Anemia Falciforme e outras hemoglobinopatias

Hematopoiese em humanos

Leucócitos

Eritropoiese

Hemácias

São células responsáveis pelo transporte de oxigênio e gás carbônico para os tecidos;

Seu tempo de vida é de aproximadamente 120 dias;

São constituídas por globulina e hemoglobina;

Possuem formato de disco bicôncavo;  Não possuem núcleo;

Estrutura da hemoglobina

Proteína tetramérica formada por dois pares de cadeias globínicas α e β, cada uma associada a um grupo heme (anel tetrapirrólico com um átomo de ferro, responsável pela ligação ao oxigênio);

Localização gênica: as globinas α no cromossoma 16 e as β no cromossoma 11;

αβ

δγ

Tipos de Hb Composição

Concentração

A 2296 – 98%

A2 222 – 4%

FETAL 220 – 1%

Hemoglobinas durante a vida

Tipos de Hb Composição

Concentração

A 2296 – 98%

A2 222 – 4%

FETAL 220 – 1%

Hemoglobinopatias

Doenças hereditárias relacionadas com a síntese das cadeias globínicas da hemoglobina;

Podem ser decorrentes de alterações quantitativas (talassemias) ou qualitativas (hemoglobinas variantes);

Anemia Hemolítica

Hemoglobina Falcêmica

(HbS) 

Hemoglobina C (HbC)

Transporte de

oxigênio alterado 

Metemoglobinas (HbM)

Hb Kempsey, Hb Kansas.

Fenótipos de

Talassemia

Hemoglobina E

Hemoglobinas Lepore

ALTERACOES QUALITATIVAS

ALTERACOES QUANTITATIVAS

Doenças falciformes

Caracterizam-se pela presença de globina “S” na cadeia beta do tetrâmero de hemoglobina (heterozigose simples, dupla heterozigose ou homozigose);

Classificados de acordo com a percentagem de hemoglobina S presente na eletroforese;

As doenças falciformes correspondem à padrões de dupla heterozigose (HbS = 50%) ou homozigose (HbS >80% = anemia falciforme) para o gene HbS;

Mutação in situ

O que ocorre?

 Ao se tornarem desoxigenadas, as moléculas de Hb S expõe componentes carbonados da valina mutante (β6 Val) que se interagem com componentes químicos da fenilalanina da posição 85 da globina beta (β85 Fen), bem como com a leucina da posição 88 da mesma globina (β88 Leu). As interações β85 > β6 > β88 que dão o início à agregação entre moléculas de Hb S desoxigenadas.

Classificação das doenças falciformes

• HbSS (homozigose); mais de 80 %; Anemia grave.Anemia falciforme

• HbSC; HbSD; (dupla heterozigose, aproximadamente 50% de cada); Anemia moderada.Doença SC e SD;

• HbSE (dupla heterozigose, aproximadamente 50% de cada); Anemia moderada com fenótipo talassêmico.Doença SE

• HbS/talassemia (dupla heterozigose, aproximadamente 50% de cada ou maior quantidade de HbS); Anemia moderada a grave.

Microdrepanocitose

• Dupla heterozigose do gene HbS/PHHF ( gene da persistência hereditária da hemoglobina fetal); 50% ou mais de HbS. Anemia leve.

Doença S/PHHF

Outras hemoglobinopatias estruturais

• Pode ser expressa em heterozigose simples (HbAC), homozigose (HbCC) ou dupla heterozigose (HbSC);

Hemoglobina C

• Assintomaticos para hemoglobina C. Importância no aconselhamento genético. Morfologia: células em alvo.

Heterozigose AC

• Anemia leve a moderada. Morfologia: grande quantidade de hemácias em alvo e cristais de hemoglobina C;

Homozigose CC

• Pode ser expressa em heterozigose simples (HbAD), homozigose (HbDD) ou dupla heterozigose (HbSD);

Hemoglobina D

• Importância no aconselhamento genético. Solubilidade normal e falciteste negativo.

Hemoglobina AD

• Importância no aconselhamento genético. . Solubilidade normal e falciteste negativo.

Homozigose DD

Achados morfológicos nas doenças falciformes

Hemácia em elipse

Hemácia em foice

Hemácia em alvo

Por que estas hemácias são deletérias?

Talassemia α

αβ

δγ

Paciente praticamente assintomático e com alterações laboratoriais mínimas ou ausente (CANCADO, 2006)

Anemia (Hb entre 8,0 e 11,0 g/dl), microcitose (VCM entre 55 e 65 fl), hipocromia e poiquilocitose, presença de hemácias policromatófilas e de hemácias em alvo, icterícia e esplenomegalia(CANCADO, 2006).

Anemia (Hb geralmente entre 11,0 e 13,0 g/dl), hemácias hipocrômicas e microcíticas (VCM entre 75 e 80 fl), anisopoiquilocitose discreta e pela presença de Hb Bart's (5% a 10%) ao nascimento(CANCADO, 2006).

α-/ α- ou αα/- -

Talassemia β

Talassemia β

αβ

δγ

Tipos de Hb Composição

Concentração

A 2296 – 98%

A2 222 – 4%

FETAL 220 – 1%

De acordo com cada talassemia β pode haver um aumento de outras hemoglobinas que não necessitam da cadeia β para serem sintetizadas.

β0/ β0 = ↑↑↑ Hb F; ↑ Hb A2 (aumenta apenas até 8% a produção) β+/ β0 = Hb A (produçao diminui para 25%)/ HbA2 ↑/ Hb F ↑ ↑ ↑

β+/ β+= sem diferença na produção

β+/ β ou β0/ β = HbA ↓ / HbA2 ↑ / Hb F normal ou ↑

Achados morfológicos nas talassemias

Talassemia alfaTalassemia alfa

Coloraçao de azul de cresil brilhante

Hb H

Dacriócitos

Achados morfológicos nas talassemias

Talassemia beta menor Talassemia beta maior

Testes para identificação de doenças falciformes

Teste de falcização

Provas de solubilidade

Eletroforese alcalina e ácida

Teste de resistência osmótica

Teste de falcização

A fenômeno da falcização pode ser induzido por agentes que provocam uma desoxigenação química, como o metabissulfito de sódio, sendo assim, quando uma solução de metabissulfito é adicionada ao sangue total, e esta mistura é lacrada entre lâmina e lamínula, os eritrócitos contendo HbS se deformam (WOITOWICZ, 2010).

Provas de solubilidade

A hemoglobina S é insolúvel e precipita-se em solução, tornando turva a solução contendoditionito de sódio (WOITOWICZ, 2010).

Eletroforese

Eletroforese alcalina

• Permite a separação dos principais genótipos de hemoglobinas variantes e talassemias. A sua avaliação é qualitativa, podendo em algumas situações supor que determinada fração de hemoglobina esteja elevada;

• Feita em pH 8,6.

Eletroforese ácida

• Consegue diferenciar alguns tipos de hemoglobinas variantes mais lentas que a Hb A. Diferencia a Hb S da Hb D, e a Hb C da Hb E; 

• Feita em pH 6,2.

Eletroforese ácida e alcalina

Teste de resistência osmótica em NaCl 0,36%

• Teste de triagem para identificar possíveis portadores de talassemia beta menor. Os eritrócitos esquizócitos desses pacientes não hemolisam nessa solução, tornando-a turva.

• A positividade também ocorre nos genótipos AC, SS, SC e SF, além de casos com anemia ferropriva intensa.

Quais são estes perfis de eletroforese?

Referências

CANÇADO, R. D. Talassemias alfa. Rev. Bras. Hematol. Hemoter. Vol.28 no.2 são josé do rio preto apr./June 2006.

NAOUM,P. C; ANÁLISE LABORATORIAL PARA O DIAGNÓSTICO DAS HEMOGLOBINOPATIAS. Academia de Ciência e Tecnologia de São José do Rio Preto, SP. Disponivel em: http://www.hemoglobinopatias.com.br/dialab/dialab-index.htm

OLIVEIRA, R. A. G; Hemograma: como fazer e interpretar. 1ª edição. LMP Editora, 2007.

WOITOWICZ, E. J; HENNEBERG, R; SILVA, P. H. da; NASCIMENTO, A. J do. Traço Falciforme: Estudo Comparativo De Técnicas Laboratoriais Utilizadas Para a Triagem da Doença. Visão Acadêmica, Curitiba, v.11, n.2, Jul. - Dez./2010 - ISSN 1518-5192