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Método de análise de capacidade antioxidante para alimentos.
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Método DPPH
Aluna: Yasodhara CapellaProfª: Enayde Melo
Introdução
• Vários processos metabólicos e estresses em geral foram espécies reativas denominada radicais livres.
• O método DPPH é rotineiramente praticado para avaliar o potencial de sequestro de radicais livres por uma molécula antioxidante.
• É comumente usada em grão e farelo de trigo, legumes, óleos, e farinhas em diferentes sistemas (etanol, metanol, acetona e alcool aquoso, benzeno)
Introdução
• DPPH é um radical que se apresenta roxo, absorvendo a luz a 515nm em metanol.
• O método é baseado no princípio que o DPPH vai aceitar um H de uma molécula antioxidante, se tornando DPPH2 e mudando a coloração para amarelo, com uma diminuição da absorbância a 515nm. Essa mudança é acompanhada com espectrofotômetro.
• Esse método foi desenvolvido pela primeira fez por Blois, em 1958, quando demonstrou a habilidade de o DPPH aceitar H da cisteína.
• Com mudanças feitas por Brand-Williams, Cuvelier, and Berset em 1995, esse método tem sido usado mundialmente como um ponto de referência, sendo adotado com modificações de acordo com a necessidade.
Fatores que afetam o método
Método
[DPPH]
Vol. e tipo da
amostra
Tempo de
reação
águapH
Fe, Cu
Luz, O2
Proteínas
Precipita em
metanol
Detergente não iônico
Estável e solúvel por
60min
• Relação entre a concentração do antioxidante e o sequestro do DPPH não é linear, por isso medir o EC50 é problemático.
• É necessário estudar o comportamento de cada amostra e obter uma curva padrão para cada uma.
• As curvas não apresentam bons ajustes, levando a erros
• Obteve EC20, com 40% de inibição• Para assegurar a linearidade entre a inibição
do DPPH e a concentração da amostra.• Sugeriu-se usar EC20 porque o EC50 está
numa zona não-linear e não definida, o que dificulta a determinação de maneira acurada.