Érika Carvalho Silva Disciplina: Termogênese nos seres vivos Professora: Ana Maria Landeira Estudo...

Érika Carvalho Silva

Disciplina: Termogênese nos seres vivosProfessora: Ana Maria Landeira

Estudo do papel da proteína CIDEA

no controle do estresse oxidativo

celular

Família Cide

(Liang et al., 2003)

(Cory, 1998)

Cidea e Cideb como indutoras de apoptose

(Inohara et al., 1998)

Cide3 como indutora de apoptose

(Liang et al., 2003)

293T controle 293T CIDEB 293T CIDE3

Expressão das proteínas Cide em humanos

(Inohara et al., 1998)

(Liang et al., 2003)

Camundongos knockout

CIDEA e UCP1

AMPK e suas vias de sinalização

AMPK e Cidea

Modelo proposto

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

Knockout

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

Knockout

Superexpressão

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

X

Superexpressão

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

X

H+

H+ H+ H+ H+ H+H+H+

Superexpressão

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

X

H+

H+ H+ H+ H+ H+H+H+

ROS

Superexpressão

MOM

MIMCadeia

Transportadora de Elétrons

F0

F1ADP

ATP

H+ H+ H+

UCP

H+H+

H+

X

H+

H+ H+ H+ H+ H+H+H+

ROS

Superexpressão

Morte celular!!!

Objetivo

Caracterizar o papel da proteína Cidea no

controle do estresse oxidativo

1) Estabelecimento do modelo

Linhagem Jurkat de célula T e células primárias

• Western blot para Cidea e UCP2

2) Colocalização e inibição de UCP2 por Cidea

• Microscopia confocal

• Imunoprecipitação de proteínas • FACS para DiOC6

3) Efeito do estresse oxidativo: tratamento com H2O2

• Célula Cidea-KO é mais resistente ao tratamento com peróxido de hidrogênio?

• Célula UCP2-KO produz mais espécies reativas de oxigênio?

• Após o tratamento com peróxido de hidrogênio, ocorre diminuição da interação entre

Cidea e UCP2?

• Doses celulares letais de peróxido de hidrogênio associado a tratamento com FCCP

em Cidea-KO inibe essa morte?

AMPK na proteção celular do estresse oxidativo

AMPK na proteção celular do estresse oxidativo

4) Papel de Cidea na regulação de AMPK e outras vias metabólicas• Ocorre fosforilação de AMPK após tratamento com peróxido?

• Cidea é capaz de ubiquitinar AMPK e levá-la para a degradação?

• Não degradação de AMPK necessária para sobrevivência após tratamento com

peróxido?

• O que ocorre com enzimas da via glicolítica?

5) Cidea como sensor redox?

• Modelagem molecular e localização das cisteínas.

• Mutagênese sítio-dirigida das cisteínas para avaliar capacidade de responder ao

estresse oxidativo.

Aceito para The Journal of Biologial Chemistry

Outra proposta!

Será um inibidor das proteínas CIDE um

futuro medicamento anti-obesidade???