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Centro Universitário de Caratinga
Programa de Pós-Graduação em Ciências da Reabilitação
Mestrado Acadêmico
ESTUDO COMPARATIVO DAS RESPOSTAS TERAPÊUTICAS DO
LASER DIODO VISÍVEL E DO LED NO TRATAMENTO DO
FOTOENVELHECIMENTO INDUZIDO EM CAMUNDONGOS
JULIANA BITTENCOURT E XAVIER
Prof. Dr. Marcus Vinícius de Mello Pinto- Orientador
Profª. Drª. Lamara Laguardia Valente Rocha- Co-Orientadora
Caratinga- Minas Gerais- Brasil
Novembro/2010.
Dissertação apresentada ao Centro
Universitário de Caratinga, como
parte das exigências do Programa de
Pós-Graduação em Ciências da
Reabilitação, para obtenção do título
de Magister Scientiae.
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JULIANA BITTENCOURT E XAVIER
ESTUDO COMPARATIVO DAS RESPOSTAS TERAPÊUTICAS DO
LASER DIODO VISÍVEL E DO LED NO TRATAMENTO DO
FOTOENVELHECIMENTO INDUZIDO EM CAMUNDONGOS
Caratinga- Minas Gerais- Brasil
Novembro/2010.
Dissertação apresentada ao Centro Universitário
de Caratinga-UNEC, como parte das exigências
do Programa de Pós-Graduação em Ciências da
Reabilitação, para obtenção do título de Magister
Scientiae.Orientador: Prof. Dr. Marcus Vinícius
de Mello Pinto. Co-orientadora: Profª. Drª.
Lamara Laguardia Valente Rocha.
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JULIANA BITTENCOURT E XAVIER
ESTUDO COMPARATIVO DAS RESPOSTAS TERAPÊUTICAS DO
LASER DIODO VISÍVEL E DO LED NO TRATAMENTO DO
FOTOENVELHECIMENTO INDUZIDO EM CAMUNDONGOS
APROVADA: 09 de novembro de 2010
________________________________ ______________________________
Prof. Dr. Marcus Vinícius de Mello Pinto Profª. Drª. Lamara L. Valente Rocha
Orientador Co-Orientadora
__________________________________
Prof. Dr. Sebastião David dos Santos Filho
Examinador externo
Dissertação apresentada ao Centro
Universitário de Caratinga, como
parte das exigências do Programa de
Pós-Graduação em Ciências da
Reabilitação, para obtenção do título
de Magister Scientiae.
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AGRADECIMENTOS
Agradeço primeiramente a Deus por me dar força, determinação e discernimento.
Ao meu orientador Prof. Dr. Marcus Vinícius de Mello Pinto e à minha co-orientadora Prof.ª
Drª. Lamara Laguardia Valente Rocha pelo profissionalismo, compreensão, ensinamentos e
por acreditarem neste trabalho e me apoiarem em todos os momentos.
Aos meus pais, Jairo e Dione, e aos meus irmãos, Rodrigo e Lucas pelo apoio e carinho
incondicionais. Por serem os alicerces nos momentos difíceis durante esta caminhada.
Ao meu namorado Anderson, ao Prof. Lacerda, à Viviane e Terezinha pelo companheirismo e
por não medirem esforços e por estarem ao meu lado e acreditarem em mim.
Aos amigos Maria Eugênia Corrêa, Rodrigo Bicalho e Elcinéia Tavares pelo apoio durante a
execução do trabalho.
Ao Jésus, técnico do Centro de Estudos de Biologia (CEB), por estar sempre disposto a ajudar
e por tratar os animais com cuidado e profissionalismo.
A todos, que direta ou indiretamente contribuíram de alguma forma para que meu objetivo
fosse alcançado, expresso meus sinceros agradecimentos.
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RESUMO
ESTUDO COMPARATIVO DAS RESPOSTAS TERAPÊUTICAS DO LASER DIODO
VISÍVEL E DO LED NO TRATAMENTO DO FOTOENVELHECIMENTO
INDUZIDO EM CAMUNDONGOS
O bronzeamento, por ser interpretado por muitos como sinônimo de beleza e saúde, tem
contribuído para exacerbar os efeitos cumulativos do sol tanto na epiderme quanto na derme.
Sendo assim, tem-se aumentado a busca por tratamentos eficazes à fim de reduzir os sinais do
envelhecimento extrínseco. Baseando-se neste fato, o presente trabalho apresentou como
objetivo comparar duas modalidades terapêuticas, sendo elas o LED e o LASER para o
tratamento do fotoenvelhecimento induzido em camundongos BALB-c. Para a realização do
experimento foram utilizados, inicialmente, 40 animais sendo estes divididos em quatro
grupos: grupo controle (irradiado com lâmpada isenta de RUV), grupo UV (submetido à
exposição à RUV e sem tratamento), grupo UV+LED (submetido à exposição à RUV e
tratados com LED) e grupo UV+LASER (submetido à exposição à RUV e tratados com
LASER). A avaliação da histomorfometria foi realizada através de imagens capturadas e
avaliadas por sistema de captura de imagens. Através dos resultados da análise concluiu-se
que o protocolo adotado foi capaz de induzir o processo de fotoenvelhecimento sendo
possível evidenciar hiperceratose, hipergranulose, acantose e espongiose na camada
epidérmica. Na derme observou-se redução no número de fibras colágenas, aumento na
quantidade de substância fundamental amorfa (SFA), do infiltrado inflamatório e no número
de fibrócitos/fibroblastos. O LED demonstrou melhores resultados no tratamento da pele
fotoenvelhecida visto que apresentou efeitos satisfatórios tanto na derme quanto na epiderme.
Já o LASER foi capaz de agir de forma significativa apenas na derme.
Palavras-chave: fotoenvelhecimento, Luz Emitida por Diodo (LED), LASER.
6
ABSTRACT
COMPARATIVE STUDY OF THERAPEUTIC RESPONSES OF VISIBLE LASER
DIODE AND LED IN THE TREATMENT OF INDUCED PHOTOAGING IN MICE.
Tan, being interpreted by many people as synonymous with beauty and health, have
contributed to exacerbate the cumulative effects of the sun both in the epidermis and dermis.
Thus, we have increased the search for effective treatments to reduce the signs of extrinsic
aging. Based on this fact, this study showed the objective of comparing two therapeutic
modalities, which were LED and LASER in the treatment of photoaging induced in BALB-c
mice. To perform the experiment we used 40 BALB-c male mice which are divided into four
groups: control group (irradiated with light free of UV), UV group (subjected to UVR and
untreated), UV+LED group (subjected to UVR and treated with LED) and UV+LASER group
(Subjected to UVR and treated with LASER). The evaluation of histomorphometry was
performed using images captured and evaluated by image capture system. Through the results
of the analysis concluded that the protocol adoped was able to induce the process of
photoaging and possible evidence, hypergranulosis, acanthosis and spongiosis in the
epidermal layer. In the dermis there was a reduction in the number of collagen fibers,
increasing the amount of SFA, the inflsmmstory infiltrate and the number of
fibrocytes/fibroblast. The LED has shown better results in the treatment of photodamaged
skin as presented satisfactory results in both the dermis and epidermis. Since the LASER was
able to take significant action only in the dermis.
Keywords: photoaging, light emitting diode (LED), LASER.
.
7
LISTA DE FIGURAS
FIGURA 1: Sistema Tegumentar............................................................................................15
FIGURA 2: Desenho esquemático de um melanócito e o processo de melanogênese............21
FIGURA 3: Representação esquemática do processo de formação de rugas..........................25
FIGURA 4: Características macroscópicas da pele fotoenvelhecida.......................................26
FIGURA 5: (A) Esquema representativo da estrutura e componentes de um LED; (B)
Dispositivo de um LED e cavidade reflectora, observados ao microscópio.....................................30
FIGURA 6: Coerência da luz LASER....................................................................................34
FIGURA 7: Colimação da luz LASER...................................................................................34
FIGURA 8: Monocromaticidade da luz LASER....................................................................34
FIGURA 9: Resposta tecidual à luz LASER..........................................................................38
FIGURA 10: Profundidade de penetração dos comprimentos de onda na pele......................39
FIGURA 11: Balança de precisão (A); Mensuração do peso dos animais (B).......................42
FIGURA 12: Fotomiografias de camundongos BALB-c submetidos à dose única de
RUV.........................................................................................................................................44
FIGURA 13: Fotomiografias de camundongos BALB-c submetidos à dose única de RUV
com diferentes tempos de irradiação....................................................................................... 44
FIGURA 14: Indução do fotoenvellhecimento de camundongos BALB-c com lâmpadas de
radiação ultravioleta B (UVB) da marca Philips TL40W/ 12RS (à esquerda).Irradiação dos
camundongos BALB-c do grupo controle (G1) com lâmpada Philips 25 W isenta de radiação
ultravioleta (à direita)...............................................................................................................47
FIGURA 15: Óculos para proteção individual e mensuração da temperatura da lâmpada de
RUV..........................................................................................................................................47
FIGURA 16: Fotorejuvenescimento de camundongos BALB-c com uso de LED.................48
FIGURA 17: Fotorejuvenescimento de camundongos BALB-c com LASER diodo visível da
marca Dentoflex, modelo quasar, comprimento de onda 632,8 nm, 90 J.................................49
FIGURA 18: Procedimento cirúrgico para obtenção da pele do dorso dos animais (A);
inclusão do material (B)............................................................................................................50
8
FIGURA 19: Fotomiografias da pele do dorso de camundongos BALB-c, adquiridas durante
a sétima semana de experimento, pertencentes ao grupo controle assim como aos grupos
submetidos à RUV e tratados ou não.......................................................................................54
FIGURA 20: Secções da pele do dorso dos camundongos BALB-c pertencentes ao grupo
controle assim como aos grupos submetidos à RUV tratados ou não com LED ou LASER ,
sacrificados após sete semanas de experimento. Barra: 6,95µm; Aumento de 40X...............59
9
LISTA DE TABELAS
Tabela 1: Fototipos de pele (Fitzpatrick).............................................................................20
Tabela 2. Classificação de Glogau: Grupos de Fotoenvelhecimento...................................29
Tabela 3: Ação da LEDterapia X comprimento de onda......................................................33
Tabela 4: Grupos experimentais utilizados no estudo...........................................................41
Tabela 5. Protocolo adotado para fotoenvelhecimento.........................................................45
Tabela 6. Protocolo adotado para o tratamento dos grupos experimentais...........................48
10
LISTA DE GRÁFICOS
Gráfico 1- Valores médios da espessura da epiderme nos diferentes grupos de camundongos
BALB-c submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com Radiação Ultravioleta e tratados ou
não com LASER ou LED (n=38).............................................................................................60
Gráfico 2- Valores médios do número de queratinócitos e da presença de queratina nos
diferentes grupos de camundongos BALB-c submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com
Radiação Ultravioleta e tratados ou não com LASER ou LED (n=38)....................................61
Gráfico 3- Valores médios da quantidade de Substância fundamental amorfa (SFA), de
colágeno e núcleos de células nos diferentes grupos de camundongos BALB-c submetidos ou
não ao fotoenvelhecimento com Radiação Ultravioleta e tratados ou não com LASER ou LED
(n=38).......................................................................................................................................63
Gráfico 4- Valores médios de células do infiltrado inflamatório nos diferentes grupos de
camundongos BALBc submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com Radiação Ultravioleta e
tratados ou não com LASER ou LED (n=38)..........................................................................64
11
SUMÁRIO
1-INTRODUÇÃO..................................................................................................................12
2- OBJETIVOS
2.1- Objetivos Gerais.......................................................................................................14
2.2- Objetivos Específicos................................................................................................14
3-FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
3.1- Constituição da pele................................................................................................15
3.2-Lesões de pele relacionadas ao fotoenvelhecimento..............................................22
3.3- Radiação ultravioleta, fotoenvelhecimento e envelhecimento cronológico........23
3.4-Luz Emitida por Diodo (LED)................................................................................29
3.5- LASER.....................................................................................................................33
4- METODOLOGIA
4.1- Grupos experimentais e número de animais..........................................................40
4.2- Projeto piloto.............................................................................................................42
4.3- Indução do fotoenvelhecimento...............................................................................45
4.4- Fotorejuvenescimento...............................................................................................47
4.5- Sacrifício e análises histológicas...............................................................................49
4.6- Análise macroscópica................................................................................................50
4.7- Análise histopatológica..............................................................................................50
4.9- Histomorfometria......................................................................................................51
4.10- Análise estatística.....................................................................................................51
5- RESULTADOS
5.1- Análise macroscópica.................................................................................................52
5.2- Análise histopatológica...............................................................................................55
5.3- Análise histomorfométrica.........................................................................................60
6- DISCUSSÃO......................................................................................................................66
7- CONCLUSÃO...................................................................................................................77
8-REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS............................................................................78
9- ANEXO I............................................................................................................................85
12
1- INTRODUÇÃO
O sol é a principal fonte emissora de radiação ultravioleta (RUV), sendo a intensidade
desta dependente não apenas do horário do dia, como também de fatores geográficos. A
incidência da RUV tem aumentado nas últimas décadas em decorrência da destruição da
camada de ozônio, conseqüente à poluição ambiental. Com isso, aumentou-se o risco do
fotoenvelhecimento em pessoas continuamente expostas a este tipo de irradiação. Devido a
este fato, estes indivíduos apresentam maior predisposição ao envelhecimento extrínseco.
Desta forma, tem-se observado um aumento na demanda de pacientes à procura do
melhor tratamento para os sinais de fotoenvelhecimento como flacidez cutânea, manchas e
rugas.
O fotoenvelhecimento, também denominado envelhecimento extrínseco, é causado
pela exposição a fatores ambientais principalmente à RUV. Dentre as características
histológicas características desta afecção cutânea podem ser citadas a desorganização das
fibras elásticas e redução de colágeno na matriz extracelular acarretando, assim,
comprometimento da propriedade viscoelástica da pele.
Para o reparo de tais lesões dermatológicas tem-se utilizado, na prática clínica, algumas
modalidades terapêuticas como a Luz Emitida por Diodo (LED) e Luz Amplificada por
Emissão Estimulada de Radiação (LASER) de alta intensidade.
A LEDterapia baseia-se na ativação das mitocôndrias acarretando um incremento na
síntese de trifosfato de adenosina (ATP) e, conseqüentemente do metabolismo celular. Tal
processo pode ser evidenciado nos fibroblastos que, por sua vez, aumentam a produção de
colágeno. Esta reação é importante para o tratamento do fotoenvelhecimento visto que dentre
as alterações histológicas características da pele fotoenvelhecida destaca-se a destruição de
fibras colágenas. A estimulação das mitocôndrias presentes em fibroblastos também pode ser
13
evidenciada com a utilização da LASERterapia de baixa intensidade, como o LASER diodo
visível de 632,8 nm, no processo de cicatrização de feridas cutâneas.
Apesar de ambas as modalidades apresentarem efeitos confirmados na produção e
organização de fibras colágenas na cicatrização de feridas, tais estudos relacionados com o
fotorejuvenescimento ainda são precários.
Não há na literatura estudos nos quais o LASER diodo visível de 632,8 nm seja
utilizado no tratamento do fotoenvelhecimento. Na prática clínica utilizam-se LASERs de
custo mais elevado como o Q-switched Nd:YAG. Porém, se considerarmos que o LASER
diodo visível seja amplamente utilizado no processo de cicatrização de feridas assim como no
reparo de lesões tendíneas, seria válido pesquisar o seu efeito no tratamento do
fotoenvelhecimento, pois nestes três casos, há a necessidade de uma maior produção de fibras
colágenas e, de fato tanto na regeneração tendínea quanto no reparo tecidual este resultado já
é confirmado.
A NASA desenvolveu o LED como alternativa de substituição do LASER.
Sendo assim, desde a introdução do LED como luz terapêutica, muitos debates têm sido
realizados com foco nas diferenças e similaridades com o LASER. Vários estudos têm
demonstrado a eficácia da LEDterapia na cicatrização de feridas, porém a literatura ainda é
escassa em trabalhos comparativos destas duas modalidades terapêuticas, principalmente no
que se refere ao fotorejuvenescimento.
Considerando os efeitos fisiológicos tanto do LED quanto do LASER de baixa
intensidade no aumento do número de fibroblastos e conseqüentemente da síntese de colágeno
e, sabendo que uma das alterações histológicas características do fotoenvelhecimento é a
destruição de fibras colágenas, o que confere à pele um aspecto enrugado, seria interessante a
comparação destas duas modalidades terapêutica no tratamento da pele fotoenvelhecida
através da indução do fotoenvelhecimento em camundongos
14
2-OBJETIVOS
2.1- Objetivo geral
Induzir fotoenvelhecimento induzido por RUV em camundongos BALB-c e tratá-los
visando fotorejuvenescimento de pele com a utilização de LED (Luz Emitida por Diodo)
com comprimento de onda de 660 nm e com LASER diodo visível de 632,8 nm.
2.2- Objetivos específicos
Induzir fotoenvelhecimento em camundongos BALB-c através da exposição destes
animais à radiação ultravioleta.
Tratar um grupo de camundongos BALB-c utilizando LED com comprimento de onda de
660 nm e, outro grupo com LASER diodo visível de 632,8 nm.
Avaliar por aspectos anatomopatológicos e histomorfométricos o fotoenvelhecimento
induzido por RUV.
Avaliar e comparar por aspectos histopatológicos e histomorfométricos a eficiência da
LEDterapia e LASERterapia.
15
3- FUNDAMENTAÇÃO TEÓRICA
3.1- Constituição da pele
A pele é o maior órgão do corpo humano correspondendo a 12% do seu peso seco total.
É constituída por duas camadas, a epiderme, camada mais superficial formada por tecido
epitelial e, a derme, formada por tecido conjuntivo (FIGURA 1). Estas, por sua vez, estão
separadas através de uma estrutura denominada lâmina basal, visível apenas ao microscópio
eletrônico (GUIRRO & GUIRRO, 2007).
A classificação das estruturas da pele, no entanto é controversa. Autores como
Montagner & Costa (2004) consideram que esta seja dividida em três camadas (epiderme,
derme e hipoderme) e não em duas como descrito por Guirro & Guirro (2007).
FIGURA 1: Sistema Tegumentar
Compilado de: Bear MF, Connors BW, Paradiso MA 2002. Neurociências-Desvendando o Sistema
Nervoso. Porto Alegre 2ª ed. Artmed Editora. Disponível em: <http://www.mundo
vestibular.com.br/content_images/sistema_tegumentar.gif>. Acesso em: 06 maio 2010.
16
De acordo com Haake & Holbrook (2005), a epiderme é um epitélio escamoso
estratificado que, por sua vez, caracteriza-se por uma constante ceratinização, ou seja, é
renovado continuamente dando origem a anexos como folículo piloso, unhas e glândulas
sebáceas. Segundo estes mesmos autores, os ceratinócitos, também denominados
queratinócitos, são as células encontradas em maior quantidade na epiderme e, de acordo com
a diferenciação e propriedades mitóticas destas, ocorrerá a divisão da epiderme em camadas
(germinativa, espinhosa, granulosa e córnea). A ceratinização, por sua vez, dependerá de
fatores extrínsecos (relacionados ao meio) e intrínsecos (genéticos).
Os queratinócitos, além de serem responsáveis pela divisão da epiderme em camadas,
produzem uma proteína responsável pela impermeabilidade cutânea, denominada queratina. A
atividade mitótica da epiderme inicia-se na sua camada mais profunda, denominada camada
germinativa ou basal, e à medida que os queratinócitos migram em direção à superfície,
sofrem diferenciação dando origem às demais camadas (SOUSA & VARGAS, 2004).
As células da camada basal apresentam citoplasma escasso e núcleos grandes. A
espinhosa, por sua vez, é subdividida em cinco a dez camadas e apresenta células maiores que
as basais caracterizadas por grande quantidade de citoplasma. A camada granulosa possui de
uma a três fileiras de células com abundante citoplasma e, por sua vez, são maiores que as da
camada espinhosa. A camada córnea é a mais superficial, e sua espessura varia de acordo com
a região anatômica, sendo mais espessa nas palmas e plantas (SOUSA E VARGAS, 2004).
A camada germinativa ou basal é responsável pela constante renovação da epiderme,
fornecendo células para substituir aquelas que são perdidas na camada córnea. A camada
espinhosa é constituída por células com aspecto espinhoso, responsável pela sua
denominação. Suas células têm importante função na manutenção da coesão das células da
epiderme e conseqüentemente, na resistência ao atrito. A camada granulosa apresenta células
com citoplasma caracterizado por conter grânulos de querato-hialina ou de melanina. A
17
camada córnea é constituída por vários planos de células mortas e intimamente ligadas. A
partir do momento em que seu citoplasma é substituído por uma proteína fibrosa denominada
queratina, estas células mortas são referidas como corneificadas que, não só protegem o
organismo contra a invasão de agentes externos, como também restringem a perda de água
(GUIRRO & GUIRRO, 2007).
Guirro & Guirro (2007) relatam ainda a existência da camada lúcida que, por sua vez,
não é visível com facilidade. Porém, quando visível, tem o aspecto de uma linha clara,
brilhante e homogênea. É constituída por várias camadas de células, achatadas e intimamente
ligadas, das quais a maioria apresenta limites distintos e perde todas as suas inclusões
citoplasmáticas, exceto as fibrilas de queratina e algumas gotículas de eleidina. Esta é
transformada em queratina assim que as células desta camada tornam-se parte da camada
córnea.
Além dos queratinócitos, a epiderme é constituída por outros tipos celulares, sendo eles
os melanócitos, células de Langerhans e células de Merkel. Os melanócitos são responsáveis
pela produção de um pigmento acastanhado denominado melanina que, por sua vez é
transferido para os queratinócitos. Vale ressaltar que a melanina é de extrema importância na
proteção cutânea contra a RUV. As células de Langerhans, por sua vez, são importantes na
imunidade celular, enquanto que as de Merkel relaciona-se à função sensorial (GUIRRO &
GUIRRO, 2007).
A derme localiza-se abaixo da epiderme e é considerada o principal constituinte da
pele sendo responsável por sua flexibilidade, elasticidade e estiramento. Em condições
normais, é considerada a camada mais importante em relação ao comportamento mecânico da
pele. É constituída por abundante tecido conjuntivo, sendo o colagenoso e o elástico os
principais. Apresenta vasos sanguíneos e linfáticos, fibras nervosas, folículos pilosos e
glândulas sebáceas. Vale ressaltar ainda que esta camada cutânea é organizada em duas
18
regiões: papilar, a mais superficial constituída por tecido conjuntivo frouxo, e reticular, a mais
profunda constituída por tecido conjuntivo denso (GONÇALVES & CAMPOS, 2009 ;
GUIRRO & GUIRRO, 2007; UITTO et al., 2005;).
Além das fibras elásticas e colágenas, encontra-se na derme a substância fundamental
amorfa (SFA) sendo esta representada por um gel viscoso constituído por
glicosaminoglicanas, proteoglicanas e glicoproteínas adesivas que formam um arcabouço
entrelaçado e ligado às fibras e a receptores celulares denominados integrinas (JUNQUEIRA
& CARNEIRO, 1999).
Batistela et al. (2007) relatam que a espessura da pele assim como as suas propriedades
viscoelásticas dependem tanto da quantidade de material elástico e colágeno presentes na
derme, quanto da organização estrutural dos mesmos. De acordo com estes mesmos autores,
por apresentar um comportamento viscoelástico, a pele, ao sofrer uma deformação
temporária, através da aplicação de forças externas, tende a não retornar imediatamente ao seu
estado inicial sendo que tal característica acentua-se na pele envelhecida. Segundo Gonçalves
& Campos (2009), o comportamento elástico está relacionado com a presença e disposição
das fibras de elastina, já o comportamento viscoso deve-se à presença de fibras colágenas.
Existem nove tipos diferentes de colágeno na pele humana, porém o colágeno tipo I é
encontrado em maior quantidade em relação aos demais, correspondendo aproximadamente a
80% do total. O colágeno tipo III, por sua vez, é predominante na pele humana durante o
período fetal. A produção primária de tais proteínas na derme ocorre através de células
denominadas fibroblastos (BATISTELA et al., 2007; FISHER et al., 2008).
Na derme humana jovem, os fibroblastos apresentam uma conformação achatada e
encontram-se dispersos. Por outro lado, na pele envelhecida, estes encontram-se colapsados,
com citoplasma escasso (FISHER et al., 2008).
As fibras colágenas apresentam como principal função fisiológica, a propriedade de
19
tensão da pele, através da qual a mesma possa servir como órgão protetor a traumas externos.
São sintetizadas a partir da secreção de procolágeno que, por sua vez, é convertido em
colágeno, através da ação de enzimas extracelulares denominadas colagenases (UITTO et al.,
2005). De acordo com estes mesmos autores, os colágenos formados, a partir de ligações
cruzadas são transformados em fibras colágenas.
De acordo com Batistela et al. (2006), a fibra colágena é o principal componente
responsável pela resistência da pele, sendo que a diminuição do colágeno tipo I é
caracterizado pela redução da espessura da derme tornando-a mais vulnerável à agressões.
As fibras elásticas representam 1 a 2% do peso seco total da derme. Um dos seus
principais constituintes é a elastina, sendo esta sintetizada por células musculares lisas e por
fibroblastos (UITTO et al., 2005). De acordo com estes autores, os tecidos ricos em elastina
geralmente contêm enzimas proteolíticas denominadas elastases, capazes de degradar as fibras
elásticas.
Kim et al. (2008) ressaltam a importância do conhecimento sobre a enzima elastase
devido ao fato desta não ser específica. Para eles, apesar de ser a única enzima capaz de
degradar a elastina, participa também na degradação de outros componentes como colágeno,
proteoglicanas e queratina.
A hipoderme, de acordo com Rusenhack (2006), é a camada mais profunda da pele
sendo também conhecida como tecido subcutâneo. Esta, por sua vez, é constituída por células
de gordura e apresentam espessura variável. Dentre as funções conferidas a esta camada
cutânea destacam-se a proteção mecânica, regularidade do relevo corporal e isolamento
térmico.
De acordo com Guirro & Guirro (2007), a hipoderme permite a contração muscular sem
que haja alterações no relevo cutâneo. Tal fato ocorre devido à conexão pouco resistente entre
esta camada cutânea e as fáscias musculares.
20
Magalhães e Hofmeister (2004) relatam que a coloração da pele depende
fundamentalmente de duas cores: a proporcionada pela melanina e a dos pigmentos
sanguíneos hemoglobina e oxiemoglobina. A pigmentação melânica está diretamente
relacionada à maior ou menor tolerância de um indívíduo à exposição solar e, é determinada
geneticamente. Baseando-se nestas características a pele pode ser dividida em fototipos
descritos por Fitzpatrick, como pode ser observado na tabela 1:
Tabela 1: Fototipos de pele (Fitzpatrick)
I. Sempre queima, nunca bronzeia
II. Sempre queima, bronzeia pouco
III. Bronzeia muito, queima pouco
IV. Bronzeia sempre, nunca queima
V. Altamente pigmentada
VI. Negro
FONTE: Adaptado de Kede & Sabatovick, 2004. Dermatologia Estética.
De acordo com estes mesmos autores, as peles escuras, por possuírem maiores
concentrações de melanina, apresentam maior resistência em ambientes com altas
concentrações de radiação ultravioleta do que as peles claras. Além deste fato, as peles mais
claras apresentam índices aumentados de infecções em decorrência aos danos agudos
causados pela exposição à RUV.
Jimbow et al. (2005) relatam que a cor normal da pele humana está relacionada ao
tamanho, forma, tipo e cor dos melanossomas, assim como à sua distribuição nos melanócitos
e queratinócitos .
Os melanossomas são organelas elipsoidais altamente organizadas que contêm
21
melanina guardada no interior de uma vesícula e a depositam em uma matriz interna
filamentosa e/ou microvesiculosa. Os melanócitos, por sua vez, possuem as organelas
necessárias, como o retículo endoplasmático rugoso e complexo de Golgi, para a síntese da
enzima melanogênica, a tirosinase, que é incorporada nos melanossomas. Os melanócitos
epidérmicos são capazes de transportar os melanossomas maduros através de seus dendritos
para os queratinócitos vizinhos. Após a transferência dos melanossomas para os
queratinócitos, eles são circundados por uma membrana, tornando-se lisossomas secundários
(FIGURA 2). Na pele branca, os melanossomas são relativamente pequenos e formam grupos
no interior de lisossomas secundários. Isso é chamado de complexo melanossômico. Contudo,
na pele negra, os melanossomas são maiores em comprimento (0,7 a 10 µm) e em diâmetro
(0,3µm) e, quando são transferidos para os queratinócitos, permanecem isolados, ou seja, não
se agregam (JIMBOW et al.,2005).
FIGURA 2: Desenho esquemático de um melanócito e o processo de melanogênese
Compilado de: <http://esteticaitu.blogspot.com> Acesso em :11 maio 2010.
22
3.2- Lesões de pele relacionadas ao fotoenvelhecimento
Antes de abordarmos as características macroscópicas e microscópicas de uma pele
fotoenvelhecida, é necessário a descrição de alguns termos utilizados em dermatopatologia.
No presente trabalho serão citados alguns termos macroscópicos, sendo eles: ceratose
ou queratose solar, rítides, poiquilodermia, reticulado tangiectásico e melasma
Ceratose ou queratose solar é uma lesão pré-maligna comum em áreas fotoexpostas de
pessoas idosas ou em adultos de meia idade de pele clara. São lesões máculo-papulosas,
recobertas por escamas secas, endurecidas, de superfície áspera, de cor amarelo a castanho
escura, podendo confluir formando placas (SIMIS & SIMIS, 2006). De acordo com Robins et
al. (1996), mácula refere-se a uma área circunscrita de qualquer tamanho , caracteristicamente
plana e geralmente diferenciada da pele circundante por sua coloração. Denomina-se pápula,
segundo estes mesmos autores, uma área sólida e elevada com até 5 mm de largura.
Rítide é o termo utilizado como sinônimo de ruga. De acordo com Guirro & Guirro
(2007), as rugas ocorrem devido à diminuição das fibras elásticas, presentes no tecido
conjuntivo, aliada à rigidez gradual do colágeno.
A poiquilodermia solar é caracterizada por reticulado telangiectásico nas faces laterais
do pescoço e região infra-hióidea sendo comumente encontrada em pessoas de pele clara
(SIMIS & SIMIS, 2006). As telangiectasias são manchas vásculo-sanguíneas caracterizadas
por dilatação de pequenos vasos sanguíneos e linfáticos (BARROS, 2009).
Melasma é uma zona de hipercromia facial. Manifesta-se sob a forma de máculas
irregulares e mal definidas, afetando bilateralmente as bochechas, as têmporas e a fronte. Esta
hipercromia pode ser acentuada através da exposição à luz solar, sendo muito comum durante
a gravidez (MURPHY & MIHM, 1996).
Dentre os termos microscópicos abordados no presente estudo, podem ser citados:
23
acantose, hiperceratose e hipergranulose.
Acantose refere-se à hiperplasia da epiderme, ou seja, consiste no aumento do número
de células da epiderme, que se mostra espessada. A hiperceratose, por sua vez, é o aumento da
espessura da camada córnea, geralmente associada a uma anormalidade qualitativa da
queratina. Já a hipergranulose, é o aumento do número de células na camada granulosa
(GUEDES & FURTADO, 2000; MURPHY & MIHM 1996).
3.3 - Radiação ultravioleta, fotoenvelhecimeto e envelhecimento cronológico
O sol é a principal fonte geradora de radiação ultravioleta, sendo que esta corresponde
a menos de 9% do espectro eletromagnético que chega à superfície da Terra (SILVA, 2008).
A radiação ultravioleta (RUV) divide-se em três faixas: UVC (100-290nm), UVB
(290- 320nm) e UVA (320 a 400nm), sendo que cada uma difere de acordo com os efeitos
biológicos que causam (GUARATINI et al., 2007). Simis & Simis (2006) relatam que a
maior parte do UVC é absorvida pela camada de ozônio.
A poluição atmosférica tem sido responsável pela destruição da camada de ozônio e,
como conseqüência, tem favorecido ao aumento nos níveis de RUV incidentes na superfície
da Terra. A incidência de radiação ultravioleta B (RUV-B) está diretamente relacionada com
danos na pele, propiciando, desta forma, um aumento no interesse de prevenção contra tais
danos (HWANG et al.,2006).
Dentre os danos cutâneos causados pela RUV podem ser citados o eritema calórico, a
queimadura solar, o fotoenvelhecimento, a fotossensibilidade e o câncer de pele. A
fotossensibilidade pode causar reações fotoalérgicas e fototóxicas. No primeiro tipo de reação
citada, ocorre a ativação do sistema imune, ou seja, a luz solar promove reações entre as
substâncias alergênicas e as proteínas da pele gerando uma resposta imunológica e, como
24
conseqüência, a produção de anticorpos específicos. Já as reações fototóxicas ocorrem quando
uma substância fotoreativa é exposta à radiação solar com o conseqüente desenvolvimento de
eritemas, edemas, esfoliações e hiperpigmentação (RAMOS et al., 2005).
A energia da radiação solar depende do comprimento de onda, sendo mais evidente
em comprimentos de ondas menores. Por outro lado, se considerarmos a capacidade de
penetração da RUV, esta será maior em comprimentos de ondas maiores, como é o caso da
radiação UVA. Desta forma, quanto menor a quantidade de energia, maior a capacidade de
permeabilidade, acarretando maiores alterações estruturais a nível dérmico (FLOR et al.,
2007).
O fotoenvelhecimento está diretamente relacionado com as mudanças
comportamentais associadas a uma maior exposição solar visando uma valorização estética
através do bronzeamento. Para isso, muitas pessoas recorrem à exposição à RUV tanto natural
quanto artificial. Além deste fato a prática de atividades ao ar livre, associada à utilização de
indumentárias que permitem uma maior exposição de áreas do corpo como face e membros,
sem a devida proteção com o uso de filtros solares, têm contribuído para o aumento no
número de casos de envelhecimento cutâneo (SOUSA et al., 2004).
É válido destacar que apesar dos efeitos deletérios e cumulativos da RUV, esta é capaz
de propiciar benefícios ao indivíduo desde que a exposição aos raios solares ocorra dentro dos
horários de menor incidência de RUV. Além deste fato é necessário uma correta utilização de
filtros solares e indumentárias especiais. A formação de vitamina D é um fato comprovado
dos benefícios advindos da RUV e pode ser uma alternativa para a profilaxia e tratamento do
raquitismo, desde que haja uma conscientização do indivíduo quanto aos riscos do excesso de
exposição (PINTO & XAVIER, 2011).
O envelhecimento da pele pode ser classificado em dois tipos: envelhecimento
intrínseco ou cronológico e envelhecimento extrínseco ou fotoenvelhecimento, sendo que em
25
ambos os tipos, a propriedade viscoelástica da pele encontra-se comprometida graças às
alterações estruturais, principalmente nas fibras elásticas, que ocorrem na derme
(GONÇALVES & CAMPOS, 2009).
Hachiya et al. (2009) relatam que a pele fotoenvelhecida caracteriza-se ainda por
desorganização das fibras elásticas e redução de colágeno na matriz extracelular.
O envelhecimento intrínseco ocorre de forma lenta e gradual, caracterizado
principalmente por atrofia progressiva da pele. Além disso, observam-se diminuição da
extensibilidade e elasticidade (FIGURA 3). O fotoenvelhecimento, por sua vez, ocorre devido
à exposição prolongada a fatores ambientais, principalmente à RUV, superpondo-se ao
envelhecimento intrínseco. As alterações cutâneas características deste tipo de
envelhecimento ocorrem de forma mais agressiva, caracterizando-se por uma pele manchada,
áspera, dura, amarelada e espessa. A pele jovem e não agredida pelo sol, por outro lado,
apresenta-se uniformemente pigmentada, com textura macia e sem manchas (FIGURA 4)
(BATISTELA et al., 2006).
FIGURA 3: Representação esquemática do processo de formação de rugas. Observa-se uma redução na
quantidade de fibras de colágeno assim como na quantidade de fibroblastos.
Compilado de: http:www.dermatopatologia.com/pele/default.asp. Acesso em 11 de maio de 2010.
26
FIGURA 4: Características macroscópicas da pele fotoenvelhecida.
FONTE: <http://www.dermatologia.net/novo/base/index.shtml> Acesso: 6 de maio 2010.
O fotoenvelhecimento é caracterizado por muitas alterações histológicas. Observa-se
adelgaçamento da camada espinhosa na epiderme assim como achatamento da junção dermo-
epidérmica. As células de Langerhans diminuem em número e função, resultando em perda da
imunidade cutânea. Os queratinócitos envelhecidos tornam-se resistentes à apoptose,
tornando-se susceptíveis às mutações do DNA. Ocorre também diminuição do número de
melanócitos.O metabolismo do colágeno sofre alterações com a idade. Observa-se um
declínio na sua produção e aumento na sua degradação (MONTAGNER & COSTA, 2009).
As alterações visíveis na pele devem-se a reações fotobiológicas que ocorrem devido à
penetração da radiação no tecido cutâneo que, por sua vez, podem ocorrer de forma direta,
quando a RUV entra em contato direto com o DNA celular, ou, indireta, quando há a
produção de radicais livres e esses interagem com o DNA ( MONTAGNER & COSTA,
2009).De acordo com Timares et al. (2006), para que tal fato ocorra, é necessária a absorção
da RUV por receptores biológicos denominados cromóforos.
De acordo com Batistela et al. (2007), o envelhecimento cutâneo, em especial o
fotoenvelhecimento relaciona-se diretamente com o tipo de pele, assim como aos hábitos do
27
indivíduo. Pessoas de pele mais clara, apresentam maior predisposição ao envelhecimento
extrínseco mais precocemente se comparadas com pessoas de pele negra, por exemplo. O uso
de filtros solares, assim como a correta utilização dos mesmos, são fatores que devem ser
estimulados independente do fototipo da pele.
Vale ressaltar que a fotoproteção é importante visto que os efeitos deletérios da RUV
são cumulativos e irreversíveis, sendo estes capazes de desenvolver reações bioquímicas ao
longo dos anos (SOUZA et al., 2005). Porém, de acordo com estes autores tem-se observado
um aumento no número de casos de fotoenvelhecimento assim como de melanoma cutâneo
em indivíduos que utilizam protetores solar sendo tal processo denominado “paradoxo da
fotoproteção”. Este fato se justifica pela falta de conscientização quanto à forma correta de
aplicação do fotoprotetor assim como a necessidade de reaplicação do mesmo durante a
exposição solar. Sendo assim, muitas pessoas, por sentirem mais protegidas ao utilizarem um
protetor solar, abusam da exposição sem considerar os cuidados necessários para a eficácia de
tais produtos.
A penetração da RUV nas duas camadas cutâneas dependerá do comprimento de onda.
A radiação UVB (290-320nm) é mais absorvida na epiderme e derme superficial, enquanto
que o UVA (320-400nm) atinge tanto a epiderme quanto a derme profunda (KWON et al.
2005; MONTAGNER & COSTA, 2009). Desta forma, segundo estes mesmos autores, serão
encontradas alterações histológicas em ambas as camadas cutâneas. Na epiderme observa-se
diminuição da espessura da camada espinhosa seguida por achatamento da junção dermo-
epidérmica. Ocorre ainda uma redução no número de melanócitos assim como das células de
Langerhans, podendo ocorrer ainda mutações no DNA de queratinócitos envelhecidos, fator
este relacionado com o risco de carcinogênese.
A redução no número de células de Langehans somado às alterações do DNA de
queratinócitos contribui para um efeito imunossupressor, visto que tais células objetivam
28
defender a pele contra agentes agressores (JUCHEM et al., 1998). Desta forma, aumenta-se a
predisposição ao desenvolvimento de infecções, efeitos neoplásicos e até mesmo o
fotoenvelhecimento.
A derme, por sua vez, será caracterizada, histologicamente, por desorganização das fibras
colágenas assim como por dilatação dos vasos sanguíneos tornando-se tortuosos (PINNELL,
2003). Fisher et al. (2009) relatam que a pele fotoenvelhecida caracteriza-se ainda por
destruição das fibras de colágeno, assim como por declínio na produção das mesmas.Em seu
artigo, os referidos autores relatam que a desintegração destas fibras deve-se à ativação de
enzimas denominadas metaloproteinase de matriz (MMPS). Estas enzimas, na pele saudável,
trabalham com o objetivo de garantir o equilíbrio entre produção e degradação de colágeno.
No entanto, esta homeostasia é rompida a partir do momento em que ocorre um aumento na
produção deste tipo de enzima.
As fibras elásticas, por sua vez, também serão alteradas, tornando-se encurtadas e mais
espessas. As mudanças estruturais em ambos os tipos de fibras, em conjunto, serão
responsáveis pelas mudanças na propriedade viscoelástica da pele, o que ocasiona a formação
de rugas (NISHIMORI et al., 2001).
Além das alterações histopatplógicas observadas na pele fotoenvelhecida, de acordo
com Gonçalves e Campos et al. (2009), observa-se também um aumento exacerbado da perda
transepidérmica de água, acarretando, desta forma,uma maior vulnerabilidade à agentes
externos e desidratação.
Antes de iniciar o tratamento para fotoenvelhecimento, é necessário que o especialista
seja capaz de avaliar o grau de dano solar. Esta avaliação apresenta como objetivo buscar as
alterações pigmentares, o número de ceratoses solares ou epiteliomas ou mesmo outros tipos
de câncer, o grau de rítides, ou rugas, induzidas pelo sol e a presença ou ausência de
poiquilodermia. Para isto, Glogau desenvolveu uma classificação para o fotoenvelhecimento
29
que, por sua vez, é útil na avaliação do dano actínico, demonstrada na tabela 2
(MAGALHÃES & HOFMEISTER, 2004).
Tabela 2. Classificação de Glogau: Grupos de Fotoenvelhecimento
Grupo 1: Leve (usualmente entre 20-35 anos)
Sem queratoses
Poucas rugas
Sem cicatrizes
Pouca ou nenhuma maquiagem habitual
Grupo 2: Moderada (usualmente entre 35-50 anos)
Ceratoses actínicas iniciais – leve descoloração amarelada da pele
Rugas iniciais – linhas paralelas ao sorriso
Poucas cicatrizes
Pouca maquiagem
Grupo 3: Avançada (usualmente entre 50-65 anos)
Ceratoses actínicas – descoloração amarelada óbvia com telangiectasias
Rugas – presentes em repouso
Cicatrizes de acne moderadas
Usa maquiagem sempre
Grupo 4: Severa (usualmente entre 60-75 anos)
Ceratoses actínicas e câncer cutâneo ocorreram
Rugas- muita flacidez e rugas de origem actínica, gravitacional e dinâmica
Cicatrizes acnéicas severas
Usa maquiagem sempre, que não cobre, mas “emplastra”.
FONTE: Kede e Sabatovick., 2004. Dermatologia Estética
3.4- Luz Emitida por Diodo (LED)
O LED é composto por um diodo semicondutor que, ao ser energizado emite luz.
Geralmente a luz é monocromática e sua cor está diretamente relacionada ao material
semicondutor empregado. É utilizado, na área da saúde, como uma terapia não ablativa no
processo de rejuvenescimento da pele fotoenvelhecida. Trata-se de uma modalidade segura na
qual os comprimentos de onda são absorvidos na pele e utilizados no reparo do tecido, através
30
de um processo denominado fotobiomodulação (BAEZ et al., 2007; MARTINS et al., 2007).
A constituição do LED é baseada em uma estrutura emissora de luz geralmente com
uma área de secção quadrada entre 0,18 mm² e 0,36 mm². Tal estrutura é formada por um
material semicondutor como, por exemplo, o Fosfeto de Arseneto de Gálio (GaSP) ou Fosfeto
de Gálio (GaP) e, por sua vez, é rodeada por uma cavidade refletora sendo esta responsável
pela reflexão direcionada da luz. Esta estrutura é ainda envolta por uma cápsula de resina
epóxi que não apenas a protege como também permite a dispersão da luz emitida, o que pode
ser evidenciado, esquematicamente, na figura 5 (CAVALCANTE et al., 2005; MARTINS et
al., 2007).
FIGURA 5: (A) Esquema representativo da estrutura e componentes de um LED; (B) Dispositivo de um
LED e cavidade refletora, observados ao microscópio.
Compilado de: < http://www.forumpcs.com.br> Acesso em: 26 jmaio 2010.
A LEDterapia é o termo utilizado para definir a aplicação do LED à saúde. Este
procedimento tem ganhado espaço principalmente na fisioterapia dermatofuncional assim
como na medicina estética devido aos resultados obtidos no tratamento não apenas do
fotoenvelhecimento como também na cicatrização de feridas, na terapia para acne e na queda
de cabelo. No entanto, é válido ressaltar que para cada tipo de tratamento é adotado um
comprimento de onda específico dentro do espectro eletromagnético que varia de 405 nm
31
(azul) a 940 nm (vermelho) (KHOSHNEGAR et al.,2010).
Para que o LED tenha sua ação bem sucedida é necessária a ocorrência de reações
fotobioquímicas sendo estas dependentes da absorção de fótons por cromóforos moleculares
ou fotoaceptores. Para que ocorra a ativação de um determinado cromóforo é necessária a
utilização de doses e comprimentos de onda específicos (WEISS et al., 2005).
De acordo com Weiss et al. (2005), dentre os mecanismos envolvidos na
fotobiomodulação inclui a ativação de transferência de energia na mitocôndria. Tal fato deve-
se à absorção da luz por moléculas específicas localizadas na membrana mitocondrial.
Segundo estes autores, a luz absorvida causa mudanças conformacionais na membrana de tais
organelas favorecendo o incremento de energia e, consequentemente a atividade celular.
Os fibroblastos sofrem o processo acima descrito sendo evidenciado um aumento na
produção de colágeno que, por sua vez, é necessário ao processo de rejuvenescimento cutâneo
(GERONEMUS et al., 2003). Estes mesmos autores realizaram um experimento com culturas
de fibroblastos de pele humana e, observaram que além do aumento na síntese de fibras
colágenas, observa-se uma redução das metaloproteinases de matriz (colagenases), sendo
estas responsáveis pela degradação do colágeno. Desta forma, conclui-se que a soma destes
dois efeitos, aumento na síntese de colágeno e redução das proteínas que o destroem, serão
responsáveis por resultados satisfatórios no tratamento do fotoenvelhecimento pelo uso da
terapia com LED.
Experimentos com LED vermelho (670 nm) na cicatrização de feridas induzidas em
modelo experimental, realizados por Erdle et al. (2008) , demonstraram efeitos satisfatórios
devido aos mecanismos já mencionados. A cicatrização nada mais é que o preenchimento da
região lesada por tecido conjuntivo, ou seja, colágeno. Sendo assim, tanto no
fotorejuvenescimento com LED quanto na cicatrização de feridas, o processo será o mesmo.
Tais achados vão de encontro com trabalhos desenvolvidos por Agnol et al. (2009) e Whelan
32
et al. (2003).
A National Aero Space Agency (NASA) nos Estados Unidos foi a primeira a estudar os
efeitos da fotobiomodulação através da utilização do LED sendo observada, pelos cientistas, a
ocorrência de regeneração tecidual de forma mais rápida e intensa, mesmo no espaço, onde se
esperava que este processo devesse ocorrer de forma mais lenta. Sendo assim, tais estudos
evidenciaram a eficiência do LED nos processos de estimulação celular (DIAS et al., 2009).
De acordo com Trelles et al. (2007), o LED com comprimento de onda de 415 nm
(azul) geralmente é utilizado para o tratamento de acne, o comprimento de onda de 633 nm
(vermelho), por sua vez, é útil para uma grande variedade de situações assim como o
comprimento de onda de 830 nm. A luz azul de 415 nm apresenta uma ação fotodinâmica
endógena sobre as porfirinas naturais existentes no Propionibacterium acnes, denominadas
coproporfirina III e protoporfirina 9 , causando deste modo, a destruição da bactéria através
da apoptose mediada por um processo oxidativo. Já a luz vermelha é importante para o
processo de cicatrização de feridas por estimular o fator de crescimento de fibroblastos.
O LED tem sido ainda amplamente utilizado da Terapia Fotodinâmica (TFD) para o
tratamento do fotorejuvenescimento cutâneo. De acordo com Pinto e Silva (2011) esta
modalidade terapêutica baseia-se em três fatores essenciais: droga fotossensibilizante, fonte
de luz LED ou LASER e a presença efetiva de oxigênio. O agente fotossensibilizante
utilizado possui afinidade pelas células displásicas induzindo, assim, citotoxidade com
conseqüente morte celular seletiva. Porém, tal processo só ocorre quando esta substância é
ativada por uma luz específica e em presença de oxigênio.
Pinto et al. (2009), utilizou a TFD para o tratamento de inflamação granulomatosa
induzida em ratos Wistar através da combinação do LED com o fotosensibilizador azul de
metileno. Ao final do experimento este tipo de terapia mostrou-se eficiente na resolução do
processo inflamatório.
33
Carvalho et al. (2009) utilizaram o LED de 850 nm como tratamento coadjuvante da
fibromialgia. De acordo com estes autores, este comprimento de onda ao interagir com o
tecido, resulta na produção de beta-endorfinas e controle da produção de prostaglandinas,
resultando na diminuição da intensidade da dor e até mesmo analgesia.
A tabela 3 representa as aplicações da LEDterapia de acordo com cada comprimento
de onda.
Tabela 3: Ação da LEDterapia X comprimento de onda
Comprimento
de onda
Azul (415 nm) Vermelho (670 nm) Infra-vermelho
(850 nm)
Efeitos
Bactericida
(tratamento da
acne)
Vasodilatador,
cicatrizante,
Rejuvenescimento
Antiinflamatório,
analgesia.
3.5-LASER
LASER é um acrônimo de “Light Amplification by Stimulated Emission of Radiation”,
ou seja, “Luz Amplificada por Emissão Estimulada de Radiação”. Esta modalidade
terapêutica, por sua vez, diferencia-se de outras fontes luminosas por possuir características
únicas: monocromaticidade, coerência e colimação (GENOVESE, 2000).
Monocromaticidade significa que a emissão da luz LASER será caracterizada por um
mesmo comprimento de onda, sendo desta forma, uma luz pura, com uma única cor. A
coerência refere-se à uniformidade de suas ondas, estando sempre em fase no tempo e no
espaço. A colimação, por sua vez, relaciona-se ao paralelismo de seus feixes (AGNE, 2007).
Tais características estão representadas nas figuras 6, 7e 8.
34
FIGURA 6: Coerência da luz LASER.Comprimentos de onda coerente no tempo e espaço (A).
Comprimentos de onda incoerentes no tempo e espaço (B).
Compilado de: NEVES et al. (2005) .
FIGURA 7: Colimação da luz LASER. A luz natural é divergente ao contrário que a luz LASER é
paralela ao tubo onde é produzida.
Compilado de: NEVES et al. (2005)
FIGURA 8: Monocromaticidade da luz LASER (possui apenas um comprimento de onda),
enquanto que a luz branca comum possui vários comprimentos de onda, portanto várias cores.
FONTE: Adaptado de NEVES et al.( 2005)
35
Os LASERs podem ser divididos em categorias de acordo com sua potência. As
categorias I e II referem-se à potência muito baixa e emitem luz vermelha visível. Não
produzem aquecimento nem efeitos na pele, porém, podem produzir lesões oculares quando
incidida diretamente sobre os olhos e de forma prolongada. Estes tipos de LASERs são
utilizados nos leitores de código de barras, leitores de CD e impressoras a LASER e não
possuem aplicações terapêuticas (AGNE, 2007).
Os LASERs pertencentes às categorias IIIA e IIIB apresentam potência média,
geralmente inferior a 50 mW, com luz vermelha visível ou infravermelha invisível sendo
utilizados na fisioterapia e conhecidos como LASERterapia de baixa intensidade. Nesta
classificação, o feixe não apresenta efeito térmico apreciável e não causam lesões cutâneas se
aplicados corretamente. No entanto, assim como os pertencentes às categorias I e II, são
perigosos quando atingem os olhos tanto de forma direta quanto por reflexão tornando o uso
de óculos adequados para proteção (AGNE, 2007).
Já na categoria IV, estão incluídos aqueles de potência elevada e, por sua vez, são
utilizados em processos cirúrgicos para coagulação ou corte, para o tratamento de tumores e
para cauterização em oftalmologia. Tais equipamentos são de uso e manuseio médicos. O
efeito térmico da radiação LASER sobre os tecidos é a base do denominado LASER cirúrgico
(AGNE, 2007).
OS LASERs emitem luz tanto de maneira contínua quanto em pulsos. Os raios de onda
contínua (OC), ao contrário dos pulsados, não são capazes de atingir o pico instantâneo. Dessa
forma, a natureza da interação LASER-tecido é geralmente diferente quando comparados os
tipos contínuos e pulsados de alta energia. Dentre os LASERs de onda contínua encontrados
na dermatologia podem ser citados os LASERs de argônio (azul/verde), argônio com corante
bombeado (pumped dye), neodymium: ytrium-aluminium-garnet (Nd:YAG) e CO²
(infravermelho longo). Estes são utilizados na área médica e são consagrados para a
36
realização de vaporização tecidual e coagulação. Alguns LASERs pulsados comportam como
se fossem LASERs contínuos por produzirem pulsos em freqüência rápida e com pequena
energia por pulso sendo denominados LASERs de onda quase contínua (OQC) que
apresentam as mesmas funções dos contínuos. Como exemplo deste tipo, podem ser citados
os de vapor de cobre (verde/amarelo) e os KTP. Já os LASERs pulsados de alta energia
podem induzir uma fototermólise seletiva, um processo no qual a lesão térmica é confinada
microscopicamente aos sítios de absorção cutânea, como vasos sanguíneos e células
pigmentadas. Os LASERs de corante pulsado tunable (amarelo,585 nm), rubi e Nd:YAG Q-
switched (infravermelho curto, 1.064 nm e verde ,532 nm) são exemplos de LASERs
pulsados (HERD et al.,2005).
Os feixes de LASER, ao atingirem o tecido, podem desencadear três efeitos distintos:
efeitos fototérmicos, que derivam diretamente do calor; efeitos fotoquímicos, derivados de
reações fotoquímicas originais ou induzidas por fotossensibilizantes; efeitos fotomecânicos,
que resultam de expansão térmica extremamente rápida, ondas de pressão e ondas de choque.
Estes três modelos de interação do LASER freqüentemente coexistem, mas um ou dois
geralmente são dominantes. Tais efeitos dependem da transferência de energia do LASER
para o tecido, porém, para que esta transferência ocorra é necessário que haja uma ressonância
entre o comprimento de onda do LASER e a cor da molécula alvo (cromóforo) (HERD et al.,
2005).
O efeito fototérmico ocorre quando o cromóforo absorve a energia com o comprimento
de onda correspondente e, a energia luminosa se converte em calor capaz de destruir o alvo
atingido. Quando a expansão térmica ocorre de forma extremamente rápida é capaz de
produzir ondas acústicas e destruição fotomecânica do tecido que a absorveu. Estes dois tipos
de efeitos descritos são os mais comumente utilizados na prática da cirurgia cutânea com a
utilização de LASERs de alta intensidade (PATRIOPA, 2007).
37
Quanto ao efeito fotoquímico, a energia absorvida pode atuar de duas maneiras:
estimulando a liberação de substâncias pré-formadas, como a histamina, serotonina e
bradicinina ou, modificando as reações enzimáticas normais, tanto no sentido de excitação
quanto de inibição. Além deste fato, a radiação LASER exerce um estímulo na produção de
ATP no interior das células, originando e promovendo a aceleração das mitoses. Vale ressaltar
que o efeito fotoquímico é o princípio básico da terapia fotodinâmica visto que se baseia em
uma reação química após a absorção da luz por agentes fotossensibilizantes (endógenos ou
exógenos) (GUIRRO & GUIRRO, 2007; PATRIOTA, 2007).
O tipo de reação resultante da interação LASER-tecido dependerá ainda da intensidade
do aparelho. LASER de alta intensidade, no qual se observa níveis de potência e energia
relativamente altos além de características altamente colimadas ou focalizadas, podem
facilmente acarretar reações fototérmicas nos tecidos, inclusive com efeitos ablativos ou
explosivos. Por outro lado, a LASERterapia de baixa intensidade baseia-se em reações não-
térmicas (BAXTER, 1998).
De acordo com Guirro & Guirro (2002), os estratos biológicos representam uma
barreira à penetração da radiação LASER. Devido à complexa estrutura dos estratos cutâneos
o feixe de LASER pode sofrer quatro processos nos diferentes estratos cutâneos: a reflexão, a
absorção, a transmissão e a difusão. A penetração da radiação LASER será tanto maior quanto
maior for o comprimento de onda (FIGURA 9).
Normalmente, a reflexão ocorre na interface dos diferentes estratos. Tal fato ocorre
devido à diferença de índice de reflexão entre os mesmos. A absorção, por sua vez, será
responsável pelo desencadeamento de um processo bioquímico ou bioelétrico. O tipo de
LASER utilizado está diretamente relacionado com a absorção da radiação pelos diferentes
tecidos, uma vez que cada tecido absorve diferentes comprimentos de onda. Isso ocorre, pois
cada comprimento de onda possui um fototropismo positivo para determinados tecidos.
38
Assim, o LASER de Hélio-neônio (HeNe) é absorvido por tecidos preferencialmente
vermelhos. A transmissão refere-se ao percurso da radiação nos diferentes estratos. Já a
difusão ocorre pelas moléculas, fibras ou células no interior dos estratos. É dependente das
dimensões das partículas que formam o estrato em relação com o comprimento de onda em
que se emite a radiação (GUIRRO & GUIRRO, 2007).
Para que exista efeito clínico é necessário que a luz seja absorvida pelo tecido. A luz
que sofre reflexão, transmissão ou dispersão não apresenta nenhum efeito. A unidade de
medida utilizada para a energia absorvida é Joules/cm² (J/cm²) e é conhecida como densidade
de energia ou fluência. A absorção da luz LASER pelo tecido relaciona-se diretamente com a
quantidade de cromóforo existente e também com o comprimento de onda correspondente às
características de absorção daquele cromóforo. A água, a melanina e a hemoglobina são os
principais cromóforos endógenos da pele. O principal cromóforo exógeno é a tinta de
tatuagem (PATRIOTA, 2007).
FIGURA 9: Resposta tecidual à luz LASER.
FONTE: Selected Readings in Plastic Surgery, 2003.
A absorção, assim como a dispersão, define a profundidade de penetração da energia
do LASER na pele. A dispersão geralmente é mínima na epiderme sendo maior na derme
devido à presença de fibras colágenas que dispersam a energia. A dispersão é inversamente
LUZ
Reflexão
Transmissão
Dispersão
Absorção
39
proporcional ao comprimento de onda, ou seja, quanto maior o comprimento de onda mais
profunda é a penetração da energia do LASER (FIGURA 10). Sendo assim, comprimentos de
onda entre 300 e 400 nm dispersam mais e penetram menos. Por outro lado, comprimentos de
onda entre 1000 e 1200 nm dispersam menos e penetram mais (PATRIOTA, 2007).
FIGURA 10: Profundidade de penetração dos comprimentos de onda na pele.
Compilado de: SIMUNOVIC, Z; TROBONJACA, T. (2000) Lasers in Medicine and Dentistry-Basic Scienc
andu p-to-date Clinical Aplication of Low Energy-Level Laser Therapy.
A radiação tecidual com fontes de luz de baixa intensidade.
Dentre os LASERs de baixa intensidade utilizados na área da saúde para o tratamento de
afecções cutâneas destaca-se, atualmente, o diodo visível de 632,8 nm denominado
antigamente como HeNe . Este, por sua vez foi o primeiro LASER utilizado na dermatologia,
objetivando, principalmente, a cicatrização de feridas, porém, foi substituído pelo diodo
visível mantendo-se o mesmo comprimento de onda e os mesmos efeitos biológicos. Era
composto por uma combinação destes dois tipos de gases nobres, sendo tal mistura
constituída por 90% de hélio e 10% de neônio. Dentre os efeitos fisiológicos provenientes
deste comprimento de onda podem se citados o aumento no número de fibroblastos e,
conseqüentemente de fibras colágenas, regeneração dos vasos sanguíneos a partir dos já
existentes, aumento da velocidade de crescimento de nervos seccionados e aumento do ritmo
de divisão celular. (GENOVESE, 2000).
40
Estudos realizados por Júnior et al. (2006) evidenciaram aumentos da
neovascularização e da proliferação fibroblástica em feridas tratadas em ratos Wistar com
LASER de baixa intensidade.
Outro ponto a ser destacado, além do aumento na produção de colágeno é a sua
organização sendo que esta característica, de acordo com Arruda et al. (2007) deve-se,
provavelmente, ao fato de que a terapia LASER de baixa intensidade possa causar um sinal na
matriz extracelular, produzindo mudanças nas estruturas fibrilares. Este seria um fator
importante não apenas no processo de cicatrização de feridas como também no
fotorejuvenescimento.
Assim como o LED, o LASER atua à nível mitocondrial propiciando um incremento
na produção de energia, sendo tal fato evidenciado nos fibroblastos garantindo, desta forma,
uma maior produção de fibras de colágeno (TAFUR & MILLS ,2008).
4-METODOLOGIA
4.1- Grupos Experimentais e número de animais
Foram utilizados, inicialmente, 40 camundongos machos BALB-c, provenientes do
Biotério Central da Universidade Federal de Minas Gerais (UFMG) e mantidos no Biotério
Central do Centro Universitário de Caratinga (UNEC). Os animais com idade a partir de oito
semanas e com pesos iniciais entre 19 ± 26,4g foram mantidos em vinte gaiolas com dois
animais cada, sendo supridos com água e alimento à vontade, acondicionados à temperatura
ambiente entre 22-24ºC, com ciclo de luz de 12 horas (claro-escuro).
Os animais foram divididos em quatro grupos, conforme especificado na tabela 4:
41
Tabela 4: Grupos experimentais utilizados no estudo
Grupos experimentais Número de animais (n)
Grupo controle n= 8
Grupo UV n=10
Grupo UV+LED n=10
Grupo UV+LASER n=10
Total n=38
Os animais do grupo controle foram submetidos apenas à exposição à lâmpada isenta
de RUV, marca Philips 25 W. O grupo UV refere-se aos camundongos submetidos apenas à
RUV sem qualquer tipo de tratamento. Nos grupos UV+LED e UV+LASER estão incluídos
os animais submetidos à RUV e tratados respectivamente com LED e LASER. Foram
excluídos 2 animais do grupo controle, pertencentes à mesma gaiola, devido à lesões cutâneas
no dorso dos mesmos em decorrência de lutas entre eles.
Todos os animais foram pesados e submetidos à tricotomia do dorso semanalmente,
incluindo o grupo controle. Para a mensuração do peso, foi utilizada uma balança de precisão
da marca MARTE® (FIGURA 11).
Para a realização do experimento, o presente projeto foi aprovado pelo Comitê de Ética
do Centro Universitário de Caratinga (UNEC), com protocolo número 041/10.
42
FIGURA 11: Balança de precisão (A); Mensuração do peso dos animais (B).
4.2- Projeto piloto
Antes do início do experimento, foi realizado um piloto com sete camundongos
BALB-c para testar diferentes tempos de irradiação com RUV, a fim de se encontrar a dose
eritematosa mínima (DEM) com a utilização da lâmpada Philips TL 40W/12RS. De acordo
com Goettsch et al. (1998), a DEM é a menor dose de irradiação ultravioleta capaz de causar
eritema na pele de 24 a 72 horas após irradiação.
A realização do piloto tornou-se necessária, pois não dispúnhamos de radiômetro para
a mensuração da intensidade da lâmpada e, o protocolo no qual nosso estudo se baseou para a
indução do fotoenvelhecimento, foi realizado com ratos sem pêlo Hos:HR-1. Em nosso
experimento foram utilizados camundongos BALB-c, pois, estudos realizados por Goettsch et
al. (1998) e Carneiro et al. (2007) demonstraram resultados satisfatórios na indução do
fotoenvelhecimento com a utilização destes animais. Sendo assim seria interessante testarmos
os efeitos da RUV na pele do dorso dos camundongos utilizados através da exposição a
diferentes tempos de irradiação.
É válido ressaltar que, de acordo com Agne (2007), o teste de Saidman deve ser
43
utilizado para verificar a DEM, porém no presente experimento, não foi possível a execução
deste teste pela dificuldade encontrada para a imobilização dos animais. Sendo assim, este foi
mais um motivo que levou à realização do projeto piloto
Os animais foram divididos da seguinte forma: R1 foi apenas tricotomizado sem
exposição à RUV, sendo considerado o animal controle. Os demais foram tricotomizados e
irradiados, sendo o animal R2 durante 3 minutos, R3 durante 5 minutos, R4 durante 7 minutos
e 30 segundos, R5 durante 15 minutos, R6 durante 30 minutos e R7 durante 1 hora
(FIGURAS 12 e 13).
Foram realizadas análises macroscópicas através da observação de eritema na pele do
dorso dos animais.
A temperatura das lâmpadas de RUV foi mensurada através de um termômetro da
marca Standard Light Red Non-Contact Thermometer CE, modelo IR 88, número 06146236,
sendo encontrada a temperatura de 31⁰C.
De acordo com as características macroscópicas obtidas nos animais pertencentes ao
piloto, a DEM foi observada no animal exposto à RUV durante 7 minutos e 30 segundos, indo
de encontro com relatos de Oosten et al. (2000). De acordo com estes autores, comparando-se
as lâmpadas FS40 e Philips 40W/TL12, constatou-se que esta última induz o mesmo efeito
biológico na pele de ratos com a metade da dose necessária com a lâmpada FS40.Segundo
Molen et al. (2002), 1DEM com a lâmpada FS40 corresponde a 15 minutos de irradiação,
então, 1DEM com a lâmpada Philips 40W/TL12, corresponde a metade, ou seja, 7 minutos e
30 segundos, confirmando os resultados encontrados no piloto.
De acordo com Purim et al. (2010), os distúrbios cutâneos dependem do tipo de pele e
tempo de exposição solar, em conjunto com as características raciais e imunogenéticas. Como
a DEM é a menor quantidade de RUV capaz de causar eritema após 24 a 72 horas, quanto
maior for o tempo de exposição, maior será a DEM.
44
FIGURA 12: Fotomiografias de camundongos BALB-c submetidos à dose única de RUV. A-
Ausência de eritema em R2 72 horas após a irradiação durante 3 minutos; B- Ausência de eritema em
R3 72 horas após a irradiação durante 5 minutos; C e D- Presença de eritema em R4 72 horas após a
irradiação durante 7 minutos e 30 segundos (setas).
FIGURA 13: Fotomiografias de camundongos BALB-c submetidos à dose única de RUV com
diferentes tempos de irradiação. A-R5 (à direita) irradiado durante 15 minutos demonstrando eritema
72 horas após a irradiação. À esquerda animal controle (R1); B- R6 irradiado durante 30 minutos
evidenciando-se eritema com formação de crosta 72 horas após a irradiação. C- R7 (à direita) irradiado
durante 1 hora com sinal de eritema e crosta 48 horas após a irradiação se comparado com R1 (à
esquerda); D- Fotofobia demonstrada em R7. Os sinais de eritema estão sendo demonstrados através
das setas.
45
4.3- Indução do fotoenvelhecimento
Os animais dos grupos UV, UV+LED e UV+LASER foram submetidos à RUV através
da exposição do dorso previamente tricotomizado a duas lâmpadas de radiação ultravioleta B
(UVB) da marca Philips TL40W/ 12RS (ANEXO 1).
É importante destacar que antes do início do experimento, as lâmpadas permaneceram
ligadas durante 100 horas, pois de acordo com Goettsh et al. (1998) nas primeiras 100 horas
de uso, ocorre variação da intensidade de irradiação. De acordo com estes mesmos autores, os
animais deveriam permanecer a uma distância de 25 cm das lâmpadas.
A indução do fotoenvelhecimento foi realizada em um período de sete semanas através
da modificação do protocolo adotado por Tanaka et al. (2009). Na primeira e segunda semana
os animais foram irradiados três vezes na semana durante um minuto. Na terceira semana, a
irradiação ocorreu também três vezes, porém com duração de dois minutos. Na quarta
semana, foram realizadas três sessões de três minutos cada. Na quinta semana, a duração da
irradiação aumentou para quatro minutos sendo realizadas duas sessões. Na sexta e sétima
semanas foram realizadas sete sessões com duração de 3 minutos cada (Tabela 5).
Tabela 5. Protocolo adotado para indução do fotoenvelhecimento.
Semanas Número de sessões Duração
Primeira 3 1 min
Segunda 3 1 min
Terceira 3 2 min
Quarta 3 3 min
Quinta 2 4 min
Sexta 7 3 min
Sétima 7 3min
Adaptado de Tanaka et al. (2009).
46
Pode-se observar, através do protocolo adotado, que o mesmo baseia-se em variações
no tempo de exposição dos animais à RUV no decorrer do experimento, porém os tempos
utilizados foram sempre inferiores a 7 minutos e 30 segundos, referente à 1DEM. Tal fato é
importante, pois, segundo Goettsch et al. (1998), doses sub-eritematosas de RUV são capazes
de causar alterações microscópicas como hiperqueratose e processo inflamatório, necessárias
para a indução do fotoenvelhecimento. De acordo com estes mesmos autores, a utilização de
altas doses de RUV acima de 1DEM pode causar desconforto nos animais aumentando o nível
de estresse o que dificultaria e execução do trabalho. Sendo assim, tornou-se viável a
utilização de um protocolo cuja sessão de RUV não ultrapassasse o tempo equivalente a
1DEM que corresponde a 7 minutos e 30 segundos.
A exposição dos animais ocorreu individualmente, sendo que cada animal permaneceu
em um Becker de vidro. Os animais do grupo controle foram irradiados com lâmpada isenta
de RUV, marca Philips 25W, seguindo o mesmo protocolo dos demais animais para controlar
possíveis fatores de estresse (FIGURA 14 A e 14 B).
Para proteção individual do pesquisador foram utilizadas luvas, jaleco e óculos de
proteção (FIGURA 15 A).
A temperatura das lâmpadas de RUV foi mensurada através de um termômetro da
marca Standard Light Red Non-Contact Thermometer CE, modelo IR 88, número 06146236,
sendo encontrada a temperatura de 31⁰C (FIGURA 15 B).
47
FIGURA 14: Indução do fotoenvelhecimento em camundongos BALB-c com lâmpadas de RUV
da marca Philips TL40W/ 12RS (A). Irradiação dos camundongos BALB-c do grupo controle
(G1) com lâmpada Philips 25 W isenta de radiação ultravioleta (B).
FIGURA 15: Óculos para proteção individual (A) e termômetro para mensuração da lâmpada de
RUV (B).
4.4- Fotorejuvenescimento
O tratamento para fotorejuvenescimento iniciou-se a partir da quinta semana de
irradiação com UVB. O grupo UV+LED foi submetido a sessões de nove minutos com a
utilização de LED vermelho, comprimento de onda de 660 nm, força 30 W, marca LED
Technologies. O grupo UV+LASER, por sua vez, foi tratado com LASER diodo visível da
marca Dentoflex, modelo Quasar, comprimento de onda de 632,8 nm, 90 J, sendo que cada
sessão apresentou duração de um minuto (Tabela 6).
48
Tabela 6: Protocolo adotado para o tratamento dos grupos experimentais
Semanas Tratamento com LED Tratamento com LASER
5ª semana 2X na sem/duração 9 min 2X na sem/duração 1 min
6ª semana 4X na sem/duração 9 min 4X na sem/duração i min
7ª semana 4X na sem/duração 9 min 4X na sem/duração 1 min
Os animais tratados com LED foram colocados em um recipiente de vidro com as
seguintes dimensões: 18cm de comprimento, 12cm de largura e 9cm de altura , sendo
colocado um animal no interior do recipiente em cada sessão (FIGURA 16).
FIGURA 16: Fotorejuvenescimento de camundongos BALB-c com uso de LED
Para a realização das aplicações com LASER, os camundongos foram imobilizados por
meio de preensão manual e foram irradiados através da técnica de varredura (FIGURA 17).
49
FIGURA 17: Fotorejuvenescimento de camundongos BALB-c com Laser diodo visível da marca
Dentoflex, modelo quasar, comprimento de onda 632,8 nm, 90 J (A e B).
4.5- Sacrifício e análises histológicas
O sacrifício dos animais ocorreu 24 horas após o término do protocolo. Inicialmente os
camundongos foram anestesiados via subcutânea com solução de cloridrato de xilazina
(Rompum ® – Bayer) 10 mg/kg e quetamina (Ketalar®) 25 mg/kg. Após serem posicionados
na tábua de sacrifício, a pele da região dorsal foi retirada utilizando-se uma pinça e uma
tesoura cirúrgica (FIGURA 18-A). Posteriormente os camundongos foram sacrificados por
overdose de anestésico.
O material foi incluído em fixador formalina de Carson durante 24 horas e,
posteriormente em álcool 70%. Após tais procedimentos foram realizados a desidratação,
diafanização e inclusão em parafina (FIGURA 18-B). Posteriormente, os materiais receberam
cortes de 5 µm utilizando-se micrótomo da marca EK Micro 1 (Eikonal do Brasil-
Instrumentos ópticos e científicos Ltda) para a confecção das lâminas histológicas e
subseqüente coloração com hematoxilina-eosina (HE).
50
FIGURA 18: Procedimento cirúrgico para obtenção da pele do dorso dos animais (A);
inclusão do material (B).
4.6- Análise macroscópica
A pele do dorso dos animais pertencentes aos grupos experimentais foi analisada
macroscopicamente durante as sete semanas de experimento. Esta análise baseava-se em
determinar a ocorrência de eritema ou hiperpigmentação com o protocolo adotado.
4.-Análise histopatológica
A análise histopatológica foi realizada através das lâminas histológicas de fragmentos
da pele do dorso dos camundongos BALB-c pertencentes aos grupos experimentais, coradas
com HE. Foram analisadas ambas as camadas cutâneas.
A avaliação da epiderme baseou-se na análise do número de núcleos dos queratinócitos
assim como na disposição dos mesmos nas diferentes camadas epidérmicas. A espessura desta
camada e a quantidade de queratina também foram avaliadas.
A integridade das fibras de colágeno e sua organização foram alguns aspectos
analisados na derme. Vale ressaltar que a quantidade de SFA, a distribuição dos fibrócitos e
fibroblastos e a presença de infiltrado inflamatório também foram avaliados.
51
4.9-Histomorfometria
A histomorfometria foi realizada no Laboratório Multifuncional do Mestrado em
Ciências da Reabilitação do UNEC, através de imagens capturadas e avaliadas por sistema de
captura de imagens. Foram realizadas captura de quinze campos aleatórios de cada lâmina
histológica com câmera digital (Samsung ES10) em microscópio Ken-a-vision 2103, com
objetiva de 40X. As imagens foram gravadas em CD e submetidas à contagem de células no
programa IMAGE PRO-PLUS avaliando os seguintes critérios: queratina, núcleo de
queratinócito, substância fundamental amorfa (SFA), fibra de colágeno, fibrócitos/fibroblastos
e infiltrado inflamatório. A contagem das estruturas mencionadas foi realizada por um
programa de análise de imagens empregando-se uma grade com 176 pontos por campo,
totalizando 2640 pontos por animal. Foram realizadas também as medidas da espessura da
epiderme em três pontos distintos para cada foto, totalizando 45 medidas por animal.
4.10-Análise Estatística:
Para análise estatística foi utilizado o software Sigmastat Statistical Analysis System,
versão 1.0 (Jandel Scientific). Foram aplicados análise de variância e o teste t-student e
quando indicados os métodos não paramétricos de comparações múltiplas pelos métodos
Student Newman-Keuls e Dunn, com significância em p˂ 0,05. As medidas foram
apresentadas como média ± desvio padrão.
5-RESULTADOS
Antes da descrição dos resultados, é importante ressaltar que os animais pertencentes
aos quatro grupos estudados (grupo controle, grupo UV, grupo UV+LED e grupo
52
UV+LASER) apresentaram ganho de peso. Os pesos iniciais encontravam-se entre 19± 26,4g
e, ao final do experimento, os camundongos apresentaram pesos entre 24,97± 34,68 g.
5.1- Análise macroscópica
Foram realizadas análises macroscópicas da pele do dorso dos camundongos BALB-c
do grupo controle assim como dos grupos submetidos à RUV com ou sem tratamento com
LED ou LASER.
As peles dos dorsos dos animais pertencentes ao grupo controle mantiveram coloração
normal e homogênea durante as sete semanas de experimento (Figura 19A). No grupo
submetido à RUV e sem tratamento, foi evidenciada a presença de eritema difuso e intenso na
última semana podendo ser evidenciado nas áreas delimitadas na figura 19B. Nos grupos
irradiados e tratados tanto com LED quanto com LASER foi observada uma coloração
próxima à encontrada no grupo controle, porém, em algumas regiões foram observados
eritema focal e discreto no grupo tratado com LED e, focal leve no grupo tratado com
LASER. Tais grupos apresentam estas regiões delimitadas nas figuras 19C e 19D.
53
FIGURA 19
Fotomiografias da pele do dorso de camundongos BALB-c, adquiridas durante a sétima
semana de experimento, pertencentes ao grupo controle assim como aos grupos
submetidos à RUV e tratados ou não.
A- Animal controle. Observa-se coloração normal e homogênea.
B- Animal submetido apenas à RUV. Presença de eritema difuso e intenso evidenciado
através das áreas delimitadas.
C- Animal submetido à RUV e tratado com LED. Presença de eritema focal discreto melhor
visualizado nas áreas delimitadas.
D- Animal submetido à RUV e tratado com LASER. Através da delimitação pode-se
evidenciar eritema focal e leve.
54
FIGURA 19
55
5.2- Análise histopatológica
Foram analisados fragmentos de pele retiradas do dorso dos camundongos BALB-c
pertencentes ao grupo controle assim como aos grupos submetidos à RUV e tratados ou não.
No grupo controle é possível observar a presença de tecido cutâneo com aspecto
normal havendo a manutenção da integridade de ambas as camadas. Na epiderme podem ser
visualizados os núcleos de queratinócitos em diferentes formas, sendo esta característica
importante para a divisão deste epitélio em camadas ou estratos. De acordo com a camada, as
células apresentam formas diferentes e, os núcleos acompanham o formato das mesmas.
Sendo assim, na região basal encontram-se células cilíndricas com núcleos alongados e, na
região mais superficial estão presentes células pavimentosas. Sendo assim, a epiderme pode
ser classificada como epitélio de revestimento estratificado pavimentoso queratinizado, pois a
sua classificação baseia-se no número de camadas constituintes assim como na forma das
células mais superficiais. É importante ressaltar ainda a presença de delgada camada de
queratina no corte histológico analisado. Observando-se a espessura da epiderme, pode-se
concluir que se trata de uma pele fina devido à localização anatômica da mesma.
Ainda no grupo controle observa-se que a epiderme repousa sobre uma camada de
tecido conjuntivo, a derme, sendo esta última constituída por uma variedade de tipos celulares
com predomínio de fibrócitos e fibroblastos. Estas células são responsáveis pela produção de
fibras de colágeno que, por sua vez, por apresentarem característica acidófila são coradas pela
eosina. Nos cortes histológicos analisados, apresentam-se íntegras, orientadas em várias
direções e organizadas em duas camadas: a derme papilar, mais superficial, próxima à
epiderme e, a derme reticular, mais profunda. A derme papilar é constituída por tecido
conjuntivo frouxo sendo observado fibras de colágeno finas. Já a derme reticular apresenta
fibras de colágeno grossas sendo formada por tecido conjuntivo denso. Os fibroblastos
56
apresentam núcleo claro, grande, de forma ovóide, já os fibrócitos, por sua vez, apresentam
núcleo menor, alongado e mais escuro. Ambos os tipos celulares encontrados na derme, em
condições normais, como no grupo controle analisado, apresentam-se dispostas adjacentes às
fibras de colágeno, seguindo a orientação das mesmas. Entre tais fibras encontra-se a SFA em
imagem negativa. Algumas destas características podem ser observadas na figura 20A.
Analisando-se as lâminas dos animais submetidos à RUV e não tratados pertencentes ao
grupo UV, são observadas alterações histopatológicas em ambas as camadas cutâneas (Figura
20B). Na epiderme é possível evidenciar hiperplasia difusa caracterizando um quadro de
acantose, resultando, desta forma, em um aumento da espessura desta camada. Observa-se,
ainda, a ocorrência de hiperceratose, ou seja, está ocorrendo um espessamento do estrato
córneo associado a um aumento qualitativo da queratina (20B e 20E). Na análise da figura
20E pode-se observar, ainda, hipergranulose facilitando, deste modo, a visualização de grãos
de querato-hialina. Células de queimadura solar também são encontradas nas diferentes
camadas da epiderme.
Na derme, as fibras de colágeno encontram-se em quantidade reduzida,
desorganizadas e fragmentadas. Observa-se SFA em imagem negativa. Encontram-se núcleos
de fibrócitos e fibroblastos além de outros tipos celulares provavelmente relacionados à
presença de infiltrado inflamatório.
Nos animais submetidos à RUV e tratados com LED observa-se a epiderme menos
espessa, se comparado com o grupo UV além de uma menor quantidade de núcleos de
queratinócitos. A camada de queratina apresenta-se delgada assim como observado no grupo
controle.
Na derme, as fibras de colágeno encontram-se em maior quantidade se comparadas às
do grupo UV, além de apresentarem uma melhor organização em toda a extensão da camada
dérmica acompanhadas pela presença de fibrócitos e fibroblastos. A SFA, em imagem
57
negativa, aparece em menor quantidade em relação aos grupos controle e UV. Observa-se
ainda a presença de glândula sebácea e folículo piloso (Figura 20C).
No grupo submetido à RUV e tratado co LASER observou-se benefícios da fototerapia
principalmente na derme. Esta camada apresenta fibras colágenas, SFA em imagem negativa,
fibrócitos e fibroblastos que, por sua vez, encontram-se organizados ao longo do eixo
longitudinal das fibras colágenas sendo que estas últimas apresentam-se bem orientadas. Em
relação à epiderme, observa-se manutenção tanto da acantose quanto da hiperceratose
desencadeados pela RUV (Figura 20D).
58
FIGURA 20
Secções da pele do dorso dos camundongos BALB-c pertencentes ao grupo controle
assim como aos grupos submetidos à RUV tratados ou não com LED ou LASER ,
sacrificados após sete semanas de experimento. Barra: 6,95µm; Aumento de 40X.
A- Animal controle. Evidenciam-se ambas as camadas cutâneas com aspectos normais sendo
elas a epiderme (Ep) e a derme (Der). Presença de delgada camada de queratina (Que). Na
epiderme observa-se a presença de núcleos de queratinócitos cilíndricos (NCq) e
pavimentosos (NPq). A derme é constituída por tecido conjuntivo frouxo (TCF) na sua
porção mais superficial e, tecido conjuntivo denso (TCD) na região mais profunda. Nesta
camada pode-se evidenciar ainda a presença de fibrócitos (F) e fibroblastos (Fib), substância
fundamental amorfa (SFA) e núcleo de outras células (NOC).
B e E- Animal submetido à RUV e sem tratamento. Presença de alterações histopatológicas
em ambas as camadas. Observa-se aumento de núcleos de queratinócitos (NQ) assim como na
espessura da epiderme (Ep). Nesta camada evidencia-se ainda aumento qualitativo da
queratina (Que), hipergranulose podendo-se visualizar grãos de querato-hialina (GQH) e
células de queimadura solar (CQS). Na derme (Der) encontam-se fibras de colágeno (FC)
desorganizadas e fragmentadas, fibroblastos (Fib), substância fundamental amorfa (SFA) e
núcleo de outras células (NOC).
C- Animal submetido à RUV e tratado com LED. Observa-se os benefícios da fototerapia em
ambas as camadas cutâneas Presença de epiderme (Ep) menos espessa se comparada ao grupo
UV e delgada camada de queratina (Que). O número de queratinócitos encontra-se reduzido
(NQ). Na derme (Der) encontram-se fibras de colágeno (FC) organizadas, fibroblastos (Fib)
e reduzida quantidade de substância fundamental amorfa (SFA).
D- Animal submetido à RUV e tratado com LASER. Os benefícios da fototerapia podem ser
evidenciados apenas na derme (Der). Nesta camada encontram-se fibras de colágeno (FC),
substância fundamental amorfa (SFA) em quantidade reduzida, fibrócitos (F) e fibroblastos
(Fib). A espessura da epiderme (Ep) manteve-se aumentada assim como a quantidade de
queratina (Que).
59
FIGURA 20
60
5.1- Análise Histomorfométrica
Os resultados obtidos na morfometria estão representados nos gráficos 1 ao 4 nos
quais encontram-se registrados as médias referentes à espessura de epiderme, número de
queratinócitos, presença de queratina, substância fundamental amorfa (SFA), fibras de
colágeno, fibrócitos/fibroblastos e infiltrado inflamatório.
0,00
20,00
40,00
60,00
80,00
100,00
120,00
140,00
160,00
180,00
CONTROLE UV UV+LED UV+LASER
Méd
ia d
a E
sp
essu
ra (
um
)
Gráfico 1- Valores médios da espessura da epiderme nos diferentes grupos de camundongos
BALB-c submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com Radiação Ultravioleta e tratados ou
não com LASER ou LED (n=38).
* Diferença significativa para Controle X UV (P= 0,0000122 ). Comparação Múltipla pelo Método de Dunn.
○ Diferença significativa para Controle X UV+LASER (P= 0,0101 ) Teste t Student
■ Diferença significativa para UV X UV + LASER e UV X UV+LED (P= 0,0000122 ). Comparação Múltipla
pelo Método de Dunn
A espessura da epiderme apresentou variações significativas em algumas das
comparações realizadas e os resultados encontram-se no gráfico 1. Observa-se aumento
significativo na espessura da epiderme no grupo submetido à radiação ultravioleta sem
tratamento (123,7±38,57) em comparação ao grupo controle (37,7±7,06). Ambas as
modalidades de fototerapia foram capazes de reduzir a espessura da epiderme, pois se
encontraram diferenças estatisticamente significantes nos valores médios deste parâmetro em
relação aos grupos UV+LED (54,6±15,06) e UV+LASER (59,9±25,83) com o grupo UV
* ○
■
61
(123,7±38,57). Porém a terapia com LED (54,6±15,06) demonstrou resultados compatíveis
aos encontrados no controle (37,7±7,06) não havendo, portanto, diferença estatisticamente
significante entre tais grupos. Por outro lado, é possível evidenciar diferença estatística entre a
média das espessuras da epiderme encontradas no grupo controle (37,7±7,06) em relação ao
grupo UV+LASER (59,9±25,83), sugerindo que a LASERterapia, apesar de possibilitar uma
diminuição na espessura da epiderme, esta não ocorreu dentro de valores compatíveis com a
normalidade.
0
100
200
300
400
500
600
CO
NT
RO
LE
UV
UV
+L
ED
UV
+L
AS
ER
CO
NT
RO
LE
UV
UV
+L
ED
UV
+L
AS
ER
número de queratinócitos queratina
Va
lore
s m
éd
ios
/26
40
po
nto
s
Gráfico 21- Valores médios do número de queratinócitos e da presença de queratina nos
diferentes grupos de camundongos BALB-c submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com
Radiação Ultravioleta e tratados ou não com LASER ou LED (n=38).
Através da análise do gráfico 2, observa-se diferença significativa quanto ao número
de queratinócitos, entre o grupo controle (85,8±20,5) e o grupo submetido somente à radiação
ultravioleta (387,3±105,8), sendo que os animais pertencentes a este último grupo
apresentaram aumentado o número destes tipos celulares. Observa-se ainda uma diferença
1 * Diferença significativa para Controle X UV e Controle X UV+LASER (P= 0,00000317 ) .Comparação Múltipla pelo Método de Dunn.
■ Diferença significativa para UV X UV+LED (P= 0,00000317 ) Comparação Múltipla pelo Método de Dunn) □ Diferença significativa para Controle X UV e Controle x UV+LASER (P= 0,00153 ). Comparação Múltipla pelo Método de Dunn.
● Diferença significativa para UV X UV+LED (P= 0,00153 ) .Comparação Múltipla pelo Método de Dunn
◄ Diferença significativa para UV+ LED X UV+LASER (P= 0,00153 ). Comparação Múltipla pelo Método de Dunn.
*
■
□
●
◄
62
estatisticamente significante entre o grupo controle (85,8±20,5) e o grupo tratado com
LASER (181,4±75,3), ou seja, os animais submetidos a este tipo de tratamento não obtiveram
redução do número de queratinócitos induzido pela RUV a níveis semelhantes aos que se
observam nos controles. Por outro lado, quando comparados o grupo UV (387,3±105,8), e o
grupo submetido à radiação ultravioleta e tratado com LED (134±26,9), evidencia-se que
neste último houve redução no número de queratinócitos em relação ao primeiro, havendo
assim diferença significativa.
Já em relação à presença de queratina, pode-se observar diferença estatisticamente
significante entre o grupo controle (139,5±52,4), em relação ao grupo submetido à radiação
ultravioleta e tratado com LASER (244,3±75,2), assim como em relação ao grupo UV
(248,7±80,8). Com base nestes dados, evidencia-se que o LASER não foi capaz de reduzir a
quantidade de queratina mantendo–a semelhante à do grupo submetido apenas à radiação
ultravioleta, pois entre estes grupos não foi encontrada diferença significativa. Por outro lado,
entre o grupo UV (248,7±80,8) e o grupo UV+LED (161,8±53,9), encontrou-se diferença
significativa sugerindo que o LED é capaz de reduzir a hiperceratose. Quando ambos os
grupos tratados com fototerapia são comparados observa-se diferença significativa, sugerindo
que o LED (161,8±53,9) seja capaz de causar maior redução na quantidade de queratina, o
que não pôde ser observado com o grupo tratado com LASER (244,3±75,2).
No gráfico 3 encontram-se registrados os resultados da histomorfometria relativos a
presença de substância fundamental amorfa (SFA), colágeno e fibrócito/fibroblasto.
63
0
200
400
600
800
1000
1200
1400
Co
ntr
ole UV
UV
+L
ED
UV
+L
AS
ER
Co
ntr
ole UV
UV
+L
ED
UV
+L
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Co
ntr
ole UV
UV
+L
ED
UV
+L
AS
ER
SFA Colágeno Fibrócito/fibroblasto
Va
lore
s m
éd
ios
/26
40
po
nto
s
Gráfico 3- Valores médios do número de pontos quantificados para Substância fundamental
amorfa (SFA), colágeno e núcleos de células nos diferentes grupos de camundongos BALB-c
submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com Radiação Ultravioleta e tratados ou não com
LASER ou LED (n=38).
* Diferença significativa para Controle X UV; Controle X UV+LED; Controle X UV+LASER (P=
0,000000000997 ) .Comparação Múltipla pelo método de Student Newman-Keuls
○ Diferença significativa para UV X UV+LED; UV X UV+LASER (P= 0,000000000997 ) .Comparação
Múltipla pelo método de Student Newman-Keuls
□ Diferença significativa para Controle X UV (P= 0,000000000446) Comparação Múltipla pelo método de
Student Newman-Keuls
● Diferença significativa para UV X UV+LED e UV X UV+LASER (P= 0,000000000446) .Comparação
Múltipla pelo método de Student Newman-Keuls
■ Diferença significativa para UV X UV+ LED e UV X UV+LASER (P= 0,000159 ). Comparação Múltipla
pelo Método de Dunn
Sobre a SFA pode-se dizer que houve diferença estatisticamente significante entre o
grupo controle (675±82,2) e os outros três grupos (UV: 562,4±130,1; UV+LED: 362±84,9;
UV+LASER: 278,9±89), sendo que o grupo controle apresenta maior quantidade deste
componente do tecido conjuntivo em relação aos demais grupos. Porém, ao se comparar o
grupo UV (562,4±130,1) com os grupos tratados tanto com LED (362±84,9) quanto com
LASER (362±84,9), observa-se que estes dois últimos grupos apresentam redução
significativa de SFA.
* ○
□
●
■
64
Considerando a quantidade média de colágeno, ainda no gráfico 3, constatou-se que o
grupo UV (725,6±94,3) apresentou menor quantidade desta proteína fibrosa em relação aos
demais grupos. Comparando-se o grupo UV (725,6±94,3) com os grupos tratados (UV+LED:
1137,2±109,8; UV+LASER: 1089,1±99,2) observa-se que em ambos houve um aumento de
fibras colágenas. Quanto aos fibrócitos e fibroblastos encontrados na derme, pode-se
evidenciar ausência de diferença significativa no número destes tipos celulares na comparação
do grupo controle com os demais grupos experimentais. No entanto, maior quantidade de
fibrocitos/fibroblastos foi identificada tanto no grupo UV+LED (76,1±32,7) quanto
UV+LASER (49±31,1) na comparação com o grupo UV (16,6±10,6).
Outro aspecto considerado no material biológico analisado foi a presença de infiltrado
inflamatório. Estes resultados encontram-se representados no gráfico 4.
Gráfico 4- Valores médios de células do infiltrado inflamatório nos diferentes grupos de
camundongos BALBc submetidos ou não ao fotoenvelhecimento com Radiação Ultravioleta e
tratados ou não com Laser ou LED (n=38).
* Diferença significativa para Controle X UV (P= 0,000248 ) .Comparação Múltipla pelo Método de Dunn
○ Diferença significativa para UV X UV+LED; UV X UV+LASER (P= 0,000248 ) .Comparação Múltipla pelo
Método de Dunn.
0,00
5,00
10,00
15,00
20,00
25,00
30,00
CONTROLE UV UV+LED UV+LASER
Infiltrado inflamatório
valo
res m
éd
ios/2
640p
on
tos
*
○
65
A partir da análise do gráfico 4, observa-se um aumento significativo no número de
infiltrado inflamatório no grupo UV (20±5,42) em relação aos demais grupos (controle:
0,375±0,518; UV+LED: 1,1±1,1; UV+LASER: 0,8±0,789), sugerindo que ambas as
modalidades terapêuticas utilizadas para o tratamento do fotoenvelhecimento apresentam
resultados satisfatórios compatíveis com os encontrados no grupo controle.
66
6- DISCUSSÃO
Através da análise macroscópica da pele do dorso dos animais pertencentes aos grupos
experimentais, foi possível observar a presença de eritema difuso e intenso no grupo UV na
última semana de experimento, mesmo utilizando um protocolo cujos tempos de irradiação
eram compatíveis com doses suberitematosas. Isto se deve aos efeitos cumulativos da RUV
no processo de envelhecimento extrínseco. Sendo assim, até mesmo a exposição em pequenas
doses, porém de forma crônica, é o suficiente para propiciar sinais de fotoenvelhecimento
(YANO et al.,2002).
Cestari et al. (2007) descreve o uso de lâmpadas de RUV para o tratamento de
algumas dermatoses como a psoríase. De acordo com estes autores, apesar do uso benéfico
destas fontes artificiais de RUV, nestes casos específicos, podem ocorrer efeitos adversos. Em
longo prazo a RUV pode causar fotoenvelhecimento, câncer de pele não-melanoma e
imunossupressão em animais. Além destes fatores pode ser evidenciado eritema similar ao
desencadeado pela exposição solar excessiva além de queimaduras graves. O eritema
observado nos animais do grupo UV no presente estudo é coerente com os relatos destes
autores.
Através das análises histopatológicas e histomorfométricas foi possível evidenciar nos
animais submetidos à RUV sinais característicos de fotoenvelhecimento como, por exemplo,
redução no número de fibras colágenas e na quantidade de SFA que, por sua vez, podem ser
comprovados por outros estudos. Desta maneira, como descrito por Lee et al. (2007), a RUV
é responsável não apenas pela redução na quantidade de fibras colágenas como também pela
fragmentação das mesmas, sendo este dado coerente com os nossos resultados.
Esta diminuição das fibras colágenas da Matriz Extracelular (MEC) ocorre devido à
soma de três fatores: ativação das metaloproteinases de matriz (MMPs) que, por sua vez, são
67
enzimas responsáveis pela degradação do colágeno; bloqueio das enzimas inibidoras das
MMPs (TIMPS- tissue inhibitors of MMPS) garantido, desta forma, uma ação contínua das
MMPs e, sinalização inibitória da função fibroblástica proveniente de fragmentos das fibras
colágenas contribuindo, assim, para a deficiência na reposição de tais estruturas (ALMEIDA
et al.,2008; FISHER et al.,2004; VARANI et al.,2004).
Varani et al. (2002) afirmam que quando os fibroblastos dérmicos são incubados em
contato com fragmentos de colágeno tipo I in vitro, através de uma mistura com
metaloproteinase de matriz da pele humana ou MMP-1 (colagenase intersticial), observa-se
uma redução na síntese de procolágeno tipo I. Tal fato sugere que a presença de colágeno
danificado possa agir sobre as células capacitadas na produção desta estrutura causando um
declínio em suas funções. Fligiel et al. (2003), por sua vez, realizou um estudo in vivo sendo
mais uma vez confirmado que fragmentos de colágeno na derme causam inibição dos
fibroblastos aí existentes.
A redução na quantidade de SFA, em decorrência da exposição crônica à RUV,
demonstrada no presente trabalho pode ser justificada por Guirro & Guirro (2007). Estes
autores afirmam que a RUV propicia a formação de radicais livres responsáveis pela
despolimerização do ácido hialurônico que, por sua vez, é um tipo de glicosaminoglicano
encontrado na SFA.
A importância dos glicosaminoglicanos não se restringe à sustentação e transporte
molecular. Atuam também na produção do colágeno pelos fibroblastos, bem como no seu
arranjo tridimensional (GUIRRO & GUIRRO, 2007). Baseando-se neste fato, a
despolimerização do ácido hialurônico seria responsável pela diminuição da quantidade de
SFA e de fibras de colágeno assim como pela desorganização das fibras existentes.
Estudos realizados por Dai et al. (2007) evidenciaram a ocorrência de uma
remodelação da matriz extracelular dérmica durante o processo de fotoenvelhecimento.
68
Segundo estes autores, a RUV crônica induz a perda de ácido hialurônico na derme,
contribuindo, deste modo, com o processo de quiescência de fibroblastos.
Na epiderme dos camundongos pertencentes ao grupo UV foi possível evidenciar
ainda a presença de células de queimadura solar, aumento no número de queratinócitos e de
queratina, hiperplasia epidérmica difusa e hipergranulose. Estas alterações histopatológicas
podem ser confirmadas por diferentes autores (Mc GREGOR & HAWK, 2005; INOMATA et
al., 2003; GOETTSH et al., 1998).
Segundo Mc Gregor e Hawk (2005), as células de queimadura solar provavelmente
possam derivar de queratinócitos danificados pela RUV e assemelham-se as células
apoptóticas, com citoplasma se tornando hialino e, com freqüência, eosinofílico com núcleo
picnótico, às vezes desaparecendo prematuramente. Estes mesmos autores relatam que este
tipo celular aparece, tipicamente, na epiderme inferior, frequentemente adjacente a células de
aparência completamente normal. Posteriormente, tais células se movem para a região
superior em direção ao estrato córneo. Tais relatos são compatíveis aos resultados
demonstrados em nosso estudo.
Inomata et al. (2003) demonstraram, em seus estudos, aumento na quantidade de
metaloproteinases de matriz tipos 2 e 9 (MMPS-2 e MMPS-9). De acordo com estes autores,
tais enzimas são responsáveis pela degradação dos colágenos tipos IV e VII sendo estes os
componentes principais da membrana basal presente na junção derme-epidérmica. Sendo
assim, a degradação destes tipos de colágeno resulta em uma alteração estrutural da
membrana basal causando o desenvolvimento de hiperplasia difusa das células epidérmicas,
pois, de acordo com Burgeson (2005) uma das funções da membrana basal é servir como
substrato para a migração programada e para as interações seletivas da camada germinativa
durante o desenvolvimento.
69
Goettsh et al. (1998) afirmam que uma das alterações histopatológicas observadas em
animais expostos à RUV é a hipergranulose, sendo este um resultado demonstrado em nosso
estudo.
Segundo Guirro & Guirro (2007), nos queratinócitos presentes na camada granulosa
estão contidos não apenas querato-hialina como também melanina. Baseando-se neste fato, os
resultados advindos da análise histopatológica das lâminas coradas com hematoxilina-eosina
dos animais pertencentes ao grupo UV, aqui apresentados, demonstram possível acúmulo de
grãos de querato-hialina associados à melanina.
Pathak et al. (2005) relatam que o envelhecimento extrínseco, ao contrário do
intrínseco, é caracterizado por um aumento no número de melanócito. Para estes autores, a
exposição crônica à luz solar induz a produção de melanina pelos melanócitos assim como a
ativação ou proliferação de tais células. Estudos realizados por tais autores evidenciaram que
biópsias pareadas da pele de braços de oito doadores com idades entre 28 e 80 anos
apresentam um aumento duas vezes maior na densidade numérica de melanócitos nas áreas
expostas se comparado às áreas não-expostas. É válido ressaltar que os melanócitos das áreas
expostas eram mais ativos melanogenicamente do que os das áreas protegidas, explicando o
maior grau de pigmentação visível.
Tal ativação da produção de melanina pela RUV provavelmente deve ter ocorrido nos
animais do presente estudo. Acredita-se que este fato poderia ser comprovado se houvesse
uma extensão do processo de RUV para mais de sete semanas, quando poderia ser observada
a presença de melasma na pele dos camundongos pertencentes ao grupo UV, visto que o
processo de melanogênese ocorre após a formação de eritema, sendo este último um achado
macroscópico evidente na sétima semana de experimento.
70
A hiperceratose observada no presente trabalho é uma reação protetora desencadeada
pelo organismo em resposta aos efeitos deletérios causados pela RUV (PINTO & XAVIER,
2011; TOFFETI & OLIVEIRA, 2006).
Através das análises histopatológica e histomorfométrica dos animais submetidos à
RUV e tratados tanto com LED quanto com LASER, foi possível evidenciar que ambas as
modalidades terapêuticas foram capazes de propiciar melhora nos efeitos deletérios causados
pela radiação ultravioleta. Porém o LED apresentou melhores resultados, visto que os efeitos
de fotorejuvenescimento puderam ser evidenciados tanto na derme quanto na epiderme
enquanto o LASER apresentou atuação satisfatória apenas na derme.
De acordo com DeHoratius et al. (2007), os efeitos advindos do LED são oriundos do
processo de fotobiomodulação que, pode ser observado nos fibroblastos e também nos
queratinócitos. Tais células apresentam suas atividades moduladas ao entrarem em contato
com o feixe de LED. Sendo assim, para o tratamento do fotorejuvenescimento, os fibroblastos
são induzidos ao aumento de sua função resultando em um incremento na síntese de fibras de
colágeno. Já a proliferação de queratinócitos, induzida pela RUV, será reduzida propiciando
uma diminuição na espessura da epiderme, assim como na quantidade de queratina como o
observado em nosso trabalho.
Barolet (2008) relata que o LED não apenas estimula os fibroblastos como também
inibe a enzima responsável pela degradação das fibras de colágeno, denominadas
metaloproteinases de matriz.
Baez et al. (2007), realizaram um estudo com treze pacientes com o objetivo de
avaliar a redução dos sinais clínicos do fotoenvelhecimento através da percepção destes após
cinco semanas de tratamento com a combinação de diferentes comprimentos de onda de LED,
sendo eles 633 e 830 nm. Ao final do experimento foi constatado que o LED apresentou uma
boa resposta de acordo com relatos das pacientes sendo que 50% relataram melhora moderada
71
e 25%, melhora leve Outro fator relatado pelas pacientes e que merece atenção é o fato do
LED ser uma terapia indolor, o que facilita a adesão ao tratamento.
Apesar da análise dos resultados do trabalho desenvolvido por Baez et al. (2007)
terem sido baseados em fotografias, sendo este um dado macroscópico, e na percepção das
pacientes, a ação satisfatória do LED neste experimento confirma a ação da fototerapia em
mecanismos celulares e teciduais que podem ser evidenciados no tratamento da pele
fotoenvelhecida aqui apresentados.
Nossos resultados demonstraram que além do aumento das fibras de colágeno, a
LEDterapia promoveu aumento no número de fibroblastos, ou seja, além de estimular os
fibroblastos já existentes antes do tratamento, também foi capaz de estimular a proliferação
dos mesmos. Este achado vai de encontro com relatos de Rinald (2008) que, por sua vez,
afirma que o efeito fotoquímico da luz parece permitir a conversão do difosfato de adenosina
(ADP) em trifosfato de adenosina (ATP) garantindo, deste modo, o fornecimento de energia
para a célula, o que é fundamental para a multiplicação celular.
Em seu artigo, Barolet (2008) afirma que a ação do LED seja importante tanto no
tratamento quanto na prevenção da pele fotoenvelhecida por promover aumento na quantidade
de fibras de colágeno. Minatel et al.(2009) também relatam a importância da LEDterapia na
síntese de novas fibras colágenas . Esta afirmação vai de encontro com nossos resultados.
Lee et al. (2007), assim como no presente trabalho, observou através de um estudo
com 112 pacientes com sinais de fotoenvelhecimento, aumento no número de fibras de
colágeno associado a uma redução na quantidade de substância fundamental amorfa (SFA)
após tratamento com LED. Estes mesmos autores explicam que à medida que novas fibras
colágenas são formadas, estas substituem a matriz dérmica previamente deteriorada pela
RUV.
Através da análise histopatológica realizada no presente estudo foi observado não apenas
72
um aumento na quantidade de fibras colágenas como também uma melhor organização das
mesmas. Estudos realizados por Lee et al. (2007) com LED para a promoção do
fotorejuvenescimento cutâneo, confirmam tais resultados.
Embora o LASER diodo visível de 632,8 nm não seja utilizado na prática clínica para o
tratamento da pele fotoenvelhecida, os resultados demonstraram que o mesmo foi capaz de
estimular a produção de fibras de colágeno, o que é relevante para o processo de
fotorejuvenescimento. Este tipo de LASER, por ser de baixa intensidade, normalmente é
utilizado no tratamento de feridas por diferentes autores como Simões et al.(2009) e Pinto et
al.(2009b), porém, para que ocorra o processo de cicatrização de feridas, é necessário a
estimulação de fibroblastos para a produção de colágeno, e esta ação é coerente com os
achados aqui apresentados.
Pinto et al. (2009b), realizou tratamento com LASER diodo visível de 632,8 nm em
um paciente com úlcera na região do calcâneo e no hálux durante seis semanas, totalizando 10
sessões. Ao final do experimento constatou-se redução significativa das úlceras a partir da
terceira sessão, acompanhada de diminuição do quadro álgico.
Como o LASER diodo visível de 632,8 nm não demonstrou ação satisfatória na
epiderme ao ser comparado aos efeitos do LED, a utilização deste tipo de fototerapia parece
não ser vantajosa.
Porém, os LASERs utilizados hoje na medicina estética para o tratamento do
fotorejuvenescimento são mais modernos e sofisticados em relação ao LASER diodo visível.
No entanto, é válido ressaltar que estes LASERs modernos, como por exemplo o CO² LASER
e o erbium:yttrium-aluminum-garnet (Er:YAG;2930 a 2940 nm), ao contrário daqueles de
baixa intensidade, são ablativos e em decorrência do aquecimento do tecido podem ocasionar
danos térmicos residuais como descrito por Trelles (2006).
73
Na prática clínica, os LASERs ablativos são considerados padrão-ouro no tratamento
de fotorejuvenescimento (IZIKSON, 2008). Por serem de alta intensidade, causam uma
destruição proposital da epiderme e da porção superior da derme papilar desencadeando a
neoformação de células epidérmicas. O aspecto macroscópico resultante do tratamento com
estes LASERs é satisfatório, porém, Doherty et al. (2009) apontam algumas questões que
devem ser consideradas. Para estes autores, o desgaste total da epiderme e de parte da derme
pode ocasionar complicações como infecções, edema, eritema e despigmentação. Além deste
fato, o paciente necessita de um longo período de recuperação, sendo este, geralmente
superior a um mês. Tratam-se, desta forma, de pontos negativos desta modalidade terapêutica
que não são evidenciados na terapia com LED.
Estes efeitos adversos conseqüentes ao uso de LASERs ablativos , a insatisfação dos
pacientes quanto ao desconforto pós-tratamento somado à busca por procedimentos mais
seguros e que ofereçam um período reduzido de recuperação aliado a um
fotorejuvenescimento efetivo, têm motivado os pesquisadores a estudar com mais empenho as
terapias não-ablativas como o LED (LEE et al.,2007).
Existem LASERs considerados não-ablativos utilizados no processo de
fotorejuvenescimento como o 1,450-nm Diode Laser e 1450 nm Erbium Glass Laser. Na
realidade estes produzem calor, mas apresentam um processo de resfriamento (FOURNIER et
al.,2001; TANZI et al.,2003). De acordo com estes autores, tem-se observado melhora
macroscópica na pele de pacientes submetidos a estes LASERs, porém fica uma incógnita: até
que ponto o resfriamento ocasionado é capaz de evitar lesões ablativas? Este questionamento
é válido, pois Lupton et al.(2002), ao realizarem um estudo experimental com vinte e quatro
pacientes do sexo feminino, com idades de 31 a 69 anos, com sinais de fotoenvelhecimento,
observaram melhora leve a moderada tanto na análise macroscópica quanto histológica com a
utilização do Erbium Glass Laser . Estes autores relatam a ocorrência de eritema transitório e
74
edema imediatamente após o uso da LASERterapia. Sendo assim, baseando-se nestes
achados, a utilização do termo não-ablativo, para este tipo de LASER, é controversa em
decorrência dos efeitos adversos evidenciados no estudo citado.
Segundo Fatemi et al. (2002), o conceito “rejuvenescimento não-ablativo”
provavelmente envolva algum dano epidérmico subclínico, visto que uma hora após o
tratamento da pele fotoenvelhecida com Nd:YAG 1320nm LASER, foi observado edema de
células basais da epiderme. Neste mesmo experimento, três horas após a LASERterapia, foi
demonstrado através de biópsias da pele, microtrombose, vasodilatação, esclerose da parede
dos vasos e infiltrado inflamatório, sendo tais achados equivalentes aos de Lupton et al.
(2002).
Vale ressaltar ainda, que tais LASERs apresentam custo elevado, assim como os
LASERs ablativos amplamente utilizados na medicina estética, o que requer um dispêndio
financeiro elevado por cada sessão.
De acordo com Whelan et al. (2001), o LASER apresenta algumas características que
tornam seu uso problemático, sendo que um dos fatores é a impossibilidade de combinar
diferentes comprimentos de onda simultaneamente, como ocorre com a LEDterapia. Outro
fator a ser considerado, segundo estes autores, é que a colimação característica do LASER faz
com que a emissão da luz ocorra de forma pontual, não sendo possível o tratamento de áreas
extensas. O LED, por sua vez, garante o tratamento de grandes áreas sendo que tal fato deve-
se não apenas ao modelo do equipamento, como também à divergência do foco luminoso.
Vale ressaltar ainda o baixo custo do LED se comparado ao LASER. Considerando as
características acima mencionadas, a NASA desenvolveu o LED como uma alternativa efetiva
de substituição ao LASER (WHELAN et al., 2001).
Agnol et al. (2009) compararam estas duas modalidades terapêuticas na cicatrização de
feridas diabéticas induzidas em ratos. De acordo com estes autores, era esperado que o
75
LASER, por ser pontual e monocromático, fosse mais específico na estimulação de
cromóforos, desta forma, apresentaria resultados melhores. Porém foi constatado que ao final
das primeiras 168 horas tanto o LED quanto o LASER apresentaram efeitos semelhantes no
reparo tecidual. Porém, nas primeiras setenta e duas horas a terapia com LED demonstrou
melhores resultados. Foi constatado que apesar da especificidade do LASER em relação aos
cromóforos, o LED estimula vários cromóforos simultaneamente, garantindo uma série de
eventos bioquímicos. Sendo assim, através destes argumentos, justifica-se os melhores
resultados, encontrados em nosso estudo, advindos da LEDterapia em comparação à
LASERterapia no rejuvenescimento da pele fotoenvelhecida.
Agnol et al. (2009) registraram ainda diminuição do infiltrado inflamatório e aumento
de fibrócitos/fibroblastos tanto pelo LED quanto pelo LASER em úlceras de ratos diabéticos.
Este efeito da fototerapia também foi encontrado nos resultados apresentados no modelo
experimental aqui utilizado.
Barolet (2008) relata que os radicais livres são os principais causadores da inflamação
subclínica, porém, o processo inflamatório pode ocorrer devido a uma série de fatores. Pode
resultar da oxidação de enzimas produzidas pelos mecanismos de defesa do corpo em resposta
à exposição a um fator traumático como a radiação ultravioleta. Para este autor, a LEDterapia
é um tratamento inovador para as lesões causadas pelo sol devido à sua possibilidade em
conter tais mediadores inflamatórios. Isto é possível através da inibição da enzima
cicloxigenase (COX) e consequentemente, bloqueando a produção de prostaglandina.
DeLand et al. (2007) demonstraram a diminuição do processo inflamatório por ação
do LED no tratamento das reações adversas tanto na derme quanto na epiderme resultantes da
radioterapia como eritema, desidratação cutânea, prurido e descamação. Tais efeitos adversos,
de acordo com estes autores, ocorrem devido a um processo inflamatório resultante da
formação de radicais livres. Observa-se, no entanto, que estes sinais clínicos apresentados
76
pelo paciente submetido à radioterapia são semelhantes aos encontrados em uma pele
fotoenvelhecida. Baseando-se neste fato, justifica-se a eficiência da LEDterapia na redução do
processo inflamatório durante o tratamento da pele fotoenvelhecida demonstrada em nosso
estudo.
77
7- CONCLUSÃO
Com base nos resultados encontrados, conclui-se que o protocolo adotado foi capaz de
induzir fotoenvelhecimento em camundongos BALB-c submetidos à radiação ultravioleta
visto que nestes animais foram evidenciadas, através das análises macroscópica,
histomorfométrica e histopatológica, alterações cutâneas típicas do processo de
envelhecimento extrínseco.
Dentre as modalidades terapêuticas utilizadas para o tratamento do fotoenvelhecimento
o LED demonstrou melhores resultados se comparado com o LASER diodo visível de
632,8nm, pois foi capaz de atuar tanto na derme quanto na epiderme melhorando o aspecto de
ambas as camadas. O LASER, por sua vez, apresentou resultados satisfatórios apenas na
derme. Sendo assim a LEDterapia mostra-se mais vantajosa devido não apenas aos resultados
encontrados como também em decorrência do seu baixo custo e por ser capaz de tratar áreas
extensas em menor tempo se comparado ao LASER.
Além deste fato, o LED pode ser uma alternativa de substituição aos LASERs
ablativos e “não-ablativos” que necessitam de um dispêndio financeiro elevado associado a
um maior período de recuperação podendo resultar em complicações pós-tratamento.
Já o LASER diodo visível se 632,8 nm não podem substituir os LASERs modernos por
não agirem de forma satisfatória na camada epidérmica.
78
8- REFERÊNCIAS BIBLIOGRÁFICAS
AGNE, J. E. Laserterapia. In: AGNE, J. E. Eletrotermoterapia teoria e prática. Santa
Maria-RS: Orium, 2007.p.309-328.
AGNOL, M. A. D. et al. Comparative analysis of coherent light action (laser) versus non-
coherent light (light emitting diode) for tissue repair in diabetic rats. Lasers Med Sci ,2009.
ALMEIDA, R.L. et al. Padronização e determinação da fotoestabilidade do extrato de folhas
de Pothomorphe umbellata L. Miq (pariparoba) e avaliação da inibição in vitro de
metaloproteinases 2 e 9 na pele. Revista Brasileira de Ciências Farmacêuticas, v.44, n.1,
2008.
ALTOMARE, M.; MACHADO, B. Cirurgia plástica: terapêutica pré e pós. In: BORGES, F.
S. Modalidades terapêuticas nas disfunções estéticas. São Paulo: Phorte , 2006, p. 413-458.
ARRUDA, E.R.B. et al. Influences of diferent low level laser therapy wavelengths in rat
tendon regeneration after tenotomy. Revista Brasileira de Fisioterapia, v.11, n.4, p.247-252,
jun/ago, 2007.
BAEZ, F. et al. The use of light-emitting diode therapy in the treatment of photoaged skin.
Journal of Cosmetic Dermatology, v.5, p. 189-194, 2007.
BAROLET, D. Light-emitting diodes (LEDs) in dermatology. Seminars in Cutaneous
Medicine and Surgery, v.27, p.227-238, 2008.
BARROS, L.A. Dicionário de Dermatologia. São Paulo: Cultura Acadêmica. 2009, p. 398.
BATISTELA, M. A. et al. Abordagens no estudo do envelhecimento cutâneo em diferentes
etnias. Rev. Bras. Farm, v.88, n. 2, p. 59-62, 2007.
BAXTER, D. Laserterapia de baixa intensidade. In: KITCHEN, S.; BAZIN, S.Eletroterapia
de Clayton. 10 ed. São Paulo: Manole,1998. p.191-210.
BURGESON, R.E. Membranas Basais. In: FREEDBERG, I.M. et al. Fitzpatrich: Tratado
de Dermatologia. 5 ed. Rio de Janeiro: Revinter, 2005, p.271-282.
CARNEIRO et al. Increase in dermal collagen fibril diameter and elastogenesis with UVB
exposure: na optical and ultrastructural study in albino Balb-c mice. Acta Dermatovenerol
Croat. v.15, n.2, p.65-71, 2007.
CARVALHO, J.M. et al. Aplicação do diodo de luz infravermelha no tratamento da dor
fibromiálgica. Revista Dor, v.10, n.4, p.331-336, 2009.
CAVALCANTE, M.A.C.;CAETANO, C.R.; HAAG, R. Experiências em física moderna.
Física na Escola ,v.6, n.1, p.75-82, 2005.
79
CESTARI, T.F.; PESSATO, S.; CORRÊA, G.P. Fototerapia-aplicações clínicas. Anais
Brasileiros de Dermatologia, v.82, n.1, p.5-6, 2007.
DAI,G. et al.Chronic ultraviolet B irradiation causes loss of hyaluronic acid from mouse
dermis because of down-regulated of hyaluronic acid synthases. The American Journal of
Pathology, v.171, n. 5, 2007.
DEHORATIUS, D.M.; DOVER, J.S. Nonablative tissue remodeling and photorejuvenation.
Clinics in Dermatology. v.25, p.474-479, 2007.
DELAND, M.M. et al. Treatment of radiation-induced dermatitis with light-emitting diode
(LED) photomodulation. Lasers in Surgery and Medicine, v.39, p.164-168, 2007.
DIAS, I.F.L. et al .Efeitos da luz em sistemas biológicos. Semina: Ciências Exatas e
Tecnológicas, v.30, n.1, p.33-40,2009.
DOHERTY S.D. et al. A paradigm for facial skin rejuvenation. Facial Plastic Surgery. v.25,
n.4, p.245-251, 2009.
DUARTE, I.; BUENSE, R.; KOBATA, C. Fototerapia. Anais Brasileiros de Dermatologia,
v.81, n.1, p.74-82, 2006.
ERDLE, B.J. et al. Effects of continuous-wave (670 nm) red light on wound healing.
Dermatol Surg, v.34, n.3, p.320-325, março, 2008.
FATEMI, A.; WEISS, M.A.; WEISS, R.A. Short-term histologic effects of nonablative
resurfacing: results with a dynamically cooled millisecond-domain 1320 nm Nd: YAG laser.
American Society for Dermatologic Surgery, v.28, p.172,176, 2002.
FISHER, G.F. et al. Collagen fragmentation promotes oxidative stress and elevates matrix
metalloproteinase-1 in fibroblasts in aged human skin. The American Journal of Pathology.
v.174, p.101-114, 2009.
FISHER, G. et al. Looking older. Arch Dermatol. v.144, n.5, p.666-672, 2008.
FLIGIEL, S.E.G. et al. Collagen degradation in aged/photodamaged skin in vivo and after
exposure to matrix metalloproteinase-1 in vitro. The Society for Investigative Dermatology,
Inc, v.120, n.5, p.842-848,2003.
FLOR, J.; DAVOLOS, M. R.; CORREA, M. A. Protetores Solares. Química Nova; v.30, n.1,
p.153-158, 2007.
FOURNIER, N. et al. Nonablative remodeling: clinical, histologic, ultrasound imaging, and
profilometric evaluation of 1540 nm Er:Glass Laser. American Society for Dermatologic
Surgery, v.27, n.9, 2001.
GENOVESE, W. J. Principais lasers de baixa intensidade utilizados em odontologia. In:
_____ LASER de baixa intensidade: aplicações terapêuticas em odontologia. São Paulo:
Lovise, 2000, p.47- 50.
80
GERONEMUS, R. et al. Non-ablative, LED photomodulation – light activated fibroblast
stimulation clinical trial. Lasers Surg Med ,v.25, n.22, 2003.
GOETTSCH, W. et al. Methods for exposure of laboratory animals to ultraviolet radiation.
Laboratory animals, v.33, p.58-67, 1998.
GONÇALVES, G. M. S. ;CAMPOS, P. M. B. G. Aplicação de métodos de biofísica no
estudo da eficácia de produtos dermocosméticos. Brazilian Journal of Pharmaceutical
Sciences, v.45, n.1, janeiro/março, 2009.
GUARATINI, T. et al. Antioxidantes na manutenção do equilíbrio redox cutâneo: uso e
avaliação de sua eficácia.Química Nova,v.30, n.1, p.206-213, 2007.
GUEDES, A.C.M. & FURTADO, T. Pele e anexos. In: FILHO, G.B. Bogliolo Patologia.
6 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 2000, p.1081-1142.
GUIRRO, E.; GUIRRO, R . Noções de citologia e histologia. In: _____.Fisioterapia
dermato- funcional. 3 ed. Barueri-SP: Manole, 2002.p. 3-32.
HAAKE, A. R.; HOLBROOK, K. Estrutura e Desenvolvimento da Epiderme. In:
FREEDBERG, I. M. et al .Tratado de dermatologia: fitzpatrich. 5 ed. Rio de Janeiro:
Revinter, 2005, v.1, p.70-113.
HACHIYA, A. et al. Mechanistic effect of long-term ultraviolet B irradiation induce
epidermal and dermal changes in human skin xenografts. The American Journal of
Phathology, v. 174, n.2, p.401-413, fevereiro. 2009.
HERD, R. et al. Resurfacing cutâneo: Laser. In: FREEDBERG, I.M. et al. Tratado de
dermatologia: fitzpatrich. 5 ed., v.1, Rio de Janeiro: Revinter. 2005, p. 2950-2954.
HWANG, I.K. et al. An extract of Polygonum multiflorum protects against free radical
damage induced by ultraviolet B irradiation of the skin. Brazilian Journal of Medical and
Biological Research, n.39, p.1181-1188, 2006.
INOMATA, S. et al. Possible involvement of gelatinases in basement membrane damage and
wrinkle formation in chronically ultraviolet B- exposed hairless mouse. The Journal of
Investigative Dermatology, v.120, n. 1, p.1-7, 2003.
IZIKSON L. Laser photorejuvenation of asian and ethnic skin. Journal of Cosmetic and Laser
Therapy,v.10, p. 161-166, 2008.
JIMBOW, K et al. Biologia dos Melanócitos. In: FREEDBERG, I.M. et al. Tratado de
dermatologia:fitzpatrich 5ed, v.1, Rio de Janeiro :Revinter. 2005, p. 192-219.
JUCHEM, P.P. et al. Riscos à saúde da radiação ultravioleta. Revista Brasileira de Cirurgia
Plástica, v.13, n.2, p.31-60, abr/mai/jun, 1998.
81
JÚNIOR, A. M R. et al. Modulação da proliferação fibroblástica e da resposta inflamatória
pela terapia a laser de baixa intensidade no processo de reparo tecidual. Anais Brasileiros de
Dermatologia. v.81, n.2, p.150-156, 2006.
JUNQUEIRA,L.C; CARNEIRO,J. Histologia básica. 9ed. Rio de Janeiro: Guanabara
koogan, 2008.
KHOSHENEGAR, M. et al. Desing of GaN white light-emitting diode though envelope
function analysis. IEEE Journal of Quantum Electronics,v.46, n.2, p.228-237, 2010.
KIM, Y.H. et al. Anti-Wrinkle Activity of Ziyuglycoside I isolated from a Sanguisorba
officialis Root Extract its application as a cosmeceutical ingredient. Biosci. Biotechnol.
Biochem, v.72, n.2, p.303-311, 2008.
KWON, Y.H.; HA, H.Y.; KIN, T.Y. Effect of ultraviolet B on the gene expression of
peroxiredoxin, a family of antioxidant protein, in mouse keratinocyte pam212 cells and mouse
skin. Korean Journal of Investigative Dermatology, v.12, n.1, p.16-22, 2005.
LEE, S.Y. et al. A prospective, randomized, placebo-controlled, Double-blinded, and split-
face clinical study on LED phototherapy for skin rejuvenation: clinical, profilometric,
histologic, ultrastructural,and biochemical evaluation and comparison of three different
treatment settings. Journal of Photochemistry and Photobiology B.Biology, v.88, p.51-67,
2007.
LUPTON, J.R.; WILLIAMS, C.M.; ALSTER, T.S. Nonablative laser skin resurfacing a 1540
nm Erbium Glass Laser: a clinical and histologic analysis. American Society Dermatologic
Surgery,v.28, n.9, 2002.
MAGALHÃES, L.; HOFMEISTER. Avaliação e classificação da pele. In: KEDE, M.P.V. &
SABATOVICH,O. Dermatologia Estética. São Paulo: Atheneu.v. 1, 2004, p.23-42.
MARTINS, B.M.R. et al. Efficacy of new microprocessed phototherapy system with five
high intensity light emitting diodes (Super LED). Jornal de Pediatria, v. 83, n.3, p.253-258,
2007.
McGREGOR, J.M. & HAWK,J.L.M. Efeitos agudos da radiação ultravioleta na pele. In.
FREEDBERG, I.M. et al. Tratado de Dermatologia:fitzpatrich. 5 ed. Revinter: Rio de
Janeiro. v.1. 2005, p.1555-1560.
MINATEL, D.G. et al. Fototerapia (LEDs 660/890nm) no tratamento de úlceras de perna em
pacientes diabéticos: estudo de caso. Anais Brasileiros de dermatologia,v.83, n.3, p.279-283,
2009.
MOLEN, R. G. et al. Application of a systemic herpes simplex virus type 1 in the rat as a tool
for sunscreen photoimmunoprotection studies. Photochem. Photobiol. Sci, v.1, p.592-596,
2002.
MONTAGNER S.; COSTA A. Bases biomoleculares do fotoenvelhecimento. Anais
Brasileiros de Dermatologia, v.84, n.30, p.263-269, 2009.
82
MURPHY, G.F. & MIHM, M.C. A pele. In: COTRAN, R.S. et al. Robbins: Patologia
estrutural e functional. 5 ed. Rio de Janeiro: Guanabara Koogan, 1996, p.1058-1093.
NEVES, L. S.; SOUZA E SILVA, C. M.; HENRIQUES, J. F. C.; CANÇADO, R.H.;
HENRIQUES, R. P.; JANSON, G. A utilização do LASER em Ortodontia. Revista Dental
Press de Ortodontia e Ortopedia Facial, Maringá, v. 10, n. 5, p.149-156, 2005.
NISHIMORI, Y. et al .Degenerative alterations of dermal collagen fiber bundles in
photodamaged human skin and UV-irradiated hairless mouse skin: possible effect on
decreasing skin mechanical properties and appearance of wrinkles. The Society for
Investigative Dermatology, v.117, n.6. p.1458-1463, dezembro. 2001;
OOSTEN, M. et al. Differential role of transcription- coupled repair in UVB- induced G2
arrest and apoptosis in mouse epidermis. PNAS, v.97, n.21, outubro, 2000.
PATHAK, M.A. et al. Efeitos agudos e crônicos do sol. In: FREEDBERG, M.F. et al.
Tratado de dermatologia: fitzpatrich. 5 ed., v.1, Rio de Janeiro: Revinter, 2005, p. 1598-
1607.
PATRIOTA, R.C.R. Laser um aliado na dermatologia. Rev. Med. (São Paulo),v.86, n.2, p.64-
70, 2007.
PINNELL, S. R. Cutaneous photodamage, oxidative stress, and topical antioxidant
protection.The Academy of Dermatology, v.48, n.1, p.1-19, janeiro. 2003.
PINTO, M.V.M. et al. Estudo da influência da laserterapia de 632,8 nm por 150 mW na
cicatrização diabética. Revista DOR Pesquisa, Clínica e Terapêutica, v.10, n.2, p.194-199,
abr/mai/jun, 2009.
PINTO, M.V.M. & SILVA, C.M. Terapia fotodinâmica e sua abordagem clínica. In: PINTO,
M.V.M. Fototerapia: Aspectos clínicos da reabilitação. v.1,São Paulo: Andreoli, 2011, p.63-
80.
PINTO, M.V.M. & XAVIER, J.B. Radiação ultravioleta. In: PINTO, M.V.M. Fototerapia:
aspectos clínicos da reabilitação. v.1, São Paulo: Andreoli, 2011, p.207-284.
PURIM, K.S.M. et al. Fotoproteção e exercício físico. Rev Bras Med Esporte, v.16, n.3,
p.224-229, 2010.
RAMOS, M.F.S. et al. Avaliação fototóxica e screening mutagênico de extratos de própolis,
Aloe spp. ehamamelis virginiana. Revista de Ciências Farmacêuticas Básica e Aplicada, v.26,
n.2, p.105-111, 2005.
RINALD,F. Laser: a review. Clinics in Dermatology, v.26, p.590-601, 2008.
RUSENHACK,C. Microdermoabrasão. In: BORGES, F.S. Modalidades terapêuticas nas
disfunções estéticas. Phorte, 2006, v.1, p.99-115.
83
SILVA, A.A. Medidas de radiação solar ultravioleta em Belo Horizonte e saúde pública.
Revista Brasileira de Geofísica. v.26, n.4, p.417-425, 2008. SILVA, E.R.; SANTOS, E.P.;
RICCI-JÚNIOR, E. Terapia fotodinâmica no tratamento do câncer de pele: conceitos,
utilizações e KINESIA, n.1, p.19-26, mar, 2008.
SIMIS, T.; SIMIS, D. R. C. Doenças da pele relacionadas à radiação solar. Rev. Fac. Ciênc.
Médica, Sorocaba; v.8, n.1, p.1-8, 2006.
SIMÕES, N.P.; ALMEIDA, M.F.C.; NOHAMA, P. Estudo comparativo entre laser He-Ne e a
estimulação elétrica microamperada na cicatrização de pele de ratos. Kinesia: A revista
brasileira de fisioterapia dermatofuncional. n.1, v.1, p.19-30, 2009.
SIMUNOVIC, Z; TROBONJACA,T. Clinical Aplication of Low Energy-Level Laser
Therapy. Lasers in Medicine and Dentistry-Basic Scienc, 2000.
SOUSA, M. A. J.; VARGAS,. Anatomia, Fisiologia e Histologia da Pele: Noções de estrutura
e função da pele. In: KEDE, M. P. V.; SABATOVICK, O. Dermatologia Estética. Atheneu,
2004, p.3-8.
SOUZA, T.M. et al. Avaliação da stividade fotoprotetora de Achillea millefolium L.
(Asteraceae). Revista Brasileira de Farmacognosia. v.15, n.1, p. 36-38, 2005.
TAFUR, J.; MILLS, P.J. Low-intensity light therapy: exploring the role of redox mechanisms.
Photomedicine and Laser Surgery, v.26, n.4, p.323-328, 2008.
TANAKA, M. et al. Effects of Collagen Peptide Ingestion on Induced UV-B-Induced Skin
Damage. Biosci. Biotechnol. Biochem, v.73, n.4, p.930-932, 2009.
TANZI, E.L.; WILLIAMS, C.M.; ALSTER, T.S. Treatment of facial rhytides with a
nonablative 1,450-nm diode laser: a controlled clinical and histologic study. Dermatol Surg,
v.29, p.124-128, 2003.
TIMARES, L.; KATIYAR, S.; ELMETS, C. A .DNA damage, apoptosis and langerhans
cells-Activators of UV-induced immune tolerance. Photochem Photobiol, v.84, n.2, p.422-
436, 2008.
TOFETTI, M.H.F.C.; OLIVEIRA, V.R. A importância do uso do filtro solar na prevenção do
fotoenvelhecimento e do câncer de pele. Revista Científica da Universidade de Franca. v.6,
n.1, p.59-66, 2006.
TRELLES, M.A; MORDON, S; CALDERHEAD, R.G. Facial rejuvenation and light: our
personal experience.Lasers Med Sci, v.22, p.93-99, 2007.
TRELLES, M.A. Phototherapy in anti-aging and its photobiologic basics: a new approach to
skin rejuvenation. Journal of Cosmetic Dermatology, v.5, p.87-91, 2006.
TRELLES, M.A.; ALLONES, I.; MAYO, E. Combined visible light and infrared light-
emitting diode (LED) therapy enhances wound healing after laser ablative resurfacing of
photodamaged facial skin. Medical Laser Application, v.21, p.165-175, 2006.
84
UITTO, J. et al. Biologia da matriz extracellular, sangue, vasos e nervos. In: FREEDBERG
I.M. et al. Tratado de dermatologia: fitzpatrick.5.ed., v.1,Rio de Janeiro:Revinter,2005.
p.245-259.
VARANI, J.et al. Inhibition of type I procollagen production in photodamage: correlation
between presence of high molecular weight collagen fragments and reduced procollagen
synthesis. The Society for Investigative Dermatology, v.119, n.1, p.122-129, 2002.
VARANI, J. et al. Reduced fibroblast interaction with intact collagen as a mechanism for
depressed collagen synthesis in photodamaged skin. The Society for Investigative
Dermatology, v.122, n.6, 2004.
WEISS R.A. et al. Clinical experience with light-emitting diode (LED) photomodulation.
Dermatol Surg, v.31, setembro, 2005.
WHELAN H.T. et al. Effect of NASA light-emitting diode irradiation on wound healing.
Journal of Clinical Laser Medicine and Surgery. v.19, n.6, p.305-314, 2001.
WHELAN, H.T. et al. Effect of NASA Light-Emitting Diode irradiation on molecular
changes for wound healing in diabetic mice. Journal of Clinical Laser Medicine & Surgery.
v.21, n.2, p.67-74, 2003.
YANO, K.; OURA, H.; DETMAR, M. Targeted overexpression of the angiogenesis inhibitor
thrombospondin-1 in the epidermis of transgenic mice prevents ultraviolet-B-induced
angiogenesis and cutaneous photo-damage. Prevents cutaneous photo-damage. v.118,
n.5,p.800-805, 2002.
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9- ANEXO 1- Manual descritivo da lâmpada Philips TL40W/12 RS SLV
Product Features
• Emit radiation for therapeutic and other applications
Application
• Phototherapy in dermatology (psoriasis, SUP)
• Meteorological testing equipment
• These lamps produce UV-B radiation which is harmful to human skin and eyes. They are
therefore only available
for medical and industrial applications
System
• Compact, single-ended lamps have the same lamp caps and can operate on the same
universal ballasts as compact,
single-ended lamps for general lighting
• Tubular lamps can be operated in normal switch-start as well as pre-heat rapid-start systems
86
87
TL/12
