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MONOGRAFIA:
EFEITO DA OUABAÍNA NA EFEITO DA OUABAÍNA NA RECICLAGEM DE VESÍCULAS RECICLAGEM DE VESÍCULAS
SINÁPTICAS EM JUNÇÃO SINÁPTICAS EM JUNÇÃO NEUROMUSCULARNEUROMUSCULAR
Aluna: Luciana Ferreira Leite
Orientadora: Profª. Dra. Cristina Guatimosim Fonseca
Laboratório de Biologia da Neurotransmissão
JUNÇÃO NEUROMUSCULAR DE RÃ
http://academic.wsc.edu/faculty/jatodd1/351/ch6outline.html
Ca++
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
Abreu, B.J.
http://www.standford.edu/group/Urchin/GIFS/exocyt.gifhttp://thalamus.wustl.edu/nonetlab/ResearchF/svcycle.html
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
http://www.erin.utoronto.ca/~w3bio315/RME.htm
http://www.neuro.ki.se/molsyn/Brodin_home.html
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
RECICLAGEM DE VESÍCULAS SINÁPTICAS
Royle and Lagnado, 2003
+ Positivehead
Lypophilic tail
bridges
FM1-43 STAINING
Abreu, B.J.
FM1-43 STAINING
Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min
FM1-43 STAINING
Marcação com estímulo elétrico de 20Hz por 10 min
FM1-43 DESTAINING
Abreu, B.J.
COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)
COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)
• Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)
COMPOSTOS QUE AFETAM A RECICLAGEM
• OUABAOUABAÍNAÍNA (Adam-Vizi & Ligeti, 1984; Haimann et al, 1985; Prado et al, 1990; Prado et al, 1993; Lomeo et al, 2003).
• α-Latrotoxina (Ceccarelli & Hurlbut, 1980; Henkel & Betz,1995)
• Propionato e Acidificação (Lindgren et al, 1996)
OBJETIVOS
Objetivo geralObjetivo geral
- Investigar o efeito da ouabaína na reciclagem de vesículas sinápticas “ in vivo”
Objetivos específicosObjetivos específicos
- Padronizar a técnica de marcação de terminais axônicos com a sonda fluorescente FM1-43.
- Investigar o efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas.
- Investigar o efeito da ouabaína na endocitose de vesículas sinápticas.
- Investigar se a ação da ouabaína é dependente de cálcio extracelular.
OBJETIVOS
RESULTADOS
Marcação e desmarcação dos terminais nervosos com estímulo elétrico
A
B
Desmarcação evocada por estímulo elétrico
Tempo (min)
0 2 4 6 8 10 12
Fluo
resc
ênci
a (%
)
40
60
80
100
120
C
1 terminação / 6 spots
RESULTADOS
Efeito da ouabaína na marcação de terminais nervosos
Estímulo elétrico Ouabaína
RESULTADOS
Efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas
Desmarcação evocada pela ouabaína
Tempo (min)
0 10 20 30 40 50 60 70
Flu
ore
scên
cia
(%)
40
60
80
100
120
Queda sem estímuloDesmarcação com 100 µMde ouabaína
34 spots 6 terminações
RESULTADOS
O efeito da ouabaína na exocitose de vesículas sinápticas é dependente de cálcio extracelular?
Desmarcação com Ouabaína
Tempo (min)
0 10 20 30 40 50 60 70
Flu
ore
scên
cia
(%)
40
60
80
100
120
Desmarcação sem estímuloOuabaína em Ringer NormalOuabaína em 0Cálcio + EGTA(2mM)
68 spots 12 terminações
RESULTADOS
Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:
RESULTADOS
Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:
• Bloqueia a endocitose
RESULTADOS
Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:
• Bloqueia a endocitose
• Promove a exocitose
RESULTADOS
Efeitos da ouabaEfeitos da ouabaína:ína:
• Bloqueia a endocitose
• Promove a exocitose
• O efeito da ouabaína é independente de cálcio extracelular
PERSPECTIVAS...
AGRADECIMENTOS ...
OBRIGADA PELA
ATENÇÃO!
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