Western Blotting

Western Blotting

IntroduoWestern blotting (WB) tambm conhecido como protenas blotting ou immunoblotting, um poderoso e importante mtodo utilizado para imunodeteco de protenas aps a separao destas por eletroforese em gel de policramida e transferncia para membrana adsorvente.VANTAGENSAlta sensibilidade e especificidade;Reconhecimento de antgenos individuais em um extrato;Realizao de perfil de reconhecimento de antgenos;Determinao de protenas imunodominantes.

DESVANTAGENS Custo mdio a alto; procedimento longo e propenso a erros em diversos pontos; dependendo do sistema de revelao, pode-se ter problemas de segurana.

Alguns Equipamentos Cuba de Eletroforese horizontal

Equipamento de transferncia de protenas

Tcnica

Preparao do tecidoEletroforese em GelTransfernciaBloqueioDetecoMtodo de dois passos:Anticorpo primrioAnticorpo SecundrioMtodo de um passo

METODOS PARA ANALISE DO WESTERN BLOTTING Deteco colorimtricaQuimioluminescnciaDeteco RadioativaDeteco fluorescenteSondagem SecundriaAnlise

Esquema da eletroforese em gel de poliacrilamida (PAGE). A amostra colocada em uma canaleta confeccionada no gel. Sob correnteeltrica, as protenas migram do lado de carga negativa para o ladopositivo. No gel, as protenas se posicionam de acordo com seutamanho e peso.Fonte: http://www.nehmi-ip.com.br/imagens_servicos/bio_23_p.gif

Transferncia de protenas do gel para membrana com omtodo de transferncia horizontal semi seca.

Fonte: http://www.fermentas.com/techinfo/Electrophoresi/pproteintransfer.htm

Tcnica de Western blotting evidenciando a adio de anticorpos.Fonte: http://www.chemicon.com/resource/ANT101/a2B.aspAplicaes em Diagnsticos MdicosA Tcnica Western blotting tem sua aplicao muito importante em diagnsticos mdicos, o qual ajuda na deteco dos anticorpos , produzidos por ns, de vrias doenas, como por exemplo a AIDS, a doena da vaca louca, de Lyme e outras.

GrupoAlessandraClaraGilvanira Tateane