proposed to develop a DNA vaccine against MVV.

The genome of MVV has three major genes, gag, pol, and env, which encode the virus structural proteins. The core proteins p14, p24, and p11 are encoded by the gag gene, while pol encodes the virus polymerase, and env encodes the envelope glycoproteins gp41 (TM) and gp135 (SU).

The DNA vaccine was constructed under the control of CMV promoter, using pVAX1 and pVAX1lacZ (Invitrogen) as vectors, and two Portuguese MVV isolates, P1OLV and 3951. The nucleotide sequence of the insert was confirmed by automatic sequencing.

To assess the plasmid expression in vitro, CHO cells were transfected and plasmids containing the insert and lacZ fused gene were used as controls. We obtained transfected cells expressing β-Gal activity thus suggesting that all plasmids containing the insert upstream of lacZ gene were correctly constructed.

The in vivo experiments were carried out by inoculating BALB/c mice with 50 µg of several plasmids by different routes. The mice immune response was monitored by ELISA.


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Ruminantes

Sequência genómica integral do primeiro lentivírus de ovino isolado em Portugal [Complete genome sequence of the first Portuguese isolate of ovine

lentivirus]

Sílvia Barros e Miguel Fevereiro

Laboratório Nacional de InvestigaçãoVeterinária - Deptº de Virologia, Estrada de Benfica 701 – 1549 Lisboa

Resumo O vírus Maedi Visna (MVV) é um Lentivirus responsável por infecções persistentes e de

evolução arrastada nos ovinos. Após longo período de incubação, os animais infectados apresentam encefalite (Visna) e pneumonia progressiva (Maedi). O genoma de alguns isolados Europeus e Norte Americanos apresentam maior identidade com o lentivírus dos caprinos (CAEV) do que com o MVV. Este facto sugere que as infecções cruzadas entre as duas espécies é fenómeno comum. O reduzido número de vírus isolados cujo o genoma foi totalmente sequenciado tem sido um obstáculo á compreensão da diversidade dos lentivírus em cada uma destas espécies. Actualmente, apenas quatro sequências integrais do MVV estão publicadas; dois vírus de origem Islandesa (K1514 e KV1772), um Inglês (EV-1) e um Sul Africano (SA-OMVV). Estudos publicados sobre a prevalência da doença em Portugal indicam que a infecção está espalhada por todo o país e que a sua prevalência é elevada. O genoma do primeiro lentivírus de ovino isolado em Portugual designado P1OLV, foi integralmente clonado e sequenciado. O vírus foi isolado a partir de culturas de células de pulmão e do plexo coróide de um ovino seropositivo. O genoma do P1OLV tem 9189 pb e apresenta as ORFs gag, pol, vif, tat, rev e env. O genoma do P1OLV apresenta uma identidade de 79,9%, 80,1%, 78,9% e 69,9% respectivamente com as sequências publicadas do K1514, SA-OMVV, EV-1 e do CAEV. A análise filogenética, baseada nos alinhamentos das sequências da LTR e dos genes pol e env revelou que o P1OLV se agrupa claramente com os isolados MVV.

Summary Maedi Visna virus (MVV) is a Lentivirus responsible for a persistent infection and slow

progressive disease of sheep. Infected animals develop an inflammatory, degenerative neurological disease (Visna) and progressive pneumonia (Maedi) after a long incubation period. Lentivirus infections are widespread in sheep and goats. Some European and North American ovine lentivirus isolates show a higher sequence identity in the env, gag and pol genes to Caprine Arthritis Encephalitis virus (CAEV) than to MVV suggesting that cross-species transmissions of MVV and CAEV between domestic goats and sheep may be a common event. The relatively small number of virus isolates from each species that have been fully sequenced to date is the major obstacle to the understanding of the intra-species diversity in each lineage. To present only four genomic MVV sequences are published; two Icelandic strains (K1514 and KV1772), one British isolate (EV-1) and the South African strain SA-OMVV. In Portugal, the prevalence of MVV infection is high. In the present study, we report the complete nucleotide sequence of the first Portuguese ovine lentivirus, isolated from the lung and SCP cells obtained from a MVV seropositive sheep. The genome of P1OLV is 9189 bases long. The overall nucleotide sequence identities between P1OLV and strains K1514, SA-OMVV, EV1 and CAEV are 79.9%, 80.1%, 78.9%, and 69,9% respectively. The phylogenetic trees inferred using the LTR and genes pol and env sequences revealed that P1OLV is closely related to the Icelandic ovine lentivirus prototype.


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Ruminantes

Carcinoma de células escamosas com localização ocular em ovinos na região do Alto Alentejo [Squamous cell carcinoma with ocular localization in sheep, in

Alto Alentejo -Portugal]

Barata, Sandra M.S. B. *; Bettencourt, E. M. V.* , Romão, Ricardo J.T.C.P.**

*Departamento de Sanidade Animal e Vegetal - Universidade de Évora; **Departamento de Zootécnia - Universidade de Évora

Resumo

No presente trabalho descrevem-se dois casos de carcinoma das células escamosas com localização ocular em ovinos. Os tumores foram identificados em animais de refugo de uma exploração na região do Alto Alentejo.

Os carcinomas das células escamosas do olho têm origem no epitélio da conjuntiva do limbus e pálpebras, incluindo a terceira pálpebra. Estão descritos predominantemente em bovinos, equinos, felinos e caninos, por esta ordem de frequência, sendo a sua ocorrência em ovinos muito rara.

No exame macroscópico observaram-se, em ambos os animais, na região ocular, massas tumorais globosas, com aproximadamente cinco centímetros de diâmetro maior, bem delimitadas, ulceradas e hemorrágicas. O exame histopatológico revelou a presença de cordões e placas de células neoplásicas epiteliais, com formação de lamelas concêntricas de queratina o que lhe confere um elevado grau de diferenciação. Observou-se também a existência de infiltração celular inflamatória, predominatemente constituida por neutrófilos, e ulceração da periferia da lesão.

Palavras chave: neoplasia, carcinoma, carcinoma escamoso, olho, ovino

Summary In this paper we report two cases of an ocular squamous cell carcinoma in sheep. This type

of tumour arises from the conjunctiva epithelium of the limbus, eyelids and third eyelid. It occurred primarily in cattle, horses, cats and dogs, in this order of frequency and in sheep it has been rarely described.

In both cases, at macroscopic examination, we observed in the ocular region, a tumoral and globose mass, with a diameter of five centimetres, with defined limits, ulcerated and hemorrhagic. The histopathologic examination showed cords and islands of invasive epithelial cells, associated with the formation of concentric lamellae of keratin, which is characteristic of a well-differentiated squamous cell carcinoma. It was also present an extensive infiltration of inflammatory cells, mainly neutrophils, and periferic ulceration.

Key words: neoplasia, carcinoma, squamous carcinoma, eye, sheep.


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Ruminantes

Isolamento dos primeiros vírus nacionais da Artrite Encefalite Caprina (CAEV) [Isolation of the first Portuguese Caprine Arthritis Encephalitis Viruses

(CAEV)]

Miguel Fevereiro, Fernanda Ramos, Sílvia Barros, Teresa Fagulha e Raquel Mengas

Laboratório Nacional de Investigação Veterinária – Deptº de Virologia, Estrada de Benfica 701 – 1549 Lisboa

Resumo O CAEV, é um retrovírus exógeno, não oncogénico do género Lentivirus. A transmissão do

vírus faz-se essencialmente através do colostro e do leite. A manifestação da doença varia consoante a idade do animal sendo as artrites mais comuns nos adultos e as encefalites nos jovens. Nas cabras, são também frequentes as mastitis crónicas. Os prejuízos económicos causados pelo CAEV, particularmente na indústria de laticíneos, levou alguns países europeus (Suíça, França, Holanda, Dinamarca, Irlanda, Bélgica e Reino Unido) a implementarem planos de controlo e erradicação da doença e a restringir as importacões a animais certificadamente livres de CAEV. Em Portugal, a doença é ainda pouco conhecida. Apesar dos relatos de alguns surtos de artrite e mastites em caprinos nacionais, o facto é que o diagnóstico clínico e anatomohistopatológico, fundamentado com serologia positiva e isolamento do vírus está ainda por fazer. O número aproximado de caprinos em Portugal está estimado em 800 000. A utilização de um teste ELISA, desenvolvido pelo nosso grupo, revelou uma elevada percentagem (27 %) de animais seropositivos ao CAEV. Em cabradas com problemas de artrite e mastites, foi possível isolar e dar início á caracterização genómica de oito CAEV nacionais. Os vírus foram propagados numa linha celular desenvolvida a partir da bainha sinovial da articulação do carpo de caprinos livres de CAEV. A presença do vírus nestas culturas foi detectada por observação do efeito citopatogénico, imunocitoquímica, microscopia electrónica e por sequenciação de fragmentos genómicos amplificados por RT-PCR.

Summary Caprine arthritis encephalitis virus (CAEV) is an exogenous, nononcogenic retrovirus of the

genus Lentivirus. CAEV is normally transmitted from dam to kid in colostrum and milk. The disease expression is age dependent with neurological disease occurring mainly in young animals and arthritis occurring predominantly in adults. CAEV infection is also responsible for chronic mastitis. Because of the economic impact of CAEV on the goat dairy industry, many countries are imposing regulations that allow import of only certified CAEV-free goats. In addition, European countries including Switzerland, France, Holland, Denmark, Ireland, Belgium and United Kingdom developed control and eradication programs for CAEV. In Portugal the disease is still poorly known. There have been several personal reports of arthritis and mastitis in goats resistant to antibiotics treatment. However, a positive diagnosis of the disease based on clinical signs and histopathological description of the lesions, together with the detection of specific antibodies against CAEV and virus isolation has yet to be done. The number of goats in Portugal is estimated at about 800,000. A serological survey using an ELISA developed by our group revealed a high percentage (27 %) of CAEV seropositive goats. Eight different national CAEV have been isolated from goats showing arthritis and mastitis. The isolates were propagated in goat synovial membrane cells. The virus was detected in the cell cultures by the observation of cytophatogenic effects, immunocytochemistry, electron microscopy and by sequencing fragments of viral genome amplified by RT-PCR.


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Ruminantes

Respostas de adaptação à infecção por Haemonchus spp em caprinos das ilhas Terceira (Açores) e Santiago (Cabo Verde)

Lucena, S. (1); Ferreira, M.L. (2); Pinho, M. (2); Afonso-Roque, M.M. (3).

(1) – Universidade de Évora; (2) - CIISA/Faculdade de Medicina Veterinária de Lisboa; (3) -Instituto de Investigação Científica Tropical (Centro de Veterinária e Zootecnia).

No presente trabalho pretende-se identificar algumas respostas de adaptação ao parasitismo por Haemonchus spp numa amostragem de populações locais de caprinos naturalmente infectados, abatidos para consumo público entre 1998/2000, nas Ilhas Terceira (Açores) e Santiago (Cabo Verde). Dispusemos de um total de 152 animais, 113 da Terceira e 39 de Santiago.

A escolha de marcadores fenotípicos dos hospedeiros respeitou a parâmetros hemáticos, histopatológicos e parasitológicos: ovos por grama de fezes (OPG) e carga parasitária. Estes parâmetros foram correlacionados entre si, segundo métodos estatísticos de análise multivariada.

Nos caprinos das duas Ilhas, os valores de OPG foram da responsabilidade do género Haemonchus spp.

Os monócitos e os eosinófilos sanguíneos apresentaram uma correlação positiva com os parâmetros parasitológicos. Relativamente aos monócitos, esta correlação parece sugerir associação à infiltração por macrófagos na mucosa abomasal. A infiltração por células mononucleadas assim como os mecanismos de sobrevivência do parasita que se associaram às lesões do epitélio gastrointestinal (hiperplasia e metaplasia mucípara) foram mais evidentes nos caprinos da Terceira.

Palavras-chave: Haemonchus, caprinos, Açores, Cabo Verde, monócitos, CMN.

Financiamentos: Instituto de Cooperação Científica e Tecnológica Internacional (ICCTI) – Programa de Formação Avançada para Estudos Africanos; -“Mecanismos genéticos de adaptação parasita/hospedeiro em populações locais de caprinos da Ilha Terceira (Açores) – Dinâmica de infecção e resistência anti-helmíntica”. Praxis XXI 3/3.2/CA/1985/95


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Adaptation responses to Haemonchus spp infection in goats from Terceira (Azores) and Santiago (Cape Verde) Islands.

Lucena, S. (1); Ferreira, M.L. (2); Pinho, M. (2); Afonso-Roque, M.M. (3).

(1) – Évora University; (2) - CIISA/Veterinary Medicine Faculty of Lisbon; (3) - CVZ/ Institute of Tropical Scientific Research.

The main objective of the present research was to identify some responses to Haemonchus spp adaptation on naturally infected goats from Terceira (Azores) and Santiago (Cape Verde) Islands, slaughtered to public consume between 1998/2000. One hundred fifty two animals were studied: 113 from Terceira and 39 from Santiago Islands.

The host phenotypic markers included haematological, histopathological and parasitological parameters: faecal eggs counts (FEC) and parasite burden. These parameters were inter-correlated, according to statistical methods of multivariate analysis.

The results confirm a positive correlation between FEC and Haemonchus spp burden in goats from both Islands.

The monocytic and eosinophilic responses in peripheral blood had a positive correlation with the parasitological parameters. The increased number of blood monocytes suggests an association with the abomasal mucosa infiltration by macrophages. The mononuclear cells infiltration and the parasite survival mechanisms that were associated with the gastrointestinal mucosa lesions (mucous cells hyperplasia and parietals cells losses) were more evident on goats from Terceira Island.

Key Words: Haemonchus, goats, Azores, Cape Verde, monocytes, CMN

Financements: The Institute for International Technological and Scientific Co-operation – Program of Advanced Formation for African Studies; “Genetics mechanisms of parasite/host adaptation in local populations of goats from Terceira (Azores) Island – Infection dynamics and anti-helminths resistance”; Praxis XXI 3/3.2/CA/1985/95.


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Ruminantes

Um caso de síndrome de persistência dos derivados dos ductos de Müller num cabrito (Capra hircus)

J.F. Silva e J.J. Correia

SEPAT, DEMOC, Faculdade de Medicina Veterinária (Universidade Técnica de Lisboa), Rua Prof. Cid dos Santos (Polo Universitário - Alto da Ajuda), 1300-477 Lisboa, Portugal.

O síndrome de persistência dos derivados dos ductos de Müller (SPDM) é uma variedade de pseudo-hermafroditismo masculino caracterizado pela coexistência dos derivados dos ductos mesonéfricos e paramesonéfricos num indivíduo com sexo gonádico e cromossómico masculinos. Inicialmente descrito no homem, foi também referido no cão. Haibel e Rojko (1990) observaram um caso de SPDM num cabrito de 10 meses.

O presente caso refere-se ao cadáver dum cabrito de 9 meses, que, à necrópsia, revelou hidrocaquexia, hidrotórax (95 mL), hidroperitoneu (115 mL), presença de grande quantidade de grãos de aveia no rúmen e retículo.

No exame do aparelho sexual, os testículos ocupavam posição abdominal e não apresentavam espermatogénese. Os respectivos epidídimos eram normais. Perto de cada testículo, notava-se uma pequena massa ovóide, correspondente à trompa uterina, enrolada sobre si própria. Cada trompa contactava com um corno uterino, inicialmente de diâmetro normal e dilatando-se caudalmente. Os cornos uterinos juntavam-se num corpo uterino, que se continuava caudalmente pela porção cranial da vagina, que se terminava próximo da uretra em fundo de saco. Todas estas estruturas apresentavam-se distendidas por 21 mL de muco translúcido (mucómetra). Os ductos deferentes estavam inseridos na parede dos derivados dos ductos paramesonéfricos, desembocando na uretra. Não se detectaram vesículas seminais, mas confirmou-se microscopicamente a presença de próstata. O pénis e forro estavam normalmente desenvolvidos, apesar de não ter sido possível observar-se a flexura sigmoideia.

Os autores pensam que este é o segundo caso descrito de SPDM em caprinos a nível mundial.


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A case of persistent müllerian duct syndrome in a caprine (Capra hircus)

J.F. Silva e J.J. Correia

SEPAT, DEMOC, Faculdade de Medicina Veterinária - UTL, Rua Prof. Cid dos Santos (Polo Universitário - Alto da Ajuda), 1300-477 Lisboa, Portugal

The persistent müllerian duct syndrome (PMDS) is a variety of male pseudohermaphroditism characterized by the simultaneous presence of derivatives from the mesonephric and paramesonephric ducts in a gonadally and cytogenetically male. It was first described in man, later in the dog. Haibel and Rojko (1990) observed a case of PMDS in a ten months old kid.

In this study we report a case of PMDS in a nine months old kid, which necropsy showed generalized serous atrophy of fat, hydrothorax (95 mL), hydroperitoneum (115 mL) and big amounts of oat grain in the rumen and reticulum.

The testes were intra-abdominal with no spermatogenesis. Their epididymides were normal. Near each testis, there was a little ovoid mass that corresponded, at the microscopic examination, to an extremely coiled uterine tube. This tube contacted with a uterine horn, which proximal segment was normal, contrarily to the distal segment, which was dilated. There were also a corpus uteri and the cranial segment of a vagina, which were also distended. The uterovaginal content consisted of 21 mL of mucous liquid (mucometra). The vagina ended in a cul-de-sac, not contacting with the urethra. The deferent ducts were inserted in the müllerian ducts wall and were connected with the urethra. The seminal vesicles were not detected, but the presence of the prostate was confirmed microscopically. The penis and sheath were almost normally developed, though there was no sigmoid flexure.

The authors think that this is the second described case of PMDS.

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COMUNICAÇÕES LIVRES - fmv.ulisboa.pt · Um dos autores desenvolveu um índice de capacidade do processo (CpK) que permite avaliar a consistência da qualidade do leite produzido