Aulas 01-histórico-e-microscopia

CITOLOGIA: HISTÓRIA E MICROSCÓPIOS

UNIVERSDADE DE SÃO PAULOCOLÉGIO TÉCNICO DE LORENAENSINO MÉDIO – PRIMEIRO ANO

Marco Alcântara – marko@usp.br

AULAS 01

Linha 1Linha 2

Linha 3Linha 4

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Coluna 1

Coluna 2

Coluna 3

Roteiro da aula

HISTÓRICO

MICRAOSCÓPIO ÓPTICO E TÉCNICAS DE USO

MICROSCÓPIO ELETRÔNIO: UMA REVOLUÇÃO NA CITOLOGIA

OUTRAS TÉCNICAS UTILIZADAS EM MICROSCÓPIO ÓPTICO

TAMANHOS E INTRUMENTOS

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Até início do séc. XIX:Microscópio: “brinquedo sofisticado”- Pernas de mosca, olhos facetados...

Dois personagens mudaram isso: - Robert Hooke – Inglaterra - Anton Von Leeuwenhoeck – Holanda

HISTÓRICO

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ROBERT HOOKE

Física – c/ Robert Boyle –gasesQuímicaPaleontologiaAstronomiaArquiteturaTecnologia naval,Meteorologia – barômetro,anemômetro, higrômetro

Figura 1: Robert Hooke

Problema: Isaac Newton...

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Hooke: usou um dosmelhores microscópioscompostos da épocaObservações: Esponjas,insetos, penas deaves...

Figura 2: microscópio de Hooke

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+ Famosa: cortiçaNa época: não se entendia a cortiça: leve e resistente.

Celas de monge –célulasNa época: não sabiao que eram...Termo utilizado atéhoje!

Figura 3: Foto de cortiça vista ao microscópio óptico

1665 – Livro Micrographia

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ANTONIE PHILIPS VON LEEUWENHOEK

Tudo menos cientista: Comerciante de tecidos Provador de vinhos Funcionário público(Provavelmente influenciado porHooke)

Figura 4: Anton von Leeuwenhoeck

1as observações de protozoáriosBactériasEspermatozóides – “animálculos”Glóbulos vermelhos do sanguePlacas dentárias – “animaizinhos”

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Sucesso de Leeuwenhoek:

Lentes alta qualidade. Microscópios simples.Evitava “aberrações cromáticas” – 40-50x.

Enviava cartas para a Royal Society (Londres).Acabou ficando sócio (nunca foi nas sessões)

Esses 2 abriram caminho para outros:

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SCHLEIDEN & SCHWANN:

Séc. XIX – Teoria Celular“Todo ser vivo é composto por células”

VIRCHOW:

“Toda célula provém de outra célula”

TEORIA CELULAR

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Figura 5: O microscópio óptico e seus componentes

MICROSCÓPIO ÓPTICO E TÉCNICAS DE USO

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Figura 6: O microscópio óptico e seus componentes

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Figura 7: princípio de funcionamento do MO

PRINCÍPIO DE FUNCIONAMENTO DO MICROSCÓPIO ÓPTICO

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Princípio:

Feixe luz atravessa objeto fino → sistema de lentes → ampliação

Objeto grosso pode ser observado MO? Fatias muito finas: micrótomo

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Figura 8: Dois exemplos de micrótomos

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Outro problema prático:A luz atravessa igualmente diversos componentes Ex: núcleo e citoplasmaComo resolver?

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Coloração: corantes têm afinidades especiais porcertas partes da célula.

Hematoxilina (azul): Básicocolore ácido – núcleo, ribossomos

Eosina (rosa): Ácidocolore bases – citoplasma

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Corantes básicos ou nucleares - Estruturas

Azul de metileno - Cora o núcleo de azul

Vermelho neutro - Acumula-se em vacúolos

Água iodada - Cora o núcleo e amiloplastos

Corantes ácidos ou citoplasmáticos - Estruturas

Eosina - Citoplasma

Fucsina ácida - Citoplasma

CORANTES SELETIVOS

pH OU CARGA ELÉTRICA DA PROTEÍNA

Corantes neutros - Estruturas

Violeta de Genciana - Cromossomas de células vivas em divisão

Soluto de lugol - Grãos de amido, paredes celulósicas

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CORANTES NATURAIS - ORIGEM

Carmim - Ovários de um insecto - Cochonilha

Hematoxilina - leguminosa

Anil - Anileira – papilionácea

Orceína - Líquen

Açafrão - Estames de Crocus sativus

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Figura 9: Células hepáticas de camundongo tratadas comdiversos corantes e fixadores

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Problema:estruturas celulares rapidamente deterioram

Antes de corar: preciso fixar:Conservar estruturas celulares

Métodos Físicos Métodos Químicos

Calor Aldeídos Ácido acético Tetróxido de ósmio

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Figura 10: preparação de uma lâmina para microscópio óptico

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Duas fases: antes e depois do MEME: 1946

Feixe de elétrons, não feixe de luz:Aumentou poder de resolução

Poder de Resolução:capacidade de distinguir dois objetos

Aumento máximo:MO: 1.500xME: 300.000x (ou mais)Mais recente:ME de varredura – tridimensionais

MICROSCÓPIO ELETRÔNICO: UMA REVOLUÇÃO NA CITOLOGIA

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Figura 11: Células de ameba ao MO, ME e MEV

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CAMPO CLAROComum, já conhecidonosso...

Figura 12: Microscópio óptico de campo claro

OUTRAS TÉCNICAS UTILIZADAS EM MICROSCÓPIOS ÓPTICOS

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CONTRASTE DE FASEÍndice de refração ≠: retardoda luz é captado por anelespecial na objetiva

Aumenta ≠ contraste entrecélula e meio circundante,possibilita observar célulasnão coradas

Figura 13: Microscópio óptico de contraste de fase

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CAMPO ESCUROLuz atinge lateralmenteobjetoNa objetiva: luz dispersadapelo objeto

Ótimo para organismosmóveis: ver flagelos

Figura 14: Microscópio óptico de campo escuro

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FLUORESCÊNCIAObjetos que emitem corquando iluminados por umacor ≠Autofluorescência ou corantesfluorescentes

Estudos diagnósticos clínicose ecologia microbiana

Figura 15: Microscópio óptico de fluorescência

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Figura 16: Tamanho das estruturas

Unidades de medida: m → mm → µm → nm

TAMANHOS E INSTRUMENTOS

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Figura 17: comparação entre os tamanhos de diferentes estruturas

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