Genética aplicada al

diagnóstico prenatal

Tema 8

TÉCNICAS NO INVASIVAS TIPO DE DIAGNÓST.

Screening sérico (16-18) alfa-feto proteína, Gonadotropina

Coriónica y Estriol no Conjugado

Ecografía de alta resolución (>18) Marcadores ecograf.

Células fetales en sangre materna Citogenética

INDICACIONES PARA EL DIAGNÓSTICO PRENATAL NO INVASIVO

.- GESTANTE DE < 35 AÑOS

.- SIN ANTECEDENTES FAMILIARES

INDICACIONES Y TIPOS DE DIAGNÓSTICO PRENATAL

TÉCNICAS INVASIVAS TIPO DE DIAGNÓSTICO

BIOPSIA CORIAL MOLECULAR, CITOGENÉTICO, BIOQUI.

AMNIOCENTESIS CITOGENET., BIOQUI., ALFA-FETO PRO.

FUNICULOCENTESIS o CORDOCENTESIS CITOGENET., INMUNOL., HEMATOLÓG.

INDICACIONES PARA EL DIAGNOSTICO PRENATAL

INVASIVO

-DIAGNÓSTICO PRENATAL CROMOSÓMICO: GESTANTE >35 AÑOS

PROGENITOR PORTADOR DE ANOMALÍA CROMO.ESTRUCTURAL

PROGENITOR PORTADOR DE ANOMALÍA CROMO. NÚMERICA

HIJO ANTERIOR CON ANOMALÍA CROMOSÓMICA

DIAGNÓST. DEL SEXO FETAL (ENFERMEDAD LIGADA AL SEXO)

MALFORMACIONES FETALES DETECTADAS ECOGRAFICAMENTE

SCREENING SERICO ALTERADO

-DIAGNÓSTICO PRENATAL MOLECULAR: ANTECEDENTES FAMILIARES DE ENFERMEDAD MENDELIANA

-DIAGNÓSTICO PRENATAL (DEFECTOS TUBO NEURAL) HIJO ANTERIOR AFECTO DE DCTN.

INDICACIONES PARA EL ESTUDIO CROMOSÓMICO

A) DE UN PACIENTE - RETRASO MENTAL:

DE CAUSA NO CONOCIDA

SOSPECHA DE X FRAGIL

FENOTIPO DE SÍNDROME DE DOWN

FENOTIPO DE SÍNDDROMES DE MICRODELECIÓN

(PRADER-WILLI, ANGELMAN, DI GEORGE )

- SÍNDROME POLIMALFORMATIVO:

DE CAUSA NO CONOCIDA

CON FENOTIPO DE SÍNDROME CROMOSÓMICO

- RECIÉN NACIDO:

CON RETRASO DE CRECIMIENTO INTRAUTERINO Y

DISMOMORFIA CRANEOFACIAL

B) DE UNA PAREJA

- ALTERACIONES DE LA FERTILIDAD:

PERDIDAS FETALES DE REPETICIÓN

ESTERILIDAD

HIJOS MORTINATOS

MUERTE NEONATAL NO EXPLICADA

- ANTECEDENTES FAMILIARES DE:

RETRASO MENTAL

SÍNDROMES POLIMALFORMATIVOS

INDICACIONES PARA EL ESTUDIO CROMOSÓMICO

Existe indicación de técnicas invasivas para estudio de cariotipo fetal ante:

AFP: < 0.5 hCG: > 3 hCG: < 0.2 ( Riesgo de trisomía 18 ) AFP: > 3 ( Riesgo de defecto del tubo neural ) La aplicación del tamizaje bioquímico en segundo trimestre permite detectar el 60 a 65 % de los fetos con síndrome de Down con una tasa de falsos positivos del 5 % .

INDICACIONES PARA EL ESTUDIO CROMOSÓMICO

Se realiza a partir de las semanas (menstruales) 14-16 de

gestación, cuando la tasa de células viables contra muertas es

mayor, el útero es accesible por vía abdominal y hay suficiente

cantidad de liquido amniótico (LA) (200-250ml) como para

extraer 20 – 30 ml sin mayor riesgo.

Debe realizarse bajo control

ultrasonográfico directo, visualizando

continuamente la punta de la aguja, la

cual no debe ser más gruesa que número

22.

Si para tener acceso al pozo de líquido

amniótico es necesario atravesar la

placenta con la aguja, se hace, pero se

debe tener sumo cuidado para no tocar

la inserción del cordón.

TÉCNICA DE AMNIOCENTESIS

TÉCNICA DE AMNIOCENTESIS

TÉCNICA DE AMNIOCENTESIS

Cultivo primario de “amniocitos”

• El botón celular se siembra en medios de cultivo ricos en nutrientes y factores del crecimiento celular.

• El cultivo es cerrado y/o abierto

• Colonias no confluentes con suficientes mitosis

• “arresto” mitótico y cosecha por suspensión o in situ.

• Análisis cromosómico bandeo GTG.

FISH

Hibridización in situ fluorescente

Síndromes por Micro-deleciones Retinoblastoma(RB) del13q14 Prader Willi-Angelman del15q12 Di George/VCFacial del22q11 Beckwith Wiedwmann del11p15

“Hibridar” sondas marcadas sobre un cromosoma (metafase) o sobre un fragmento de ADN (interfase)

Limitaciones de FISH

Técnicas

Es muy laborioso

Hay que ver muchas mitosis (25-50)

Económicas

• Sondas son muy costosas

Cordocentesis

DIAGNÓSTICO PRENATAL MEDIANTE

TÉCNICAS DE OBTENCIÓN DE MUESTRAS

TRANSABDOMINALES

Método Tasa de

éxitos % Semanas de gesta

Demora para el diagnóstico

Fiabilidad Tasa de pérdidas fetales %

MVC > 99 9 Horas-10 días

Muy alta 1

Amnio > 99 15 10-20 días Muy alta 1

Cordo > 95 18 3-4 días Muy alta 1-2

0,5

La biopsia de corion tiene más probabilidad de resultados

ambiguos pues ~ 1-2% de las muestras reflejan mosaicismo

confinado a la placenta. Además puede haber más problemas de

contaminación con células maternas.

PROBLEMAS DEL DIAGNÓSTICO PRENATAL

1.-RIESGO DE ABORTO: +0,5 A 1%.

2.-NO OBTENCIÓN DE RESULTADOS CITOGENÉTICOS: FALLO EN LA OBTENCIÓN DE LA MUESTRA

FALLOS EN EL CULTIVO CELULAR

3.- RESULTADOS CITOGENÉTICOS AMBIGUOS: (1% Biopsia corial, y 0,2% liquido amniótico)

CONTAMINACIÓN CON CELULAS MATERNAS

ARTEFACTO DE CULTIVO O MUTACIÓN IN VITRO

MOSAICISMO CONFINADO A PLACENTA

MOSAICISMO FETAL REAL

4.-ANOMALÍAS CROMOSÓMICAS DE DIFICIL PRONOSTICO: ALTERACIONES DE LOS CROMOSOMAS SEXUALES (TURNER)

ALTERACIONES ESTRUCTURALES APARENTEMENTE EQUILIBRADAS

CROMOSOMAS MARCADORES O MICROCROMOSOMAS

Extracción de una blastómera Diagnóstico preimplantacional

Se transfieren, con ayuda de un catéter, 1-2 embriones seleccionados, al útero materno y se protege con progesterona.

A los 10-12 días de la transferencia, si el embarazo es positivo se proseguirá el tratamiento con progesterona.

Los embriones no transferidos podrán ser congelados y transferidos en ciclos sucesivos.

¿Qué sucede con los embriones? Diagnóstico preimplantacional

Mínimo 9 cromosomas

Cromosomas analizados % fetos alteraciones cromosómicas

5 28 %

6 47% *

9 (13,15,16,17,18,21,22,XY) 70% **

12 (8,13,14,15,16,17,18,20,21,22,XY)

80%

* Staessen et al 2004 y Plateau y al 2005 ** Giamaroli et al 1999 y Munne et al 2003

¿Qué cromosomas se estudian? Diagnóstico preimplantacional

13 +

Diagnóstico por FISH Diagnóstico preimplantacional

18 +

Diagnóstico por FISH Diagnóstico preimplantacional

21 +

Diagnóstico por FISH Diagnóstico preimplantacional

Edad Materna

% embriones alterados

35-37 40-48%

38-41 50-55%

41-45 65%

Riesgo de tener un niño afectado de alguna anomalía cromosómica:

1/385 a los 30 años

1/179 a los 35 años

1/63 a los 40 años

1/19 a los 45 años

Edad materna Diagnóstico preimplantacional

La probabilidad éxito cada implantación es limitada: (15-40%)

Insuficientes óvulos o embriones para analizar

No todos los óvulos fecundados crecerán bien

Algunos embriones pueden dañarse al extraer material

No todos los embriones serán aptos para transferir al útero

No todos los embriones sanos se implantan correctamente

en el útero

Gestación en DGPI Diagnóstico preimplantacional

Diagnóstico prenatal en embarazos naturales (sin recurrir a fecundación in vitro)

Inseminación artificial con gametos donados

Adopción

Embarazo natural confiando en las probabilidades de que el niño nazca sano

No tener hijos

Alternativas al DGPI Diagnóstico preimplantacional

GENÉTICA DE LA VISIÓN EN COLOR

Los fotorreceptores, de los cuales existen 120 millones de conos y 7 millones de bastones

en la especie humana, tienen características morfológicas similares, pero son diferentes

funcionalmente. En ambos tipos celulares se distinguen tres regiones comunes claramente

diferenciadas: el segmento externo, el segmento interno y el terminal sináptico

El núcleo de conos y bastones contiene el material hereditario como cualquier otra célula del

cuerpo. Conos y bastones son neuronas superespecializadas en los procesos de la visión. Se

componen de una parte o expansión externa el núcleo celular y una expansión interna

Partes en las que se compone el segmento externo

En el segmento externo se encuentran los pigmentos fotosensibles y es la parte sensible a la luz.

La estructura del segmento externo es diferente en conos y bastones. En conos está formada por

repliegues de la membrana celular, mientras que en bastones son discos independientes.

En las paredes de los discos y en los bastones y en los repliegues de membrana de los conos

hay moléculas de fotopigmento compuesto de una proteína “opsina” y un pigmento retinal de

constitución lipídica (grasa) derivado de la vitamina A.

PROTEÍNA

Existen tres tipos de conos con pigmentos sensibles a distinta longitud de honda

La luz que llega a la retina estimula al fotopigmento por el proceso de fototransducción y por

una serie de reacciones químicas es transformada en impulsos nerviosos.

La energía necesaria para estos procesos se obtienen de las mitocondrias que se encuentran en

el elipsoide.

A través de los terminales sinápticos llamado esférula para el bastón y pedículo para el cono

se pasa la información a las neuronas contiguas hacia el nervio óptico.

DALTONISMO

TIPOLOGÍA

ACROMATOPSIA

PROTANOPIA

TRITANOPIA DEUTERANOPIA

Deuteranopía: Ausencia o defecto de los conos VERDE Protanopía: Ausencia o defecto de los conos ROJOS Tritanopía: Ausencia o defecto de los conos AZULES Acromatopsia: Carencia total de conos o defecto en todos ellos, por el cual el individuo sólo ve en B/N

DALTONISMO: Um exemplo de herança ligada ao sexo na espécie humana

• Daltonismo: Dificultad en distinguir algunos colores.

• El Daltonismo esta determinado por un gen recesivo, ligado al sexo, simbolizado por Xd

• El alelo dominante, que condiciona la visión normal, se simboliza por XD.

• Daltonismo

Las personas con mutaciones en los genes que determinan el color del pigmento hacen que no puedan ver algunos colores

Otra alteración debida a un alelo recesivo es el DALTONISMO. Consiste en una alteración en la correcta visión de los colores.

Una persona daltónica es incapaz de distinguir en estas láminas los números 182 y 13

¿Qué números ves en estas láminas?

Una persona daltónica es incapaz de distinguir en estas láminas F4 y 69

¿Qué ves en estas láminas?

Una persona daltónica es incapaz de distinguir un 74 y un 42

¿Qué números ves?

Visión tricomática (arriba), vista por un humano con visión normal para los colores. La misma escena vista a través de los ojos de un mono catarrino, un pariente relativamente prósimo con visión dicromática (abajo)