UNIVERSIDADE CASTELO BRANCOUNIVERSIDADE CASTELO BRANCOCENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE E CENTRO DE CIÊNCIAS DA SAÚDE E

BIOLÓGICASBIOLÓGICASCURSO DE MEDICINA VETERINÁRIACURSO DE MEDICINA VETERINÁRIA

PROCESSAMENTPROCESSAMENTO TECNOLÓGICO O TECNOLÓGICO

DE LEITE E DE LEITE E DERIVADOSDERIVADOS

Iracema M. de Iracema M. de Carvalho da HoraCarvalho da Hora

1. INTRODUÇÃO1. INTRODUÇÃO

O leite é um excelente alimento pelo seu valor O leite é um excelente alimento pelo seu valor nutritivo, constituído por proteínas, nutritivo, constituído por proteínas, carboidratos, gorduras, sais minerais, carboidratos, gorduras, sais minerais, vitaminas e água (Frazier & Westhoff, 1978). vitaminas e água (Frazier & Westhoff, 1978).

Em saúde pública, ocupa lugar de destaque em Em saúde pública, ocupa lugar de destaque em nutrição humana, pois, constitui-se em nutrição humana, pois, constitui-se em alimento essencial para todas as idades, alimento essencial para todas as idades, principalmente recém nascidos. (Oliveira principalmente recém nascidos. (Oliveira et al et al 1999).1999).

Segundo dados da Organização das Segundo dados da Organização das Nações Unidas para Agricultura e Nações Unidas para Agricultura e Alimentação (FAO, 2002), a produção Alimentação (FAO, 2002), a produção mundial de leite alcançará 665 milhões mundial de leite alcançará 665 milhões de toneladas em 2020, com um de toneladas em 2020, com um crescimento anual médio de 1,5%. crescimento anual médio de 1,5%.

Nos países em desenvolvimento a Nos países em desenvolvimento a produção crescerá 71 milhões de produção crescerá 71 milhões de toneladas, até alcançar 293 milhões de toneladas, até alcançar 293 milhões de toneladas em 2010. toneladas em 2010.

Mudança no perfil do consumidor: Mudança no perfil do consumidor: Estima-se que, no período de 2000-Estima-se que, no período de 2000-

2030, a população total da América 2030, a população total da América Latina e Caribe crescerá de 512 Latina e Caribe crescerá de 512 milhões para 725 milhões de pessoas milhões para 725 milhões de pessoas (FAO, 2004).(FAO, 2004).

GlobalizaçãoGlobalização

Utilização de antibióticos na produção Utilização de antibióticos na produção leiteira:leiteira:

MastiteMastite

Uso indiscriminado: Uso indiscriminado: presença de resíduos de presença de resíduos de antibióticos no leiteantibióticos no leite

Importância em saúde pública:Importância em saúde pública: potenciais potenciais riscos à saúde do consumidor.riscos à saúde do consumidor.

Implicações tecnológicas:Implicações tecnológicas: Comprometimento Comprometimento da fabricação de produtos lácteos. da fabricação de produtos lácteos.

Importância do controle de resíduos Importância do controle de resíduos de antibióticos no leite:de antibióticos no leite:

Conferir um produto inócuo, não Conferir um produto inócuo, não causando riscos à saúde do causando riscos à saúde do consumidor, e conferir um bom consumidor, e conferir um bom processo tecnológico na fabricação processo tecnológico na fabricação de produtos lácteos.de produtos lácteos.

3. Revisão Bibliográfica3. Revisão Bibliográfica

3.1. Composição química do 3.1. Composição química do leite:leite:

O leite é um produto secretado pelas O leite é um produto secretado pelas glândulas mamárias e alimento glândulas mamárias e alimento indispensável aos mamíferos, nos indispensável aos mamíferos, nos primeiros meses de vida, enquanto primeiros meses de vida, enquanto não podem digerir e assimilar outras não podem digerir e assimilar outras substâncias necessárias à sua substâncias necessárias à sua subsistência BEHMER, 1979).subsistência BEHMER, 1979).

Composição química do leiteComposição química do leite

Composição Composição química média do química média do leite de vacaleite de vaca

Fonte: BEHMER,1979Fonte: BEHMER,1979

COMPONENTCOMPONENTEE

CONCENTRAÇCONCENTRAÇÃOÃO

( % )( % )

ÁGUAÁGUA 87,587,5

GORDURAGORDURA 3,63,6

CASEÍNACASEÍNA 3,63,6

ALBUMINAALBUMINA 0,30,3

LACTOSELACTOSE 4,64,6

SAIS SAIS MINERAISMINERAIS

0,70,7

E.S.TE.S.T 12,512,5

E.S.D.E.S.D. 8,98,9

Fonte de proteínas de alta qualidade:Fonte de proteínas de alta qualidade: Contém proteínas bioativas que demonstram Contém proteínas bioativas que demonstram

ter um efeito de fortalecimento dos ossos. ter um efeito de fortalecimento dos ossos. Lactoferrina, identificada como um novo Lactoferrina, identificada como um novo

fator de crescimento ósseo com potencial uso fator de crescimento ósseo com potencial uso terapêutico no tratamento da osteoporose. terapêutico no tratamento da osteoporose.

Peptídeos bioativos derivados do leite tem um Peptídeos bioativos derivados do leite tem um papel benéfico na saúde dos dentes ao inibir papel benéfico na saúde dos dentes ao inibir as bactérias cariogênicas e a as bactérias cariogênicas e a desmineralização do esmalte dentário.desmineralização do esmalte dentário.

MineraisMinerais O principal mineral fornecido é o O principal mineral fornecido é o

cálcio: melhora o acúmulo de massa cálcio: melhora o acúmulo de massa óssea, melhorando a densidade óssea, melhorando a densidade mineral óssea durante o mineral óssea durante o desenvolvimento infantil.desenvolvimento infantil.

Fatores que afetam a composição do Fatores que afetam a composição do leite:leite:

alimentação, raça , idade, estágio de alimentação, raça , idade, estágio de lactação, variações climáticas, ciclo lactação, variações climáticas, ciclo estral ou ainda infecções no úbere.estral ou ainda infecções no úbere.

Infecções no úbere: Infecções no úbere: redução da concentração de lactose, redução da concentração de lactose,

gordura, caseína e aumento no conteúdo gordura, caseína e aumento no conteúdo de proteínas do soro e cloretos. de proteínas do soro e cloretos.

3.2. Perspectivas quanto a 3.2. Perspectivas quanto a qualidade do leite produzidoqualidade do leite produzido

Globalização:Globalização: Reorganização do comércio Reorganização do comércio

internacional e formação de blocos internacional e formação de blocos blocos econômicosblocos econômicos

Integração entre os países, ao nível Integração entre os países, ao nível de conhecimento, fluxos de mão de de conhecimento, fluxos de mão de obra, e economia, favorecendo dessa obra, e economia, favorecendo dessa forma, o comércio internacionalforma, o comércio internacional

3.3. Panorama do leite3.3. Panorama do leite A produção brasileira de leite A produção brasileira de leite

vem crescendo a uma taxa vem crescendo a uma taxa consistente ao longo dos últimos consistente ao longo dos últimos 25 anos, como mostra a figura25 anos, como mostra a figura

- De 1995 para 2005, a produção - De 1995 para 2005, a produção aumentou cerca de 50%, aumentou cerca de 50%, passando de 16,4 bilhões para passando de 16,4 bilhões para estimados 25 bilhões.estimados 25 bilhões.

Um termômetro de que os grandes Um termômetro de que os grandes produtores estão acreditando na produtores estão acreditando na atividade é o levantamento Top 100 do atividade é o levantamento Top 100 do Milk PointMilk Point. Desde que começou a ser . Desde que começou a ser realizado, em 2001, vemos ano a ano realizado, em 2001, vemos ano a ano um aumento considerável da produção um aumento considerável da produção média e a intenção mais ou menos média e a intenção mais ou menos constante de cerca de 70% dos constante de cerca de 70% dos produtores em elevar a produção no produtores em elevar a produção no ano seguinte.ano seguinte.

Minas Gerais é o principal estado produtor Minas Gerais é o principal estado produtor de leite e continua líder no número de de leite e continua líder no número de fazendas, mas diminuiu levemente a sua fazendas, mas diminuiu levemente a sua participação em comparação ao ano de participação em comparação ao ano de 2004, passando de 42% para 39%. São 2004, passando de 42% para 39%. São Paulo verificou uma queda menor que em Paulo verificou uma queda menor que em 2004, ficando com 16 fazendas entre as 100 2004, ficando com 16 fazendas entre as 100 maiores. O Paraná se consolidou na maiores. O Paraná se consolidou na segunda posição com 27 fazendas, segunda posição com 27 fazendas, mantendo o mesmo número que no ano mantendo o mesmo número que no ano passado. Poucas modificações ocorreram passado. Poucas modificações ocorreram nos outros estados.nos outros estados.

3.4. Resíduos de antibióticos no leite3.4. Resíduos de antibióticos no leite

3.4.1. Fatores responsáveis:3.4.1. Fatores responsáveis:

Antibióticos são substâncias químicas Antibióticos são substâncias químicas produzidas por diferentes espécies de produzidas por diferentes espécies de microorganismos que suprimem o microorganismos que suprimem o crescimento de outros microorganismos crescimento de outros microorganismos e podem eventualmente destruí-los e podem eventualmente destruí-los (DIAS,2006).(DIAS,2006).

A presença de resíduos de A presença de resíduos de antimicrobianos no leite é antimicrobianos no leite é conseqüência de tratamentos conseqüência de tratamentos terapêuticos aplicados no animal em terapêuticos aplicados no animal em lactação, principalmente no combate lactação, principalmente no combate às doenças infecciosas da glândula às doenças infecciosas da glândula mamária, sendo a de maior mamária, sendo a de maior incidência a mastite (VILELA, 1984).incidência a mastite (VILELA, 1984).

Mastite caracteriza-se por Mastite caracteriza-se por inflamação aguda ou crônica das inflamação aguda ou crônica das mamas, sendo mais freqüente nos mamas, sendo mais freqüente nos ruminantes e neles os agentes ruminantes e neles os agentes etiológicos são predominantemente etiológicos são predominantemente bacterianos (CORRÊA,1992) .bacterianos (CORRÊA,1992) .

Persistência de resíduos de antibióticos Persistência de resíduos de antibióticos no leite:no leite:

Período de carência: prazo de Período de carência: prazo de eliminação do antibiótico no leite, após eliminação do antibiótico no leite, após a última aplicação.a última aplicação.

ProdutoProduto Dose e via de administraçãoDose e via de administração Excipiente utilizado e a solubilidadeExcipiente utilizado e a solubilidade

- Após aplicação intravenosa: resíduos - Após aplicação intravenosa: resíduos aparecem por um período de 12 a 48 aparecem por um período de 12 a 48 horas, dependendo do tipo de preparação horas, dependendo do tipo de preparação e dose administrada.e dose administrada.

- A excreção, após a aplicação - A excreção, após a aplicação intramamária é de 6 a 150 horasintramamária é de 6 a 150 horas

- A excreção, após aplicação intravenosa - A excreção, após aplicação intravenosa é de 24 a 96 horasé de 24 a 96 horas

Absorção do antibiótico via sanguínea: Absorção do antibiótico via sanguínea: contaminação de todos os quartos contaminação de todos os quartos mamários mamários

Causas freqüentes de resíduos de antibióticos Causas freqüentes de resíduos de antibióticos no leite:no leite:

ordenha acidental de vacas no período secoordenha acidental de vacas no período seco descarte somente dos quartos tratadosdescarte somente dos quartos tratados não identificação das vacas tratadas ou perda não identificação das vacas tratadas ou perda

da identificaçãoda identificação falha de notificação do período da retirada do falha de notificação do período da retirada do

leite para consumo e uso de produtos indicados leite para consumo e uso de produtos indicados para o período seco durante a lactação.para o período seco durante a lactação.

Contaminação dos equipamentos de ordenhaContaminação dos equipamentos de ordenha

Antibióticos mais utilizados no Antibióticos mais utilizados no tratamento da Mastite:tratamento da Mastite:

betalactâmicos (penicilinas e betalactâmicos (penicilinas e cefalosporinas), tetraciclinas, cefalosporinas), tetraciclinas, macrolídeos, aminoglicosídeos, macrolídeos, aminoglicosídeos, quinolonas e polimixinas. Dentre as quinolonas e polimixinas. Dentre as classes, uma das mais utilizadas são classes, uma das mais utilizadas são os betalactâmicos.os betalactâmicos.

3.4.2. Implicações Tecnológicas3.4.2. Implicações Tecnológicas a presença de antimicrobianos no a presença de antimicrobianos no

leite cria inconvenientes à indústria leite cria inconvenientes à indústria leiteira já que a maioria deles exerce leiteira já que a maioria deles exerce ação contra as bactérias lácticas, ação contra as bactérias lácticas, importantes no processamento importantes no processamento tecnológico de produtos lácteos. tecnológico de produtos lácteos. (Castañeda,2003).(Castañeda,2003).

Conseqüências tecnológicas mais Conseqüências tecnológicas mais importantes da presença de antibiótico no importantes da presença de antibiótico no leite: leite:

- formação de uma coalhada inadequada - formação de uma coalhada inadequada durante a elaboração do queijo, que durante a elaboração do queijo, que provoca uma maturação anormalprovoca uma maturação anormal

- diminuição da produção de acidez e - diminuição da produção de acidez e flavor da manteiga e de outros produtos flavor da manteiga e de outros produtos fermentados.fermentados.

Bactérias lácticas:Bactérias lácticas: importante papel importante papel na indústria de queijosna indústria de queijos

Acidificação:Acidificação: maturação – aroma, maturação – aroma, sabor, textura e consistência. sabor, textura e consistência.

Antibióticos:Antibióticos: impedem a ação das impedem a ação das bactérias lácticas, acidez bactérias lácticas, acidez insuficiente, alteração das insuficiente, alteração das características sensoriais.características sensoriais.

Características sensoriais:Características sensoriais: Presença de cavernas, olhaduras Presença de cavernas, olhaduras

grandes e deformes em quantidade grandes e deformes em quantidade abundante, um flavor não abundante, um flavor não característico, picante, e uma característico, picante, e uma concentração anormalmente elevada concentração anormalmente elevada de ácido butírico de ácido butírico (CASTAÑEDA,2003).(CASTAÑEDA,2003).

Sensibilidade das bactérias lácticas Sensibilidade das bactérias lácticas aos agentes microbianos:aos agentes microbianos:

Penicilina, mais importante do ponto Penicilina, mais importante do ponto de vista tecnológico.de vista tecnológico.

Cloranfenicol, afeta pouco os Cloranfenicol, afeta pouco os microorganismosmicroorganismos

tabelatabela

Outras classes de antibióticos são Outras classes de antibióticos são prejudiciaisprejudiciais: :

estreptomicina, tetraciclinas, porém, estreptomicina, tetraciclinas, porém, tem sensibilidade menor aos testes tem sensibilidade menor aos testes comumente utilizados para detecção comumente utilizados para detecção de resíduos de antibióticos no leite. de resíduos de antibióticos no leite.

tabelatabela

3.4.3. Riscos para a saúde pública3.4.3. Riscos para a saúde pública Os riscos decorrentes da ingestão de resíduos Os riscos decorrentes da ingestão de resíduos

de antibióticos nos alimentos para a saúde de antibióticos nos alimentos para a saúde humana, resultam em vários problemas, tendo humana, resultam em vários problemas, tendo como mais comum, a pressão seletiva sobre a como mais comum, a pressão seletiva sobre a flora intestinal, favorecendo o crescimento de flora intestinal, favorecendo o crescimento de microorganismos com resistência natural ou microorganismos com resistência natural ou adquirida, dando lugar, direta ou adquirida, dando lugar, direta ou indiretamente, ao aparecimento de resistência indiretamente, ao aparecimento de resistência em bactérias enteropatogênicas em bactérias enteropatogênicas (ROCHA,2003).(ROCHA,2003).

Origem da resistência às drogas:Origem da resistência às drogas: Caráter genético: Mutação no seu Caráter genético: Mutação no seu

cromossoma ou por infecção por um cromossoma ou por infecção por um plasmídeoplasmídeo

Caráter não genético: Multiplicação ativaCaráter não genético: Multiplicação ativa Principais fatores que podem ocasionar o Principais fatores que podem ocasionar o

surgimento de bactérias resistentes:surgimento de bactérias resistentes: Administração de quantidades Administração de quantidades

subterapêuticas de antibióticossubterapêuticas de antibióticos Uso indiscriminado, não respeitando o Uso indiscriminado, não respeitando o

tempo correto de tratamentotempo correto de tratamento

Outros problemas relacionados à ingestão de Outros problemas relacionados à ingestão de resíduos de antibióticos:resíduos de antibióticos:

- Penicilina: hipersesibilidade e possível choque - Penicilina: hipersesibilidade e possível choque anafilático em indivíduos mais sensíveisanafilático em indivíduos mais sensíveis

- Desequilíbrio da flora intestinal, principalmente - Desequilíbrio da flora intestinal, principalmente em crianças abaixo de um ano de idade.em crianças abaixo de um ano de idade.

- Cloranfenicol: Discrasias sanguíneas- Cloranfenicol: Discrasias sanguíneas - Metronidazol, estreptomicina e tetraciclina: - Metronidazol, estreptomicina e tetraciclina:

efeito teratogênico em gestantes, podendo causar efeito teratogênico em gestantes, podendo causar otoxidade e alteração no desenvolvimento ósseo otoxidade e alteração no desenvolvimento ósseo fetal. fetal.

3.5. PNCR – Plano Nacional de Controle de 3.5. PNCR – Plano Nacional de Controle de Resíduos de Antimicrobianos no leiteResíduos de Antimicrobianos no leite

Objetivo: Objetivo: Melhoria da produtividade e da Melhoria da produtividade e da qualidade dos alimentos de origem animal qualidade dos alimentos de origem animal destinados à população, e conseqüentemente, destinados à população, e conseqüentemente, proporcionar à nação, condições de se adequar do proporcionar à nação, condições de se adequar do ponto de vista sanitário, às regras do comércio ponto de vista sanitário, às regras do comércio internacional de alimentos, preconizadas pela internacional de alimentos, preconizadas pela Organização Mundial do Comércio (OMC) e órgãos Organização Mundial do Comércio (OMC) e órgãos auxiliares,tais como Fundo das Nações Unidas auxiliares,tais como Fundo das Nações Unidas para Alimentação e Agricultura, Organização para Alimentação e Agricultura, Organização Internacional de Epizootia e Organização Mundial Internacional de Epizootia e Organização Mundial da Saúde (FAO, OIE e WHO).da Saúde (FAO, OIE e WHO).

Metas:Metas: Verificação do uso correto e Verificação do uso correto e seguro dos medicamentos seguro dos medicamentos veterinários, de acordo com as veterinários, de acordo com as práticas veterinárias recomendadas práticas veterinárias recomendadas e das tecnologias utilizadas nos e das tecnologias utilizadas nos processos de produção e processos de produção e produtividade pecuária.produtividade pecuária.

O PNCR tem como função regulamentar O PNCR tem como função regulamentar básica, o controle e a vigilância de básica, o controle e a vigilância de resíduos em produtos de origem animal. resíduos em produtos de origem animal. Sua ações estão direcionadas para se Sua ações estão direcionadas para se conhecer e evitar a violação dos níveis conhecer e evitar a violação dos níveis de segurança ou dos LMRs de de segurança ou dos LMRs de substâncias autorizadas, bem como a substâncias autorizadas, bem como a ocorrência de quaisquer níveis de ocorrência de quaisquer níveis de resíduos de compostos químicos de uso resíduos de compostos químicos de uso proibido no país.proibido no país.

O programa deve incluir como O programa deve incluir como medida inicial, métodos de triagem, medida inicial, métodos de triagem, os quais não deverão exigir os quais não deverão exigir investimentos em instrumentos investimentos em instrumentos laboratoriais complexos, nem em laboratoriais complexos, nem em reagentes ou na capacitação de reagentes ou na capacitação de pessoal a elevados custos. pessoal a elevados custos.

- Os métodos de triagem ou seleção - Os métodos de triagem ou seleção podem ser definidos como métodos de podem ser definidos como métodos de análises qualitativos ou semiquantitativos, análises qualitativos ou semiquantitativos, que detectam a presença numa espécie ou que detectam a presença numa espécie ou matriz de interesse, de um remanescente matriz de interesse, de um remanescente resíduo de uma substância em resíduo de uma substância em concentração igual ou inferior ao LMR. concentração igual ou inferior ao LMR. Um resultado suspeito indica que pode ter Um resultado suspeito indica que pode ter sido superado o LMR, devendo a amostra sido superado o LMR, devendo a amostra em questão ser novamente analisada em questão ser novamente analisada através de métodos confirmatórios. através de métodos confirmatórios.

3.6. Métodos para a detecção de resíduos 3.6. Métodos para a detecção de resíduos de antibióticos no leitede antibióticos no leite

conceitualmente os níveis de tolerância se conceitualmente os níveis de tolerância se expressam através do termo LMR (Limite expressam através do termo LMR (Limite Máximo de Resíduo), que é a concentração Máximo de Resíduo), que é a concentração máxima de resíduo no alimento que é aceito máxima de resíduo no alimento que é aceito legalmente, e expresso em PPB ou ug/Kg. O legalmente, e expresso em PPB ou ug/Kg. O cálculo é baseado na IDA (Ingestão Diária cálculo é baseado na IDA (Ingestão Diária Aceitável), dose diária que, se ingerida Aceitável), dose diária que, se ingerida durante toda a vida do indivíduo, não gera durante toda a vida do indivíduo, não gera riscos à pessoa que ingere (CORASSIM,2002). riscos à pessoa que ingere (CORASSIM,2002).

Codex AlimentariusCodex Alimentarius : A principal : A principal referência mundial para esse referência mundial para esse assunto é o Codex Alimentarius assunto é o Codex Alimentarius (FAO/OMS), que fornece subsídios (FAO/OMS), que fornece subsídios técnicos e serve de referência para técnicos e serve de referência para vários países do mundo.vários países do mundo.

TabelaTabela

Histórico:Histórico: O primeiro teste descrito foi o método O primeiro teste descrito foi o método

em placa cilíndrica, na década de 40. em placa cilíndrica, na década de 40. Posteriormente, foi desenvolvido o Posteriormente, foi desenvolvido o método de disco de papel-feiltro. método de disco de papel-feiltro.

Na década de 50, o teste do disco Na década de 50, o teste do disco utilizando o utilizando o Bacillus sbtilisBacillus sbtilis foi foi utilizado para detectar resíduos de utilizado para detectar resíduos de antibióticos no leite. sulfonamidas. antibióticos no leite. sulfonamidas.

O método de ensaio em disco e em tubo O método de ensaio em disco e em tubo utilizando o utilizando o Bacillus stearothermophilus Bacillus stearothermophilus ocorreu durante a década de 70, sendo ocorreu durante a década de 70, sendo amplamente utilizado, além de boa amplamente utilizado, além de boa aceitação. No final da década de 70 e aceitação. No final da década de 70 e início dos anos 80, ocorreu o início dos anos 80, ocorreu o desenvolvimento das técnicas desenvolvimento das técnicas radioimunológicas e enzimáticas para a radioimunológicas e enzimáticas para a detecção da presença de batalactâmicos e detecção da presença de batalactâmicos e outros como tetraciclina, estreptomicina, outros como tetraciclina, estreptomicina, eritromicina, novobiocina, clorafenicol e eritromicina, novobiocina, clorafenicol e sulfonamidas. sulfonamidas.

Teste de Inibição microbiológica:Teste de Inibição microbiológica: Este se fundamenta no princípio de Este se fundamenta no princípio de

que todos os antimicrobianos inibem que todos os antimicrobianos inibem bactérias sensíveis.bactérias sensíveis.

Bactérias utilizadas:Bactérias utilizadas: Bacillus starothermophilus, Bacillus starothermophilus,

Streptococcus slivares ssp Streptococcus slivares ssp termophilus, Bacillus subtilis, Bacillus termophilus, Bacillus subtilis, Bacillus cereus e Micrococcus luteucereus e Micrococcus luteu

Análise:Análise: Em placas, utilizando-se um disco ou swab Em placas, utilizando-se um disco ou swab

estéril posto em contato com fluido ou estéril posto em contato com fluido ou tecido suspeito de conter resíduos.tecido suspeito de conter resíduos.

Avaliação através de indicadores Avaliação através de indicadores colorimétricoscolorimétricos

Testes: Testes: - BRT (Black reduction test) - BRT (Black reduction test) - Delvo Test- Delvo Test - Colpan test - Colpan test

Testes:Testes:

A microbiota da amostra é um fator A microbiota da amostra é um fator a ser levado em contaa ser levado em conta

Utilização de microrganismos-teste Utilização de microrganismos-teste mesófilos: pré-aquecimento da mesófilos: pré-aquecimento da amostraamostra

Utilização de microrganismos-teste Utilização de microrganismos-teste termófilos: incubação dos sistemas termófilos: incubação dos sistemas de teste em temperatura >50°Cde teste em temperatura >50°C

Sensibilidade das classes de Sensibilidade das classes de antibióticos aos testes antibióticos aos testes microbiológicos:microbiológicos:

- betalactâmicos: excelente limite de - betalactâmicos: excelente limite de detecção para penicilinadetecção para penicilina

-tetraciclina: razoável-tetraciclina: razoável -sulfas: execelente limite de detecção-sulfas: execelente limite de detecção - clorafenicol: ruim - clorafenicol: ruim

Resultados falso-positivos: Resultados falso-positivos:

Sensibilidade aos inibidores naturais Sensibilidade aos inibidores naturais do leitedo leite

CCS (contagem de células CCS (contagem de células somáticas)somáticas)

Produtos da inflamaçãoProdutos da inflamação

Métodos Bioquímicos:Métodos Bioquímicos: Entre as vantagens destas técnicas, Entre as vantagens destas técnicas,

destacam-se rapidez e simplicidade de destacam-se rapidez e simplicidade de execução, menor conhecimento técnico execução, menor conhecimento técnico exigido para suas operações, maior exigido para suas operações, maior especificidade para determinados especificidade para determinados antibióticos e possibilidade de antibióticos e possibilidade de detecção de outros agentes detecção de outros agentes antimicrobianos, além de antibióticos. antimicrobianos, além de antibióticos.

Princípio:Princípio: baseiam-se na competição por baseiam-se na competição por sítios de ligação em receptores de células sítios de ligação em receptores de células bacterianas que são específicos para bacterianas que são específicos para várias classes de antibióticos. várias classes de antibióticos.

Análise:Análise: Os receptores bacterianos são Os receptores bacterianos são adicionados à amostra de leite, junto com adicionados à amostra de leite, junto com um antimicrobiano da classe testada, um antimicrobiano da classe testada, sendo marcado radioativamente. sendo marcado radioativamente.

Testes mais utilizado:Testes mais utilizado: -Charm Test I-Charm Test I

Métodos físico-químicos:Métodos físico-químicos: Maior sensibilidade para detecção Maior sensibilidade para detecção

de resíduos de antimicrobianos no de resíduos de antimicrobianos no leite tais como a cromatografia leite tais como a cromatografia líquida de alta eficiência (CLAE) e a líquida de alta eficiência (CLAE) e a eletroforese.eletroforese.

Alguns métodos físicos-químicos Alguns métodos físicos-químicos proporcionam alto grau de especificidade, proporcionam alto grau de especificidade, porém não apresentam alta sensibilidade em porém não apresentam alta sensibilidade em todos os casos. Segundo Heeschen (1993) todos os casos. Segundo Heeschen (1993) apud apud Rocha (2003) são os procedimentos Rocha (2003) são os procedimentos como cromatrografia gasosa, cromatrografia como cromatrografia gasosa, cromatrografia líquida de alta “performace” com coluna de líquida de alta “performace” com coluna de fase reversa, cromatrografia em camada fina fase reversa, cromatrografia em camada fina com detecção química ou microbiológica e com detecção química ou microbiológica e um tipo altamente específico de um tipo altamente específico de espectometria de massa (CAD MIKES). espectometria de massa (CAD MIKES).

Entretanto, técnicas cromatográficas Entretanto, técnicas cromatográficas apresentam a desvantagem de apresentam a desvantagem de serem despendiosas, requerendo serem despendiosas, requerendo equipamentos sofisticados, por equipamentos sofisticados, por demandar pessoal capacitado e demandar pessoal capacitado e técnica aprimorada quando técnica aprimorada quando comparadas a outras técnicas comparadas a outras técnicas analíticas. analíticas.

Conclusão:Conclusão: