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Métodos e inovações em microscopia
eletrônica aplicada a Paleoparasitologia
Juliana Dutra
Laboratório de Paleoparasitologia
ENSP-FIOCRUZ
Como os parasitos em material arqueológico podem ser estudados?
• Sir Armand Ruffer (1910) – primeiras observaçoes de ovos de parasitoem tecido mumificado
• Callen and Cameron (1960) – técnica de reidratação• Sedimentação espontânea – a técnica de Lutz
Fotos: Lab. Paleoparasitologia
Microscopia de luz – Primeira etapa
Diphyllobothrium sp. Acanthocephala sp.
Trichuris trichiura Pediculus capitis
Como inovar o diagnóstico?
• Microscopia eletrônica;• Primeiros estudos – Macadan & Sandison (1969), Horne & Lewin
(1977);
Pele. Somente a derme está preservada e
consiste em uma trama de fibras de colageno,
com vários danos causados pela tecnica de
processamento (X 21,000). Macadan & Sandison,
1969
Ovo de Taenia( x 18 800) Hemacia achada em conteúdointestinal e vista pormicroscopia de varredura
Horne & Lewin (1977)
Microscopia eletronica de varredura
• Alto vácuo• Baixo vácuo• Modo ambiental
Qual a melhor técnica para material antigo?
Amostras antigas
• Estado dessecado• Fragilidade• Artefatos
MEVAlto vácuo
Vácuo < 6e-4 Pa Fixação química Desidratação em etanol
Secagem porponto crítico
metalização
Maior intensidade de sinal – melhor resolução
Material pode serguardado
Muito dano ao material Alto custo
Alto Vácuo
Baixo vácuo
• Sem fixação química;• Sem metalização;• Sem danos a amostra que pode ser
guardada ou reutilizada em outrastécnicas;
Observação direta
Baixo vácuo
Vácuo (low) < 10 to 130 Pa
Modo Ambiental
Modo ambiental< 10 to 2600 Pa
• Permite a imagem de material umido;• Menor manipulação• Reduz a chance de artefatos;• Baixa temperatura – estágio de Peltier• Amostras só podem ser observadas
uma única vez.
Observação diretaem água
Conclusões
• Amostras antigas precisam de protocolos especiais• O surgimento de artefatos é problemático pois, em alguns casos, não
há material moderno para comparar;• As várias técnicas de MEV precisam ser adaptadas para a natureza
dessecada ou úmida da amostra;• Atualmente o baixo vácuo é a opção mais promissora para materiais
antigos.
Apoio: FAPERJ and CNPq
Metas
• Estabelecer protocolos padronizados para material antigo• Criar um banco de dados com informações tridimensionais de ovos de
parasitos, amostras de pelos, dentes, cabelo etc• Disponibilizar o acesso aos protocolos visando padronizar o uso de
material arqueológico, diminuindo os danos a peças de coleção.
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