Reunião Científica: mosaicismos e alterações genéticas na FIV

Oscar B. Duarte Filho, M.D.19 de janeiro de 2017

2

Fertility and Sterility® Vol. 101, No. 1, Jan 2017

3

Fertility and Sterility® Vol. 101, No. 1, Jan 2017

Mosaicismo

Erros na mitose pós-fertilização (2ª ou 3ª clivagem mais comum)

Genoma inativado Transcriptoma citoplasmático

Aneuploide-aneuploide ou aneuploide-euploide (75% em clivagem!!)

Aneuploide-euploide 50% corrigem em blasto normal– Divisão + lenta– Apoptose– Euploides ICM

Mosaicismo: aCGH

Estudo comparando FISH x aCGH de todo o blasto

Detecção depende do grau de mosaicismo– < 25% células aneuploides não detecta– 25-40% células aneuploides detecta em 3/5 dos casos– >40% detecta em todos os casos

Concordância de 97% entre ICM e TE

Mosaicismo: NGS

+ rápido, + barato, várias amostras de DNA ao mesmo tempo

MiSeq (Illumina): – >50% de aneuploidia para detectar mosaicismo– Aneuploidia de cromossomos inteiros + Contagem mitocondrial

Personal Genome Machine (Thermo-Fischer Sci)– >20% de aneuploidia para detectar mosaicismo– Aneuploidia de cromossomos inteiros, deleções e duplicações + Contagem

mitocondrial (+ sensível 800 kb – 1,2 mb)

Aumento a taxa de falso positivo até 33%

Mosaicismo: NGS

Garisi et al (2016)43 blastos mosaico descartados múltiplas biópsias:11,6% de blastos normais (TE e ICM)41,8% de blastos normais (ICM)TE = ICM (83% das vezes)Taxa global de predição de mosaicismo: 58,2%

Maxwell et al (2016)14 blastos mosaico descartados múltiplas biópsiasTaxa global de predição de mosaicismo: 48,3%

The detection of low-grade mosaicism within an embryo appears to be subject to some degree of sampling error.

Mosaicismo: NGS

Maxwell et al (2016)78 blastos euploides com CGH38 abortos 12 (32%) eram mosaico por NGS38 NV 5 (16%) eram mosaico por NGS

This suggests that some mosaic embryos result in live birth, but they may also be at increased risk of early pregnancy loss. The implantation potential of mosaic

embryos has yet to be determined, but data suggest that it may be reduced

Mosaicismo: grupos de risco?

Idade avançada NÃO é fator de risco (alterações pós-zigóticas)

In a study including 192 donor oocyte cycles from nine different IVF centers, rates of mosaicism detected by NGS performed

at a single genetics laboratory ranged from 17% to 47%

Mosaicismo: aconselhamento pré-teste

NGS: 1/3 dos embriões são mosaico!!! aconselhamento pré-teste sobre:– falsos positivos– Rebiópsia– incertezas sobre repercussão clínica (nascido vivo saudável, abortamento e não

implantação, repercussões neonatais)

Mosaicismo: qual transferir?

Princípios: Guideline (PGDIS)– Monossomia + euploide > trissomia + euploide

(cuidado trissomia:monossomia for 1:1, um dos dois pode ser subdiagnosticado)– Sexuais > autossomos– Mosaico com trissomias 1, 3, 4, 5, 6, 8, 9, 10, 11, 12, 17, 19, 20, 22, X, Y > 2, 7, 13, 14, 15,

16, 18, and 21 – Mosaicos: + dissomias uniparentais (piores dissomias para o feto: 7, 14 e 15)– Mosaicismo confinado a placenta (2,7, 16 e 22): RCF e OFIU

REGRAS PARA CROMOSSOMOS INTEIROS

Mosaicismo: aneuploidias parciais

Aneuploidias parciais/segmentares puras: não transferir

Mosaico euploide + aneuploidia parcial: ?

Mosaicismo: pré-natal nos mosaicos

NIPT: (?) ACMGG 13, 18 e 21; risco de mosaicismo confinado à placenta

CVS: risco de mosaicismo confinado à placenta

Amniocentese: pode não representar todos os tecido fetais

Tipo de estudo genético– Citogenética convencional– Microarray– FISH – Estudos para dissomias uniparentais

Mosaicismo: Conclusão

Physicians should understand that mosaic embryos may represent a third category between normal (euploid) and abnormal (aneuploid) embryos

It can be difficult to determine which mosaic aneuploidies may be the ‘‘safest’’ to transfer. Although counseling patients about the risks associated with trisomies 13, 18, and 21 and aneuploidies involving chromosomes 2, 7, 14, 15, and 16 may certainly be more straightforward, it is essential to emphasize that full or partial aneuploidies involving other chromosomes may not necessarily be safer to transfer; there is simply less known about the risks.

CNVs: copy number variations

Deleções parciais ou duplicações parciais

Origem na meiose paterna e materna por igual

NÃO TEM INFLUÊNCIA DA IDADE MATERNA

> 50 bp

Espectral: adaptativas doença letalidade

Como testar: Chomossome microarray (CMA) aCGH, SNP array

Quem testar: atrasos de DNPM e intelectual a/e (MM Syndromes)

CNVs: copy number variations

Cariótipo convencional > 5 Mb

Cariótipo de alta resolução 2-5Mb

CMA: 100 Kb

CMA: Pré-natal

2,5% dos cariótipos normais em pré-natal tinham CNVs de significado clínico

3,2% dos cariótipos normais em pré-natal tinham CNVs de significado incerto

CMA (aCGH, SNP): PGS

CNV: PGS

Resolução atual prejudicada pela necessidade de amplificação de DNA: as detectadas provavelmente patogênicas porque são grandes

Falta de banco de dados para interpretar os resultados– Benigno– Patogênico– VUS