ROTEIROS PARA AULAS PRÁTICAS

HISTOLOGIA GERAL

Tecidos: Epiteliais

Conjuntivos

Musculares

Nervoso

Roteiros HG – Histologia Geral

Francisco Benedito Kuchinski

Júlio Fernandes

ROTEIROS PARA AULAS PRÁTICAS DE

CITOLOGIA (Biologia Celular)

HISTOLOGIA GERAL

HISTOLOGIA ESPECIAL

EMBRIOLOGIA GERAL

Francisco Benedito Kuchinski

Júlio Fernandes

ROTEIROS PARA AULAS PRÁTICAS DE

CITOLOGIA (Biologia Celular)

Roteiros TH – Técnicas microscópicas

Roteiros CT - Citologia (Célula eucariótica)

Francisco Benedito Kuchinski

Júlio Fernandes

ROTEIRO TH 01 INTERPRETAÇÃO TRIDIMENSIONAL DE CORTES

MACROSCOPICAMENTE

UNIDADES DE MEDIDAS EM MICROSCOPIA.

MATERIAL Pecíolo de mamona, ovos cozidos, limão ou laranja, abacate, faca

bem afiada

TÉCNICA Cortes macroscópicos, em diferentes materiais

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Diferentes tipos de cortes de um mesmo material

PROCEDIMENTO: Faça cortes dos tipos: transversais, oblíquos, longitudinais medianos e

excêntricos e ainda tangenciais. Nos pecíolos de mamonas, faça cortes em diferentes níveis. O

objetivo desses cortes é permitir uma interpretação tridimensional a partir de fatias com duas

dimensões (a espessura é desprezível). O importante, é que, trabalhando com estes pecíolos

macroscópicos, você pode confrontar o seu exercício mental com a realidade desses cortes

(por exemplo, cortes de artérias, veias, ductos de glândulas exócrinas, entre outros órgãos).

Em relação aos demais materiais (limão, ovo cozido, abacate, faça os cortes indicados,

coloque-os uns ao lado dos outros e faça uma boa observação e comparação. Cortes de

limão/laranja sugerem macroscopicamente cortes de porções secretoras ( de adenômeros) das

glândulas exócrinas. Ovos e abacate sugerem cortes de células (cuidado, ninguém está

afirmando que o ovo de galinha e o abacate são células.....). Lembrar ainda que um corte

(secção) num plano mediano, é um corte longitudinal no maior eixo separando o lado direito

do lado esquerdo. Secções (cortes) sagitais / planos sagitais são cortes paralelos ao plano

mediano. Uma secção (corte) vertical produzindo o plano frontal, separa a porção anterior da

posterior, portanto, é um corte vertical em ângulo reto ao plano mediano. Cortes (secções)

transversais ocorrem no menor eixo, com base num ser humano, separa a porção superior da

inferior. Agora, observe um corte transversal de esôfago, órgão tubular oco. Qual será o

aspecto dessa fatia? Será o de uma circunferência, sem dúvida: o contorno corresponderá à

parede do órgão e o interior, à cavidade (luz) delimitada pela parede, pela qual transitam os

alimentos. Observe nesta parede, invaginações de células epiteliais originando ductos de

glândulas. Notar que o corte no esôfago foi transversal e você observará o ducto da glândula

em corte longitudinal (vide figura abaixo). Raciocine sobre os dois cortes observados. Após

cortar os materiais citados e observá-los macroscopicamente, faça sempre interpretações

como são, em três dimensões, os órgãos seccionados e observados no MOC. NOTA:

Unidades de medidas usadas em microscopia: 1 Micrômetro (µm) → 1µ = 0,001mm

(1mm dividido por 1000); 1 Nanômetro (nm) → 1 nm = 0,001 µ (1µm dividido por

1000); 1 Angstron (Å) → 1 Å = 0,1nm (1 nm dividido por 10).

Dividir os círculos abaixo em quatro partes e realizar os esquemas dos cortes em

apenas dois planos e não em três planos (na forma tridimensional).

ROTEIRO TH 02 IDENTIFICAÇÃO DAS PEÇAS DO MICROSCÓPIO

ÓPTICO COMPOSTO (MICROSCÓPIO DE LUZ)

MATERIAL Microscópio Óptico Composto (MOC)

PROCEDIMENTO: identificar no microscópio as peças ópticas, que permitem o exame

de material invisível a olho nu (o limite de visibilidade do olho humano é de 0,2mm ou

200 µm). Para o pleno funcionamento dessas peças ópticas, o MOC dispõe de vários

dispositivos mecânicos. As peças ópticas possuem vidros especiais denominados de

lentes. Essas peças são: oculares; objetivas; condensador e espelho plano-côncavo

(atualmente, substituído pelo sistema iluminador). As peças mecânicas são: tubo ou

canhão (de dimensões compatíveis com as distâncias focais da ocular e das

objetivas); revolver (câmbio das objetivas); braço ou estativo, parafusos macrométrico

e micrométrico de focalização (correção de distâncias focais); sistema Charriot de

mudança na disposição da lâmina sobre a platina (sentidos verticais e horizontais);

platina ou mesa (suporte para a lâmina); diafragma; filtro, parafuso do sistema

condensador (move o condensador, o diafragma e o filtro); base ou pé do MOC.

ROTEIRO TH 03 MANUSEIO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO COMPOSTO

(MICROSCÓPIO DE LUZ).

MATERIAL Microscópio óptico composto (MOC), lâminas, lamínulas, letra

maiúscula F, recortada de jornal, papel de filtro, frasco com água e

pipeta (ou conta gotas). Régua de plástico transparente.

Procedimento: ETAPA DA FOCALIZAÇÃO: 1. Ligar a fonte luminosa (verifique a voltagem

correta); 2. Abaixar a platina utilizando o parafuso macrométrico; 3. Colocar a lâmina já

preparada sobre a platina (coloque sobre uma lâmina, a letra “F” maiúscula, utilize conta gotas

e coloque uma gota de água sobre a letra “F”, a seguir coloque a lamínula sobre a preparação

com ângulo de 45º. Para evitar a formação de bolhas de ar) ; 4. Utilize corretamente o

condensador e o diafragma para obter uma boa iluminação (só no aumento máximo de 1000 X

é que há necessidade de luz total); 5. Focando (olhando) em direção à platina, girar o parafuso

macrométrico para aproximar o material existente na lâmina da objetiva de menor aumento

(4x). 6. Olhe pelas oculares e gire o parafuso macrométrico no sentido contrário até obter a

imagem do material. Após tal procedimento, gire o parafuso micrométrico para obter a

imagem bem nítida do material. Após focalização neste aumento, o que você descobriu?

Consulte o professor para obter a resposta desta descoberta. 7. Para passar do aumento de

40X (ocular de 10 X e objetiva de 4 x) para o aumento de 100 X, gire o revolver para objetiva de

10 X e fazer o uso apenas do parafuso micrométrico. Repita tal procedimento para o aumento

de 400 X (gire o revolver para objetiva de 40 X e fazer o uso apenas do parafuso micrométrico).

Se for necessário, conforme o material, se deve movimentar o sistema Charriot para ajuste do

material a ser observado. O que você constatou nestes aumentos? 8. Para observação com a

objetiva de 100 X (objetiva de imersão), faça o seguinte procedimento: colocar uma gota de

óleo de imersão sobre a lâmina com o material (uma única gota deve ser colocada sobre a

lamínula), a objetiva de 100 X deve ficar posicionada sobre a preparação, girar o parafuso

macrométrico até aproximação da objetiva no óleo de imersão, mover agora apenas o

parafuso micrométrico para ajuste do foco. A lente da objetiva de imersão deve ser limpa logo

após a observação, evitando que o mesmo seque e cause danos a lente da objetiva de

imersão. Atenção: neste exercício prático ainda não será utilizada a objetiva de imersão. Os

objetivos desta aula (deste exercício) são: 1. Treinar o aluno na utilização do microscópio; 2.

Desenvolver a capacidade de observação para a verificação da proporcionalidade entre as

várias estruturas observadas ( quanto maior o aumento, menor o campo de observação.

Entender que aumentar na microscopia é chegar mais próximo do material). As operações de

iluminação, focalização, mudanças de objetivas, correção de iluminação, entre outros

procedimentos, transformam-se numa cadeia rotineira de reflexos, mais ou menos como

ocorre com as operações que resultam na direção de um veículo, neste caso, a sequência dos

trabalhos é de suma importância; assim sendo, oriente cada passo deste trabalho até “adquirir

reflexos”. Evite quebrar lâminas utilizando o MOC, pois, as lentes das objetivas serão

danificadas.

Sobre o Limite de resolução do MOC:

Tem como definição ser a menor distancia entre dois pontos que a objetiva do

microscópio consegue separar.

Calculo do limite de resolução:

LR = k.λ

AN

Onde:

LR = é o limite de resolução

K = é a constante (0,61)

λ = é o comprimento de onda na faixa verde-amarelado da luz branca (0,55); e AN = é

a abertura numérica.

O valor da abertura numérica aparece na objetiva:

Objetiva de 4x possui 0,10 de AN. Onde LR = 0,61x0,55 → LR = 3,35µm

0,10

Objetiva de 10x possui 0,25 de NA. Onde LR = 0,61x0,55 → LR = 1,34µm

0,25

Objetiva de 40x possui 0,65 de NA. Onde LR = 0,61x0,55 → LR = 0,52µm

0,65

Objetiva de 100x possui 1,25 de NA. Onde LR = 0,61x0,55 → LR = 0,27µm

1,25

Quanto maior a objetiva, maior é o valor da abertura numérica e menor o valor

do limite de resolução. Quanto menor o valor do limite de resolução, é com mais

nitidez que a objetiva consegue separar pontos próximos.

ROTEIRO TH 04 MICROMETRIA

MATERIAL Microscópio óptico composto e régua de plástico transparente

TÉCNICA Cortes macroscópicos em diferentes materiais

OBSERVAR A régua nos aumentos de 40X, 100X e 400X

PROCEDIMENTO: para o exercício de MICROMETRIA proceda assim: coloque sob a objetiva,

portanto, na platina, a régua graduada e transparente. Você observará a graduação da régua.

Na microscopia óptica utiliza-se como unidade de medida, “micrômetros”. Sabe-se que um

milímetro dividido por 1.000 é igual a 1µm (um micrométrico é a milésima parte do milímetro,

portanto, em 1mm há 1.000 µm, em meio milímetro há 500 µm). Quando você muda para a

objetiva de 10x, o aumento será de 100x e no campo observa-se apenas 1,5mm, logo, 1.500

µm. Caso haja, por exemplo, uma célula arredondada ocupando todo o campo do microscópio,

seu diâmetro será igual a 1.500 µm. Assim, você conclui que ao mudar para o aumento de

400x, o campo foi reduzido em quatro vezes (o aumento era de 100x, você mudou para 400x)

e a imagem observada será outra: no aumento de 100 X, a célula hipotética era observada,

agora, no aumento de 400 X apenas o seu núcleo será visto em sua totalidade. Qual será sua

conclusão sobre o tamanho deste núcleo? Resposta: no aumento de 100x, o campo é igual a

1.500 µm, no aumento de 400x o campo foi reduzido em quatro vezes, logo, a divisão 1.500

µm por quatro será igual a 375 µm, portanto, esse será o diâmetro do núcleo. Faça os cálculos

em micrômetros para saber qual será o campo num aumento de 40x como também no

aumento de 400X e 1.000X.

ROTEIRO TH 05 Observação de células epiteliais e manuseio do MOC

MATERIAL Espátula de madeira, lâmina, lamínula, corante azul de

metileno ou violeta de genciana, pipeta (ou conta-gotas),

papel de filtro.

TÉCNICA Técnica da dissociação da mucosa oral (bucal)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Células epiteliais vistas de frente, de perfil, isoladas e

aglomeradas. Em todas as células, é possível identificar o

núcleo como uma esfera corada em azul escuro e de

posição central. O citoplasma aparece corado em azul

claro e com a presença de minúsculas granulações. Caso

formem bolhas de ar, estas serão observadas com

margens pretas.

PROCEDIMENTO: com a espátula, raspe suavemente a mucosa que reveste a bochecha, na

cavidade oral. Espalhe o material sobre o centro da lâmina e acrescente uma gota do corante.

Segure uma lamínula com o polegar e o indicador da mão direita, de tal maneira que o ângulo

que contém o material seja de 45º. Deixe a lamínula cair sobre o material, largando-a

bruscamente. Enxugue o excesso de corante com o papel de filtro.

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ROTEIRO TH 06 Observação da cromatina sexual em células femininas

MATERIAL Espátula de madeira, lâmina, lamínula, corante orceína

acética pipeta (ou conta-gotas), papel de filtro.

TÉCNICA Dissociação de células femininas da mucosa oral (bucal)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Cromatina sexual em 40 até 70% dos núcleos, geralmente

na periferia interna da membrana do núcleo

PROCEDIMENTO: raspe a mucosa oral com a espátula de madeira e coloque o material no

centro da lâmina. Pingue rapidamente uma ou duas gotas de orceína acética sobre o material

coletado. Deixe corar por uns 10 minutos. Coloque então a lamínula conforme orientação

dada, utilize dois pedaços de papel filtro grosso (entre a lâmina e a lamínula) e pressione forte

a lamínula coberta com o papel de filtro com o polegar. Tome cuidado para não deslocá-la

lateralmente. Observação: células femininas normais possuem cariótipo representado por 44A

+ XX enquanto em células normais masculinas essa representação é: 44A + XY.

ROTEIRO TH 07 Observação de células sanguíneas anucleadas e

nucleadas (diferentes formas de núcleo) e de

fragmentos celulares (plaquetas). Prática facultativa.

MATERIAL Microscópio, lâminas, lanceta, algodão, álcool 70%,

corante Leishman. (Opção para a Técnica do Panótico),

papel de filtro, caixa de descarte, cuba para descarte de

lâminas e óleo de imersão.

TÉCNICA Esfregaço de sangue periférico segundo Leishman.

Técnica do Panótico.

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Glóbulos vermelhos (hemácias ou eritrócitos), glóbulos

brancos / leucócitos polimorfonucleados (neutrófilos,

eosinófilos e basófilos) e mononucelados (linfócitos e

monócitos). Plaquetas (trombócitos). Em neutrófilos de

células femininas é possível (A=1.000X) observar a

cromatina sexual (baqueta)

PROCEDIMENTO: 1. Faça assepsia digital na polpa do dedo mínimo da mão esquerda do

“doador” com solução de álcool 70%). Com a lanceta, pique (perfure) a polpa interna da

falange do dedo mínimo, espere sangrar (presença da hemorragia), utilize, se possível a

segunda gota de sangue, colocando-a na extremidade da lâmina. Faça com uma segunda

lâmina, o procedimento do esfregaço. Ao levar a segunda lâmina até a gota de sangue, por

capilaridade, o sangue escorre na borda desta lâmina (entre a bordo apical da lâmina de

esfregaço e a primeira lâmina, a que você colocou a gota. Faça o esfregaço da direita para a

esquerda e com movimento normal (nem rápido, nem lento demais), conforme esquemas

abaixo. Não volte com a lâmina. Faça o preparo de duas lâminas. Deixe o sangue distendido

secar. A coloração deverá seguir os seguintes passos: 1. A lâmina deve ficar (permanecer) num

suporte numa cuba ou na pia. 2. Cobrir o esfregaço com o corante Leishman por cinco

minutos ( o álcool do corante é o fixador e o eosinato cora estruturas básicas, como o

citoplasma e o azul de metileno cora estruturas ácidas como o núcleo. 3. Gotejar água

destilada sem tirar o corante, com uso da pipeta e/ou conta gotas por sete minutos. 4.

Escorrer e lavar com água destilada; 5. Deixar o esfregaço secar ao ar ambiente. 6. Após

secagem da lâmina, observe-a no aumento de 1000 X utilizando óleo de imersão (não use

lamínula). 7. Observe glóbulos vermelhos em maior número e glóbulos brancos, em roxo e em

menor número. Nota: Técnica de esfregaço (extensão) para sangue periférico, segundo

Leishman (é a mistura de “ROMANOWSKY = eosina + azul de azul de metileno + azur de

metileno, que é o azul de metileno oxidado. Na técnica de PANÓTICO para esfregaço de

sangue, são três os corantes utilizados: corante I – solução de triarilmetano 0,1% ( tempo de

10 segundos); corante II – solução de xantenos 0,1% (tempo de 8 segundos) e corante III,

solução de tiazinas 0,1% (tempo de 5 segundos). Após essas passagens pelos corantes, é só

deixar secar e observar as células sanguíneas.

ROTEIRO TH 08 Observação de células epiteliais (células do fígado ou

hepáticas ou hepatócitos) e manuseio do MOC

MATERIAL Microscópio, lâmina de fígado previamente preparada e

do acervo da Instituição, óleo de imersão.

TÉCNICA Técnica da Hematoxilina e Eosina (H&E)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Células hepáticas mononucleadas e binucleadas. Núcleo,

nucléolo e grânulos de cromatina. Esquematizar apenas

duas ou três células no aumento de 400X ou de 1.000X.

PROCEDIMENTO: Conforme aulas anteriores, inicie a observação manuseando corretamente

o microscópio. Após colocar a lâmina na platina, observe nos aumentos de 40 X, 100 X e 400 X.

Identifique os núcleos em roxo e como estruturas arredondadas. No seu interior é possível

identificar o nucléolo e os grânulos de cromatina (DNA + proteína histona). O citoplasma

encontra-se corado em róseo pela ação da eosina, pois, trata-se de uma estrutura alcalina

(base), portanto, possui afinidade pelo corante ácido (eosina). O corante hematoxilina é

quimicamente base (alcalino), logo, evidencia estruturas celulares de natureza química ácida,

como o núcleo. Pode-se afirmar que o núcleo apresenta basofilia celular enquanto o

citoplasma eosinofilia (acidofilia) celular. Com aumento de 1.000 X (utilize apenas uma gota de

óleo de imersão) faça o esquema de dois cordões de células hepáticas com seus detalhes.

ROTEIRO TH 09 Identificação de componentes celulares com o uso do

mesmo material (fígado), corado por técnicas

diferentes.

MATERIAL Microscópio e lâminas de fígado

TÉCNICA Técnicas: H&E – Hematoxilina e Eosina

H +PAS – Hematoxilina e Ácido Periódico + reativo de

Schiff

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Células hepáticas com aumento de 400 X pela técnica do

H&E e pela técnica do H+PAS (núcleo e glicogênio).

PROCEDIMENTO: Sempre inicie suas observações utilizando o menor aumento do MOC, isto

é, utilize de início a objetiva que aumenta 4 X, logo o aumento inicial será de 40 X. Mude de

objetiva, utilize agora a que aumenta 10x. Neste aumento de 100 X você ao observar a lâmina

corada por H&E identificará o núcleo em roxo e o citoplasma na coloração róseo. Algumas

células do fígado (células hepáticas ou hepatócitos) são binucleadas (apresentam dois

núcleos). Utilize também o aumento de 400 X, você observará grânulos de cromatina e

nucléolo bem evidente no núcleo dos hepatócitos. Faça o mesmo procedimento com a lâmina

corada por H + PAS, utilizando os mesmos aumentos. Você não observará o núcleo tão

evidente, porém, constata que a coloração do citoplasma é diferente, pois, não foi utilizada a

eosina, que cora o citoplasma. Na coloração do H+PAS, há grânulos de coloração vermelho

magenta, os quais correspondem ao glicogênio evidenciado pelo PAS, daí, a utilização da

afirmação PAS+. O principal objetivo deste exercício é o de fazer você perceber que um dado

método de coloração é usado para mostrar certos pormenores das células; já outros métodos

podem não ter a mesma finalidade. Atenção: você não deve memorizar cores, mas sim as

estruturas das células e dos tecidos. Na lâmina corada pelo H&E, as áreas claras (transparentes

no citoplasma) correspondem a imagem negativa do glicogênio.

ROTEIRO TH 10 Ação enzimática da catalase e fatores que atuam na

ação enzimática (temperatura e pH).

MATERIAL Batata inglesa, fígado de boi, lâminas de barbear ou

estilete, água oxigenada, vinagre, fonte de calor, tubos de

ensaio, pinça de madeira, suporte e pegadores de tubos

de ensaio.

TÉCNICA Experimento laboratorial

OBSERVAR Efeito do pH e da temperatura

PROCEDIMENTO: o trabalho deverá ser realizado em equipes. Cada equipe deverá cortar

com auxílio da lâmina de barbear ou estilete, fragmentos de batata e de fígado com

aproximadamente 1 cm de aresta. Coloque em tubo de ensaio, 3 cm3 de água oxigenada (tubo

controle). Coloque em outro tubo de ensaio, 3 cm3 de água oxigenada, adicionando um pedaço

de fígado; verifique o efeito. Constate o oxigênio desprendendo-se. No terceiro tubo de

ensaio, coloque a mesma quantidade de água oxigenada mais um pedaço de batata; verifique

o efeito. Conclusão: pela ação da enzima catalase, a água oxigenada desdobra-se em água e

oxigênio. Coloque agora no tubo controle pedaços de fígado e num outro tubo 3 cm3 de água

oxigenada e de vinagre. Observe e compare o que ocorreu (efeito do pH). Num outro tubo de

ensaio, coloque água de torneira e um pedaço de fígado e leve a fervura por alguns minutos. A

seguir, o pedaço de fígado deve ser colocado em outro tubo de ensaio, com 3 c m3 de água

oxigenada. Oberve o efeito (efeito temperatura). Responda em equipe: Qual é o efeito do

vinagre sobre a ação enzimática; por que, com o fígado cozido, não houve reação enzimática?

O que é pH? Nota: a catalase é uma enzima que fica localizada no interior dos peroxissomos.

RESPOSTAS:

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ROTEIRO CT 01 Membrana impregnada por sais de prata

MATERIAL Mesotélio nitratato (Epitélio simples pavimentoso)

TÉCNICA Impregnação Argêntica – AgNO3

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 100 X e 400 X observe contornos irregulares

delimitando espaços claros. Esses contornos são depósitos de

sais de prata que se precipitam sobre a membrana plasmática,

enquanto os espaços claros correspondem ao meio intracelular

não evidenciado pela técnica.

Observação: a membrana plasmática é imperceptível na microscopia óptica, possui espessura

de 7,5 até 10 nm (ou 60 até 100 angstroms). Na microscopia eletrônica é vista como duas

camadas escuras e separadas por um espaço claro entre elas. Ao nível molecular apresenta-se

na forma de bicamada lipídica com proteínas suspensas (mosaico fluido). Há também nesta

membrana moléculas de colesterol. As proteínas globulares aí presentes são classificadas em

proteínas integrais e periféricas. As proteínas integrais criam canais por onde transitam outras

moléculas, canais estes que podem ser seletivos e que são portadores de poros (aqui ocorre a

passagem de água sem resistência). As proteínas globulares formam outras proteínas que são

denominadas de periféricas, presentes tanto externamente como internamente na membrana

plasmática. As periféricas internas apresentam limitações de movimentos, pois, encontram-se

ligadas ao citoesqueleto celular, já as periféricas externas ligam-se aos lipídios (glicolipídios) e

aos açúcares (glicoproteínas). As glicoproteínas formam o glicocálix, o qual possui duas

categorias de moléculas: uma de adesão celular (CAMs) e outra atuando como receptor de

membrana. Um receptor de membrana pode ser, portanto, uma glicoproteína e/ou uma

proteína simplesmente integral. Os receptores de membrana são importantes, pois, realizam o

reconhecimento celular (entre as células) – sinalização celular (resposta imune mediada por

células – linfócito do tipo T), também auxilia microrganismos a reconhecerem às células alvo. A

sinalização química também relaciona-se com os receptores. Este tipo de sinalização ocorre na

ação dos hormônios, dos neurotransmissores e dos ligantes, tipo de mensageiro químico que

pode alterar o metabolismo celular. Alguns ligantes são enzimas.

ROTEIRO CT 02 Especializações da membrana plasmática: cílios,

flagelos, microvilos (borda estriada ou em escova) e

estereocílios.

MATERIAL Vias respiratórias e tuba uterina/oviduto (cílios);

Espermatozóide e organismos patogênicos (flagelo); Intestino

delgado: duodeno e jejuno-íleo (microvilos ou microvilosidades);

Epidídimo (estereocílios); epiderme (tonofibrilas /

tonofilamentos)

TÉCNICA H&E, Azul de Metileno (espermatozóides) e Azul de

Toluidina para tonofilamentos

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com 400 X, cílios, flagelos, microvilos e estereocílios.

Observação: Cílios e flagelos são extensões da membrana plasmática. São móveis

e com funções diferentes. Os cílios movimentam partículas, bactérias, muco e o oócito

fecundado enquanto o flagelo aderido à célula realiza sua movimentação. Cílios

possuem de comprimento 10 µm enquanto o flagelo de 60 µm. Ambos relacionam-se

com o citoesqueleto, apresentam nove pares de microtúbulos que rodeiam um par

central. Originam-se de um par de centríolos, os corpúsculos basais, de localização

periférica na célula. Crescem a partir destes corpúsculos. Microvilosidades são

projeções da membrana plasmática para o lúmen do órgão. Cada célula absortiva

intestinal apresenta em média três mil microvilosidades. A função é de absorção,

tamanho médio: comprimento 1 µm e diâmetro 0,1 µm. Os estereocílios são microvilos

longos e ramificados do epitélio pseudo estratificado colunar estereociliado deste

ducto extratesticular que é o ducto epididimário. Os tonofilamentos no MOC são

prolongamentos celulares localizados nos desmossomos (são de queratina e com

função de adesão celular).

ROTEIRO CT 03 Permeabilidade da membrana plasmática

MATERIAL Microscópio, lâminas, lamínulas, pipetas e soluções hipo e

hipertônicas de sacarose e de cloreto de sódio, água

destilada e epiderme da planta Tradescantia sp ou Rhoeo

discolor

TÉCNICA Ruptura, destacando a epiderme inferior da folha (será

rasgada)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumentos de 40 X e de 100 X as modificações que

ocorrem na célula em meios hipo e hipertônico.

Observação: A membrana plasmática é semipermeável. A planta utilizada possui o

pigmento antociana (roxo) dentro dos vacúolos das células epidérmicas, cuja cor

auxilia na observação do experimento (de plasmólise). Em meio hipertônico a água sai

da célula, do vacúolo (plasmólise) e é caracterizado pela menor “quantidade” de

antociana no vacúolo, já em meio hipotônico, a água entra na célula, no vacúolo

(deplasmólise) e é caracterizado pela maior “quantidade” deste pigmento no vacúolo.

Tal experimento pode ser realizado com glóbulos vermelhos (hemácias), cuja

morfologia em meio isotônico é a de um disco bicôncavo e em meio hipertônico, de

forma crenada. É interessante aplicar os conhecimentos teóricos do transporte passivo

(difusão simples, difusão facilitada e osmose) e do transporte ativo.

ROTEIRO CT 04 Basofilia Celular (Retículo Endoplasmático Granular

ou Rugoso – REG ou RER) e Inclusão de Proteínas

MATERIAL Pâncreas

TÉCNICAS Gallocianina e H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X, por Gallocianina, basofilia celular

(REG) no polo basal das células acinosas pancreáticas,

núcleo e nucléolo e por H&E: basofilia celular, núcleo,

nucléolo e inclusão de zimogênio (proteína) no polo apical.

PROCEDIMENTO: Observe inicialmente a lâmina corada por H&E, no menor aumento,

verificando o aspecto geral do órgão: lóbulos pancreáticos separados por tecido conjuntivo

com vasos, nervos e ductos excretores. O pâncreas é uma glândula mista com funções

exócrina (produz o suco pancreático) e endócrina (produz hormônios). O que nos interessa no

momento é a porção exócrina, constituída por células epiteliais acinosas serosas, secretoras de

proteínas. Essas células são basófilas devido à predominância do REG, os núcleos são

arredondados com nucléolo bem visível. Essa basofilia é caracterizada pela coloração azulada,

a qual se encontra localizada no polo basal da célula acinosa. No polo oposto, no apical, ocorre

uma coloração avermelhada (eosinofilia e/ou acidofilia celular) que caracteriza a presença da

inclusão da proteína que constitui o suco pancreático (zimógeno ou zimogênio). O Retículo

endoplasmático (RE) que possui ribossomos é REG ou RER e o que não possui é o REAgranular

ou Liso – REAg ou REL. São funções do RE: transporte e armazenamento de materiais, síntese

de lipídios, de carboidratos e de proteínas pelos ribossomos do REG. Os ribossomos são

partículas de 20 até 30 nm constituídos por quatro tipos de RNAr e por oitenta proteínas. Há

tipos diferentes de ribossomos em células procariontes, cloroplastos, mitocôndrias e de células

eucariontes. Ribossomos unidos por uma molécula de RNAm constituem polirribossomos. No

REG ou RER ocorrem os polirribossomos, os quais conferem a basofilia celular para este tipo de

RE. Os ribossomos são os locais onde ocorre a síntese de proteínas.

ROTEIRO CT 05 Complexo de Golgi

MATERIAL Epidídimo

TÉCNICA Impregnação Argêntica – AgNO3 (Técnica de Aoyama)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X, Complexo de Golgi visto no MOC

por técnica Citoquímica.

PROCEDIMENTO: O epidídimo é um ducto genital extratesticular e se constitui num único

“tubo” enovelado (enrolado) cujo comprimento total pode superar 5 metros. A parede deste

tubo possui os tecidos epitelial, conjuntivo e muscular do tipo liso. Na luz ou lúmen do túbulo

epididimário estão localizados os espermatozóides que foram produzidos nos testículos. As

secções nos ductos apresentam-se circulares, elípticas ou com outras formas. As células

epiteliais constituintes destes ductos apresentam os estereocílios, os quais estão voltados para

o lúmen do tubo, local da existência dos espermatozóides. Estas células epiteliais que

revestem internamente o ducto epidimário apresentam grande desenvolvimento do Complexo

de Golgi, o qual se caracteriza na microscopia eletrônica como uma rede tubos ou sacos

achatados, empilhados uns sobre os outros com função de armazenamento e embalagem de

material a ser secretado para o citoplasma ou para o meio extracelular. O Complexo de Golgi

também origina as organelas denominadas de lisossomos. No MOC, o Complexo de Golgi será

observado na forma de precipitações escuras (pretas) no polo apical, tendo logo abaixo o

núcleo de coloração cinza azulada.

ROTEIRO CT 06 Observação de Lisossomos (de suas enzimas

hidrolíticas)

MATERIAL Rim

TÉCNICAS Gomori (Fosfatase alcalina) e Hölt (Fosfatase ácida)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X enzimas presentes nos

lisossomos

PROCEDIMENTO: Os rins são órgãos responsáveis pela homeostasia do organismo, filtram o

sangue produzindo a urina e também produzem hormônios. Apresentam quando seccionados

uma porção central (região medular) mais clara e outra mais externa (região cortical) menos

clara. As técnicas utilizadas são citoquímicas / histoquímicas. A enzima fosfatase alcalina por

Gomori será observada no interior das células renais da porção mais externa (cortical) na

coloração preta, trata-se de coloração específica (seletiva) para tal tipo de enzima, porém,

células renais e seus respectivos núcleos serão palidamente observados. Já a enzima fosfatase

ácida por Hölt também será observada na região cortical, na forma de grânulo castanho escuro

e não serão perceptíveis demais componentes celulares, pois, trata-se também de corante

seletivo. No microscópio eletrônico de transmissão os lisossomos são observados como

vesículas elétron densas. São funções dos lisossomos: digestão de materiais absorvidos e

autólise. NOTA: os peroxissomos são vesículas que também armazenam enzimas (peroxidases

e catalases) e abundantes nas células hepáticas e renais. A enzima peroxidase realiza oxidação

de compostos orgânicos e de radicais livres produzindo o peróxido de hidrogênio enquanto a

catalase realiza a redução deste peróxido (água oxigenada) em água mais oxigênio.

Provavelmente, os peroxissomos se originam quando se dividem em suas metades.

ROTEIRO CT 07 Mitocôndrias

MATERIAL Fígado

TÉCNICA Impregnação argêntica – AgNO3 (Técnica de Polak)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X e/ou 1.000 X o estroma hepático

(citoplasma amarelado) com grânulos de coloração

castanho escuro (são as mitocôndrias)

PROCEDIMENTO: A técnica em uso é citoquímica / histoquímica, ela não objetiva aspectos

morfológicos como os lóbulos hepáticos, portanto, é do tipo seletiva. Consulte os roteiros TH

08 e TH 09. Com pequeno e médio aumento se constata a presença de um estroma amarelado,

pois, não é perceptível a observação poliédrica das células hepáticas (elas perdem seu

contorno devido à técnica). Caso utilize o aumento máximo, pingue uma gota de óleo de

imersão. Com o aumento de 400 X já é possível a observação de minúsculas partículas coradas

em castanho escuto. Cada uma dessas partículas corresponde a uma mitocôndria vista no

MOC. Podem aparecer pequenas esferas (esférulas) as quais correspondem aos núcleos de

células hepáticas e mesmo à hemácias (glóbulos vermelhos). Na microscopia eletrônica de

transmissão as mitocôndrias estruturalmente apresentam duas membranas, uma externa lisa

e outra interna com as cristas para aumentar a área de superfície, além da matriz mitocondrial.

Podem ter várias formas e sua função é a produção do trifosfato de adenosina (ATP) da

respiração celular.

ROTEIRO CT 08 Inclusão de lipídios (imagem negativa)

MATERIAL Pele (hipoderme)

TÉCNICA H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X células adiposas (adipócitos ou

lipócitos) que formam o tecido adiposo.

PROCEDIMENTO: Após explicações dadas pelo professor, observe cuidadosamente a lâmina

macroscopicamente, visando sua colocação correta na platina (ou mesa do MOC), para que o

tecido epitelial (epiderme) da pele fique posicionado em primeiro plano. Para tanto, a porção

mais clara na lâmina corresponde à hipoderme e a mais corada à epiderme e derme, portanto,

a colocação da lâmina na platina deve ser feita com a porção mais corada voltada para o aluno,

logo, a porção mais clara ficará oposta ao aluno. Com o menor aumento (40 X) faça uma

observação global do material (pele) e localize a hipoderme. Movimente o sistema Charriot e

posicione a hipoderme para ser observada em outros aumentos (100 X e 400 X). Nestas células

adiposas, à medida que ocorre o armazenamento de gordura, ocorre o deslocamento do

citoplasma e do núcleo para a periferia da célula. O núcleo inclusive fica achatado. O

citoplasma será observado em róseo e o núcleo em roxo. Fios róseos (eosinófilos) mais

espessos correspondem às fibras colágenas. Devido ao uso de álcool e xilol na técnica do H&E

(materiais que são incluídos em parafina), a gordura foi dissolvida e removida no curso da

preparação da lâmina, daí, a denominação de imagem negativa de lipídios (de gordura). Nota:

quando o material for fixado pelo método de congelação e tratado com corante específico, por

exemplo, o SUDAM III, a base de ácido ósmico, a gordura permanece na célula adiposa e é

revelada no MOC na coloração castanho. As inclusões localizam-se em vesículas, em vacúolos

e/ou na forma de gotas lipídicas. A função geral das inclusões é representada por: estocagem

de material produzido e/ou absorvido pela célula e transporte de substâncias.

ROTEIRO CT 09 Inclusão de melanina (inclusão endógena)

MATERIAL Pele fina

TÉCNICA H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X, grânulos de melanina no interior

de melanócitos como também no interior de seus

prolongamentos e nas células epidérmicas

PROCEDIMENTO: A melanina é um pigmento marrom escuro, produzido pelas células

denominadas de melanócitos (são células epiteliais) que se localizam na epiderme, na coróide

do globo ocular e nas papilas dos folículos pilosos. Nesta lâmina a melanina pode ser

observada tanto na epiderme como nas papilas dos folículos. Focalize a lâmina, com aumento

de 40X localize a epiderme e posteriormente papilas de folículos pilosos. Passe para aumento

de 100 X e posteriormente para aumento de 400 X e observe na epiderme e/ou em alguma

papila grânulos de melanina que aparecem bem escuros (marrom amarelado). A melanina

possui função protetora contra os raios UV. Também é responsável pela coloração da pele com

o pigmento caroteno. Além destes dois fatores que agem na coloração da pele há outros como

a quantidade de capilares sanguíneos. A síntese da melanina é dependente da enzima

tirosinase produzida no REG, a qual é enviada ao Golgi e deste para o citoplasma em vesículas

denominadas de melanossomos I. Uma vez presente no citoplasma o aminoácido tirosina,

sofre ação da enzima tirosinase. Tirosina + tirosinase constituem os melanossomos dos tipos II

e III. A inexistência da tirosinase no melanossomo III já caracteriza o grânulo de melanina. Os

grânulos se localizam nos prolongamentos dos melanócitos e no interior das células

epidérmicas denominadas de queratinócitos. Lisossomos dos queratinócitos destroem tais

grânulos. No albinismo não ocorre a síntese da melanina, por estar ausente a enzima tirosinase

(fator hereditário) ou pela incapacidade de absorção do aminoácido tirosina pelo melanócito.

A deficiência na produção do hormônio cortisol pela glândula endócrina supra renal causa a

produção excessiva do hormônio ACTH pela glândula hipófise, promovendo maior produção

de melanina.

ROTEIRO CT 10 Inclusão de Bilirrubina (inclusão exógena)

MATERIAL Fígado e/ou Fígado com esteatose hepática

TÉCNICA H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X inclusão de bilirrubina na

coloração amarelo alaranjado dentro e fora das células.

PROCEDIMENTO: A bilirrubina é um pigmento resultante da degradação da proteína

hemoglobina (Hb) pelos macrófagos do baço. Glóbulos vermelhos (eritrócitos ou

hemácias)apresentam no seu interior a Hb. A Hb é um proteína conjugada com ferro com

funções no transporte de oxigênio e de dióxido de carbono. As hemácias possuem vida média

de 90 até 120 dias. A destruição (processo denominado de hemocaterese) destas células

ocorre no órgão baço. Esse pigmento cai na corrente sanguínea e é capturado pelos

hepatócitos (célula do fígado) e é utilizado para a fabricação por parte destas células, da bile,

tipo de secreção ácida que será armazena na vesícula biliar (atenção: quem produz a bile é o

fígado e não a vesícula biliar). Quando da presença de problemas hepáticos, como na

esteatose, hepatites entre outras, essa bilirrubina se acumula no fígado e também em outras

partes do organismo (caso da icterícia, caracterizado pelo aumento de bilirrubina lipossolúvel

no organismo). Especificamente, a bilirrubina é insolúvel em água, porém, no REG dos

hepatócitos ocorre a síntese da enzima glucoronil transferase a qual promove a conjugação da

bilirrubina com glucuronato de bilirrubina no REAg ou REL, formando assim um composto

solúvel em água, que será excretado, caso contrário, ocorre o seu aumento promovendo a

icterícia. Muitas são as causas da icterícia (desde a incapacidade dos hepatócitos de

absorverem a bilirrubina lipossolúvel, ausência de enzima, não excreção para o canalículo biliar

do glucoronato, cálculos biliares e até tumores hepáticos).

ROTEIRO CT 11 Pigmento corado – Hemossiderina (Ferro iônico)

MATERIAL Baço

TÉCNICA H&E + Pearls

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X o pigmento hemossiderina em

azul no interior de macrófagos no órgão linfoide baço.

PROCEDIMENTO: O baço é o maior órgão linfoide do organismo, possui morfologia

semelhante a uma língua e se encontra do lado esquerdo do abdome e fica interposto na

circulação sanguínea e é responsável pelo processo de destruição das hemácias

(hemocaterese), pela produção de linfócitos (tipo de glóbulo branco / leucócito) e pela

filtração da linfa. Seu maior constituinte é o tipo celular denominado de linfócito, os quais se

reúnem e constituem nódulos ou folículos linfoides. Estes nódulos em conjunto formam a

polpa branca do baço sendo que as demais estruturas deste órgão constituem a polpa

vermelha. Portanto, o baço apresenta função linfática e hematológica. No menor aumento (40

X) identifique estruturas arredondas (nódulos linfáticos); com o aumento de 100 X já é

possível observar enorme quantidade de núcleos de linfócitos (pontos roxos com nucléolo e

cromatina), bem mais visíveis no aumento de 400 X. Neste mesmo aumento é possível

diferenciar pontos roxos que são os núcleos dos linfócitos e áreas de coloração roxa com azul

claro, as quais correspondem aos macrófagos contendo o ferro iônico (hemossiderina)

revelado pelo corante Pearls na coloração azul claro. O baço externamente possui uma

cápsula fibrosa representada por fibras colágenas (proteína) e por fibras musculares lisas. Essa

cápsula envia septos para o interior do órgão nos quais há vasos sanguíneos, nervos e tecidos

muscular liso. É importante saber neste momento que quando ocorre contrações desta

musculatura lisa o sangue é expulso do interior do baço de volta à circulação, portanto, o baço

também é um órgão armazenador de sangue.

ROTEIRO CT 12 Inclusão de Carboidrato (inclusão do polissacarídeo

glicogênio)

MATERIAL Fígado

TÉCNICA Hematoxilina + Ácido Periódio com Reativo de Schiff (H+PAS)

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X, células hepáticas, núcleos destas

células e glicogênio na coloração vermelho magenta.

PROCEDIMENTO: Com o aumento menor (40X e 100 X) faça uma observação geral do material

e escolha uma boa área para observação com aumento de 400 X. Os hepatócitos formam

cordões celulares, procure observar grânulos de coloração vermelho magenta (púrpura) os

quais correspondem ao glicogênio (tipo de polissacarídeo) no interior dos hepatócitos, além do

núcleo, nucléolo e da cromatina. Um carboidrato é constituído por carbono, hidrogênio e

oxigênio (CHO), com hidrogênio e oxigênio na mesma proporção que a água – dois para um. A

fórmula molecular da água é H2O e do açúcar glicose que é um carboidrato é C6H12O6. São

moléculas usadas para energia, armazenamento de energia entre outras estruturas celulares.

Monossacarídeos apresentam de três a sete átomos de carbono em uma cadeia ou anel. A

glicose possui seis carbonos, logo é um açúcar hexose e ribose e a desoxirribose,

respectivamente do RNA e do DNA possuem cinco carbonos, portanto, são pentoses. Nas

frutas ocorre o açúcar frutose com a mesma fórmula molecular da glicose, porém, possui a

disposição dos átomos diferentemente na molécula. Quando dois monossacarídeos se unem

formam um dissacarídeo e liberam água, tal reação química se denomina síntese por

desidratação. Exemplo clássico é a formação da sacarose a partir da união de uma glicose com

uma frutose. Nas células ocorrem reações similares de sínteses visando a construção de

moléculas para à vida celular, processo que é denominado de anabolismo. Quimicamente, a

sacarose quando decomposta na água em monossacarídeos, afirma-se que a reação é de

hidrólise. Nas células também ocorrem reações de decomposição visando a liberação de

energia contida nas ligações entre os átomos. A decomposição dos nutrientes provenientes

dos alimentos e o catabolismo. Polissacarídeos são combinações de muitos monossacarídeos

com liberação de água. Os polissacarídeos apresentam função estrutural e de armazenamento

de energia. O glicogênio armazena combustível nos tecidos do corpo (fígado, músculos).

ROTEIRO CT 13 Célula caliciforme (tipo de célula epitelial glandular) e

muco

MATERIAL Traquéia

TÉCNICA H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X células caliciformes da mucosa

traqueal contendo muco

PROCEDIMENTO: Geralmente a lâmina que contém a traqueia possui também o órgão

esôfago. Observe macroscopicamente para diferenciar um órgão do outro. Na traqueia,

macroscopicamente, é possível observar um semianel em azul (é a cartilagem hialina deste

órgão). O lúmen (a luz) da traqueia por onde circula o ar é arredondado, ocorrendo o oposto

no lúmen do esôfago (este órgão possui paredes colabadas / aderidas). Vide roteiro CT – 02. As

células caliciformes são encontradas nas vias respiratórias, exceto nos pulmões; no intestino

delgado e grosso como também na tuba uterina / oviduto. São células secretoras de muco

(glicoproteínas) com alta taxa de polissacarídeos, logo, dão reação PAS positiva (PAS+). Pela

técnica do H&E são reveladas na coloração bem clara e intercaladas com células ciliadas de

revestimento. Já na técnica de tricrômico de Masson com aldeído fucsina, são células com

tonalidades de roxo e as de revestimento com os cílios se apresentam na coloração

avermelhada. A morfologia destas células é a de um cálice, daí a sua denominação. O muco

localiza-se superficialmente e logo abaixo deste fica o núcleo alongado e roxo. O microscópio

eletrônico revelou que o polo basal desta célula é bem estreito e contém REG e mitocôndrias,

mais acima, deste polo se localiza o núcleo achatado também envolto por RER e por

mitocôndrias. No polo apical localiza-se o Complexo de Golgi que libera os grânulos de

secreção para o meio externo. Cerca de 50% ou mais do volume desta célula é representado

pelos grânulos de secreção com glicoproteínas. A síntese de proteínas ocorre na base da

célula, local do REG. Monossacarídeos são acrescentados às proteínas tanto no RE como no

Golgi. O muco ao ser secretado (eliminado da célula) é bem hidratado (tipo de secreção

viscosa, elástica e lubrificante). É bom não confundir células caliciformes produtoras de muco

com outras células epiteliais que não são caliciformes e produzem muco, como células das

glândulas do exócrinas do esôfago, do colo uterino (muco cervical) e da mucosa gástrica.

ROTEIRO CT 14 Observação de miofibrilas em fibras musculares.

Citoesqueleto celular (miofilamentos de actina e

miosina).

MATERIAL Língua

TÉCNICA Hematoxilina Férrica – HF

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 1.000 X miofibrilas contraídas e

relaxadas

PROCEDIMENTO: Após explicações dadas pelo professor, observe no menor aumento (40 X) a

lâmina de língua seccionada transversalmente e corada por HF. Externamente, a língua

apresenta tecido epitelial de revestimento, tendo logo abaixo uma pequena área clara de

tecido conjuntivo. O maior volume da língua é representado por tecido muscular estriado

esquelético, tipo de músculo de contração voluntária. Neste mesmo aumento, é possível

diferenciar a porção dorsal da língua, a qual apresenta diversas elevações, as papilas linguais.

Também é possível observar tubos seccionados de forma transversal, oblíqua, longitudinal e

até oblíqua, são vasos sanguíneos. Com o aumento médio de 100 X, procure diferenciar feixes

de fibras musculares seccionadas longitudinalmente e transversalmente. Neste aumento,

posicione-se com ajuda do sistema Charriot nos feixes longitudinais e passe para o aumento de

400 X. Obverve agora os núcleos com nucléolo e cromatina (pontos escuros) que se

posicionam externamente na célula muscular estriada esquelética que é alongada, daí a sua

denominação de fibra muscular. Também neste aumento já é possível detectar estriações

claras (bandas I) e escuras (bandas A) ao longo das miofibrilas no interior da fibra muscular.

Passe para o aumento de 1.000 X e utilize o óleo de imersão. Oberve com este aumento que

há miofibrilas contraídas e outras relaxadas. Na banda I só ocorre o filamento fino de actina

enquanto na banda A existe miofilamentos de actina e de miosina. Na miofibrila contraída não

se observa a faixa ou banda H da banda A, esta só ocorre na miofibrila relaxada ou em

repouso.

ROTEIRO CT 15 Núcleo interfásico e Citoplasma

MATERIAL Fígado

TÉCNICA H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 1.000 X, núcleo, nucléolo, grânulos de

cromatina

PROCEDIMENTO: Inicie corretamente o manuseio do microscópio. Utilize óleo de imersão e

identifique núcleos interfásicos em células hepáticas (hepatócitos). A célula hepática por ser

muito versátil pode ser mono e binucleada. O núcleo ou os núcleos são esféricos e roxos, de

localização central, nesta célula de forma poliédrica. O núcleo foi evidenciado pela

Hematoxilina e o citoplasma pela Eosina, em róseo. O núcleo é o coordenador geral da célula,

possui todas as informações genéticas para o correto funcionamento metabólico como

atividades de síntese de proteínas - transcrição do DNA e da reprodução celular - replicação

do DNA (estágio S). Possui uma dupla membrana com lamelas interna e externa, esta última

contínua como REG ou RER. Há poros nesta membrana a qual também é denominada de

envoltório e possui função se separar o núcleo do citoplasma, permitindo também a entrada e

saída de moléculas do núcleo. Num núcleo interfásico há cromatina (eucromatina e

heterocromatina) a qual é constituída por DNA e por proteínas histonas. Quando ocorrer a

condensação da cromatina constituem-se os cromossomos, porém, o núcleo já não é mais

interfásico é mitótico (a célula se encontra em reprodução – mitose / meiose). O núcleo

interfásico há estágios metabólicos distintos, caracterizados pelos estágios G1, S e G2. O DNA

regula a síntese de proteínas entre outras atividades metabólicas (estágio G1). O nucléolo

geralmente é único, porém há células com dois ou mais nucléolos. Contém muito RNAr e

proteínas e são os responsáveis pela origem dos RNAs dos tipos ribossômico (que forma os

ribossomos) – RNAr e RNA transportador – RNAt. O RNA mensageiro – RNAm forma-se a partir

do DNA pelo processo de transcrição (estágio G1). O citoplasma é um fluído com eletrólitos,

nutrientes de diferentes categorias químicas, aminoácidos, proteínas, enzimas e contém

diferentes tipos de organelas citoplasmáticas, inclusive o núcleo, inclusões e pigmentos. Há

pesquisadores que diferenciam no citoplasma uma porção denominada de citosol, a qual é

formada pelo fluido descrito, pelas inclusões e pelo citoesqueleto de proteínas.

ROTEIRO CT 16 Técnica de esmagamento de meristema apical de

raiz de cebola – Allium cepa

MATERIAL Cebola, béquer (Becker), papel alumínio, água, pinça,

gilete, vidro relógio, placa de Petri, tubo de ensaio, bico

de Bunsen.

TÉCNICA Orceína acética

DESENVOLVIMENTO

DA TÉCNICA

O trabalho deverá ser efetuado em equipe no laboratório

de Citologia da USJT.

PROCEDIMENTO: Selecionar uma cebola globosa (por aluno), aparar suas raízes e colocá-la

na boca do béquer com água (as pontas das raízes não devem mergulhar na água), o béquer

deve ser revestido com papel alumínio (promover artificialmente um ambiente para o

geotropismo positivo). Após alguns dias (3 ou 4 dias), cortamos algumas pontas das raízes

novas (0,5 cm) da extremidade livre. Para esta espécie de planta, o melhor momento para os

cortes é por volta 1:30 hora ou então às 22:00 horas (nestes horários, a atividade mitótica

atinge os mais altos índices e/ou entre 16 /17 horas). Pode-se cortar também em outros

horários. A seguir, mergulhamos as raízes cortadas, utilizando uma pinça ou pincel num tubo

de ensaio, com 2 a 3 ml do corante orceína acética a 5%, levamos o tubo de ensaio ao bico de

Bunsen até ferver (2 a 3 minutos). Despejamos o material numa placa de Petri e com a pinça

ou pincel conduzimos as raízes (2 ou 3 raízes) para cada lâmina. Pingamos sobre cada raiz uma

gota de orceína acética fria e deixamos em repouso durante 5 minutos. Colocamos uma

lamínula sobre o material e, com o uso de papel de filtro, pressionamos a lamínula com

cuidado para esmagar a raiz. Com este método, o meristema apical da raiz de cebola sofre

dissociação das células e os cromossomos são intensamente corados, mantendo-se na posição

esperada para cada fase da mitose e também da interfase. NOTA IMPORTANTE: convém

lembrar que tal técnica refere-se a mitose em células vegetais e há diferenças com a mitose de

células animais. A mitose em células animais pode ser observada em tecidos embrionários

e/ou no extrato germinativo da epiderme, utilizando fragmentos destes tecidos, fixados em

Carnou, ou Bouin ou em líquido de Zenker, a coloração pode ser feita com hematoxilina férrica

de Régaud.

A preparação pela técnica de esmagamento de meristema apical de raiz de cebola (Allum

cepa) pode ser observada consultando o site: http://www.biologia.seed.pr.gov.br

http://www.biologia.seed.pr.gov.br/

ROTEIRO CT 17 Figuras de Mitose e/ou Ciclo celular mitótico

MATERIAL Raiz de Cebola

TÉCNICA Hematoxilina Férrica

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

No aumento de 400 X e/ou 1.000 X com óleo de imersão,

núcleo interfásico e fases: prófase, metáfase, anáfase e

telófase.

PROCEDIMENTO: Observe, no meristema primário apical, algumas células, procurando

reconhecer as diversas fases da mitose. Para facilitar a observação, utilize aumento de 100 X

e/ou 400 x. Na mitose a célula se divide ativamente. Uma única célula origina duas células

filhas idênticas à célula mãe. Essas células filhas apresentam o mesmo potencial da célula mãe

para se duplicarem e assim continuar replicando / duplicando o DNA. A mitose possui quatro

fases: prófase, metáfase, anáfase e telófase. Denomina-se citocinese, a divisão do citoplasma

que ocorre no final da telófase. A prófase se caracteriza pela condensação da cromatina

originando os cromossomos (são formados por duas cromátides idênticas unidas pelo

centrômero ou cinetócoro). A membrana do núcleo deixa de existir como também o nucleólo.

Na metáfase os cromossomos se encontram no centro do fuso mitótico. Ao se separarem de

forma uniforme, constituem a placa metafásica. O centrômero de cada cromossomo se

encontra ligado a uma única fibra do fuso mitótico (essa fibra é um microtúbulo /

citoesqueleto). No início da anáfase, os centrômeros separam-se e cada cromátide (molécula

de DNA) torna-se cromossomo. Essa separação é atribuída às fibras do fuso. A morfologia

cromossômica desta fase lembra letras V com disposição horizontal. Na anáfase a célula torna-

se mais alongada. Esse processo de separação das cromátides é muito importante. Na telófase,

os cromossomos adquirem novamente aspecto de grânulos de cromatina. Surge novamente a

membrana do núcleo e os nucléolos. Microfilamentos citoplasmáticos formam um tipo de anel

o qual promove a citocinese. O controle de mitose é feita por proteínas reguladoras e

específicas denominadas de ciclinas e ciclinas dependentes de cinases (CDKs). O volume (a

porcentagem) de ciclinas é variável a cada ciclo mitótico, deixando de existir totalmente no

final da mitose (na telófase). Já as CDKs quando ativadas proporcionam uma série de reações

enzimáticas as quais promovem a mitose.

ROTEIRO CT 18 Morfologia cromossômica (Cromossomos metafásicos)

MATERIAL Xérox de cariótipo com cromossomos metafásicos

PROCEDIMENTO: Identifique no cariótipo normal dado diferentes tipos de cromossomos

metafásicos: cromossomos metacêntricos, submetacêntricos e acrocêntricos. A posição do

centrômero é fundamental para a identificação. Observação: cada braço cromossômico

observado corresponde a uma cromátide, a qual por sua vez é uma molécula de DNA. A

montagem do cariótipo entre outros estudos pertinentes aos cromossomos serão realizados

pela disciplina de Genética e Citogenética. No espaço abaixo faça esquema dos três diferentes

tipos de cromossomos metafásicos.

ROTEIRO CT 19 Montagem de células com base na microscopia

eletrônica de transmissão ( MET)

MATERIAL Esquemas (desenhos) de imagens das organelas

citoplasmáticas obtidas da MET, cola, papel A-4, lápis

preto.

TÉCNICA Reconstrução de células a partir de modelos básicos

OBJETIVO Caracterizar a função celular através da análise ultra

estrutural.

PROCEDIMENTO: Realizar a montagem no espaço abaixo de apenas de uma das células

citadas a seguir (consulte a bibliografia recomendada): célula secretora de proteínas; célula

secretora de glicoproteínas; célula secretora de esteroides e célula transportadora de íons.

ROTEIRO CT 20 Necrose

MATERIAL Baço

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Com aumento de 400 X, necrose celular

PROCEDIMENTO: Inicie sua observação com aumento de 40 X, passe para aumento de 100 X

e posteriormente para 400x. Células em processo de necrose se caracterizam por

apresentarem núcleo picnótico (volume reduzido, hipercorado devido à cromatina condensada

e com distribuição irregular aderida na lamela interna da membrana do núcleo (cariorréxis ou

cariorrexe), células anucleadas, pois após a carorrexe a cromatina sofre dissolução.

Posteriormente ocorre a morfosfase (alterações citoplasmáticas): surgem grânulos e espaços

irregulares, citoplasma opaco e posteriormente eosinófilo e perda do contato com células

vizinhas. O processo da necrose ocorre devido a um processo de agressão no protoplasma. É

um tipo de morte celular / tecidual que não é fisiológico, ocorre como afirmado devido a um

processo de lesão, o qual promove a lise celular com liberação de conteúdos citoplasmáticos e

do núcleo, desencadeando um processo inflamatório. Não é uma morte fisiológica como

ocorre no processo da apoptose, mas sim um tipo de morte celular que mantém contato com

células vivas. Necrose pode ter as seguintes causas: a) física (ação mecânica, temperatura,

radiações), b) química (álcool, fenóis, detergentes, medicamentos entre muitas outras) e c)

biológicas (vírus, bactérias, fungos, parasitas).

No processo da apoptose ocorre nas células uma diminuição do volume celular (ficam

atrofiadas; presença de citoplasma bem eosinófilo (devido a agregação das organelas

citoplasmáticas e da atrofia celular), cromatina periférica no núcleo, núcleo denso e/ou

fragmentado. Apoptose é uma morte programa geneticamente pela célula e é dependente da

enzima caspase. Trata-se de fenômeno comum nos organismos pluricelulares. Tal processo

pode ocorrer durante o desenvolvimento embrionário e fetal como também na vida pós natal

(infância, adolescência e adulta), portanto, são mortes celulares programadas, fisiológicas,

dirigida por genes. Não ocorre processo de autólise nem de inflamação, porém, há gasto de

energético (de ATP). Suas causas relacionam-se com: manutenção da homestasia, regulações

celulares e teciduais e ainda estímulos patológicos como lesões no DNA (devido a estímulos de

radiação, químicos e virais), portanto, a apoptose pode ocorrer por estímulos normais

(fisiológicos) e patológicos.

ROTEIROS PARA AULAS PRÁTICAS

HISTOLOGIA GERAL

Tecidos: Epiteliais

Conjuntivos

Musculares

Nervoso

Roteiros HG – Histologia Geral

Francisco Benedito Kuchinski

Júlio Fernandes

I - TECIDO EPITELIAL (TE)

ROTEIRO HG 01 TE - EPITÉLIOS DE REVESTIMENTO SIMPLES

MATERIAL Mesentério Nitratado (mesotélio) e/ou rim (A)

Rim (túbulos renais) e/ou tireoide (tiroide) (B)

Vesícula biliar e/ou intestino / estômago (C)

TÉCNICA Impregnação Argêntica (Nitrato de prata) e/ou H&E (A)

Hematoxilina e Eosina para (B) e (C)

LÂMINAS (A):________ (B):_______ (C):_______

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Epitélios simples dos tipos: pavimentoso (A), cúbico (B) e

colunar ou cilíndrico/prismático (C) utilizando aumentos de 40 X

100 X e 400 X.

PROCEDIMENTO: (A) - observe a lâmina macroscopicamente e focalize a lâmina de

rim inicialmente com os aumentos de 40X e de 100X. Você verificará que o rim é

formado por duas porções distintas até o olho nu: uma externa (camada cortical, mais

corada) e outra interna (camada medular, menos corada). Localize a camada cortical

e, nesta, observe ao MOC a cápsula de Bowman, que tem seu aspecto

aproximadamente circular, circundando o glomérulo renal. Identifique o folheto parietal

desta cápsula, constituído por epitélio simples pavimentoso. Observando, ainda a

camada cortical, localize núcleos arredondados de túbulos renais. Estes núcleos

pertencem às células epiteliais que estão constituindo o epitélio simples cúbico do

túbulo contorcido proximal (B). Na porção medular do rim observe núcleos achatados

do epitélio simples pavimentoso, da porção delgada da alça de Henle descendente

(A). Este tipo de epitélio apresenta células com citoplasma delgado e núcleo saliente

na porção mediana das células. Utilizando o aumento de 400X esquematize o folheto

parietal da cápsula de Bowman. No mesotélio nitratado, é evidenciado o depósito de

prata metálica sobre as membranas na coloração escura, portanto, não se observa a

membrana plasmática, mas sim a prata. O citoplasma das células do epitélio simples

cúbico é bem eosinófilo. (C) – Todos os órgãos citados apresentam parede

constituída por camadas (túnicas) denominadas de mucosa, submucosa, muscular e

serosa. Localize a revestimento interno de um destes órgãos com o menor aumento.

Com aumento de 400 X observe as células alongadas com núcleos basais. É

importante notar que as células se dispõem numa única camada. A camada mais

interna, em contato com a luz / lúmen é a mucosa, e nestes órgãos possui epitélio

simples colunar. O tecido subjacente ao epitélio é o conjuntivo do tipo frouxo areolar

denominado de lâmina própria ou córion.

ROTEIRO HG 02 TE - EPITÉLIOS DE REVESTIMENTO ESTRATIFICADOS

MATERIAL Esôfago e/ou Bochecha / Vagina (A)

Pele Grossa (B)

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina para (A) e (B)

LÂMINAS (A):________ (B):_______

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Epitélios estratificados dos tipos: pavimentoso estratificado não

queratinizado (A) e queratinizado (B) utilizando aumentos de 40X

100 X e 400 X.

PROCEDIMENTO: (A) - Localize o epitélio que reveste a mucosa do esôfago e/ou a

mucosa da bochecha. Observe os diferentes tipos de células, caracterizando-as

através de seus núcleos. Notar que somente as células mais superficiais apresentam

núcleos achatados, portanto, são de células pavimentosas e o epitélio é do tipo

estratificado pavimentoso. Represente com aumento de 400 X, um trecho da mucosa

com o epitélio solicitado. O tecido subjacente é o conjuntivo e ambos constituem uma

mucosa. Na vagina, as células epiteliais superficiais sofrem processo de descamação

contínua, daí a denominação de epitélio escamoso. Nota: outras disciplinas darão

ênfase para a Citologia esfoliativa da vagina pelas técnicas de Papanicolau e/ou de

Shorr. (B) – Observe macroscopicamente a lâmina da pele e descubra uma área mais

avermelhada. Está área corresponde à queratina localizada acima das células

epiteliais. Com aumento de 40 X e posteriormente com 100 X e 400 X, esquematize

um trecho deste epitélio, observando também diferentes morfologias de núcleos sendo

que as células mais superficiais possuem núcleos que caracterizam células

pavimentosas. Essas células deste epitélio são denominadas de queratinócitos.

Observe grânulos basófilos no interior destas células (são grânulos de querato hialina).

Tal epitélio se localiza acima do tecido conjuntivo (derme), daí a denominação de

epiderme. Nota: a pele é constituída pela epiderme + derme.

ROTEIRO HG 03 TE - EPITÉLIOS DE REVESTIMENTO PSEUDO

ESTRATIFICADO E DE TRANSIÇÃO (polimorfo).

EPITÉLIO GLANDULAR – CÉLULA CALICIFORME

MATERIAL Traqueia (A)

Bexiga urinária e/ou ureter (B)

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E para (A) e (B)

LÂMINAS (A):________ (B):_______

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Epitélio pseudoestratificado colunar ciliado com células

caliciformes e epitélio de transição utilizando aumentos de 40 X

100 X e 400 X.

PROCEDIMENTO: (A) Provavelmente, a lâmina utilizada além de possuir a traqueia

também contêm o esôfago, portanto, há dois cortes transversais de estruturas

tubulares nesta lâmina, ao ser observada macroscopicamente (a olho nu). Identifique

na lâmina a estrutura que possui arco azul e luz / lúmen arredondado, é a traqueia. O

outro órgão tubular com luz bem reduzida e estrelada é o esôfago. Na mucosa

traqueal identifique núcleos localizados em diferentes alturas (em níveis diferentes),

embora as porções basais de suas células estão situadas no mesmo plano inferior,

acima da lâmina basal. Este epitélio possui dois tipos celulares, as maiores ciliadas e

com núcleo próximo à superfície e as outras são menores e é denominado de epitélio

respiratório. A célula caliciforme é um exemplo de “glândula” exócrina unicelular,

secreta muco e é encontrada em mucosas como das vias respiratórias, intestinal e da

tuba uterina. A expressão glândula é utilizada para designar estrutura secretora

multicelular. (B) – Observe no aumento de 40 X e de 100 X a mucosa da bexiga

urinária e/ou do ureter e identifique duas ou mais camadas de células com núcleos

arredondados. No aumento de 400 X constate que as células mais superficiais são

grandes e esféricas enquanto às inferiores apresentam forma variável. Trata-se de um

epitélio estratificado com variação conforme o estado da vacuidade da bexiga urinária.

Assim, quando a bexiga se encontra cheia de urina, as células superficiais apresentam

morfologia achatada.

ROTEIRO HG 04 TE - EPITÉLIOS GLANDULARES – EXÓCRINO

MATERIAL Pele Fina (A), Esôfago (B) e Parótida (C)

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E

LÂMINAS (A):________ (B):_______ (C):__________

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Epitélios glandulares: glândulas sudoríparas, sebáceas,

esofágicas e salivar,utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: (A) – Na lâmina de pele fina, inicialmente, macroscopicamente e

posteriormente com aumento de 40 X identifique a epiderme, a derme (área mais

avermelhada) e a hipoderme (área mais clara). A epiderme possui o epitélio

estratificado pavimentoso queratinizado (menos espesso do que na pele grossa). Com

esse mesmo aumento e com 100X é possível identificar os folículos pilosos

seccionados em vários planos e cada um é acompanhado da glândula sebácea

presente na derme (tecido conjuntivo). A glândula sebácea é acinosa. Identifique

também aglomerados de “tubos” cortados também em planos diferentes, são as

representações da glândula sudorípara. A glândula sudorípara é tubulosa ou túbulo

glomerular. (B) – Na mucosa do esôfago você deverá rever o epitélio estratificado

pavimentoso e reconhecer a glândula mucosa esofágica com suas porções: ducto

excretor e porção secretora mucosa com células acinosas mucosas. (C) – Na glândula

salivar parótida reconhecer ácinos serosos, células mioepiteliais e ductos excretores

com: epitélio simples cúbico (ducto intercalar); epitélio simples colunar (ducto estriado)

e com epitélio estratificado (ducto excretor). A luz / lúmen do ducto intercalar é a

menor e a do excretor é a maior. Inicie sempre seu trabalho de observação dos

tecidos utilizando a sequência do menor aumento para aumentos de 100X e 400X.

ROTEIRO HG 05 TE - EPITÉLIOS GLANDULARES – ENDÓCRINO

MATERIAL Tireoide (A), Paratireoide e/ou Supra Renal / Adrenal

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E

LÂMINAS (A):________ (B):_______

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Epitélios glandulares: glândula endócrina vesicular ou folicular e

cordonal, utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: (A) - Com o menor aumento você deverá reconhecer os folículos

tireoidianos que caracterizam a estrutura vesicular ou folicular deste órgão endócrino,

constituídos por epitélio simples cúbico. Notar a presença no interior destes folículos

do coloide eosinófilo que contém a tireoglobulina (pré-hormônio). Essas células

cúbicas são as foliculares e responsáveis pela produção dos hormônios tireoidianos:

triiodotironina e tiroxina. Entre os folículos há vasos sanguíneos, predominantemente

de capilares, de tecido conjuntivo e de células parafoliculares responsáveis pela

síntese do hormônio tireocalcitonina ou calcitonina. Observe também nos aumentos de

100X e 400X. (B) – As glândulas paratireoides e o córtex das adrenais apresentam

estrutura cordonal. Na paratireoide as células denominadas de principais formam

cordões em diferentes planos, o que dificulta a caracterização perfeita de cordões.

Entre estes cordões há capilares sanguíneos. O hormônio produzido é o paratormônio.

Há células bem eosinófilas denominadas de oxífilas cuja função ainda é desconhecida.

Já o córtex da supra renal possui células com distribuição cordonal distinta

constituindo três zonas, a mais periférica é a glomerulosa, produtora de aldosterona, a

intermediária é a fasciculada que produz andrógenos e glicocorticoides e a mais

interna é a reticulada, responsável também pela produção dos mesmos hormônios

feitos pela fasciculada. A porção central da supra renal é denominada de medula e

sintetiza catecolaminas (adrenalina e noradrenalina). Focalize a paratireoide ou o

córtex da supra renal nos três aumentos: 40X, 100X e 400 X e esquematize em

apenas um único aumento, diferenciando estrutura endócrina vesicular (folicular) da

cordonal.

II – TECIDO CONJUNTIVO - TC

ROTEIRO HG 06 TC - TECIDO CONJUNTIVO – Elementos do Tecido

Conjuntivo – Células Conjuntivas e Conjuntivos de

Propriedades Especiais

MATERIAL Polpa de dente jovem e/ou Cordão Umbilical (A), mucosas (B), pele e/ou fígado injetados (C), granuloma dental (D), mesentério (E) e hipoderme (F).

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E (A e B); Nankin e Lítio

Carmin (C), H&E (D) e Weigert / azul de toluidina (E)

LÂMINAS (A):___ (B):____ (C):___ (D):___ (E):_____ (F):____

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Célula mesenquimal indiferenciada, fibroblastos, fibras

colágenas, SFA e Tecido conjuntivo mucoso (A); núcleos de

fibroblastos e de fibrócitos, fibras colágenas e SFA (B);

macrófagos e histiócitos (C); plasmócitos, fibras colágenas e

SFA (D); mastócitos e fibras elásticas distendidas (E), utilizando

aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: Em todos os seis materiais inicie sua observação com o aumento

de 40X, passa para 100 X e posteriormente para 400X. Siga orientação do Professor

para cada uma destas lâminas. As células mesenquimais possuem prolongamentos

citoplasmáticos que se comunicam entre si. O núcleo destas células ocupa posição

central. Observe a grande quantidade de imagem negativa da SFA, caracterizando o

tecido conjuntivo mucoso ou mucóide. Os fios róseos (eosinófilos) são as fibras

colágenas. Identifique a forma do núcleo comparando fibroblasto com fibrócito no

tecido conjuntivo da mucosa dada. Macrófagos são células que apresentam o núcleo

em forma de rim (feijão), pelas técnicas utilizadas, o citoplasma apresenta colorações

distintas, fato devido ao processo de fagocitose do Nankin e do Lítio Carmin. Os

plasmócitos apresentam citoplasma basófilo pela alta proporção de REG ou RER. Os

núcleos destas células se encontram deslocados para a porção basal (são

excêntricos) e com grande quantidade de cromatina, a qual promove uma imagem ao

núcleo de roda de carroça. Neste material há outros tipos de células de defesa como

leucócitos (neutrófilos, eosinófilos, linfócitos, monócitos), os quais serão ainda objeto

de estudo. Os mastócitos apresentam núcleo esférico e central, granulações com

tonalidades diferentes dependendo do tipo de técnica utilizada. Os fios finos

observados são de fibras elásticas. Nota: célula mesenquimal indiferenciada é uma

célula mater, por exemplo, origina fibroblastos, os quais sintetizam o material

extracelular fibrilar e afibrilar e tornam posteriormente fibrócitos. Miofibroblastos são

fibroblastos diferenciados que realizam processos de contração (apresentam no

citoplasma filamentos de actina). Macrófagos e histiócitos são células de defesa. Os

histiócitos são macrófagos fixos como a célula de Kupffer do fígado. Os plasmócitos

são células responsáveis pela produção dos anticorpos (proteínas – imunoglobulinas –

mecanismo de defesa humoral / químico). Mastócitos produzem histamina e heparina.

Células adiposas (lipócitos ou adipócitos) constituem o tecido adiposo unilocular da

hipoderme da pele.

ROTEIRO HG 07 TC - TECIDO CONJUNTIVO – Elementos do Tecido

Conjuntivo – Material Extracelular Fibrilar e Afibrilar.

Tipos de Tecido Conjuntivo propriamente dito

MATERIAL Tendão ou Pele Grossa e/ou Pele Fina (A); Rim ou Fígado (B) Artéria Aorta (C) e Mucosas (do esôfago, do ureter e/ou........)

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E (A); Impregnação Argêntica

(B) e Weigert ou H&E + Aldeído Fucsina

LÂMINAS (A):______ (B):_____ (C):_____ (D):_______

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Fibras conjuntivas: colágenas (A); reticulares (B); e elásticas

(C), utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: Fibras conjuntivas colágena, elástica e reticular constituem a

porção fibrilar do material extracelular. Já a Substância Fundamental Amorfa (SFA)

representa a porção afibrilar e não é observada por técnicas rotineiras, sua

observação será sempre realizada na forma de imagem negativa (áreas claras entre

as fibras colágenas e células conjuntivas). No tendão, você perceberá que as fibras

colágenas ocorrem mais ou menos paralelas entre si e se apresentam eosinófilas, na

coloração róseo pela ação do corante eosina. Essas fibras conjuntamente com células

aí existentes mais a SFA constituem o tecido conjuntivo denso modelado. Na pele,

focalize a derme e observe que as fibras colágenas predominam no campo e ocorrem

em direções e planos diferentes, constituindo o tecido conjuntivo denso não modelado.

Utilize aumentos de 100X e de 400X. Tanto no tendão como na derme da pele, há

pontos roxos que correspondem aos núcleos das células conjuntivas, evidenciados

pelo corante hematoxilina. No rim e/ou no fígado, observe no aumento de 400 X fios

pretos entrelaçados entre si e com células renais (no rim) e/ou hepáticas (no fígado).

Esses fios são as fibras reticulares (reticulina evidenciada por sais de prata). A fibra

elástica não é evidenciada pelo corante H&E, sua observação por esta técnica é

realizada na forma de imagem negativa. Para evidenciar fibras elásticas, os corantes

devem ser específicos, como os citados. A coloração das fibras elásticas é púrpura e

sua morfologia é um fio bem fino quando distendidas (esticada) e de um fio tortuoso

quando não sujeita ao processo de alongamento. Nesta lâmina de artéria, as fibras

elásticas observadas na parede deste vaso sanguíneo não se encontram distendidas.

Observe nos três aumentos: 40X, 100X e 400X. Na mucosa do esôfago e/ou do ureter

ou de outro órgão, observe logo abaixo do epitélio, o tecido conjuntivo frouxo sem

predominância de algum de seus elementos (células, fibras e SFA). Neste tecido

conjuntivo que também e denominado de lâmina própria há proporções bem parecidas

destes constituintes. Observe no aumento de 100X e de 400X. Nota: Fibras colágenas

pela técnica de tricrômico de Mallory e/ou Tricrômico de Masson são evidenciadas em

azul, já pela técnica do H&E em róseo (são eosinófilas).

ROTEIRO HG 08 TC - TECIDO CONJUNTIVO DE SUSTENTAÇÃO / DE

SUPORTE – TECIDO CARTILAGINOSO

MATERIAL Traqueia, orelha e disco intervertebral

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E (A); Weigert (B) e H&E (C)

LÂMINAS (A):___ (B):____ (C):___

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Tecido cartilaginoso hialino (A), tecido cartilaginoso elástico (B)

e Tecido cartilaginoso fibroso, utilizando aumentos de 40X

100X e 400X.

PROCEDIMENTO: (A) - A cartilagem hialina é formada pelo tecido cartilaginoso

hialino. Essa cartilagem localiza-se no septo nasal, na traqueia, nos brônquios e nas

superfícies articulares, daí a denominação de cartilagem articular. A cartilagem

elástica é formada pelo tecido cartilaginoso elástico. Essa cartilagem localiza-se na

orelha, na tuba auditiva, na epiglote e na laringe. A cartilagem fibrosa ou

fibrocartilagem localiza-se no disco intervertebral, em algumas áreas que ocorre a

inserção dos ligamentos e tendões nos ossos e na sínfise pubiana. Observar na

traqueia, abaixo da mucosa, o anel de cartilagem hialina com o pericôndrio (local que

ocorre o principal tipo de crescimento, o aposicional) com fibras colágenas, núcleos

de fibroblastos e de fibrócitos, além dos núcleos dos condroblastos na porção interna

do pericôndrio. Mais internamente, na matriz cartilaginosa, ocorre os grupos isógenos

de condrócitos (local que ocorre o crescimento intersticial da cartilagem). A matriz

cartilaginosa é a área basófila entre tais grupos, sendo mais basófila na periferia

destes grupos. Nesta matriz há colágeno do tipo II com ácido hialurônico,

proteoglicanas e glicoproteínas, os quais conferem a basofilia. (B) - A cartilagem

elástica localiza-se abaixo da pele da orelha, seus condrócitos são maiores e há fibras

elásticas na matriz contínuas com o pericôndrio. (C) - A fibrocartilagem sempre está

muito próxima ao tecido conjuntivo denso. A matriz cartilaginosa da fibrocartilagem é

predominantemente eosinófila, sua basofilia fica restrita ao redor dos condrócitos que

se distribuem em fileiras / cordões. Nota: disco intervertebral pode ser observado na

cauda de cão / de rato. Sua localização entre as vértebras é de suma importância,

pois, amortece impactos e protege contra o desgaste ósseo. Siga orientações do

Professor e observe corpos vertebrais, disco intervertebral contendo o núcleo pulposo

(é de fibrocartilagem no indivíduo adulto).

ROTEIRO HG 09 TC - TECIDO CONJUNTIVO DE SUSTENTAÇÃO / DE

SUPORTE – TECIDO ÓSSEO

MATERIAL Osso descalcificado (calota craniana e/ou osso esponjoso de epífises / maxila / mandíbula e diáfises (A); osso desgastado (díploe, processo alveolar, diáfise (B)

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E para (A e B) e desgaste

para (C e D)

LÂMINAS (A):___ (B):____ (C):___ (D):___

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Tecido ósseo esponjoso e compacto descalcificado e

desgastado utilizando aumentos de 40X 100X e 400X.

PROCEDIMENTO: Células ósseas só são observadas pela técnica de

descalcificação, pois, pela técnica de desgaste são observados os locais que estas

células ocupam, denominados de osteoplastos. Pela técnica de descalcificação +

H&E, com o menor aumento, observe no osso esponjoso: trabéculas ósseas com

matriz óssea e osteócito, área do endósteo e do periósteo, medula óssea nas

cavidades medulares e osteoblastos (são células mononucleadas e com citoplasma

basófilo) bem como osteoclastos (são células multinucleadas e com citoplasma

eosinófilo) nas membranas de revestimento ósseo (periósteo e endósteo). Pela técnica

de desgaste, observe no osso esponjoso as cavidades medulares (sem medula óssea)

e trabéculas ósseas com os osteoplastos e canalículos ósseos. No osso compacto por

técnica de desgaste identifique o Sistema de Havers (sistema nutridor) com o canal de

Havers, lamelas ósseas concêntricas, canalículos ósseos. Caso o corte tenha sido do

tipo longitudinal na diáfise, será possível identificar o canal de Volkman.

ROTEIRO HG 10 TC - TECIDO CONJUNTIVO – Osteogêneses

MATERIAL Díploe e Disco Epifisário

TÉCNICA Hematoxilina e Eosina – H&E

LÂMINAS (A):___ (B):____

OBSERVAR E

ESQUEMATIZAR

Processo de ossificação intramembranoso e endocondral nos

aumentos de 40X, 100X e 400X

PROCEDIM