Boas Práticas Laboratoriais Preparo de soluções Disciplina de Reumatologia 2011

Boas Práticas Laboratoriais

Preparo de soluções

Disciplina de Reumatologia2011

http://www.ruf.rice.edu/~bioslabs/schedules/Talks/Solutions_dilutions/BIOEDmixtures.htm

O que fazer antes do preparo

• Vc sabe quais são os reagentes?• Todos os reagentes estão disponíveis?• Quanto vc vai preparar?• Solução estoque ou de uso?• Vai usar algum produto tóxico? Veja no

rótulo• Que água vc vai usar?• Onde vai guardar sua solução?

Soluções

• Estoque – ex. tampões concentrados

• PBS, TBS, TAE, NaCl – sempre colocar nome e concentração do reagente, pH, quem fez e data

• Solução de uso – quantidade suficiente para a reação

• Alíquotas – substâncias sensíveis a congelamento/descongelamento

Preparo de soluções

• Solvente universal – água• As soluções podem ser:• peso/volume (g/v ou w/v) – x gramas de soluto

em um dado volume final de solução (ex 1g em 100ml = solução 1%),

• volume/volume (v/v)– x ml de soluto em x em um dado volume final de solução (líquidos),

• peso/peso – x gramas de soluto em 100 gramas de solução (uso em gradiente)

Molaridade (M)

• A molaridade de uma solução indica quantos moles da substância existem em 1 litro de solução.

• O mol é o peso molecular (PM) expresso em gramas e seu valor é encontrado no rótulo do frasco.

M =

Massa em gramas

PM x volume de solução (L)

Você sabia?

• 1 mol equivale ao peso de 6.02214078×1023 moléculas do composto

• Esse é o número de átomos de 12C presentes em 12g desse isótopo de carbono

• Esse número é conhecido como a constante de Avogadro

Ajuda dos universitários

• http://www.graphpad.com/quickcalcs/molarityform.cfm

• Chemical and radiochemical data

• Create and convert molar solutions

millimolarMass from volume &

concentration

Concentration:  

Formula Weight:   Volume:  

milliliter

Preparar a solução a partir de reagente sólido:

• Qual o peso (ou massa) molecular do reagente? Veja no frasco – MW, mol wt, MMs, PM

• Qual o volume de solução você vai preparar em litros, V.• Qual a molaridade da solução, M.• Calcule as gramas (g) de soluto necessárias usando a

equação:g = MW x M x V

• Exemplo: Preparar 800 mL de NaCl 2 M (MW = 58.45 g/mol).

g NaCl = 58.45 g/mol x 2 mol/L x 0.8 L g NaCl = 93.52 g NaClDissolva 93.52 g de NaCl em 400 mL de água destilada e então

adicione mais água até completar o volume de 800 mL.

Exemplo

Preparar 200 mL de solução 0,4M de NaCl

• PM de NaCl=58,43g/mol

• Solução 1M de NaCl - 58,43g em 1L

• g=58,43g/mol x 0,4mol/L x 0,2L

• g=4,674g

Molaridade a partir de solução em %

• Determine a molaridade de HCl 37,2% (peso)

(densidade 1,19 g/mL. MW 36,4 g/mol).• Calcule a massa de 1L da solução = 1000 mL x

1,19 g/mL = 1190 g• Calcule quanto dessa massa é de HCl = 1190 g

x 0,372 = 442,68 g• Calcule quantos moles correspondem a essa

massa = 442,68 g/36,4 g/mol = 12,1 moles• Portanto a molaridade é 12,1 M

Normalidade (N)

• N é o nº de equivalentes grama (Eq) de soluto por litro de solução. O nº de Eq é o mol dividido pela valência (nº de H+ ou de OH-).

• Ex: uma solução 1M de H2SO4 tem 1 mol por litro (peso molecular=98g). Como são 2 H+, o Eq do H2SO4 é 98/2=49g. Como temos 98g do soluto, e o Eq é 49g temos 2 Eq por litro e a solução é 2N.

• Como regra, a Normalidade é a Molaridade multiplicada pela valência.

Grau de pureza

• ACS grade• Mais alta qualidade possível (often equals or

exceeds the latest purity standards set by the American Chemical Society (ACS).

• Reagent grade• Pureza geralmente semelhante ao grau ACS.

Adequado para trabalho analítico e para laboratórios em geral.

• USP grade• Pureza suficiente para passar nos testes da

U.S. Pharmacopoeia (USP).

Diluições

Para diluir uma solução acrescentamos apenas solvente, a quantidade de soluto não é alterada

Solução inicial

adicionar solvente

Diluições

• A partir de uma solução estoque mais concentrada pode-se obter uma solução mais diluída empregando a fórmula abaixo:

Ci x Vi = Cf x Vf

• Ci = concentração inicial (estoque)• Vi= volume da solução inicial (estoque)• Cf = concentração final desejada• Vf = volume final desejado

Diluições

• Diluição 1:2 (ex.diluir soro em PBS)

• 1 parte do soluto (soro) + 1 parte de solvente (PBS) – o volume final é o dobro do inicial

• Diluição 1:10

• 1 parte do soluto + 9 partes do solvente

• O volume final é dez vezes o volume inicial

Atenção

• Em muitos protocolos encontramos:

• Prepare uma solução 100mM de cloreto de cálcio pH 7,5 (11,09 g de CaCl2 em 1L de água, acertar pH com HCl 1N)

• Quanta água devo colocar para dissolver o cloreto de cálcio?

• Só tenho CaCl2.2 H2O quanto devo pesar?

Acertando o pH

• Cuidados ao acertar o pH– O pHmetro está calibrado?– Sei calibrar?– Cuidados com os padrões de pH– Qual ácido ou base usar?– Tenho as soluções de ácido ou base que vou

usar? Não? – Sei preparar?

Dicas• Tris, Trizma-base, Tris-Cl o que significam?• Como diluir um ácido ou base concentrados?

Acessórios

Sites úteis

• http://www.flinnsci.com/sections/safety/chemicalSafety/L1051-1065_HS_SOLUTION_PREP.pdf

• http://www.carolina.com/category/teacher+resources/instructions+and+buying+guides/chemistry+instruction+manuals/solution+preparation+manual.do