29/06/2015

1

Doença de Chagas: diagnóstico, epidemiologia e CQ

42º Congresso Brasileiro de Análises Clínicas

21 - 24 de Junho de 2015 – Rio de Janeiro

Amadeo Sáez-Alquezar

Doença de ChagasDoença de ChagasDoença de ChagasDoença de ChagasAmerican American American American TrypanosomiasisTrypanosomiasisTrypanosomiasisTrypanosomiasis

� Carlos Chagas Carlos Chagas Carlos Chagas Carlos Chagas (1909)(1909)(1909)(1909)

� TrypanosomaTrypanosomaTrypanosomaTrypanosoma cruzicruzicruzicruzi

29/06/2015

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Mecanismos de transmissão do T.cruzi

Evolução da Doença de Chagas na Evolução da Doença de Chagas na Evolução da Doença de Chagas na Evolução da Doença de Chagas na América LatinaAmérica LatinaAmérica LatinaAmérica Latina

Dados epidemiológicos 1990 2000 2006 / 2007

Mortes p/ ano > 45.000 21.000 12.500

Pessoas infectadas 30 millões 18 millões 15 millões

Incidência anual 700.000 200.000 41.200

População em risco 100 millões 40 millões 28 millões

Transmissão congênita 14.385 / ano

•Dias JCP, 2008 Salvatella R, PAHO, 2007 TDR - PAHO - WHO

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Doença de Chagas na América Latina - atualização epidemiológica com estimativas de 2010

População 543.877.115

No estimado de pessoas infectadas pelo T.cruzi 5.742.167

No anual de novos casos por transmissão vetorial 29.925

Mulheres (15 – 44 anos) infectadas pelo T.cruzi 1.124.930

No anual de casos de infecção congênita 8.668

Incidência vetorial/congênita 0,0050 / 0,089

Prevalência em doadores de sangue 0,931

População em risco para infecção pelo T.cruzi 70.199.360

Weekly epidemiological record. No.6, 2015, 90, 33-40

População infectada pelo T. cruzi

Países EndêmicosN=21

Migração

RISCO DE TRANSMISSÃO POR TRANSFUSÃO SANGUINEATRANSPLANTE DE ÓRGÃOS E TRANSMISSÃO CONGÊNITAEM PAÍSES NÃO ENDÊMICOS.

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Fases Clínicas e Formas da Doença de ChagasFases Clínicas e Formas da Doença de ChagasFases Clínicas e Formas da Doença de ChagasFases Clínicas e Formas da Doença de Chagas

Fase Aguda• Forma Assintomática• Forma Moderada• Forma Severa

Fase Crônica • Forma Indeterminada

• Forma Cardíaca • Forma Digestiva• Forma Cardíaca e digestiva• Forma Neuroautonômica

Forma Congênita• Aborto

• Prematuros• Lesões Orgânicas

Formas em imunosuprimidosParasitemia evidente

Lesões do sistema Nervoso centralMiocardite difusa e meningoencefalite

Períodos de incubaçãoTransmissão vetorial: 4 – 15 dias

Transmissão transfusional: 30 – 40 dias...

Transmissão oral: 3 – 22 dias

Testes para o diagnóstico da infecção por T. cruzi

1. Testes parasitológicos

� DiretosGota espessa, esfregaço sanguíneo, técnicas

do Micro hematócrito e de Strout.

� IndiretosXenodiagnóstico, Hemocultura, PCR

2. Testes sorológicos

Dependem da presençade parasitas no sangue

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Testes parasitológicosDependem da presença de parasitas circulantes

• Diretos

– Quando se suspeita de fase aguda, independentemente do

mecanismo de transmissão.

– Requerem profissionais bem treinados.

• Indiretos (Xenodiagnóstico, Hemocultura e PCR)

– Valor real quando o resultado é positivo

– Limitações técnicas

– PCR: alta sensibilidade – Detecção de infecção no Chagas Congênito

TécnicasResultados Positivos na forma crônica da infecção

por T.cruzi (%)

Xenodiagnóstico 9,0 – 87,5

Hemocultura 0 – 94

PCR 3,8 - 100

Testes Parasitológicos Indiretos

Portela-Lindoso AABP and Shikanay-Yasuda MA, Rev Saúde Pública 37(1): 107-115, 2003.

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Técnica do Micro hematócrito (MHT)

Freilij H, et al. J.Clin. Microbiol. 18(2):327-30 (1983)

Crianças menores que 7 meses

Critério:Identificar o parasita

Teste parasitológico

direto Positivo

PCR x MH>90% das mães infectadas: 10 parasitas / ml

76% dos recém nascidos: 1.000 parasitas / ml

PCR: até 2 parasitas / ml

MHT: ≥ 40 parasitas / ml

Capacidade de detecção

•Virreira H et al. (2007) Am. J. Trop. Med. Hyg 77(1):102-106

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Aplicação do teste de PCR

Mesmo que o teste de PCR seja a mais sensívelpara a detecção precoce em recém nascidos infectados pelo T.cruzi, não se recomenda para uso nos sistemas públicos de saúde de Países Endêmicos por não estar disponível no cenário do atendimento primário .

O teste de PCR ficaria reservado para uso em

Centros Especializados

Russomando et al, (2010) Expert. Rev. Mol. Diagn. 10(6)

Sorologia para identificar a infecção por T.cruzi

Testes convencionaiso ELISA, HAI, IFI

Testes convencionais modificadoso ELISA

Antígenos recombinantes / PS

o CLIAAntígenos recombinantes

Testes não-convencionaiso Testes rápidos

Testes complementareso RIPA, WB, IB (TESA Blot)

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Testes Sorológicos: Importância para o Diagnóstico da Infecção por T.cruzi

• Para Triagem

– Doadores de sangue, órgãos e tecidos

– Prevenção do Chagas Congênito

• Identificar as mães infectadas

• Para diagnóstico

• Para seguimento pós-tratamento (?)

• Para confirmação de resultados

Diagnóstico sorológico – anti-T.cruzi

– Realizar dois testes• ELISA

• HAI

• IFI

• Não convencionais

• Realizar um teste– ELISA* de alta sensibilidade

Seguir rigorosamente os procedimentos de Controle de Qualidade Externo e Interno

Recomendações da OMS Recomendações da OMS Recomendações da OMS Recomendações da OMS ---- 2002200220022002

Laboratório clínico Banco de sangue

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WHO: 2 testes, 1991

WHO: 1 teste, 2002

Argentina: 2 testes, 2004

Brasil: Até 2002, 2 testes

Brasil: Desde 2003, 1 teste ELISA/CLIA

Costa Rica: 2005-2010, 2

testes (rec + lis)

Costa Rica:Desde 2011,

1 teste

Espanha: 2008, 2 testes. Agora

1 teste

USA: 2007,

1 teste (lis)

França: 2007, 2 testes (rec + lis)

Agora 1 teste

UK: 2006, 1 teste rec

Estratégias para a Triagem Sorológica em Doadores de Sangue para anti-T.cruzi

Testes ou associação de testes usados na triagem sorológica p/ anti-T.cruzi em doadores de sangue: Brasil (2002-2008)

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� Testes convencionais

Hemaglutinação indireta (HAI)

Imunofluorescência indireta (IFI)

ELISA (Lisado parasitário)

� Testes modificados

ELISA, CLIA

Proteínas recombinantes / PS

Testes serológicos mais utilizados na triagem sorológica para T.cruzi em doadores de sangue (1990-2010)

Doadores: 411.017 Unidades descartadas: 6.936 (1,7 %)

Salles NA et al, Transfusion, 36: 969-973, 1996

HAIHAIHAIHAI IFIIFIIFIIFI ELISA / CLIAELISA / CLIAELISA / CLIAELISA / CLIA

DesdeDesdeDesdeDesde 1962196219621962 1966196619661966 1975197519751975

AcAcAcAc detectadosdetectadosdetectadosdetectados IgGIgGIgGIgG IgGIgGIgGIgG e e e e IgMIgMIgMIgM IgGIgGIgGIgG

LeituraLeituraLeituraLeitura VisualVisualVisualVisual VisualVisualVisualVisual InstrumentosInstrumentosInstrumentosInstrumentos

Valor de corteValor de corteValor de corteValor de corte 1/16 1/16 1/16 1/16 –––– 1/201/201/201/20 1/40 (1/20)1/40 (1/20)1/40 (1/20)1/40 (1/20) Cut offCut offCut offCut off

SensibilidadeSensibilidadeSensibilidadeSensibilidade Variável*Variável*Variável*Variável* AltaAltaAltaAlta 97,7% 97,7% 97,7% 97,7% ---- 100%100%100%100%

EspecificidadeEspecificidadeEspecificidadeEspecificidade Baixa**Baixa**Baixa**Baixa** Baixa**Baixa**Baixa**Baixa** 93,3% 93,3% 93,3% 93,3% ---- 100%100%100%100%

Triagem (BS)Triagem (BS)Triagem (BS)Triagem (BS)Não Não Não Não

recomendadorecomendadorecomendadorecomendado

Não Não Não Não

recomendadorecomendadorecomendadorecomendadoRecomendadosRecomendadosRecomendadosRecomendados

Testes Convencionais para Detectar a Infecção pelo T. cruzi

(*): Resultados Falsos-negativos (**): Resultados Falsos-positivos

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Testes Sorológicos de uso mais frequente.Imunoensaios para anti-T.cruzi [Lys]MarcaMarcaMarcaMarca comercialcomercialcomercialcomercial MétMétMétMét SensibilidadeSensibilidadeSensibilidadeSensibilidade EspecificidadeEspecificidadeEspecificidadeEspecificidade

BioMérieuxBioMérieuxBioMérieuxBioMérieux Ag Ag Ag Ag LysLysLysLys ((((epimastigotasepimastigotasepimastigotasepimastigotas) [1] ) [1] ) [1] ) [1] ELISA 100%100%100%100% 99,6%99,6%99,6%99,6%

BioschileBioschileBioschileBioschile Ag Ag Ag Ag LysLysLysLys (Y, (Y, (Y, (Y, TalahuenTalahuenTalahuenTalahuen,,,, MNV2) [2]MNV2) [2]MNV2) [2]MNV2) [2] ELISA 100%100%100%100%99,4%99,4%99,4%99,4%

100%100%100%100%99,6299,6299,6299,62

ChagatekChagatekChagatekChagatek Ag Ag Ag Ag LysLysLysLys PurifPurifPurifPurif. [3] . [3] . [3] . [3] ELISA100%100%100%100%99,4%99,4%99,4%99,4%

90%90%90%90%99,2499,2499,2499,24

OrthoOrthoOrthoOrtho Ag Ag Ag Ag LysLysLysLys ((((epimastigotasepimastigotasepimastigotasepimastigotas) [4]) [4]) [4]) [4] ELISA

99,7%99,7%99,7%99,7%98,9%98,9%98,9%98,9%100%100%100%100%

100%100%100%100%99,4%99,4%99,4%99,4%100%100%100%100%

WienerWienerWienerWiener Ag Ag Ag Ag LysLysLysLys [5][5][5][5] ELISA 100%100%100%100% 99,6%99,6%99,6%99,6%

[1]: Instruções técnicas [2-3]: Instruções técnicas / Otani M, et al,Transfusion, 2009

[4] Instruções técnicas / Transfusion 2007; 47:90-96 / Transfusion 2008; 48(3) [5]: Instruções técnicas

Testes Sorológicos de uso mais frequenteImunoensaios para anti-T.cruzi [Rec]

Marca comercialMarca comercialMarca comercialMarca comercial MétMétMétMét SensibilidadeSensibilidadeSensibilidadeSensibilidade EspecificidadeEspecificidadeEspecificidadeEspecificidade

AbbottAbbottAbbottAbbott ((((TcFTcFTcFTcF, FP3, FP6 y FP10) [1] , FP3, FP6 y FP10) [1] , FP3, FP6 y FP10) [1] , FP3, FP6 y FP10) [1]

ARCHITECTARCHITECTARCHITECTARCHITECT CLIA100%100%100%100%99,36%99,36%99,36%99,36%99,74%99,74%99,74%99,74%

99,94%99,94%99,94%99,94%99,96%99,96%99,96%99,96%>99,73>99,73>99,73>99,73

BioKitBioKitBioKitBioKit (TcDTcDTcDTcD, , , , TcETcETcETcE, PEP, PEP, PEP, PEP----2 y TcLo1) [2]2 y TcLo1) [2]2 y TcLo1) [2]2 y TcLo1) [2] ELISA100%100%100%100%100%100%100%100%

99,5%99,5%99,5%99,5%99,24%99,24%99,24%99,24%

BioKitBioKitBioKitBioKit BIOBIOBIOBIO----FLUSH [3]FLUSH [3]FLUSH [3]FLUSH [3] CLIA 100%100%100%100% 99,86%99,86%99,86%99,86%

WienerWienerWienerWiener 3.0 3.0 3.0 3.0 (Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 &

Ag36) Ag36) Ag36) Ag36) [4][4][4][4]

ELISA 100%100%100%100% 99,6%99,6%99,6%99,6%

WienerWienerWienerWiener 4.0 4.0 4.0 4.0 (Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 & Ag1, Ag2, Ag30, SAPA, Ag13 &

Ag36) [5]Ag36) [5]Ag36) [5]Ag36) [5] ELISA 100%100%100%100% 99,7%99,7%99,7%99,7%

[1]: Transfusion 2006; 46(10):1737-44 / Diag. Microb. Infect. Dis. 2011, 69: 74-81

[2]: Sáez-Alquezar A, 2000 / Otani M et al Transfusion, 2009[4]:Sáez-Alquezar A, 2004 [5]:Sáez-Alquezar A, 2009[3]:Sáez-Alquezar A, 2012

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12

Testes ELISA Lisado

Clinical and Vaccine Immunology, (2007); 14(8):1045-1049.

Lab. Lemos Bioschile

In house bioMérieux

Clinical and Vaccine Immunology, (2007); 14(8):1045-1049.

Testes ELISA recombinantes

Wiener Omega

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TESTES CONFIRMATÓRIOSAté o momento, nenhum teste foi aceito universalmente como “gold

standard” para o diagnóstico sorológico da infecção por T. cruzi.

Testes Complementares (“confirmatórios”)

Métodos Frações antigênicas Sens Espec

RIPA& Ab glucoproteins 72- 90 kDConcordância

89% con IFI

Western blot* TESA (Excreted-secreted antigens) 100% 98,5%

Imunoblot** FP10, FP6, FP3, TcF 100% 100%

(*): IMTSP/bioMérieux; Umezawa ES et al.1996(**): Abbott: Cheng KY et al. 2007(&): Leiby DA et al. JCM - 2000

?

Desempenho do TESA-blot

� Sensibilidade: 100%� Especificidade: 99.6%� Como teste confirmatório para amostras reagentes ou

indeterminadas na triagem sorológica em doadores de sangue:

VPP: 98 %VPN: 100 %

+

205 kD

120 kD

97

66

Trypomastigotes

Excreted/secreted antigens

Umezawa ES et al, J Clin Microbiol 34: 2143-2147, 1996

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Sorologia para infecção por T.cruzi

Testes para detecção de Anti-T.cruzi

Teste ELISA Teste CLIA

BIO-FLASH Chagas

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ELISA x CLIAELISA CLIA

Suporte Microplaca Partícula magnética

Possibilidades Acesso aleatorio

Sensibilidade Semelhante

Especificidade Semelhante

Velocidade +++ ++++

OpçõesPequeno porte

Grande porte

Pequeno porte

Grande porte

Equipamentos Abertos / Fechados Fechados

Tendência nos próximos anos

Diminuição,

principalmente en

grandes rotinas

Aumentar

DESEMPENHO

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Infectadoscom sintomas

Infectados assintomáticos

Filhos não infectados

Gestantes Infectadas pelo T.cruzi

Identificar o estado de infecção pré-natal e durante

a gestação

Identificar o estado de infecção (0 – 9 meses)

Doença de Chagas congênita - Transmissão Transplacentaria

Triagem sorológicagestantes / parto

Triagem sorológicagestantes / parto

NegativoNegativo

Ausência de infecçãoAusência de infecção

PositivoPositivo

Recém nascidoRecém nascidoRecém nascidoRecém nascidoRecém nascidoRecém nascidoRecém nascidoRecém nascido

Avaliação da parasitemiaMicrohematócrito + PCRAvaliação da parasitemiaMicrohematócrito + PCR PositivoPositivoNegativo Negativo

Positivo Positivo

NegativoNegativo

Negativo Negativo TratamentoTratamentoTratamentoTratamentoTratamentoTratamentoTratamentoTratamento

Ausência de infecçãoAusência de infecção

1o mês MHT + PCR1o mês MHT + PCR

9o mês MHT + Sorologia9o mês MHT + Sorologia

Comunidad Autonoma de Madrid

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Tratamento

• Benznidazol� 7 - 10 mg/Kg/dia em 2 doses diárias� 30 – 60 dias

• Nifurtimox� 10 – 15 mg/Kg/dia em 2 doses diárias� 60 – 90 dias

Tempo apósTempo apósTempo apósTempo após a a a a infecçãoinfecçãoinfecçãoinfecção

< 1 ano< 1 ano< 1 ano< 1 ano < 12 anos< 12 anos< 12 anos< 12 anos > 12 anos> 12 anos> 12 anos> 12 anos

% de cura% de cura% de cura% de cura ~100 %~100 %~100 %~100 % 60 %60 %60 %60 % 8 8 8 8 –––– 25 %25 %25 %25 %

Tempo para Tempo para Tempo para Tempo para negativarnegativarnegativarnegativar a a a a sorologiasorologiasorologiasorologia

< 1 ano< 1 ano< 1 ano< 1 ano 5 5 5 5 –––– 7 anos7 anos7 anos7 anos 10 10 10 10 –––– 15 anos15 anos15 anos15 anos

Cura parasitológica em indivíduos infectados pelo T.cruzi

Clin. Infect. Dis, 2009; 48:1736-40

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Controle de Qualidade Externo e Interno

• Participar de pelo menos um programa de avaliação externa

• Usar um SCI* diariamente em cada corrida analítica– Estabelecer um critério mínimo para aceitação e usá-lo

• Realizar avaliações lote a lote

(*): Soro Controle Interno de baixa reatividade

LABORATÓRIOS DE DIAGNÓSTICO OU DE TRIAGEM

PréPréPréPré----AnalíticaAnalíticaAnalíticaAnalítica AnalíticaAnalíticaAnalíticaAnalítica PósPósPósPós----AnalíticaAnalíticaAnalíticaAnalíticaPacientePaciente esultadoResultado

SISTEMA DE GARANTIA DA QUALIDADESISTEMA DE GARANTIA DA QUALIDADESISTEMA DE GARANTIA DA QUALIDADESISTEMA DE GARANTIA DA QUALIDADE

Controle Controle Controle Controle dededede

QualidadeQualidadeQualidadeQualidade

InternoInternoInternoInterno

Controle Controle Controle Controle de de de de QualidadeQualidadeQualidadeQualidade ExternoExternoExternoExterno

ERROS

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Painéis de Soros para Procedimentos de Controle de Qualidade

Soros Controle Interno (SCI)Soros Controle Interno (SCI)Soros Controle Interno (SCI)Soros Controle Interno (SCI)

Painéis de Performance Painéis de Performance Painéis de Performance Painéis de Performance

Painéis ou Painéis ou Painéis ou Painéis ou MultipainéisMultipainéisMultipainéisMultipainéis

Padrões de ReferênciaPadrões de ReferênciaPadrões de ReferênciaPadrões de Referência

Baixa Reatividade (DO/CO: 2,0 – 4,5)

Para uso na Avaliação Externa

WHO, outros

AmostrasAmostrasAmostrasAmostras

Positivas e Positivas e Positivas e Positivas e

Negativas Negativas Negativas Negativas

mmmmuito bem uito bem uito bem uito bem

ccccaracterizadasaracterizadasaracterizadasaracterizadas

Avaliação inicial e lote a lote

Caracterização

Chagas

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20

AVALIAÇÃO EXTERNA (PAEQS)

Os testes de Triagem Sorológica são QUALITATIVOS

Programas de Avaliação Externa da Qualidade em Sorologia (PAEQS)

• Possíveis falhas nos procedimentos internos dos Laboratórios Participantes poderão dar origem a:

– Resultados Falsos Reagentes

– Resultados Falsos Não-Reagentes

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21

Amostras para o Controle de Qualidade Externo Liofilizadas

PNCQ20112012201320142015

RFR e RFNR em 29 PCQES (PNCQ) com avaliação mensal em Centros de Hemoterapia do Brasil (05/2011 - 09/2013)

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PCQES para a Triagem Sorológica Meses COM avaliação

Meses SEM avaliação

1995 - 2011 PAHO/WHO

América Latina

1995 - 2009 QPanel - Brasil

2010 PNCQ - Brasil

2011 – 2015PNCQ - Brasil

AmostrasNº 1 a 6

Primeiro mês

Processar:

AmostrasNº 7 a 12

Segundo mês

Processar:

AmostrasNº 13 a 18

Terceiro mês

Processar:

Avaliação mensal

18 Amostras Envio a cada três meses

PCQES usando Amostras de soro liofilizadas para HIV, HTLV, HCV, HBsAg, Anti-HBc, Sífilis y Chagas

PNCQ - Brasil

On

line

Novo envio

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23

AmostrasNº 1 a 3

Primeiro mês

Processar:

AmostrasNº 4 a 6

Segundo mês

Processar:

AmostrasNº 7 a 9

Terceiro mês

Processar:

Avaliação mensal

36 Amostras Envio uma vez por ano

PCQES usando amostras de soro para Chagas liofilizadas, oferecido a Países Não-endêmicos em colaboração com a OMS (2013 - 2015)

PNCQ - Brasil

On

line

ESPANHA (1)ITÁLIA (2)PORTUGAL (1)

Até 12 meses

AmostrasNº 1 a 6

Primeiro semestre

Processar:

AmostrasNº 7 a 12

Segundo semestre

Processar:

Avaliação semestral

12 Amostras Envio uma vez por ano

PCQES usando amostras de soro para Chagas liofilizadas, desenvolvidos na Costa Rica (2005 - 2015)

PNCQ - Brasil

On

line

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Controle de Qualidade Interno

• Corrida analíticaCorrida analíticaCorrida analíticaCorrida analítica– De acordo com o Clinical & Laboratory Standards Institute(CLSI) a Corrida Analítica é o intervalo de tempo em que se realizam uma serie de medições de maneira estável em termos de precisão e exatidão

– Podem ocorrer efeitos adversos que deverão ser detectados de forma adequada

– O número, a frequência e os níveis dos controles dependerá do número e da magnitude da Corrida Analítica

• Fluxo continuo ou lotes

• Testes manuais ou automatizados

Soros Controle Interno (SCI)

Soros controle de baixa reatividade

Validação diária das corridas

Diferentes dos controles internosDos kits

Sofrem variações na mudança de lotes de kits

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25

Aplicação dos SCI na Rotina DiáriaAplicação dos SCI na Rotina DiáriaAplicação dos SCI na Rotina DiáriaAplicação dos SCI na Rotina Diária

Gráfico de Gráfico de Gráfico de Gráfico de LeveyLeveyLeveyLevey ---- JenningsJenningsJenningsJennings

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26

ANÁLISE CRITERIOS VALIDAÇÃO ANÁLISE

SCI - Análise dos resultadosRegras – Tendências – Dispersão - Mudanças

� Alerta 12DE

� Alerta 22DE

� Alerta 41DE

� Mandatória 13DE

� Mandatória R4DE

� Mandatória 10x

� Tendências� 41DE, 10x

� Dispersão� 12DE, 13DE, R4DE

� Mudanças� Repentinas

� Lotes diferentes

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Ações Decorrentes da Violação das Regras de Westgard

ACEITAR A CORRIDA

Quando Somente uma regra de Alerta

é violada

REJEITAR A CORRIDA

Quando uma Regra

Mandatória é violada

Os Critérios para aceitar, ou não, uma corrida analítica devemser definidos por cada laboratório, e...... Obedecidos.

Uso de “Uso de “Uso de “Uso de “BiologicalBiologicalBiologicalBiological ReferenceReferenceReferenceReference Standards” Standards” Standards” Standards” desenvolvidos pela OMSdesenvolvidos pela OMSdesenvolvidos pela OMSdesenvolvidos pela OMS

Ferramenta para comparação de resultados

entre diferente ensaios e para facilitar o

desenvolvimento de produtos diagnósticos

Dr Ana Padilla, Quality Assurance & Safety: Blood Products & related Biologicals

Medicines Policy and Standards DepartmentHealth Technology and Pharmaceuticals Cluster

WHO, Geneva, Switzerland

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Distribuição de TCI e TCII na América Latina

Guhl, 2007

Evaluation of two International Reference Standards for antibodies to Trypanosoma cruzi in a WHO collaborative study - WHO/BS/ 2011.2181

Marcia Otani, Jason Hockley, Carmen Guzmán Bracho, Sjoerd Rijpkema, Alejandro O.Luquetti, Robert Duncan, Peter Rigsby, Pedro Albajar-Viñas, Ana Padilla

Two freeze dried preparations of defibrinated human plasma containing anti-Trypanosoma cruzi (T. cruzi) antibodies, coded 09/186 and 09/188,

were assessed for their suitability as International Reference Standards for the serodiagnosis of Chagas disease.

Dois Padrões:09/186, representativo da área com maior prevalência de Tc2 09/188, representativo da área com maior prevalência de Tc1

Devem ser usados com diluições, até 1/64

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29

Comportamento dos testes ELISA e CLIA frente aos

“Biological Standards” da OMS

Testes Não Convencionais: Testes Rápidos

� Aglutinação de Partículas

� Imuno dot (dipstick)

� Imuno filtração (flow-through device)

� Imuno cromatografia (lateral flow)

Surgiram a partir da década de 90

Sem reagentes adicionais, instrumentos nem refrigeração

De uso fácil para trabalhos em campo e que possam ser manipulados por pessoas sem muita capacitação

Que apresentem Sensibilidade y especificidade aceitáveis

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Procedimentos de CQ – Avaliação de testes

Comparative Evaluation of 11 Commercialized Rapid Diagnostic Tests for Detecting Trypanosoma cruzi Antibodies in Serum Banks in Areas of Endemicity and Nonendemicity; Sánchez-Camargo CL, Albajar-Viñas P, Wilkins PP, Nieto J, Leiby DA, Paris l,Scollo k, Flóre z C, Guzmán-Bracho A,

Luquetti AO, Calvo N, Tadokoro K, Saez-Alquezar A, Palma PP, Martin M, Flevaud L. J.C.M; p. 2506–2512 July 2014 Vol 52 Number 7

Foram avaliados 11 Testes Rápidos para anti-T.cruzi em 10 Laboratórios de Referência Nacional de 9 países, endêmicos (Japão, França, Espanha, USA) e não-endêmicos (Argentina,Brasil, Colômbia, Costa Rica, México)

Test

es R

ápid

os

Ava

liad

os

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Cada Laboratório De Referência Nacional (LRN) testou 50 amostras de soro (25 Positivas e 25 Negativas para anti-T.cruzi) previamente caracterizadas.

CONTROLE DE QUALIDADE:Painel cego de 4 amostras de soro liofilizadas enviado a cadaum dos LRN para serem processados juntamente com as amostras da avaliação

Procedimentos de CQ – Avaliação de testes

Procedimentos de CQ – Avaliação de testes

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Procedimentos de CQ – Avaliação de testes

Procedimentos de CQ – Avaliação de testes

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Considerações finais

• Escolha dos testes sorológicos – Frações antigênicas (Lys ou rec)

– Desempenho em avaliações

• Tipos de plataformas ou metodologias não são critérios definitivos

• Aplicação de procedimentos de Controle de Qualidade– CQE, CQI, Avaliação inicial e lote a lote

Muito Obrigado

amadeo62@gmail.com