Disciplina: Preparações citológicas e análises citogenéticas Maria Isabel Afonso da Silva P ó...

Disciplina: Preparações citológicas e análises citogenéticas

Maria Isabel Afonso da Silva

Pós-Graduação em Genética

Basofilia e Acidofilia: coloração do Panótico

Substratocatiônico

Substratoaniônico

Coranteaniônico

Corantecatiônico

Acidofilia

Basofilia

Afinidade eletrostática: um corante ionizado em uma solução reage com um substrato de carga

iônica oposta.

Reações Citoquímicas Mediadas por Ligações Eletrostáticas

Basofilia Corantes Básicos (Catiônicos)

Azul de metileno

Azul de toluidina

Azul de alcian

Substrato carregado negativamente (aniônico) reage eletrostaticamente com um corante carregado positivamente (catiônico).

Corantes:

Basofilia

Fosfatos

(ácidos nucléicos)

Sulfatos

(Glicosaminoglicanos sulfatados)

Carboxilas

(Proteínas e açúcares ácidos)

Grupamentos negativos

Basofilia

Xilydine Ponceau

Sírius Red

Orceína

Fast green

Os corantes reagem com os elementos que possuem cargas positivas na célulaEx: proteínas, que podem apresentar radicais básicos de seus aminoácidos ionizados (NH3+).

Reação de Acidofilia - Corantes ácidos (Aniônicos)

Grupamentos se ionizam na dependência de pHs diferenciados

Obtidos a partir de solução tampão em que os corantes são diluídos

Reação de Acidofilia

SUBSTRATO CORANTE EXEMPLOS

BASOFILIA

- aniônico

+ catiônico

- Azul de Toluidina - Azul de metileno - Azul de alcian - Hematoxilina

ACIDOFILIA

+ catiônico

- aniônico

- Xylidine ponceau - Sirius red - Fast Green - Eosina - Orceína

Hematoxilina (+)

Substratos (-)

Núcleos

(grupam/os fostato do DNA e RNA)

ácidos nucleicos, aminoácidos ácidos (aspártico, glutâmico).

Azul

Eosina (-)

Substratos (+)

Citoplasma

(grupam/o NH2+)

aminoácidos básicos (lisina, arginina, histidina)

Rosa

Hematoxilina Eosina

(Mus muscullus) (ASSIS & AZEREDO-

OLIVEIRA, 2002)

Hematoxilina Eosin

G

A

Ep

ML

V

A

L

Normal

Próstata

5.0 µm

5.0 µm

Glândulas acessórias de morcego

Basofilia: Como a hematoxilina- grupamentos fosfatos dos ácidos nucléicos (Núcleo)

Como a eosinaAmino de resíduos protéicos (NH3)- (núcleo e Citoplasma)

Acidofilia:

• Coloração de rotina para análise geral da morfologia das células sanguíneas• Facilita a identificação e diferenciação dos leucócitos

Panótipo (Hematocor-BiológicaR)

Reação de Acidofilia/Basofilia-Mediadas por Ligações Eletrostáticas

PANÓTICO RÁPIDO LB

1)Finalidade:Conjunto para coloração rápida em hematologia.

2) Princípio:A extensão hematológica é submetida à ação de um fixador e duas soluções corantes, por meio de imersões, ao final da última, encontra-se pronto para leitura.

CORANTE RAPIDO PARA HEMATOLOGIA COM1 FIXADOR-TRIARILMETANO E CORANTES / 2-XANTENO / 3-TIAZINA (de 500 ml)

O material deve ser mantido em temperatura ambiente, em local fresco, seco e protegido da incidência direta de luz solar

Panótico rápido 1: compõe-se por uma solução de triarilmetano a 0,1%. Panótico rápido 2: compõe-se por uma solução de xantenos a 0,1%. Panótico rápido 3: compõe-se por uma solução de tiazinas a 0,1%.

Phrynops geoffroanus ou “Cágado-de-Barbelas”

Amostras Sanguíneas

Punção Cardíaca

Seio venoso cervical

Descartada a primeira gota – técnica de esfregaço – extensões sangüíneas - fixação.

Hemograma

• Contagem de trombócitos• Contagem diferencial dos leucócitos:

- monócitos

- linfócitos

- neutrófilos

- azurófilos

- heterófilos

- eosinófilos

- basófilos

Células Vermelhas de Quelônios

Atuam na inflamação, promovem fagocitose; como célula hemostática

Monócito• Combate a doenças infecciosas. • 3% a 20%

Linfócitos

• Citoplasma basofílico.• Resposta imune - infecção viral.•15% a 90%

Neutrófilo

• Respondem à infecções bacterianas.• 0,5% a 10%

Azurófilo+Monócito

2% a 5%

Células brancas de Quelônios

Eosinófilo+Heterófilo

• Encontrados em infecções parasitárias.• 7% a 20%

Heterófilo

• Combate a infecções bacterianas.• 20% a 40%

Basófilo

• Reações imunes. • 10% a 25%

Células brancas de Quelônios

Constituem o maior nº de células do sangueEm média 4,5 milhões na mulher e 5,5 milhões no homem.Medem aproximadamente 7,5 um de diâmetro

Agranulócitos:• Núcleo sem segmentação e apenas granulações azurofílicas, quase imperceptíveis: • linfócitos e monócitos.

Granulócitos:• Núcleos lobulados de forma variável (polimórficos)• grânulos citoplasmáticos proeminentes, cujas características tintoriais diferem conforme a classe à qual pertence o granulócito: • neutrófilos, eosinófilos ou basófilos.

Neutrófilo

• 40-70%• Medem 12-15um de diâmetro.• O citoplasma é acidófilo, com muitos grânulos finos. • O núcleo possui cromatina em grumos, com 2-5 lóbulos distintos• Função fagocitária.

Linfócito

•20-50%• Medem de 6-12 um de diâmetro.• Possuem citoplasma basófilo, pequeno, escasso. • O núcleo apresenta-se esférico com cromatina bastante condensada.Linfócitos T: imunidade celularLinfócitos B: produção de anticorpos.

Monócito

•2-10%• diâmetro de 12-20 um.• Apresenta um núcleo irregular, frequentemente lobulado, e citoplasma cinza-azulado opaco, com grânulos azurófilos finos.• São células precursoras do sistema fagocítico mononuclear.

Eosinófilo

•0-8%• São ligeiramente maiores do que os neutrófilos: 12-17 um.• O núcleo é geralmente bilobulado, mas pode ser trilobulado.• Os grânulos são esféricos e maiores, preenchem o citoplasma e coram-se de avermelhado (eosina).• São importantes nas doenças alérgicas e parasitárias

Basófilo

• 0-3%• Apresentam o citoplasma com granulações pretas e grandes, irregulares, que têm afinidade por corantes básicos.• O núcleo tem dois segmentos, geralmente encobertos pelas granulações.• Estão envolvidos nas reações imediatas de hipersensibilidade (asma).

Plaquetas

• São pequenos fragmentos citoplasmáticos presentes no sangue circulante. • Medem 2-4um de diâmetro.• Atuam na coagulação sanguínea, na retração e dissolução de coágulos