7/23/2019 Separao de Pigmentos de Folhas Verdes Por Cromatografia Em Camada Delgada de Slica Gel

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SEPARAO DE PIGMENTOS DE FOLHAS VERDES PORCROMATOGRAFIA EM CAMADA DELGADA DE SLICA GEL (CCD)

Este experimento visa apresentar aos alunos algumas tcnicas bsicasempregadas em um laboratrio de qumica orgnica. Faremos uso de mtodos

simples de extrao (lquidolquido! e cromatogra"ia# a "im de analisarvisualmente uma mistura de compostos orgnicos e isolar substnciascoloridas encontradas em material vegetal.

Objetivo: $eri"icar a separao por %%& dos pigmentos (caroteno# cloro"ila 'e ! extrados de "ol)as verdes (espina"re!.

Introduo:Entre os mtodos modernos de anlise# a cromatogra"ia ocupa umlugar de destaque devido a sua "acilidade em e"etuar a separao# identi"icao

e quanti"icao de espcies qumicas# por si mesma# ou em con*unto comoutras tcnicas instrumentais de anlise# como por exemplo# a espectroscopiano in"ravermel)o ou a espectrometria de massas.' cromatogra"ia um mtodo "sicoqumico de separao dos componentesde uma mistura# reali+ada atravs da distribuio destes componentes em duas"ases# que esto em contato ntimo. ,ma "ase permanece estacionria e outrase move atravs dela. &urante a passagem da "ase mvel pela "aseestacionria# os componentes da mistura so distribudos entre as duas "ases#de tal "orma que cada um dos componentes seletivamente retido pelaestacionria# resultando em migra-es di"erenciais destes componentes. ovrios os critrios usados para classi"icao das di"erentes modalidades de

cromatogra"ia# sendo os mais comuns relacionados / tcnica empregada# omecanismo de separao envolvido e aos di"erentes tipos de "ases usadas. 0acromatogra"ia em %%& a "ase estacionria a slica e a "ase mvel umamistura de solventes. 1oda cromatogra"ia trabal)a com o mesmo princpio2depende de di"erenas de solubilidade ou adsorvidade das substncias emrelao /s duas "ases.

Cromatografia em camada delgada:' cromatogra"ia em camada delgada(%%&! consiste na separao dos componentes de uma mistura atravs damigrao di"erencial sobre uma camada delgada de adsorvente retido sobreuma super"cie plana. 3 processo de separao est "undamentado

principalmente no "en4meno de adsoro. Este processo "sico baseadoprincipalmente em atra-es eletrostticas ou dipolares ("oras de $an der5aals!# incluindo a "ormao de pontes de )idrog6nio. 7uando se trata de umslido# como slica ou alumina# como "ase estacionria# a adsoro ocorre nainter"ace entre slido e a "ase mvel# devido a presena de grupos ativos nassuas super"cies.

' %%& uma tcnica simples# barata e muito importante para aseparao rpida e anlise quantitativa de pequenas quantidades de material.Ela usada para determinar a pure+a do composto# identi"icar componentesem uma mistura comparandoos com padr-es8 acompan)ar o curso de umareao pelo aparecimento dos produtos e desaparecimento dos reagentes eainda para isolar componentes puros de uma mistura.

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Adsorventes: lica (i39! que um dos adsorventes mais utili+ados e'lumina ('l3:! que o segundo mais utili+ado.

Fase mvel: olventes ou misturas de solventes.olventes em ordem de polaridade2 gua;metanol;cido

actico;acetona;etanol;acetato de etila;ter etlico;cloro"rmio;tolueno;ben+eno;tetracloreto de carbono;pentano;ter depetrleo;ciclo )exano.

0a %%& as molculas t6m uma certa atrao pela slica e uma atraodi"erente pelo solvente que se move pela ao da capilaridade.%ompostos muito polares (lcoois# aminas e cidos carboxlicos! se "ixam"ortemente / super"cie da slica "ormando pontes de )idrog6nio com osresduos cidos da slica# portanto necessrio usar solventes muito polarespara entemente usado em cromatogra"ia o ?"ator dereteno? de um composto (@"!. 0a %% o @" "uno do tipo de suporte ("ase"ixa! empregado e do eluente. Ele de"inido como a ra+o entre a distnciapercorrida pela manc)a do componente e a distncia percorrida pelo eluente.

Aortanto2Rf = dc/ ds

3nde2dc B distncia (cm# mm! percorrida pela substncia.

d

s

B distncia (cm# mm! percorrida pela "rente da "ase mvel (eluente!.

"#$erimental:

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I% &ateriais e 'eagentes

Cter de petrleo (p.e. :D D o%! ou )exano quer de GD mH Etanol ErlenmeIer de 9G mH 'cetona Aroveta de JD mH %loro"rmio Aapel de "iltro ul"ato de sdio anidro Alaca de Aetri Fol)as de espina"re %ubetas ou bquer de JDD mH 'lmo"ari+ Alacas de slica gel Aipeta de Aasteur %apilares Funil de separao de D mH

II )rocedimento:

a) Preparao do extrato

%olocar em um almo"ari+ GJD "ol)as de espina"re e alguns mililitros deuma mistura de 92J de ter de petrleo ou )exano e etanol. 1riturar bem as"ol)as. ,tili+ando uma pipeta de Aasteur# e uma bolin)a de algodo# "iltrar oextrato# trans"erindoo para um "unil de separao. 'dicionar# igual volume degua. Kirar lentamente o "unil# pois a agitao brusca pode causar a "ormaode emulso. eparar e descartar a "ase aquosa. @epetir esta operao delavagem# por mais duas ve+es# sempre descartando a "ase aquosa. 1rans"erir asoluo de pigmentos para um ErlenmeIer e adicionar aproximadamente 9 gde sul"ato de sdio anidro. 'ps alguns minutos# utili+ando uma pipeta deAasteur# decantar a soluo de pigmentos do sul"ato de sdio# trans"irindo paraum bquer. e a soluo no estiver "ortemente colorida de verde escuro#

concentrar parte do ter de petrleo# usando uma suave corrente de ar.b) Aplicao da amostra na placa

,tili+ando um capilar# aplicar duas ou tr6s por-es da soluo depigmentos sobre uma placa de slica (9#G x L#G cm! a J#D cm de uma dasextremidades. Evitar a di"uso da manc)a de "orma que seu dimetro no devaultrapassar a 9 mm durante a aplicao da amostra. &eixar o solventeevaporar.

c) Desenvolvimento do cromatogramaAreparar uma cuba colocando uma tira de papel de "iltro de MxG cm e G

mH de cloro"rmio. Esperar o tempo su"iciente para que ocorra a completa

saturao. %olocar cuidadosamente a placa na cuba# evitando que o ponto deaplicao da amostra mergul)e no solvente. 7uando o solvente atingir cerca deD#G cm do topo da placa# remover a placa e marcar a "rente do solvente (lin)ade c)egada da "ase mvel!. &eixar secar ao ar e observar o nNmero demanc)as coloridas. %opiar a placa com as substncias separadas(cromatograma!# obedecendo "ielmente a distncia entre o ponto de aplicaoe a "rente do solvente# bem como a distncia percorrida por cada substncia#iniciando pelo ponto de aplicao at o centro de maior concentrao damanc)a.

Areparar uma nova cuba usando como eluente uma mistura de %O%l :eacetona (P2J!. Esperar que ocorra a saturao completa e e"etuar um novo

desenvovimento da placa# tendo o cuidado de no deixar que a "rente do

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solvente atin*a a manc)a amarela de maior "ator de reteno (@ "!# obtida naprimeira eluio. %opiar o cromatograma.

Observao: As manchas observadas no cromatograma, so normalmente

identificadas, em ordem decrescente de valores de Rf, como carotenos (duasmanchas laranja), as xantofilas (uatro manchas amarela) clorofila a (a!ulesverdeada) e clorofila b (verde)"

III % *uestion+rio

J. Aesquisar estruturas das cloro"ilas ae b# xanto"ilas e carotenos.9. 7ual o estado "sico da "ase mvel e da "ase estacionria na

cromatogra"ia em camada delgada (%%&!Q:. 7ual o mecanismo de separao da cromatogra"ia em camada

delgada de slica gelQ

M. %om que "inalidade a soluo de pigmentos lavada com guaQG. Aor que o sul"ato de sdio anidro adicionado / soluo de pigmentosQ. 7ue se entende por "ator de reteno (@"!QL. &ois componentes ' e # "oram separados por %%&. 7uando a "rente do

solvente atingiu# #G cm# acima do ponto de aplicao da amostra# amanc)a de '# estava a G cm# a de a :# cm. %alcular o @ "de ' e de .&esen)ar esta placa# obedecendo o mais "ielmente possvel asdistncias "ornecidas. 3 que se pode concluir sobre a resoluo dasmanc)as# nesta separaoQ

I, % -I-.IO/'AFIA

J. @3E@1# @. R.8 KSHE@1# T. %.8 @3&E5'H H. . 5S0K@3$E# '..# #odern experimental organic chemistr$# Mt) ed# A)Iladelp)iaaunders %ollege Aublis)ing#JPUG.

9. %3HHS0# %. O.8 @'K'# K. H.8 30'13# A. .# %ntroduo a m&todoscromatogr'ficos# . ed# %ampinas# Editora da ,0S%'RA# JPPG.

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M. 3HS3# F. 3.8 3HS3# A.'. %ntroduo - umica de alimentos. 9.ed. o Aaulo2 Hivraria $arela. JPP9.