Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201530

CIEcircNCIAS BIOLOacuteGICAS

O PAPEL ANTIOXIDANTE DA MESALAZINA NO MODELO EXPERIMENTAL DE COLITE

INDUZIDA POR AacuteCIDO ACEacuteTICO EM RATOS

Daiana Silva1

Rosa Maria B L Moura2

Renata Minuzzo Hartmann3

Henrique Sarubbi Fillmann4

Norma Possa Marroni5

RESUMOA retocolite ulcerativa indeterminada eacute uma doenccedila inflamatoacuteria intestinal que envolve o coacutelon

e o reto Foi avaliada a accedilatildeo da mesalazina sobre marcadores de estresse oxidativo e a atividade das enzimas antioxidantes Foram utilizados 20 ratos wistar divididos em 4 grupos controle controle+mesalazina colite e colite+mesalazina Os animais foram submetidos agrave adminstraccedilatildeo de aacutecido aceacutetico a 4 e o tratamento com mesalazina na dose oral de 20 mgkg 48h apoacutes a induccedilatildeo da colite A mesalazina reduziu as lesotildees teciduais e lipoperoxidaccedilatildeo aumentou a pressatildeo esfincteriana e normalizou a atividade das enzimas avaliadas Sugere-se que a mesalazina tenha papel antioxidante na colite induzida por aacutecido aceacutetico

Palavras-chave colite enema mesalazina

ABSTRACTThe indeterminate ulcerative rectocolitis is an inflammatory bowel disease that involves the colon

and the rectum We evaluated the action of mesalazine on oxidative stress measurements and antioxidant enzyme activity Were used 20 wistar rats were divided into 4 groups control control+mesalazine colitis and colitis+mesalazine The animals were submitted to 4 acetic acid adminstration and treatment with mesalazine at the oral dose of 20 mgkg 48 hours after the induction of colitis The mesalazine reduced tissue damage and lipoperoxidation increased sphincter pressure and normalized the activity of the evaluated enzymes It is suggested that mesalazine have antioxidant role in acetic acid induced colitis

Keywords colitis enema mesalazine

INTRODUCcedilAtildeOAs doenccedilas inflamatoacuterias intestinais compreendem duas formas principais de

apresentaccedilatildeo a retocolite ulcerativa indeterminada (RCUI) e doenccedila de Crohn (DC)

1 Aluna do curso de Odontologia ndash Bolsista de PIBICCNPq - ULBRA2 Aluna de Mestrado do Programa de Poacutes Graduaccedilatildeo em Geneacutetica e Toxicologia AplicadaULBRA3 Aluna de doutorado do Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Medicina Ciecircncias MeacutedicasUFRGS4 Professor do Curso de MedicinaPUCRS5 Professora de Fisiologia no Curso de Odontologia e Orientadora no Programa de Poacutes-Graduaccedilatildeo em Biologia

Celular e Molecular Aplicada agrave SauacutedeULBRA e do PPG em Geneacutetica e Toxicologia AplicadaULBRA

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da ULBRA n13 p30-40 2015Canoas

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(CARDOZO WALTER 2015 CURY MOSS 2015) A RCUI eacute uma doenccedila crocircnica que acomete principalmente o coacutelon caracterizando-se por inflamaccedilatildeo e ulceraccedilatildeo das camadas mais superficiais afetando apenas a mucosa e submucosa exceto nos casos mais graves (COTRAN 2005 CHUONG CHRISTENSEN AYRES 2008 GUYTON HALL 2011 REID CAREY 2011 COTRAN 2012)

A inflamaccedilatildeo tem um papel importante na patogecircnese da RCUI pois as substacircncias oxidantes causam lesotildees e destruiccedilatildeo dos tecidos desencadeando um desequiliacutebrio entre agressatildeo e defesa caracterizando estresse oxidativo (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007 CAROCHO FERREIRA 2013) Por outro lado o estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidantes endoacutegenas eou exoacutegenas (RAHAL 2014)

Tendo em vista que eacute bem demonstrada a implicaccedilatildeo do estresse oxidativo na patogecircnese da RCUI observou-se a estudar a possibilidade do uso de substacircncia antioxidante no tratamento desta doenccedila Recentemente foi comprovada a inibiccedilatildeo do NF-kB na mucosa de pacientes com RCUI ativa com o uso de mesalazina (HAM MOSS 2012)

A mesalazina tem accedilatildeo anti-inflamatoacuteria analgeacutesica e antioxidante e o seu metaboacutelito ativo eacute conhecido como aacutecido 5-aminosaliciacutelico (5-ASA) constituindo a terapia padratildeo de primeira linha para a manutenccedilatildeo e remissatildeo da doenccedila inibindo a cascata do aacutecido araquidocircnico produccedilatildeo de espeacutecies ativas de oxigecircnio (EAO) inibindo a funccedilatildeo dos linfoacutecitos e monoacutecitos assim como a produccedilatildeo de imunoglobulinas (GENNARO 2004 HAYASHI et al 2009 HAM MOSS 2012) Portanto a accedilatildeo da mesalazina ocorre diretamente sobre a mucosa inflamada bloqueando tambeacutem as vias da cicloxigenase e lipoxigenase diminui os niacuteveis teciduais de hipoclorito prevenindo a oxidaccedilatildeo da enzima gliceraldeiacutedo-3-fosfato desidrogenase nas ceacutelulas do epiteacutelio coacutelico (TOKUI et al 2002 BLONSKI BUCHNER 2008)

O interesse em investigar a etiopatogenia da RCUI estaacute relacionada ao desconhecimento dos mecanismos celulares e imunoloacutegicos e por afetar indiviacuteduos nos anos mais saudaacuteveis e produtivos da vida resultando em custos aacute longo prazo para o paciente para o sistema de cuidado de sauacutede e para a sociedade Sendo assim ocorre a necessidade de buscar por novos tratamentos que possam controlar ou minimizar a doenccedila Neste estudo avaliamos as alteraccedilotildees histoloacutegicas as alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana os niacuteveis de lipoperoxidacatildeo e a atividade das enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) no intestino dos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico e tratados com mesalazina

MATERIAL E MEacuteTODOSDelineamento da pesquisa Este estudo tem caraacuteter experimental quantitativo realizada a induccedilatildeo de colite

em ratos machos wistar cujos resultados foram comparados aos dos animais controle

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e tratados com mesalazina Os procedimentos com os animais estatildeo de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos padronizados pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa no Uso de Animais - ULBRA Canoas RS sob a aprovaccedilatildeo do mesmo (projeto nordm 2015-22P)

Grupos ExperimentaisOs animais foram divididos em quatro grupos

1 Grupo controle (CO) n= 5 submetido ao enema com soluccedilatildeo fisioloacutegica

2 Grupo controle + mesalazina (CO + M) n= 5 administraccedilatildeo na dose de 20 mgKg

3 Grupo colite (CL) n= 5 submetido agrave induccedilatildeo da colite por enema de aacutecido aceacutetico

4 Grupo colite + mesalazina (CL + M) n= 5 induccedilatildeo da colite por enema de aacutecido aceacutetico e administraccedilatildeo da mesalazina na dose de 20 mgKg

Modelo ExperimentalOs animais foram divididos em quatro grupos experimentais que foram avaliados

no periacuteodo 48 horas de tratamento O modelo escolhido para a induccedilatildeo da colite foi uma adaptaccedilatildeo do trabalho descrito por Yamada et al (1992) e Tannahill et al (1995) Os animais foram anestesiados e submetidos agrave administraccedilatildeo intracolocircnica por enema a partir de um cateter de 008 mm de diacircmetro com soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico diluiacutedo a 4 e com volume de 4 mL

Administraccedilatildeo da mesalazinaForam administradas nos animais doses de mesalazina por via oral a partir de uma

sonda de gavagem na dose de 20 mgKg diluiacutedos em 1 mL de NaCl uma vez ao dia durante 48 horas apoacutes a induccedilatildeo da colite (adaptado de HIROTANI et al 2008)

Analises BioquiacutemicasHomogeneizadoO tecido do intestino foi homogeneizado em Ultra Turrax (IKA-WERK) por 1

minuto agrave temperatura de 0 - 2 ordmC Este homogeneizado foi centrifugado em centriacutefuga refrigerada por 10 min a 3000 rpm O precipitado foi desprezado e o sobrenadante utilizado para as anaacutelises

ProteiacutenasA concentraccedilatildeo de proteiacutenas no homogeneizado foi determinada utilizando como

padratildeo uma soluccedilatildeo de albumina bovina 1mgmL Para a curva de concentraccedilatildeo utilizada no caacutelculo foram utilizados volumes de 50 100 e 150 microL Colocou-se uma aliacutequota do homogeneizado (20 microL) em 780 microL de aacutegua destilada e 20 mL de reativo C que foi preparado com 50 mL de NaHCO3 (reativo A) adicionado com 05 mL do reativo B1

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(CuSO4 5H2O 1) e 05 mL do reativo B2 (taacutertaro de soacutedio e potaacutessio 2) Apoacutes a adiccedilatildeo do reatico C foi aguardado 10 minutos e colocado 02 mL de reativo de Folin-Ciocalteau diluiacutedo na proporccedilatildeo de 13 em aacutegua destilada Apoacutes 30 minutos de reaccedilatildeo foi realizada a medida no espectrofotocircmetro a 625nm o resultado eacute expresso em mgml (LOWRY et al 1951)

Substacircncias Reativas ao Aacutecido Tiobarbituacuterico (TBARS) A teacutecnica de TBARS consiste no aquecimento do homogeneizado com aacutecido

tiobarbituacuterico e na consequente formaccedilatildeo de um produto corado O aparecimento da coloraccedilatildeo ocorre devido agrave presenccedila do malondialdeiacutedo e outras substacircncias provenientes da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica no material bioloacutegico As amostras de tecido foram colocadas em tubos de ensaio com uma mistura de aacutecido tricloroaceacutetico (TCA) 10 e aacutecido tiobarbituacuterico (TBA) 067 Posteriormente foram aquecidas em banho durante 15 minutos e resfriadas em gelo por aproximadamente 5 minutos O TBA reage com produtos da lipoperoxidaccedilatildeo formando uma base de Schiff o TCA eacute utilizado para desnaturar as proteiacutenas presentes aleacutem de acidificar o meio da reaccedilatildeo Apoacutes o resfriamento das amostras seraacute acrescentado 15 mL de aacutelcool n-butiacutelico para extrair o pigmento formado Foram colocados em agitador por 45 segundos e centrifugados por 10 minutos a 3000 rpmA concentraccedilatildeo de TBARS obtida foi expressa em nmol por miligrama de proteiacutena com um comprimento de onda de 535 nm (BUEGE AUST 1978)

Atividade da Enzima Superoacutexido Dismutase (SOD)A atividade da enzima superoacutexido dismutase (SOD) eacute definida por sua capacidade

de inibir um sistema de detecccedilatildeo que reage com o O-2 A teacutecnica de medida da SOD eacute

baseada na inibiccedilatildeo dessa reaccedilatildeo (MISRA FRIDOVICH 1972)

Antes de realizar a determinaccedilatildeo com o homogeneizado foi realizada a medida do meio de reaccedilatildeo (glicina - NaOH 50 Mm pH 10) e da adrenalina (1 mM pH 10) esta corresponde a 100 da reaccedilatildeo Na cubeta seraacute colocado tampatildeo glicina 50 mM com pH 11 uma aliacutequota de homogeneizado e a adrenalina Apoacutes foi realizada agitaccedilatildeo e a leitura a 480 nm Os dados foram expressos em Unidades de SOD por miligrama de proteiacutena (USOD mg prot) A cataacutelise da adrenalina eacute demonstrada na (reaccedilatildeo 1) logo abaixo

Adrenalina + O2bull- rarr Adrenocromo + O2

O2bull- +SOD rarr H2O2 + O2 (reaccedilatildeo 1)

Adrenalina + O2bull- +SOD rarr 2 Adrenocromo + O2

Atividade da Enzima Glutationa Peroxidase (GPx)Esta enzima cataliza a reaccedilatildeo dos hidroperoacutexidos com a glutationa reduzida (GSH)

para formar glutationa oxidada (GSSG) e o produto da reduccedilatildeo do hidroperoacutexido A teacutecnica consiste em determinar a atividade da enzima espectrofotometricamente medindo-se a velocidade de oxidaccedilatildeo de NADPH em uma mistura de reaccedilatildeo Em uma cubeta foram

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colocados soluccedilatildeo reguladora de fosfatos de potaacutessio (100 mM pH 70) H2O bidestilada azida soacutedica 20 mM com GSH 40 mM GR e NADPH Essa mistura foi encubada dur)ante 3 minutos e logo apoacutes foi adicionada a amostra diluiacuteda e H2O2 Por fim a atividade da GPx foi medida em espectrofotocircmetro a 340 nm e sua atividade expressa em nmoles por minuto por miligrama de proteiacutena (nmolminmg prot) (FLOHEacute GUNZLER1984)

Anaacutelise Estatiacutestica A partir dos dados coletados as meacutedias e os desvios padrotildees de cada grupo

foram calculadas utilizando para anaacutelise estatiacutestica GrapPadInstat versatildeo 30 O teste utilizado para a anaacutelise de variacircncia dos resultados foi o ANOVA seguido do teste de Student-Newman-Keuls para os dados parameacutetricos Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando obtivemos um niacutevel de significacircncia de pelo menos 5 (plt005)

RESULTADOSNa figura 1 a fotomicrografia dos grupos CO e CO+M observou-se a arquitetura

normal do coacutelon onde identifica-se a luz intestinal criptas (CP) e a submucosa (SB) No grupo CL verificou-se alteraccedilatildeo mais severa na arquitetura colocircnica com destruiccedilatildeo das CP e um edema de SB caracterizado por infiltrado inflamatoacuterio No grupo CL+M observou-se a preservaccedilatildeo das criptas da mucosa e um menor edema de submucosa

Figura 1 - Fotomicrografia do intestino de animais do grupo CO CO+M CL e CL+M com aumento de 200x

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Na figura 2 a pressatildeo anal esfincteriana demonstrou uma diminuiccedilatildeo significativa em animais com colite quando comparados aos grupos controles O grupo tratado com mesalazina demonstrou um aumento significativo quando comparados ao grupo colite sendo p lt 005

Figura 2 - Valores meacutedios das pressotildees anais esfincterianas Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 3 o estresse oxidativo foi avaliado pela teacutecnica de TBARS Observaram-se um aumento significativo entre o grupo CL em relaccedilatildeo aos controles A administraccedilatildeo de 20mgkg de mesalazina no grupo tratado diminuiu a LPO em relaccedilatildeo ao grupo colite sendo plt005

Figura 3 - Valores meacutedios dos niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 4 podemos observar os valores referidos agrave atividade da enzima superoacutexido dismutase nos grupos avaliados Houve aumento na atividade enzimaacutetica nos animais

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do grupo CL quando comparados aos grupos CO e CO+M e diminuiccedilatildeo nos animais do grupo CL+M em relaccedilatildeo ao grupo CL sendo plt0001

Figura 4 - Atividade da enzima superoacutexido dismutase Os resultados correspondem a meacutedia plusmnerro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

entre o grupo CL+M e CL

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa

Na figura 5 a atividade da enzima glutationa peroxidase foi observada nos diferentes grupos avaliados Houve diminuiccedilatildeo significativa nos animais do grupo CL quando comparados aos do grupo CO e CO+M e aumento nos grupos CL+M quando comparados aos do grupo CL

Figura 5 - Atividade da enzima glutationa peroxidase Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

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DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

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Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

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e tratados com mesalazina Os procedimentos com os animais estatildeo de acordo com os Princiacutepios Eacuteticos padronizados pelo Comitecirc de Eacutetica em Pesquisa no Uso de Animais - ULBRA Canoas RS sob a aprovaccedilatildeo do mesmo (projeto nordm 2015-22P)

Grupos ExperimentaisOs animais foram divididos em quatro grupos

1 Grupo controle (CO) n= 5 submetido ao enema com soluccedilatildeo fisioloacutegica

2 Grupo controle + mesalazina (CO + M) n= 5 administraccedilatildeo na dose de 20 mgKg

3 Grupo colite (CL) n= 5 submetido agrave induccedilatildeo da colite por enema de aacutecido aceacutetico

4 Grupo colite + mesalazina (CL + M) n= 5 induccedilatildeo da colite por enema de aacutecido aceacutetico e administraccedilatildeo da mesalazina na dose de 20 mgKg

Modelo ExperimentalOs animais foram divididos em quatro grupos experimentais que foram avaliados

no periacuteodo 48 horas de tratamento O modelo escolhido para a induccedilatildeo da colite foi uma adaptaccedilatildeo do trabalho descrito por Yamada et al (1992) e Tannahill et al (1995) Os animais foram anestesiados e submetidos agrave administraccedilatildeo intracolocircnica por enema a partir de um cateter de 008 mm de diacircmetro com soluccedilatildeo de aacutecido aceacutetico diluiacutedo a 4 e com volume de 4 mL

Administraccedilatildeo da mesalazinaForam administradas nos animais doses de mesalazina por via oral a partir de uma

sonda de gavagem na dose de 20 mgKg diluiacutedos em 1 mL de NaCl uma vez ao dia durante 48 horas apoacutes a induccedilatildeo da colite (adaptado de HIROTANI et al 2008)

Analises BioquiacutemicasHomogeneizadoO tecido do intestino foi homogeneizado em Ultra Turrax (IKA-WERK) por 1

minuto agrave temperatura de 0 - 2 ordmC Este homogeneizado foi centrifugado em centriacutefuga refrigerada por 10 min a 3000 rpm O precipitado foi desprezado e o sobrenadante utilizado para as anaacutelises

ProteiacutenasA concentraccedilatildeo de proteiacutenas no homogeneizado foi determinada utilizando como

padratildeo uma soluccedilatildeo de albumina bovina 1mgmL Para a curva de concentraccedilatildeo utilizada no caacutelculo foram utilizados volumes de 50 100 e 150 microL Colocou-se uma aliacutequota do homogeneizado (20 microL) em 780 microL de aacutegua destilada e 20 mL de reativo C que foi preparado com 50 mL de NaHCO3 (reativo A) adicionado com 05 mL do reativo B1

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(CuSO4 5H2O 1) e 05 mL do reativo B2 (taacutertaro de soacutedio e potaacutessio 2) Apoacutes a adiccedilatildeo do reatico C foi aguardado 10 minutos e colocado 02 mL de reativo de Folin-Ciocalteau diluiacutedo na proporccedilatildeo de 13 em aacutegua destilada Apoacutes 30 minutos de reaccedilatildeo foi realizada a medida no espectrofotocircmetro a 625nm o resultado eacute expresso em mgml (LOWRY et al 1951)

Substacircncias Reativas ao Aacutecido Tiobarbituacuterico (TBARS) A teacutecnica de TBARS consiste no aquecimento do homogeneizado com aacutecido

tiobarbituacuterico e na consequente formaccedilatildeo de um produto corado O aparecimento da coloraccedilatildeo ocorre devido agrave presenccedila do malondialdeiacutedo e outras substacircncias provenientes da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica no material bioloacutegico As amostras de tecido foram colocadas em tubos de ensaio com uma mistura de aacutecido tricloroaceacutetico (TCA) 10 e aacutecido tiobarbituacuterico (TBA) 067 Posteriormente foram aquecidas em banho durante 15 minutos e resfriadas em gelo por aproximadamente 5 minutos O TBA reage com produtos da lipoperoxidaccedilatildeo formando uma base de Schiff o TCA eacute utilizado para desnaturar as proteiacutenas presentes aleacutem de acidificar o meio da reaccedilatildeo Apoacutes o resfriamento das amostras seraacute acrescentado 15 mL de aacutelcool n-butiacutelico para extrair o pigmento formado Foram colocados em agitador por 45 segundos e centrifugados por 10 minutos a 3000 rpmA concentraccedilatildeo de TBARS obtida foi expressa em nmol por miligrama de proteiacutena com um comprimento de onda de 535 nm (BUEGE AUST 1978)

Atividade da Enzima Superoacutexido Dismutase (SOD)A atividade da enzima superoacutexido dismutase (SOD) eacute definida por sua capacidade

de inibir um sistema de detecccedilatildeo que reage com o O-2 A teacutecnica de medida da SOD eacute

baseada na inibiccedilatildeo dessa reaccedilatildeo (MISRA FRIDOVICH 1972)

Antes de realizar a determinaccedilatildeo com o homogeneizado foi realizada a medida do meio de reaccedilatildeo (glicina - NaOH 50 Mm pH 10) e da adrenalina (1 mM pH 10) esta corresponde a 100 da reaccedilatildeo Na cubeta seraacute colocado tampatildeo glicina 50 mM com pH 11 uma aliacutequota de homogeneizado e a adrenalina Apoacutes foi realizada agitaccedilatildeo e a leitura a 480 nm Os dados foram expressos em Unidades de SOD por miligrama de proteiacutena (USOD mg prot) A cataacutelise da adrenalina eacute demonstrada na (reaccedilatildeo 1) logo abaixo

Adrenalina + O2bull- rarr Adrenocromo + O2

O2bull- +SOD rarr H2O2 + O2 (reaccedilatildeo 1)

Adrenalina + O2bull- +SOD rarr 2 Adrenocromo + O2

Atividade da Enzima Glutationa Peroxidase (GPx)Esta enzima cataliza a reaccedilatildeo dos hidroperoacutexidos com a glutationa reduzida (GSH)

para formar glutationa oxidada (GSSG) e o produto da reduccedilatildeo do hidroperoacutexido A teacutecnica consiste em determinar a atividade da enzima espectrofotometricamente medindo-se a velocidade de oxidaccedilatildeo de NADPH em uma mistura de reaccedilatildeo Em uma cubeta foram

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201534

colocados soluccedilatildeo reguladora de fosfatos de potaacutessio (100 mM pH 70) H2O bidestilada azida soacutedica 20 mM com GSH 40 mM GR e NADPH Essa mistura foi encubada dur)ante 3 minutos e logo apoacutes foi adicionada a amostra diluiacuteda e H2O2 Por fim a atividade da GPx foi medida em espectrofotocircmetro a 340 nm e sua atividade expressa em nmoles por minuto por miligrama de proteiacutena (nmolminmg prot) (FLOHEacute GUNZLER1984)

Anaacutelise Estatiacutestica A partir dos dados coletados as meacutedias e os desvios padrotildees de cada grupo

foram calculadas utilizando para anaacutelise estatiacutestica GrapPadInstat versatildeo 30 O teste utilizado para a anaacutelise de variacircncia dos resultados foi o ANOVA seguido do teste de Student-Newman-Keuls para os dados parameacutetricos Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando obtivemos um niacutevel de significacircncia de pelo menos 5 (plt005)

RESULTADOSNa figura 1 a fotomicrografia dos grupos CO e CO+M observou-se a arquitetura

normal do coacutelon onde identifica-se a luz intestinal criptas (CP) e a submucosa (SB) No grupo CL verificou-se alteraccedilatildeo mais severa na arquitetura colocircnica com destruiccedilatildeo das CP e um edema de SB caracterizado por infiltrado inflamatoacuterio No grupo CL+M observou-se a preservaccedilatildeo das criptas da mucosa e um menor edema de submucosa

Figura 1 - Fotomicrografia do intestino de animais do grupo CO CO+M CL e CL+M com aumento de 200x

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Na figura 2 a pressatildeo anal esfincteriana demonstrou uma diminuiccedilatildeo significativa em animais com colite quando comparados aos grupos controles O grupo tratado com mesalazina demonstrou um aumento significativo quando comparados ao grupo colite sendo p lt 005

Figura 2 - Valores meacutedios das pressotildees anais esfincterianas Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 3 o estresse oxidativo foi avaliado pela teacutecnica de TBARS Observaram-se um aumento significativo entre o grupo CL em relaccedilatildeo aos controles A administraccedilatildeo de 20mgkg de mesalazina no grupo tratado diminuiu a LPO em relaccedilatildeo ao grupo colite sendo plt005

Figura 3 - Valores meacutedios dos niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 4 podemos observar os valores referidos agrave atividade da enzima superoacutexido dismutase nos grupos avaliados Houve aumento na atividade enzimaacutetica nos animais

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do grupo CL quando comparados aos grupos CO e CO+M e diminuiccedilatildeo nos animais do grupo CL+M em relaccedilatildeo ao grupo CL sendo plt0001

Figura 4 - Atividade da enzima superoacutexido dismutase Os resultados correspondem a meacutedia plusmnerro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

entre o grupo CL+M e CL

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa

Na figura 5 a atividade da enzima glutationa peroxidase foi observada nos diferentes grupos avaliados Houve diminuiccedilatildeo significativa nos animais do grupo CL quando comparados aos do grupo CO e CO+M e aumento nos grupos CL+M quando comparados aos do grupo CL

Figura 5 - Atividade da enzima glutationa peroxidase Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 132015 37

DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

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Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

REFEREcircNCIASBLONSKI W BUCHNER A M Treatment of ulcerative colitis Current opinion in gastroenterology v 30 n 1 p 84-96 2008

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CHUONG M C CHRISTENSEN J M AYRES J W New dissolution method for mesalamine tablets and capsules Dissolution Technologies v 15 n 3 p 7-14 2008

COTRAN R S Patologia - Bases Patoloacutegicas das Doenccedilas 7 ed Rio de Janeiro Elsevier 2005

COTRAN R S Fundamentos de Patologia 8 ed Rio de Janeiro Elsevier 2012

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 132015 39

CURY D B MOSS A C Doenccedilas inflamatoacuterias intestinais retocolite ulcerativa e doenccedila de crohn 2 ed Satildeo Paulo Saraiva 2015

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HARTMANN R M et al Boswellia serrate has beneficial anti-inflamatory and antioxidant properties in a model of experimental colitis Phytotherapy Research v 28 n 9 p 1392-1398 2014

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(CuSO4 5H2O 1) e 05 mL do reativo B2 (taacutertaro de soacutedio e potaacutessio 2) Apoacutes a adiccedilatildeo do reatico C foi aguardado 10 minutos e colocado 02 mL de reativo de Folin-Ciocalteau diluiacutedo na proporccedilatildeo de 13 em aacutegua destilada Apoacutes 30 minutos de reaccedilatildeo foi realizada a medida no espectrofotocircmetro a 625nm o resultado eacute expresso em mgml (LOWRY et al 1951)

Substacircncias Reativas ao Aacutecido Tiobarbituacuterico (TBARS) A teacutecnica de TBARS consiste no aquecimento do homogeneizado com aacutecido

tiobarbituacuterico e na consequente formaccedilatildeo de um produto corado O aparecimento da coloraccedilatildeo ocorre devido agrave presenccedila do malondialdeiacutedo e outras substacircncias provenientes da peroxidaccedilatildeo lipiacutedica no material bioloacutegico As amostras de tecido foram colocadas em tubos de ensaio com uma mistura de aacutecido tricloroaceacutetico (TCA) 10 e aacutecido tiobarbituacuterico (TBA) 067 Posteriormente foram aquecidas em banho durante 15 minutos e resfriadas em gelo por aproximadamente 5 minutos O TBA reage com produtos da lipoperoxidaccedilatildeo formando uma base de Schiff o TCA eacute utilizado para desnaturar as proteiacutenas presentes aleacutem de acidificar o meio da reaccedilatildeo Apoacutes o resfriamento das amostras seraacute acrescentado 15 mL de aacutelcool n-butiacutelico para extrair o pigmento formado Foram colocados em agitador por 45 segundos e centrifugados por 10 minutos a 3000 rpmA concentraccedilatildeo de TBARS obtida foi expressa em nmol por miligrama de proteiacutena com um comprimento de onda de 535 nm (BUEGE AUST 1978)

Atividade da Enzima Superoacutexido Dismutase (SOD)A atividade da enzima superoacutexido dismutase (SOD) eacute definida por sua capacidade

de inibir um sistema de detecccedilatildeo que reage com o O-2 A teacutecnica de medida da SOD eacute

baseada na inibiccedilatildeo dessa reaccedilatildeo (MISRA FRIDOVICH 1972)

Antes de realizar a determinaccedilatildeo com o homogeneizado foi realizada a medida do meio de reaccedilatildeo (glicina - NaOH 50 Mm pH 10) e da adrenalina (1 mM pH 10) esta corresponde a 100 da reaccedilatildeo Na cubeta seraacute colocado tampatildeo glicina 50 mM com pH 11 uma aliacutequota de homogeneizado e a adrenalina Apoacutes foi realizada agitaccedilatildeo e a leitura a 480 nm Os dados foram expressos em Unidades de SOD por miligrama de proteiacutena (USOD mg prot) A cataacutelise da adrenalina eacute demonstrada na (reaccedilatildeo 1) logo abaixo

Adrenalina + O2bull- rarr Adrenocromo + O2

O2bull- +SOD rarr H2O2 + O2 (reaccedilatildeo 1)

Adrenalina + O2bull- +SOD rarr 2 Adrenocromo + O2

Atividade da Enzima Glutationa Peroxidase (GPx)Esta enzima cataliza a reaccedilatildeo dos hidroperoacutexidos com a glutationa reduzida (GSH)

para formar glutationa oxidada (GSSG) e o produto da reduccedilatildeo do hidroperoacutexido A teacutecnica consiste em determinar a atividade da enzima espectrofotometricamente medindo-se a velocidade de oxidaccedilatildeo de NADPH em uma mistura de reaccedilatildeo Em uma cubeta foram

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colocados soluccedilatildeo reguladora de fosfatos de potaacutessio (100 mM pH 70) H2O bidestilada azida soacutedica 20 mM com GSH 40 mM GR e NADPH Essa mistura foi encubada dur)ante 3 minutos e logo apoacutes foi adicionada a amostra diluiacuteda e H2O2 Por fim a atividade da GPx foi medida em espectrofotocircmetro a 340 nm e sua atividade expressa em nmoles por minuto por miligrama de proteiacutena (nmolminmg prot) (FLOHEacute GUNZLER1984)

Anaacutelise Estatiacutestica A partir dos dados coletados as meacutedias e os desvios padrotildees de cada grupo

foram calculadas utilizando para anaacutelise estatiacutestica GrapPadInstat versatildeo 30 O teste utilizado para a anaacutelise de variacircncia dos resultados foi o ANOVA seguido do teste de Student-Newman-Keuls para os dados parameacutetricos Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando obtivemos um niacutevel de significacircncia de pelo menos 5 (plt005)

RESULTADOSNa figura 1 a fotomicrografia dos grupos CO e CO+M observou-se a arquitetura

normal do coacutelon onde identifica-se a luz intestinal criptas (CP) e a submucosa (SB) No grupo CL verificou-se alteraccedilatildeo mais severa na arquitetura colocircnica com destruiccedilatildeo das CP e um edema de SB caracterizado por infiltrado inflamatoacuterio No grupo CL+M observou-se a preservaccedilatildeo das criptas da mucosa e um menor edema de submucosa

Figura 1 - Fotomicrografia do intestino de animais do grupo CO CO+M CL e CL+M com aumento de 200x

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Na figura 2 a pressatildeo anal esfincteriana demonstrou uma diminuiccedilatildeo significativa em animais com colite quando comparados aos grupos controles O grupo tratado com mesalazina demonstrou um aumento significativo quando comparados ao grupo colite sendo p lt 005

Figura 2 - Valores meacutedios das pressotildees anais esfincterianas Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 3 o estresse oxidativo foi avaliado pela teacutecnica de TBARS Observaram-se um aumento significativo entre o grupo CL em relaccedilatildeo aos controles A administraccedilatildeo de 20mgkg de mesalazina no grupo tratado diminuiu a LPO em relaccedilatildeo ao grupo colite sendo plt005

Figura 3 - Valores meacutedios dos niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 4 podemos observar os valores referidos agrave atividade da enzima superoacutexido dismutase nos grupos avaliados Houve aumento na atividade enzimaacutetica nos animais

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do grupo CL quando comparados aos grupos CO e CO+M e diminuiccedilatildeo nos animais do grupo CL+M em relaccedilatildeo ao grupo CL sendo plt0001

Figura 4 - Atividade da enzima superoacutexido dismutase Os resultados correspondem a meacutedia plusmnerro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

entre o grupo CL+M e CL

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa

Na figura 5 a atividade da enzima glutationa peroxidase foi observada nos diferentes grupos avaliados Houve diminuiccedilatildeo significativa nos animais do grupo CL quando comparados aos do grupo CO e CO+M e aumento nos grupos CL+M quando comparados aos do grupo CL

Figura 5 - Atividade da enzima glutationa peroxidase Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

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DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201538

Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

REFEREcircNCIASBLONSKI W BUCHNER A M Treatment of ulcerative colitis Current opinion in gastroenterology v 30 n 1 p 84-96 2008

BUEGE J A AUST S D Microsomal lipid peroxidation Methods in enzymology v 52 p 302-309 1978

CARDOZO W S WALTER C Doenccedila inflamatoacuteria intestinal 2 ed Satildeo Paulo Saraiva 2015

CAROCHO M FERREIRA F R A review on antioxidants prooxidants and related controversy Natural and synthetic compounds screening and analysis methodologies and future perspectives Food and Chemical Toxicology v 51 p 15-23 2013

CHUONG M C CHRISTENSEN J M AYRES J W New dissolution method for mesalamine tablets and capsules Dissolution Technologies v 15 n 3 p 7-14 2008

COTRAN R S Patologia - Bases Patoloacutegicas das Doenccedilas 7 ed Rio de Janeiro Elsevier 2005

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Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 132015 39

CURY D B MOSS A C Doenccedilas inflamatoacuterias intestinais retocolite ulcerativa e doenccedila de crohn 2 ed Satildeo Paulo Saraiva 2015

DIANZANI C et al Cholesteryl butyrate solid lipid nanoparticles inhibit adhesion of human neutrophils to endothelial cells British journal of pharmacology v 148 n 5 p 648-656 2006

FILLMANN H et al Glutamine inhibits over-expression of pro-inflammatory genes and down-regulates the nuclear factor kappaB pathway in an experimental model of colitis in the rat Toxicology v 236 p 217ndash226 2007

FLOHEacute L GUNZLER W A Assays of glutathione peroxidase Methods in enzymology v 105 p114-121 1984

GASSULL M A Review article the intestinal lumen as a therapeutic target in inflammatory bowel disease Alimentary Pharmacology amp Therapeutics v 24 n 3 p 90-95 2006

GENNARO A R A ciecircncia e a praacutetica da farmaacutecia 20 ed Rio de Janeiro Guanabara Koogan 2004

GHATULE R R Protective effects of Aegle marmelos fruit pulp on 246 trinitrobenzene sulfonic acid-induced experimental colitis Pharmacognosy magazine v 10 n 1 p S147-52 2014

GUYTON A C HALL J E Tratado de Fisiologia Meacutedica 12 ed Satildeo Paulo Guanabara Koogan 2011

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HARTMANN R M Effect of Boswellia serrata on Antioxidant Status in an Experimental Model of Colitis Rats Induced by Acetic Acid Digestive diseases and sciences v 57 n 8 p 2038-2044 2012

HARTMANN R M et al Boswellia serrate has beneficial anti-inflamatory and antioxidant properties in a model of experimental colitis Phytotherapy Research v 28 n 9 p 1392-1398 2014

HAYASHI Y et al Oral administration of mesalazine protect against mucosa injury and permeation in dextran sulfate sodium-induced colitis in rats Scandinavian journal of gastroenterology v 44 n 11 p 1323-1331 2009

HIROTANI Y et al Changes of the peptideyy levels in the intestinal tissue of rats with experimental colitisfollowing oral administration of mesalazine and prednisolone Yakugaku zasshi Journal of the Pharmaceutical Society of Japan v 128 n 9 p 1347-1353 2008

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KRETZMANN N A et al Effects of glutamine on proinflammatory gene expression and activation of nuclear factor kappa B and signal transducers and activators of transcription in TNBS-induced colitis Inflammatory bowel diseases v 14 n 11 p 1504-1513 2008

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RAHAL A et al Oxidative stress prooxidants and antioxidants the interplay BioMed Research International p 761264 2014

REID G CAREY F A Pathology of idiopathic inflammatory bowel disease Surgery v 29 p 362-365 2011

SIDDIQUI A et al Antioxidant therapy with N- Acetiylcysteine plus mesalamine accelerates mucosal healing in a rodent model of colitis Digestive diseases and sciences v 51 n 4 p 698-705 2006

SONG M XIA B LI J Effects of topical treatment of sodium butyrate and 5-aminosalicylic acid on expression of trefoil factor 3 interleukin 1beta and nuclear factor kappaB in trinitrobenzenesulphonic acid induced colitis in rats Postgraduate medical journal v 82 n 964 p 130-135

TAHAN G et al Melatonin expresses powerful anti-inflammatory and antioxidant activities resulting in colpleteimprovement of acetic-acid-induced colitis in rats Digestive diseases and sciences v 56 n 3 p 715-20 2011

TANNAHILL C L et al Induction and immunolocalization of manganese superoxide dismutase in acute acetic acid-induced colitis in the rat Gastroenterology v 109 n 3 p 800-811 1995

TOKUI K et al Comparative Absorption of 5- aminosalicylic acid (5-ASA) after administration of a 5-ASA enema and salazosulfapyridine (SASP) after an SASP suppository in Japanese volunteers Biological amp pharmaceutical bulletin v 25 n 2 p 264-267 2002

VIEIRA E L et al Oral administration of sodium butyrate attenuates inflammation and mucosal lesion in experimental acute ulcerative colitis The Journal of nutritional biochemistry v 23 n 5 p 430-436 2011

YAMADA Y et al A comparative analysis of two models of colitis in rats Gastroenterology v 102 n 5 p 1524-1534 1992

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201534

colocados soluccedilatildeo reguladora de fosfatos de potaacutessio (100 mM pH 70) H2O bidestilada azida soacutedica 20 mM com GSH 40 mM GR e NADPH Essa mistura foi encubada dur)ante 3 minutos e logo apoacutes foi adicionada a amostra diluiacuteda e H2O2 Por fim a atividade da GPx foi medida em espectrofotocircmetro a 340 nm e sua atividade expressa em nmoles por minuto por miligrama de proteiacutena (nmolminmg prot) (FLOHEacute GUNZLER1984)

Anaacutelise Estatiacutestica A partir dos dados coletados as meacutedias e os desvios padrotildees de cada grupo

foram calculadas utilizando para anaacutelise estatiacutestica GrapPadInstat versatildeo 30 O teste utilizado para a anaacutelise de variacircncia dos resultados foi o ANOVA seguido do teste de Student-Newman-Keuls para os dados parameacutetricos Os resultados foram considerados estatisticamente significativos quando obtivemos um niacutevel de significacircncia de pelo menos 5 (plt005)

RESULTADOSNa figura 1 a fotomicrografia dos grupos CO e CO+M observou-se a arquitetura

normal do coacutelon onde identifica-se a luz intestinal criptas (CP) e a submucosa (SB) No grupo CL verificou-se alteraccedilatildeo mais severa na arquitetura colocircnica com destruiccedilatildeo das CP e um edema de SB caracterizado por infiltrado inflamatoacuterio No grupo CL+M observou-se a preservaccedilatildeo das criptas da mucosa e um menor edema de submucosa

Figura 1 - Fotomicrografia do intestino de animais do grupo CO CO+M CL e CL+M com aumento de 200x

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Na figura 2 a pressatildeo anal esfincteriana demonstrou uma diminuiccedilatildeo significativa em animais com colite quando comparados aos grupos controles O grupo tratado com mesalazina demonstrou um aumento significativo quando comparados ao grupo colite sendo p lt 005

Figura 2 - Valores meacutedios das pressotildees anais esfincterianas Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 3 o estresse oxidativo foi avaliado pela teacutecnica de TBARS Observaram-se um aumento significativo entre o grupo CL em relaccedilatildeo aos controles A administraccedilatildeo de 20mgkg de mesalazina no grupo tratado diminuiu a LPO em relaccedilatildeo ao grupo colite sendo plt005

Figura 3 - Valores meacutedios dos niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 4 podemos observar os valores referidos agrave atividade da enzima superoacutexido dismutase nos grupos avaliados Houve aumento na atividade enzimaacutetica nos animais

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do grupo CL quando comparados aos grupos CO e CO+M e diminuiccedilatildeo nos animais do grupo CL+M em relaccedilatildeo ao grupo CL sendo plt0001

Figura 4 - Atividade da enzima superoacutexido dismutase Os resultados correspondem a meacutedia plusmnerro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

entre o grupo CL+M e CL

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa

Na figura 5 a atividade da enzima glutationa peroxidase foi observada nos diferentes grupos avaliados Houve diminuiccedilatildeo significativa nos animais do grupo CL quando comparados aos do grupo CO e CO+M e aumento nos grupos CL+M quando comparados aos do grupo CL

Figura 5 - Atividade da enzima glutationa peroxidase Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

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DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

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Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

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CURY D B MOSS A C Doenccedilas inflamatoacuterias intestinais retocolite ulcerativa e doenccedila de crohn 2 ed Satildeo Paulo Saraiva 2015

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HARTMANN R M et al Boswellia serrate has beneficial anti-inflamatory and antioxidant properties in a model of experimental colitis Phytotherapy Research v 28 n 9 p 1392-1398 2014

HAYASHI Y et al Oral administration of mesalazine protect against mucosa injury and permeation in dextran sulfate sodium-induced colitis in rats Scandinavian journal of gastroenterology v 44 n 11 p 1323-1331 2009

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Na figura 2 a pressatildeo anal esfincteriana demonstrou uma diminuiccedilatildeo significativa em animais com colite quando comparados aos grupos controles O grupo tratado com mesalazina demonstrou um aumento significativo quando comparados ao grupo colite sendo p lt 005

Figura 2 - Valores meacutedios das pressotildees anais esfincterianas Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 3 o estresse oxidativo foi avaliado pela teacutecnica de TBARS Observaram-se um aumento significativo entre o grupo CL em relaccedilatildeo aos controles A administraccedilatildeo de 20mgkg de mesalazina no grupo tratado diminuiu a LPO em relaccedilatildeo ao grupo colite sendo plt005

Figura 3 - Valores meacutedios dos niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

Na figura 4 podemos observar os valores referidos agrave atividade da enzima superoacutexido dismutase nos grupos avaliados Houve aumento na atividade enzimaacutetica nos animais

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do grupo CL quando comparados aos grupos CO e CO+M e diminuiccedilatildeo nos animais do grupo CL+M em relaccedilatildeo ao grupo CL sendo plt0001

Figura 4 - Atividade da enzima superoacutexido dismutase Os resultados correspondem a meacutedia plusmnerro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

entre o grupo CL+M e CL

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa

Na figura 5 a atividade da enzima glutationa peroxidase foi observada nos diferentes grupos avaliados Houve diminuiccedilatildeo significativa nos animais do grupo CL quando comparados aos do grupo CO e CO+M e aumento nos grupos CL+M quando comparados aos do grupo CL

Figura 5 - Atividade da enzima glutationa peroxidase Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

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DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201538

Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

REFEREcircNCIASBLONSKI W BUCHNER A M Treatment of ulcerative colitis Current opinion in gastroenterology v 30 n 1 p 84-96 2008

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CARDOZO W S WALTER C Doenccedila inflamatoacuteria intestinal 2 ed Satildeo Paulo Saraiva 2015

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Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 132015 39

CURY D B MOSS A C Doenccedilas inflamatoacuterias intestinais retocolite ulcerativa e doenccedila de crohn 2 ed Satildeo Paulo Saraiva 2015

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Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201540

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Revista de Iniciaccedilatildeo Cientiacutefica da Ulbra Ndeg 13201536

do grupo CL quando comparados aos grupos CO e CO+M e diminuiccedilatildeo nos animais do grupo CL+M em relaccedilatildeo ao grupo CL sendo plt0001

Figura 4 - Atividade da enzima superoacutexido dismutase Os resultados correspondem a meacutedia plusmnerro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

entre o grupo CL+M e CL

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa

Na figura 5 a atividade da enzima glutationa peroxidase foi observada nos diferentes grupos avaliados Houve diminuiccedilatildeo significativa nos animais do grupo CL quando comparados aos do grupo CO e CO+M e aumento nos grupos CL+M quando comparados aos do grupo CL

Figura 5 - Atividade da enzima glutationa peroxidase Os resultados correspondem a meacutedia plusmn erro padratildeo (EP) para 5 animais de cada grupo

diferenccedila significativa entre o grupo CL e CO CO+M diferenccedila significativa entre o grupo CL+M e CL

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DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

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Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

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COTRAN R S Fundamentos de Patologia 8 ed Rio de Janeiro Elsevier 2012

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DIANZANI C et al Cholesteryl butyrate solid lipid nanoparticles inhibit adhesion of human neutrophils to endothelial cells British journal of pharmacology v 148 n 5 p 648-656 2006

FILLMANN H et al Glutamine inhibits over-expression of pro-inflammatory genes and down-regulates the nuclear factor kappaB pathway in an experimental model of colitis in the rat Toxicology v 236 p 217ndash226 2007

FLOHEacute L GUNZLER W A Assays of glutathione peroxidase Methods in enzymology v 105 p114-121 1984

GASSULL M A Review article the intestinal lumen as a therapeutic target in inflammatory bowel disease Alimentary Pharmacology amp Therapeutics v 24 n 3 p 90-95 2006

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GHATULE R R Protective effects of Aegle marmelos fruit pulp on 246 trinitrobenzene sulfonic acid-induced experimental colitis Pharmacognosy magazine v 10 n 1 p S147-52 2014

GUYTON A C HALL J E Tratado de Fisiologia Meacutedica 12 ed Satildeo Paulo Guanabara Koogan 2011

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HAM M MOSS A C Mesalamine in the treatment and maintenance of remission of ulcerative colitis Expert review of clinical pharmacology v 5 n 2 p 113-123 2012

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HARTMANN R M et al Boswellia serrate has beneficial anti-inflamatory and antioxidant properties in a model of experimental colitis Phytotherapy Research v 28 n 9 p 1392-1398 2014

HAYASHI Y et al Oral administration of mesalazine protect against mucosa injury and permeation in dextran sulfate sodium-induced colitis in rats Scandinavian journal of gastroenterology v 44 n 11 p 1323-1331 2009

HIROTANI Y et al Changes of the peptideyy levels in the intestinal tissue of rats with experimental colitisfollowing oral administration of mesalazine and prednisolone Yakugaku zasshi Journal of the Pharmaceutical Society of Japan v 128 n 9 p 1347-1353 2008

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KRETZMANN N A et al Effects of glutamine on proinflammatory gene expression and activation of nuclear factor kappa B and signal transducers and activators of transcription in TNBS-induced colitis Inflammatory bowel diseases v 14 n 11 p 1504-1513 2008

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TAHAN G et al Melatonin expresses powerful anti-inflammatory and antioxidant activities resulting in colpleteimprovement of acetic-acid-induced colitis in rats Digestive diseases and sciences v 56 n 3 p 715-20 2011

TANNAHILL C L et al Induction and immunolocalization of manganese superoxide dismutase in acute acetic acid-induced colitis in the rat Gastroenterology v 109 n 3 p 800-811 1995

TOKUI K et al Comparative Absorption of 5- aminosalicylic acid (5-ASA) after administration of a 5-ASA enema and salazosulfapyridine (SASP) after an SASP suppository in Japanese volunteers Biological amp pharmaceutical bulletin v 25 n 2 p 264-267 2002

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DISCUSSAtildeONo presente estudo foi avaliado o efeito da mesalazina sobre marcadores de

estresse oxidativo Os resultados da anaacutelise histopatoloacutegica demonstraram o efeito troacutefico da mesalazina no coacutelon melhorando a estrutura colocircnica diminuindo o tamanho e a intensidade da lesatildeo Juntamente com a accedilatildeo troacutefica observou-se a melhora na permeabilidade intestinal com a reconstruccedilatildeo colocircnica e a melhora na arquitetura da mucosa Estudos anteriores demonstraram que a administraccedilatildeo concomitante de butirato e mesalazina em modelo de colite experimental induzida por dextran sulfato de soacutedio (DSS) melhorou a lesatildeo colocircnica e normalizou o infiltrado de neutroacutefilo destacando o uso potencial do butirato como adjuvante no tratamento da RCUI (DIANZANI et al 2006 GASSULL 2006 SONG XIA LI 2006 HAMER et al 2008 VIEIRA et al 2011) Em ensaios experimentais a mesalazina foi administrada em combinaccedilatildeo com o antioxidante n-acetilcisteiacutena (NAC) em ratos com colite induzida por aacutecido 246ndashtrinitrobenzeno sulfocircnico (TNBS) e verificou-se que o tratamento combinado promoveu o reparo da mucosa inflamada (SIDDIQUI et al 2006)

Neste estudo verificamos as medidas de pressatildeo anal esfincteriana (PAE) atraveacutes de manometria anorretal no qual observamos uma diminuiccedilatildeo no grupo de animais com induccedilatildeo da colite Por outro lado os animais tratados com mesalazina apresentaram um aumento significativo da pressatildeo anal esfincteriana assemelhando-se ao grupo controle Esses resultados corroboram com os estudos de Kretzmann et al (2008) e Hartmann et al (2014) que demonstraram um aumento nos niacuteveis de pressatildeo anal esfincteriana quando administrado doses de dois antioxidantes glutamina e Boswellia serrata (KRETZMANN et al 2008 HARTMANN et al 2014)

Os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo (LPO) foram avaliados pela teacutecnica de TBARS na qual observamos um aumento significativo nos niacuteveis de LPO no grupo colite No entanto o grupo tratado com mesalazina demonstrou uma reduccedilatildeo significativa desses niacuteveis sugerindo o seu efeito antioxidante Resultados semelhantes foram encontrados no estudo de Fillmann et al (2007) que utilizaram a glutamina como preacute-tratamento na colite induzida por TNBS e tambeacutem observaram uma reduccedilatildeo dos niacuteveis de LPO nos animais tratados Tahan et al (2011) e Ghatule et al (2014) observaram que a administraccedilatildeo de melatonina e de extrato de marmelo nos animais com colite reduziu os niacuteveis de lipoperoxidaccedilatildeo nos grupos tratados com essas substacircncias com efeito antioxidante (FILLMANN et al 2007 TAHAN et al 2011 GHATULE et al 2014 )

O estresse oxidativo tem seus danos minimizados por sistemas de defesa antioxidante natildeo enzimaacutetico como as vitaminas A C e E e enzimaacutetico como as enzimas superoacutexido dismutase (SOD) e glutationa peroxidase (GPx) (HALLIWELL GUTTERIDGE 2007) Neste estudo avaliamos a atividade da enzima SOD e observamos um aumento significativo da atividade no grupo colite possivelmente pela ativaccedilatildeo do mecanismo de compensaccedilatildeo ao dano agudo causado pela accedilatildeo do aacutecido aceacutetico no intestino dos animais Entretanto no grupo que foi administrada a mesalazina os valores da enzima SOD mantiveram-se proacuteximos aos do grupo controle Resultados semelhantes foram observados no estudo de Hartmann et al (2012) que administrou doses do extrato de

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Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

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Boswellia serrata nos animais com colite induzida por aacutecido aceacutetico observando o mesmo paracircmetro dessa enzima com valores proacuteximos ao do grupo controle apoacutes o tratamento (HARTMANN et al 2012)

A atividade da enzima GPx demonstrou uma reduccedilatildeo no grupo colite e um aumento no grupo que recebeu o tratamento com mesalazina Os resultados apontam que a mesalazina restaurou a atividade enzimaacutetica nos grupos tratados confirmando a sua accedilatildeo sobre o estresse oxidativo Nossos resultados corroboram com o estudo de Maheshwari et al (2015) que utilizou sinvastatina e rosuvastatina no tratamento da colite induzida por TNBS observaram um aumento da atividade da GPx possivelmente pelo efeito antioxidante dessas substacircncias utilizadas como tratamento (MAHESHWARI et al 2015) Visto que o tratamento utilizado neste trabalho eacute bem toleraacutevel e de faacutecil acesso a possibilidade de utilizaccedilatildeo deste medicamento na cliacutenica como coadjuvante no tratamento da colite eacute plausiacutevel

CONCLUSAtildeOComo a fisiopatologia da RCUI ainda natildeo foi completamente elucidada ainda

existe um grande espaccedilo para futuros tratamentos nessa aacuterea Avaliamos neste trabalho os danos causados pela colite induzida por aacutecido aceacutetico onde observamos um aumento da lipoperoxidaccedilatildeo alteraccedilotildees na pressatildeo anal esfincteriana e das enzimas antioxidantes bem como das lesotildees teciduais Sendo assim a administraccedilatildeo da mesalazina foi eficaz na melhora dos danos oxidativos restaurando a atividade das enzimas antioxidantes e demonstrou um efeito protetor contra as lesotildees teciduais possivelmente pelo seu efeito antioxidante

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