Instituto Federal Goiano câmpus Urutaí.

Curso de Agronomia

Disciplina de Fitopatologia

Apresentador : Jose Fernando M. Gondim

ARIF, M., ALI, M., REHMAN, A., FAHIM, M.Detection of potato mop-top virus in soils and potatotubers using bait-plant bioassay, ELISA and RT-PCR.Journal of Virological Methods, 195:221–227, 2014.

Detecção de “vírus em batata mop-top ” em

solos e tubérculos de batata utilizando

bioensaios bait-plant, ELISA e RT-PCR.

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INTRODUÇÃO

• O vírus em batata mop-top (PMTV) tem partículasfrágeis em forma de bastonete, transmitida pelovector plasmódio, que -se desenvolve no solosubterrâneo, é uma espécie de tipo do gêneroPomovirus o genoma de RNA de cadeia simplesrica em cisteína 8 kDa proteína.

• O vírus também foi detectado em zoósporos deSpongospora subterrâneo derivada a partir decascas de tubérculos selecionados usando triplasanduíche de anticorpos .

• O vetor de PMTV, S. subterrânea também causasarna em pó doença em tubérculos de cultivaressuscetíveis. Infecções com vírus que podem causarsintomas graves em tubérculos de batata.

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• Sintomas Primários: pode ocorrer como arcoscastanhos e círculos na carne de tubérculos decultivares suscetíveis em cima da batata emplantação em áreas infestadas .

• Os sintomas secundários de PMTV sãoproduzidos quando as plantas de batata sãocultivadas a partir de vírus de tubérculos infectados, adquirido, após a infecção primária. Os sintomasde produção são, manchas amarelas nas folhas, e oefeito è devido à acumulação e encurtamento dosentrenós.

INTRODUÇÃO

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• Transmissão

• Vetor S.do PMTV se transmite in vivo pormeio de mono cultura .O vírus pode manter asua efetividade por mais de 18 anos , ocorre emregiões produtoras de batata do Norte e Centralda Europa, e regiões andinas da América doSul, China e Japão.

INTRODUÇÃO

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OBJETIVO

A detecção, identificação e caracterização de PMTV

usando técnicas convencionais e moleculares.

Fonte: Stock Royalty FreeFonte:cnptia.embrapa6

MATERIAIS E MÉTODOS

• Exame de Campo: coleção de plantas e amostras de solos

• Teste “isca do solo”

• Detecção serológica através do fungo Spongosporasubterranea pelo método ELISA-Direto

• Detecção serológica de PMTV em batata e plantascultivadas em ensaios “bait plant” através do método de ELISA Indireto

• Detecção molecular de PMTV em ensaios de “baitplants” (isca planta) e tubérculos de batata

– Extração de RNA e sintese de moléculas de cDNA

– Reação de polimerase em cadeia (RT-PCR)

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RESULTADOS E DISCUSSÃOTab. 1. Detecção de PMTV em Nicotiana debneyi crescidas por 6-8 semanas em solos virulíferos coletados

de várias regiões do noroeste do Paquistão

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RESULTADOS E DISCUSSÃO

Tab. 2. Detecção de PMTV em cultivares comerciais cultivadas em vários locais do nordeste do Paquistão

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RESULTADOS E DISCUSSÃO

Fig. 1. Detecção de PMTV através de bioensaio com solos contaminados. A. Nicotina debneyi

apresentando sintomas cloróticas em forma de V, demarcando as margens foliares. Aos 4-6 semanas

depois do crescimento das mudas que se desenvolveram em solos infestados utilizando o bioensaio

“bait-test”. As mudas de N. debneyi foram transplantadas em solos infestados coletadas de várias

regiões produtoras de batata do Nordeste do Paquistão. B. Plantas de N. benthamiana mostrando

sintomas de mosaico e manchas as 2-3 semanas depois da inoculação por seiva de raízes de N. debneyi

utilizadas como fonte para inoculação. 10

RESULTADOS E DISCUSSÃO

Fig. 2. Detecção de PMTV por RT-PCR em N. debneyi pelos ensaios “bait plant”. A. raizes, B. folhas de

batata de 6-8 semanas de crescimento em solos infestados coletados de varias regiões do nordeste do

Paquistão. As áreas amostradas foram: 1. Khwazakhela, 2. Shin, 3. Fatehpur, 4. Madyan, 5. Miandam, 6.

Kher Abad, 7. Jukhtai, 8. Senay, 9. Shahgram, 10. Cham Ghari, 11.Ashrait, 12. Mankyal, 13. Kaidam, 14.

Balakot, 15. Ghruna, 16. Laikot, 17.Peshmal, 18. Kalam, 19. Gabral, 20. Ashuran, 21. Tarhana, 22. Bilal

Town, 23. Academy town, 24.Doraha, 25. Ghitti Ghatti, 26. Baffa, C. controle livre de virus, bandas

formadas na posição de 566 bp. 11

RESULTADOS E DISCUSSÃO

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Considerações finais

• Através do teste ELISA ou PCR ambos em tubérculos debatata com arco marrom ou interna sintomas de escurecimentoem carne do tubérculo. Concluiu-se que a ELISA ou PCR nãoconseguiu detectar PMTV em tubérculos sarnentos outubérculos com spraing verificou-se PMTV em algum extrato,mas não em outras partes do mesmo tubérculo. Pode serdevida a idade fisiológica ou a temperatura a que ostubérculos foram armazenados isso pode afetar a replicaçãodo vírus,ou a planta mãe foi infectada tarde e tem baixo títulodo vírus ou até mesmo alta es-pecificidade do TAS-ELISA.

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REFERÊNCIAS

• Ahmad, I., Iftikhar, S., Soomro, MH, Merz, U., 1996. Primeiro relato deSpongospora subterranea f.sp. subterranea na batata, no Paquistão. Planta Dis. 80,959.

• Arif, M., 1995. Estudos sobre Fungo Transmissão e Patologia Molecular da BatataMop-Top Furovirus. A Universidade de Edimburgo, Reino Unido (tese dedoutorado).

• Arif, M., Torrance, L., Reavy, B., 1994. Melhoria da eficácia da detecção de batatamop-top furovirus em tubérculos de batata e nas raízes e folhas de plantas de solo-isca.Batata RES. 37, 373-381.

• Arif, M., Torrance, L., Reavy, B., 1995. Aquisição e transmissão de batata mop-melhores furovirus por uma cultura de Spongospora subterranea f. sp. subterraneaderivadode cystosorus individuais. Ann. Appl. Biol. 126, 493-503.

• Arif, M., Reavy, B., Torrance, L., 1999a. Gene leitura através da proteína de batata-mop topo furovirus está associada com a aquisição e a transmissão do vírus atravésSpongospora f.sp subterranea substerranea. Pak. J. Bot. 31, 225-236.

14

• Arif, M., Reavy, B., Barker, H., 1999b. Engenharia alto nível de proteínacasaco medi-ciado resistência à transmissão do fungo da batata mop-topfurovirus em Nicotiana benthamiana. Pak. J. Biol. Sci. 2, 478-483.

• Arif, M., 2000. Vírus em forma de bastonete por fungos transmissíveis,transmissão e biologia patologia molecular. Pak. J. Biol. Sci. 3, 1194-1212.

• Barker, H., Webster, KD, Reavy, B., 1993. Detecção do vírus Y da batataem tubérculos de batata: uma comparação de reacção em cadeia dapolimerase e imunoabsorvente ligado a enzimaensaio. Batata RES. 36, 13-20.

• Barker, H., Reavy, B., McGeachy, KD, Dawson, S., 1998. Atransformação de Nicotiana benthamiana com gene da capa protéica dovírus da batata mop-top produz uma novela fenótipo de resistênciamediada pela proteína de revestimento. Mol. Plant-Micro. Inter. 11,626-633.

• Budziszewska, M., Wieczorek, P., Nowaczyk, K., Borodynko, N.,Pospieszny, H.,Obrepalska-Steplowska, A., 2010. Primeiro relato de batatavírus mop-top na batata na Polônia. Planta Dis. 94, 920.

• Calvert, EL, 1968. A reação de variedades de batata para enxugar-topvírus. Rec. Agric. Res.(Minis. Agric. Norte. Irlanda) 17, 31-40.

15

• Calvert, EL, Harrison, BD, 1966. Potato mop-top, um vírus transmitidopelo solo. Pathol Plant.15, 134-139.

• Chen, JP, Wilson, TMA, 1995. Taxonomia de vírus rígidos em forma debastonete transmitida por fungos. Agronomie 15, 421-426.

• Clark, MF, Adams, AN, 1977. Características do método de microplacasde enzima ensaio imunoenzimático para detecção de vírus de plantas. J.Gen. Virol. 34,475-483.

• Cowan, GH, Torrance, L., Reavy, B., 1997. A detecção de vírus capsídeobatata mop-top readthrough proteína em partículas de vírus. J. Gen.Virol. 78, 1779-1783.

• Crosslin, JM, 2011. Primeiro relato de batata vírus mop-top em batatas emWashington Estado. Planta Dis. 95, 1483.

• David, N., Mallik, I., Crosslin, JM, Gudmestad, NC, 2010. Primeiro relatode batata mop-top virus em Dakota do Norte. Planta Dis. 94, 1506.

• Dessens, JT, Meyer, M., 1996. Identificação de semelhanças estruturaisentre proteínas putativas de transmissão e Polymyxa Spongosporatransmitida bymoviruses e furovírus. Vírus Gen. 12, 95-99.

16

• Harrison, BD, Reavy, B., 2002. Potato Mop Top-Virus. Descrições CMI / AAB deFábrica Os vírus, No. 389. Commonwealth Mycological Institute / Association ofApplied Biólogos, Kew, Surrey, Inglaterra.

• Harrison, BD, Jones, RAC, 1970. Hospedar gama e propriedades de batata vírusmop-top.Ann. Appl. Biol. 65, 393-402.

• Harrison, BD, Jones, RAC, 1971. Fator que afeta o desenvolvimento de spraing emtubérculos de batata infectadas com o vírus da batata mop-top. Ann. Appl. Biol. 68,281-289.

• Harrison, JG, Searle, RJ, Williams, NA, 1997. Doença Powdery crosta de batata -umarevisão. Pathol Plant. 46, 1-25.

• Homs, MJ, Preece, TF, 1975. Spongospora subterranea f. sp. subterranea. No. 477.In:Descrições de Patogenicidade fungos e bactérias. CommonwealthMycologicalInstituto / Associação de Biólogos Aplicadas, Kew, Surrey, Inglaterra.

• Hussain, A., Farooq, K., 1995. Sistema de batata-semente no Paquistão. Em:Hussain, A. (Ed.), Pesquisa e Desenvolvimento da Produção de Batata no Paquistão.

• Processo daSeminário Nacional realizado em NARC, Islamabad durante 23-25 abrilde 1995. Paquistão Swiss Development Project Potato: PARC, Islamabad, Paquistão,pp 41-50.

• Jones, RAC, 1988. Epidemiologia e controle da batata vírus mop-top. In: Cooper,JI,Asher, MJC (Eds.), A evolução da Biologia Aplicada II. Vírus com FúngicasVetores. Ordem dos Biólogos Aplicadas, Wellesbourne, Reino Unido, pp 255-270.

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Nascemos sem saber

Vivemos aprendendo

E morremos sem saber nada 18

Abrigado !!!

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