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HEPATITE AHEPATITE ALaboratório - Técnicas e FluxosLaboratório - Técnicas e Fluxos
Laboratório de HepatitesServiço de Virologia – IAL
Revisado em Novembro de 2006
Aula Ministrada por Cláudia P. Saraceni – IAL, ANO 2002
Descoberta do VHA há mais de 2000 anos relatos de casos
início do Sec. 20 - “hepatite infecciosa”
1947 - introdução dos termos hepatite A e B, que foram posteriormente adotado pela OMS
estudo realizado em instituição para deficientes mentais - agente MS1
1973 - inoculação em voluntários com esta linhagem Feinstone e cols. conseguiram visualizar o
vírus nas fezes por imunomicroscopia eletrônica
1979 - Provost e Hilleman cultivo do VHA em cultura de células
Família Picornaviridae
Gênero Hepatovirus
Classificação do VHA
início da década de 80 - Família Picornaviridae, provisoriamente enterovírus tipo 72.
• ácido nucleíco - RNA• tamanho (27 a 32 nm)• não-envelopado• simetria icosaédrica• estrutura do genoma• replicação viral
Classificação do VHAVHA X outros Picornavirus
1. seqüência de aminoácidos e nucleotídeos, e tamanho das
proteínas diferentes
2. cresce com dificuldade em cultura de células, sem induzir efeito
citopático
3. é mais resistente à temperatura e às drogas
4. possui apenas um sorotipo e um único local de neutralização
imunológica
5. não reage contra um anticorpo monoclonal específico para
enterovírus
Gênero Hepatovirus
Estabilidade do VHA
estabilidade relativamente alta em estudos experimentais, manteve a infectividade:
• água e solo até 3 mês a 25oC• superfícies inertes 1 mês a 25oC
resistência ao calor• vários anos a -20oC• 1 hora a 60oC
resistente aos desinfetantes mais comuns: éter, clorofórmio, Freon
no ambiente, viável dias até meses: água, água do mar, ostras, verduras
Inativação do VHA
fervura a 100oC por 1 minuto
radiação ultravioleta
etanol 70% a 25oC por 60 min
hipoclorito de sódio (1:100)
autoclave 121oC por 20 min
Diagnóstico
exame clínico
provas de função hepática transaminases bilirrubinas fosfatase alcalina gama-glutamiltransferase
sorologia• marcadores virais específicos
Transaminases
marcadores bioquímicos mais utilizados:• marcadores sensíveis de lesões do fígado;• atingem picos elevados no início dos sintomas
valores de referência• homens, mulheres, crianças e > 60 anos• kits / laboratório
x L.S.N.: no de vezes acima do limite superior normal
Transaminases
ALT - alanina aminotransferase
TGP - transaminase glutâmico pirúvica
AST - aspartato aminotransferase
TGO - transaminase glutâmico oxalacética
Transaminases
mais específica, principal/e no fígado
exclusivamente citoplasmática
fígado, coração, músculo, rins
citoplasma e mitocôndria
ALT
AST
hepatites virais: ALT>AST
Transaminases
Fatores que podem causar alterações:
hora do diahora do dia - ALT pode variar até 45% durante o dia
entre os diasentre os dias - ALT 10 a 30% de variação
AST 5 a 10% de variação
raça e gênero - AST 15% mais alta em afro-americanos
exercício - AST principalmente (3x)
ALT mais baixo (20%) nos que fazem exercício regular/e
IMC - ALT e AST mais altas (40 a 50%) em indivíduos com IMC mais alto
Bilirrubinas
pigmento biliar
aumentos são específicos de doenças do fígado e
das vias biliares
bilirrubina total, direta e indireta
valores de referência variam com gênero e idade
hepatites virais: BD>BI
Bilirrubinas
Fatores que podem causar alterações:
hora do diahora do dia - pode variar 15% a 30% durante o dia
ingestão de alimentosingestão de alimentos
raça - mais baixa em afro-americanos (33% homens;15% mulheres)
luz - cai 50% em 1h de exposição
gestação - cai 33% no segundo semestre
Diagnóstico Específico
Pesquisa do vírus
Pesquisa de anticorpos
Pesquisa do vírus
imunomicroscopia eletrônica• fezes
técnicas de biologia molecular • fezes
• soro
Pesquisa de anticorpos
anti-VHA IgM• marcador de infecção recente
anti- VHA IgG• conferem imunidade duradoura
• marcador soroepidemiológico
• indicador de contato prévio
Pesquisa de anticorpos
amostra clínica • soro saliva papel de filtro - polpa digital
SORO
Coleta• colher em tubo com gel • separar o soro dentro de 4 horas
Transporte• sangue - T ambiente• soro - no gelo
Conservação• geladeira até a realização do ensaio
Pesquisa de anticorpos
Testes utilizados
1a geração• reação de fixação de complemento
2a geração• hemaglutinação
3a geração - imunoensaios• radioimunoensaio
• ELISA
ELISADeterminação qualitativa do anti-VHA IgM
ELISA por Captura
ac - soro
VHA
E
E
E
E
anti-VHAmonoclonal
peroxidaseconjugado
cromógeno/substrato
fase sólida
ac anti igM
ALTALTALTALT
anti-HAV IgManti-HAV IgM
anti-HAV IgGanti-HAV IgGanti-HAV IgGanti-HAV IgG
Meses após a exposiçãoMeses após a exposição
Tít
ulo
Tít
ulo
0 1 2 3 4 5 6 12
24
Hepatite A Eventos clínicos e sorológicos
Hepatite A Eventos clínicos e sorológicos
sintomassintomas
VHA nas fezes
Surto de hepatite A em Vargem Grande Paulista
Bairro de Tijuco Preto
27 de janeiro a 15 de março
INVESTIGAÇÃO DE CAMPO
visita aos domicílios, escolas, local de trabalho
55,1% das solicitações atendidas
problemas com a coleta
Surto de hepatite A em Vargem Grande Paulista
idade variou de 1 a 23 anos, 70% <10 anos
total 18 casos:
8 assintomáticos
10 sintomáticos (médias):
bilirrubina total: 4,6 mg/dl (0,5 - 14,8)
direta: 3,4 mg/dl (0,1 -11,4)
indireta: 1,3 mg/dl (0,3 - 3,4)
ALT: 11,8 x L.S.N. (0,4 - 38,1)
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