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RESISTÊNCIA A ANTIMICROBIANOS DE ISOLADOS DE Escherichia coli OBTIDOS DE DIARREIA EM BEZZEROS

Amanda A. L. Santos1, Juliane F. Tutija2,Guilherme H. Reckziegel3 , Cássia R. B. Leal 4.

1Aluna do Curso de Zootecnia da FAMEZ/UFMS. Bolsista PIBIC. E-mail: amandalindaalice@gmail.com2Mestranda em Ciências Veterinárias FAMEZ/UFMS. E-mail: juliane_tutija@hotmail.com3Residente em Medicina Veterinária Preventiva da FAMEZ/UFMS. E-mail: ghreckziegel@gmail.com4 Professora da FAMEZ/UFMS. E-mail: cassia.leal@ufms.br

Resumo: A diarreia é considerada uma das principais causas de doença e mortalidade que acometem em bezerros especialmente nas primeiras quatro semanas de idade. Alguns fatores de riscos que influenciam o aparecimento da doença são má higiene, condições climáticas e condição imunológica. A colibacilose é uma das mais importantes doenças causadoras de diarreia, sendo causada pela bactéria Escherichia coli. Para o tratamento dessa doença, antimicrobianos são utilizados, sendo substâncias capazes de matar bactérias ou inibir o crescimento dos micro-organismos. Em casos graves, devido ao tratamento errôneo ou a resistência bacteriana, os animais podem vir a óbito, demonstrando a importância da realização do antibiograma para a escolha do antibiótico adequando.

Palavras-Chave: colibacilose, microbiologia, antibiograma.

ANTIMICROBIAL RESISTENCE OF Escherichia coli ISOLATES FROM DIARRHEA IN CALVES

Abstract: Diarrhea is considered one of the leading causes of disease and mortality affecting calves especially in the first four weeks of age. Some risk factors that influence the onset of the disease are poor hygiene, weather conditions, and immune condition. Colibacillosis is one of the most important diseases that cause diarrhea, being caused by Escherichia coli. For the treatment of this disease, antibiotics are used, being substances capable of killing bacteria or inhibiting the growth of microorganisms. In severe cases, due to wrong treatment or bacterial resistance, animals may die, demonstrating the importance of performing the antibiogram for choosing the appropriate antibiotic.

Keywords: colibacillosis, microbiology, antibiograma.

Introdução

A diarreia é uma das doenças mais prevalentes em bezerros, a maioria dos problemas sanitários na bovinocultura ocorre na fase de cria, na qual, a diarreia tem sido apontada como a mais importante enfermidade de bovinos jovens, com perdas econômicas entre 20% e 52%, com custos totais em relação a doenças entéricas equivalentes a US$ 33,46 bezerro/ano (CHO ET AL., 2013). Diversos enteropatógenos podem causar diarreia, com destaque para Escherichia coli, agente etiológico da colibacilose (BUTLER & CLARKE 1994, BLANCHARD 2012). O principal sinal clínico da colibacilose é a diarreia aquosa de coloração amarelo-pálida ou esverdeada e, raramente com muco ou sangue. Ademais há desidratação, debilidade e óbito dentro de poucos dias (HAGGARD, 1985; CASTRO & YANO, 1992).

Escherichia coli são bactérias gram negativas, fermentativas, anaeróbias facultativas, cultivadas facilmente em meios de cultura de rotina. A via de transmissão de Escherichia coli diarreiogênica é fecal-oral por meio de água e alimentos contaminados. Comumente isoladas de fezes, na maioria das vezes E. coli são comensais, não causando doença em seus hospedeiros. Entretanto, em animais debilitados, imunocomprometidos ou com a barreira gastrointestinal alterada, cepas de Escherichia coli não patogênicas presentes no intestino podem causar infecção. Desta forma, para confirmação de diarreia por Escherichia coli, é necessária a identificação de cepas de Escherichia coli diarreiogênicas (NATARO & KAPER 1998)

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Material e Métodos

Foram coletadas 20 amostras de fezes de bezerros com até 60 dias de idade em 4 fazendas nos municípios de Rio Brilhante (04 amostras), Água Clara (10 amostras) e Campo Grande (06 amostras) todas localizadas no estado do Mato Grosso do Sul. Essas coletas foram realizadas com sacos plásticos limpos, diretamente da ampola retal de cada animal, e foram mantidas resfriadas (4ºC) até o envio ao Laboratório de Bacteriologia, da Faculdade de Medicina Veterinária e Zootecnia da Universidade Federal de Mato Grosso do Sul, em no máximo 48 horas após a coleta. Junto com as amostras foram coletados também dados clínicos e epidemiológicos de cada animal. As amostras foram semeadas em placas de ágar MacConkey e ágar BHI (infusão de cérebro e coração), sendo incubadas a 37 ± 1º C por 18 a 24 h.

Após o período de crescimento inicial as amostras provenientes do cultivo em MacConkey foram separadas de acordo com características das colônias e características morfotintoriais (coloração de Gram). Uma bateria de provas bioquímicas específicas para enterobactérias foi utilizada para se ter a confirmação de Escherichia coli, utilizando ágar TSI (Triplo Açúcar Ferro), SIM (Sulfureto, Indol, Motilidade), Citrato de Simmons, Fenilalanina, Lisina Ferro, Ureia e MRVP.

Foi realizado o antibiograma das amostras que apresentaram características bioquímicas compatíveis com o gênero Escherichia coli. O método que foi utilizado no teste de resistência antimicrobiana foi o de Kirby-Bauer (Bauer et al., 1966). No qual as colônias isoladas e identificadas foram selecionadas e suspensas em 4 mL de caldo Mueller Hinton esterilizado, padronizando-se a suspensão para uma turvação compatível com o grau 0,5 da escala Mac Farland (1x106 UFC/mL). Um swab estéril foi embebido na suspensão bacteriana e semeado em ágar Mueller Hinton por todas direções da placa (três direções). Com auxílio de uma pinça flambada e resfriada, os discos de antibióticos foram colocados sobre a superfície do meio inoculado. Após incubação de 18 horas, os halos foram mesurados com régua e observados em uma tabela se a bactéria é sensível ou resistente. Foram utilizados para o antibiograma 12 antibióticos AMC (Amox. + ác. Clavuronico), ENO (Enrofloxacina), NOR (Norfloxacina), OXA (Oxacilina), SUT (Sulfazotrim), TET (Tetraciclina), PEN (Penicilina), GEN (Gentamicina), CFE (Cefalexina), FLF (Florfenicol), AMO (Amoxicilina) e CFL (Cefalotina), para verificar a resistência ou sensibilidade bacteriana, sendo estes antibióticos comumente utilizados para o tratamento de diarreia em bovinos.

Resultados e Discussão

Em todas as amostras foram isoladas Escherichia coli, sendo uma bactéria comum no trato intestinal de ruminantes, isso explica o porquê todos os animais foram positivos a Escherichia coli. (NATARO & KAPER 1998) A diarreia é uma das mais importantes doenças de bezerros neonatos da produção de leite e de carne. Ela é responsável por grandes prejuízos econômicos na atividade agropecuária devido aos índices de mortalidade dos animais afetados, os custos com tratamentos e ainda, à perda de peso e o menor desenvolvimento dos bezerros doentes em relação aos sadios (BRUNING-FANN E KANEENE, 1996; BARRINGTON ET AL., 2002).

Tabela 1– Porcentagem de resistência de todos os antibióticos testados nas 20 amostras. AMC (Amox. + ác. Clavuronico), ENO (Enrofloxacina), NOR (Norfloxacina), OXA (Oxacilina), SUT (Sulfazotrim), TET (Tetraciclina), PEN (Penicilina), GEN (Gentamicina), CFE (Cefalexina), FLF (Florfenicol), AMO (Amoxicilina) e CFL (Cefalotina).

AMC ENO NOR OXA SUT TET PEN GEN CFE FLF AMO CFL

25% 65% 55% 100% 60% 90% 100% 55% 80% 15% 65% 70%

Em relação às classes de antimicrobianos, temos alguns mecanismos de resistência comumente encontrados em cada grupo. A resistência para os antimicrobianos inibidores do ácido fólico é normalmente mediada por plasmídeos, podendo resultar em produção de enzimas que são menos afetadas pelas sulfonamidas, desenvolvimento de vias metabólicas alternativas, produção aumentada do PABA, diminuição da permeabilidade das sulfonamidas (MANDELL E PETRI JR, 1996B; RANG ET AL.,

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1997; EDRINGTON ET AL., 2008). Amicacina, estreptomicina e gentamicina mostraram alta efetividade para amostras de Escherichia coli isoladas de bezerros e animais adultos (FILHO ET AL., 2007; CARSON ET AL., 2008; GOW ET AL., 2008).

Conclusão

Das vinte amostras, todas foram positivas para bactéria Escherichia coli, no qual foi constatado um grande número de isolados de Escherichia coli resistentes aos antibióticos testados, sendo caracterizado como multirresistentes. Em nenhuma dos isolados foi contatado sensibilidade a todos os antimicrobianos testados e nenhum dos antibióticos teve capacidade de inibir todas as amostras.

Literatura citada

BLANCHARD P.C. 2012. DIAGNOSTICS OF DAIRY AND BEEF CATTLE DIARRHEA. VET. CLIN. NORTH AM. FOOD ANIM. PRACT. 28:443-464.

BRUNING-FANN, C.; KANEENE, J.B. ENVIROLNMENTAL AND MANAGEMENT RISK FACTORS ASSOCIATED WITH MORBIDITY AND MORTALITY IN PERINAL AND PRE-WEANING CALVES: A REVIEW FROM AN EPIDEMIOLOGICAL PERSPECTIVE. J. OF AMERICAL VET. MED. ASSOC. V. 208, P. 2043-2046, 1996.

CONSTABLE, P.D. ANTIMICROBIAL USE IN THE TREATMENT OF CALF DIARRHEA. J. VET. INTERN. MED. V. 18, N. 1, P. 8-17, 2004.

CHO, Y.-I. ET AL. CASE–CONTROL STUDY OF MICROBIOLOGICAL ETIOLOGY ASSOCIATED WITH CALF DIARRHEA. VETERINARY MICROBIOLOGY, V. 166, N. 3, P. 375-385, 2013. ISSN 0378-1135.

FILHO, J.P.O.; SILVA, D.P.G.; PACHECO, M.D. ET AL. DIARRÉIA EM BEZERROS DA RAÇA NELORE CRIADOS EXTENSIVAMENTE: ESTUDO CLÍNICO E ETIOLÓGICO. PESQ. VET. BRAS. V. 27, N. 10, P. 419-424, 2007.

HAGGARD, D.L. BOVINE ENTERIC COLIBACILLOSIS. VET. CLIN. NORTH AM. – FOOD NIM. PRACT., PHILADELPHIA, V.1, N.3, P.495-508, 1985.

MANDELL, G.L.; PETRI JR, W.A. FÁRMACOS ANTIMICROBIANOS: PENICILINAS, CEFALOSPORINAS E OUTROS ANTIBIÓTICOS B- LACTÂMICOS. IN: GOODMAN, L.S.; GILMAN, A.G. AS BASES FARMACOLÓGICAS DA TERAPÊUTICA. 9. ED. RIO DE JANEIRO: MCGRAUHILL, 1999A, P. 790-811.

NATARO JP, KAPER JB. DIARRHEAGENIC ESCHERICHIA COLI. CLIN MICROBIOL REV. 1998

JAN;11(1):142-201.

RANG, H.P.; RITTER, J.M.; DALE, M.M.AGENTES ANTIMICROBIANOS. IN: FARMACOLOGIA.

3. ED. RIO DE JANEIRO: GUANABARA KOOGAN. 1997. P. 572-592.