UNIVERSIDADE FEDERAL DO ESPRITO SANTO

CENTRO DE CINCIAS AGRRIAS

PROGRAMA DE PS-GRADUAO EM CINCIAS FLORESTAIS

LUCIANA FERREIRA DA SILVA

CAPACIDADE DE DETERIORAO DE CEPAS DE Eucalyptus spp. POR

FUNGOS XILFAGOS

JERNIMO MONTEIRO ES

DEZEMBRO 2011

LUCIANA FERREIRA DA SILVA

CAPACIDADE DE DETERIORAO DE CEPAS DE Eucalyptus spp. POR

FUNGOS XILFAGOS

Orientador: Prof. Dr. Waldir Cintra de Jesus Junior

Coorientador: Prof. Dr. Juarez Benigno Paes

JERNIMO MONTEIRO ES DEZEMBRO 2011

Dissertao apresentada ao Programa

de Ps-Graduao em Cincias

Florestais do Centro de Cincias

Agrrias da Universidade Federal do

Esprito Santo, como parte das

exigncias para obteno do Ttulo de

Mestre em Cincias Florestais, rea de

Concentrao Cincias Florestais.

1.

Luciana Ferreira da Silva

Aprovada em 15 de dezembro de 2011.

CAPACIDADE DE DETERIORAO DE CEPAS DE Eucalyptus spp. POR

FUNGOS XILOFAGOS

Dissertao apresentada ao Programa de Ps-Graduao em Cincias Florestais do Centra de Cincias Agrrias da Universidade Federal do Esprito Santo, como parte das exigncias para obteno do Ttulo de Mestre em Cincias Florestais na rea de Concentrao Cincias Florestais.

Prof. Dr. Edson Luiz Furtado

FCA-UNESP Membra

Externo

Prof. Dr. ose Tarcfsio da Silva Oliveira

CCA/UFES

Membra Interno

Prof. Dr. Waldir Cintra de Jesus Junior

CCA/UFES

Orientador

o Ramos Alves UFES

Externo

Dissertao 0041

Dados Internacionais de Catalogao-na-publicao (CIP)

(Biblioteca Setorial de Cincias Agrrias, Universidade Federal do Esprito Santo, ES, Brasil)

Silva, Luciana Ferreira da, 1983-

S586c Capacidade de deteriorao de cepas de Eucalyptus spp. por fungos

xilfagos / Luciana Ferreira da Silva. 2011.

77 f. : il.

Orientador: Waldir Cintra de Jesus Junior.

Coorientador: Juarez Benigno Paes.

Dissertao (Mestrado em Cincias Florestais) Universidade Federal

do Esprito Santo, Centro de Cincias Agrrias.

1. Eucalipto. 2. Basidiomicetos. 3. Fungos apodrecedores da madeira. 4.

Madeira - Deteriorao - Anlise. 5. Teste de apodrecimento da Madeira. I.

Jesus Junior, Waldir Cintra de. II. Paes, Juarez Benigno. III. Universidade

Federal do Esprito Santo. Centro de Cincias Agrrias. IV. Ttulo.

CDU: 630

http://autoridades.bn.br/scripts/odwp032k.dll?t=bs&pr=assuntos_pr&db=assuntos&use=sh&disp=list&sort=off&ss=NEW&arg=basidiomicetoshttp://autoridades.bn.br/scripts/odwp032k.dll?t=bs&pr=assuntos_pr&db=assuntos&use=sh&disp=list&sort=off&ss=NEW&arg=fungos|apodrecedores|da|madeirahttp://autoridades.bn.br/scripts/odwp032k.dll?t=bs&pr=assuntos_pr&db=assuntos&use=sh&disp=list&sort=off&ss=NEW&arg=madeira|-|deterioracao

iv

Aos meus pais, Carlos Roberto e Maria

Jos; ao meu esposo Jos Valber pelo

esforo, dedicao e compreenso, em

todos os momentos desta e de outras

caminhadas.

v

AGRADECIMENTOS

Meu maior agradecimento dirigido primeiramente a Deus, por permitir

que tudo acontecesse.

Universidade Federal do Esprito Santo (UFES), Centro de Cincias

Agrrias (CCA), em especial ao Programa de Ps-Graduao em Cincias

Florestais (PPGCF), pela oportunidade concedida.

A equipe do Laboratrio de Cincia da Madeira (LCM), localizado no

Departamento de Engenharia Florestal (DEF), pertencente a Universidade

Federal do Esprito Santo (UFES), localizado em Jernimo Monteiro Esprito

Santo.

Fibria Celulose S.A. pelo apoio financeiro concedido.

Minha seleo, no mbito acadmico, deve tambm comear do incio,

sendo assim, agradeo ao professor Dr. Waldir Cintra de Jesus Junior a

considerao de ter aceito a orientao de minha Dissertao, na esperana

de retribuir, com a seriedade de meu trabalho, a confiana em mim depositada.

Ao professor Dr. Juarez Benigno Paes, pela co-orientao deste

trabalho de dissertao meus agradecimentos pelos ensinamentos, cujos

temas foram de fundamental importncia para elaborao desse trabalho, por

sua permanente presena em todas as fases do projeto, pela sua

disponibilidade nos trabalhos de campo, pelo seu incentivo, apoio na

elaborao deste trabalho.

Ao professor Dr. Jos Tarcisio da Silva Oliveira, pelo incentivo na

realizao deste trabalho e pelas discusses valiosas, conselhos e

ensinamentos.

Aos professores participantes da banca examinadora, pelas sugestes

e aconselhamentos.

Aos demais professores da Ps-graduao, por suas importantes

contribuies para o aprimoramento deste trabalho.

Ao Bilogo Aelion Alves, ao Engenheiro Agrnomo Rodrigo Jos

Gonalves Monteiro e ao Professor Dr. Clvis Eduardo Nunes Hegedus, por

nos permitirem a coleta de materiais em suas fazendas para execuo

pesquisa.

vi

Ao Elecy Palcio Constantino, pela ajuda na confeco dos corpos de

prova.

Ao Jos Geraldo Lima de Oliveira, Gilson Barbosa Sao Teago, Jordo

Cabral Moulin e demais colegas de laboratrio, que direta ou indiretamente,

colaboraram para que este trabalho atingisse os objetivos propostos.

A Regina Gonalves dos Santos Oliveira e ao Professor Dr. Celson

Rodrigues pela grande ajuda durante a identificao dos fungos.

A meus pais, por terem sido o contnuo apoio em todos estes anos,

ensinando-me, principalmente, a importncia da construo e coerncia de

meus prprios valores.

Ao meu esposo, Jos Valber, companheiro nesta trajetria, soube

compreender, como ningum, a fase pela qual eu estava passando. Durante a

realizao deste trabalho, sempre tentou entender minhas dificuldades e

minhas ausncias, procurando se aproximar de mim por meio da prpria

Dissertao, ajudando durante toda a fase de coleta e montagem do

experimento.

A todos os amigos e colegas que de uma forma direta ou indireta,

contriburam, ou auxiliaram na elaborao do presente estudo, pela pacincia,

ateno e fora que prestaram em momentos menos fceis. Para no correr o

risco de no enumerar algum no vou identificar ningum, aqueles a quem este

agradecimento se dirige sab-lo-o, desde j os meus agradecimentos.

No poderia deixar de agradecer minha famlia por todo o carinho

que sempre me prestaram ao longo de minha vida acadmica, bem como,

elaborao da presente Dissertao a qual sem o seu apoio, teria sido

impossvel

Agradeo-lhes, carinhosamente, por tudo isto.

vii

BIOGRAFIA

Luciana Ferreira da Silva, filha de Edival Ferreira da Silva e Maria

Jos Ferreira da Silva nasceu em 14 de outubro de 1983, no municpio de

Alegre, Estado do Esprito Santo.

Concluiu o Ensino Mdio (2 grau) e o Curso de Tcnico Agrcola, na

Escola Agrotecnica Federal de Alegre (EAFA), atualmente IFES - Alegre, em

2001.

Obteve o grau de Licenciatura Plena em Cincias Biolgicas pela

Faculdade de Filosofia, Cincias e Letras de Alegre (FAFIA) - Alegre - ES, em

2005.

Em 2009 recebeu o Ttulo de Engenheira Agrnoma da Universidade

Federal do Esprito Santo (UFES).

No ano de 2011 concluiu a Ps-Graduao em Educao, Governana

e Direito Ambiental: A Gesto dos Espaos Antroponizados pela Faculdade de

Filosofia, Cincias e Letras de Alegre (FAFIA).

Em 2009 ingressou no Programa de Ps-Graduao em Cincias

Florestais em nvel de Mestrado em Cincias Florestais da Universidade

Federal do Esprito Santo (UFES) - Jernimo Monteiro- ES, submetendo-se

defesa de Dissertao em 15 dezembro de 2011.

viii

SUMRIO

RESUMO.............................................................................................

Pgina x

ABSTRACT......................................................................................... xi 1. INTRODUO ............................................................................... 1 1.1. OBJETIVOS ............................................................................ 1.1.1. Objetivo geral ............................................................... 1.1.2. Objetivos especficos ..................................................

3 3 3

2. REVISO DE LITERATURA ......................................................... 4 2.1. MEIOS DE CULTURA ............................................................. 4 2.2. ISOLAMENTO FNGICO DIRETO E INDIRETO ................... 5 2.3. ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE TRONCOS ........ 6

2.4. FATORES ASSOCIADOS AO CULTIVO DE FITOPATGENOS..................................................................

6

2.5. PRODUO DE ESPOROS EM MEIO DE CULTURA .......... 7 2.6. ARMAZENAMENTO DE FUNGOS FITOPATOGNICOS ..... 7 2.7. REPICAGENS PERIDICAS .................................................. 8 2.8. CONSTITUIO QUMICA DA MADEIRA ............................. 9 2.8.1. Celulose ........................................................................ 9 2.8.2. Hemiceluloses .............................................................. 10 2.8.3. Lignina ........................................................................... 11 2.8.4. Extrativos ...................................................................... 12 2.9. DURABILIDADE NATURAL DA MADEIRA ........................... 13 2.10. O GNERO Eucalyptus ........................................................ 14 2.11. FUNGOS XILFAGOS ......................................................... 16 3. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................... 18 CAPTULO I: COLETA, ISOLAMENTO, SELEO E

IDENTIFICAO DE FUNGOS XILFAGOS DE CEPAS DE EUCALIPTO DETERIORADAS .............

23 RESUMO ........................................................................................... 24 ABSTRACT......................................................................................... 25 1. INTRODUO ............................................................................... 26 2. MATERIAL E MTODOS .............................................................. 30

2.1. LOCALIZAO E DESCRIO DA REA E DO MATERIAL COLETADO..........................................................

30

2.2. ARMAZENAMENTO E PREPARO DAS AMOSTRAS .......... 32 2.3. ISOLAMENTO INDIRETO E DIRETO DOS

FUNGOS PRESENTES NAS CEPAS ...................................

33 2.4. ARMAZENAMENTO DAS CULTURAS E

IDENTIFICAO DOS FUNGOS ......................................

34 3. RESULTADOS E DISCUSSO .................................................... 35 4. CONCLUSES ............................................................................ 39 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS ............................................. 40 CAPTULO II: CAPACIDADE DE DETERIORAO DE

Eucalyptus spp. POR FUNGOS XILFAGOS .....

42 RESUMO ............................................................................................ 43

ix

ABSTRACT......................................................................................... 44 1. INTRODUO ............................................................................... 45 2. MATERIAL E MTODOS ......................................................... 48 2.1. DETERMINAO DA RESISTNCIA NATURAL DA

MADEIRA ............................................................................ 2.1.1. Espcies de madeira utilizadas .................................

48 48

2.1.2. Preparao dos corpos de prova ............................... 48 2.1.3. Obteno e manuteno dos fungos utilizados ....... 49

2.1.4. Preparo do substrato .................................................. 49 2.1.5. Repicagem dos fungos ............................................... 50 2.1.6. Inoculao e incubao dos fungos ......................... 50 2.1.7. Climatizao e esterilizao dos corpos de prova .. 50

2.1.8. Inoculao dos corpos de prova e perodo de ataque dos fungos ...................................................

51

2.1.9. Retirada dos corpos de prova .................................... 51 2.1.10. Avaliao da perda de massa .................................. 52 2.1.11. Determinao do teor de extrativos ........................ 52 2.1.12. Anlises estatsticas ................................................. 53 3. RESULTADOS E DISCUSSO ..................................................... 54 4. CONCLUSES .............................................................................. 63 5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS............................................... 64

x

RESUMO

SILVA, Luciana Ferreira da. Capacidade de deteriorao de cepas de Eucalyptus spp. por fungos xilfagos. 2011. Dissertao (Mestrado em Cincias Florestais) - Universidade Federal do Esprito Santo, Alegre-ES Orientador: Prof. Dr. Waldir Cintra de Jesus Junior. Coorientador: Prof. Dr. Juarez Benigno Paes. Na reforma do povoamento florestal, aps o corte das rvores, as cepas remanescentes de Eucalyptus spp. devem ser retiradas. A degradao natural de cepas de eucalipto aps o corte raso lenta. A destoca mecnica eleva o custo de produo, envolve trfego de mquinas sobre o solo favorecendo a sua compactao e dificultando o crescimento e a distribuio das razes. Uma alternativa para retirada destas cepas remanescentes o emprego de fungos decompositores. Objetivou-se com a pesquisa coletar, isolar, selecionar e identificar fungos com potencial de deteriorar madeira de eucalipto, a partir de fragmentos de cepas apodrecidas, para serem utilizados em um ensaio de apodrecimento acelerado e realizar a anlise qumica de madeiras sadias e deterioradas pelos fungos isolados das cepas, que apresentaram maior capacidade de deteriorao, para verificar, quais os componentes da madeira sofreram maiores alteraes em funo da deteriorao causa pelos fungos. Amostras de cepas de eucalipto, em decomposio, foram coletadas em plantios comerciais, em trs municpios, com microclimas e altitudes diferentes e acondicionadas em sacos de papel poroso e transportadas para o Laboratrio de Cincia da Madeira (LCM), no Departamento de Engenharia Florestal (DEF), pertencente ao Centro de Cincias Agrrias (CCA) da Universidade Federal do Esprito Santo (UFES) no municpio de Jernimo Monteiro, ES. No LCM foram retiradas amostras de madeira para realizar o isolamento dos fungos e posteriormente a obteno de culturas puras, em meio de cultura Batata-Dextrose-gar (BDA). Nove culturas puras foram isoladas e identificadas, sendo, trs fungos pertencentes Classe dos Basidiomycetes (Basidiomicetos 1, 2 e 3), quatro do gnero Trichoderma, um Lasiodiplodia e um Penicillium. As culturas foram selecionadas, repicadas em placa de Petri e tubos de ensaio contendo BDA e armazenadas em sala climatizada a 25 2 C e utilizadas no ensaio de apodrecimento acelerado. Aps 12 semanas de ensaio, pode-se concluir que os fungos isolados mais eficientes na deteriorao da madeira foram os pertencentes Classe dos Basidiomycetes (Basidiomiceto 1 e Basidiomiceto 2). A anlise qumica da madeira pelos Basidiomicetos 1 e 2, revelou que houve um incremento no teor de extrativos totais na madeira, para ambos Basidiomicetos testados. Para a holocelulose (celulose + hemiceluloses), ocorreram pequenas diferenas entre as madeiras sadias e deterioradas (variaes mdias em torno de 1%). O Basidiomiceto 2 causou maior degradao da lignina quando comparado ao Basidiomiceto 1. Palavras chave: Cepas apodrecidas. Culturas puras. Fungos xilfagos. Resistncia natural.

xi

ABSTRACT

SILVA, Luciana Ferreira da. Capacity of deterioration of stumps of Eucalyptus spp. by xylophagous fungi. 2011. Dissertation (Mester's degree on Florest Science) - Universidade Federal do Esprito Santo, Alegre-ES. Adviser: Prof. Dr. Waldir Cintra de Jesus Junior. Co-adviser: Prof. Dr. Juarez Benigno Paes.

On the reform of the forest stand, after the cutting of trees, the remaining strains of Eucalyptus spp. must be removed. The natural degradation of stumps of eucalypts after clear cutting is slow. The mechanical destock raises the cost of production, involves machinery traffic on the ground favoring soil compaction and hindering the growth and distribution of roots. An alternative to the withdrawal of the remaining stumps is the employment of decomposing fungi. This research aimed to collect, isolate, select and identify fungi with potential for decayed eucalypts wood, from fragments of stumps to be used in an essay of accelerated decay and perform chemical analysis of sound wood and deteriorated by fungi isolated from stumps, which have greater ability to deterioration, to verify which components of wood suffered major changes as a function of decay by fungi. Samples of stumps of eucalypts, decomposed, were collected from commercial plantations, in three municipalities, with different altitudes and microclimates and wrapped in porous paper bags and transported to the Laboratrio de Cincia da Madeira (LCM), in the Departamento de Engenharia Florestal (DEF), belonging to the Centro de Cincias Agrrias (CCA) of Universidade Federal do Esprito Santo (UFES) in the municipality of Jernimo Monteiro, ES, Brazil. In LCM wood samples were taken to perform the isolation of fungi and subsequently obtaining pure cultures in culture medium Potato-Dextrose-Agar (PDA). A total of nine pure cultures were isolated and identified, being, three belonging to the Class Basidiomycetes fungi (Basidiomycetes 1, 2 and 3), four of the genus Trichoderma, one Lasiodiplodia and one Penicillium. The cultures were selected, subcultured in Petri dish and test tubes containing PDA and stored in air-conditioned room at 25 2 C and used in the trial of accelerated decay. After 12 weeks of test, conclude that fungi isolated more efficient in the deterioration of wood were those belonging to the Class Basidiomycetes (1 and 2). Chemical analysis of wood decayed by Basidiomycetes 1 and 2, showed that there was an increase in total extractives content in wood, for both the Basidiomycetes tested. For the holocelulose (cellulose more hemicelluloses), there were minor differences between the healthy woods and decayed (variations averaging around 1%). The Basidiomycete 2 caused increased degradation of lignin when compared to Basidiomycete 1. Keywords: Decayed stumps. Pure Cultures. Xylophagous fungi. Natural resistance

1

1. INTRODUO

Para a reforma do povoamento florestal, aps o corte das rvores os

tocos remanescentes de Eucalyptus spp. devem ser retirados. A destoca

mecnica eleva o custo de produo, alm de envolver trfego intenso de

mquinas sobre o solo favorecendo a sua compactao e dificultando o

crescimento e a distribuio das razes.

A degradao natural de cepas remanescentes de eucalipto aps o

corte raso lenta, permanecendo tal material praticamente inalterado por

vrios anos aps a colheita florestal. Assim, o emprego de fungos pr-

selecionados com potencial de deteriorar cepas de eucalipto pode constituir

uma alternativa, visando assim reduzir ou eliminar a influncia negativa das

cepas nas reas de reforma e contribuir para a maior sustentabilidade das

florestas plantadas.

A resistncia ou durabilidade natural da madeira (cepas) a sua

capacidade de resistir ao ataque de organismos xilfagos (PAES, 2002).

Mesmo uma espcie botnica que apresenta reconhecida durabilidade natural,

no capaz de resistir, indefinidamente, a ao das intempries ou s

variaes das condies ambientais (SILVA, 2005).

A madeira, ao ser exposta a diversas condies ambientais, est

sujeita s influncias de variao de temperatura e umidade, sofre ao de

substncias qumicas do meio (atmosfera, solo e gua) que reagem com seus

componentes deteriorando-os, alm de sofrer ao de organismos xilfagos,

principalmente fungos e insetos (SGAI, 2000).

A durabilidade natural da madeira determina sua utilizao,

principalmente em regies de clima tropical, onde as condies de temperatura

e umidade proporcionam timas condies para o desenvolvimento de fungos,

que podem utilizar a madeira como fonte de alimento. Estes organismos tm

uma atividade to intensa que o ataque pode ocorrer at em uma rvore viva

(ROCHA, 2001). Segundo o autor citado anteriormente, a ao de agentes

xilfagos na madeira denominada de deteriorao biolgica.

Madeiras que apresentam elevada durabilidade natural a esses

organismos podem ser destacadas por um alto grau de nobreza, conferindo-

2

lhes amplo espectro de utilizao e, consequentemente, tornando-as mais

valorizadas no mercado. Sabe-se que o grau de resistncia aos agentes

biolgicos muito varivel entre as madeiras, sendo um grande nmero destas

caracterizadas por apresentarem elevada resistncia ao ataque de insetos e de

fungos apodrecedores (OLIVEIRA et al., 2005).

Segundo Oliveira et al. (2005), o processo de apodrecimento causado

pela atuao de enzimas produzidas pelos fungos pode ser relativamente

rpido, demonstrando, assim, a eficincia dos fungos xilfagos em degradar

substratos lignocelulsicos.

Ao longo do desenvolvimento da rvore se acumulam compostos ou

metablicos secundrios, apresentando infinitas composies qumicas,

podendo ser terpenos, compostos fenlicos e compostos nitrogenados, que

fornecem proteo natural madeira, por causa da sua toxidez aos agentes

xilfagos (MADY, 2010). Segundo o autor citado, algumas substncias

inorgnicas que preenchem o interior das clulas como cristais e slica,

dificultam ainda mais o ataque de insetos e de brocas, e at mesmo obstrues

nos elementos de vaso, conhecidas como tilos, constituindo uma barreira

natural proliferao de fungos.

Segundo Santos (1992), a madeira sob ataque de fungos apresenta

alteraes na composio qumica, reduo da resistncia mecnica,

diminuio de massa, modificao da cor natural, aumento da permeabilidade,

reduo da capacidade acstica, aumento da inflamabilidade, diminuio do

poder calorfico e maior propenso ao ataque de insetos, comprometendo,

dessa forma, a sua qualidade e inviabilizando a sua utilizao para fins

tecnolgicos.

Lelles e Rezende (1986) citaram que dentro do gnero Eucalyptus

existem espcies produtoras de madeiras cultivadas no Brasil que no so

resistentes ao ataque de organismos xilfagos. Para eles, inclusive a madeira

de cerne da maioria das espcies, no apresenta resistncia natural

satisfatria. Os autores relataram tambm que h poucos estudos sobre a

resistncia natural das diversas espcies de Eucalyptus cultivadas no Brasil.

Segundo Onofre et al. (2001), o tempo estimado para a degradao

biolgica natural de tocos de Eucalyptus spp. no campo de aproximadamente

3

25 anos. Considerando que as reas de plantio de eucalipto so

intensivamente cultivadas e este plantio renovado a cada cinco ou sete anos,

com 1.800 a 2.500 plantas/ha, com o passar do tempo, estas reas iro se

tornar imprprias para o plantio, uma vez que estaro totalmente ocupadas, em

sua maior parte, por cepas e razes em diferentes estdios de decomposio

(ANDRADE, 2003).

Desta forma, a deteriorao de cepas remanescentes, aps a colheita

florestal, est condicionada s caractersticas edafoclimticas, sucesso

fngica ecolgica de decomposio, espcie florestal e a idade das cepas

(proporo de cerne e alburno).

1.1. OBJETIVOS

1.1.1. Objetivo geral

Realizar a seleo, o isolamento, a identificao e avaliao da

capacidade de deteriorao dos fungos isolados em cepas de Eucalyptus spp.

1.1.2. Objetivos especficos

Realizar o isolamento indireto de fungos a partir de fragmentos das

cepas de eucaliptos deterioradas coletadas no campo;

Obter culturas puras a partir da realizao do isolamento indireto e

sucessivas repicagens;

Identificar os fungos xilfagos isolados e armazenados;

Classificar os fungos isolados e identificados de acordo com os grupos

os quais pertencem (emboladodores, manchadores e apodrecedores);

Utilizar as culturas puras obtidas para a realizao de ensaio de

apodrecimento acelerado em laboratrio; e

Realizar a anlise qumica de madeiras sadias e deterioradas pelos

fungos isolados das cepas, que apresentaram maior capacidade de

deteriorao, para verificar, quais os componentes da madeira sofreram

maiores alteraes em funo da deteriorao.

4

2. REVISO DE LITERATURA

2.1. MEIOS DE CULTURA

Meios de cultura consistem da associao qualitativa e quantitativa de

substncias que fornecem os nutrientes necessrios ao desenvolvimento

(cultivo) de microrganismos fora do seu meio natural. Tendo em vista a ampla

diversidade metablica dos microrganismos, existem vrios tipos de meios de

cultura para satisfazerem as variadas exigncias nutricionais. Os nutrientes so

substncias necessrias sntese de constituintes celulares para manuteno

da vida e so fornecidos de forma a atender s exigncias da espcie a ser

cultivada, promovendo o crescimento e, ou, esporulao satisfatria do

organismo. Alm dos nutrientes preciso fornecer condies ambientais

favorveis ao desenvolvimento dos microrganismos, tais como pH, presso

osmtica, umidade, temperatura e atmosfera (aerbia, microaerbia ou

anaerbia).

A composio do meio de cultura vai depender do microrganismo que se

deseja cultivar e dos objetivos do estudo. Segundo Tuite (1969) quanto ao

estado fsico, os meios podem ser lquidos (caldo ou extratos) ou slidos,

quando se adiciona gar (1,5-2%) para solidificar, estes so normalmente

usados em placas de Petri e em tubos de ensaio. Quanto composio, os

meios podem ser sintticos, semi-sintticos ou naturais. Os meios de cultura

naturais, que so base de extratos e decoces de material natural de

composio desconhecida, como extrato de levedura, extrato de malte, extrato

de carne, batata, cenoura, aveia, arroz, milho e outros. Por estes meios de

cultura serem de baixo custo, so amplamente utilizados em trabalhos de rotina

(isolamento e repicagem). Contudo, alguns fungos no esporulam e nem

mesmo crescem nesses meios, exigindo, assim, aqueles mais complexos, com

adio de vitaminas e outros reguladores de crescimento.

5

2.2. ISOLAMENTO FNGICO DIRETO E INDIRETO

Segundo Alfenas (2005), o isolamento de fungos fitopatognicos

consiste na sua obteno em cultura pura a partir de tecidos doentes do

hospedeiro, solo ou de qualquer outro substrato. A obteno do patgeno em

cultura pura essencial em estudos de morfologia, taxonomia, reproduo e

fisiologia, bem como em testes de patogenicidade, resistncia gentica de

plantas e sensibilidade a fungicidas.

A obteno de um organismo em cultura pura no significa que ele seja

o agente causal da doena. Para provar que um dado organismo o agente

capaz de causar uma doena, essencial seguir rigorosamente as seguintes

regras do Postulado de Koch: associao constante do organismo com a

doena; isolamento do organismo em cultura pura; inoculao da cultura

isolada em plantas sadias, reproduo dos sintomas e sinais tpicos da doena

e por fim, reisolamento do mesmo organismo inoculado.

Diferentes tcnicas de isolamento so usadas conforme a natureza do

rgo doente, o substrato e o estdio de desenvolvimento do patgeno

(vegetativo ou reprodutivo), bem como a critrio do operador. Todavia, os

mtodos bsicos de isolamento so o direto e o indireto.

O isolamento direto consiste na transferncia, com o auxlio de um

estilete, de estruturas do patgeno (esporos, hifas, rizomorfos, ou esclerdios)

diretamente do rgo infectado ou de outro substrato para o meio de cultura. O

isolamento direto tem diversas vantagens, pois, por meio, deste pode-se obter

o organismo puro, isento de contaminaes de microrganismos saprfitas

associados ao tecido infectado, sendo possvel saber exatamente qual

organismo est sendo transferido para o meio e podem-se estabelecer

comparaes entre as estruturas do organismo formadas na superfcie do

hospedeiro e em cultura.

A tcnica de isolamento indireto consiste na transferncia, para o meio

de cultura, de pores infectadas de tecido do hospedeiro ou amostras de solo

e sementes infestadas. Os mtodos de isolamento indireto variam com o tipo

de rgo ou tecido infectado (rgos lenhosos ou carnosos, no-lenhosos ou

no-carnosos) ou substrato de onde o organismo recuperado.

6

2.3. ISOLAMENTO DE FUNGOS A PARTIR DE TRONCOS

Nos tecidos lenhosos ou carnosos o patgeno atinge as camadas de

clulas mais profundas, a incidncia de contaminantes superficiais deve ser

evitada pela remoo dos tecidos expostos e transferncia de apenas

fragmentos tissulares mais internos, retirados das margens da leso, para o

meio de cultura (ALFENAS, 2005).

A exposio dos tecidos dos quais o patgeno isolado feita com o

auxlio de um escalpelo ou lmina de barbear previamente flambados, tendo-se

o cuidado de no tocar com a ferramenta cortante na regio do tecido recm-

exposto.

Pequenos fragmentos do tecido recm-descoberto so cortados nas

margens da leso e assepticamente transplantados em meio de cultura, com o

uso de uma pina ou estilete.

2.4. FATORES ASSOCIADOS AO CULTIVO DE FITOPATGENOS

A maioria dos fungos se desenvolve satisfatoriamente na faixa de 20-

30 C. A temperatura tima para crescimento vegetativo pode diferir da tima

para esporulao. Alm disso, alguns fungos desenvolvem melhor quando h

flutuaes de temperatura, como ocorre em condies naturais. O

conhecimento das exigncias do microrganismo quanto temperatura tima de

crescimento fundamental para otimizao de seu cultivo in vitro. As

temperaturas mnimas e mximas so aquelas em que abaixo e acima das

quais no h crescimento, respectivamente (TUITE, 1969).

A esporulao de fungos geralmente estimulada pela luz, no entanto

seus efeitos podem variar com a espcie, com o meio de cultura, com a

temperatura e com o perodo de incubao. Normalmente, a exposio luz

continua ou ao fotoperodo de 12h e a utilizao de lmpadas do tipo

fluorescente que emitem luz branca (luz do dia) ou luz negra de comprimento

de onda prxima do ultravioleta (UV) num espectro de 320-420 nm, estimulam

a esporulao. Assim, o fornecimento de luz deve ser feito com dois ou trs

7

dias de incubao aps inicio do crescimento do fungo, pois colnias velhas

no respondem ao estimulo de luz (DHINGRA e SINCLAIR, 1995).

O pH timo para crescimento vegetativo pode ser distinto daquele para

induo de esporulao. Enquanto fungos crescem numa faixa ampla de

valores, bactrias geralmente no toleram meios cidos. Meios contendo gar

no solidificam em pH abaixo de 4,0. Desde que a autoclavagem pode alterar o

pH do meio, seu ajuste, antes ou depois da mesma, depende do objetivo do

estudo (DHINGRA e SINCLAIR, 1995).

Dixido de carbono e oxignio so os principais gases que afetam o

crescimento de microrganismos. O gs carbnico utilizado em todas as

clulas em determinadas reaes qumicas, no entanto, seu excesso no meio

de cultura, como tambm o de amnia e de outras substancias volteis, pode

inibir o crescimento e a esporulao de alguns fungos (ALFENAS, 2005).

2.5. PRODUO DE ESPOROS EM MEIO DE CULTURA

Para a produo de esporos em meio de cultura devem-se utilizar

meios mais pobres em nutrientes, mas que sustente seu crescimento. Os

meios pobres em carbono (carboidrato complexo ou menor quantidade de

acar) e, ou nitrognio, como os meios de cultura naturais, provenientes de

extratos (sucos), decoco (ch) ou tecidos, preferencialmente obtidos do

hospedeiro do patgeno so mais indicados (TUITE, 1969).

Para fungos biotrficos, como as ferrugens e odios, os esporos so

produzidos no prprio hospedeiro inoculado e mantido sob condies de

ambiente favorveis esporulao.

2.6. ARMAZENAMENTO DE FUNGOS FITOPATOGNICOS

Normalmente culturas fngicas so armazenadas em curto prazo,

rotineiramente, em tubos com meio inclinado (BDA), em geladeira (10oC). Os

tubos ocupam menos espao e tm superfcie exposta bem menor que a de

uma placa, ficando menos sujeito s contaminaes. Todavia, necessrio

efetuar repicagens peridicas para garantir a viabilidade das culturas. O

8

perodo de repicagem varia entre espcies, mas em geral as culturas devem

ser repicadas a cada seis meses.

Existem outros mtodos mais eficientes de armazenamento de

microrganismos, como nitrognio lquido, liofilizao, gua destilada

esterilizada (mtodo de Castellani), gros, solo e congelamento, que garantem

a viabilidade e preservao de caractersticas de interesse das culturas por

mais tempo (TUITE, 1969; SINGLETON et al., 1992; DHINGRA e SINGLAIR,

1995; FIGUEIREDO, 2001).

Aps o isolamento do fungo de interesse em cultura pura, deve-se

proceder o armazenamento por longo prazo, para que no haja perda de

culturas. Para efeito de padronizao de metodologia, considera-se 30 dias

como o tempo mnimo de armazenamento de curto prazo, embora no caso de

bactrias haja isolados que no suportam mais que sete dias num tubo de meio

inclinado em geladeira (ALFENAS, 2005).

2.7. REPICAGENS PERIDICAS

provavelmente o mtodo de rotina mais usado para manuteno de

culturas, em curto prazo. Consiste na repicagem peridica do microrganismo

em estudo para novos tubos de ensaio contendo meio de cultura. Os tubos so

mantidos na temperatura que favorea o crescimento do patgeno at que se

colonize todo o meio de cultura e, aps a colonizao, devem ser mantidos

baixa temperatura, em refrigerador (10 C), para reduzir a atividade metablica

do organismo. Para evitar contaminao das culturas dentro da geladeira,

recomenda-se usar tampes de algodo hidrfobo (ALFENAS, 2005).

O tempo de repicagem das culturas varia com o microrganismo, o meio

de cultura, a umidade e a temperatura de armazenamento. Quando em meio

inclinado e armazenadas em geladeira, so usualmente repicadas a cada seis

meses. Alm de laboriosas, as repicagens peridicas podem induzir o

patgeno ao hbito saproftico, alterao de sua morfologia, diminuio e

perda de sua capacidade de esporular e diminuio de sua agressividade e

at mesmo sua virulncia. Para minimizar esses problemas, na repicagem

devem-se transferir apenas as pores jovens e esporulantes da colnia

9

(TUITE, 1969). Para trabalhos com fungos fitopatognicos realizados num

prazo de um semestre, este mtodo pode ser utilizado com sucesso.

2.8. CONSTITUIO QUMICA DA MADEIRA

A constituio qumica dos materiais lignocelulsicos abrangente e

diversificada, com relao s substncias que neles se traduzem em um

sistema multimolecular de alta complexidade estrutural, de ligaes cruzadas e

de grande importncia na preservao e nas propriedades dos materiais

lenhosos (KLOCK et al., 2005).

O conhecimento da composio qumica da madeira importante para

utilizaes tcnicas e fins cientficos, tais como polpao e branqueamento,

biopolpao, durabilidade natural, desenvolvimento de preservantes e

retardantes de fogo e produo de carvo so alguns exemplos em que o

conhecimento da composio qumica da madeira necessrio. As

propriedades fsicas e mecnicas tambm esto relacionadas s propriedades

qumicas e morfolgicas da madeira (TRUGILHO et al., 1997).

A composio qumica da madeira caracterizada pela presena de

componentes fundamentais (primrios) e complementares (secundrios). Os

componentes primrios caracterizam a madeira, pois so partes integrantes

das paredes das fibras e da lamela mdia. So considerados componentes

primrios, a celulose, as hemiceluloses e a lignina (OLIVEIRA, 1997; SILVA,

2002). O conjunto da celulose e das hemiceluloses compe o contedo total de

polissacardeos contidos na madeira sendo denominado holocelulose (ZOBEL

e VAN BUIJTENEN, 1989). Os extrativos atuam como componentes

secundrios e tambm devem ser quantificados (OLIVEIRA, 1997; SILVA,

2002).

2.8.1. Celulose

A celulose o composto orgnico mais comum na natureza. Ela

constitui entre 40 e 50% de quase todas as plantas, e localiza-se

principalmente na parede secundria das clulas vegetais. Quimicamente, a

10

celulose um polissacardeo que se apresenta como um polmero de cadeia

linear com comprimento suficiente para ser insolvel em solventes orgnicos,

gua, cidos e lcalis diludos, temperatura ambiente, consistindo nica e

exclusivamente de unidades de -D-anidroglucopiranose, que se ligam entre si

pelos carbonos 1-4, possuindo uma estrutura organizada e parcialmente

cristalina (KLOCK et al., 2005).

Ainda segundo tais autores, molculas de celulose formam feixes e tm

forte tendncia para formar pontes de hidrognio inter e intramoleculares.

Feixes de molculas de celulose se agregam na forma de microfibrilas na qual

regies altamente ordenadas (cristalinas) se alternam com regies menos

ordenadas (amorfas). As microfibrilas constroem fibrilas e estas constroem as

fibras celulsicas. Como consequncia dessa estrutura fibrosa a celulose

possui alta resistncia trao e insolvel na maioria dos solventes.

A celulose possui frmula geral (C6H10O5)n e sua unidade de repetio

a celobiose, que contm dois acares. As madeiras de conferas so

compostas de, aproximadamente, 45-50% de celulose e as folhosas de cerca

de 40-50% (BIERMANN, 1996).

2.8.2. Hemiceluloses

As hemiceluloses, tambm chamadas de polioses, encontram-se em

estreita associao com a celulose na parede celular, possuem cadeias mais

curtas; isto significa um grau de polimerizao menor quando comparado

celulose, podendo existir grupos laterais e ramificaes em alguns casos

(ANDRADE, 2006). Segundo Pastore (2004), quimicamente, as hemiceluloses

so a frao polimrica de polissacardeos, constituda de unidades de vrios

acares sintetizados na madeira e em outros tecidos das plantas.

Enquanto a celulose, como substncia qumica, contm

exclusivamente a D-glucose como unidade fundamental, as hemiceluloses so

polmeros, em cuja composio podem aparecer, condensadas em propores

variadas, as seguintes unidades de acar: xilose, manose, glucose, arabinose,

galactose, cido galactournico, cido glucournico e cido metilglucournico

(KLOCK et al., 2005).

11

Deve-se sempre lembrar que o termo hemicelulose no designa um

composto qumico definido, mas sim uma classe de componentes polimricos

presentes em vegetais fibrosos, possuindo cada componente, propriedades

peculiares. Como no caso da celulose e da lignina, o teor e a proporo dos

diferentes componentes encontrados nas hemiceluloses de madeira variam

grandemente com a espcie e, provavelmente, tambm de rvore para rvore.

Por no possuir regies cristalinas, as polioses so atingidas mais

facilmente por produtos qumicos. Entretanto, em funo da perda de alguns

substituintes da cadeia, as hemiceluloses podem sofrer cristalizao induzida

pela formao de pontes de hidrognio, a partir de hidroxilas de cadeias

adjacentes, dificultando, desta forma, a atuao de um produto qumico com o

qual esteja em contato (KLOCK et al., 2005).

As hemiceluloses isoladas da madeira so misturas complexas de

polissacardeos, sendo os mais importantes: as glucouranoxilanas,

arabinoglucouranoxilanas, galactoglucomananas, glucomananas e

arabinogalactanas. As conferas possuem propores de glucomananas (10-

15%) e galactoglucomananas (6%) mais altas do que as folhosas, enquanto as

folhosas tm maior proporo de glucoronoxilanas (15-30%) e de grupos

acetlicos (BIERMANN, 1996; PASTORE 2004). J Klock et al. (2005)

encontraram propores diferentes, de 18 a 25% de glucomananas e 8 a 20%

de galactoglucomananas nas conferas (superiores que as folhosas), e 20 a

35% de glucoronoxilanas nas folhosas, maior que o encontrado em conferas.

2.8.3. Lignina

um biopolmero aromtico amorfo, formado via polimerizao

oxidativa. Ocorre na parede celular de plantas superiores em diferentes

composies: folhosas de 25 a 35%, conferas de 18 a 25% e gramneas de 10

a 30% (PASTORE, 2004). localizada principalmente na lamela mdia, bem

como na parede secundria. Durante o desenvolvimento das clulas, a lignina

incorporada como o ltimo componente na parede, interpenetrando as fibrilas

e assim fortalecendo e enrijecendo as paredes celulares (FENGEL, 1989).

12

Ocorre, principalmente, em tecidos vasculares, porm a distribuio das

ligninas no uniforme nas diferentes partes da rvore.

As ligninas podem ser classificadas de acordo com os seus trs

elementos estruturais bsicos: lcool p-coumaril, lcool coniferil e lcool sinapil.

As madeiras de folhosas contm dois deles, o lcool coniferil (50-75%) e o

lcool sinapil (25-50%), e as conferas contm somente o lcool coniferil. A

polimerizao do lcool coniferil produz ligninas guaiacil, enquanto a

polimerizao dos lcoois coumaril e sinapil produzem as ligninas siringil-

guaiacil das folhosas (PASTORE, 2004).

2.8.4. Extrativos

Os extrativos so responsveis por determinadas caractersticas como

cor, cheiro, resistncia natural ao apodrecimento, gosto e propriedades

abrasivas da madeira.

Os compostos extraveis so geralmente caracterizados por terpenos,

compostos alifticos e compostos fenlicos quando presentes. Os extrativos

so compostos qumicos presentes em relativamente pequena quantidade na

madeira e so extrados mediante a sua solubilizao em solventes. Podem ser

quantificados e isolados com o propsito de um exame detalhado da estrutura

e composio da madeira (FENGEL, 1989; DUEAS, 1997).

Do ponto de vista qumico, a cor da madeira depende pouco dos seus

componentes principais e mais das substncias extraveis em gua ou

solventes orgnicos. Um fato que corrobora esta afirmao que somente o

cerne da madeira nitidamente colorido. No alburno, h a predominncia da

colorao das ligninas (branca amarelada) que, comparativamente do cerne,

so pouco coloridas. Os pigmentos so produzidos durante a formao do

cerne (KLOCK et al., 2005).

Em regies de clima temperado, a porcentagem de extrativos nas

madeiras varia de 0,5 a 10%; em algumas regies tropicais, pode ser acima de

20%. Os principais mecanismos de extrao dos extrativos de madeiras fazem

uso de solventes orgnicos, gua ou por destilao em vapor (OLIVEIRA,

2009). Porm, a determinao exata da quantidade de extrativos em massa

13

complicada por causa dos fenmenos de entrecruzamento molecular que

ocorre com os demais constituintes da madeira ao se fazer uso de solventes.

2.9. DURABILIDADE NATURAL DA MADEIRA

A durabilidade biolgica ou natural da madeira a capacidade inerente

da espcie em resistir ao dos agentes degradadores, incluindo os agentes

fsicos, os qumicos e os biolgicos (PAES, 2002). Segundo OLIVEIRA et al.,

(1986) a madeira degradada biologicamente porque os organismos

reconhecem os polmeros naturais da parede celular como fonte de nutrio e,

os metabolizam em unidades digerveis pela ao de sistemas enzimticos

especficos.

A constituio qumica varivel entre as espcies, e at mesmo entre

as clulas da mesma madeira, um fator determinante da sua resistncia

natural ao ataque dos microrganismos. O alburno mais suscetvel

degradao que o cerne por ser a parte da madeira que apresenta material

nutritivo armazenado. O cerne, alm da ausncia deste tipo de material, possui

os extrativos, que contm substncias inibidoras ou txicas (SILVA, 2007).

Os fungos so organismos que necessitam de compostos orgnicos

como fonte de alimento. Aqueles que utilizam os componentes qumicos da

madeira so conhecidos como fungos xilfagos (OLIVEIRA et al., 1986; LELIS

et al., 2001) e so os principais e mais importantes agentes biodeterioradores

das madeiras existentes no mundo (OLIVEIRA, 1997). Sendo os responsveis

por profundas alteraes nas propriedades fsicas e mecnicas da madeira

(ISTEK et al., 2005). Os polissacardeos presentes na parede celular da

madeira servem como fonte de energia (alimento) para esses microrganismos

(LELIS, 2000). No processo de deteriorao, o teor de lignina conhecido por

ser um fator que confere maior resistncia degradao da parede celular.

Usualmente, a habilidade dos fungos em deteriorar a madeira no a mesma e

se observa uma especificidade de alguns fungos a algumas madeiras

(FERRAZ et al., 2001).

Os fatores que facilitam a deteriorao da madeira por fungos so os

teores de umidade do material acima de 25%, a temperatura entre 20 e 35C e

14

os baixos teores de extrativos totais presentes na madeira (OLIVEIRA et al.,

1986; LELIS et al., 2001). J para o Forest Products Laboratory (2010) as

condies timas para o desenvolvimento dos fungos compreendem

temperaturas entre 10 e 35C e madeira com teores de umidade em torno de

20 a 30%.

2.10. O GNERO Eucalyptus

A cultura do eucalipto foi introduzida no Brasil em 1904, com o objetivo

de fornecer lenha s locomotivas da Companhia Paulista de Estradas de Ferro

(REZENDE, 1981; AGUIAR, 1986). Em Minas Gerais sua implantao ocorreu

em 1940, para suprir o setor siderrgico de carvo vegetal. Mais tarde, com a

lei dos incentivos fiscais, a eucaliptocultura teve grande expanso em todo o

territrio nacional (REZENDE, 1981; DELLA LUCIA, 1986; SILVA, 1993).

A expanso na rea plantada com eucalipto resultado de um conjunto

de fatores que vm favorecendo o plantio em larga escala deste gnero. Entre

os aspectos mais relevantes esto o rpido crescimento em ciclo de curta

rotao, a alta produtividade florestal e a expanso e direcionamento de novos

investimentos por parte de empresas de segmentos que utilizam sua madeira

como matria prima em processos industriais.

Segundo dados da Associao Brasileira de Produtores de Florestas

Plantadas - ABRAF (2009), o setor florestal brasileiro a cada ano se destaca no

cenrio mundial, em 2009 a rea total de florestas plantadas de eucalipto e

pinus no Brasil atingiu 6.310.450 ha, apresentando um crescimento de 2,5 %

em relao ao total de 2008. A rea de florestas com eucalipto est em franca

expanso na maioria dos estados brasileiros com tradio na silvicultura deste

grupo de espcies, ou em estados considerados como novas fronteiras da

silvicultura, com crescimento mdio no pas de 7,1% ao ano entre 20042009.

Apesar de serem descritas cerca de 700 espcies do gnero

Eucalyptus, os plantios so restritos a poucas espcies, podendo-se citar,

principalmente, Eucalyptus grandis, E. urophylla , E. saligna , E. camaldulensis,

E. tereticornis, E. globulus, E. viminalis, E. deglupta, Corymbia citriodora, E.

exserta , E. paniculata e E. robusta. Ressalta-se que, no Brasil, as espcies E.

15

cloezina e E. dunnii so consideradas promissoras para as regies centrais e

sul, respectivamente (GOMIDE, 1986).

Segundo Carvalho (2000), a hibridao empregada como tcnica de

desenvolvimento de novos materiais genticos com intuito de gerar indivduos

com vantagens especificas. Estes materiais hbridos unem em uma nica

planta caractersticas almejveis vindas de espcies distintas, possibilitando a

melhoria, em menor tempo, de diferentes propriedades tecnolgicas desejveis

na matria prima para atender aos mais diversos usos.

Para Gouva et al. (1997) parmetros como rusticidade, resistncia

mecnica e tolerncia ao dficit hdrico do Eucalyptus urophylla, conferem a

espcie alto potencial para ser empregada em programas de hibridao com o

Eucalyptus grandis que possui boas caractersticas silviculturais, resultando em

um material homogneo e com qualidade.

De acordo com Bassa et al. (2007), os hbridos de Eucalyptus urophylla

x Eucalyptus grandis apresentam rpido crescimento, com ciclos de corte

variando entre seis e sete anos de idade.

Segundo Almeida (2002), o hbrido de Eucalyptus urophylla x

Eucalyptus grandis tem grande importncia no setor de produo de polpa

celulsica por sua alta produtividade na qualidade das fibras, o que faz com

que as empresas deste ramo desenvolvam plantios do hibrido.

Em funo da grande variao gentica entre espcies, o eucalipto

pode ser utilizado como madeira na construo civil, na indstria de mveis e

na produo de portas, janelas, lambris e assoalhos (VITAL e DELLA LUCIA,

1986). Por causa da ampla gama de utilizao do eucalipto, algumas

empresas, tradicionalmente produtoras de celulose e papel ou de carvo

vegetal, passaram a manejar suas florestas para o uso mltiplo (SILVA, 1993;

COUTO, 1995). Por causa de sua disponibilidade, taxa de crescimento, forma

do fuste e propriedades fsico-mecnicas, o eucalipto apresenta boas

perspectivas como sucednea de espcies nativas (LELLES e REZENDE,

1986).

A escolha do eucalipto para suprir o consumo de madeira, tanto em

escala industrial como para pequenos consumidores, est relacionada a

algumas vantagens da espcie que ser escolhida para tal fim. s

16

caractersticas desejveis citadas, somam-se o conhecimento acumulado sobre

silvicultura e manejo do eucalipto e ao melhoramento gentico, que favorecem

ainda mais a utilizao do gnero para os mais diversos fins (PLAZZI, 1986).

2.11. FUNGOS XILFAGOS

Segundo Bergamin Filho e Amorim (2011), os fungos constituem um

grupo numeroso de organismos, diversificado filogeneticamente e de grande

importncia ecolgica e econmica. um grupo heterogneo que apresenta

caractersticas que permitem separ-los dos outros seres vivos, formando um

reino a parte.

Oliveira et al. (1986), Oliveira (1997), Lelis et al. (2001) e "Forest

Products Laboratory" (2010) citaram que os fungos xilfagos so reunidos, em

funo do tipo de ataque madeira, nos seguintes grupos: (1) Fungos

emboloradores e, ou, manchadores (responsveis por alteraes na superfcie

da madeira e popularmente conhecidos como bolor e, ou, por manchas

profundas no alburno das madeiras por causa da presena de hifas

pigmentadas ou de pigmentos liberados pelos fungos). As propriedades

mecnicas das madeiras atacadas por esses fungos so pouco alteradas, pois

eles no possuem complexos enzimticos capazes de degradar os polmeros

da madeira e apenas utilizam as substncias de fcil assimilao (aucares

simples, protenas e gorduras) encontradas nos lumes celulares; e (2) Fungos

Apodrecedores (responsveis por profundas alteraes nas propriedades

fsicas e mecnicas das madeiras, por causa das progressivas deterioraes

das molculas que constituem as suas paredes celulares).

A madeira atacada pelos fungos de podrido mole apresenta uma

camada superficial escurecida e pequenas fissuras paralelas e perpendiculares

gr e macroscopicamente caracterizada por um ataque seletivo no interior

da parede secundria da clula (ZABEL e MORREL, 1992). A podrido mole

considerada como uma forma de apodrecimento causada por fungos

pertencentes s Divises Ascomycota e dos fungos mitospricos

Deuteromycota. Em geral, estes fungos so considerados microrganismos com

uma capacidade limitada de degradao, que se desenvolvem dentro das

17

paredes celulares e decompem os principais componentes da madeira, tais

como a celulose e hemicelulose.

A podrido parda causada por fungos pertencentes Diviso

Basidiomycota que, em geral, apresentam uma alta capacidade de

degradao. Estes fungos despolimerizam a celulose, porm, afetam pouco a

lignina. As madeiras atacadas por estes fungos apresentam colorao marrom

escura (EATON e HALE, 1993).

A podrido branca tambm causada por fungos pertencentes

Diviso Basidiomycota, que apresentam uma alta capacidade de degradao.

Entretanto, para este caso, a lignina removida da parede da clula e a

celulose e a hemicelulose so degradadas em propores variadas. A madeira

degradada por estes fungos apresenta-se mais clara e macia do que a sadia e

tem as suas propriedades fsicas e mecnicas afetadas, causam uma

diminuio significativa na resistncia e um aumento na permeabilidade da

madeira (OLIVEIRA, 1986).

18

3. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

ASSOCIAO BRASILEIRA DE PRODUTORES DE FLORESTAS PLANTADAS - ABRAF. Anurio Estatstico da ABRAF 2010 ano base 2009. Braslia, 2010. 140p. Disponvel em: Acesso em: 10 jun. 2011. AGUIAR, O. J. R. Mtodos para controle das rachaduras de topo em toras de Eucalyptus grandis Hill ex Maiden, visando produo de lminas por desenrolamento. 1986. 92 f. Dissertao (Mestrado em Engenharia Florestal) - Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba, 1986. ALFENAS, A. C. Mtodos em fitopatologia. Viosa: Universidade Federal de Viosa, 2005. 210 p. ALMEIDA, R. R. Potencial da madeira de clones de hibrido de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla para a produo de lminas e manufatura de painis de compensado. 2002. 80f. Dissertao (Mestrado em Recursos Florestais) - Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba, 2002. ANDRADE, F. A. Degradao de tocos de Eucalyptus grandis por fungos. 2003. 73 f. Tese (Doutorado em Agronomia) Faculdade de Cincias Agronmicas Jlio de Mesquita Filho, UNESP, Botucatu, 2003. ANDRADE, A. S. Qualidade da madeira, celulose e papel em Pinus taeda L.: influncia da idade e classe de produtividade. 2006. 107f. Dissertao (Mestrado em Cincias Florestais) - Universidade Federal do Paran, Curitiba, 2006. BASSA, A. et al. Misturas de madeira de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla e Pinus taeda para produo de celulose Kraft atravs do processo Lo-Solids. Scientia Forestalis, Piracicaba, v. 51, n. 75, p. 19-29, 2007. BERGAMIN FILHO, A.; AMORIM. L. Agentes causais. In: BERGAMIN FILHO, A.; AMORIM. L. (Eds.). Manual de fitopatologia. 4. ed. So Paulo: Editora Agronmica Ceres, 2011. v. 1, p. 46 - 95.

BIERMANN, C. J. Handbook of pulping and papermaking. 2. ed. San Diego: Academic Press, 1996. 754p. CARVALHO, A. M. Valorizao da madeira do hibrido de Eucalyptus grandis x Eucalyptus urophylla atravs da produo conjunta de madeira serrada em pequenas dimenses, celulose e lenha. 2000. 138f. Dissertao (Mestrado em Recursos Florestais) - Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz, Piracicaba, 2000. COUTO, H. T. Z. Manejo de floresta e sua utilizao em serraria. In: SEMINRIO INTERNACIONAL DE UTILIZAO DA MADEIRA DE

19

EUCALIPTO PARA SERRARIA, 1995, So Paulo. Anais... So Paulo: LCF/ESALQ/USP, 1995, p. 20-30. DELLA LUCIA, M. A. Histrico da poltica da cultura do eucalipto. Informe Agropecurio, Belo Horizonte, v. 12, n. 141, p. 3-4, 1986. DHINGRA, O. D.; SINCLAIR, J. B. Basic plant pathology methods. Boca Raton: CRC Press, 1995. 434 p. DUEAS, R. S. Obtencin de pulpas y propiedades de las fibras para papel. Guadalajara: Universidad de Guadalajara, 1997. 293p. EATON, R. A.; HALE, M. D. C. Wood: decay, pests and protection. New York: Chapman & Hall, 1993. v.1, 116p. FERRAZ, A. et. al. Biodegradation of Pinus radiata softwood by white - and brown-rot fungi. World Journal of Microbiology & Biotechnology, Oxford, v.17, n.1, 2001, p.31-34. FENGEL, D. G. Wood: chemistry, ultrastructure, reactions. Berlin: Walter de Gruyter, 1989. 613p. FIGUEIREDO, M. B. Mtodos de preservao de fungos patognicos. Biolgico, So Paulo, p. 59- 68. 2001. FOREST PRODUCTS LABORATORY FPL. Wood handbook: wood as an engineering material. Madison: USDA/FS/FPL, 2010, 463p. (General Technical Report , FPL/GTR,113). GOUVA, C. A. et al. Seleo fenotpica por padro de proporo de casca de rugosapersistente em rvores de Eucalyptus urophylla S. T. Blake, visando formao de populao base de melhoramento gentico: qualidade da madeira. In: INFRO CONFERENCE ON SILVICULTURE AND IMPROVEMENTOP EUCALYPTUS, 4., 1997, Salvador. Proceedings... Colombo: Embrapa, Centro Nacional de Pesquisas de Florestas, 1997. v.1. p. 355-360.

GOMIDE, J. L. Produo de celulose e papel com madeira de eucalipto. Informe Agropecurio, Belo Horizonte, v.12, n 133, p. 80 - 82, 1986. ISTEK, A. et al. Biodegradation of Abies bornmlleriana (Mattf.) and Fagus orientalis (L.) by the white-rot fungus Phanerochaete chrysosporium. International Biodeterioration & Biodegradation, Berlin, v.55, n.2, p. 63 - 67, 2005. KLOCK, U. et al. Qumica da madeira. 3. ed. Curitiba: Universidade Federal do Paran, 2005. 81p. Disponvel em: . Acesso em: 03 jun. 2011.

20

LELIS, A. T. et al. Biodeteriorao de madeiras em edificaes. So Paulo: IPT, 2001. 54p. LELIS, A. T. Insetos deterioradores de madeira no meio urbano. Srie Tcnica IPEF, Piracicaba, v.13, n.33, p.81-90, 2000. LELLES, J. G.; REZENDE, J. L. P. Consideraes gerais sobre tratamento preservativo da madeira de eucalipto. Informe Agropecurio, Belo Horizonte, v.12, n. 133, p.83 - 89, 1986. MADY, F. T. M. Preservao da madeira. 2010. Disponvel em: . Acesso em: 09 jun. 2011. OLIVEIRA, J. T. S. et al. Influncia dos extrativos na resistncia ao apodrecimento de seis espcies de madeira. Revista rvore, Viosa, v. 29, n. 5, p. 819-826, 2005. OLIVEIRA, A. M. F. et al. Agentes destruidores da madeira. In: LEPAGE, E. S. (Coord.). Manual de preservao de madeiras. So Paulo: IPT, 1986. v.1, p.99-278. OLIVEIRA, R. M. Utilizao de tcnicas de caracterizao de superfcies de madeiras tratadas termicamente. 2009. 118f. Tese (Doutorado em Cincias) - Universidade de So Paulo, So Carlos, 2009. OLIVEIRA, J. T. S. Caracterizao da madeira de eucalipto para construo civil. 1997. 429f. Tese (Doutorado em Engenharia Civil) - Universidade de So Paulo, So Paulo, 1997. ONOFRE, F. F. et al. Modelo de degradao de tocos remanescentes em povoamentos de eucalipto. In: CONGRESSO DE INICIAO CIENTFICA DA UNESP, 8., 2001. Bauru, Anais... Bauru: UNESP, 2001. CD ROM. PAES, J. B. Resistncia natural da madeira de Corymbia maculata (Hook.) K. D. Hill e L.A.S. Johnson a fungos e cupins xilfagos, em condies de laboratrio. Revista rvore, Viosa, v. 26, n. 6, p. 761-767, 2002. PASTORE, T. C. M. Estudos do efeito da radiao ultravioleta em madeiras por espectroscopias raman (ft-raman), de refletncia difusa no infravermelho (drift) e no visvel (cie-l*a*b*). 2004. 131f. Tese (Doutorado em Qumica) - Universidade de Braslia, Braslia, 2004. PLAZZI, T. Celulose e papel de alta qualidade. Informe Agropecurio, Belo Horizonte, v.12, n. 133, p. 99 -100, 1986. REZENDE, G. C. Implantao e produtividade de florestas para fins energticos. In: PENEDO, W.R. (Ed.). Gaseificao de madeira e carvo

21

vegetal. Belo Horizonte: CETEC, 1981. p. 9-24. (Srie de Publicaes Tcnicas, 4). VITAL, B.R.; DELLA LUCIA. R.M. Propriedade fsica e mecnica da madeira de eucalipto. Informe Agropecurio, Belo Horizonte, v.12, n. 141, p.7174, 1986. ROCHA, M. P. Biodegradao e preservao da madeira. 5. ed. Curitiba:

Fundao de Pesquisas Florestais do Paran, 2001. 94p. (Srie Didtica

01/01).

SANTOS, Z. M. Avaliao da durabilidade natural da madeira de Eucalyptus grandis W. Hill: Maiden em ensaios de laboratrio. 1992. 75f. Dissertao (Mestrado em Cincia Florestal) - Universidade Federal de Viosa, Viosa, 1992. SGAI, R. D. Fatores que afetam o tratamento para preservao de madeiras. 2000. 122f. Dissertao (Mestrado em Engenharia Civil) - Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 2000. SILVA, C. A. Anlise da composio da madeira de Caesalpinia echinata Lam. (Pau-Brasil): subsdios para o entendimento de sua estrutura e resistncia a organismos xilfagos. 2007. 120f. Tese (Doutorado em Biologia Celular e Estrutural) - Universidade Estadual de Campinas, Campinas, 2007. SILVA, E. Os plantios florestais no Brasil. In: CONGRESSO FLORESTAL BRASILEIRO, 4.; e CONGRESSO FLORESTAL PANAMERICANO, 1., 1993, Curitiba. Anais... Curitiba: SBS/SBEF, 1993, v. 2. p. 719. SILVA, J. C. Caracterizao da madeira de Eucaliptus grandis Hill ex. Maiden, de diferentes idades, visando a sua utilizao na indstria moveleira. 2002. 160f Tese (Doutorado em Engenharia Florestal) Universidade Federal do Paran, Curitiba, 2002. SILVA, J. C. Anatomia da madeira e suas implicaes tecnolgicas. Viosa: Universidade Federal de Viosa, 2005. 140p. SINGLETON, L. L.; MIHAIL, J. O.; RUSH, C.M. Methods for research on soilborne phytopathogenic fungi. New York: APS Press. 1992. 266p. TUITE, J. Plant pathological methods: fungi and bacteria. Minneapolis: Burgess Publish Company, 1969. 239 p. TRUGILHO, P. F. et al. Influncia da idade nas caractersticas fsicas, qumicas e anatmicas da madeira de Eucalyptus grandis. In: INFRO CONFERENCE ON SILVICULTURE AND IMPROVEMENTOP EUCALYPTUS, 4., 1997, Salvador. Proceedings... Colombo: Embrapa, Centro Nacional de Pesquisas de Florestas, 1997. v.1. p. 269-275.

22

ZABEL, R. A.; MORRELL, J. J. Wood microbiology: decay and its preservation. San Diego: Academic Press, 1992.474p. ZOBEL, B. J.; VAN BUIJTENEN, J. P. Wood variation: its causes and control. New York: Springer-Verlag, 1989. 363 p.

CAPTULO I

COLETA, ISOLAMENTO, SELEO E IDENTIFICAO DE FUNGOS

XILFAGOS OBTIDOS DE CEPAS DE EUCALIPTO DETERIORADAS

24

RESUMO

Objetivou-se com a pesquisa coletar, isolar, selecionar e identificar a partir de

fragmentos de madeira de cepas apodrecidas de eucaliptos, fungos com

potencial de deteriorar madeiras, para serem utilizados posteriormente em um

ensaio de apodrecimento acelerado. Amostras de tocos de eucalipto em

decomposio foram coletadas em plantios de Eucalyptus spp. em trs

municpios com microclimas e altitudes diferentes e acondicionadas em sacos

de papel poroso e transportadas para o Laboratrio de Cincia da Madeira

(LCM), no Departamento de Engenharia Florestal (DEF), pertencente ao Centro

de Cincias Agrrias (CCA) da Universidade Federal do Esprito Santo (UFES)

no municpio de Jernimo Monteiro, ES. Das amostras foram retirados

fragmentos de madeira para realizar o isolamento indireto de fungos e

posteriormente a obteno de culturas puras. Para realizao dos isolamentos

dos fungos foi utilizado o meio de cultura Batata-Dextrose-gar (BDA). Nove

culturas puras foram isoladas e identificadas. Foram obtidas culturas

pertencentes Classe dos Basidiomycetes e dos fungos mitospricos dos

gneros Trichoderma, Lasiodiplodia, Penicillium, estas foram selecionadas,

repicadas BDA contido em placa de Petri e tubos de ensaio e armazenadas no

LCM em sala climatizada a 25 2 C, no escuro, para que fossem

posteriormente utilizadas no ensaio de apodrecimento acelerado.

Palavras chave: Cepas apodrecidas de Eucalyptus spp. Culturas puras.

Fungos xilfagos.

25

ABSTRACT

This research aimed to collect, isolate, select and identify from fragments of

wood of stumps decayed of eucalypts, fungi with potential to deteriorate wood,

to be used later in an accelerated laboratory test decay. Samples of stumps of

eucalypts in decomposition were collected in stumps of Eucalyptus spp. in three

municipalities with microclimates and different altitudes and placed in paper

bags porous and transported to the Laboratrio de Cincia da Madeira (LCM),

in the Departamento de Engenharia Florestal(DEF), belonging to the Centro de

Cincias Agrrias (CCA) of the Universidade Federal do Esprito Santo (UFES)

in the municipality of Jernimo Monteiro, ES, Brazil. The samples were

removed from fragments of wood, to hold the insulation indirect of fungi and

subsequently to obtain pure cultures. For completion of the isolates of the fungi

was used the culture medium potato-dextrose-agar (PDA). Cultures were

obtained from belonging to the Class Basidiomycetes fungi and mitosporicos of

the genera Trichoderma, Lasiodiplodia, Penicillium, these were selected and

subcultured PDA contained in Petri dishes and test tubes and stored at LCM in

acclimatized room at 25 2 C, in the dark, for which were later used in

accelerated laboratory test decay.

Keywords: Decayed stumps of Eucalyptus spp. Pure Cultures. Wood decay

fungi.

26

1. INTRODUO

Os fungos so organismos encontrados nos mais variados substratos,

entre os quais se destaca a madeira que atualmente representa o principal

produto florestal, sendo um dos materiais orgnicos mais importantes,

complexos e versteis que se conhece. Por causa da constituio anatmica e

qumica que possui, ela pode sustentar uma rica comunidade de espcies de

fungos e de outros microrganismos (DIX e WEBSTER, 1995).

A deteriorao da madeira pode ocorrer pela ao de agentes fsicos,

qumicos e biolgicos. Os agentes biolgicos merecem maior ateno, uma vez

que so os causadores de maiores prejuzos ao setor florestal e madeireiro. E

dentre os agentes biolgicos se destaca a ao de microrganismos fngicos,

cujo incio de ataque pode ocorrer na rvore antes de ser abatida e nas

diversas fases posteriores ao abate: corte, transporte, desdobramento,

armazenamento e utilizao final da madeira (OLIVEIRA et al., 1986;

MORESCHI, 1996). O ataque pode ser por diferentes grupos de agentes

fngicos, na forma de manchamentos superficiais e internos e as podrides.

Os microorganismos xilfagos podem interferir nas propriedades

fsicas, mecnicas e qumicas da madeira. Geralmente, os primeiros fungos a

colonizarem as rvores recm-abatidas so os emboloradores e os

manchadores de madeira. Dependendo da espcie botnica florestal, dos

fatores ambientais e dos tratamentos qumico ou fsico, os fungos podem

ocupar toda a superfcie da tora, em menos de 48 horas (OLIVEIRA et al.,

1986).

O ataque dos fungos emboladores superficial, comprometendo o

aspecto visual da madeira, pois h um crescimento acentuado de hifas sobre a

superfcie, que podem penetrar profundamente no alburno, por serem hialinas,

essas hifas no afetam a colorao da madeira (OLIVEIRA et al., 1986). A

passagem das hifas dos fungos de uma clula a outra ocorre atravs das

pontoaes, com o consequente rompimento da membrana da pontoao ou

do torus.

A madeira atacada por fungos emboloradores apresenta, em sua

superfcie, rea de aspecto pulverulento, constituda de massa de esporos, que

27

pode ser facilmente removida por raspagem. A colorao varia com a espcie

de fungo, variando entre cinza, verde e amarelo. Dentre os agentes causadores

do manchamento superficial esto os fungos mitospricos do gnero

Penicillium e Trichoderma, da Classe Hyphomycetes, que so saprfitas de

esporulao abundante, eles tem como caractersticas particulares condios

muito pequenos, unicelulares e so facilmente disseminados pelo ar. Por isso

so considerados contaminantes areos de diversos ambientes, em todo o

mundo, por serem cosmopolitas (FURTADO, 2000).

Para que ocorra o desenvolvimento dos fungos, eles necessitam de

condies favorveis. Os mofos, por exemplo, s crescem superficialmente em

ambientes quentes, midos e abafados podendo permanecer na madeira em

estado latente. Esses organismos no se proliferam at que a madeira

umedea novamente, quando voltam a crescer e se multiplicarem

(MORESCHI, 1996).

Os fungos causadores de manchas internas nas madeiras apresentam

hifas pigmentadas ou hifas hialinas que podem secretar substncias coloridas.

A madeira atacada por estes fungos apresenta, no alburno, reas de colorao

varivel, geralmente de azul a cinza escuro, que so observadas em cortes

transversais e distribuem-se radialmente. As manchas, que podem ser

superficiais ou profundas, depreciam a qualidade e o valor comercial da

madeira (OLIVEIRA et al., 1986).

Aqueles capazes de causar de manchas internas nas madeiras, no

tm a capacidade de decompor a parede celular destas, normalmente, eles

crescem nas clulas parenquimatosas do alburno, onde produzem suas hifas

escuras, causando manchas acinzentadas a azuladas, conhecidas como

azulamento da madeira, ou mesmo azulo ou mancha azul. Estas manchas

ocorrem em funo do crescimento no interior da madeira, de hifas

pigmentadas deste grupo de fungos (OLIVEIRA et al., 1986).

Os fungos manchadores internos ocorrem, frequentemente, em toras

recm-cortadas e em peas de madeira serrada, durante a secagem, ou

mesmo aps a secagem no reumidecimento das peas. Em rvores vivas e

saudveis no so muito comuns, mas podem ocorrer em rvores

senescentes. Dentre os principais degradadores deste tipo esto os gneros de

28

fungos mitospricos, da Classe Coelomycetes: Lasiodiplodia, Ophiostoma,

Graphium, Diplodia (FURTADO, 2000). A maioria destes organismos no

capaz de perfurar as paredes das clulas e dependem de aberturas naturais

entre as mesmas para penetrarem na madeira e do rompimento mecnico das

membranas das pontoaes.

Alguns fungos manchadores internos so capazes de atravessar a

parede celular, graas formao de apressrios, o que sugere um

mecanismo de penetrao mecnica, no envolvendo ataque qumico. As hifas

penetram profundamente no alburno e absorvem as substncias de reserva

existentes no lume das clulas (FURTADO, 2000).

Os principais fungos causadores de podrides so pertencentes

Classe dos Basidiomycetes. Dentre esses se destacam os causadores da

chamada podrido parda, que destroem os polissacardeos da parede celular,

e os de podrido branca, que, alm de polissacardeos, destroem tambm a

lignina (TEIXEIRA et al., 1997).

Segundo Lepage (1986), a madeira atacada por fungos de podrido

parda apresenta-se em estgios iniciais ligeiramente escurecida, assumindo

uma colorao pardo-escura medida que o apodrecimento progride. Pode ser

observada tambm a presena de grupos de clulas intensamente

deterioradas, envolvidas por clulas pouco atacadas. A madeira atacada por

estes fungos apresenta uma reduo na sua massa especfica, tornando-a

mais permevel ao ataque de microrganismos e higroscpica, alm de sua

resistncia ao impacto tambm ser diminuda.

A madeira atacada por fungo de podrido branca, alm de deteriorar a

celulose e hemicelulose, ataca tambm a lignina da parede celular,

apresentando-se mais clara e com a superfcie atacada mais macia do que a

madeira sadia (LEPAGE, 1986). Wetzstein et al. (1999) relataram que as

atividades ocorrentes em materiais atacados por podrido branca so

atribudas s enzimas, como a lignina peroxidase, lacase e mangans

peroxidase, que catalisam a deteriorao via difuso de agentes oxidantes ou

mediadores especficos.

A podrido parda provoca uma diminuio nas caractersticas

mecnicas da madeira mais rapidamente que a podrido branca, enquanto a

29

diminuio na massa especfica, ao final do processo, maior nesta ltima

(LEPAGE, 1986).

O presente trabalho teve como objetivos coletar, isolar, selecionar e

identificar a partir de fragmentos de madeira de cepas apodrecidas de

eucaliptos, fungos com potencial de deteriorar madeiras de Eucalyptus spp.

30

2. MATERIAL E MTODOS

2.1. LOCALIZAO E DESCRIO DA REA E DO MATERIAL COLETADO

A diversidade dos fungos lignocelulolticos foi analisada a partir de

coletas de materiais de varias cepas, realizadas entre os meses de agosto e

setembro de 2010 em trs municpios, Cachoeiro de Itapemirim ES, Guaui -

ES e Espera Feliz - MG . Segundo a classificao de Kppen-Geiger, o clima

desses municpios Cwa clima sub tropical mido, com estao chuvosa no

vero e seca no inverno.

A Fazenda Bananal do Sul (Latitude de 260768 W, Longitude de

770138 S), localizada em Pacotuba, distrito de Cachoeiro de Itapemirim

ES, apresenta o relevo com variaes de fortemente ondulado a montanhoso,

com altitudes variando entre 70 e 130 metros. A temperatura mdia anual de

24 C. Os materiais coletados neste municpio foram provenientes de cepas

deterioradas de clones de eucalipto resultantes do cruzamento entre

Eucalyptus grandis W. Hill ex. Maiden e E. urophylla S.T. Blake, com idade de

aproximadamente 5 anos (Figura 1), sendo quatro anos de plantio e um ano

aps o corte.

Figura 1. Cepa de eucalipto a partir da qual foram coletados materiais para o

presente trabalho (Fazenda Bananal do Sul, Pacotuba, Distrito de

Cachoeiro de Itapemirim ES).

31

Localizada no Crrego do Patrimnio em Guaui ES, a Fazenda So

Sebastio (Latitude de 228876 W, Longitude de 770679 S), possui seu

relevo bastante acidentado, a altitude oscila entre 600 e 1.000 metros. A

temperatura mdia anual de 20 C. As amostras coletadas, tambm foram

clones de eucaliptos, resultantes do cruzamento entre Eucalyptus grandis W.

Hill ex. Maiden com E. urophylla S.T. Blake. Os clones encontravam-se com

idade de aproximadamente 5 anos, sendo quatro anos de plantio e um ano

aps o corte (Figura 2).

Figura 2. Cepa de eucalipto a partir da qual foram coletados materiais para o

presente trabalho (Fazenda So Sebastio, Crrego do Patrimnio,

Distrito de Guaui ES).

A Fazenda Paraso (Latitude de 205335 W, Longitude de 772555

S), situada na Zona Rural de Espera Feliz MG parte integrante do macio

do Capara, possui seu relevo muito acidentado, a altitude oscila entre 900 e

2.000 metros, com temperatura mdia anual de 19 C. A precipitao

pluviomtrica anual em mdia de 1.595mm. O material coletado pertencia

espcie Eucalyptus grandis, com idade de aproximadamente 20 anos, sendo

18 anos de plantio e dois anos aps o corte. A cepa da qual as amostras foram

coletadas se encontrava, localizada aproximadamente 925 metros de altitude

(Figura 3).

32

Figura 3. Cepa de eucalipto a partir da qual foram coletados materiais para o

presente trabalho (Fazenda Paraso, Espera Feliz MG).

2.2. ARMAZENAMENTO E PREPARO DAS AMOSTRAS

As amostras coletadas foram devidamente identificadas, acondicionadas

em sacos de papel poroso e transportadas para o Laboratrio de Cincia da

Madeira (LCM), localizado no Departamento de Engenharia Florestal (DEF)

pertencente ao Centro de Cincias Agrrias (CCA) da Universidade Federal do

Esprito Santo (UFES), localizado em Jernimo Monteiro, no Estado do Esprito

Santo.

O preparo das amostras foi realizado no Laboratrio de Usinagem da

Madeira (LUM) do DEF, este consistiu na transformao das cepas em

pequenos fragmentos de madeira (Figura 4).

33

Figura 4. Disco (A) transformado em pequenos fragmentos de madeira (B).

2.3. ISOLAMENTO INDIRETO E DIRETO DOS FUNGOS PRESENTES NAS

CEPAS

Com o intuito de obter isolamento fngico de forma indireta, fragmentos

de tecido de madeira, foram retirados da rea de transio, localizada entre a

poro sadia e aquela em decomposio e posteriormente desinfestados em

soluo de hipoclorito de sdio 0,2% por 30 segundos, lavados em gua

destilada esterilizada, passados rapidamente pela chama de gs e transferidos

assepticamente para placas de Petri contendo meio de cultura BDA estril. As

placas de Petri foram lacradas com fita plstica ("Parafilm M"), mantidas em

sala climatizada, que apresentava temperatura de 25 2C e umidade relativa

de 60 5%, embaladas em folhas de papel para permaneceram no escuro, at

a observao de crescimento micelial, para realizar o isolamento direto.

Para o isolamento direto dos fungos, procedeu-se uma transferncia,

com o auxlio de um estilete, de estruturas do patgeno (esporos e hifas) para

meio BDA contido em placas de Petri. Estas foram lacradas com fita plstica,

embaladas em folhas de papel para permaneceram no escuro e mantidas em

sala climatizada a uma temperatura de 25 2C e umidade relativa de 60 5%

at a observao de crescimento micelial, quando as culturas foram

sucessivamente repicadas para placas de Petri com meio de BDA at a

obteno de culturas puras.

A B

34

2.4. ARMAZENAMENTO DAS CULTURAS E IDENTIFICAO DOS FUNGOS

As culturas obtidas pelo isolamento direto foram transferidas para Placas

de Petri e tubos de ensaio contendo BDA, armazenadas no LCM a uma

temperatura de 25 2C e umidade relativa de 60 5%, no escuro, para serem

utilizadas posteriormente em ensaios de laboratrio.

Para a identificao dos fungos foram feitas observaes

macroscpicas das culturas e microscpicas em lminas semipermanentes

preparadas com lactofenol. Com emprego de um microscpico ptico foram

feitas observaes das estruturas reprodutivas dos fungos. Para alguns fungos

foram preparadas microculturas conforme descrito por Fernandez (1993),

visando observar detalhes das estruturas, particularmente importantes para

que a identificao fosse a mais precisa possvel. As caractersticas

macroscpicas e microscpicas foram comparadas com s descritas em

bibliografia especializada (RIFAI, 1969; BOOTH, 1971; SAMSON, 1974;

CARMICHAEL, et al., 1980; HALIN, 1997; 1998; BARNETT e HUNTER, 1998).

A etapa de comparao microscpica foi realizada no Laboratrio de

Fitopatologia do Ncleo de Desenvolvimento Cientfico e Tecnolgico em

Manejo Fitossanitrio de Pragas e Doenas (NUDEMAFI) no CCA da UFES,

localizado em Alegre - ES.

35

3. RESULTADOS E DISCUSSO

Das amostras retiradas a partir das cepas de eucaliptos deterioradas

nos trs municpios amostrados, foram obtidos nove isolados fngicos

associados s amostras de madeiras, sendo provenientes de trs culturas

puras de cada localidade (Figuras 5, 6 e 7). Os fungos foram identificados

macroscpica e microscopicamente, como recomendados por, Barnett e Hunter

(1998), em nvel de gnero e includos em seus respectivos grupos.

Figura 5. Placas de Petri com os fungos isolados em cepas de eucalipto na Fazenda Bananal do Sul. Pacotuba distrito de Cachoeiro de Itapemirim - ES A e B - Basidiomicetos e C - Trichoderma sp.

Figura 6. Placas de Petri com os fungos isolados em cepas de eucalipto na Fazenda So Sebastio. Crrego do Patrimnio distrito de Guaui - ES. D - Lasiodiplodia sp.; E - Basidiomicetos e F - Trichoderma sp.

A B C

D E F

36

Figura 7. Placas de Petri com os fungos isolados da Fazenda Paraso. Espera Feliz - MG. G - Penicillium sp.; H - Trichoderma sp. e I - Trichoderma sp..

Dos nove isolados de fungos associados s amostras de madeira, o

gnero Trichoderma foi o de maior ocorrncia e apresentou diversidade de

espcies, tendo sido isolado em duas amostras provenientes da Fazenda

Paraso, uma na Fazenda Bananal do Sul e uma na Fazenda So Sebastio. O

gnero Penicillium foi isolado de amostras da Fazenda Paraso (Figuras 5, 6 e

7).

Os fungos causadores de manchas superficiais, tambm denominados

fungos emboloradores, nutrem-se a partir de substncias de reserva do lume

celular, no afetando a parede celular, portanto, no comprometendo a

resistncia mecnica da madeira. O ataque superficial, comprometendo

apenas o aspecto visual, pois h um crescimento acentuado de hifas sobre a

superfcie, deixando-as com aspecto algodoado, cuja colorao varia com a

espcie de fungo a que pertence, sendo removveis. Estes fungos crescem

nutrindo-se de substncias solveis, como: acares, aminocidos e cidos

orgnicos que extravasam das clulas parenquimatosas danificadas pelo corte

(FURTADO, 2000).

Os fungos emboloradores no so capazes de atacar a superfcie da

madeira em umidades abaixo do ponto de saturao das fibras ( 30%), sendo

por isso, seu ataque comum em toras recm-cortadas, peas recm-serradas

ou madeiras expostas em ambiente com alta saturao de umidade (GALVO

e JANKOWSKY, 1985).

G H I

37

Dix e Webster (1995) consideram os fungos Trichoderma spp. e

Penicillium spp. como emboloradores de madeira. Ye et al. (1993) isolaram os

fungos Trichoderma, Penicillium, entre outros, de madeira de Pinus

selecionadas.

Segundo Furtado (2000), alm de alterar o aspecto visual, fungos do

gnero Penicillium, podem produzir toxinas como: citrinas, patulinas,

ocratoxinas, aflatoxinas, que so txicas ao homem e animais, alm de serem

oportunistas aos mesmos em infeces respiratrias, quando estes se

encontram imunodeficientes. As condies para a produo de toxinas variam

de acordo com o substrato e da espcie do fungo presente, o que torna estes

fungos potencialmente perigosos quando a madeira contaminada utilizada

para compor embalagens de produtos alimentcios ou de produtos que serviro

para embalar alimentos.

O gnero Lasiodiplodia pertence ao grupo dos fungos manchadores

internos, tendo sido isolados de amostras provenientes da Fazenda So

Sebastio localizada no municpio de Guaui - ES.

Os fungos causadores de manchas internas uma vez, em contato com

a parte interna da madeira, causam o manchamento ou azulamento da mesma

(TALBOT, 1977). Na frica e no Brasil Lasiodiplodia theobromae foi relatado

como agente causal da mancha azul de madeiras (ENCIAS, 1996).

Nas conferas, as hifas colonizam exclusivamente as clulas do

parnquima radial e raramente so observadas nos traquedeos (FURTADO,

2000). Estes, tambm, no alteram a densidade ou resistncia da madeira,

apenas a esttica comprometida. Oliveira et al. (1986) apontaram que o

alburno de Pinus, internamente manchado, pode apresentar reduo de 1 a 2%

na densidade, 2 a 10% na dureza, 1 a 5% na resistncia flexo e de 15 a

30% na resistncia ao impacto, alm da madeira se apresentar muito mais

permevel que a madeira sadia. Dessa forma, a utilizao deste tipo de

madeira deve ser restringido. Por causa da alta velocidade de penetrao das

hifas no material lenhoso, quanto mais rpido a madeira for tratada, seca e

preservada com aplicao de agentes qumicos em melhor estado ficar

(MORESCHI, 1996).

38

Para Krik (1975), uma mesma espcie de fungo pode atuar de forma

diferente de acordo com as circunstncias. Alm disso, os fungos

emboloradores e manchadores ocorrem quase que concomitantemente,

ocupando nichos ecolgicos bastante prximos (OLIVEIRA et al., 1986). Krik

(1975) acrescentou que, geralmente, a distino entre fungos emboloradores e

manchadores est embasada em suas atividades enzimticas, as quais

diferenciam os principais grupos fisiolgicos que preenchem sucessivamente

os diferentes nichos ecolgicos existentes na madeira, no discriminando,

necessariamente, grupamentos taxonmicos. Portanto, nem sempre possvel

separar ou discernir com clareza se o fungo provoca bolor ou mancha na

madeira, sem um estudo histolgico.

Sob certas circunstncias, fungos emboloradores e manchadores

podem ser antagnicos a fungos degradadores, principalmente se eles forem

os colonizadores pioneiros (HULME e SHIELDS, 1975).

Vrios estudos explorando essa linha de pesquisa tm sido realizados.

Brown e Bruce (1999) estudaram o potencial do Trichoderma viride como

antagonista a fungos degradadores de madeira. Schoeman et al. (1993)

observaram que T. harzianum reduziu a quantidade de fungos apodrecedores

em toras de Pinus sp. e Messner et al. (1996) observaram que madeiras

infestadas com T. harzianum mostraram resistncia a fungos degradadores,

principalmente aos fungos da podrido parda.

39

4. CONCLUSES

Os fungos decompositores isolados das cepas de eucaliptos

provenientes dos locais de estudo variaram em espcie em funo das

caractersticas dos locais provenientes.

Das cepas foi possvel o isolamento de nove culturas puras de fungos

xilfagos, sendo estes trs de cada localidade.

A identificao dos fungos permitiu separ-los em grupos sendo trs

fungos pertencentes Classe Basidiomycetes, quatro ao gnero Trichoderma,

um Penicillium e um Lasiodiplodia.

Dos fungos isolados, cinco (quatro Trichoderma sp. e um Penicillium

sp.) provocam manchas externas (manchadores) e um (Lasiodiplodia sp.)

causa mancha interna (embolorador) na madeira.

Os Basidiomicetos no puderam ser classificados em nvel de gnero

por que as culturas armazenadas em placas de Petri contendo meio de cultura

BDA no produziram esporos, no sendo possvel sua identificao.

40

5. REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS

BARNETT, H. L.; HUNTER, B. B. Illustrated genera of imperfect fungi. 4. ed. Saint Paul: The American Phytopathological Society, 1998. 218p. BOOTH, C. The genus Fusarium. New England: International Mycological Institute, 1971. 237p. BROWN, H. L.; BRUCE, A. Assessment of the biocontrol potential of a Trichoderma viride isolate. Part I: Establishment of field and fungal cellar trials. International Biodeterioration & Biodegradation, Berlin, v. 44, p. 219 - 223, 1999. CARMICHAEL, J. W, et. al. General of Hyphomycetes. Alberta: The University of Alberta Press, 1980. 386p. DIX, N. J.; WEBSTER, J. Fungal ecology. London: Chapman & Hall, 1995. 549 p. ENCIAS, O. Development and significance of attack by Lasiodiplodia theobromae (Pat.) Griff. & Maubl. in Caribbean pine wood and some other wood species. 1996. 107f. Thesis (Phylosophae Doctor in Agriculture)