UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO CENTRO DE TECNOLOGIA E
GEOCINCIAS DEPARTAMENTO DE ENERGIA NUCLEAR
PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM TECNOLOGIAS ENERGTICAS E NUCLEARES
Deteco de Microncleo em Hemcitos de Biomphalaria glabrata
exposto a Radiao Gama de 60Co
LUANNA RIBEIRO SANTOS SILVA
RECIFE PERNAMBUCO BRASIL AGOSTO 2010
Deteco de Microncleo em Hemcitos de Biomphalaria glabrata
exposto a Radiao Gama de 60Co
LUANNA RIBEIRO SANTOS SILVA
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Deteco de Microncleo em Hemcitos de Biomphalaria glabrata
exposto a Radiao Gama de 60Co
Dissertao de Mestrado submetido ao Programa de Ps-graduao em
Tecnologias Energticas e Nucleares, do Departamento de Energia
Nuclear, da Universidade Federal de
Pernambuco, para obteno do ttulo de Mestre em Cincias. rea de
Concentrao: Dosimetria e
Instrumentao Nuclear.
Orientador: Prof. Dr Edvane Borges da Silva (CAV/DEN-UFPE)
Co-orientadora: Prof. Dr. Ana Maria M. De Albuquerque Melo
(DBR-UFPE)
RECIFE-PERNAMBUCO-BRASIL AGOSTO-2010 5
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Dedico minha famlia e meus amigos que sempre me acompanharam em
todos os momentos.
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AGRADECIMENTOS
A todas as foras celestiais que me ajudaram na minha jornada da
vida. Nossa Senhora da Conceio, por nunca ter me faltado quando
precisei. Aos meus pais, Antonio Ribeiro Silva Filho e Severina
Ceclia dos Santos, por toda dedicao, amor e educao a mim dada.
minha Orientadora, Ana Maria Mendona de A. Melo, pela pacincia,
amor e companheirismo e por TODOS esses anos juntos no laboratrio.
Porque sem ela no sei o que eu seria. minha Orientadora, Edvane
Borges da Silva, pelo carinho e toda pacincia durante todo o
mestrado. Ao professor Amncio, pelos ensinamentos e por ser meu pai
cientifico. minha amada av Alice Anunciao (in memorian) por ter
simplesmente ter sido tudo na minha vida e ter me ensinado que o
amor o maior trofu que um homem pode carregar. Aos meus avs que
mesmo sem perceber me ajudam muito. A meu irmo Luann Ribeiro, por
ter me apoiado em todos as momentos que precisei. Aos meus amigos
que sempre estavam ao meu lado em todos os momentos da minha vida.
A todos do laboratrio de Radiobiologia da UFPE, Cris, Mona,
Fabrcio, Gustavo, Pedro, Edvaldo, Will, Samia, Karine e todos que
me ajudaram direta e indiretamente. A minha amiga Rebeca Cantinha,
pelo carinho e pela parceria. Ao departamento de Biofsica e
Radiobiologia do CCB/UFPE, pelo suporte e ajuda na minha jornada
cientifica. seu Fredson pelo apoio e pelos incentivos que me foi
dado durante todo o estagio. Ao Laboratrio de Metrologia das
Radiaes Ionizantes (DEN/ UFPE), na pessoa da Prof Helen Koury, por
ter cedido gentilmente a fonte radioativa para realizao de meus
trabalhos. Ao LAMBDA, na pessoa do Prof Ademir Amaral, pelo suporte
de equipamentos e insumos para realizao dos experimentos. 8
Ronaldo e Clarissa, pelo o amor, pois isso que nos une. Ao meu
grande amigo Luiz Reinuax (in memorian), por ter vibrado a cada
conquista e por todo carinho que me foi dado. Te amo, jamais
esquecerei a sua alegria. todas amizades cultivadas na graduao, que
nunca esquecerei. Carlos Eduardo (Dola), pelo companheirismo,
PACINCIA e amor cultivado. A todos os membros das bancas
examinadoras Prof. Dr. Francisco Fernandes Amancio, Profa. Dra.
Vlaudia Costa, Prof. Dr. Ademir Amaral, Prof. Dr. Thiago de Salazar
e Fernandes e Prof. Dr. Cristiano Aparecido Chagas por suas
valiosas contribuies para o enriquecimento deste trabalho. Ao
Departamento de Energia Nuclear na pessoa do Prof. Dr. Andr Maciel
Netto. Aos professores do DEN, pelo suporte cientfico que me
concederam neste mestrado A todos os funcionrios do DEN, em
especial a Magali e Nilvnia, pela amizade e por tornarem minha
jornada muito mais agradvel. Aos colegas do GERAR, pela companhia e
pelos momentos agradveis que passamos juntos. Aos colegas do DEN
pela amizade e companhia neste caminho. minha pequenina cunhada
Natalia Mirrely, por ter aquentado meus estresses. s minhas filhas,
Sasha, Lecca e Raquely por terem alegrado todos os meus dias. CAPES
(Coordenao de Aperfeioamento de Pessoal de Nvel Superior) pelo
suporte financeiro para a execuo deste trabalho.
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LISTA DE FIGURAS
Figura 1 Esquema da ao da radiao na molcula de DNA.
www.cnen.gov.br 5 Figura 2 Classificao taxonmica de Biomphalaria
glabrata, segundo Rey (2001) 10 Figura 3 (A) Biomphalaria glabrata
(SAY, 1818) melnico. (B) Concha do molusco B. glabrata1. Fonte:
http://www.elrincondelmalacologo.com 11 Figura 4 Hemcito de B.
glabrata, corados com DAPI e observados no microscpio de
fluorescncia. (aumento 1000X) 13 Figura 5 (A) Hialincitos corados
com Giemsa.(1000 X); (B) Granulcitos corado com Giemsa.(1000 X) 14
Figura 6 Aqurios de criao de moluscos B. glabrata do moluscrio do
Departamento de Biofisica e Radiobiologia-UFPE 18 Figura 7 (A)
Recipientes individuais de B. glabrata; (B) Molusco, demonstrando o
dimetro da concha 19 Figura 8 (A) Fonte Gammacell 220 Excel-MDS
Nordion. (B) Tubos Falcon com os B. glabrata que sero irradiados 21
Figura 9 Microscpio ptico Medilux do laboratrio de Radiobiologia
(DBRUFPE) 23 Figura 10 Microscpio de Fluorescncia Leica CW4000 do
Lambda (DENUFPE) 24 Figura 11 Esquema com os critrios de
identificao de MN; (A) Dimetro menor que 1/3 do tamanho do ncleo;
(B) Cor e textura semelhante ao ncleo; (C) No estar em contato
direto com o ncleo. 25 Figura 12 Alteraes encontrados na hemolinfa
de B. glabrata irradiados nas doses de 35, 45 e 55 Gy. (A) Ncleo
bilobulado; (B) ncleos interligados 28 Figura 13 Apoptose em
hemcitos de Biomphalaria glabrata submetidos a 55Gy de radiao gama
de 60Co 29 Figura 14 (A) Hemcito corado com Giemsa; (B) Hemcito
corado com Hoechst 33258. A seta vermelha indica MN 34
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LISTA DE TABELAS
Tabela 1 - Hemcitos originrios dos moluscos irradiados e no
irradiados Tabela 2 Dados da Frequncia de Microncleo de B. glabrata
submetidos a radiao gama de 60Co Tabela 3- Vantagens e limitaes das
tcnicas de colorao Giemsa e Hoechst 33258
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LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS
B. glabrata60
Biomphalaria glabrata Cobalto-60 Comisso Nacional de Energia
Nuclear Departamento de Biofsica e Radiobiologia cido
Desoxirribonucleico Departamento de Energia Nuclear Gray KiloGray
Microncleo
Co
CNEN DBR DNA DEN Gy kGy MN
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Deteco de Microncleo em Hemcitos de Biomphalaria glabrata
exposto a Radiao Gama de 60Co Autor: Luanna Ribeiro Santos Silva
Orientador: Prof. Dr Edvane Borges da Silva Co-orientadora: Prof.
Dr. Ana Maria M. De Albuquerque Melo RESUMO As radiaes ionizantes
podem induzir mutaes gnicas, aberraes cromossmicas e morte celular.
Recentemente, comeou a haver grande empenho no desenvolvimento de
tcnicas que auxiliem na compreenso desses possveis danos biolgicos
surgidos aps exposies dos organismos a certas doses de radiao
ionizante. Dentre estas tcnicas, o teste do microncleo tem se
mostrado um timo biomarcador de efeitos de genotoxicidade do dano
ao DNA. Esta tcnica tambm pode ser utilizada para deteco de
genotoxicidade ambiental, na biomonitorao. O molusco Biomphalaria
glabrata, devido s suas caractersticas biolgicas e ambientais, tem
se apresentado como um timo modelo experimental, possibilitando a
avaliao de efeitos produzidos por agentes fsicos e qumicos. Diante
disso, o presente trabalho visou detectar os efeitos genotxicos da
radiao gama de 60Co em hemcitos de Biomphalaria glabrata, por meio
do teste do microncleo, bem como estabelecer este ensaio como um
novo biomarcador ambiental. Os moluscos foram divididos em grupos e
submetidos a dose de 0 (controle), 25, 35, 45 e 55 Gy de radiao
gama. Aps 48 horas da irradiao, a hemolinfa dos moluscos foi
coletada e analisada em microscpios ptico e de fluorescncia. As
lminas foram coradas com Giemsa e hoechst 33258, posteriormente
foram analisadas quanto ao nmero de hemcitos, alteraes nucleares e
frequncia de microncleos. A anlise estatstica foi realizada por
meio do Teste do 2, ANOVA e teste de Tukey, com p
