ANAIS 2016 - engene-sbg.com.br · XXI Encontro de Genética do Nordeste UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO FIOCRUZ PERNAMBUCO SÍNTESE BIOTECNOLOGIA Biogene Promoção e Realização Apoio

XXI Encontro de Genética do Nordeste

UNIVERSIDADEDE PERNAMBUCO

FIOCRUZPERNAMBUCO

SÍNTESEBIOTECNOLOGIA

Biogene

Promoção e Realização

Apoio

ANAIS 2016

ENGENE

2016

Presidência: Dra. Ana Maria Benko-IsepponVice-presidência: Dr. Reginaldo de CarvalhoCoordenação científica: Dra. Neide Santos

Vice-coordenação científica: Dr. Tercílio Calsa-Jr.

Universidade Federal de PernambucoRecife-PE, 29/11 a 02/12/2016

1

Sumário

Área de Tematica Página inicial Página Final

Ensino de Genética e Biologia Molecular 3 30

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética 31 46

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução 47 51

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular 52 90

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético 91 141

Genética, Evolução e Melhoramento Animal 142 176

Genética Humana e Médica 177 257

Genética de Microrganismos 258 307

Mutagênese e Farmacogenômica 308 352

Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas 353 417

Genética Forense 418 420

2

Coordenação Cientifica por área Nome Função Área Instituição

Marise Bezerra Sobreira Coordenadora Ensino de Genética e Biologia Molecular UPE/Genética

Marília de França Rocha Vice-Coordenadora Ensino de Genética e Biologia Molecular UPE/Genética

Ederson Akio Kido Coordenador Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas UFPE/Genética

José Ribamar Ferreira Neto Vice-Coordenador Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas UFPE/Genética

Rodrigo Augusto Torres Coordenador Genética, Evolução e Melhoramento Animal UFPE/Zoologia

Rita de Cássia de Moura Vice-Coordenadora Genética, Evolução e Melhoramento Animal UPE/Genética

Paula Sandrin Garcia Coordenadora Genética Humana e Médica UFPE/Genética

Jaqueline de Azevedo Silva Vice-Coordenadora Genética Humana e Médica UFPE/Genética

Will Barros Pita Coordenador Genética de Microrganismos UFPE/Antibióticos

Anna Carolina Soares Almeida Vice-Coordenadora Genética de Microrganismos UFRPE/Genética

Ana Christina Brasileiro Vidal Coordenadora Mutagênese e Farmacogenômica UFPE/Genética

Silvany Araújo Vice-Coordenadora Mutagênese e Farmacogenômica UFRPE

Ana Maria Benko Iseppon Coordenadora Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas UFPE/Genética

Antonio Mauro Rezende Vice-Coordenador Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas CPqAM-

FIOCRUZ

Valdir de Queiroz Balbino Coordenador Genética Forense UFPE/Genética

Marília de França Rocha Coordenadora Genética na Praça UPE/Genética

Vilma Loreto da Silva Vice-Coordenadora Genética na Praça UFPE/Genética

3

Ensino de Genética e Biologia Molecular

"PERFIL GÊNICO": UMA FORMA LÚDICA DE APRENDER GENÉTICA HUMANA

Patricia de Souza Cavalcante Carnaval1; Arthur Rodrigues da Silva

1; Iully Karla Neves Gusmão

1; Pedro

Henrique do Bomfim Nascimento1; Igor Vieira de Melo Alves

1; Rildo Ney Tavares da Silva

1; Daniele Rodrigues

de Amorim1; Elizangela Zuleide de Melo Santos

1; Anny Cibelly Campelo Barbosa

1; Isliria Stephany Correia do

Nascimento1; Vilma Loreto

2.

E-mail: [email protected]

(1)Discente do Curso de Ciências Biológicas Licenciatura - Centro de Biociências - UFPE;

(2)Laboratório de

Genética e Citogenética Animal e Humana - Departamento de Genética - Centro de Biociências - UFPE

RESUMO No ensino básico, a Biologia sofre com a falta de percepção dos alunos, que não veem validade no que estudam,

além de professores despreparados, que cooperam com este cenário. Este problema cresce ainda mais em relação

aos conteúdos de genética, que solicitam muito da imaginação dos alunos. Estes, por sua vez, deparam-se com o

ensino de genética estagnado, com pouco envolvimento, e a classificam como difícil, mal sabendo definir "gene".

Para evitar que alunos concluam o Ensino Médio achando que as Leis de Mendel são "letras", este trabalho propõe

o uso do Lúdico como meio relevante no ensino de genética, sobretudo a genética humana. Um importante aliado

são os jogos didáticos, que trazem vantagens pedagógicas, tais como cognição, afeição, socialização e criatividade.

O objetivo do presente trabalho foi desenvolver um jogo estimulador do processo de ensino/aprendizagem da

herança de cromossomos sexuais humanos de maneira mais lúdica e menos abstrata. Galgou-se também contribuir

para práticas inovadoras de ensino, como o Ensino por Investigação, despertando assim novas práticas avaliativas

docentes e explorar e melhorar as relações interpessoais dos alunos, de modo a criar um ambiente de troca de

saberes. Assim, surge o "Perfil Gênico", um jogo de tabuleiro, com cartas de dicas acerca da temática "genética" e

regras definidas, que tem como público alvo alunos do Ensino Médio e graduandos de Ciências Biológicas. Nesse

material constam pontos abordados em aula teórica de cromossomos sexuais de humanos, como a definição da

herança dos cromossomos, doenças ligadas ao sexo. Para a sua construção foi necessário papelão e papel ofício

para elaboração das cartas que contém as dicas; papel A3 para impressão do tabuleiro; cola de isopor, tesoura,

tintas de tecido e tampas de garrafa PET para as peças do tabuleiro. Foi desenvolvida uma linguagem simples e

direta, para tornar a atividade um momento de muito aprendizado e divertimento, onde os alunos puderam

estimular seus conhecimentos prévios de forma lúdica. Por ser uma proposta de prática de ensino, espera-se que o

sucesso deste jogo venha em forma de ganho de conhecimentos de genética, desenvolvimento cognitivo e

interpessoal e fomento de novas práticas pedagógicas. Portanto, o "Perfil Gênico" é uma forma de envolver o

lúdico com a atividade investigativa, tornando-se um aliado para o ensino, quebrando a barreira do ensino

tradicional.

4


DO ENSINO À PRATICA: A GENÉTICA SOB O OLHAR DOS DISCENTES DA ÁREA DA SAÚDE DA

UNIVERSIDADE ESTADUAL DA PARAÍBA

Dulceria Costa da Silva1; Renaly da Costa Rodrigues

2; Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis

3.


(1)Discente do curso de Ciências Biológicas da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB);

(2)Discente do curso de

Fisioterapia da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB); (3)

Faculdade de Ciências Médicas de Campina Grande

(FCM-CG)

RESUMO A genética é ao mesmo tempo uma ciência básica e uma especialidade nas ciências da saúde e se faz necessária

nos currículos dos cursos da saúde com abordagens diferenciadas, direcionadas para as áreas de atuação de cada

profissional. O trabalho objetivou analisar a percepção dos acadêmicos dos cursos da saúde da UEPB a respeito do

ensino de genética e suas vivências práticas durante os atendimentos. Para tanto, foram aplicados questionários

semi-estruturados a discentes de enfermagem, odontologia e fisioterapia da UEPB campus I que já tivessem

cursado a disciplina de genética e que já possuíssem alguma experiência prática de atendimento. Obteve-se 99

respostas: 39 referentes a enfermagem, 29 a fisioterapia e 31 a odontologia. A grande maioria dos discentes

classificam a genética como muito importante para sua formação e 68% afirmam que seu conhecimento teórico da

disciplina seja regular. Quanto à carga horária oferecida (30 horas), foi considerada insuficiente pela maioria dos

discentes de enfermagem (67%) e fisioterapia (68%) e suficiente para odontologia (87%). Quando perguntados se

o conteúdo abordado condizia com as necessidades do curso, houve um equilíbrio entre as respostas positivas e

negativas em todos os cursos. Também a maioria dos discentes (80%) considera necessário que haja abordagem

prática da disciplina. A maioria dos alunos de enfermagem (54%) e odontologia (74%) afirma nunca ter atendido

pacientes com indício de doença genética, enquanto em fisioterapia 72% afirmaram já ter atendido. 82% de

fisioterapia, 80% de enfermagem e 74% de odontologia dizem não ter orientação acadêmica de como proceder

quanto a pacientes com doenças genéticas. Dentre as sugestões para melhoria no rendimento da disciplina, relatou-

se aumento da carga horária, realização de atividades práticas e modificações na metodologia e maior

direcionamento do conteúdo para o curso (as duas últimas bastante significativas em enfermagem e odontologia,

respectivamente). É perceptível que há um déficit no processo de ensino-aprendizagem de genética, necessitando

de intervenções que tornem a disciplina mais proveitosa, dentre as quais boas opções seriam as atividades práticas

direcionadas e o aumento na carga horária.

5


A TEMÁTICA DA CONSANGUINIDADE E SUA POUCA ABORDAGEM EM SALA DE AULA: UM

PROBLEMA CONSTATADO EM ALUNOS DA 2ª SÉRIE DO ENSINO MÉDIO DO CENTRO DE

ENSINO MODERNO INTEGRADO - CEMTI DA CIDADE DE SÃO RAIMUNDO NONATO - PI.

André Santos Landim1; Fernando Raimundo de Sousa

2; Goldemberg Alves Duarte

2; Marcos Ricelle de Carvalho

2;

Taylane Fernandes da Rocha2; Fernanda Paes dos Santos

2; Raimunda Ferreira da Silva

2; Kleber de Oliveira

Macêdo2; Fabiana Sousa Carvalho

2; Maria do Socorro Nunes Cavalcante

3.


(1)Universidade Estadual do Piauí;

(2)Universidade Estadual do Piauí - UESPI;

(3)Faculdade Afonso Mafrense -

FAM

RESUMO O livro didático de Biologia utilizado no Ensino Médio tem resumido bastante seus conteúdos na finalidade que

possam ser completamente trabalhados para os alunos prestarem seleção do Exame Nacional do Ensino Médio -

ENEM, entre outras seleções de ingresso para o Ensino Superior. Todavia, tal redução de conteúdos tem deixado

importantes temas de fora das discussões em sala de aula como a problemática da consanguinidade que tem

perdido seu espaço em conteúdos da área da Genética. A consanguinidade pode elevar o risco de homozigozidade

recessiva, possibilitando a união de genes deletérios que venham provocar algum tipo de deficiência na prole do

casal, ou, até levar o indivíduo a óbito. Partindo desse pressuposto, este trabalho teve como objetivo verificar se o

conteúdo de consanguinidade foi trabalhado e observar se houve aprendizado efetivo nos alunos da 2ª Série do

Ensino Médio do Centro de Ensino Moderno Integrado - CEMTI na cidade de São Raimundo Nonato - PI.

Primeiramente foi entregue aos alunos um questionário objetivo sobre consanguinidade na finalidade de

diagnosticar se estes já tinham conhecimento acerca do tema. Na sequência, aconteceu uma explanação através de

slides criados em forma de mapas conceituais na plataforma Prezi e, por último, foi aplicado outro questionário no

qual os participantes puderam qualificar a apresentação. Ao todo participaram da pesquisa 74 alunos, sendo

divididos em 3 turmas denominadas de "A", "B" e "C". Dos 74 alunos, 40 (54,05%) afirmaram ter conhecimento

sobre o tema e 34 (45,95%) afirmaram não conhecer, sendo que 82,5% dos que conhecem o assunto reconheceram

ter aprendido em sala de aula. Após a apresentação, 100% dos alunos admitiram ter assimilado o conteúdo, onde,

60,8% classificaram a apresentação como Ótima, 32,4% como Boa e 6,8%, como Razoável. Além disso, 60,8%

alegaram ter ao menos um casal de primos consanguíneos em sua família e 39,2% alegaram não conhecer ou não

recordar sobre. Portanto, nota-se uma carência de discussão sobre o tema em tal escola, pois nas respostas dos

alunos a cidade tende a possuir um elevado índice de casamentos consanguíneos e que faltam informações sobre o

tema, sendo essencial destacar a importância do aconselhamento genético para estes casais de primos onde é

possível verificar a probabilidade de se ter filhos com alguma deficiência. Tais problemas seriam amenizados com

um tópico mais relevante sobre consanguinidade dentre os conteúdos de Genética do livro didático de Biologia.

6


A UTILIZAÇÃO DE JOGOS DIDÁTICOS NO ENSINO DE GENÉTICA

Jéssica Maria Alexandre Soares1; Bruna Alves Martins

1; Tiago Silva de Lima

1; José Elinaldo da Silva Oliveira

1;

Laianne de Souza Guilherme1; Merilane da Silva Calixto

1.


(1)Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas/Centro de Saúde e Tecnologia Rural/UFCG - Patos/PB

RESUMO A Genética mesmo sendo de grande importância para o ensino de Biologia ainda é uma das áreas biológicas em

que os alunos do Ensino Médio têm encontrado dificuldade na aprendizagem, pois não fazem associação dos

conteúdos com o cotidiano pelo caráter abstrato e de difícil visualização que a temática aborda, o que resulta em

certa resistência aos conteúdos, cabendo ao professor buscar metodologias inovadoras de caráter motivador que

despertem interesse nos estudantes, facilitando a aprendizagem. Assim, a introdução de ferramentas lúdicas como

os jogos didáticos funcionam como instrumentos de apoio possibilitando a assimilação e reforçando conteúdos já

vistos. Este trabalho visa apresentar a importância da utilização dos jogos no processo de ensino-aprendizagem na

área de Genética, agindo como instrumentos motivadores de intenso potencial na sala de aula. A pesquisa teve

uma abordagem quantitativa, sendo realizada em três escolas da Rede Estadual de Ensino de dois municípios da

Paraíba, sendo a Escola Francisco Romano da Silveira, localizada em Mãe D´água e as Escolas Professor José

Gomes Alves e Auzanir Lacerda, em Patos. Foram utilizados dois jogos didáticos intitulados como O Bingo das

Ervilhas (1ª Lei de Mendel) e Construindo Heredogramas, sendo aplicados a 76 alunos matriculados na terceira

série do Ensino Médio, que responderam a um mesmo questionário antes e depois de cada jogo para fins

comparativos, ressaltando que os testes foram semiestruturados na abordagem de assuntos que já haviam sido

trabalhados pelos docentes. Com a aplicação do jogo do Bingo, o percentual de acertos foi de 36,05% para

62,37%, notando-se aumento nas respostas corretas. Para o segundo jogo trabalhado os resultados apontam que

houve aumento acentuado de 40,49% no percentual de acertos, e uma redução em cerca de 29% das questões nas

quais os alunos não quiseram ou não souberam responder. Os resultados mostram que nos dois jogos trabalhados

houve um aumento significativo de acertos e ainda uma diminuição na taxa de erros, sugerindo a eficiência da

introdução do jogo como ferramenta lúdica no auxílio do ensino de Genética. Dessa forma, é perceptível a

influência positiva do lúdico como facilitador no processo de ensino-aprendizagem, fazendo com que os

estudantes assimilem os conteúdos e construam conhecimentos de conceitos que até então eram considerados

difíceis e de complexa associação, sendo ainda uma alternativa viável e de fácil aplicação.

7


A UTILIZAÇÃO DE MODELOS TÁTEIS NO ENSINO DE GENÉTICA PARA DEFICIENTES VISUAIS

Samara de Brito Vieira1; Thalyta Tâmara Moura dos Reis

2; Thales Eduardo Galdino Andrade

3; Claudiana da

Silva Pereira4; Lúcia da Silva Fontes

5; Tony César de Sousa Oliveira

6; Antônio Carlos dos Reis Filhos

7.


(1)Discente do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI;

(2)Graduada

em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI; (3)

Mestrando do Programa de Pós-Graduação

em Genética e melhoramento vegetal da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (4)

Mestranda do Programa de Pós-

Graduação em Genética e melhoramento vegetal da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (5)

Professora do

Departamento de Biologia da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (6)

Mestrando do Programa Desenvolvimento e

Meio Ambiente da Universidade Federal do Piauí-UFPI; (7)

Graduado em Ciências Biológicas da Universidade

Federal do Piauí-UFPI

RESUMO A aprendizagem de Biologia é um desafio para grande parte dos alunos pela necessidade de abstração dos assuntos

abordados (FERRACIOLI et al., 2012). Isso é ainda mais difícil ao se tratar de alunos deficientes visuais, pois

segundo Andrade (2016), a genética é a maior dificuldade para professores e alunos nesse âmbito da educação

especial.Para auxiliar no ensino-aprendizagem, faz-se necessária criatividade levando em consideração a diversas

texturas que existem na natureza a fim de aprimorar as aulas para alunos videntes e não-videntes (BECKERS,

PEREIRA e TROGELLO, 2014).Com base nisso, este trabalho teve como objetivo avaliar a eficácia da utilização

de modelos táteis nas aulas de Biologia, enfatizando o conteúdo sobre o Ciclo Celular para alunos deficientes

visuais da Associação de Cegos do Piauí (ACEP). A pesquisa foi aplicada a 17 alunos, uma amostra de 65,38%

dos discentes da disciplina de Biologia. Para confecção dos modelos táteis utilizou-se: bolas de isopor nº 16, EVA

nas cores azul e verde, tinta-relevo nas cores: amarela, azul, roxa e vermelha, biscuit na cor rosa para construção

dos cromossomos, estilete, tesoura, cola para isopor/EVA, cola branca e lã vermelha. Para avaliação da

aprendizagem foi utilizado pré-teste e pós-teste com 8 questões objetivas, tendo sido previamente aplicado o

Termo de Consentimento Livre e Esclarecido (TCLE).Na avaliação do pré-teste, após aula expositiva do assunto e

antes de se utilizar os modelos táteis, os alunos obtiveram uma média de acertos de 42,25%. No pós-teste, após

apresentação dos materiais didáticos táteis, houve uma média de acertos de 85,29%, havendo melhoria de 43,04%

na assimilação do conteúdo, corroborando com outros trabalhos já desenvolvidos na área de ensino para

deficientes visuais (ANDRADE, 2016; DE SOUZA e PRADO, 2014; LOPES, ALMEIDA e AMADO, 2014), e

demonstrando que é possível obter melhorias no ensino através de modelos táteis, ajudando a incluir os alunos

deficientes visuais em um processo de aprendizagem significativo, fazendo uso de diversos materiais com

diferentes texturas.A partir do trabalho desenvolvido podemos concluir que os modelos táteis propostos para uso

no ensino de genética para deficientes visuais são eficazes em facilitar a aprendizagem.

8


ALÉM DA APARÊNCIA: A INTERAÇÃO GENÓTIPO-FENÓTIPO

Elis Aragão Magalhães1; Marília de França Rocha

2.


(1)Faculdade de Ciencias Médicas- Universidade de Pernambuco;

(2)Instituto de Ciências Biológicas -Universidade

de Pernambuco

RESUMO O estudo da Genética na Medicina não deve abordar apenas o paciente, e sim sua família e contexto. Nessa

perspectiva, este trabalho visou analisar a formação de conceitos em Genética, com base no Modelo das Múltiplas

Perspectivas (MoMuP-PE), tendo por motivação um caso no tema Hipercolesterolemia Familiar (HF). Essa

doença autossômica dominante, comum na população geral, caracteriza-se por níveis plasmáticos muito elevados

do colesterol da lipoproteína de baixa densidade, reduzindo a expectativa de vida. Foi analisada a produção de 16

estudantes de uma turma de 1º período do Curso de Medicina de uma universidade pública em Recife-PE. Os

participantes foram selecionados voluntariamente e organizados em grupos de 4 integrantes. O caso foi

contextualizado com base no grupo musical Fat Family, para facilitar o entendimento sobre a relação genótipo-

fenótipo e padrão de herança. Foram obtidos 8 mapas conceituais em cartolina, sendo 4 prévios (E1) e 4

posteriores (E2) ao estudo, respectivamente. A análise consistia em ler trechos áudio gravados e relacionar

categorias a partir dos mapas para organizar os dados. Os estudantes se limitavam à ideia de que havia uma

predisposição genética associada a algum defeito na degradação de colesterol ou em sua entrada na célula. Os E1 e

E2 facilitaram o processo de aprendizagem, levando-os a desconstrução e a utilização de diferentes comentários

temáticos (livros, vídeos, outros) para solucionar dúvidas e (re)construir esquemas. Esse ir e vir na busca de

respostas caracteriza a travessia temática e auxiliou na construção de significados. No MoMuP-PE a reflexão

orientada levou a reconstrução dos saberes, dessa forma os alunos compreenderam que a obesidade do Fat

Family não era condição suficiente para desencadear as complicações de saúde descritas no caso. O fato do pai dos

integrantes do grupo ser magro, esportista e ter feito um transplante cardíaco despertou nos estudantes curiosidade

sobre a real causa para as condições de saúde da família, promovendo a reflexão genótipo/fenótipo. Por sua vez,

foi feita a diferenciação da HF de outras, principalmente da hipercolesterolemia comum ou poligênica, pois o

indivíduo com HF está exposto a elevados níveis de colesterol plasmático desde o nascimento. Esse trabalho deixa

clara a importância de trabalhar o pensamento complexo interconectando conceitos para que os alunos tenham a

capacidade de empregar o conhecimento em diferentes situações como preconiza a flexibilidade cognitiva.

APOIO PIBIC-AF/UPE/CNPq.

9


ATIVIDADES LÚDICAS E O GOSTO PELA GENÉTICA NO ENSINO MÉDIO: UMA ABORDAGEM

DIDÁTICA NA UNIDADE ESCOLAR LETÍCIA MACEDO - PI.

Kleber de Oliveira Macedo1; Iara Lima Paes Landim

2; Eronilde de Santana Lima

2; André Santos Landim

3;

Daniela Santos Landim Silva3; Fernando Raimundo de Sousa

3; Goldemberg Alves Duarte

3; Marcos Ricelle de

Carvalho3; Maria do Socorro Nunes Cavalcante

4; Taylane Fernandes da Rocha

3; Hellen Cristina de Oliveira

Alves5.


(1)Unidade Escolar Letícia Macêdo;

(2)EFFO;

(3)Universidade Estadual do Piauí - UESPI;

(4)Faculdade Afonso

Mafrense - FAM; (5)

Instituto Federal do Piauí - IFPI

RESUMO A genética sempre foi considerada uma das áreas da Biologia em que os alunos possuem grande dificuldade de

assimilação dos conteúdos, seja devido ao uso de vários conceitos específicos, seja por causa de questões

complexas. Mesmo sendo uma subdivisão da biologia considerada complexa, ainda assim, possibilita a utilização

de uma vasta variedade de dinâmicas e metodologias de ensino. A maneira tradicional de ensinar os conteúdos de

forma expositiva, muitas vezes, não explora a curiosidade e prazer dos alunos em buscar respostas e

conhecimentos. Assim, se torna necessário o uso de práticas que facilite esse processo e que estimule alunos a ter

gosto pela área. É nesse contexto que as atividades lúdicas se tornam grandes aliados no processo de ensino-

aprendizagem de genética, pois, possibilitam o ensino da disciplina de maneira mais divertida e prazerosa. O

objetivo deste trabalho é facilitar o processo de ensino-aprendizagem de genética no ensino médio, buscando

despertar a motivação e o interesse dos alunos pela área. A execução do trabalho ocorreu durante os 5 meses finais

do ano letivo de 2014 na Unidade Escolar Letícia Macedo, Anísio de Abreu-PI, abrangendo 2 turmas da 3ª série

do Ensino Médio, designadas como turmas "A" e "B", respectivamente, no turno matutino e vespertino,

compreendendo 75 alunos no total, com faixa etária entre 16 a 28 anos de idade. Primeiramente, foi feito um

levantamento e análise sobre as possíveis atividades lúdicas a serem utilizadas, dominó de genética, modelos

representativos, entre outras, e em quais conteúdos cada atividade se encaixava melhor. O uso das atividades

lúdicas iniciaram-se no final do primeiro semestre letivo. No início da aula, explicava-se as regras e realizava-se os

sorteios ou seleção dos grupos para execução das atividades. No início do ano, notava-se grande falta de interesse

e dificuldade de compreensão pelos alunos. Após a inserção das atividades lúdicas, notou-se mais motivação,

interesse, assimilação e prazer dos alunos. O interesse perdurou-se nas outras áreas da biologia, sendo que

aproximadamente 90% dos alunos tiveram melhorias no desempenho qualitativo e quantitativo. As relações,

aluno-aluno e professor-aluno em sala de aula, também tiveram grandes melhorias. Com isso, conclui-se que as

atividades lúdicas promovem a melhoria do ensino, reduzindo drasticamente o "pavor" que muitos possuem ao

estudar genética, e, assim, ampliando a motivação, a compreensão e o interesse destes pela genética.

10


AVALIAÇÃO DO CONHECIMENTO DOS ALUNOS DO ENSINO MÉDIO PÚBLICO SOBRE O TEMA

BIOÉTICA E REPRODUÇÃO HUMANA IN VITRO COMO ABORDAGEM NO ENSINO DE

GENÉTICA

Luís Eduardo Oliveira Alves1; Leomá Albuquerque Matos

1; Maria dos Remédios Mendes de Brito

1.


(1)Universidade Federal do Piauí / Universidade Aberta do Brasil, Polo de Apoio Presencial de Buriti dos Lopes

RESUMO Tendo em vista que muitos casais não conseguem ter seus filhos pelo meio natural, para combater a esterilidade e

a infertilidade tanto masculina quanto feminina, a biotecnologia trouxe várias soluções nesta área. Entre essas

soluções encontramos a técnica de reprodução humana assistida a fertilização in vitro, mais comumente conhecida

como bebê de proveta. No presente trabalho, procura-se trazer um breve histórico da técnica, bem como, os

problemas gerados em face da FIV destacando-se o destino dos embriões excedentes criopreservados em

laboratório e a suposta ausência de legislação para sua proteção jurídica. A polêmica que envolve o tema está

concentrada ao início da vida, de quando esta se inicia, se desde sua concepção ou conforme as fases de seu

desenvolvimento. Existem correntes doutrinárias que discorrem sobre o assunto dentre elas encontra-se a

conceptiva e a desenvolvimentista. Pretende-se trazer os conceitos e argumentos de autores que apresentam

opinião favorável e daqueles que se manifestam contra a utilização de embriões humanos. Por fim, buscar-se-á na

Constituição de 1988, com base no fundamento do Estado Democrático de Direito elencado no art. 1º, III, a

dignidade da pessoa humana; no princípio de prevalência dos direitos humanos que rege as relações internacionais

da República Federativa do Brasil, art. 4º, II e no direito à vida, direito e garantia fundamental, art. 5º, caput, da

carta magna o subsídio pronto e suficiente para proteção do embrião humano. O trabalho irá analisar o

desenvolvimento de alunos da 3º série do ensino médio público sobre o ensino da genética em sala de aula.

Abordamos as questões relacionadas ao casal, ao embrião e ao nascituro, considerando também o ensino da

genética no século XXI no ensino médio público na cidade de Magalhães de Almeida no estado do Maranhão.

11


AVALIANDO RISCOS PARA O CÂNCER DE MAMA: OFICINA SOBRE ACONSELHAMENTO

GENÉTICO NO ENSINO MÉDIO

Maria Izabel Pereira e Silva1; Iêda Ferreira de Oliveira

1.


(1)Departamento de Biologia/Universidade Federal Rural de Pernambuco

RESUMO O Ensino de Genética é apontado como uma necessidade na formação de jovens conscientes e capazes de tomar

decisões com relação à sociedade em que vivem e à sua própria vida. Porém, nem sempre as instituições de ensino

estão preparadas para transmitir seus conhecimentos, devido à velocidade com que são produzidos. Com o

objetivo de difundir e popularizar conceitos relacionados à Genética do Câncer e Aconselhamento Genético, foi

desenvolvida a oficina denominada "Avaliando riscos para o câncer de mama", destinada a estudantes do Ensino

Médio de uma escola pública do Recife. Ela abordou de modo integrado os conteúdos: dogma da Biologia

Molecular, mutações, genética do câncer, sequenciamento de DNA e aconselhamento genético. Inicialmente, foi

exibido aos estudantes um vídeo sobre câncer de mama envolvendo a atriz Angelina Jolie, a fim de sensibilizá-los.

Depois, foram mostrados aspectos gerais dessa doença e explicados os principais mecanismos moleculares

envolvidos, mencionando alguns genes importantes. A seguir, esses conteúdos foram relacionados com o

aconselhamento genético. Para isso, o assunto do vídeo foi resgatado e os estudantes foram convidados a refletir

sobre os motivos que levaram à decisão "radical" da atriz. Na ocasião, foram discutidos preceitos do

aconselhamento genético, culminando na apresentação dos principais métodos de diagnóstico genético do câncer

de mama. Pela exibição de um segundo vídeo, foi mostrada a técnica Sanger de sequenciamento de DNA,

empregada por esses métodos. Posteriormente, foram distribuídas fichas, simulando resultados de exames

laboratoriais, para que cada participante fizesse suas análises genéticas e descrevesse o aconselhamento que

dispensaria ao paciente fictício. Por fim, todos os "diagnósticos" foram coletivamente discutidos. A atividade teve

boa aceitação pelos estudantes, os quais mostraram muito interesse, curiosidade, autonomia e trabalho

cooperativo. Verificaram-se algumas dificuldades conceituais (por exemplo: gene, alelo e polimorfismo) pelos

estudantes, que, no decorrer da atividade, foram explicadas. Como conclusão, a oficina aqui descrita foi um

instrumento didático facilitador da aprendizagem eficaz na contextualização dos conteúdos envolvendo a tríade

Genética, Câncer e Aconselhamento Genético. Espera-se que ela contribua na formação mais integral dos sujeitos

envolvidos para esses temas e outros relacionados.

APOIO Pró Reitoria de Extensão/UFRPE

12


BIOLOGIA E RELIGIÃO: VISÃO DE ALUNOS DO ENSINO MÉDIO DE ESCOLAS PUBLICAS

Marcos Antonio Nobrega de Sousa1; Mayara Ramalho de Andrade Pereira

1; Mônica da Costa Lima

1; Adrielly de

Lira Moreira1; Ronaldo Leite da Silva Filho Neto

1.


(1)Universidade Federal de Campina Grande - UFCG

RESUMO O Neodarwinismo uniu informações de Mendel da transmissão de caracteres com as ideias de Charles Darwin

sobre à origem das espécies. No entanto, mesmo a Evolução Biológica estando corroborada por evidências

científicas, é de difícil aprendizagem aos alunos pelo conflito com aspectos religiosos. Foi investigada a influência

das convicções religiosas no aprendizado de evolução em alunos do ensino médio. Foram aplicados questionários

a alunos do 3º ano do ensino médio de quatro escolas públicas diferentes em Itapetim (PE), Teixeira, Passagem e

Patos (PB) para obtenção da idade, escolaridade, sexo, denominação e frequência religiosa. Além de três questões

sobre a influência religiosa no aspecto científico (1-3 escala Likert) e uma de múltipla escolha (a-e); e cinco sobre

a evolução com alternativas (a-e). Foram amostrados 168 alunos de oito turmas diferentes. A maioria deles na

faixa de 16-19 anos e do sexo feminino (52,9%). O estado da Paraíba teve 63,69% dos entrevistados. Pelas

respostas válidas, a maioria, 43,9% são católicos, 14,3% são evangélicos, 4,5% cristãos, 3% protestantes, 3%

ateus, 1,8% agnósticos e 23,8% não responderam. Dos católicos, 22,2% vão a igreja eventualmente e entre os

evangélicos, a maioria vai frequentemente e eventualmente. A análise das questões foi agrupada por assunto: as

que versam sobre a influência religiosa (1-4) e evolução (5-9). A escola de Itapetim apresentou uma maior

tendência nas convicções religiosas, com maior frequência 10,7% de alunos que consideram que o que eles creem

está acima de qualquer coisa. E na Paraíba a maioria considera a bíblia uma verdade sem erros e que foram

ensinados pelos pais a acreditar em Deus. A questão 5 apresentou o menor número de acertos (1,8%) e a 6 o maior

(32,8%) em todas as escolas. A escola com menor índice de acertos foi a PE e maior foi uma da PB (Dionísio da

Costa). As diferenças foram estatisticamente significativas entre as escolas (α=0,05). A escola de PE obteve os

maiores índices religiosos e as menores médias de questões certas sobre evolução, mas todas as escolas tiveram

uma pontuação baixa. Observa-se que não houveram diferenças significativas, nem correlação entre as

denominações religiosas e o nível de acerto sobre conceitos evolutivos. Embora a alta taxa de erro / em branco

(>80%) indique que que as convicções religiosas afetem o ensino-aprendizagem de evolução; os resultados obtidos

diferem dos observados em outros trabalhos e novas investigações devem ser realizadas.

13


BIOTECNOLOGIA E VACINA DE DNA RECOMBINANTE: APLICAÇÃO DE RECURSOS

DIDÁTICOS NO ENSINO MÉDIO

Débora Eveny Santana Silva1; Cássia Kellen Lopes Fonseca

1; Suzana Oliveira Santos

1; Nara Suzy Aguiar de

Freitas1.


(1)Maria de Fátima de Santana

RESUMO O desenvolvimento de vacinas de DNA está em constante avanço. Apresentar aos alunos as diferentes etapas do

processo biotecnológico envolvidos é sempre um desafio para os professores de Biologia. Os Parâmetros

Curriculares Nacionais para o Ensino Médio (PCNEM), na área de ciências da natureza, matemática e suas

tecnologias, pontuam a temática no contexto Tecnologia e Sociedade. No presente trabalho foi realizada uma

intervenção pedagógica, na escola de Referência em Ensino Médio Conde Pereira Carneiro, situada na cidade de

São Lourenço da Mata - PE. Com o objetivo de contextualizar a importância da vacina, foi utilizado como

exemplo a atual epidemia pelo Zika vírus, assim como as vacinas de DNA em desenvolvimento para Tuberculose

e Melanoma. A primeira fase do estudo consistiu em uma avaliação diagnóstica, que utilizou como instrumento

um questionário semiestruturado para avaliar os conhecimentos prévios dos alunos da turma de 3° ano do ensino

médio. Após a análise da avaliação diagnóstica, foi realizada uma aula expositiva dialogada. No segundo

momento, foi realizada uma dramatização sobre o experimento pioneiro do DNA recombinante, dos americanos

Herbert Boyer e Stanley. Na sequência, foi realizada uma oficina, na qual os discentes foram divididos em seis

grupos e cada grupo recebeu um envelope com um texto base, um roteiro e moldes, para a confecção ilustrativa

das diferentes etapas necessárias para produção da vacina de DNA. No final, as equipes debateram sobre o eixo

temático e responderam o mesmo questionário da fase inicial. A avaliação diagnóstica inicial revelou que os

alunos conheciam pouco sobre biotecnologia e vacina de DNA, porém no final, a maioria distinguiu com precisão

as diferentes enzimas utilizadas no processo, bem como os benefícios históricos da imunização para as sociedades.

Apesar dos resultados positivos, se faz necessário que o eixo temático seja continuamente trabalhado nas escolas

para aproximar os alunos de outras aplicações da tecnologia do DNA recombinante e seus impactos sociais.

14


CONCEITOS EVOLUTIVOS DE FUTUROS PROFESSORES DE CIÊNCIAS BIOLÓGICAS

Marcos Antonio Nobrega de Sousa1; Cecília Ruth Fernandes da Silva

1; Idineide Lidiane Silva

1.


(1)Universidade Federal de Campina Grande - UFCG

RESUMO A Evolução Biológica é um tema polêmico no ensino de genética e evolução em todos os níveis acadêmicos, que

embora corroborada por evidências científicas, ainda causa problemas aos futuros professores. Foi buscado

analisar o grau de aprendizagem de alunos de licenciatura em Biologia em aulas de evolução. Foi analisado o

conhecimento em evolução de graduandos de dois turnos de Licenciatura em Ciências Biológicas (diurno e

noturno) da UFCG. Foi utilizado um questionário com seis questões sobre conceitos básicos da teoria evolutiva,

com as mesmas perguntas aplicadas antes e depois da disciplina Evolução. No segundo momento foi adicionada

uma pergunta sobre à contribuição da disciplina ao conhecimento dos alunos. Foram entrevistados 72% dos alunos

de cada turma. Pelas respostas válidas foram amostrados 59,5% alunos do sexo masculino e 40,5% do feminino,

com média de idade de 20,2 anos; e cerca de 67,5% estudaram o ensino médio só em escola pública. No turno

diurno houve 100% de aumento no número de alunos com acertos depois da aula, e no noturno 48%. Em ambos os

turnos, houve 62,9% de aumento. A média de acertos do número de questões antes e depois, respectivamente

foram, no diurno (2,2 e 4,3) e no noturno (2,3 e 3,5); e de modo geral (2 e 4), Estas diferenças foram

estatisticamente significativas (α=0,05). Apenas a questão sobre evolução e origem da vida apresentou maior

dificuldade, com os menores índices de acertos nos dois turnos. Todas as demais tiveram maior índice de acerto

após a disciplina. Foi observado que os alunos, mesmo após a disciplina apresentaram muitas dúvidas sobre

evolução e seus conceitos, tendo em vista o baixo número de acertos depois. Mas foi observado que o número de

acertos dobrou após a disciplina, que o turno diurno teve um desempenho melhor do que o noturno e que 87,5%

dos alunos afirmaram que a disciplina contribuiu para aumentar o seu conhecimento sobre evolução. Dificuldades

no entendimento sobre evolução também foi observada por licenciados em Biologia em outras instituições de

ensino. Destaca-se que a evolução biológica deve ser tratada com mais intensidade nos cursos superiores de

Biologia, principalmente nas Licenciaturas, pois apenas aulas expositivas não são suficientes para que os alunos

superem suas dificuldades, sugere-se mais aulas práticas / integrativas, transdisciplinariedade e maior atenção a

evolução biológica ao longo da formação do licenciando e na sua formação continuada depois de formado como

professor.

15


CONSTRUÇÃO DO CONHECIMENTO ATRAVÉS DO DOMINÓ GENÉTICO: UM JOGO LÚDICO NO

ENSINO MÉDIO

Wilson Dias de Oliveira1; Marina Ferreira Kitazono Antunes

1; Thais Kelly Ferreira da Silva

1; Amanda Fagundes

Ximenes1; Vilma Loreto da Silva

2.


(1)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Depto. de Genética, UFPE.;

(2)Laboratório de Genética e

Citogenética Animal e Humana, Depto. de Genética, UFPE.

RESUMO Atualmente a utilização de jogos lúdicos auxilia no desenvolvimento dos estudantes, pois tal recurso permite a

vivência nas áreas cognitiva e psicomotora. Além disso, sabe-se que o jogo constitui uma ferramenta pedagógica

que também promove o desempenho social do aluno e proporciona uma metodologia inovadora que o atrai para o

conhecimento através de uma forma mais prazerosa e interessante, visto que recentemente a falta de motivação é a

principal causa do desinteresse dos alunos. A genética é a ciência dos genes, que estuda a forma como são

transmitidas as características biológicas de uma geração a outra, sendo frequentemente de difícil fixação para os

alunos, devido a sua alta complexibilidade. Pelo exposto, o presente trabalho teve como objetivo auxiliar a

aprendizagem dos termos de genética mendeliana, empregando um jogo lúdico. Para isto, foi utilizado um Dominó

Genético o qual é composto por vinte peças, sendo essas formadas por duas partes, uma correspondente a termos

presente na genética mendeliana, e outra composta por imagens, estas figuras apresentam-se como importantes

estimuladores visuais, como também representa parte do pensamento, da linguagem e da historia vivenciada. A

associação da imagem e termo foi o foco do jogo, o qual tem como função a consolidação do conhecimento. O

vencedor foi aquele que primeiro associou todas as suas peças do dominó. Esta dinâmica foi realizada com 185

alunos, referentes as turmas de 3º ano do ensino médio na Semana Nacional de Ciência e Tecnologia realizada na

Universidade Federal de Pernambuco em 2015. Após a aplicação dessa estratégia lúdica, pode-se observar que

62,2% dos estudantes não tiveram dificuldades para associar os termos às imagens, enquanto 37,8% tiveram, esta

parcela justificada pela dificuldade na materialização do conhecimento e limitação dos saberes. Observou-se que a

maior dificuldade encontrada foi a relação do termo albinismo, pois esse estava representado por um animal.

Diante disso, ressalta-se a importância da utilização de jogos lúdicos nos aspectos da dinamização dos conteúdos,

da interação social entre os alunos e do ensino-aprendizagem por meio de brincadeiras, despertando o interesse dos

estudantes.

APOIO (CNPq, CAPES e FACEPE)

16


DERIVA GÊNICA: UMA FORMA LÚDICA DE ENSINAR

Patricia de Souza Cavalcante Carnaval1; Rildo Ney Tavares da Silva

1; Daniele Rodrigues de Amorim

1;

Elizangela Zuleide de Melo Santos1; Anny Cibelly Campelo Barbosa

1; Isliria Stephany Correia do Nascimento

1;

Arthur Rodrigues da Silva1; Iully Karla Neves Gusmão

1; Pedro Henrique do Bomfim Nascimento

1; Igor Vieira de

Melo Alves1; Vilma Loreto

2.


(1)Discente do Curso de Ciências Biológicas Licenciatura - Centro de Biociências - UFPE;

(2)Laboratório de

Genética e Citogenética Animal e Humana - Departamento de Genética - Centro de Biociências - UFPE

RESUMO Os conteúdos programáticos de genética nos livros didáticos de ensino médio de biologia são, por diversas vezes,

de difícil materialização para o alunado, afastando-os de sua concepção real. Esse parâmetro deve obedecer a uma

sequência lógica de atividades que atendam os objetivos preestabelecidos no processo de ensino e aprendizagem.

Estudos nos mostram que numa ação educativa esse processo deve ser dinâmico e que o agente multiplicador

quanto o aprendente, o completem de forma eficaz tanto para uma formação escolar quanto para a aplicação em

sua vida social. A introdução de jogos didáticos em aulas práticas no ambiente escolar nos permite utilizar o

lúdico, aproximando os alunos dos conteúdos que requerem deles um alto grau de abstração. Sendo assim,

percebemos a utilização desses recursos pedagógicos como uma complementação durante o processo de ensino-

aprendizagem. Após uma aula expositiva dialogada sobre deriva gênica, propomos a parte prática com uma

aplicação de um jogo didático sobre o tema, mostrando de forma lúdica como a deriva pode, de maneira

totalmente ao acaso, alterar as frequências dos alelos de um determinado gene, ao longo das gerações. O recurso

consistiu em uma versão, análoga a um jogo de bingo tradicional, já conhecido pelos alunos e que funciona através

de cartelas para marcar à medida que os sorteios vão acontecendo. Para confecção do material foram usados

papelão, cola branca, papel ofício impresso (para as cartelas) e emborrachados coloridos cortados em formato de

borboleta, lápis e borracha para marcação e construção de um gráfico usado como resultado final da conclusão do

jogo na própria cartela. Durante a realização da prática didática, os alunos passaram a perceber como acontecem as

combinações dos alelos dentro de uma população, através dos cruzamentos que acontecem de forma totalmente

aleatória. Além disso, atentaram também para aspectos de funcionamento do efeito gargalo, efeito fundador e

mudanças na frequência dos alelos resultantes ao longo do tempo. Após a aplicação, verificou-se que a ideia de

implementação de jogos didáticos e outros recursos pedagógicos, aplicados a uma metodologia bem elaborada em

sala de aula, além de terem baixo custo, facilitou a compreensão dos mecanismos de ação da deriva genética e de

suas consequências evolutivas, um tópico disciplinar obrigatório dentro da biologia que só com o auxílio da aula

teórica não levaria o alunado e os docentes a completarem o processo de ensino e aprendizagem.

17


DIVERSIDADE CARIOTÍPICA EM ESPÉCIES ANIMAIS E VEGETAIS CONTRIBUINDO PARA O

ENSINO TEÓRICO-PRÁTICO DA CITOGENÉTICA

Araúna Sara Silva Reis1; Ingrid Giovanna Vieira Santos

1; Palloma Lima de Oliveira

1; Elianderson Gomes de Sá

1;

Ebenézer Bernardes Correia Silva2; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti

1.


(1)Universidade Federal do Vale do São Francisco;

(2)Instituto Federal de Alagoas

RESUMO O ensino da Citogenética ressalta a morfologia, função, organização, variação e evolução cromossômica,

integrando o conteúdo teórico e prático, mediante a exemplificação da diversidade cariotípica. Neste trabalho, um

laminário foi construído com preparações citológicas de oito espécies, quatro animais [Mus musculus Linnaeus,

1758 (camundongo), Rattus novergicus Berkenhout, 1769 (ratazana), Gracilinanus agilis Burmeister, 1854 (cuíca)

e Tropidurus hispidus Spix, 1825 (lagartixa)] e quatro vegetais [Allium cepa L. (cebola), Capsicum annuum L.

(pimentão), Lactuca sativa L. (alface) e Solanum lycopersicum L. (tomate)], com o intuito de utilizá-lo em aulas

práticas, facilitando a difusão do conhecimento científico entre o corpo discente em duas Instituições Federais de

Ensino Superior (UNIVASF - Petrolina/PE e IFAL - Maceió/AL). Para as espécies animais, indivíduos

provenientes da Caatinga e mantidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga (UNIVASF),

foram obtidas preparações cromossômicas mitóticas a partir da extração de células da medula óssea. Por sua vez,

para as espécies vegetais, pontas de raízes recém-germinadas foram pré-tratadas com 8-HQ, fixadas em Carnoy e

utilizadas para preparação das lâminas. Em ambos os casos, as lâminas foram coradas com Giemsa 10%. O

laminário foi explorado mediante duas abordagens; nas aulas práticas de Citogenética, ofertada pelo curso

Ciências Biológicas/UNIVASF, a partir das análises das lâminas, os discentes identificaram números (haploides e

diploides) e morfologias cromossômicas (metacêntrica/submetacêntrica/acrocêntrica), diferenciaram cromossomos

autossomos e sexuais quando possível e classificaram o cariótipo quanto à simetria

(simétrico/assimétrico/gradativo/bimodal). Em paralelo, foram confeccionadas pranchas plastificadas, permitindo

escrever sobre as mesmas com lápis, contendo a imagem da espécie, nomes científico e vulgar, cariograma

montado a partir de metáfases fotografadas e questionamentos envolvendo as características cariotípicas acima

citadas. Tais pranchas têm sido utilizadas nas aulas práticas de Genética geral, ofertada pelo curso de Ciências

Biológicas (IFAL). Ambas as abordagens suscitaram a curiosidade pelo tema, a qual foi notória pela participação

ativa dos discentes nas aulas. Assim, o laminário constituiu-se como uma ferramenta para a transposição didática,

facilitando a transformação do conhecimento científico em saber escolar, contribuindo para o processo ensino-

aprendizagem.

APOIO Ministério da Integração Nacional; UNIVASF

18


EXPRESSÃO DO GENE PGC-1? EM MÚSCULO GASTROCNÊMIO DE RATOS APÓS SESSÃO

ÚNICA DE EXERCÍCIO EXAUSTIVO

José William Girão Dias1; Isabele da Silva Pereira

1; Luiz Henrique Pontes dos Santos

1; Sávio Victor Diógenes

Mendes1; Jonathan Elias Rodrigues Martins

1; Karla Camila Lima de Souza

1; Francisco Sérgio Lopes

Vasconcelos Filho1; Christina Pacheco

1; Thiany Vieira do Nascimento

2; Anderson Gomes Agostinho

2; Juliana

Osório Alves1; Vânia Marilande Ceccatto

1.


(1)Universidade Estadual do Ceará;

(2)Faculdade Maurício de Nassau

RESUMO O exercício físico é uma terapêutica não-farmacológica que promove entre outras modificações moleculares

benéficas à saúde, o aumento da biogênese mitocondrial. Um dos principais genes relacionado a este processo é o

Co-ativador-1α do receptor ativado de proliferador de Peroxissoma -γ (PGC-1α) pois interage e co-ativa uma

variedade de fatores e receptores nucleares envolvidos na indução de diversos outros genes ligados ao exercício.

Porém ainda não se conhece o comportamento de expressão deste importante fator após algumas horas de uma

sessão de exercício experimental exaustivo. Buscou-se desta forma analisar a expressão do gene PGC-1? na

porção vermelha do músculo gastrocnêmio de ratos, submetidos a uma sessão de exercício exaustivo. Este

trabalho foi aprovado pelo CEUA/UECE, nº 3145789/2014. Trinta e seis ratos machos, com peso de 220-250

gramas com alimentação ad libitum e ambiente com temperatura controlada em 20-22 oC foram distribuídos em

seis grupos experimentais: Controle sedentário (C) e Pós-exercício com eutanásia do animal nos horários: (0h), 6h,

12h, 24h e 48h após o teste exaustivo. Os animais foram adaptados à esteira ergométrica em velocidade mínima

(cinco dias por semana, 1a semana 0,4 km/h por 5 minutos, 2

a semana: 0,4 km/h por 10 minutos) por duas

semanas, após o que, ocorreu o teste. Este teste consistiu de a uma sessão única de exercício exaustivo, em etapas

de 3 minutos de corrida em carga constante, com incrementos de 0,2 km/h entre etapas subsequentes até a

exaustão do animal. Nos horários previstos, os animais foram anestesiados e decapitados. Amostras do músculo

gastrocnêmio foram dissecadas, pesadas e congeladas em -80 ?C. A análise da expressão gênica foi realizada

através da técnica de qPCR, sistema Biorad CFX 96. Os resultados foram avaliados pela análise de variância

(ANOVA - One way) e pós teste de Tukey (p<0,05). Os dados encontrados demonstraram um aumento

significativo do gene PGC-1? no grupo 6h após exercício (2,23±0,25) quando comparado com o grupo controle

(1,12 ± 0,27). Os outros grupos não mostraram diferença significativa entre si e com o controle, apresentando

assim um pico de expressão deste gene após o exercício exaustivo e agudo, regredindo aos níveis basais

posteriormente. Este pico de expressão provavelmente está ligado, portanto, à necessidade celular de energia na

forma de ATP por indução de biogênese mitocondrial e ativação geral metabólica.

APOIO FUNCAP

19


INTOLERÂNCIA À LACTOSE: EXPLORANDO A COEVOLUÇÃO ENTRE GENES E CULTURA

HUMANA

Felipe Pessoa da Silva1; Iêda Ferreira de Oliveira

1.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Departamento de Biologia, Recife, PE

RESUMO Todos os mamíferos recém-nascidos dependem do leite como fonte exclusiva de nutrição, sendo a lactose seu

carboidrato principal. Na sua decomposição em glicose e galactose, monossacarídeos absorvíveis pelo intestino, a

ação da enzima lactase é fundamental. Porém, observa-se que a habilidade de digerir a lactose pode diminuir ao

longo da vida, sobretudo em humanos. Hoje, sabe-se que a persistência ou não à lactase possui causa genética,

cuja herança é autossômica dominante. Indivíduos persistentes possuem mutações em seu DNA que mantêm o

gene lactase (LCT) funcional na vida adulta e, portanto, são capazes de digerir a lactose. Evidências também

sugerem que tais alterações são evolutivamente recentes, surgiram independentemente e aumentaram sua

frequência devido à seleção natural em algumas populações humanas. O objetivo desse trabalho é apresentar uma

oficina pedagógica, voltada para estudantes do Ensino Médio, que explora aspectos genéticos, moleculares e

evolutivos da intolerância à lactose. Inicialmente, exibe-se um vídeo sobre o tema, a fim de sensibilizar e resgatar

os conhecimentos prévios dos participantes. A seguir, são explicados os principais mecanismos moleculares

responsáveis pelos diferentes fenótipos observados (persistente ou não à lactase). Depois, algumas sequências de

DNA do gene LCT de diferentes populações são exploradas, com o emprego do programa MEGA. Nele, os

participantes realizam o alinhamento de sequências e a construção da árvore evolutiva. Fichas também são

distribuídas, para que cada participante faça anotações, sistematize as informações e resolva uma situação-

problema contextualizada à oficina. Por fim, os resultados são coletivamente discutidos. A oficina foi inicialmente

testada por um grupo de voluntários, estudantes de graduação. Atualmente, ela vem sendo aplicada em escolas de

Ensino Médio. Em geral, a oficina foi positivamente aceita pelos participantes. Eles demonstraram interesse, fácil

entendimento, participação ativa e colaborativa, além de curiosidade sobre o assunto. Entretanto, algumas

dificuldades conceituais foram observadas, como: alelo, promotor, polimorfismo e filogenia, uma vez que esses

conteúdos raramente são abordados na Educação Básica. Essa oficina tem contribuído na popularização científica,

utilizando o tema cotidiano intolerância à lactose como modelo. Além disso, ela constitui recurso didático

alternativo ao Ensino de Genética, em que é possível explorar a coevolução entre genes e cultura humana.

20


JOGO LÚDICO COMO: FERRAMENTA FACILITADORA DA APRENDIZAGEM DE ALUNOS DE

ESCOLA PÚBLICA DO ENSINO MÉDIO

Eduardo Junior da Conceição1; Higor Maciel Pontes da Silva

1; Daniela Martins dos Santos

1; Bruna Cláudia dos

Santos1; Luiz Vital F. C. da Cunha

1; José Henrique Santoro Filho

1; Dilene Minervino de Souza

1.


(1)Universidade Católica de Pernambuco-UNICAP

RESUMO O ensino de Biologia não deve permanecer centrado na metodologia baseada na transmissão e recepção de

informações através de aulas meramente expositivas, é necessário que o professor faça uso de estratégias que

possibilitem a atuação do estudante na construção do conhecimento. O trabalho teve como objetivo incentivar e

despertar o desenvolvimento da aprendizagem de forma interdisciplinar, dinâmica e contextualizada através do

jogo lúdico, tendo em vista que este, além de ser incentivado pelos PCNs como mediadores, quando planejados e

usados de forma a unirem o lúdico com o ensino, proporcionam extremamente para o processo de ensino-

aprendizagem desenvolvendo o cognitivo a fim de facilitar a construção do conhecimento em torno do tema

Código Genético. Para isso foi proposto e avaliado um (Jogo do DNA), que abordam alguns dos conteúdos

programáticos da Biologia para o Ensino Médio, e aplicado com alunos de escola estadual do Recife. O método

utilizado para a avaliação foram palestras e questionários em seguida, durante e depois da realização de cada jogo,

resultando em um maior interesse proveniente dos alunos no empenho em estudar os conteúdos de biologia e um

esforço maior para relacionarem o conteúdo com a aula teórica e assim poderem aproveitar bem o jogo. Após

aplicação do jogo, os comentários feitos pelos alunos demonstraram que o jogo serviu para uma melhor

compreensão da estrutura da molécula de DNA, colaborando para a eficácia do aspecto lúdico associado ao

cognitivo como importante estratégia de ensino. Além disso, é observado que a diversão e competitividade oriunda

do jogo estimula o aprendizado e que também proporcionam interação e ajuda mútua entre os jogadores para que

todos permaneçam jogando. E também pode possibilitar a conscientização se o jogo for elaborado para tal

propósito.

APOIO CAPES

21


O ACONSELHAMENTO GENÉTICO SOB O OLHAR DO DISCENTE: ENFOQUE NA ATUAÇÃO

PROFISSIONAL

Dulceria Costa da Silva1; Renaly da Costa Rodrigues

2; Bruno Luiz Fonseca Schamber Reis

3.


(1)Discente do curso de Ciências Biológicas da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB);

(2)Discente do curso de

Fisioterapia da Universidade Estadual da Paraíba (UEPB); (3)

Faculdade de Ciências Médicas de Campina Grande

(FCM-CG)

RESUMO INTRODUÇÃO O aconselhamento genético (AG) é o processo de comunicação sobre a possibilidade de

ocorrência ou recorrência familiar de doenças genéticas, envolvendo diagnóstico e informações sobre a doença em

questão, terapias e/ou profilaxias e suporte psicoterápico. Nos últimos anos, modificações na regulamentação

sobre a determinação dos profissionais habilitados a atuar no AG, têm levado a sérias discussões sobre o tema

OBJETIVO Analisar a compreensão dos discentes de cursos de ciências biológicas e da saúde a respeito do AG

METODOLOGIA Foram aplicados questionários semi-estruturados para alunos dos cursos de biologia,

enfermagem, odontologia e fisioterapia da UEPB campus I que já cursaram a disciplina de genética. Obteve-se

133 respostas, sendo 39 de enfermagem, 34 de biologia, 31 de odontologia e 29 de fisioterapia RESULTADOS

Quando perguntados se já ouviram falar em AG, em biologia 50% já ouviram falar mas não definiram, 35%

definiram e 15% nunca ouviram falar, sendo este o critério de exclusão das questões subsequentes. Em

odontologia 52% nunca ouviram falar, 42% não são capazes de definir e 6% definiram. Em enfermagem 54%

nunca ouviram falar e os 46% restantes já ouviram falar mas não são capazes definir. Em fisioterapia, 32% nunca

ouviram falar, 41% já ouviram mas não são capazes de definir e 27% definiram. Quando perguntados se sabem de

alguma regulamentação sobre profissionais que podem atuar no AG, 84% de odontologia, 80% de fisioterapia,

79% de enfermagem e 59% de biologia afirmaram que não. Em biologia 83% sabem ou acreditam que são

habilitados para realizar AG. Em enfermagem, odontologia e fisioterapia 79%, 87% e 72% respectivamente,

responderam não saber ou acreditarem que sejam. Quando perguntados se seu curso oferece conhecimentos

suficientes para atuar no AG após formados 100% dos discentes de enfermagem, 87% de odontologia e 86% de

biologia e 84% de fisioterapia afirmaram que não. 80% dos discentes de enfermagem e de fisioterapia e 75% de

odontologia afirmaram que nunca houve discussão sobre a habilitação da profissão para atuar no AG, enquanto em

biologia o percentual cai para 59%. Dentre os profissionais mais relatados para atuar, citou-se médicos

geneticistas, médicos de um modo geral, seguidos por biólogos geneticistas. CONCLUSÃO Embora todos os

cursos analisados apresentem um déficit considerável no conhecimento e discussão sobre AG, o curso de biologia

mostrou os resultados mais satisfatórios.

22


O DESAFIO DE ENSINAR E APRENDER GENÉTICA EM UMA ESCOLA PÚBLICA DE ENSINO

FUNDAMENTAL

Patrícia Valéria Castelo Branco Araújo1; Meydson Benjamim Carvalho Correa

1; Muryllo Santos Castro

1; Vera

Lucia Maciel Silva2.


(1)Universidade Federal do Maranhão;

(2)Universidade Estadual do Maranhão

RESUMO Atualmente muito se tem ouvido falar sobre o grande desinteresse por parte de muitos alunos por qualquer

atividade escolar. No entanto, a escola também tem suas falhas nesse processo quando não oferece condições

oportunas para o bom aprendizado. Nas aulas de Ciências, uma das principais dificuldades dos estudantes está

relacionada à compreensão de conceitos. Visando a melhoria desse quadro, professores devem buscar aulas

alternativas para melhorar o interesse dos alunos pelas atividades escolares, motivando-os a participarem e se

envolverem no processo. Essas atividades são importantes principalmente em conteúdos que envolvam conceitos

de difícil entendimento para os alunos, como a genética, inserida dentro da disciplina de ciências no Ensino

Fundamental. Assim, este trabalho pretendeu avaliar, através de questionários, o grau de aprendizado de alunos do

9º ano do Ensino Fundamental de uma Escola Pública do Município de São José de Ribamar - MA, no conteúdo

de Genética, antes e após atividades práticas, com o objetivo de verificar se essas atividades melhoraram o

interesse e o aprendizado dos alunos, em relação às aulas teóricas. O questionário era semelhante nos dois

momentos, sendo utilizado o teste pareado de McNemar para análise dos dados. Todos os alunos do 9º ano da

escola (63 alunos) responderam aos questionários. Contudo, somente participaram desta pesquisa aqueles que os

responderam nos dois momentos (34 alunos). As atividades práticas eram relacionadas ao conteúdo ministrado na

teoria, onde foram confeccionados modelos didáticos, como a estrutura do DNA; montagem de cariótipos, com

diferentes casos de aneuploidias; experimentos, com a extração de DNA de cebola; e, exposição de cartazes e

produtos para o tema transgênicos. Os resultados mostraram que, de forma geral, os alunos tiveram um bom

entendimento da disciplina somente com as aulas teóricas. As atividades práticas motivaram a participação de boa

parte dos alunos, mas não melhoraram significativamente o aprendizado (p > 0,05) na maioria das perguntas do

questionário. Também foi observado instigante senso crítico dos alunos quanto aos assuntos mais polêmicos, como

os transgênicos. Com isso, concluímos que somente as atividades práticas não são suficientes para o aprendizado

do conteúdo de genética. Elas têm mais relevância quando o aluno tem uma boa base teórica, adquirida,

principalmente, através de aulas que despertem o seu interesse no aprendizado.

23


O ENSINO DE GENÉTICA E A IMPLICAÇÃO DO SUJEITO NO ATO DE CONHECER

Jair Moisés de Sousa1; Maria da Conceição Xavier de Almeida

2.


(1)Universidade Federal de Campina Grande;

(2)Universidade Federal do Rio Grande do Norte

RESUMO Texto: Os conteúdos de genética do ensino médio, contidos nos livros didáticos, apresentam a ciência genética

como sendo uma atividade praticada por sujeitos neutros sem qualquer influência de aspectos pessoais? O

objetivo desse trabalho é discutir a implicação do sujeito na ciência por meio de uma matriz epistemológica das

Ciências da Complexidade, bem como a forma como os livros de biologia do ensino médio abordam a importância

de aspectos humanísticos na construção de explicações científicas na área de genética. A ciência aqui será

concebida, como um aspecto da cultura humana e suas explicações, hipóteses e teorias como uma construção dos

sujeitos imersos em seus temores, desejos, crenças, fantasias e tempo histórico que marcaram suas existências.

Para tal, foram escolhidos cinco livros de biologia utilizados em escolas brasileiras e indicados no PNLD Ensino

médio de 2015. Após as escolha dos livros, foram seleciondos conteúdos de genética alusivos a uma história da

ciência, e seguidamente, identificados e analisadas as ideias que faziam referência a uma cultura humanística.

Após análise das obras escolhidas, percebeu-se que: todas as obras apresentaram uma abordagem histórica, apenas

de fatos exitosos, não discutindo aspectos culturais, disputa por status, comuns ao fazer da ciência. Os fatos

históricos, aparecem na maioria das vezes nos finais dos capítulos, passando assim uma visão de desvalorização

das relações sociais e as contribuições da genética são apresentadas como "descobertas científicas", ou seja,

verdades existentes que apenas foram reveladas pelos trabalhos experimentais. Os conflitos pessoais dos sujeitos

não aparecem nos discursos dos autores e a ciência genética, por omissão, é apresentada de forma asséptica de

humanidade. Conseqüentemente, os cientistas são vistos, como mitos, quase deuses, desprovidos de falhas e

incongruências de seus pensamentos. Diante disso, é necessário que os livros didáticos apresentem a construção

das ideias cientificas levando em consideração aspectos mais pessoais dos cientistas para que os alunos percebam

que o trabalho da ciência, como toda atividade humana, é marcada por erros, acertos, incertezas e sucessos.

24


O JOGO DA ENDOGAMIA, UMA ABORDAGEM CONSTRUTIVISTA NO ENSINO DE GENÉTICA.

Rafaella Nadja Soares da Silva1; Mayara Sousa da Silva

1; Gustavo Farias

1; Vilma Loreto

1.


(1)ivanise maria da silva

RESUMO O ato de se relacionar com pessoas da mesma família ou com algum grau de parentesco envolve não só um

contexto histórico e cultural, mas também genético. A detecção de casamentos consanguíneos é importante como

forma de identificar o aumento de doenças genéticas recessivas nas populações, sobretudo no nordeste brasileiro

onde essa prática é comum. A utilização de jogos didáticos tem sido uma prática educacional muito útil para uma

melhor contextualização de conceitos na área biológica, principalmente no campo da genética onde algumas

dúvidas conceituais e dificuldade de compreensão são um dos maiores paradigmas do ensino. Para a realização

deste trabalho foi criado um jogo de tabuleiro, que consistiu em demonstrar as consequências causadas pelo

casamento cosanguíneo. O jogo foi construído numa perspectiva sustentável, onde 90% do material utilizado foi

reciclado, desta forma estamos transmitindo para os educandos não apenas os aspectos de herança genética mas

também sensibilizando-os a cerca da educação ambiental. Para a construção do tabuleiro foi utilizado isopor que

foi encapado com papel e realizado marcações e para a confecção do dado utilizamos papelão, para dar sua forma

utilizamos um modelo encontrado na internet. O jogo consiste em jogar o dado e seguir no tabuleiro o número de

casas definido pelo mesmo. Ao longo do tabuleiro algumas casas possuem instruções, como por exemplo, estourar

um balão que será utilizado na dinâmica e dentro dele terá informações como: case-se ou divorcie-se,

especificando também o nível do grau de parentesco que esse relacionamento pode ter. Cada casamento trará um

risco e isso será dito ao decorrer do jogo. Por fim, a dupla que tiver o menor número de casamentos entre parentes

será a vencedora. Nosso intuito foi de trazer o tema endogamiaque é pouco conhecido pelos alunos de uma forma

mais didática e divertida. Desta forma, foi comprovado a partir deste trabalho que o lúdico auxiliou na

aprendizagem deste tema de uma forma muito eficaz e duradoura.

APOIO Não houve apoio financeiro. Todos os gastos foram bancados pelos autores do trabalho.

25


O LÚDICO COMO FACILITADOR DO ENSINO-APRENDIZAGEM DE GENÉTICA NA ESCOLA

FRANCISCO ROMANO DA SILVEIRA, MÃE D'ÁGUA- PARAÍBA.

José Elinaldo da Silva Oliveira1; Jéssica Maria Alexandre Soares

1; Glícia Joama Alves da Costa

1; Hachiley

Louyse de Azevedo Oliveira1; Áquila Priscila Ferraz Silva

1; Merilane da Silva Calixto

1.


(1)Unidade Acadêmica de Ciências Biológicas/Centro de Saúde e Tecnologia Rural/UFCG - Patos/PB

RESUMO Materiais didáticos são ferramentas fundamentais no processo de ensino-aprendizagem, sendo o jogo didático uma

importante alternativa por favorecer a construção do conhecimento do aluno. Assim, o objetivo do trabalho foi

aplicar jogos lúdicos, em sala de aula, como estratégia facilitadora do ensino-aprendizagem de Genética,

apresentando o conteúdo da aula de forma dinâmica e prática, para evitar uma aula tradicional, exaustiva e

monótona, devido o conteúdo de Genética ser considerado difícil. O trabalho foi desenvolvido na Escola Estadual

Francisco Romano da Silveira, no Município de Mãe D´água, Paraíba. A amostra utilizada foi de 32 alunos do

terceiro ano do Ensino Médio, que responderam um mesmo questionário antes e depois de cada jogo utilizado,

explorando os conceitos já vistos em sala pelos professores, para uma análise comparativa dos dados através de

abordagem quantitativa. Foi realizada uma oficina "Genética na Escola", onde foram aplicados dois jogos: "Bingo

das Ervilhas", abrangendo o conteúdo da 1ª Lei de Mendel, e "Construindo Heredogramas", com peças para

interpretar situações-problema e montar o heredograma de três doenças: Surdez, Polidactlia e Albinismo. Nos

resultados da aplicação do Bingo das ervilhas, percebeu-se um aumento significado no número de acertos, de

27,8% para 82,8%, com índice bastante elevado no declínio da taxa de erros (55%). Na aplicação do jogo

construindo heredogramas, os resultados também mostraram um elevado percentual de acertos ao comparar o pré e

pós-testes, aumentando de 18,8% para 91,4%, com uma diminuição no número de erros de 12,5%, além de haver

um declínio bastante significativo nos questionários sem respostas antes do jogo, de 43,8% para 0% após o jogo.

Após a aplicação dos jogos houve um elevado aumento percentual de acertos e consequente redução de erros,

indicando uma melhoria na fixação dos conteúdos e um melhor aprendizado dos alunos com a aplicação destes

jogos didáticos, comparando os percentuais obtidos nos pré e pós-testes. Dessa forma, é notório que metodologias

alternativas, como jogos lúdicos, são facilitadores no processo ensino-aprendizagem, permitindo aos alunos o

alcance do conhecimento de forma efetiva, prazerosa e eficaz, potencializando a aprendizagem e gerando

condições que ampliam a construção de conhecimentos. Além de ter um caráter motivacional, o lúdico pode ser

utilizado até mesmo em escolas que não possuam uma infraestrutura completa, sem laboratórios e/ou baixo

recurso financeiro.

26


O USO DE ESTRATÉGIAS DIDÁTICAS PARA O ENSINO DE GENÉTICA PARA ALUNOS DO

ENSINO MÉDIO DE UMA ESCOLA PÚBLICA DE PERNAMBUCO

Hortência Farias de Andrade1; Elys Karine Carvalho da Silva

1; Cícero José Luíz dos Ramos Almeida

1; Márcia

Vanusa da Silva1.


(1)UFPE

RESUMO A educação é o principal instrumento para a formação humana, uma vez que a mesma é formadora de cidadãos

atuantes na sociedade em que estão inseridos. Nas escolas publicas, observamos que são raras as atividades lúdicas

em sala de aula. E por isso se faz necessário um maior empenho para trazer novas atividades aos alunos do ensino

médio envolvendo a genética. Os conteúdos da genética chegam ao terceiro ano do ensino médio como um tabu,

algo extremamente novo e intocável e o resultado da formação inadequada nas áreas de genética e biologia

molecular aparecem de forma distanciada entre ensino escolar e a assimilação de conceitos informais, não

sistematizados. Segundo Krasilchick a formação exclusivamente teórica, resulta na dificuldade em estabelecer

relações entre o cotidiano e o conhecimento adquirido, distanciando a realidade dos alunos dos acontecimentos do

mundo a sua volta. Por isso, o uso de atividades interativas e lúdicas contribui para a aprendizagem de assuntos no

campo da genética, servindo como facilitador no processo de ensino e aprendizagem. O presente trabalho teve

como objetivo verificar, por meio de questionário, a opinião dos alunos do ensino médio sobre as aulas lúdicas

envolvendo os temas da genética. Inicialmente foi feito uma explicação do trabalho em questão, para o

entendimento dos alunos. Os dados foram obtidos através de aplicação de questionário e as variáveis analisadas

foram: Frequência das aulas práticas formuladas pelo pelos professores, quais os recursos utilizados na aula, qual a

contribuição que esse material traz para as aulas e por fim a compreensão deles frente a essas aulas. A

participação dos alunos foi extremamente intensa e proveitosa, permitindo o surgimento e esclarecimento de

dúvidas, fazendo com que os mesmos sejam disseminadores de conceitos importantes para seu meio. Diante dos

resultados, percebeu-se a necessidade de continuar com as atividades lúdicas e incentivar todos os professores da

escola a trazer alguns conceitos ligados a atividades nessa perspectiva, para que os mesmos sejam melhor

internalizados.

27


OS JOGOS LÚDICOS COMO FERRAMENTA METODOLÓGICA DE ENSINO-APRENDIZAGEM EM

GENÉTICA

Eduardo Junior da Conceição1; Pollyana Souto da Silva

1; Wallace Nazario de Araújo

1; Welison Paulo Lopes

Pessoa1; Renato Barros Morais

2.


(1)Universidade Católica de Pernambuco-UNICAP;

(2)Laboratório de Biofísica, Fisiologia e Farmacologia, Centro

de Ciências Biológicas e da Saúde (CCBS), Universidade Católica de Pernambuco-UNICAP

RESUMO Os conceitos abordados no ensino da genética são geralmente de difícil compreensão, sendo necessária a busca por

novas metodologias que auxiliem no aprendizado do aluno e que estimulem o interesse pelo tema, tornando o

processo de ensino e aprendizagem mais significativo. Nesse contexto os jogos lúdicos se enquadram como

mecanismo facilitador desse processo, ocorrendo dessa forma uma interação entre a teoria e a prática, o que acaba

por despertar a curiosidade dos alunos tornando-os mais ativos, aspecto muito importante nas aulas de genética.

Segundo o PCN, os jogos lúdicos constituem uma forma de propor atividades favorecendo a criatividade e a

simulação de situações-problema e que exercem soluções e estimulam o planejamento de ações. Pensando neste

constante desafio no ensino da genética, o presente trabalho teve como objetivo utilizar o jogo lúdico como

ferramenta metodológica de ensino e aprendizagem. Sendo aplicado pelos licenciandos do Curso de Licenciatura

em Biologia da UNICAP em um colégio público do Recife, Almirante Soares Dutra, em duas turmas do terceiro

ano do ensino médio, cada com uma média de 45 alunos, o jogo foi verificado em alunos de 15 a 17 anos, que

executaram um pré-teste antes de jogar, sendo selecionadas em torno de 80 questões de genética com os assuntos

em que os alunos tinham maiores dificuldades, tais como: DNA, replicação, transcrição, termos genéticos e

tradução. O questionário de pré-teste fora aplicado nas duas turmas, demonstrando uma média em torno de 45%.

Já o resultado do pós-teste, com o jogo lúdico, - um jogo de tabuleiro tematizado sobre genética com cartas que

apresentavam problemas usando os mesmos assuntos do questionário - foi significativamente superior quando

comparados aos do pré-teste, a média de acertos superou a margem dos 75%. A análise dos resultados demonstra

que o jogo lúdico é uma eficiente ferramenta auxiliar na aprendizagem dos conteúdos relacionados à temática

abordada, este jogo também possibilitou a interligação da teoria à prática com uma nova metodologia, sugerindo

ser uma estratégia insubstituível no estímulo da construção do conhecimento e na progressão das diferentes

habilidades.

28


PERCEPÇÃO SOBRE GENÉTICA MENDELIANA EM TURMAS DA 3ª SÉRIE DO ENSINO MÉDIO

DA UNIDADE ESCOLAR EDITH NOBRE DE CASTRO EM SÃO RAIMUNDO NONATO-PI.

Fernando Raimundo de Sousa1; Goldemberg Alves Duarte

1; Marcos Ricelle de Carvalho

1; Taylane Fernandes da

Rocha1; André Santos Landim

1.


(1)Universidade Estadual do Piauí - UESPI

RESUMO Atualmente o ensino de genética vem sendo considerado como algo abstrato, longe da realidade dos alunos, pois

os professores tem dificuldade de trabalhar seu conteúdo por se tratar de uma disciplina de difícil assimilação,

dessa forma se limitam apenas a aulas teóricas e os alunos não conseguem compreender e aprender o que foi

ensinado saindo do Ensino Médio sem o conhecimento básico da disciplina como, por exemplo, sobre as leis de

Mendelianas, fato que prejudica o aluno que decide dar continuidade aos estudos em Ciências Naturais no Ensino

Superior. Esse trabalho teve como objetivo facilitar o conhecimento sobre a Primeira e Segunda Lei de Mendel,

bem como investigar quanto os alunos sabem sobre o tema. A intervenção foi realizada em duas turmas da 3ª Série

do Ensino Médio, designadas de B e C, na Unidade Escolar Edith Nobre de Castro em São Raimundo Nonato,

Piauí, onde foi aplicado um questionário referente às Leis de Mendel, em seguida foi feita uma abordagem teórica

do conteúdo e aplicação de um jogo didático denominado de "Dominó genético" com informações de genética

mendeliana. O mesmo questionário foi respondido pelos alunos ao final da intervenção. Participaram da pesquisa

53 alunos no total, sendo 23 na 3ª Série B e 20 na 3ª Série C. As perguntas respondidas no início do trabalho pela

turma B contabilizaram 32,2% de acertos e no final esse índice chegou a 38,3%, enquanto que na turma C, 30%

dos alunos acertaram as questões no início e após a atividade esse número subiu para 44,5%. Portanto, com a

pesquisa, constatou-se a necessidade de se trabalhar de forma lúdica em disciplinas nas quais os alunos

consideram como "difíceis de assimilar". Pois tais metodologias chamam a atenção dos alunos e fazem com que

eles participem ativamente do aprendizado, tornando o processo de fixação do conteúdo mais eficiente que por

meio de aula expositiva, onde os alunos apenas recebem as informações oriundas do professor.

29


RELATO DE EXPERIÊNCIA: DESMISTIFICANDO MITOS E PRECONCEITOS SOBRE O

PORTADOR DE SÍNDROME DE DOWN

Renata de Barros Oliveira1; Rayane Santana da Silva

1; Rafaela Alves de Oliveira

1; Janaína dos Santos

2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Escola Estadual Professora Amélia Coelho

RESUMO No século XIX surgiram os primeiros trabalhos científicos envolvendo a síndrome de Down (SD). A mesma foi

descrita por John Langdon Down, em 1866, e identificada em 1959 por Jerome Lejeune. A SD, também conhecida

por Trissomia do 21, é uma alteração genética que ocorre durante a divisão celular, mais precisamente no processo

de formação dos gametas ou do embrião, resultando na existência de três cromossomos no par 21. Seguindo os

preceitos constitucionais de que toda criança tem direito inalienável à educação, a política na área da educação

pública no Brasil nos últimos anos tem sido a inclusão dos estudantes com síndrome de Down e outros tipos de

deficiência na rede regular de ensino, com um crescimento significativo do número de matrículas nos últimos

anos. No entanto, nem sempre esta inclusão se dá de maneira satisfatória: geralmente faltam recursos humanos e

pedagógicos para atender às necessidades educacionais especiais dos alunos. O presente trabalho relata a

experiência obtida por uma das equipes do subprojeto PIBID Biologia do Centro Acadêmico de Vitória de Santo

Antão. A atividade desenvolvida abordou um dos diversos assuntos de genética: as Aneuploidias Autossômicas

com ênfase na Síndrome de Down, sendo realizada a partir de uma exposição/debate com duas turmas do terceiro

ano do ensino médio da Escola Estadual Professora Amélia Coelho, localizada na mesma cidade. Foram 65 alunos

envolvidos, se fez necessário a utilização de diversos recursos para a compreensão da relevância do conteúdo

abordado, culminando em um pequeno evento na Escola. Desta forma, o assunto foi explanado com o auxílio de

cordéis, realização de dinâmicas e da formação de uma mesa redonda contendo uma assistente social e a irmã de

uma portadora da síndrome. Essa atividade teve como objetivo aprimorar e demonstrar que conceitos éticos e

críticos que podem ser abordados no ensino biologia, e sua importância com instrumento de inclusão na sala de

aula. Os resultados obtidos através dessa intervenção foram surpreendentes, os alunos participaram ativamente da

atividade, desde a organização até a produção dos materiais didáticos, a mesa redonda foi considerada altamente

proveitosa por aproximar os alunos da vida de um portador da síndrome. A escola pública brasileira tem que

melhorar muito no aspecto inclusivo, e acreditamos que esse tipo de prática pode contribuir para alcançarmos uma

escola de qualidade para todos.

30


REPRESENTAÇÕES MENTAIS SOBRE A MOLÉCULA DE DNA: A IMPORTÂNCIA DAS OFICINAS

PEDAGÓGICO-CIENTÍFICAS NO ENSINO MÉDIO

Maria Izabel Pereira e Silva1; Lisângela Barbosa de Medeiros

1; Iêda Ferreira de Oliveira

1.


(1)Departamento de Biologia/Universidade Federal Rural de Pernambuco

RESUMO O DNA é a molécula responsável pelo armazenamento e transmissão das informações genéticas dos seres vivos.

Desde a elucidação de sua estrutura, em 1953, seguiu-se intenso desenvolvimento nos campos da Genética e

Biotecnologia, com desdobramentos econômicos e éticos jamais vistos pela sociedade. Lamentavelmente, as

escolas não têm conseguido acompanhar esses avanços, dada a complexidade e o volume de informações

produzidas. Quando bem planejadas, propostas de divulgação científica são valiosas ferramentas de acesso ao

saber, pois transpõem a linguagem científica para um formato mais acessível a uma vasta audiência. O objetivo

desse trabalho foi analisar o impacto de uma intervenção pedagógica sobre as representações mentais de

estudantes do Ensino Médio de duas escolas do Recife quanto à molécula de DNA. Para isso, foi realizada a

oficina científica "Introdução à molécula de DNA", que consistiu num conjunto de atividades coordenadas, cuja

finalidade foi demonstrar a presença do DNA nos seres vivos, seus níveis de organização e compactação, além de

sua importância no cotidiano. As representações dos estudantes sobre o DNA foram exteriorizadas pela elaboração

de desenhos, antes da intervenção (AI) e depois (DI). Na Escola A, a análise dos desenhos indicou a ocorrência

das categorias: proposicional (AI=67%; DI=56%), imagística (AI=25%; DI=43%) e híbrida (AI=8%; DI=1%). Na

Escola B, 100% das representações foram imagísticas AI, enquanto DI, 17% foram proposicionais e 83%

imagísticas. Anteriormente à oficina, a maioria das representações exibiu muita similaridade com as ilustrações

presentes em livros didáticos (predominantemente a dupla-hélice). Os desenhos mostraram ou não elementos

essenciais a esse modelo. Quando presentes, as representações não foram, necessariamente, cientificamente

corretas. Sobre o impacto da intervenção, constatou-se a aquisição de novos conhecimentos pelos estudantes,

evidenciada pelo acréscimo de termos explicativos mais adequados aos desenhos ou outras formas de

representação do DNA (por exemplo, cromossomos ou aglomerados visualizados após o experimento de

extração). Esses resultados evidenciam a contextualização do conhecimento e a aprendizagem significativa dos

conteúdos trabalhados. Como a divulgação científica busca assegurar a presença da Ciência na cultura geral das

pessoas, conclui-se que, após essa vivência, os sujeitos serão capazes de melhor compreender e refletir sobre os

impactos das descobertas científicas no dia-a-dia.

31

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Citogenética

VARIABILITY IN DNA SITES REVEALS A NEW SYNAPOMORPHY KARYOTYPE FOR

NORTHEASTERN LINEAGE OF GENUS POINCIANELLA BRITTON & ROSE (CAESALPINOIDEAE,

LEGUMINOSAE)

Brena Van Lume1; Edeline Gagnon

2; Gustavo Souza

1.



(2)Institut de Recherche em Biologie Végétale, Quebec Canada

RESUMO The Poincianella-Erythrostemon (P-E) group sensu Lewis (1998) consists of about 35 species distributed in the

neotropical region, from Central America, the Andes across Peru, Bolivia, Argentina, and northeastern Brazil.

Molecular phylogenetic analyses have revealed that the genus is non-monophyletic, and may actually consist of

three to four separate lineages. However, more strongly resolved and well-sampled phylogenies are still needed to

clarify the taxonomy of this genus, part of the larger Caesalpinia group, which is in need of taxonomic

reorganizations. Karyotypically, this group presents numeric stability with 2n = 24 chromosomes, with a great

diversity of heterochromatic bands. This study aims to verify whether northeastern Brazilian P-E species can be

differentiated karyotypically from the other species of the genus, as well as the other genera of the Caesalpinia

group. For this, we used fluorescentin situ hybridization (FISH) with 45S and 5S ribosomal DNA. Four species of

P-E were analyzed in the Northeast of Brazil (P. bracteosa (Tul.) L.P. Queiroz, P. microphylla (Mart. ex G. Don)

L.P. Queiroz, P. pluviosa (DC.) L.P. Queiroz and P. pyramidalis (Tul.) L.P. Queiroz), as well as nine species of

Caesalpinia group. For the phylogenetic analysis, plastid sequences matK, rps16, trnDT, trnL an dycf6 and nuclear

ITS of 20 species were analyzed. The molecular phylogeny revealed that northeastern Brazilian P-E species form a

well-supported group. All of them exhibited synteny between the sites of 5S rDNA and 45S in the proximal region

of a pair of acrocentric chromosomes. Also, synteny was observed in rDNA of Arquita mimosifolia and

Caesalpinia pulcherrima, but in different positions of the chromosome. Furthermore, they showed 45S rDNA sites

on the short arm of three other acrocentric pairs. Moreover, other species of the Caesalpinia group showed sites of

5S and 45S rDNA on different chromosomes, with 5S located in the interstitial region of a metacentric pair. The

rDNA sites synteny present in the northeastern Brazilian species of Poincianella at first seem to represent a

synapomorphy for this group, but our results show that the character seems to have also have arisen de novo in two

other species belonging to different genera. These results support the separation of P-E in two independent

lineages, suggesting that the representatives of northeastern Brazil can be circumscribed in a different genus.

APOIO CNPq

32


BANDEAMENTO CROMOSSÔMICO E FISH EM ESPÉCIES DE CRINUM L. (AMARYLLIDACEAE

JAUME ST.-HIL.).

Emmanuelly Calina Xavier Rodrigues dos Santos1; Leonardo Pessoa Felix

2; Reginaldo de Carvalho

3.


(1)Departamento de Ciências Agrárias, Universidade Estadual da Paraíba, Catolé do Rocha, Brasil;

(2)Departamento

de Fitotecnia, Universidade Federal da Paraíba, Areia, Brasil ; (3)

Departamento de Biologia/Genética,

Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, Brasil

RESUMO O gênero Crinum L. com cerca de 130 espécies, é o único membro pantropical da família Amaryllidaceae,

ocorrendo na Ásia, América do sul e norte e Austrália. Possui grande estabilidade cariotípica, semelhança na

morfologia cromossômica, baixa frequência de poliploidia, número básico x = 11, e seu monofiletismo é bem

suportado por estudos moleculares. Com o objetivo caracterizar o cariótipo de três espécies de Crinum (C.

americanum L., C. asiaticum L. e C. ornatum (Aiton) Herb.) e investigar a distribuição da heterocromatina, foram

utilizadas técnicas como o bandeamento C, fluorocromos CMA3 e DAPI e hibridização in situ fluorescente (FISH)

com sondas de DNA ribossomal 5S e 45S. Como resultados deste trabalho, as bandas C e CMA+ apresentaram

colocalização com o DNAr 45S no braço longo de um par submetacêntrico. Crinum americanum e C. asiaticum

apresentaram dois pares de sítios de DNAr 5S um na região subterminal de um par metacêntrico maior e outro na

região proximal de um par metacêntrico menor. Em C. ornatum foi detectado um par de sítios de DNAr 5S no

braço longo do mesmo par submetacêntrico em que ocorre o sítio de DNAr 45S. Adicionalmente, em C. ornatum

o bandeamento CMA/DAPI/C revelou bandas heterocromáticas CMA

-/DAPI

+ na

região pericentromérica de todos

os cromossomos do complemento. Os dados citogenéticos corroboram com as semelhanças morfológicas

vegetativas e a distribuição geográfica, uma vez que C. americanum e C. asiaticum, com mesmo número de

bandas C/CMA+ e de sítios de DNAr 5S e 45S, apresentam flores em forma de estrela e ocorrem no Sul e Leste da

África, Madagascar e Austrália, enquanto C. ornatum, com bandas DAPI+ e um único sítio de DNAr 5S no mesmo

cromossomo que o DNAr 45S, possui flores em forma de sino e ocorre na África Ocidental. Este trabalho mostra a

importância da citogenética para auxiliar estudos de grupos com relações filogenéticas intragenéricas ainda não

bem resolvidas como é o caso do gênero Crinum.

APOIO CAPES, FACEPE

33


CHROMOSOME NUMBER AND GENOME SIZE IN THE PALEOPOLYPLOID SUBFAMILY

BOMBACOIDEAE (MALVACEAE)

Lucas Alexandre de Souza Costa1; Álex Oliveira

1; Jefferson Guedes Carvalho Sobrinho

2; Gustavo Souza

1.



(2)Universidade Federal do Vale do São Francisco

RESUMO The subfamily Bombacoideae (Malvaceae) is composed of about 250 predominantly arboreal species distributed

mainly in the Neotropical region. The subfamily represents a paleopolyploid lineage characterized by small and

numerous chromosomes ranging from 2n = 86 to 2n = 276. In the present work we analyzed the evolution of

chromosome number and genome size (1C) in Bombacoideae. Data were obtained from cytological preparations

and flow cytometry and complemented by literature data. Diploids were found in Ochroma (2n = 84),

Cavanillesia, Pochota, Pseudobombax (2n = 88), Bombax, Eriotheca gracilipes and Pachira (2n = 92). We found

polyploids in Adansonia digitata (2n = 160) and Eriotheca (2n = ca. 194 and 276). Genome size ranged from 1C =

1.13 pg in Pochota fendleri to 1C = 4.77 pg in Eriotheca macrophylla. The linear increase of genome size in

Eriotheca polyploids (2x, 4x, and 6x) suggests that they are neopolyploids. Mean genome size in Bombacoideae is

similar to that of diploids in Malvoideae. Within Bombacoideae, chromosome number and genome size showed a

weak phylogenetic signal (l = 0.626 and l = 0.409, respectively). In spite of that, our analyses reveal smaller

genomes and lower chromosome numbers in the Striated bark Clade (represented in our study by Pochota +

Pseudobombax + Ceiba) than in its sister clade (i.e., the Pachira s.l. Clade), which was cytogenetically more

variable. Given the geographic distribution and species richness patterns of Bombacoideae, our data do not support

the idea that areas of long-term climatic stability such as seasonally dry tropical forests (SDTF) would have higher

genetic diversity. In contrast, the occupation of historically stable areas may have played an important role in the

observed patterns of stable low chromosome number and small genome size of Bombacoideae lineages inhabiting

SDTF areas.

APOIO CAPES

34


CITOGENÉTICA, ORIGEM E EVOLUÇÃO DE CUSCUTA VEATCHII BRANDEGEE

(CONVOLVULACEAE)

Amalia Ibiapino1; Maria Eduarda Ferraz

1; Miguel García

2; Mihai Costea

3; Sa?a Stefanovic

2; Marcelo Guerra

1.


(1)Universidade Federal do Pernambuco;

(2)University of Toronto-Mississauga;

(3)Wilfrid Laurier University

RESUMO O gênero Cuscuta está representado por cerca de 200 espécies, divididas em 4 subgêneros

(Cuscuta, Grammica, Monogynella, Pachystigma), de distribuição cosmopolita e hábito holoparasita. As sementes

das espécies prejudiciais para a agricultura podem ser distribuídas junto com as sementes de seus hospedeiros.

Sendo proibida, em alguns países a entrada de material contaminado. O grupo apresenta pouca variação

morfológica, porém alta variabilidade cariotípica, com números cromossômicos diploides entre 2n = 8 e 2n = 30 e

alguns tetraploides. O subgênero neotropical Grammica, inclui a maioria das espécies (mais de 150), divididas em

18 seções, sendo uma delas, Denticulata, formada por apenas três espécies que se distribuem por toda a América

do Norte: duas com 2n = 30 (C. nevadensis I. M. Johnst. e C. denticulata Engelm.) e uma tetraploide com 2n = 60

(C. veatchii Brandegee). Neste trabalho foi investigada a relação desse tetraploide com os seus possíveis parentais

diploides, por meio da coloração CMA/DAPI e distribuição de sítios de DNAr 5S e 45S. Cuscuta

denticulata apresentou um cariótipo estável, com cromossomos pequenos, com uma região DAPI+ na região do

centrômero, poucos cromocentros e sítios de DNAr 5S e 45S localizados em um mesmo par de cromossomos. As

outras duas espécies apresentaram 3 pares de sítios de DNAr 5S e um número variável (2 a 5 pares) de sítios de

45S. Nestas duas últimas, os sítios variaram intra- e interespecificamente em número, tamanho e posição,

apresentando um ou dois pares de sítios de DNAr 45S ligados a sítios de DNAr 5S. Além disso, C.

nevadensis possui cromossomos maiores, sem bandas DAPI+ e com muitos cromocentros enquanto C.

veatchii apresentou características cariotípicas intermediárias entre C. nevadensis e C. denticulata. Esses dados

sugerem que: 1) C. veatchii pode ser um alopoliploide formado por esses dois diploides e 2) que a instabilidade

dos sítios de DNAr de C. nevadensis foi transmitida a C. veatchii. Contudo, a possibilidade de que C.

veatchii tenha se formado por repetidos eventos de hibridização deve ser também considerada.

APOIO CAPES, CNPq

35


CITOGENÉTICA, ORIGEM E EVOLUÇÃO DE STYLOSANTHES SCABRA E ESPÉCIES AFINS DO

COMPLEXO DE S.SCABRA

Lívia de Moraes Pereira1; Gustavo Souza

1; André Marques

2; Natoniel Melo

3; Marcelo Simon

4.


(1)Laboratory of Plant Cytogenetics and Evolution, Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil;

(2)Laboratory of Genetic Resources, Campus Arapiraca, Federal University of Alagoas, Arapiraca, Brazil;

(3)Embrapa Semiárido, Laboratory of Biotechnology, Petrolina, PE, Brazil;

(4)Embrapa Recursos Genéticos e

Biotecnologia, Brasília, Distrito Federal, Brazil

RESUMO O gênero Stylosanthes Sw. compreende 42 espécies, com uma distribuição pantropical, apresentando uma rica

diversidade no Brasil. O gênero possui cariótipo x=10 com diploides, tetraploies e hexaploides e morfologia

cromossômica similar (~2µm). Stylosanthes scabra apresenta um cariótipo incomum das demais espécies,

apresentando variação no número cromossômico e uma distinta distribuição de bandas CMA/DAPI. Para tentar

entender a origem do cariótipo de S.scabra, o presente estudo teve como objetivo analisar, citogeneticamente,

diversos acessos de S.scabra, para verificar a variação do número cromossômico, a morfologia, distribuição de

CMA/DAPI e FISH (DNAr 5S e 45S). Além disso, foi investigado a origem do alotetraploide S.scabra pela

técnica de GISH,a partir dos genomas oriundos de S.hamata (2n=20) e S.viscosa (2n=20). Todas as espécies e

seções estudadas apresentaram dois pares de bandas CMA+/DAPI

-; uma terminal, no braço curto de um par

submetacêntrico (colocalizada com os sítios de 45S) e outra intersticial no braço longo de um metacêntrico

(colocalizadas com os sítios de 5S). No entanto, o acesso 2254, 2n=20, apresentou apenas um par de bandas

CMA+/DAPI

- no braço longo de um metacêntrico e o acesso 2262, 2n=20, apresentou um par de bandas

CMA+/DAPI

- na regiao terminal do braço curto de um par submetacêntrico.Todos os cromossomos apresentaram

bandas DAPI+

centroméricas. Os acessos de S.scabra 4382, 1489, 1500 e 2253 apresentaram citótipos tetraploides

com 2n=40, sendo observado um sítio adiconal de DNAr 5s. A análise por GISH confirmou a origem

alopoliplóide de S.scabra, revelando S.hamata e S.viscosa como suas espécies parentais, onde as bandas de DAPI+

de S.scabra são provavelmente oriundas do genoma de S.hamata. Conclui-se que a citogenética molecular possui

grande potencial para desvendar a origem e as relações filogenéticas entre as espécies do gênero Stylosanthes.

APOIO FACEPE

36


DISTRIBUIÇÃO DOS SÍTIOS DE DNA RIBOSSOMAL 5S E 45S EM PASSIFLORA WATSONIANA

MAST. (PASSIFLORACEAE)

Yhanndra Karine Dias Silva1; Mariela Analía Sader

1; Andrea Pedrosa Harand

1.


(1)Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Centro de Biociências,

Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil

RESUMO Passiflora L. pertence à família Passifloraceae e tem importância econômica especialmente por seu uso para

alimentação, medicamentos e ornamentação. O gênero possui cerca de 500 espécies e tem como centro de origem

a região neotropical. A espécie Passiflora watsoniana ocorre apenas no Brasil, sendo endêmica da região

Nordeste. Em estudos filogenéticos anteriores, P. watsoniana está incluída dentro do subgênero Passiflora, que

apresenta mais de 200 espécies, em sua maioria com 2n = 18. No entanto, apenas 51 espécies apresentam

contagem cromossômica até o momento, e para as espécies analisadas quanto aos sítios de DNA ribossomal

(DNAr), houve variação tanto para o 5S quanto para o 45S. Neste trabalho, analisamos a distribuição dos sítios de

DNAr 5S e 45S no cariótipo de P. watsoniana. Raízes jovens foram obtidas de vaso, pré-tratadas com 8-

hidroxiquinolina (8-HQ) e fixadas com Carnoy 3:1. As raízes foram digeridas em 2% celulase e 20% pectinase e

esmagadas em ácido acético 45%. A hibridização in situ utilizou sondas de DNAr 5S e 45S, marcadas por nick

translation. Passiflora watsoniana apresentou 2n = 18, com cromossomos meta e submetacêntricos. A espécie

apresentou três pares de sítios de DNAr 45S terminais e um par de sítios de DNAr 5S subterminal. Os resultados

obtidos no presente trabalho confirmam o posicionamento filogenético desta espécie no mesmo subclado do

subgênero Passiflora que outras espécies que apresentam três pares de sítios de DNAr 45S. Este par extra de

DNAr 45S surgiu possivelmente por amplificação ou duplicação no ancestral comum desse clado.

APOIO CAPES, FACEPE e CNPq.

37


DNA REPETITIVO NA EVOLUÇÃO CARIOTÍPICA ENTRE ESPÉCIES DE PHILODENDRON

(ARACEAE)

Emanuelle Vasconcelos1; Santelmo Vasconcelos

2; Ana Maria Benko Iseppon

1; Ana Christina Brasileiro Vidal

1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE;

(2)Instituto Tecnológico Vale, Belém, PA

RESUMO As espécies de Philodendron são consideradas elementos importantes das florestas neotropicais, que apresentam

consideráveis variações no tamanho dos genomas. Contudo, o fato de até o momento não ter sido reportado

nenhum caso de poliploidia no gênero indica fortemente que o DNA repetitivo é um importante componente para

a dinâmica da evolução cariotípica em Philodendron. Desta forma, o estudo citogenético de sequências repetitivas

por hibridização in situ fluorescente (FISH) em 30 espécies, com sondas de DNAr e DNA telomérico, visou

auxiliar no entendimento da organização genômica, permitindo a construção de mapas comparativos e auxiliando

no entendimento da evolução cariotípica do gênero. Foram realizadas 19 contagens cromossômicas inéditas, as

quais variaram de 2n = 30 a 2n = 36 cromossomos. Devido a essa variação em uma provável série disploide, foi

realizada uma FISH com sonda de DNA telomérico em três espécies de Philodendron com o menor número

cromossômico observado, a fim de identificar possíveis sítios de DNA telomérico intercalares, como indicativo de

eventos de disploidia recente dentro do gênero. Contudo, estes sinais intercalares não foram observados sendo

sugerido a eliminação de sequências teloméricas após eventos de fusão. Embora P. callosum (2n = 28) não tenha

apresentado marcações terminais, foram observadas marcações proximais em quase todos os cromossomos da

espécie, sugerindo a presença de DNA satélite com sequência telomérica intercalar. Os dados de FISH para 30

espécies revelaram uma estabilidade no número de sítios de DNAr 5S (um par) e uma grande variação para a

quantidade de sítios de DNAr 45S (um a oito pares). Adicionalmente, foram observados heteromorfismos,

destacando-se os relacionados ao DNAr 5S em P. bipennifolium (com três sinais), P. glaziovii (sinais em

cromossomos com tamanhos diferentes) e P. pedatum (um sinal). Nossos dados mostram o uso das sequências dos

genes ribossomais como marcadores cromossômicos informativos para estudos de evolução cariotípica, indicando

a ocorrência de rearranjos cromossômicos ao longo da evolução do gênero pela evidência de heteromorfismos e

variações numéricas nos sítios de DNAr.

APOIO Capes

38


EVIDÊNCIAS CARIOMORFOMÉTRICAS NA EVOLUÇÃO CROMOSSÔMICA DA TRIBO

HIPPEASTREAE SWEET (AMARYLLIDACEAE JAUME ST.-HIL.)

Emmanuelly Calina Xavier Rodrigues dos Santos1; Leonardo Pessoa Felix


3.


(1)Departamento de Ciências Agrárias, Universidade Estadual da Paraíba, Catolé do Rocha, Brasil;

(2)Departamento

de Fitotecnia, Universidade Federal da Paraíba, Areia, Brasil; (3)

Departamento de Biologia/Genética, Universidade

Federal Rural de Pernambuco, Recife, Brasil

RESUMO Alterações cromossômicas geralmente estão envolvidas no processo de diversificação e especiação das espécies

vegetais, e podem promover modificações no número, tamanho e na estrutura dos cromossomos. O presente

trabalho objetivou apontar evidências sobre eventos de evolução cariotípica na tribo Hippeastreae, por meio da

contagem cromossômica e análise cariomorfométrica. As medidas cromossômicas foram obtidas utilizando o

software Image Tools® 0.8.1 a partir de cinco metáfases completas de 10 espécies dos gêneros Habranthus Herb.

(H. brachyandrus, H. sylvaticus), Hippeastrum Herb. (H. glaucescens, H. puniceum, H. striatum, H. stylosum e

Hippeastrum sp1) e Zephyranthes Herb. (Z. flavissima, Z. mesochloa e Z. aff. stellaris), e os cariótipos

caracterizados de acordo com o número fundamental, fórmula cariotípica, variação no tamanho cromossômico,

comprimento cromossômico total do complemento haploide, média do comprimento cromossômico, razão entre o

cromossomo maior e o menor do complemento, razão média da relação entre os braços cromossômicos, e o índice

de assimetria intracromossômica (A1) e intercromossômica (A2). Os números cromossômicos variaram de 2n = 12

em H. brachyandrus e H. sylvaticus a 2n = 26 em Z. mesochloa. Todas as espécies apresentaram cariótipos

assimétricos, com cromossomos metacêntricos, submetacêntricos a acrocêntricos. O índice de assimetria

intracromossômica (A1) variou de 0,33 a 0,52 e o tamanho cromossômico médio variou de 5,15 μm a 9,65 μm

com assimetria intercromossômica (A2) variando de 0,13 a 0,28. Os cariótipos em Habranthus e Zephyranthes são

mais assimétricos em relação aos representantes do gênero Hippeastrum. Zephyranthes mesochloa que apresentou

o maior número cromossômico na presente amostragem (2n = 26), possivelmente é resultado de um evento de

poliploidia seguido de disploidia ascendente. Apesar de não terem sido visualizados cromossomos acrocêntricos

em Z. mesochloa, o cariótipo exibe um par de cromossomos menores (3,06 µm), que correspondem a metade do

maior par cromossômico (7,67 µm), indicando a ocorrência de disploidia ascendente partindo de um cariótipo com

2n = 24 para 2n = 26. Aqui sugerimos a disploidia e a poliploidia como principais eventos evolutivos ocorrentes

em Hippeastreae. Adicionalmente, a utilização de outras técnicas, assim como o uso dos fluorocromos CMA3 e

DAPI e a FISH, contribuirá ainda mais para elucidar os eventos evolutivos ocorridos ao longo da história da tribo

Hippeastreae.

APOIO CAPES, FACEPE

39


LOW-COVERAGE GENOME SEQUENCING TO IDENTIFY 45S RDNA AND CHROMOSOMAL

LOCALIZATION IN PASSIFLORA EDULIS SIMS.

Gonçalo Santos Silva1; Margarete Magalhães Souza

1; Vanessa de Carvalho Cayres Pamponet

1; Cláusio Antônio

Ferreira de Melo1; Saráh Gomes de Oliveira

2; Fabienne Micheli

1.


(1)Departamento de Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC), Ilhéus, BA, Brasil;

(2)Departamento de Botânica, Instituto de Biociências, Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil

RESUMO Repetitive DNAs (transposable elements and tandem repeats) are the major components of the plant genome.

Genes for rDNA 45S and 5S sites, that are tandem repeated, can be characteristic for a given species or genus, and

can be used for comparative and evolutionary analysis. This study aimed to identify the 45S rDNA gene by

sequencing data for later chromosomal mapping in Passiflora. The low coverage sequencing in P. alata, P.

cincinnata and P. edulis was performed at Illumina Miseq. The 45S rDNA was identified by Repeat Explorer.

Clusters (CL) of 45S rDNA were used to construct a phylogenetic tree using the MEGA7. Contigs with greater

similarity were aligned by Clustal Omega and the sequence region with 100% similarity between the three species

were used to design the primers. The amplified fragments were labeled by Nick Translation and mapped by FISH.

Nine CL 45S rDNA were identified. Two CL in P. alata (CL 108 and CL 116), three CL in P. cincinnata (CL70,

CL71 and CL130) and four CL in P. edulis (CL108, CL116, CL117 and CL119). The phylogenetic tree showed

that CL116 (P. alata), CL71 (P. cincinnata) and CL116 (P. edulis) have high similarity between the three species,

also observed through the alignment. In the database of DNA these three clusters were similar to the 26S rDNA of

Populus tremuloides, Salix indoor and Averrhoa carambola (98% of identity). The primers designed for the 26S

rDNA gene generated a fragment of about 1.3 kb was transformed in probe and mapped in P. edulis. Four 26S

rDNA sites were detected, confirming the number of sites reported for this species. Until then in Passiflora, just

the pTa71 probe has been used to map the sites of 45S rDNA. Thus, the amplification of the 26S rDNA gene by

PCR provides another method for mapping this gene. In addition, amplification by PCR is more advantageous

when compared with use of pTa71 probe, that needs to be maintained in the plasmid in Escherichia coli, which

makes this methodology laborious and costly. The use of bioinformatics tools associated with cytogenetic has

generated significant advances in plant cytogenomics, because it has been possible to select sequences of interest

and map them, principally for repetitive DNA, such as satellite DNA, rDNA and retrotransposons.

APOIO CAPES; FAPESB; UESC.

40


O PAPEL DA POLIPLOIDIA, DISPLOIDIA ASCENDENTE E POLIMORFISMOS DE DNAR NA

DIVERSIFICAÇÃO CARIOTÍPICA DO GÊNERO CHAMAECRISTA (CAESALPINOIDEAE,

LEGUMINOSAE)

Brena Van Lume1; Guilherme Tomaz Braz

2; Giovana Augusta Torres

2; Ludmila Cristina Oliveira

2; Gustavo

Souza1.



(2)Universidade Federal de Lavras

RESUMO O gênero Chamaecrista apresenta cerca de 330 espécies, divididas em seis seções, com distribuição Pantropical e

maior diversidade na região Neotropical com 266 espécies. O gênero possui uma elevada diversidade cariotípica

com diferentes números cromossômicos, variando de 2n = 14 a 2n = 48. Análises citológicas, quando interpretadas

num contexto filogenético, permitem avaliar o histórico de alterações de diferentes caracteres, permitindo inferir

os principais eventos envolvidos nas mudanças cromossômicas e o número cromossômico básico (x) de grupos

cariotipicamente diversificados. O objetivo desse estudo foi investigar a evolução cariotípica de Chamaecrista

com base na análise de número e morfologia cromossômica, distribuição de sítios de DNAr e tamanho do genoma.

Esses dados foram plotados numa filogenia molecular baseada em sequências plastidiais trnL-trnF e nucleares

ITS1-5.8S-ITS2. Os números cromossômicos observados em Chamaecrista foram 2n = 16 (12 spp.), 2n = 14 (2

spp.) e 2n = 28 (17 spp.). O número de sítios de DNAr 5S e 45S variou de um a três pares por cariótipo,

distribuídos em cromossomos distintos ou em sintenia. A análise filogenética revelou que o gênero Chamaecrista

é monofilético e dividido em quatro clados. A comparação com grupos externos dos gêneros Caesalpinia, Cassia e

Senna permitiu inferir x = 6 como estado plesiomórfico, que por disploidia ascendente originou x = 7 e

posteriormente x = 8 em Chamaecrista. Dessa forma, o cariótipo 2n = 28, presente na maioria das espécies do

gênero, tem origem tetraploide. Os valores de conteúdo de DNA suportam essa hipótese, com genomas em média

maiores (1C = ~ 0,77 pg) nas espécies com 2n = 28 (tetraploides) do que naquelas com 2n = 16 (diploides) (1C = ~

0,51 pg). Assim, disploidias ascendentes, poliploidia e amplificação/desamplificação dos sítios de DNAr, seguido

por microrrearranjos que alteram a posição desses sítios nos cromossomos, constituem os principais eventos

envolvidos na diversificação cariotípica de Chamaecrista.

APOIO CNPq, FAPEMIG

41


POLIMORFISMO NO PADRÃO DE BANDAS GC POSITIVAS EM QUATRO ESPÉCIES DE

CONVOLVULACEAE OCORRENTES NO ESTADO DO PIAUÍ.

Antônio de Pádua de Oliveira Paula1; Genialdo Ramos dos Santos


2; Maria Teresa

Aureliano Buril Vital3.


(1)Aluno de Doutorado em Botânica - PPGB/UFRPE;

(2)Prof. Dr. do Programa de Pós-graduação em Botânica -

UFRPE; (3)

Profª. Drª. do Programa de Pós-graduação em Botânica - UFRPE

RESUMO A família Convolvulaceae apresenta sua maior distribuição em regiões tropicais e subtropicais com 55 gêneros e

1.930 espécies. Nesta família, o gênero Ipomoea L. se destaca por apresentar cerca de 600 espécies, sendo o mais

numeroso. Já o gênero Merremia Dennst. apresenta 60 espécies, com ocorrência para a maioria dos estados

pertencentes a região nordeste brasileira. O número cromossômico básico de x=15 e diploide de 2n= 30 são

comumente encontrados nas espécies do gênero Ipomoea, entretanto já foi observado para este a ocorrência de

aneuploidia e poliploidia. Para as espécies do gênero Merremia, há a ocorrência do mesmo número diploide

(2n=30), com a presença de cromossomos simétricos meta e submetacêntricos. A similaridade numérica e

morformétrica entre espécies de diferentes gêneros na família Convolvulaceae favorece a busca por padrões de

diferenciação cariotípicos capazes de diagnosticar o processo de diferenciação e evolução destes. No presente

trabalho foram analisadas quatro espécies da família Convolvulaceae pertencentes a dois gêneros, Ipomoea

bahiensis Willd. ex Roem. & Schult, I. hederifolia L., Merremia aegyptia (L.) Urb. e M. cissoides (Lam.) Hallier

f., todas ocorrentes no estado do Piauí. A análise das regiões heterocromáticas ricas em guanina e citosina e do

número cromossômico foi feita por meio da técnica de CMA/DAPI. Quanto ao número cromossômico, todas as

espécies apresentaram 2n=30 cromossomos, variando de metacêntricos a submetacêntricos. O padrão de bandas

heterocromáticas reveladas pela cromomicina (CMA) mostrou para M. aegyptia, quatro grandes bandas CMA

positivas (CMA+) nos cromossomos satelitados, envolvendo parte do cromossomo, a RON e todo o satélite,

diferente da espécie M. cissoides que apresentou um par de cromossomos com marcação na constrição secundária

no terminal do braço curto, além de algumas bandas centroméricas menos visíveis em outros pares

cromossômicos. Ipomoea bahiensis apresentou dois pares cromossômicos com bandas CMA+ na região do

satélite, enquanto que a I. hederifolia apresentou seis pares de cromossomos com bandas CMA+ na região

terminal. Nenhuma região heterocromática rica em adenina/timina foi revelada pelo DAPI. A utilização da técnica

CMA/DAPI demonstrou ser promissora no estudo comparativo para a detecção de polimorfismos cariotípicos

entre espécies proximamente relacionadas. Assim, tais observações permitem um melhor entendimento dos

mecanismos de especiação cromossômica das espécies.

APOIO Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE Laboratório de Citogenética Vegetal - LCV

42


TRANSLOCAÇÕES NOS CROMOSSOMOS PV1 E PV2 DE PHASEOLUS MACVAUGHII DELGADO

REVELADAS POR BAC-FISH

Maria Eduarda Ferraz Vasconcelos1; Artur Fonseca


1.


(1)UFPE

RESUMO O gênero Phaseolus L. é conhecido mundialmente por sua importância econômica e estabilidade estrutural e de

número cromossômico (2n = 22). Apesar disso, um pequeno grupo monofilético de três espécies, o grupo

Leptostachyus, apresenta o cariótipo disploide com 2n = 20 e um par cromossômico evidentemente maior. Muitos

rearranjos, incluindo translocações, inversões e uma inserção cêntrica, foram observados na espécie mais derivada

do grupo, Phaseolus leptostachyus Benth, revelando uma alta taxa de evolução cromossômica nessa linhagem. Até

o momento, a análise da espécie mais basal, P. macvaughii, revelou que a inserção cêntrica é um caráter

compartilhado que levou à disploidia. Assim, esse estudo teve como objetivo verificar se P. macvaughii

compartilha com P. leptostachyus os mesmos rearranjos envolvendo os cromossomos Pv1 e Pv2 e entender a

evolução cariotípica do grupo. Para isso, foram realizadas hibridizações in situ fluorescente (FISH) em lâminas

mitóticas de P. macvaughii, usando sondas de 6 cromossomos artificiais de bactérias (BACs) previamente

mapeados nos cromossomos de P. leptostachyus. As sequências selecionadas para o cromossomo 1 de P. vulgaris

hibridizaram colinearmente em P. macvaughii, contrastando com o observado para P. leptostachyus. No entanto,

uma translocação adicional de parte de outro cromossomo para o braço curto do cromossomo 1 parece ter ocorrido

em P. macvaughii, o que alterou a razão de braços em relação a P. vulgaris. O cromossomo 2 de P. macvaughii,

assim como em P. leptostachyus, apresentou perda de sintenia devido a uma translocação. A perda de parte do

braço longo do cromossomo 2 também levou a uma inversão do tamanho dos braços desse cromossomo em P.

macvaughii. Embora a translocação observada para o Pv2, assim como a inserção cêntrica, sejam sinapomorfias do

grupo Leptostachyus, diferentes rearranjos envolvendo o cromossomo Pv1 foram observados nas duas espécies,

indicando a evolução independente desse cromossomo após disploidia.

APOIO PIBIC, CNPq e UFPE

43


VARIABILIDADE CARIOTÍPICA EM NOTHOSCORDUM OSTENII (AMARYLLIDACEAE)

Paz A1; Báez M

1; Crosa O

2; Souza G

1.


(1)Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Universidade Federal de

Pernambuco, Brasil.; (2)

Laboratório de Genética, Departamento de Biologia Vegetal, Faculdade de Agronomia,

Universidade da República, Uruguai

RESUMO O gênero Nothoscurdum é formado por ~25 espécies distribuídas no Uruguai, Argentina e sul do Brasil. As

espécies do gênero possuem cromossomos grandes (~20 µm), número básico x = 5 e número cromossômico

monoplóide m = 4, com espécies diploides e poliploides. Entre essas espécies, N. ostenii caracterizam-se por

apresentar flores amarelas, inflorescência em umbela e distribuição geográfica restrita. Assim, o presente trabalho

investigou a variabilidade cariotípica desta espécie por meio da análise de número e morfologia cromossômica e

do número e distribuição de sítios de DNA ribossomal (DNAr) 5S e 45S. Dos nove acessos de N. ostenii

analisados, oito foram diploides apresentando 2n = 10 e um apresentou 2n = 16. Dentre as amostras com 2n = 10

quatro acessos apresentaram fórmula cariotípica 6M+1SM +3A e os demais 6M+4A. O acesso com 2n = 16, é

uma amostra coletada em Maldonado, Uruguai, apresentou dois cromossomos B. A distribuição de sítios de DNAr

foi altamente polimórfica, com sítios de DNAr 5S intersticiais em um par ou dois pares cromossômicos e sítios de

DNAr 45S nos braços curtos dos acrocêntricos, nos acessos com 2n = 10, e/ou na região terminal dos

metacêntricos. Ambos os sítios de DNAr podem ocorrer em cromossomos diferentes ou colocalizados em um

mesmo cromossomo. Essa diversidade permitiu reconhecer individualmente o cariótipo de cada acesso analisado.

Em conjunto, estes dados mostraram a alta variabilidade cariotípica em N. ostenii, gerada possivelmente por

eventos de poliploidia, inversões pericêntricas, amplificação/desamplificação de sítios de DNAr e a presença de

cromossomos B. Esta variação corrobora a diversidade filogenética relatada para essa espécie e sugere a

ocorrência táxons crípticos

APOIO PROAES-UFPE, FACEPE

44


VARIABILIDADE DE HETEROCROMATINA E SÍTIOS DE DNAR EM ZEPHYRANTHES

BRACHYANDRA (BAKER) BACKER (AMARYLLIDACEAE)

Raquel Gonçalves1; Mariana Báez

1; Sandra Mendes

1; Guillermo Seijo

2; Marcelo Guerra

1.



(2)Faculdade de Ciências Exatas e Naturais Agrimensura

RESUMO O gênero Zephyranthes Herb. compreende ~65 espécies de distribuição Neotropical, a maioria delas ocorrendo no

Brasil. Essas espécies apresentam cromossomos relativamente grandes, geralmente com 2n = 12 ou 24 e com

diferentes tipos de variabilidade cariotípica intraespecífica, inclusive na quantidade de heterocromatina. A maior

quantidade de heterocromatina foi encontrada em Z. brachyandra, uma espécie de reprodução assexuada por

bulbilhos e grande potencial ornamental. Um estudo anterior dessa espécie mostrou 12 bandas DAPI terminais

maiores e muitas bandas menores, além de bandas CMA em 10 cromossomos acrocêntricos do conjunto normal (2

terminais e 8 subterminais) e em um cromossomo B (Felix et al., 2011, Plant Syst Evol, 292: 215). Considerando

que, a maioria das bandas heterocromáticas não parece ter valor adaptativo e não estaria sobre o controle da

seleção natural, espera-se que ao menos algumas dessas bandas apresentem polimorfismo intra-específico.

Visando verificar se esse polimorfismo realmente ocorre, analisamos três indivíduos dessa espécie, coletados no

nordeste da Argentina (Misiones), mesma localidade que o estudo anterior. Os três indivíduos apresentaram 2n =

24, aparentemente sem cromossomos B. As bandas CMA foram restritas a seis ou sete, havendo quatro ou cinco

terminais em cromossomos acrocêntricos e dois intersticiais em um par metacêntrico. Curiosamente, a maioria

dessas não coincidiu com o cariótipo reportado anteriormente. As bandas DAPI foram de dois tipos: ~12 bandas

DAPI maiores, localizadas na região terminal de seis pares metacêntricos, e ~30 banda DAPI menores, localizadas

nas regiões terminais e subterminais em ambos tipos cromossômicos, coincidindo de maneira geral com o

cariótipo já estudado. Diferenças de tamanho da banda são mais difíceis de investigar por conta da condensação

desigual dos cromossomos. Os sítios de DNAr 45S corresponderam às seis ou sete bandas CMA, enquanto os

sítios de DNAr 5S foram numerosos (de 12 a 16) e distribuídos nos metacêntricos, alguns desses com dois pares

de sítios. Sítios de DNAr 5S e 45S foram encontrados colocalizados apenas no par metacêntrico com um sítio de

DNAr 45S intersticial. Esses dados revelam uma variabilidade cariotípica excepcionalmente alta nessa espécie,

sendo necessário um estudo populacional mais extenso para entender os mecanismos responsáveis por essa

diversidade.

APOIO CNPq

45


VARIAÇÃO NO PADRÃO DE BANDAS HETEROCROMÁTICAS POR MEIO DA TÉCNICA

CMA/DAPI EM ESPÉCIES DO GÊNERO CALLIANDRA BENTH. (FABACEAE-MIMOSOIDEAE)

OCORRENTES NO ESTADO DO PIAUÍ.

Antônio de Pádua de Oliveira Paula1; Genialdo Ramos dos Santos


2.


(1)Aluno de Doutorado em Botânica - PPGB/UFRPE;

(2)Prof. Dr. do Programa de Pós-graduação em Botânica da

UFRPE

RESUMO O gênero Calliandra Benth. é neotropical possuindo 132 espécies e distribuído em três principais regiões do

continente americano. Uma destas regiões é o nordeste brasileiro, considerada um centro de diversidade, com 56

espécies, dentre estas 20 são encontradas no estado do Piauí. O número básico proposto para o gênero é x=8, com

ocorrência de variação cariotípica entre espécies, atribuída ao evento da disploidia. Neste trabalho, foi realizada

uma análise citogenética comparativa de três espécies e duas variedades de Calliandra ocorrentes no estado do

Piauí por meio da técnica de bandeamento cromossômico com fluorocromos cromomicina A3 (CMA), para

regiões cromossômicas ricas em pares de base guanina e citosina e o 4',6-diamidino-2-fenilindol (DAPI), para

localização das regiões ricas em pares de base adenina e timina. As espécies estudadas foram de Calliandra

fernandesii Barneby, C. leptopoda Benth, C. macrocalyx Harms var. aucta Barneby e C. macrocalyx Harms var.

macrocalyx. Como resultados, o número cromossômico foi 2n = 16 para C. leptopoda (14M + 2SM), C.

macrocalyx var. aucta (10M + 6SM) e C. macrocalyx var. macrocalyx (10M + 2SM + 4A). Já para a espécie C.

fernandesii, foi verificada a ocorrência do número tetraploide de 2n = 32 (30M + 2SM), relatada pela primeira vez

no presente trabalho. Em relação ao tamanho dos cromossomos metafásicos, foi observada para C. leptopoda e C.

fernandesii uma média de 2,371 µm e 2,958 µm, respectivamente. Calliandra macrocalyx var. aucta e C.

macrocalyx var. macrocalyx apresentam tamanhos médios de 7,112 µm e 6,734 µm em prometáfases. Com a

utilização do CMA, foram observados polimorfismos interespecíficos de bandas heterocromáticas, com a

ocorrência de bandas em ambos os terminais de dois pares de cromossomos para C. leptopoda, três pares para C.

macrocalyx var. aucta e de quatro pares cromossômicos para C. macrocalyx var. macrocalyx e C. fernandesii.

Tanto a morfometria como a técnica de CMA/DAPI mostraram-se promissoras para a detecção de polimorfismos

cariotípicos entre as espécies estudadas de Calliandra, apontando a citogenética como ferramenta para o

entendimento do componente estrutural cromossômico e dos processos de especiação deste gênero.

46


VIABILIDADE POLÍNICA EM ESPÉCIES SILVESTRES E HÍBRIDOS DE MANIHOT

Ariana Silva Santos1; Genialdo Ramos dos Santos


3; Marcio Lacerda Lopes Martins

4;

Carlos Alberto da Silva Ledo5.


(1)Doutoranda em Genética e Biologia Molecular da Universidade Estadual de Santa Cruz;

(2)Doutorando do

Programa de Pós-graduação em Botânica, Universidade federal Rural de Pernambuco; (3)

Programa de Pós-

graduação em Botânica, Universidade federal Rural de Pernambuco; (4)

Universidade Federal do Recôncavo da

Bahia; (5)

Embrapa Mandioca e Fruticultura Tropical

RESUMO O gênero Manihot possui fracas barreiras de isolamento reprodutivo entre suas espécies, facilitando assim a

ocorrência de hibridação interespecífica, podendo ser natural ou artificial. Essas fracas barreiras estão relacionadas

à constituição cariotípica, indicando que um grande número de taxa pode ter surgido a partir de cruzamentos

interespecíficos. No semiárido brasileiro, na Caatinga, existem alguns híbridos naturais, devido à adjeção do

período de floração das populações nessa região. Sendo assim, a partir do endemismo ocorrentes no Nordeste

como para M. reniformis Pohl e Manihot sp. nov., este estudo objetivou avaliar a viabilidade polínica dessas

espécies silvestres, juntamente com um híbrido natural, possivelmente oriundo do cruzamento das espécies

supracitadas. Foram coletados botões florais no Parque Municipal Natural de Mucugê (PMNM)-Projeto Sempre

Viva, localizado na cidade de Mucugê, Chapada Diamantina, Bahia, Brasil. Os botões florais foram fixados em

Carnoy (metanol: ácido acético (3:1)) e as lâminas preparadas pelo método convencional e os grãos de pólen

corados com o corante de Alexander. Foram contabilizados e considerados viáveis os grãos de pólen que

apresentaram coloração avermelhada e inviáveis os de coloração azulada. Analisou-se um total de 60 lâminas,

contendo uma antera por lâmina, sendo 20 lâminas por espécie e para o possível híbrido natural. Foram

observados em média, 5.000 polens por genótipo. Os resultados mostraram os percentuais de polens inviáveis

foram de 5,3% para M. reniformis, 2,3% para Manihot sp. nov e 3,2% nos prováveis híbridos. Como formato das

flores, a época de floração e os polinizadores são semelhantes nas espécies de Manihot, estes resultados ajudam a

compreender o fluxo gênico e hibridizações entre as espécies do gênero confirmando a fraca barreira reprodutiva

entre as espécies.

APOIO CAPES, FACEPE, CNPq, EMBRAPA

47

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Evolução

SPONDIAS TUBEROSA AND S. BAHIENSIS PLASTOMES AND PHYLOGENETIC ANALYSIS IN

SAPINDALES

Vanessa Emanuelle Pereira Santos1; Cícero Carlos de Souza Almeida

1; Karla Emanuella Souza dos Santos

1;

Flávia de França Santos1.


(1)Universidade Federal de Alagoas (UFAL)

RESUMO The aim of this study was to sequence the chloroplast genomes of Spondias tuberosa and S. bahienses using NGS

data and to construct a phylogeny using complete plastid genomes for order Sapindales. Four million Illumina

100nt single end reads were used and mapper using Sapindus mukorossi plastome as a reference for obtaining the

genomes of S. tuberosa and S. bahiensis. For phylogenetic analysis, the complete genomes of Spondias and other

genomes of Sapindales available at NCBI were used to obtain the phylogeny for order. The genomes of S.

tuberosa and S. bahiensis showed 162,036 and 162,218 bp, respectively; 137 genes, 31-30 tRNAs and five rRNA.

The results showed high similarity between S. tuberosa and S. bahiensis genomes and phylogenetic analysis using

complete chloroplast genomes showed similar topology with prior phylogenies for the Sapindales order. In

summary, we have presented here the first complete chloroplast genomes sequence for the Spondias genus, and

that the use of Illumina single end reads is efficient to sequence chloroplast genomes and the phylogenies using

complete chloroplast genomes shows a robust topology for the Sapindales order.

APOIO CNPq

48


SYAGRUS CORONATA PLASTOMES AND PHYLOGENETIC ANALYSIS IN ARECOIDEAE

(ARECACEAE)

Vanessa Emanuelle Pereira Santos1; Renato Áquila

1; Jurema Silva

1; Cícero Carlos de Souza Almeida

1.


(1)Universidade Federal de Alagoas (UFAL)

RESUMO The objective of this study was to sequence the plastid genomes of Syagrus coronata using NGS data and to

construct a phylogeny using complete chloroplast genomes for the Arecoideae subfamily. Seventy seven million

Illumina 100nt single end reads were used and mapped using the Cocos nucifera genome as a reference for

obtaining the genome of S. coronata. The complete genome of S. coronata and other genomes of Arecoideae

available at NCBI were used to obtain the phylogeny of Arecoideae. The genome of S. coronata showed 155,053

bp, with IRA having 26,476 bp, IRB 26,647 bp, LSC with 84,410 bp and SSC with 17,520 bp. Ninety genes were

identified, 8 rRNAs, 39 tRNAs and 30 repetitive regions. The results showed Cocos nucifera as the closest relative

and Chamaedorea seifrziii as the most divergent and that phylogenetic analysis using plastid genomes

corroborates prior phylogenies for the Arecoideae subfamily. It follows that the use of Illumina single end reads is

efficient to sequence chloroplast genomes and that phylogenies using complete chloroplast genomes shows a

similar topology when compared with phylogenies using small plastid regions and nuclear genes.

APOIO CAPES

49


DIVERSIFICAÇÃO RECENTE DO GÊNERO STYLOSANTHES (AUBL.) SW. (LEGUMINOSAE) ESTÁ

RELACIONADA COM FORMAÇÃO DE COMPLEXOS ALOPOLIPLOIDES

Amanda Figueredo1; Gustavo Souza

1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO Stylosanthes é um gênero pantropical formado por 48 espécies herbáceas, subarbustivas ou arbustivas,

pertencendo na subfamília Papilionoideae (Leguminosae). O gênero apresenta uma taxonomia complexa devido à

similaridade morfológica da maioria das espécies, porém recentemente análises moleculares vem ajudando a

elucidar a sistemática do grupo. Com base em caracteres morfológicos o gênero foi dividido nas seções

Stylosanthes e Styposanthes, cujas relações evolutivas são pouco conhecidas. O número cromossômico básico do

gênero é x = 10, com diploides e alopoliploides naturais, que se relacionam em complexos de difícil delimitação.

O presente trabalho teve como objetivo fazer uma análise filogenética do gênero Stylosanthes baseado em

sequencias plastidiais (trnL-trnF, íntron trnL e matK) e nuclear ITS1-5.8S-ITS2, seguida por uma datação

molecular assumindo um relógio lognormal relaxado. Foram analisadas 126 amostras de 42 espécies abrangendo

as duas seções do gênero e visando discutir o relacionamento nos complexos Scabra, Erecta, Guianensis e

Capitata. A árvore filogenética revelou que o gênero é monofilético, dividido em quatro clados bem suportados,

porém as seções Stylosanthes e Styposanthes não emergiram como grupos monofiléticos. Distintas amostras de S.

hamata e S. mexicana foram posicionadas nos clados 1 e 4, o que pode indicar entidades crípticas possivelmente

relacionadas com a distribuição disjunta dessas espécies. O gênero apresenta origem recente, com as linhagens

mais basais (clados 1 e 4) se diversificando no Mioceno (~ 10 Ma) e os clados mais recentes (2 e 3) com

diversificação no Pleistoceno (~ 5 Ma). Ramos curtos e politomias estariam relacionados à diversificação recente

que pode estar relacionada também com a estabilidade cariotípica do gênero, com a maioria das espécies

apresentando 2n = 20. Essa origem recente é corroborada ainda pelo posicionamento dos representantes dos

complexos S. scabra e S. capitata em diferentes clados, sugerindo que o cruzamento entre espécies de clados

distintos é viável. O padrão de distribuição geográfica das espécies de Stylosanthes não é correlacionado com os

agrupamentos filogenéticos, sugerindo um predomínio de dispersões à longa distância na região Neotropical. Não

foi observada uma relação entre amplitude geográfica e nível de ploidia, com espécies diploides e poliploides

podendo apresentar ampla distribuição.

APOIO CAPES

50


FLUXO GÊNICO E ESTRUTURA GENÉTICA ESPACIAL EM POPULAÇÕES DE VIROLA

OFFICINALIS NO CORREDOR CENTRAL DA MATA ATLÂNTICA.

Matheus Palma Rocha1; Flora Bittencourt

1; Fernanda Gaiotto

1; Eduardo Mariano Neto

1.


(1)Universidade Estadual de Santa Cruz

RESUMO Os fragmentos florestais no sul da Bahia, região inserida no Corredor Central da Mata Atlântica, são "ilhas"

imersas em matriz variegada composta por pasto, monocultura, cabruca, seringal e coqueiral. Informações sobre

fluxo gênico e estrutura genética de espécies arbóreas presentes nestes fragmentos podem ser utilizadas para

prever a viabilidade de estratégias de conservação, uma vez que as consequências do desmatamento para a

variabilidade de populações podem ser irreversíveis. Virola officinalis, uma espécie arbórea endêmica da Mata

Atlântica, foi utilizada como objeto de estudo para avaliar a influência exercida pela quantidade de habitat na

manutenção do fluxo gênico entre populações. Também conhecida como bicuíba, a espécie desenvolve-se em

locais com muita luminosidade e tem sido utilizada em sistemas agroflorestais (SAF). A caracterização da

distribuição espacial dos genótipos dentro das populações foi realizada em 6 populações a partir de 16 locos

microssatélites. A coleta ocorreu de acordo com as categorias de porcentagem de cobertura: 0-20%, 1 população,

41-60%, 3 populações, 61-80%, 1 população e 81-100%, 1 população. Os sítios de coleta foram selecionados em

função da presença da espécie de estudo, acessibilidade e pela porcentagem de cobertura florestal. Através da

utilização de marcadores moleculares co-dominantes (microssatélites) foi possível genotipar as populações

coletadas pelo método de Sanger. As estimativas dos coeficientes de coancestria recente para a detecção da

estrutura genética espacial (EGE) foram baseadas em Louiselle et al (1995). Observou-se que na área com 92% de

cobertura vegetal os indivíduos dentro classe de distância de 100 M apresentaram EGE positiva e significativa, o

que contraria a expectativa de haverem agentes dispersores agindo com maior eficiência em função da maior

complexidade ambiental. Já nas populações inseridas em habitats com 50% de cobertura florestal na paisagem a

classe de distância de 30 M apresentou indivíduos mais aparentados. Pode-se observar que as estimativas

populacionais não refletiram o histórico de degradação da área amostrada. Entretanto, sabe-se que mesmo em

áreas florestadas pode haver a perda (ou a redução da atividade) do agente dispersor o que pode estar

influenciando diretamente na distância de fluxo gênico desta espécie na região.

APOIO CAPES, UESC

51


INFERÊNCIA FILOGENÉTICA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO MYB EM PLANTAS

SUPERIORES

Mitalle Karen da Silva Matos1; Danubia Rita de Sá Leal

1; Carolline de Jesús Pires


1.



RESUMO Os fatores de transcrição (FTs) regulam a expressão espaço-temporal de milhares de genes, garantindo o

desenvolvimento e funcionamento do organismo. A família MYB compreende uma das maiores famílias de FT,

com a prevalência do domínio R2R3-MYB em plantas. Tomados em conjunto, inúmeros trabalhos já identificaram

e caracterizaram essa família em vegetais, porém não houve uma investigação da sua história evolutiva no

contexto filogenético do grupo. Com isso, objetivamos avaliar a relação evolutiva de sequencias MYB em

angiospermas, comparativamente com a sistemática das espécies analisadas. Para isso, foi selecionada uma

proteína MYB do transcriptoma do feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] e utilizada como sonda para a

prospecção de ortólogos na base de dados do NCBI (National Center for Biotechnology Information) por meio de

um BLASTp utilizando o algoritmo PSI-BLAST. Foram selecionadas 32 sequências [nucleotídicas (nt) e proteicas

(aa)] de diferentes espécies com base nos melhores valores de e-value (variando de 0 a 8-143) e score (entre 592 e

412). Tais sequências foram alinhadas utilizando a ferramenta Clustal Ômega e ajustadas manualmente no

programa MEGA 6. As árvores filogenéticas foram construídas usando o método de máxima verossimilhança no

programa RAxML. O alinhamento das proteínas permitiu a identificação de aa característicos do domínio MYB

(triptofano, espaçados em posições regulares), os quais se apresentam como um estado de caráter plesiomórfico

dentro do conjunto de organismos em estudo. Comparando-se a topologia das filogenias geradas, observou-se que

as mesmas não divergiram significativamente para os dois grupos de sequências analisadas (aa e nt), formando

agrupamentos que apontam a história evolutiva dos TFs MYB dentro dos grupos. Os grupamentos refletiam as

relações taxonômicas em níveis de ordens, famílias e/ou gêneros (Fabales, Rosaceae, Asteridae, Malpighiales etc.)

com altos valores de bootstrap. Quando comparadas ambas as filogenias (nt e aa) verificou-se que os valores de

suporte dos nós eram mais fortes quando utilizadas sequências nucleotídicas, possivelmente devido ao maior nível

de polimorfismos presentes. Apesar dos nossos resultados terem sido mais significativos estatisticamente com

sequências nucleotídicas, verificou-se que, mesmo tendo utilizado uma região gênica (a qual é passível de pressão

seletiva) esta família também se mostrou representativa e altamente consistente com os resultados da filogenia das

espécies.

APOIO Capes, CNPq.

52

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Genética Molecular

ACCELERATED GROWTH RATE AND INCREASED DROUGHT STRESS RESILIENCE OF THE

RED RICE COLONIZED BY GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS PAL5

Nathálya Carvalho Farias1; Bruna Regina dos Santos Silva

1; Renata Priscila de Almeida Silva

1; Bruna

Cavalcante dos Santos2; Carlos Henrique Salvino Gadêlha Meneses

1.


(1)Universidade Estadual da Paraíba/Programa de Pós-Graduação Ciências Agrárias - UEPB, CEP 58.429-500,

Campina Grande-PB. Brasil; (2)

Universidade Estadual da Paraíba/CCBS/Departamento de Biologia - UEPB, CEP

58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil

RESUMO Plant growth-promoting bacteria (PGB) induce positive effects in plants, for instance, increased growth and

reduced abiotic stresses susceptibility. The mechanisms by which these bacteria impact the host plant are

numerous, diverse and often specific. Here, we studied the agronomical, molecular and biochemical effects of the

endophytic PGB Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5 on the full life cycle of red rice (Oryza sativa L.). We

evaluated growth variables (leaf area and biomass), biochemical variables (photosynthetic pigments, proline and

MDA) and production variables (dry matter of 1000 grains and total mass production). Inoculation of red

rice with G. diazotrophicus PAL5 increased root and shoot weights, accelerated growth rate and seed yield as

compared to control plants. G. diazotrophicus PAL5 efficiently colonized the plant and was recovered from roots,

stems and blades, indicating that the bacterium is able to migrate, spread systemically inside the plant, establish

itself in the aerial plant tissues and organs. Inoculation red rice seedlings and mature plants exposed to acute and

chronic drought stress minimized the phenotypic effect of drought compared to plants not harbouring the

bacterium. Protection from the inhibitory effects of drought by the bacterium was linked to up regulation of the

drought-response gene, DREB2B-like. Additionally, total soluble sugars contents increased in stressed inoculated

plants, a biochemical indication of drought tolerance. In conclusion, we show a single inoculation of red rice with

a PGB affected the whole growth cycle of the plant, accelerating its growth rates, shortening its vegetative period,

and alleviating drought stress effects.

APOIO CNPq Universal - MCTI n°483547/2013-1 and UEPB

53


AMPLIFICAÇÃO DE DEFENSINAS EM CNIDOSCULOS QUERCIFOLIUS POHL A PARTIR DA

TRANSFERIBILIDADE DE PRIMERS DE OUTRAS EUFORBIÁCEAS

Gisela Formiga Queiroz Nóbrega1; João Pacífico Bezerra Neto

2; Valesca Pandolfi

2; José Ribamar Costa

Ferreira Neto2; Rodrigo César Gonçalves Oliveira

2; Ederson Akio Kido


2; Carlos

Eduardo Alves Soares3.


(1)Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Programa de Pós

Graduação em Ciências Florestais, Patos, PB; (2)

Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências

Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE.; (3)

Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA),

Departamento de Ciências Animais (DCAN), Mossoró, RN.

RESUMO Defensinas vegetais são pequenos peptídeos antimicrobianos ricos em cisteínas que exercem um papel

fundamental na imunidade inata das plantas, agindo na proteção contra agentes patogênicos. Além disso, a

produção de defensinas também é induzida em resposta a estresses abióticos, tais como seca. Apresentam assim,

potencial biotecnológico para produção de transgênicos com maior resistência a doenças fúngicas, podendo ainda

ser utilizados na obtenção de novos fármacos. A faveleira (Cnidoscolus quercifolius Pohl) é uma euforbiácea

nativa, bastante explorada devido ao uso de seus tecidos para fins medicinais, apresentando bom potencial

antibacteriano contra Staphylococcus. Dada a importância das defensinas vegetais, bem como a existência de

componentes químicos ativos de atividade antimicrobiana em faveleira, esse trabalho teve como objetivo

identificar e isolar genes codificantes para defensinas no genoma da faveleira a partir de primers desenhados para

espécies relacionadas. Os primers utilizados para realização da PCR foram desenhados com base em sequencias

existentes no genoma de Jatropha curcas, Manihot esculenta e Ricinus communis. Os mesmos foram testados em

suas espécies de origem e obtiveram maior especificidade de amplificação entre 60ºC a 62ºC. Os primers foram

testados no genoma de C. quercifolius, porém não obtiveram resultados nas temperaturas sugeridas, sendo

necessária a realização de PCR gradiente para definir a temperatura de amplificação de cada par de primer para as

reações com o DNA de faveleira. Além das temperaturas, outras adaptações como diminuição da concentração de

primers e adição de BSA na reação foram realizadas para otimização da reação. Dos 12 primers testados (4 de J.

curcas, 5 de M. esculenta e 3 R. communis), seis apresentaram resultados de amplificação (1 de J. curcas, 1 de M.

esculenta e 3 R. communis), obtendo produtos entre 600 e 1.100 pb, muito próximos do esperado. A

transferabilidade foi eficiente para a obtenção de defensinas no genoma da faveleira, o que corrobora com o nível

de conservação predito para estes peptídeos. Mesmo se tratando de espécies de gêneros distintos, estes foram

agrupados filogeneticamente em nível de família. Os resultados alcançados neste estudo são de grande

importância, já que a espécie estudada não possui qualquer informação disponível em bancos de dados públicos a

cerca de seu genoma

APOIO CAPES, CNPq, FACEPE

54


AMPLIFICAÇÃO HETERÓLOGA DE PRIMERS MICROSSATÉLITES NUCLEARES PARA O

COMPLEXO HOHENBERGIA RIDLEYI (BAKER) MEZ (BROMELIACEAE)

Jéssica Figueredo Campos de Jesus1; Rodrigo César Gonçalves de Oliveira


2.


(1)Programa de Pós Graduação em Ciências Biológicas, Centro de Biociências, Universidade Federal de

Pernambuco (UFPE), Recife, PE, Brasil.; (2)

Centro de Ciências Biológicas, Laboratório de Genética e

Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética, UFPE, Recife, PE, Brasil.

RESUMO O complexo Hohenbergia ridleyi, composto por morfologias H. ramageana e H. ridleyi, apresenta distribuição

longitudinal na Floresta Atlântica e coocorrência na região tipo das espécies no estado de Pernambuco, onde estão

presentes tanto em brejos de altitude como em Floresta Atlântica costeira. Avaliar a estrutura genética de

populações espacialmente isoladas possibilita ampliar o entendimento acerca do padrão de distribuição das

espécies e dos processos microevolutivos que moldaram essas populações, o que auxilia em atitudes de manejo

para conservação dos ambientes naturais. Para tais tipos de estudos, marcadores microssatélites têm sido utilizados

com sucesso e seu custo de aplicação bastante reduzido quando é realizada a amplificação heteróloga de

marcadores desenvolvidos para espécies próximas. O presente trabalho teve como objetivo testar a amplificação

heteróloga de dez primers de natureza nuclear desenvolvidos para as espécies de Bromeliaceae, Ananas comosus e

Orthophytum ophiuroides, em populações do complexo H. ridleyi. Do total de primers, cinco foram previamente

desenvolvidos para Ananas comosus (Acom12.12, Acom22.22, Acom64.22, Acom71.3, Acom91.2) e cinco para

Orthophytum ophiuroides (OP17, OP28, OP69, OP93, OP30). Os testes foram realizados através da amplificação

por PCRs em oito populações do complexo. A visualização dos resultados foi realizada a partir de géis de

poliacrilamida 6% com coloração por nitrato de prata. Dos dez primers testados, cinco mostraram um produto e

apenas quatro revelaram polimorfismos, todos de A. comosus (Acom22.22, Acom64.22, Acom71.3). As

amplificações geraram em média quatro alelos por primer, sendo eficientes para estudos populacionais. Os

primers de O. ophiuroides não foram transferíveis. Esses resultados mostram o grande potencial da aplicação

desses marcadores codominantes para estudos evolutivos com o complexo H. ridleyi que podem auxiliar no

desenvolvimento de ações de conservação para as espécies no futuro.

APOIO FACEPE, CNPq

55


ANÁLISE IN SÍLICO DA HOMOLOGIA DO GENE SERK EM GOSSYPIUM HIRSUTUM L. E

ESPÉCIES CORRELATAS

Taiza da Cunha Soares1; Liziane Maria de Lima

2; Carliane Rebeca Coelho da Silva

1; Igor Luiz Vieira de Lima

Santos3; Julita Maria Frota Chagas Carvalho

2; Péricles de Albuquerque Melo Filho

4; Roseane Cavalcanti dos

Santos2.


(1)RENORBIO/ UFRPE;

(2)Embrapa Algodão;

(3)UFCG;

(4)UFRPE

RESUMO As técnicas de transgenia tem oferecido grande versatilidade ao melhoramento do algodoeiro em função da

possibilidade de introduzir transgenes exógenos, mantendo as propriedades agronômicas das cultivares geradas.

Entretanto, dependendo do método de transformação utilizado, a limitação desse processo reside na necessidade

do uso de protocolos de regeneração in vitro via embriogênese somática, uma vez que algumas espécies vegetais

são altamente recalcitrantes, como é o caso do algodoeiro, o que dificulta o progresso da seleção e o tempo de

identificação do transgene. Estudos prévios tem demonstrado que o gene SERK (Somatic Embryogenesis Receptor

Kinase) está relacionado com a aquisição de competência embriogênica, porém há limitação de informações sobre

sua atuação e conservação entre diferentes espécies. Pesquisas relacionadas ao conhecimento desse gene podem

contribuir para identificar acessos livre de recalcitrância, de modo a favorecer as práticas de regeneração. Nesse

trabalho procedeu-se a uma análise in silico buscando homologia do SERK entre acessos de G. hirsutum L. e

outras espécies relacionadas, com sequências depositadas em banco de genes (www.ncbi.nlm.nih.gov). As

espécies selecionadas foram: G. hirsutum, Theobroma cacao, Citrus sinensis, Vitis vinifera, Glycine max e

Phaseolus vulgaris. Sequências completas do gene (mRNA) foram alinhadas por meio do programa ClustalX

(http://www.ebi.ac.uk/Tools/msa/clustalw2) para estimativa da similaridade gênica. A seguir, procedeu-se análise

da proteína codificante pela ferramenta Blastx, do NCBI. Verificou-se que o gene SERK1 possui poucas regiões

conservadas entre as espécies, contudo, foi observada homologia entre as sequências de G. hirsutum e Theobroma

cacao com maior identidade na ordem de 86% e bit-score 681. Essa mesma relação (93%) foi observada entre as

sequências de Phaseolus vulgaris e Glycine max com bit-score no valor de 1036, o que é esperado por se tratar de

duas leguminosas, hermafroditas e cleistogâmicas. A espécie mais distante evolutivamente entre as demais foi a

Vitis vinífera. Baseando-se na análise dos aminoácidos, verificou-se alto grau de conservação dos principais

domínios catalíticos. A proteína SERK possui domínio catalítico da serina/ treonina-kinase e pertence a uma

subfamília envolvida em várias vias de sinalização, entre elas a restrição de proliferação de células em início de

diferenciação.

APOIO Embrapa Algodão, Capes.

56


ANÁLISE DE EST-SSR DE SACCHARUM SPP. E TRANSFERIBILIDADE DE MARCADORES PARA

PENNISETUM PURPUREUM SCHUM

Rahisa Helena da Silva1; Manassés Daniel da Silva

2; Kássia Regina da Silva Carneiro

3; Jorge Luís Bandeira da

Silva Filho4; Éderson Akio Kido

5.


(1)Aluna de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas. [email protected];

(2)Aluno de Doutorado

do PPGG - UFPE; (3)

Aluna de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas.; (4)

Aluno de Graduação em

Bacharelado em Ciências Biológicas.; (5)

Profº. UFPE. Departamento de Genética - CCB - UFPE - Laboratório de

Genética Molecular. [email protected]

RESUMO Marcadores moleculares são utilizados para estimar variabilidade genética. Dentre os marcadores moleculares, os

denominados SSR [(microssatélites, constituídos de pequenos motivos (1 a 6 nucleotídeos)], em tandem, são os

mais utilizados devido sua natureza codominante e ampla distribuição nos genomas. A cana-de-açúcar (Saccharum

spp.), família Poaceae, é uma cultura de grande importância econômica, enquanto que o capim-elefante

(Pennisetum purpureum Schum), de mesma família, possui potencial forrageiro, porém, quase não dispõe de

informação na base de dados do NCBI, diferente de Saccharum spp., possuindo grande quantidade, especialmente

ESTs (Expressed Sequence Tag). Assim, o presente trabalho objetivou avaliar a disposição de motivos SSR em

ESTs de Saccharum spp. e verificar a transferibilidade destes marcadores entre estas espécies. Para tanto, as ESTs

foram submetidas ao software (TRA) para detecção dos motivos SSR perfeitos de di tri, tetra, penta e

hexaméricos, com número mínimo de repetições de 9, 6, 5, 5 e 4, respectivamente. A análise in silico de 285.216

ESTs de Saccharum spp detectou 8.703 motivos SSRs em 8.337 ESTs, representando 2,9% das ESTs. Uma

abundância de motivos de triméricos foi observada, estando presentes em 5.512 ESTs (63,3% das ESTs com

motivos SSR), seguidos dos motivos diméricos presentes em 1.199 ESTs (13,8%) e dos hexaméricos, presentes

em 1.086 ESTs (12,5%). Por outro lado, os motivos tetra e pentaméricos foram os menos representados, com 496

(5,7%) e 397 ESTs (4,6%), respectivamente. A abundância de motivos tri e diméricos em ESTs de Saccharum spp.

já foi documentada na literatura. Posteriormente, foram propostos 120 pares de primers através da ferramenta

Primer3, destes, 18 foram sintetizados e testados via PCR com DNAs genômicos, extraídos de folhas dos acessos

das duas culturas. As reações ocorreram em volume total de 20 μL [20 ng de DNA genômico, 1x PCR buffer, 1,5

mM de MgCl2, 100 μM de dNTPs, 0,15 μM de cada primer e 0,5 U de Taq DNA polimerase]. Ao final das

reações, os fragmentos amplificados foram separados em gel de agarose 1,5% (p/v), em eletroforese. Dentre os 18

primers testados, 17 amplificaram bandas sendo um específico para cana-de-açúcar e 16 transferíveis para capim-

elefante, sendo 13 polimórficos. O sucesso da transferibilidade é fruto da sintenia entre os genomas das espécies, e

pelo fato de serem SSRs baseados em ESTs, amostrando regiões transcritas, sendo esperada maior taxa de

conservação no genoma

APOIO CAPES e CNPq

57


AVALIAÇÃO DA PLASTICIDADE FENOTÍPICA DE LEMNA AEQUINOCTIALIS (L.) PARA

FITORREMEDIAÇÃO E PRODUÇÃO DE BIOENERGIA

Adauto Gomes Barbosa Neto1; Marciana Bizerra de Morais

1; Tercilio Calsa Junior

1.


(1)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, CB, Universidade Federal de

Pernambuco, Recife-PE

RESUMO Lemna aequinoctialis é membro da família botânica Lemnaceae, composta por macrófitas aquáticas, são

consideradas as menores angiospermas do mundo. Popularmente conhecidas como lentilhas-d'água ou duckweed,

em inglês, têm despertado interesse biotecnológico no tratamento de efluentes e para bioenergia. Sua diversidade

genética pode influenciar potenciais aplicações. Neste contexto, nove clones de Lemna aequinoctialis foram

fenotipicamente caracterizados in vitro usando meio de cultura SH 1X e 0,5X, a 25±2°C, 16/8 h luz/escuro e

intensidade luminosa de 50 µmol.m-2

.s-1

. A taxa de crescimento, rendimento em biomassa, teor de amido,

pigmentos fotossintetizantes e a atividade das enzimas antioxidativas SOD, APX e CAT dos clones foram

avaliadas para cada um dos meios de cultivo. Os dados foram obtidos a partir de triplicatas e estatisticamente

analisados por ANOVA e teste de Tukey a 5% de probabilidade, e posteriormente por análise de componente

principal (PCA). Foram selecionados três clones para bioensaio de fitorremediação de efluente de estação de

tratamento de esgoto. Previamente identificados pela região intergênica plastidial atpF-atpH, os clones de Lemna

aequinoctialis apresentaram baixa diversidade genética. Contudo, o estímulo ambiental promovido pelo cultivo em

SH 0.5X comparado ao SH 1X induziu diferenciação fenotípica dos clones, sendo agrupados distintamente da

análise de Neighbor-Joining baseada na distância genética de sequências atpF-atpH. Os clones M2, RC e DI

apresentaram maior resposta para taxa de crescimento, produção de biomassa e acúmulo de amido. No efluente,

estes clones foram capazes de reduzir a DQO de 85,5% para 94,8%, de remover entre 36,3% e 39,3% do

nitrogênio total, e entre 37,8% e 57,1% do fósforo total, produzindo elevada quantidade de biomassa. Os

resultados mostraram que a plasticidade fenotípica de Lemnaceae cultivadas in vitro pode contribuir para seleção

de genótipos candidatos para utilização em aplicações biotecnológicas de tratamento complementar de efluente e

produção de biomassa e bioenergia.

APOIO CAPES, CNPq, INCT Bioetanol, FACEPE, Lógica Ambiental

58


AVALIAÇÃO DAS CONDIÇÕES DE PRESERVAÇÃO DE GOSSYPIUM MUSTELINUM QUANTO À

EFICIÊNCIA DE ISOLAMENTO DE DNA

Ana Kelly dos Santos Maia1; Allison Vieira da Silva

1; Danielson Ramos Ribeiro

1; Iêda Ferreira de Oliveira

1;

Edson Ferreira da Silva1.


(1)Departamento de Agronomia/UFRPE

RESUMO Gossypium mustelinum é uma espécie silvestre, endêmica da região Nordeste do Brasil, que apresenta potencial

exploração de seus recursos genéticos, voltados ao melhoramento do algodão cultivado. A determinação das

melhores condições de coleta e de preservação de materiais vegetais é fundamental para o sucesso da extração de

seu DNA. Usualmente, obtém-se DNA de melhor qualidade quando esse método utiliza amostras de tecido fresco.

Porém, para a maioria das espécies silvestres, essa condição torna-se inviável, pois a coleta é realizada in situ, em

locais de difícil acesso. O objetivo desse trabalho foi avaliar três diferentes métodos de conservação

(congelamento a -20ºC, desidratação em sílica e imersão em solução saturada de NaCl/CTAB) de amostras de G.

mustelinum quanto à sua eficiência no isolamento de DNA. Para isso, folhas jovens e sadias de dois diferentes

acessos dessa espécie, provenientes de um banco de germoplasma localizado no Departamento de Agronomia, da

Universidade Federal Rural de Pernambuco, foram coletadas e armazenadas sob as condições descritas acima. A

metodologia de extração de DNA que utiliza o detergente CTAB 2% foi adotada, e cada amostra foi processada

em duplicata. O tratamento comparativo consistiu no emprego de amostras frescas, maceradas diretamente no

tampão de extração. Amostras processadas em nitrogênio líquido também foram testadas. A eletroforese em gel de

agarose revelou a presença de bandas nítidas e íntegras, com rendimentos entre 200-700 ng DNA / g folha, além

da ausência de bandas para alguns tratamentos. Os melhores resultados foram observados nas amostras congeladas

ou conservadas em sílica, sendo, portanto, os métodos recomendados para obtenção de material genético a ser

usado em estudos moleculares de G. mustelinum. As amostras frescas não mostraram reprodutibilidade para o

método de extração utilizado. G. mustelinum é uma espécie rica em compostos fenólicos, que mostra fácil

oxidação. É possível que os tratamentos por congelamento ou desidratação tenham provocado a inativação das

suas oxidases. O presente estudo corrobora a importância de avaliar diferentes métodos de conservação de tecidos

vegetais antes de proceder com a coleta dos materiais para fins moleculares.

APOIO CNPq

59


AVALIAÇÃO DE DIFERENTES MÉTODOS DE EXTRAÇÃO DE RNA TOTAL EM FOLHAS DE VITIS

VINIFERA INFECTADAS POR XANTHOMONAS CAMPESTRIS

Jéssica Barboza da Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva

1; José Ribamar Costa Ferreira Neto

1; Flávia Tadeu de

Araújo1; Valesca Pandolfi

1; Andreia Cristiny Cezarino de Araújo

1; Ayug Bezerra Lemos

1; Mireli de Santana

Rêgo1; Marianne Firmino de Oliveira

1; Natoniel Franklin de Melo


1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e Biotecnologia

Vegetal, Recife, PE; (2)

Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária - Embrapa Semiárido, Laboratório de

Biotecnologia e Citogenética Vegetal, Petrolina, PE

RESUMO A Vitis vinifera L. é uma trepadeira lenhosa e de porte arbustivo, sendo a principal representante da família

Vitaceae. Essa espécie possui grande importância econômica no Brasil, principalmente nas regiões Sul, Sudeste e

Nordeste, uma vez que seus frutos servem como matéria prima para fabricação de sucos, vinhos e consumo in

natura, entre outros. Porém, a cultura da videira vem apresentando perdas em sua produtividade desencadeadas

pela ação de patógenos como a bactéria Xanthomonas campestres pv. viticola, causadora do cancro bacteriano.

Diante do exposto, este trabalho objetivou testar diferentes protocolos de extração de RNA para tecidos foliares de

videira infectadas por X. campestres e identificar o mais eficiente para o tecido avaliado. Para isso, clones das

cultivares IAC-572 e Redglobe (consideradas resistente e susceptível à X. campestres pv. viticola,

respectivamente), foram cultivadas em telado sob condições controladas. Após 30 dias de cultivo as plantas foram

inoculadas injetando a suspensão bacteriana de dois isolados distintos quanto à agressividade da infecção

desencadeada. Após 24 e 48 horas de inoculação, as amostras foram coletadas e armazenadas em freezer -80º C. A

extração de RNA total foi realizada utilizando aproximadamente 100 mg de tecido foliar a partir de seis métodos

distintos: CTAB-Acetato de Amônio (1), CTAB-LiCl (2), Trizol (3), Trizol-Fenol (4), SV Total RNA Isolation

System - Promega (5) e RNeasy Plant Mini kit - Qiagen (6). Para todos os protocolos testados foram realizadas

pequenas modificações, exceto para o protocolo 3 que seguiu as recomendações do fabricante. A integridade das

amostras foi verificada em gel de agarose (1,5 %). Observou-se que os métodos 1, 2 e 5 foram os mais eficientes,

sendo possível visualizar as duas bandas de RNA ribossomal (28S e 18S). No entanto, no método 2 foi verificado

um rastro no gel, sugerindo uma possível degradação das amostras provavelmente ocasionada pela ação de

RNAses durante o processo de extração. Nos demais protocolos não foram visualizadas bandas, indicando que

nenhum RNA foi extraído. Esse resultado pode estar associado ao fato do tecido foliar de videira apresentar altos

níveis de compostos fenólicos, conferindo uma maior dificuldade para obtenção de amostras de RNA de boa

qualidade. Portanto, conclui-se que a seleção de um método de extração de RNA adequado é um passo

fundamental para garantir sucesso em estudos de expressão gênica via PCR em tempo real.

APOIO CNPq; CAPES; Facepe.

60


AVALIAÇÃO DE PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE DNA EM ACESSOS DE PEQUI DO PARQUE

NACIONAL DE SETE CIDADES-PI

Samara de Brito Vieira1; Giovana Sarah Sales Batista

2; Sérgio Emílio dos Santos Valente

3; Jarbson Henrique

Oliveira Silva1; Davi Alvarenga Lima

1; Jailson do Nascimento Silva

1; Bárbara Leitão Braga

1; Gisele Holanda de

Sá4; Paulo Sarmanho da Costa Lima

5.


(1)Discente do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI;

(2)Licenciada do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí-UFPI;

(3)Professor Associado II do Depertamento de Biologia da Universidade Federal do Piauí-UFPI;

(4)Mestranda do

Programa de Pós-Graduação em Genética e Melhoramento Vegetal da UFPI; (5)

Pesquisador da Empresa Brasileira

de Pesquisa Agropecuária ( Embrapa Meio- Norte)

RESUMO Introdução Uma das espécies de maior distribuição no cerrado é o pequi (Caryocar brasiliense), uma planta

utilizada na indústria artesanal e na culinária regional, além de apresentar potencial para a produção de

combustíveis e lubrificantes. Devido a sua importância, se torna necessário o estudo da diversidade genética que

pode auxiliar na preservação da espécie. Uma importante ferramenta no estudo da diversidade genética é a

utilização de marcadores moleculares e o primeiro passo seria a obtenção de um DNA puro e em quantidade

suficiente para análise. O presente trabalho teve por objetivo avaliar protocolos de extração de DNA em pequi

utilizando marcadores moleculares do tipo RAPD ("Random Amplified Polymorphic DNA") para comprovar a

eficiência de cada protocolo testado. Materiais e métodos Foram coletadas amostras de quatro indivíduos de

planta de pequi do Parque Nacional de Sete Cidades ( PNSC). As amostras foram conservadas em solução de

CTAB e NaCl segundo o protocolo de Rogstad (1992). Para a extração de DNA, ultilizou-se três protocolos :

Khanuja et al.(1999), Clarck et al. (1989) e Doyle & Doyle (1987) modificado por Faleiro et al. (2002). O

DNA extraído foi quantificado com auxilio de um NanoDrop® 2000. Na eletroforese em gel de agarose,

verificou-se a qualidade do DNA extraído e selecionou-se as melhores amostras a serem utilizadas em reações

RAPD. Utilizou-se 04 primers de RAPD desenvolvidos pela Operon Technologies ( OPD-01, OPD-03, OPD-08 e

OPE-14). Resultados e Discussões Após a quantificação em Nanodrop, utilizou-se seis amostras que

apresentavam os valores mais próximos do padrão de pureza (razões A260/280 e A260/230). Com a amplificação

por meio do primer OPE-14 foram geradas bandas de boa resolução nas amostras obtidas por meio do protocolo

de Romano & Brasileiro (1999), indicando que a quantidade e a qualidade do DNA extraído foram adequadas para

amplificar o DNA por meio da PCR (Reação em Cadeia da Polimerase). No entanto, os demais primers não

amplificaram o DNA, o que pode ser explicado por não possuirem uma sequência de DNA complementar às

amostras de DNA utilizadas. Conclusão Com os resultados obtidos, foi possível determinar que o protocolo de

Khanuja et al.(1999) foi o mais eficiente, sendo passível de utilização para futuros estudos molecular com plantas

de pequi.

APOIO Pibic/ CNPq

61


CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DE FABACEAE DE INTERESSE MEDICINAL POR MÉTODO

DE PCR-RFLP DO GENE TRNK

Alice Conceição Moraes Florêncio1; Rodrigo Juan Martins Cardozo

1; Bruna Corina Silva de Lima

1; Lívia Maria

Vilabela2; Ana Maria Benko Iseppon

2; Cláudia Sampaio de Andrade Lima

1; Ricardo Yara

3; Ricardo Yara

1.


(1)Laboratório de Biofísica Química - Departamento de Biofísica - UFPE;


Biotecnologia Vegetal - UFPE; (3)

Laboratório de Engenharia Biomédica - Departamento de Engenharia Biomédica

- UFPE

RESUMO A família Fabaceae é considerada a terceira maior entre as famílias botânicas e apresenta uma importância social e

econômica. É utilizada com diversas finalidades, desde alimentação humana e animal à utilização

etnofarmacológica. Um dos maiores desafios para prescrição médica dos fitoterápicos é a ausência de controle de

qualidade que assegure a identidade das espécies presentes no fitomedicamento. Essa identificação pode ser

realizada através de ferramentas moleculares, que garantem a presença da espécie botânica no fitoterápico. Este

trabalho teve como objetivo identificar e analisar o perfil eletroforético de plantas pertencentes à família Fabaceae

com utilização medicinal através do método PCR-RFLP. Foram escolhidas quatro espécies de leguminosas -

Amburana (Amburana cearensis), com atividade ansiolítica e anti-inflamatória; Angico (Anadenanthera

colubrina), anti-inflamatório; Carrapicho (Desmodium incanum), adstringente e antibacteriano; Mulungu

(Erythrina mulungu), ansiolítico e analgésico - de folhas e cascas de áreas onde ocorre a coleta para a produção de

fitoterápicos. Na etapa inicial do processo, as plantas foram pesadas e trituradas para a extração do DNA, seguindo

o protocolo de Doyle & Doyle (1987). A presença de DNA foi confirmada por meio de eletroforese. Em seguida,

foi realizada a amplificação do gene trnK por meio da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), utilizando os

iniciadores específicos para a família, o trnK-685F e trnK-2R. O produto da PCR foi verificado e clivado com as

enzimas de restrição TaqI e HaeIII e analisados em gel de agarose a 1%. As enzimas TaqI e HaeIII apresentaram

perfis diferentes para as quatro espécies. Para a enzima TaqI, as quatro plantas obtiveram padrões diferentes. Com

a clivagem pela enzima HaeIII, foi possível obter padrões únicos para A. colubrina e D. incanum. Por outro

lado, A. cearenses e E. mulungu não apresentaram sítio de clivagem para essa enzima, não se diferenciando. Este

estudo preliminar indica que apenas a utilização da enzima TaqI em produtos de PCR do gene trnK é suficiente

para diferenciar as quatro espécies analisadas.

APOIO SUDENE

62


DESENHO E VALIDAÇÃO DE PRIMERS PARA AMPLIFICAÇÃO DE DEFENSINAS EM

CUCURBITACEAE

Roberta Lane de Oliveira Silva1; José Diogo Cavalcanti Ferreira

1; Luís Carlos Belarmino

1; Ana Maria Benko

Iseppon1.



Vegetal, Recife, PE.

RESUMO As defensinas vegetais são peptídeos antimicrobianos caracterizados por possuírem 45 a 54 aminoácidos, oito

resíduos de cisteína que formam quatro pontes dissulfídicas e originam o domínio gama-tionina. Estes peptídeos

estão relacionados com a defesa vegetal, tendo elevado potencial antifúngico, antibacteriano e inseticida. Com a

utilização em larga escala de defensivos agrícolas visando reduzir o ataque de patógenos, ocorre a seleção de

organismos resistentes, determinando o uso de uma quantidade maior de agrotóxicos para obter tais efeitos. Diante

desta situação, a obtenção de novas armas de defesa, como as defensinas, torna-se fundamental para o

desenvolvimento de compostos antimicrobianos para aplicações biotecnológicas. O presente estudo objetivou

desenhar e validar primers que amplifiquem genes codificantes de defensinas em Cucumis melo L. O gene que

codifica a provável defensina foi selecionado a partir de sequências do transcriptoma da semente do melão-de-são-

caetano (Momordica charantia) depositadas no banco de dados Sequence Read Archive (SRA). As defensinas

foram mineradas no programa HMMer a partir do cDNA de M. charantia, sendo obtidas cinco sequências

contendo domínio completo e peptídeo sinal. Os primers foram desenhados no programa Primer3 de acordo com

parâmetros default, com algumas modificações. Em seguida, foram alinhados contra o genoma de C. melo para

confirmar a anotação in silico. As amplificações foram realizadas conforme descrito na literatura, com temperatura

de anelamento (TA) entre 58° e 62° C, utilizando o DNA genômico do melão. Dos 25 pares de primers

desenvolvidos, 13 (52 %) amplificaram em fragmentos de tamanho esperado, sendo sete com fragmentos únicos

cujos tamanhos foram idênticos aos obtidos pela análise in silico (todos com TA de 62° C) e seis apresentando

várias bandas sobrepostas além da banda de interesse. Com relação aos demais (12), oito pares não exibiram

amplificação e quatro amplificaram fragmentos inespecíficos de diferentes tamanhos. A utilização de defensinas

em processos de transformação genética envolvendo resistência a fitopatógenos já têm sido relatada na literatura

em diversas culturas, no entanto, não foi encontrada nenhuma defensina relatada em curcubitáceas para essa

finalidade. Portanto, os resultados obtidos podem contribuir para a compreensão dos mecanismos de defesa dos

vegetais, assim como para a identificação de defensinas em C. melo e confirmação da sua conservação em

curcubitáceas.

APOIO CNPq; Capes; Facepe.

63


DEVELOPMENT OF MICROSATELLITE MARKERS FOR GENETIC DIVERSITY ANALYSIS OF

CAMPOMANESIA ADAMANTIUM (CAMBESS) O. BERG (MYRTACEAE)

Bruno do Amaral Crispim1; Thamiris Gatti Déo

2; Adrielle Ayumi de Devasconcelos

2; Juliana dos Santos

Fernandes2; Thiago de Oliveira Carnevali

2; Maria do Carmo Vieira

3; Alexeia Barufatti Grisolia

2.


(1)Faculdade de Ciências Exatas e Tecnologias - Universidade Federal da Grande Dourados/Dourados-MS;

(2)Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais - Universidade Federal da Grande Dourados/Dourados-MS;

(3)Faculdade de Ciências Agrárias - Universidade Federal da Grande Dourados/Dourados-MS

RESUMO Campomanesia adamantium O. Berg (Myrtaceae), known as guavira or gabiroba, is an endemic plant of the

Cerrado biome. This species has significant economic potential due to the use of its fruits in the culinary and its

medicinal properties. Population structure of this plant still has not been studied due to the lack of hypervariable

molecular markers. Therefore, we constructed a microsatellite-enriched genomic library and designed 41 primer

pairs for single sequence repeats loci (SSR), of which 36 were successfully amplified and polymorphic. The

number of alleles ranged from two to eight, with an average of 4.73 alleles per locus. The observed (Ho) and

expected heterozygosities (He) values ranged from 0.09 to 1.00 and 0.09 to 0.85 respectively. The polymorphic

information content (PIC) values ranged from 0.08 to 0.78, with an average of 0.56 showing high levels of

polymorphism. All loci showed no significant deviation from HWE. In conclusion, we developed the first set of

microsatellite markers for C. adamantium that will be useful to estimate genetic diversity parameters and

population structure. In addition, these markers can be a valuable tool for efficient management strategies in

natural environments, mapping studies and breeding programs.

APOIO We thank Fundação de Apoio ao Desenvolvimento do Ensino, Ciência e Tecnologia do Estado de Mato Grosso do

Sul (FUNDECT), Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq), and Coordenação de

Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) for the financial support.

64


DIVERGÊNCIA GENÉTICA ENTRE ACESSOS DE J.CURCAS CONTRASTANTES AO ESTRESSE

SALINO

Jorge Luís Bandeira da Silva Filho1; Rahisa Helena da Silva

1; George André de Lima Cabral

2; Marislane

Carvalho Paz de Souza3; Ederson Akio Kido

4.


(1)Aluno de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas. [email protected];

(2)Doutorando - Rede

Nordeste de Biotecnologia - Renorbio. [email protected]; (3)

Doutoranda - Rede Nordeste de Biotecnologia -

Renorbio. [email protected]; (4)

Profº. UFPE. Departamento de Genética - CCB - UFPE - Laboratório

de Genética Molecular. [email protected]

RESUMO Jatropha curcas é uma espécie da família das euforbiáceas. É uma planta oleaginosa perene, promissora para

produção de biodiesel. O estudo da variabilidade genética de diferentes acessos pode auxiliar os programas de

melhoramento a explorar essa variabilidade de maneira adequada. A variabilidade genética pode ser estimada a

partir de marcadores moleculares. Aqueles do tipo SSR (Simple Sequence Repeats) são bem informativos, por

serem multialélicos e de ampla distribuição. Tais marcadores são desenvolvidos a partir de motivos repetidos em

tandem. Este estudo objetivou verificar a variabilidade genética de nove acessos, sendo sete do banco de

germoplasma da EMBRAPA (dentre os vinte mais produtivos) e dois considerados contrastantes [tolerante 183

(Jaíba, MG) e sensível 171 (Alagoas)] ao estresse salino (150 mM de NaCl), e que foram selecionados para estudo

de transcriptômica (RNA-seq), visando identificar genes tolerantes. ESTs de J. curcas contendo motivos perfeitos

SSR (diméricos até hexaméricos) foram detectados e serviram para desenho de primers. Cerca de 120 pares de

primers foram propostos e dez pares sintetizados, dos quais oito evidenciaram 16 alelos em segregação,

amplificando DNAs dos acessos, em reações de PCR [de volume total de 20 µL (contendo 1 µL de DNA

genômico (10 ng. µL-1

), 1x tampão de PCR, 1,5 Mm de MgCl2, 0,3 µM de primers, 0,5 U de Taq DNA

Polimerase, 0,1 Mm de dNTPs), com ciclagem de desnaturação inicial em 5 mim à 95°C, seguida de 30 ciclos de

60s a 95ºC, 60 s a 52ºC - 55°C (conforme o par de primers), 60 s a 72ºC e extensão final de 10 minutos a 72ºC].

Após amplificação, fragmentos foram corados e separados em gel de agarose (2%, p/v), sendo os polimorfismos

evidenciados com a leitura das bandas no gel. Com ajuda do software PopGen32 gerou-se dendrograma, com base

no índice de identidade genética de Nei (método UPGMA, procedimento Neighbor Joining modificado), que

estabeleceu a relação genética entre os acessos em estudo. O dendrograma, considerando 1.000 amostragens

(método de Bootstrap), mostrou que o acesso tolerante 183 foi o mais divergente geneticamente, ficando isolado

dos demais, que formaram um grupo a parte, incluindo o acesso sensível 171. Essa divergência amplia a

possibilidade de desenvolvimento de marcadores moleculares outros, além de EST-SSR (ex: SNP), a partir dos

dados de transcriptômica em desenvolvimento, com potencial para marcadores funcionais associados a tolerância

ao estresse em questão.

APOIO CAPES e CNPq

65


EFFICIENCY OF GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS IN INCREASING THE AQUAPORIN

GENE EXPRESSION IN RED RICE GROWN UNDER WATER STRESS

Nathálya Carvalho Farias1; Renata Priscila de Almeida Silva

1; Bruna Regina dos Santos Silva

1; Bruna

Cavalcante dos Santos2; Carlos Henrique Salvino Gadêlha Meneses

3.


(1)Universidade Estadual da Paraíba/Programa de Pós-Graduação Ciências Agrárias - UEPB, CEP 58.429-500,

Campina Grande-PB. Brasil; (2)

Universidade Estadual da Paraíba/CCBS/Departamento de Biologia - UEPB, CEP

58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil; (3)

Universidade Estadual da Paraíba/Programa de Pós-Graduação

Ciências Agrárias - UEPB, CEP 58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil -- Universidade Estadual da

Paraíba/CCBS/Departamento de Biologia - UEPB, CEP 58.429-500, Campina Grande-PB. Brasil

RESUMO Plant growth promoting endophytic bacteria such as Gluconacetobacter diazotrophicus PAL5, can directly

interfere with the plant metabolism by triggering a phenomenon known as induced systemic tolerance that may

increase water stress tolerance. Due to the importance the red rice (Oryza sativa L.) plays an important economic

and social role in the Brazilian semi-arid region and therefore it is necessary to study the possibility of increasing

tolerance of the plant to drought stress. In this way, inoculation of rice with G. diazotrophicus PAL5 may

contribute to alleviate the stress and consequently increase the nutritional efficiency of the plants. In this work we

evaluated the expression patterns of the aquaporin gene (OsPIP2) of red rice plants during the interaction with G.

diazotrophicus PAL5. Red rice plants (405 Embrapa Meio Norte genotype ), inoculated and non-inoculated with

the bacteria were submitted to four soil water stress conditions: 30%, 50%, 70% and 100% of field capacity. The

aquaporin gene expression was measured by quantitative PCR (qRT-PCR) 15 days after submitting the plant to

water regime. The aquaporin gene was induced in all soil moisture conditions, and the expression profiles were

dependent on the treatments. The highest levels of expression were observed in plants grown at 50% of moisture

in presence of the G. diazotrophicus PAL5 and of the OsPIP2 gene was down-regulated by and the absence of the

bacterium. Marked up- or down-regulation in PIP expression was observed by increased water availability and the

absence of the bacterium. Based on the relative expression of aquaporin gene, the results suggest that G.

diazotrophicus PAL5 increase the tolerance of red rice plants to drought stress.

APOIO CNPq Universal- MCTI n°483547/2013-1 and UEPB

66


ENVOLVIMENTO DO GENE ARP (AUXIN REPRESSED PROTEIN) NA DORMÊNCIA DE

SEMENTES DE AMENDOIM

Maria de Fátima Caetano da Silva1; Taiza da Cunha Soares

2; Rosa Maria Mendes Freire

3; Liziane Maria Lima

3;

Carliane Rebeca Coelho da Silva4; Roseane Cavalcanti dos Santos

3.


(1)Programa de Pós-Graduação em Ciências Agrárias;

(2)Renorbio UFRPE;


(4)UFPB/Embrapa

Algodão

RESUMO O amendoim (Arachis hypogaea) é uma importante oleaginosa para o setor alimentício devido ao elevado valor

nutricional e ao óleo. A lavoura é conduzida com genótipos eretos e rasteiros que atendem ao mercado. Os

genótipos rasteiros são de elevada produtividade, porém as sementes possuem elevado nível de dormência que

limita sua aceitação por alguns produtores. O processo de dormência é desencadeado devido a alguns passos

metabólicos que impedem a síntese de proteínas e transporte de reservas para o embrião. A regulação envolve

vários genes que atuam ativando ou reprimindo a ação de hormônios endógenos, como os genes da família ARP

(auxin repressor protein) que estão diretamente envolvidos com regulação da auxina em algumas espécies. Ele

regular a auxina, que é um fito-hormônio responsável pelo desenvolvimento e crescimento das células vegetais.

Com intuito de identificar a expressão desse gene em genótipos eretos e rasteiros de amendoim, realizou-se o

presente trabalho, adotando-se a ferramenta de RT-qPCR. RNAs de embriões e cotilédones de quatro genótipos de

amendoim (LGoPE-06, IAC Caiapó, L7 Bege e BR1) foram extraídos e as reações de RT-qPCR foram realizadas

com o kit Syber Green Rox Plus Master Mix 2X (LGC). Os primers ARP-1F e ARP-1R foram desenhados a partir

da sequência do gene depositada no NCBI (NC_003071.7). Três genes endógenos de amendoim foram usados nas

reações (β-actina, ubiquitina e PP2A). As reações de RT-qPCR foram realizadas no termociclador do Real-Time

System Eco™ PCR (Illumina), em triplicata experimental e biológica. As análises de expressão gênica foram

realizadas utilizando o programa qBASEPlus. Os gráficos, Cq e curva de dissociação foram gerados

automaticamente, com base no método de normalização com um gene de referência, ΔΔCq. Verificou-se que o

LGoPE-06 revelou uma expressão do ARP em embrião de 10 mil vezes em relação ao genótipo L7 Bege (não-

dormente) e em cotilédones 8 mil vezes que o L7 Bege, o que corrobora com o que se ve em campo, onde esse

genótipo leva entre 10-17 dias para emergir. A cv. IAC Caiapó possui alta dormência em campo, revelou

expressão apenas em cotilédones (0,5 mil vezes que o L7 Bege). É possivel que a expressão desse gene também se

encontre nos embriões dessa cultivar, contudo, devido ao alto valor encontrado na LGoPE-06, não foi possivel

atestar tal suposição. Esses achados são relevantes contribuindo na identificação de genótipos dormentes e

posterior uso em trabalhos de melhoramento.

APOIO CAPES, UEPB e Embrapa Algodão

67


ESTRUTURA GENÉTICA DE MELOCACTUS CONOIDEUS BUINING & BREDEROO (CACTACEAE),

ESPÉCIE CRITICAMENTE AMEAÇADA DE EXTINÇÃO, A PARTIR DE MARCADORES

MOLECULARES.

Tarcísio dos Santos Cardoso1; Thalana Souza Santos Silva

1; Cibelle Santos Dias

1; Elisa Suzilene Lisboua dos

Santos2; Carlos Bernard Moreno Cerqueira Silva

2.


(1)Laboratório de Genética Molecular Aplicada (LGMA), Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia - UESB,

Itapetinga, BA, Brasil; (2)

Departamento de Ciências Exatas e Naturais, Universidade Estadual do Sudoeste da

Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000

RESUMO O gênero Melocactus possui diversas espécies que são utilizadas como recursos naturais especialmente para fins

ornamentais, a exemplo da espécie M. conoideus. Popularmente conhecida como 'cabeça-de-frade', essa espécie

apresenta distribuição restrita na região da Serra do Periperi no município de Vitória da Conquista, Bahia. M.

conoideus está atualmente listada na categoria criticamente em perigo de extinção, tendo em vista a intensa

pressão antrópica nas áreas de sua ocorrência, o que evidencia a necessidade de ações de pesquisa que contribuam

para a sua conservação. No âmbito das ações de conservação torna-se fundamental o conhecimento da composição

genética de uma espécie e de como ela está distribuída em suas populações. Diante do exposto, objetivou-se

caracterizar a estrutura genética de 58 espécimes obtidos a partir da população natural de M. conoideus.

previamente obtidas. As estimativas de estrutura genética foram realizadas com base na análise do perfil de

amplificação de 10 primers ISSR (Inter Simple Sequence Repeat) previamente selecionados. Os padrões de bandas

foram utilizados para a construção de uma tabela de dados binários, onde zero (0) foi atribuído para ausência, um

(1) para a presença de bandas e nove (9) para dados inconclusivos. Para M. conoideus, um total de 67 marcas foi

gerado a partir das reações de amplificação em 58 indivíduos obtidos na reserva ambiental do Melocactus

conoideus. Apenas uma pequena parte destas marcas foi polimórfica (16,4%), com um número médio de 6,7

marcas por primer. Análise Bayesiana foi realizada a partir do programa STRUCTURE e a estimativa do número

de pools gênicos relativos a distribuição da diversidade foi obtida com o uso da ferramenta online STRUCTURE

Harvester. Baseado nos valores de Delta K observou-se uma estruturação principal em dois pools gênicos (Delta K

= 2) como a composição mais provável para os 58 indivíduos de M. conoideus presentes na Serra do Periperi. A

estruturação genética observada para a espécie pode ser justificada, ao menos em parte, pelo baixo fluxo gênico

decorrente das estratégias de polinização por aves com comportamento territorialista e pela dispersão de sementes

por pequenas distâncias pelos lagartos e formigas. Estes dados preliminares contribuem para as primeiras

informações genético-moleculares disponibilizadas para M. conoideus, sendo portanto, importantes para o manejo

consciente da espécie.

APOIO CNPq, FAPESB

68


EXPRESSÃO DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO DOF (DNA-BINDING WITH ONE FINGER) EM

GENÓTIPOS SELECIONADOS DE FEIJÃO-CAUPI SOB ESTRESSES BIÓTICOS E ABIÓTICOS

Mitalle Karen da Silva Matos1; João Pacífico Bezerra Neto


1; Ederson Akio

Kido1; Ana Maria Benko Iseppon

1.



RESUMO Em condições naturais, a produtividade de espécies cultivadas pode ser afetada negativamente por estresses

bióticos e abióticos. O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.] apresenta uma plasticidade fenotípica que

permite sua adaptação às condições adversas, tornando-o um excelente sistema para investigar a base genética da

tolerância/resistência a estresses. Regulando as respostas moleculares específicas, os fatores de transcrição (FTs)

atuam como chaves centrais no controle da expressão gênica. Neste sentido, objetivou-se avaliar a expressão dos

FTs da família DOF (DNA-binding with one finger) em acessos selecionados do feijão-caupi submetidos a estresse

biótico (vírus), salino e hídrico. Para isso, tags correspondentes à FTs DOF foram selecionadas em bibliotecas de

SuperSAGE oriundas de folhas [inoculadas com CABMV (Cowpea Aphid-Borne Mosaic Virus) ou CMV

(Cowpea Mosaic Virus)] e raízes (submetidas à desidratação radicular ou estresse salino) de diferentes genótipos

do feijão-caupi. O software DiscoverySpace 4.0 foi utilizado para determinar a expressão diferencial das tags,

considerando as significâncias estatísticas das variações nas frequências das tags entre cada biblioteca (tratamento

versus controle). O programa Venny 2.0.2 foi utilizado para analisar a distribuição e o comportamento

das tags nos diferentes experimentos. Foram identificadas 90 tags correspondentes aos FTs DOF nas quatro

bibliotecas analisadas. Nos experimentos de infecção viral, 21 e 20 tags foram expressas sob inoculação do

CABMV e CMV, respectivamente. Destes, três transcritos foram comuns em ambos os ensaios, porém com

regulação transcricional distinta (down-regulated e ns), em consonância com o fato de que ambos os genótipos

apresentam diferentes respostas aos patógenos estudados. Já na resposta à salinidade e à desidratação radicular, 25

e 24 potenciais FTs DOF foram expressos, respectivamente. Respostas cruzadas (crosstalk) entre os estresses

avaliados foram observadas na referida família de FT, assim como resposta específica para a natureza do estresse

(biótica ou abiótica). Proteínas multifuncionais são significativamente importantes para a sobrevivência das

plantas, uma vez que tais organismos estão sujeitos a estresses múltiplos simultaneamente. Assim, este estudo

permitiu a identificação de transcritos da família DOF que atuam na regulação da resposta do feijão-caupi em

condições desfavoráveis, indicando candidatos para estudos que visem o melhoramento da cultura.

APOIO CAPES, FACEPE, CNPq.

69


GENES CANDIDATOS À AQUAPORINAS EXPRESSAS EM STYLOSANTHES SCABRA VOGEL

(FABACEAE)

Flávia Tadeu de Araújo1; João Pacífico Bezerra Neto

1; Rômulo Fonseca dos Santos

1; Roberta Lane de Oliveira

Silva1; Valesca Pandolfi


1.


(1)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal - Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO Stylosanthes scabra Vogel destaca-se entre as leguminosas forrageiras tropicais por apresentar tolerância à seca,

adaptação a solos ácidos e de baixa fertilidade, sendo frequentemente utilizada na recuperação de áreas

degradadas. Diante do exposto, aliado à sua alta variabilidade genética, S. scabra apresenta-se como um excelente

material de grande potencial em programas de melhoramento genético. Entre os genes de interesse no

melhoramento genético, estão as aquaporinas (AQPs) - proteínas de membrana, que funcionam como canais de

água - que são de grande relevância, uma vez que atuam como componentes centrais nas relações hídricas das

plantas. Esse estudo teve como objetivo identificar membros da família de AQPs no transcriptoma de S. scabra a

partir de primers desenhados para feijão-caupi (Vigna unguiculata). O RNA total de S. scabra foi extraído com o

protocolo de acetato de amônio e utilizado para síntese de cDNA (kit GOScript - Promega). As reações de PCR

foram realizadas em um volume final de 20 µL [sendo: 1 µL de cDNA, 10 mM de dNTP-mix, 50 mM de MgCl2,

5 µM de cada primer (direto e reverso) e 5 U de DNA polimerase], com a seguinte programação: 94ºC por 5 min

(desnaturação inicial) seguido por 35 ciclos de 94ºC por 1 min e por 58 ºC por 1 min e 72 ºC por 1 min

(anelamento e extensão) e uma extensão final de 72ºC por 10 min. Dos 15 pares de primers analisados, 9 pares

amplificaram nas regiões codificantes do genoma de S. scabra, com amplicons únicos no tamanho esperado,

demonstrando 60% de transferibilidade entre as duas leguminosas analisadas (V. unguiculata e S. scabra),

indicando um alto nível de conservação dessa superfamília gênica. A família de maior representatividade foi a PIP,

com 5 membros identificados, seguida pelas famílias NIP, TIP, SIP, com 2, 1 e 1, respectivamente. Corroborando

com essa análise, estudos têm relatado PIP como a maior família dentre as AQPs. Tal resultado reforça o fato de

S. scabra ser uma espécie que apresenta características de tolerância à seca, visto que os membros de PIP atuam

mais exclusivamente no transporte de água na planta, enquanto que os membros das outras famílias de AQPs estão

relacionados ao transporte não só de água, mas de outros solutos. As AQPs identificadas neste estudo representam

importantes papéis em plantas tolerantes à seca, além do valioso recurso genético a ser explorado em programas de

melhoramento genético, visando uma maior tolerância ao déficit hídrico.

APOIO CAPES, CNPq.

70


GENETIC DIVERSITY AND GENE FLOW IN A FRAGMENTED POPULATION OF PAYPAYROLA

BLANCHETIANA TUL. (VIOLACEAE), AN UNDERSTORY TREE ENDEMIC TO THE BRAZILIAN

ATLANTIC FOREST

Marcus Braun1; Tiago Esposito

1; Bruno Huettel


1.


(1) Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Centro de Biociências - UFPE,

Recife, PE, Brazil; (2)

Max Planck Genome Centre, Cologne, Germany

RESUMO Paypayrola blanchetiana is a small insect-pollinated tree with short-range seed dispersal, endemic to the Atlantic

Forest of East Brazil. A previous study showed that the species presented low fruit set and high fruit abortion rates

in forest fragments of different sizes within a matrix of sugarcane cultivation. Fruit set was also lowest in the

smaller fragments. The present study has two main goals: (1) to develop the first set of nuclear microsatellite

markers useful for population genetic work in the genus Paypayrola, and (2) to test the hypothesis that gene flow

is low and inbreeding is high among seven subpopulations of P. blanchetiana scattered across five forest

fragments. Furthermore, genetic diversity should be lowest in the smallest fragments. For microsatellite

development, 331,000 reads of 250 bp were obtained from Illumina MiSeq sequencing. Microsatellites (minimum

length 20 bp) were detected using Phobos and primer pairs were designed using Primer3Plus and OligoAnalyzer

3.1 softwares. Twenty-five of 37 primer pairs amplified specific products ranging in size from 123 to 198 bp. Of

these, seventeen were polymorphic. They were genotyped on an ABI 3500 sequencer (Applied Biosystems®),

using forward primers indirectly labeled with the fluorochromes 6-FAM, VIC, NED and PET via an "M13"

adapter. Ten nuclear loci generated sufficiently high and clear peaks for genotyping 280 plant individuals.

Preliminary results revealed an excess of homozygotes in six loci and a mean heterozygosity (HE) of 0.49 (ranging

from 0.2 to 0.74 across loci). Mean number of alleles per locus (A) was 2.9, being significantly smaller in small

versus large fragments. However, heterozygosity was not significantly different (large fragments:HE=0.45; small

fragments: HE=0.46). Inbreeding was high (FIS= 0.16) and genetic differentiation was moderate (FST=0.12) across

all loci. Pairwise FST and STRUCTURE analysis revealed the presence of three distinct populations,

geographically separated by distances between five and twelve km. This genetic structuring points to a noticeable

restriction of gene flow over short geographical distances in this fragmented landscape. Further studies are

desirable to test if near-dispersed forest trees are generally vulnerable to these effects following habitat

fragmentation.

APOIO CNPq no. 350605/2013-0 and 300532/2016-4; FACEPE DCR-0018-2.03/13

71


IDENTIFICAÇÃO IN SILICO E CARACTERIZAÇÃO DE MICROSSATÉLITES NO GENOMA DO

FEIJÃO-CAUPI

Wilson Dias de Oliveira1; Thialisson Caaci do Vale Amorim

2; Flávia Tadeu de Araújo

2; Mitalle Karen da Silva

Matos2; João Pacifico Bezerra Neto


2.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco;


RESUMO Elementos de DNA repetitivo são encontrados em todos os organismos, podendo constituir uma fração

considerável do genoma. Tais elementos podem ser classificados em (I) repetições dispersas (ex. transposons) ou

(II) in tandem, como é o caso dos microssatélites. Os SSRs (Repetições de Sequência Simples) são frequentes no

genoma de eucariotos e distribuem-se de forma aleatória nos cromossomos, além de possuírem níveis

consideráveis de polimorfismos e serem codominantes. Tais características os tornam excelentes marcadores para

estudos de variabilidade genética e identificação de genótipos superiores, entre outras aplicações. Dessa forma, o

presente estudo objetivou identificar e caracterizar os SSRs no transcriptoma do feijão-caupi [Vigna unguiculata

(L.) Walp]. Para este propósito, foi utilizado o programa MISA (MIcro SAtellite identification tool), um script

escrito em perl, contra as sequências genômicas do feijão-caupi depositados no GenBank do NCBI (National

Center for Biotechnology Information). Foram mineradas 21841 sequências do transcriptoma de V. unguiculata,

resultando em um total de 30496 microssatélites. Deste total, os motivos di- e trinucleotídeos foram os mais

abundantes com 15712 (51,5%) e 6711 (22%) respectivamente, enquanto os tetra, penta e hexanucleotídeos foram

os menos frequentes nas sequências analisadas. Também foram consideradas as repetições compostas, que

perfizeram um total de 7097 (23,3%) SSRs. Em um estudo realizado com Arabidopsis thaliana (L.) Heynh.

também foi relatada a predominância de sequências dinucleotídicas, (71%) nas 1.236 ESTs (Expressed Sequence

Tags) analisadas. Em uma pesquisa realizada com leguminosas, foram comparadas as regiões codificantes e não-

codificantes quanto à presença dos microssatélites, observando-se que as frequências de tri e dinucleotídeos

tendem a se duplicar nas regiões codificantes, possivelmente como resultado de pressão de seleção. No presente

estudo, os motivos dinucleotídicos foram os que apresentaram a maior quantidade de repetições, variando de 9 a

61 nucleotídeos. Para o desenho de marcadores, esta informação é de grande valia, pois quanto maior a variação de

repetições, maior será o potencial polimórfico. A análise in silico permitiu a identificação dos motivos SSRs no

transcriptoma de feijão-caupi, possibilitando o desenvolvimento de marcadores moleculares visando sua aplicação

em estudos de diversidade e mapeamento genético.

APOIO (CAPES, CNPq e FACEPE)

72


IDENTIFICAÇÃO DE MICROSSATÉLITES PLASTIDIAIS POLIMÓRFICOS PARA ANÁLISES

GENÉTICAS DE CENOSTIGMA MICROPHYLLA GAGNON (LEGUMINOSAE) EM ÁREAS DA

CAATINGA

Paulo Aecyo1; Tiago Esposito

1; Marcus Braun

1; Elâine Ribeiro

2; Inara Leal


1.


(1)Laboratório de Citogenética e Evolução Vegetal, Departamento de Botânica, Centro de Biociências - UFPE,

Recife, Pernambuco, Brasil.; (2)

Laboratório de Interação Planta-Animal, Departamento de Botânica, Centro de

Biociências - UFPE, Recife, Pernambuco, Brasil.

RESUMO Cenostigma microphylla [= Poincianella microphylla (Mart. ex G. Don) L. P. Queiroz], conhecida como

catingueira falsa ou catingueira da folha miúda, possui hábito arbóreo, sendo polinizada especialmente por insetos

e dispersa balisticamente. É uma espécie endêmica da Caatinga, e amplamente distribuída em toda a região

semiárida, apesar das condições adversas, como alta temperatura, baixa umidade relativa, alta evapotranspiração

potencial e baixa precipitação (i.e. 240 mm a 900 mm ao ano), e das frequentes perturbações antrópicas como o

corte e queima da vegetação, criação extensiva de animais domésticos e coleta de madeira. Este trabalho objetiva

testar a amplificação e o polimorfismo de microssatélites plastidiais (cpSSR) universais, de modo a estabelecer

marcadores para análises genéticas futuras, como a influência das perturbações antrópicas na diversidade genética

deste bioma. Para tanto, foram utilizadas folhas jovens de nove indivíduos de C. microphylla coletados em

diferentes áreas do Parque Nacional do Catimbau, localizado no interior do estado de Pernambuco, Brasil. O DNA

vegetal foi extraído utilizando CTAB (brometo de cetil-trimetilamônio) e amplificado com oito pares de primers

plastidiais universais previamente desenvolvidos (ccmp2 - 7, ccmp10 e EMCRC74), com temperaturas de

anelamento variando entre 52°C e 58ºC. Os produtos da PCR marcados diretamente foram genotipados utilizando

o ABI 3500 GeneticAnalyzer (Life). Todos os primers testados amplificaram regiões de tamanho esperado,

variando entre 89 pb a 410 pb. Dentre eles, quatro foram polimórficos (ccmp2, ccmp5, ccmp10 e EMCRC74),

com dois a seis alelos por loco. Estes locos terão grande utilidade em análises futuras que visam testar os efeitos

do aumento das perturbações antrópicas e da aridização (duas ameaças comuns à biota da Caatinga e atualmente

em investigação pelo grupo) sobre a variabilidade e estruturação genética de Cenostigma microphylla.

APOIO FACEPE, CAPES e CNPq.

73


IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS CLOROPLASTIDIAIS DE CANA-DE-AÇÚCAR (SACCHARUM

SP.) SOB DÉFICIT HÍDRICO EM GEL SDS-PAGE

Elton Pedro Nunes Pena1; Melquisedec de Sousa Oliveira

1; Amanda Emanuella Rocha de Souza

1; Fabiana

Aparecida Cavalcante Silva1; Tercilio Calsa Junior

1.


(1)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, Centro de Biociências,

Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE

RESUMO Cana-de-açúcar é uma Poaceae que possui relevância na economia brasileira devido à produção de açúcar e

bioetanol. Contudo, fatores ambientais, como a seca, comprometem a fisiologia e desenvolvimento normal da

planta, diminuindo a produtividade. Os cloroplastos são organelas semiautonômas responsáveis primariamente

pela fotossíntese, que participam de reações de biossíntese vitais a planta, sendo consideradas importantes em

respostas de tolerância a estresses abióticos. Portanto, torna-se relevante o estudo dos mecanismos de expressão

gênica do cloroplasto relacionados à tolerância ao déficit hídrico. A proteômica consiste em um conjunto de

técnicas utilizadas na determinação de proteínas diferencialmente expressas, em situações biológicas contrastantes,

como em estresses abióticos. No entanto, não há informações sobre efeito do déficit hídrico no proteoma

cloroplastidial em cana-de-açúcar. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi identificar proteínas cloroplastidiais

diferencialmente expressas em cana-de-açúcar sob déficit hídrico. Plantas da variedade RB92579 (considerada

tolerante ao déficit hídrico), com 90 dias de idade, foram submetidas ou não (controle irrigado) ao estresse hídrico,

durante sete dias, e ao fim do experimento, folhas foram coletadas e os cloroplastos isolados por centrifugação

diferencial. Após o isolamento, as proteínas foram extraídas pelo método fenólico, e separadas em gel SDS-

PAGE. Bandas de proteínas com mais de 50 % de inibição ou superexpressão (razão estresse/controle -

GelAnalyser 2010a) foram excisadas e digeridas com tripsina para análise em espectrômetro de massas

(AUTOFLEX III MALDI-TOF/TOF). Os espectros obtidos foram anotados utilizando o software Mascot contra

bancos de dados de Saccharum (Uniprot e NCBI). Na condição controle, foram identificadas cinco proteínas

diferencialmente expressas, categorizadas nas seguintes classes: fotossíntese (proteína Ycf4 do fotossistema 1

e subunidades α e β da ATP sintase); ubiquitinação (proteína CHIP e HSP90). Em plantas estressadas, cinco

proteínas foram identificadas: fotossíntese (citocromo f e proteína de ligação à clorofila a-b tipo 2); resposta a

estresse (HOP); síntese de isoprenóides (HMG-CoA sintase); recombinação meiótica cloroplastidial (proteína

At1g65010 da família WEB). Conclui-se que as proteínas identificadas são possíveis candidatas de resposta ao

déficit hídrico, sendo necessárias análises complementares para corroborar com tal hipótese.

APOIO CAPES, LGPP e CETENE

74


IDENTIFICAÇÃO DE PROTEÍNAS ENVOLVIDAS NA INTERAÇÃO COWPEA APHID BORNE

MOSAIC VIRUS (CABMV) - VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP. POR ESI LC-MS/MS.

Cláudia Juliana Tabosa Lopes de Crasto1; Antonio Felix da Costa

2; Wagner Fontes

3; Marcia Vanusa da Silva

4;

Angela Mehta5; Maria Tereza Santos Correia

6.


(1)Crasto, C.J.T.L.;

(2)Costa, A.F.;

(3)Fontes, W.;

(4)Silva, M.V.;

(5)Mehta, A.;

(6)Correia, M.T.S.

RESUMO O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa originária do continente africano com ampla

distribuição em regiões tropicais e subtropicais, constituindo um dos principais componentes da dieta alimentar,

especialmente na zona rural das regiões Nordeste e Norte do Brasil. Essa cultura tem sido constantemente atacada

por vírus, causando grandes perdas na produção. Diante do exposto, o presente trabalho objetivou identificar

proteínas diferencialmente abundantes durante a interação Cowpea aphid borne mosaic virus (CABMV) - Vigna

unguiculata (L.) Walp. Foram utilizadas neste estudo as variedades Sempre Verde Luís Eduardo Magalhães -

suscetível, e TVU 966 - tolerante ao vírus CABMV. As plantas foram borrifadas com carborundo e inoculadas

com água (controle) e com CABMV e, posteriormente, coletadas em triplicatas biológicas nos tempos 72 e 168

horas após a inoculação. Proteínas totais foram extraídas com fenol, precipitadas com acetato de amônio em

metanol e, em seguida, digeridas com tripsina. As proteínas digeridas foram injetadas no equipamento ESI- LC-

MS/MS (Thermo Scientific). A análise de dados foi realizada por meio do software Progenesis® QI for proteomics

(Non linear Dynamics) e a identificação das proteínas, por meio do software Peaks® (Bioinformatics Solutions).

Este estudo revelou um total de 2.900 proteínas, sendo 296 proteínas diferencialmente abundantes onde 185

pertencem a variedade TVU 966 e 111 a Sempre Verde Luiz Eduardo Magalhães. Com a análise dos resultados foi

possível observar diversas proteínas relacionadas com o metabolismo energético; a fotossíntese; o estresse e

resposta a defesa da planta; a sinalização entre outras baseadas na anotação do Gene Ontology . Como exemplos a

ribulose bifosfato carboxilase de cadeia longa; rubisco de subunidade longa e ligação da subunidade beta;proteína

de choque térmico 90; actina 97 dentre outras. Essas proteínas já têm sido reportadas em outros estudos de

interação planta-patógeno, mostrando que genes envolvidos na resposta a outros vírus também foram observados,

fornecendo pistas para elucidar os mecanismos moleculares e fisiológicos subjacentes à resistência e / ou

suscetibilidade.

APOIO FACEPE, IPA e EMBRAPA.

75


IDENTIFICAÇÃO DO DNA SATÉLITE NO GENOMA DE PASSIFLORA EDULIS SIMS POR

SEQUENCIAMENTO DE ÚLTIMA GERAÇÃO

Vanessa de Carvalho Cayres Pamponét1; Margarete Magalhães Souza

1; Gonçalo Santos Silva

1; Cláusio Antônio

Ferreira de Melo1; Saráh Gomes de Oliveira

2; Fabienne Micheli

1.


(1)Departamento de Ciências Biológicas, Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC), Ilhéus, BA, Brasil;

(2)Departamento de Botânica, Instituto de Biociências, Universidade de São Paulo (USP), São Paulo, SP, Brasil

RESUMO Espécies vegetais têm o genoma constituído majoritariamente de sequências repetitivas, encontradas dispersas no

genoma (elementos transponíveis) ou em tandem (DNA satélite). DNAs satélites são geralmente encontrados em

genes de DNA ribossomal, nos telômeros, subtelômeros, centrômeros e em áreas pericentroméricas.

Conhecimentos sobre funções moleculares e citológicas do DNA repetitivo são recentes, como por exemplo, nos

processos de replicação do DNA, recombinação, expressão gênica e evolução cromossômica. Assim, este trabalho

teve como objetivo utilizar o sequenciamento de nova geração (NGS) para identificar e caracterizar o DNA satélite

do genoma de Passiflora edulis, para produção de marcadores cromossômicos em genótipos de interesse ao

melhoramento genético e estudos evolutivos do maracujazeiro. O DNA genômico foi sequenciado na Plataforma

Illumina Miseq, utilizando o kit V3 que fornece sequências paired-end de até 301 ciclos. A bioinformática foi

realizada com o programa Repeat Explorer, que gera gráficos baseados na análise de agrupamento de sequências

com semelhanças, a fim de, identificar elementos repetitivos. Foi utilizada uma nova ferramenta do programa, o

TAREAN - Tandem Repeat Analyzer que permite a identificação automática de agrupamentos derivados de

repetições em tandem e reconstrução dos monômeros consensos. Foram gerados um total de 351 clusters (CL), dos

quais apenas o CL 118 apresentou um monômero consenso com 145 pares de base (pb), com Satellite probability

de 0.985 e Loop Index de 1.0 apresentando gráfico com layout circular, que caracteriza alta confiabilidade para

DNA repetitivo em tandem. Outros dois clusters foram caracterizados com baixa confiabilidade, o CL 88 e o 315,

com monômeros de 342 e 99 pb, índices de Satellite probability 0.034 e 0.011 e Loop Index 0.727 e 0.954,

respectivamente. Este resultado revela uma frequência muito baixa de DNA satélite em P. edulis. A proporção do

DNA satélite no genoma é muito variável e é desconhecida qualquer relação com o tamanho do genoma, mesmo

sabendo que há uma relação proporcional da frequência de DNA repetitivo em genomas maiores. Algumas

espécies vegetais, como Musa acuminata e Silene latifólia, também apresentam uma proporção muito baixa de

DNA satélite. Em estudos genômicos pelo sequenciamento de bibliotecas BAC-end em P. edulis também foi

encontrado um número muito baixo de DNA satélite, e num total de 4.774 elementos repetitivos apenas um foi

caracterizado como satélite.

APOIO CAPES; FAPESB; UESC

76


INITIAL ASSESSMENT OF GM COTTON RESISTANT TO COTTON BOLL WEEVIL BASED ON

FEEDING BIOASSAYS AND ELISA

Roseane Cavalcanti dos Santos1; Marília de Macêdo Freire Duarte

2; Maria de Fátima Caetano da Silva

2; Luana

Camilla Cordeiro Braz3; Carliane Rebeca Coelho da Silva

4; José Jaime Vasconcelos Cavalcanti

1; Liziane Maria

de Lima1; Érica Soares Martins

5; Rose Monnerat

5.



(2)UEPB;

(3)UFCG;

(4)Renorbio, UFRPE;

(5)Embrapa Cenargen

RESUMO The boll weevil (Anthonomus grandis) is the main pest of cotton crop due to cause serious damages to

reproductive structures, affecting directly the yield. The effective control is done through chemical insecticides,

which substantially increase management costs. Control via transgenesis is a promising strategy and less harmful

to the environment, especially by using Cry proteins, derived from endophytic Bt bacteria. In 2015, the biotech

team from Embrapa introduced a cry 10-construction into cotton plants, isolated from a Bt strain that showed low

DL50 in boll weevil feeding bioassays (7.12 mg/mL). In order to test the toxicity of Cry proteins were conducted in

laboratory bioassays feeding with boll weevil and ELISA assays. Three hundred and sixty plants T0 were grown in

green house and further were evaluated in feeding bioassays and ELISA tests, carried out in Entomology and

Biotech Labs, at Embrapa Algodão (Campina Grande, PB). Antibody used in ELISA tests was provided by

Biological Control team, at Embrapa Cenargen (Brasilia, DF). Seven events were selected, among them five

showed mortality rate ranging from 60% to 72%, and Abs-reading ELISA from 0.600 to 2.00 nm. Eighty-one

seeds T1 derivate from these events (T0) were grown in rows in a greenhouse. From 65 d, plants were infested

with two couples of adult insects under restraint environment. Shedding buds were daily recorded during 10 d and

evaluated as natural shedding (NS, no boll weevil symptom), feeding (FB) and oviposition (OBO). Based on total

of plant evaluated, 44% from T1-346, 50% from T1-371, 46% from T1-336 and 13% from T1-357 did not show

bool weevil symptom. The average natural shedding in control plants was 30% and 19% in T1 plants. The

averages of insect perforations in selected plants was 10%, including feeding and oviposition, while the control

was 35%. In ELISA assays carried out in selected T1 events, twenty two showed twice the value of control plants

(Abs-reading), indicating that they are promising for further molecular assays in order to identify events resistant

to boll weevil. These results are quite relevant to Brazilian cotton belt because, up to now, no commercial GM

cotton has resistance to bool weevil. So, this study represents an expressive oportunity for control this pest by

molecular tools.

APOIO Embrapa Algodão, CNPq, CAPES.

77


ISOLAMENTO DE PROTEOMA SOLÚVEL DE PALMA FORRAGEIRA (OPUNTIA STRICTA) PARA

ANÁLISE DE EXPRESSÃO DIFERENCIAL EM RESPOSTA À SECA E INFESTAÇÃO POR

COCHONILHA-DE-ESCAMAS (DIASPIS EHINOCACTI)

Mara Danielle Silva do Carmo Santana1; Elton Pedro Nunes Pena

2; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva

1;

Amaro de Castro Lira Neto3; Tercilio Calsa Junior

1.



Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE; (2)

Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas,

Departamento de Genética, Centro de Biociências, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE e Instituto de

Ciências Biológicas, Universidade de Pernambuco, UPE, Recife, PE; (3)

Instituto Agronômico de Pernambuco,

IPA, Recife, PE

RESUMO A palma forrageira, cultura relevante para a região semi-árida do Nordeste brasileiro por atender à nutrição animal

em períodos de estiagem, tem sofrido redução na produção por ataque de cochonilha-de-escamas (Diaspis

ehinocacti). Pouco se conhece sobre os processos moleculares envolvidos na relação praga-hospedeiro entre estas

espécies. A análise proteômica pode auxiliar pela identificação de proteínas associadas às respostas em condições

diferenciais. O trabalho objetivou selecionar método de extração de proteínas solúveis de O. stricta e verificar

acúmulo diferencial de proteínas em resposta à seca e/ou à infestação por cochonilha-de-escamas. Clones de O.

stricta var. IPA200016 de 1 ano de idade foram submetidos aos tratamentos: I-irrigado e sem infestação; II-

irrigado e com infestação; III-supressão de irrigação e sem infestação; IV-supressão de irrigação e com infestação.

A infestação se deu a partir do contato por 7 dias com palma infestada. Após infestação as plantas foram

submetidas a estresse de seca por 30 dias. Foi macerado 1 g de amostra do cladódio primário e utilizado para os

métodos: (a). Fenol: adição de tampão (EDTA 0,05 M, Tris-HCl 0,5 M pH 7,5; sacarose 0,7 M; β-mercaptoetanol

2%, PMSF 0,002 M, KCl 0,1 M), extração com fenol saturado, precipitação com metanol contendo acetato de

amônio 0,1 M e lavagens com acetona 80%. (b). Fenol/SDS: método (a) seguido de limpeza com tampão SDS

denso (sacarose 30%, SDS 2%, Tris-HCl 0,1 M pH 8,0, β-mercaptoetanol 5%), extração com fenol saturado,

precipitação com metanol contendo acetato de amônio 0,1 M e lavagens com acetona 80%. (c). TCA: precipitação

com TCA/acetona 10% e lavagens com acetona 80%. (d). Método (c) seguido pela limpeza do método (b). As

amostras foram solubilizadas em uréia 7M: tiouréia 2M, quantificadas pelo método Bradford e separadas em SDS-

PAGE 1D. A visualização das amostras revelou que o método d apresentou menor degradação, apesar de não

possuir maior rendimento de proteínas totais. A análise da intensidade de bandas entre tratamentos permitiu

identificar diferenças quali-quantitativas que podem refletir variações na produção de proteínas. Foram

selecionadas três bandas diferenciais, excisadas e identificadas por espectrometria de massas, cuja anotação

presumível permitiu associá-las às respostas da planta aos estresses aplicados. Os resultados poderão ser úteis para

seleção de biomarcadores associados à tolerância aos estresses em estudo.

APOIO UFPE, RENORBIO, IPA, UESPI.

78


MAPEAMENTO IN SILICO DE GENES DE JATROPHA CURCAS ENVOLVIDOS COM A BIOSSÍTESE

DE ÓLEOS, EM GENOMA DE MANIHOT ESCULENTA

Marislane Carvalho Paz de Souza1; George André Lima Cabral

1; Jorge Luís Bandeira Silva Filho

1; Éderson Akio

Kido1.


(1)Departamento de Genética

RESUMO Jatropha curcas é uma oleaginosa conhecida como pinhão-manso. É planta perene, rústica e adaptada a ambientes

tropicais. As sementes de J. curcas são ricas em óleo (30-40%), com potencial para produção de biodiesel. O

cultivo, entretanto, é limitado devido à falta de materiais recomendados pelo melhoramento. Embora existam

dados genômicos de J. curcas, o genoma não está totalmente resolvido, e pouco se conhece sobre a distribuição

dos genes relacionados com a biossíntese de óleos na espécie. Este estudo teve por objetivo mapear genes de

J.curcas relacionados com a biossíntese de ácidos graxos, em genoma já disponível, da mesma família

(Euphorbiaceae), no caso, Manihot esculenta (mandioca), a fim de analisar a distribuição nos cromossomos. Para

tanto, sequências proteicas de J. curcas, da base de dados NCBI, relacionadas com genes de Arabidopsis do

metabolismo de lipídeos (http://aralip.plantbiology.msu.edu/pathways/pathways), foram identificadas e alinhadas

via BLASTp (e-value < e-20

) com sequências proteicas de M. esculenta, para as quais há anotações (de gene e/ou

função gênica) e localização cromossômica prevista (base de dados Phytozome). Considerando o melhor hit para

cada uma das 70 proteínas de J. curcas em estudo, foram associadas, no total, 62 proteínas de M. esculenta (e-

value máximo observado de e-51

e score mínimo de 65 emáximo de 4.288), representando 61 locos em 18

cromossomos previstos. Em dois cromossomos (5, 10) somente um locus foi identificado; em quatro cromossomos

(3, 4, 6, 17), foram dois; em outros quatro cromossomos (7, 12, 16, 18), foram três locos; em outros quatro (8, 9,

13, 15), quatro locos; em outros três (2, 11, 14), cinco, e em um cromossomo (1), oito locos foram mapeados. Os

locos identificados foram associados quanto à função gênica atuando: a) na conversão de ácidos graxos em

lipídeos estocados no retículo endoplasmático (Gr. I); b) na biossíntese de novo de ácidos graxos em plastídios

(Gr. II); c) no citosol (Gr. III), d) como proteínas regulatórias (Gr. IV). Relativos ao Gr. I foram identificados 19

locos (em 11 cromossomos); ao Gr. II, 28 locos (16 cromossomos); ao Gr. III, 2 locos (2 cromossomos) e ao Gr.

IV, 12 locos (11 cromossomos). Apesar de separadas evolutivamente, este mapeamento abre a possibilidade de se

esperar marcadores ligados, relacionados com a biossíntese de ácidos graxos, em decorrência da sintenia entre as

espécies citadas, e que possam ser aproveitados no melhoramento vegetal de J. curcas.

APOIO FACEPE

79


MECANISMOS DE RESISTÊNCIA ESTRUTURAIS E ATIVIDADE DE ENZIMAS OXIDATIVAS E

SUA INFLUÊNCIA NO ESTABELECIMENTO DO PROCESSO INFECCIOSO DE MONILIOPHTHORA

PERNICIOSA EM FRUTOS DE CACAUEIRO.

Ivanna Michelle Meraz Pérez1; Karina Peres Gramacho

1; Virginia Fontes Soares

2; Kaleandra Sena

1; Yaska

Janaina Bastos Soares1; Mariana Rocha de Carvalho

1; Renato S. Gonzaga Santos

3; Uilson Vanderlei Lopes

1;

Carlos Priminho Pirovani2.


(1)CEPLAC/CEPEC/SEFIT, Rodovia Ilhéus- Itabuna, km22, cx. Postal 07, Ilhéus-BA,45600-970, Brasi;

(2)UESC/CBG, Rodovia Ilhéus- Itabuna, km16, Ilhéus-BA,45662-000, Brasil ;

(3) FTC, Praça José Bastos, 55 -

Osvaldo Cruz, Itabuna - BA, 45600-080, Brasil. E-mail

RESUMO A vassoura-de-bruxa do cacaueiro (VBC) causada pelo fungo Moniliophthora perniciosa é uma das principais

doenças da cacauicultura afetando grandemente tecidos em desenvolvimento tais como os frutos, principal produto

comercial. Entre os métodos disponíveis para seu controle destaca-se o uso de genótipos resistentes a doenças.

Diversos fatores inerentes à planta, bem como ativados após infecção podem influenciar no estabelecimento da

interação sendo considerados mecanismos de resistência constitutiva e/ou induzida a doenças. Diante disso o

objetivo deste trabalho foi avaliar estruturas presentes na superfície de frutos de cacaueiro, bem como a atividade

enzimática de genótipos contrastantes a VBC e estudar a influência destas variáveis no estabelecimento do

processo infeccioso de M. perniciosa. Frutos dos genótipos TSH1188 (R) e Catongo (S) foram pulverizados com

uma solução de basidiósporos do fungo na concentração de 2x105. Amostras foram coletadas nos tempos 3, 5, 6, 8

e 12 horas após inoculação (hai) e processadas para microscopia eletrônica de varredura (FIOCRUZ, BA), bem

como às 0, 3, 6, 12, 24, 48 hai para realização de ensaios enzimáticos. Tricomas estrelares e glandulares, com

predominância destes últimos foram observados em ambos os genótipos, mediante analise de variância (p<0,05) a

densidade de tricomas foi maior no TSH1188. Estômatos amonocíticos foram apresentados por ambos os

genótipos, porém com diferença na localização no filoplano dos frutos, encontrando-se em criptas estomáticas no

Catongo. O processo infeccioso de M. perniciosa foi mais rápido no Catongo onde a adesão e germinação dos

basidiósporos iniciou-se ás 3hai e no TSH1188 ás 8hai. Penetrações fúngicas foram observadas no Catongo às

5hai, e no TSH1188 às 8hai, apresentando maior ocorrência no Catongo em relação ao TSH1188 (p<0,05). A

atividade enzimática das peroxidases (guaiacol e ascorbato) em frutos de cacaueiro revelou diferenças entre os

genótipos avaliados. De maneira geral observou-se que a atividade de ambas as enzimas foram significativamente

(p<0.05) maiores no TSH1188, além de apresentar um aumento importante nos estágios iniciais da infecção. Os

resultados mostraram que estruturas na superfície dos frutos influenciam o estabelecimento de M. perniciosa neste

patossistema e sugere-se que as enzimas avaliadas estão relacionadas com respostas rápidas de defesa na interação

planta-patógeno.

APOIO CONACYT, GOVERNO DO MÉXICO, CAPES, FAPEBS, FIOCRUZ

80


MEMBROS DAS SUBFAMÍLIAS DE AQUAPORINAS EM FAVELEIRA (CNIDOSCULOS

QUERCIFOLIUS POHL)

Gisela Formiga Queiroz Nóbrega1; Valesca Pandolfi

2; João Pacífico Bezerra Neto

2; Marx Oliveira Lima

2; Heidei

Lacerda Alves da Cruz3; Carlos Eduardo Alves Soares


2.



Graduação em Ciências Florestais, Patos, PB.; (2)

Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de

Ciências Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE.; (3)

Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),

Centro de Ciências Biológicas, Plataforma de Sequenciamento de DNA do Laboratório de Bioinformática e

Biologia Evolutiva (LABBE/CB); (4)

Universidade Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA), Departamento de

Ciências Animais (DCAN), Mossoró, RN.

RESUMO A faveleira (Cnidoscolus quercifolius Pohl) é uma euforbiácea arbórea, nativa e endêmica do Brasil, com domínio

fitogeográfico na caatinga. Sua multiplicidade de uso (como fonte de proteína, óleo, fibras, madeira), aliada à

capacidade de crescimento em solos pedregosos e com baixo teor de umidade, fazem da faveleira uma espécie

alternativa na identificação genes de tolerância ao déficit hídrico. Tendo em vista a correlação existente das

aquaporinas - AQPs (proteínas intrínsecas de membrana responsáveis pelo transporte de água e outros solutos)

com os mecanismos de tolerância à seca, esse trabalho teve como objetivo identificar e testar um conjunto de

genes de aquaporinas no genoma da faveleira. As sequências de AQPs de Arabidopsis thaliana foram usadas

como sondas em alinhamentos (tBLASTn, e-value de 1e-10) de homólogos nos genomas de Manihot esculenta e

de Ricinus communis, disponíveis no banco Phytozome. Com o auxílio da ferramenta Primer3 foram obtidos 16

pares de primers, cuja distribuição entre as espécies e subfamílias de aquaporinas foi de: 10 pares de primers de

M. esculena (3 MePIP; 4 MeTIP; 2 MeNIP e 1 MeXIP) e 6 pares de primers de R. communis (1 RcPIP; 3 RcTIP, 1

RcNIP e 1 RcXIP). As PCR foram conduzidas em termociclador de gradiente de temperatura, sendo otimizadas

para cada par de primer testado. Das quatro subfamílias de AQPs analisadas, apenas uma não foi eficientemente

amplificada na faveleira. Os primers que apresentaram resultado de amplificação foram MePIP2.2 à 55ºC,

MeTIP2.1 à 56ºC e MeNIP2.1 e RcTIP1.1 à 58ºC , cujos produtos amplificados apresentaram tamanhos entre 500

a 1.500 pb, ou seja, muito próximos do esperado. Esses resultados mostram que, embora todos os primers tenham

sido inicialmente testados com as temperaturas indicadas pelo software de desenho do primer, estas não foram

eficiente na especificidade nas reações de amplificações, havendo necessidade de otimização via PCR de

gradiente. Por se tratar de uma espécie em que ainda não existe qualquer informação de sequências disponível em

bancos de dados públicos, os resultados obtidos neste estudo são de grande valia, uma vez que o índice de

transferabilidade (75%) foi satisfatório e eficiente para a obtenção das principais subfamílias de AQPs no genoma

da faveleira, revelando o elevado nível de conservação entre essas importantes euforbiáceas.


81


MUDANÇAS FENOTÍPICAS IMPOSTAS EM PLANTAS TRANSGÊNICAS DE NICOTIANA TABACUM

EXPRESSANDO GENE ANTI-SENSO DA PR4 ISOLADO DE THEOBROMA CACAO

Laiane Nascimento Ferreira1; Jacimara Rodrigues

2; Sarah Pereira Menezes

3; Fabienne Micheli

4; Marcio

Gilberto Cardoso Costa5; Carlos Priminho Pirovani

5; Fátima Cerqueira Alvim

6.


(1)Bolsista IC Fapesb Universidade Estadual de Santa Cruz;

(2)Bolsista DTI, Universidade Estadual de Santa Cruz;

(3)Pos doutoranda Universidade Estadual de Santa Cruz;

(4)Pesquisadora CIRAD;

(5)Professor Titular Universidade

Estadual de Santa Cruz; (6)

Professor Adjunto Universidade Estadual de Santa Cruz

RESUMO A cacauicultura é uma das principais atividades agrícolas do sul da Bahia. Contudo, nas últimas décadas, essa

atividade agrícola foi afetada devido ao fungo Moniliophthora perniciosa, causador da doença conhecida

vulgarmente como vassoura de bruxa. Identificar genes potencialmente relacionados com a resistência das plantas

ao M. perniciosa é fundamental para desvendar as bases moleculares da interação cacau: M. perniciosa e para

desenvolver novas estratégias de controle da doença. Dentre os genes selecionados para o estudo encontram-se os

que codificam para proteínas de resposta à patogenicidade (PR). O aumento no nível das PRs geralmente

relaciona-se de maneira direta a tolerância da planta frente à estresses bióticos e/ou abiótico. O trabalho teve como

objetivo analisar as modificações impostas em plantas transgênicas de Nicotiana tabacum frente a expressão, no

sentido anti-senso, de um gene que codifica para PR4 de cacau. Analises conduzidas in vitro com TcPR4

identificaram que esta proteína possui atividade de RNase, DNase mas não de quitinase. Esta é uma estratégia

inovadora onde se pretende aumentar a expressão das demais PRs da planta induzindo o silenciamento de uma

única PR. As plantas de tabaco foram transformadas, via Agrobacterium tumefaciens, os regenerantes tiveram o

DNA genômico extraído e a confirmação da integração do transgene foi feito via reação de PCR. Transformantes

independentes foram transferidos para a casa de vegetação juntamente com plantas não transformadas de fumo

(controle experimental). Foi observado que todas as plantas transgênicas apresentaram uma menor taxa de

crescimento e floração antecipada quando comparadas com as plantas controle. Em outras espécies o nível de PRs

já foi relacionado com mudanças no período de floração e no crescimento vegetal. As sementes das plantas

transgênicas foram germinadas in vitro. As linhagens T2 permitirão análises moleculares e fisiológicas mais

detalhadas visando estabelecer se mudanças no nível da PR aumenta a resistência das plantas ao M .perniciosa.

APOIO FINEP, MAPA, FAPESB, UESC

82


O PAPEL DO TAMANHO DO GENOMA E TIPOS DE NÚCLEO INTERFÁSICO DOS PADRÕES

INTERNOS NA CITOMETRIA DE FLUXO

Lucas Alexandre de Souza Costa1; Sandra Mendes

1; Gustavo Souza

1.



RESUMO A citometria de fluxo é uma ferramenta importante para a determinação do conteúdo de DNA (valor 1C) em

plantas. Essa técnica baseia-se na fluorescência relativa emitida por núcleos corados, sendo os valores dessa,

interpretados a partir de comparações com padrões internos (PI) com valor 1C conhecido. Tradicionalmente, o

valor 1C destes PIs não deve ultrapassar três vezes o tamanho do genoma da amostra a ser quantificada. Tal

conclusão é baseada em observações matemáticas, não havendo dados experimentais que identifiquem a

interferência dos tipos de núcleo interfásico ou organização da cromatina na determinação do valor 1C. Este

trabalho teve como objetivo testar a relação entre determinação do valor 1C e o tamanho do genoma/tipos de

núcleo interfásico de diferentes PIs. Para isso, foi utilizada como modelo Oxalis psoraleoides (Oxalidaceae) e

feitas estimativas utilizando PIs com núcleos arreticulados/semi-reticulados (Raphanus sativus cv. saxa [1C = 0,55

PG], Solanum lycopersicum cv. stupicke [1C = 0,98 pg] e Zea mays cv. CE-777 [1C = 2,72 pg]) e núcleos

reticulados (Pisum sativum cv. Ctirad [1C = 4,55 pg], Vicia faba ssp. faba var. equina [1C = 13,45 pg] e

Nothoscordum pulchellum [1C = 26 pg]). As amostras foram coradas com iodeto de propídeo, corante mais

indicado para estimativas de valor 1C. Os valores para O. psoraleoides variaram desde 1C = 20,29 pg (PI = V.

faba) a 1C = 16,95 pg (PI = R. sativus), mostrando uma relação inversamente proporcional entre a distância

PI/amostra e valor 1C estimado (R2

= -0,5). Estimativas de O. psoraleoides utilizando PIs com núcleos

arreticulados/semi-reticulados revelaram tamanhos genômicos parecidos entre si(1C ?17 pg), assim como

medições com PIs de núcleos reticulados (1C ?19pg), sugerindo que não é a distância PI/amostra que determina

desvios nos valores 1C, mas sim o tipo de núcleo interfásico do PI. Logo, a sugestão de utilizar controles com no

máximo três vezes o tamanho do genoma da amostra é arbitrária e precisa ser melhor investigada

experimentalmente. Isso sugere que as estimativas de tamanho do genoma por citometria de fluxo devem ser

complementadas por uma caracterização cariotípica, a fim de determinar a forma de organização da cromatina no

núcleo interfásico. Essa organização pode alterar a granulosidade das partículas, enviesando os valores calculados.

Assim, a escolha de PIs com organização da cromatina interfásica similar à espécie de interesse pode garantir

estimativas de valor 1C mais acuradas.


83


PERFIL PROTEÔMICO DE LEMNA AEQUINOCTIALIS (L.) CULTIVADA EM MEIO SH E

EFLUENTE DE ESTAÇÃO DE TRATAMENTO DE ESGOTO

Adauto Gomes Barbosa Neto1; Marciana Bizerra de Morais


1.


(1)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, CB, Universidade Federal de

Pernambuco, Recife-PE

RESUMO As plantas aquáticas da família Lemnaceae, consideradas as menores angiospermas conhecidas, são naturalmente

capazes de se adaptar e colonizar água residual antropogênica, reciclando poluentes emergentes e gerando

biomassa em taxas superiores às de plantas terrestres. Lemna aequinoctialis é uma das 37 espécies que compõe

esta família, que tem se destacado na biologia e biotecnologia vegetal. Visando contribuir para elucidação de

mecanismos fisiológicos e metabólicos associados ao potencial biotecnológico destas plantas, este trabalho

objetivou a análise perfil proteômico por eletroforese bidimensional (2D-PAGE) de lentilha-d'água associada à

produção de biomassa e bioenergia. O clone M1 de Lemna aequinoctialis foi cultivado em câmara de crescimento

com temperatura, umidade e luminosidade controladas, por 28 dias em meio de cultura SH 0,5X (SH); em mistura

(1:1) de meio 1X e efluente (SH:SW); e em efluente não suplementado (SW). O crescimento e o teor de amido

foram monitorados. Proteínas foram extraídas de amostras coletadas no 6º dia de cultivo. Em seguida os extratos

foram quantificados pelo método de Bradford e a integridade foi avaliada em gel SDS-PAGE. Para os géis 2D-

PAGE foram utilizados 250 µg de proteínas, focalizadas em tiras de pH imobilizado de 3-10, 13 cm (GE

Healthcare). Após coloração com azul de Coomassie G-250, os géis 2D-PAGE foram digitalizados e, em seguida,

analisados no programa ImageMaster 2D Platinum para obtenção de dados quantitativos. No total, foram

detectados 2.088 spots: 649 de SH (216 spots/gel); 656 de SH:SW (219 spots/gel); e 783 de SW (261 spots/gel).

Os perfis proteômicos tiveram coeficiente de correlação maior que 0,90. A distribuição dos spots por pI mostrou

que 74,2% estão na faixa de 4 a 7; quanto ao peso molecular, 79,1% dos spots possui massa até 30 kDa. Foram

detectados apenas 181 spots comuns em pelo menos 2 das 3 condições avaliadas, que permitiram a detecção de

nove potenciais marcadores proteômicos (p < 0.05, t-test), utilizando SH como referência: 5 para SH:SW; e 4 para

SW. A identificação destes marcadores poderá contribuir com o desenvolvimento de estratégias de melhoramento

genético de Lemnaceae para aplicações biotecnológicas.

APOIO CAPES, CNPq, INCT Bioetanol, FACEPE, Lógica Ambiental.

84


PROSPECÇÃO DE DEFENSINAS EM ESPÉCIES MEDICINAIS

Stephani Soares Rodrigues dos Santos1; Valesca Pandolfi

1; Rebeca Rivas

2; Marx Oliveira de Lima

1; Luis Carlos

Belarmino1; José Ribamar Costa Ferreira Neto

1; Manassés Daniel da Silva


1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências Biológicas, Departamento de Genética,

Recife, PE.; (2)

Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Botânica, Laboratório de Fisiologia

Vegetal, Recife, PE

RESUMO As defensinas fazem parte de uma classe de peptídeos antimicrobianos com reconhecido papel na defesa vegetal

contra vários patógenos. Devido a sua capacidade antimicrobiana, esses peptídeos tornam-se excelentes candidatos

no desenvolvimento de novos compostos potencialmente úteis na indústria farmacêutica e no melhoramento

vegetal. O objetivo deste estudo foi identificar genes homólogos a defensinas vegetais em espécies representantes

de diferentes famílias tradicionalmente usadas por sua capacidade antimicrobiana e anti-infecciosa. Foram

selecionadas seis espécies vegetais com base na literatura com ação antimicrobiana e/ou anti-infectiva claramente

demonstrada, incluindo Amburana cearenses, Bauhinia chicanta, Bidens pilosa, Calotropis procera, Croton sp

e Euphorbia hyssopifolia. Para as reações de PCR foram desenhados 12 pares de primers para defensinas baseados

em sequencias de diferentes famílias em bancos de dados públicos. No total foram obtidos 58 produtos, sendo: 15

em A. cearenses (150 a 800 pb), 14 em B. chicanta (150 -800 pb); 10 em E. hyssopifolia (150-900pb), 9 em B.

pilosa (200-900pb); 5 em C. procera (100-450 pb) e 5 em Croton sp (100-700pb). A busca por similaridade

(Blastx, e-value ≤ e-10), demonstrou que apenas a sequência de E. hyssopifolia (529 pb) apresentava homologia

com uma defensina de Vigna unguiculata. A busca por sequências homológas no banco de

dados Phytozome evidenciou um alinhamento (Score variando entre 122 a 164; e e-value entre 3e-13 a 9e-08) com

um gene de defensina de Phaseolus vulgaris (2 éxons e 1 íntron, característicos de defensinas). A predição da

região codificante, através do programa FGENESH, indicou que a sequência equivalia apenas ao segundo éxon do

gene precursor de defensina da espécie V. unguiculata. A análise das características proteicas e mudanças pós-

traducionais apontou a presença do domínio gamma thionin completo, bem como a formação de quatro pontes de

dissulfeto entre oito cisteínas comumente presentes em defensinas. Contudo, não houve a presença de um peptídeo

sinal, visto que este é codificado em parte pelo primeiro éxon. Os resultados indicam que a sequência obtida se

trata da região do peptídeo maduro de uma defensina de E. hyssopifolia com grande similaridade àquela de

defensinas de leguminosas de importância agrícola. Estes dados fornecem subsídio para o isolamento do gene

completo visando estudos funcionais e de aplicação biotecnológica.

APOIO CAPES, CNPq, FACEPE.

85


PROTEÍNAS EXPRESSAS DURANTE A REDIFERENCIAÇÃO IN VITRO DE GENÓTIPOS DE

ALGODOEIRO RECALCITRANTES E NÃO RECALCITRANTES

Taiza da Cunha Soares1; Antônio Silvio do Egito Vasconceos

2; Liziane Maria de Lima

3; Carliane Rebeca Coelho

da Silva1; Julita Maria Frota Chagas Carvalho

3; José Jaime Vasconcelos Cavalcanti

3; Roseane Cavalcanti dos

Santos3.


(1)RENORBIO/ UFRPE;

(2)Embrapa Caprinos e Ovinos;

(3)Embrapa Algodão

RESUMO A embriogênese somática (ES) é uma pratica amplamente utilizada para regeneração de plantas nos métodos de

transformação genética. Apesar de já estabelecido, os procedimentos envolvem mecanismos de desdiferenciação

celular e, por conseguinte, aquisição de competência embriogênica, os quais limitam a eficiência desta via em

algumas culturas, especialmente as recalcitrantes, como o algodoeiro. A rota biossintética da ES envolve a

expressão diferencial de vários genes que codificam proteínas com habilidade embriogênica, embora algumas

estejam ausentes ou inativas em espécies recalcitrantes. Visando aumentar a base de conhecimento sobre essas

proteínas realizou-se o presente estudo que teve por objetivo proceder uma análise previa sobre o perfil das

proteínas totais, expressas durante a fase de rediferenciação celular, usando como referencia genótipos

recalcitrantes (GR) e não recalcitrantes (GNR) de algodão. Seis genótipos foram utilizados no estudo, sendo 3

GNR (Coker 312, BRS Rubi e BRS Seridó) e 3 GR (BRS Topázio, CNPA Precoce 1 e BRS 201). Proteínas totais

foram extraídas dos genótipos utilizando-se calos liofilizados (0,04 g), dissolvidos em tampão Tris-HCl (1200 μL),

pH 6,8, na presença de SDS (0,1% ) e β-mercaptoetanol (5%) e homogeneizado em almofariz por 20 min. Após

homogeneização, as amostras foram transferidas para tubos (1,5 mL), acrescentado 300 μL de glicerol (10%), e

azul de bromofenol (0,01%), agitadas por 1 h a 25 ºC e centrifugadas (10000xg/10 min/25 ºC). Os sobrenadantes

recuperados foram aquecidos a 100 °C por 3min e volumes de 10µl de amostras foram depositados em mini gel

para análise eletroforética. A SDS-PAGE foi realizada mediante géis de poliacrilamida com concentração de 4,9%

em 125mM de tampão Tris-HCl, pH 6,8 e com géis de separação com 15,4% de poliacrilamida em 380mM de

tampão Tris-HCl, pH 8,8, contendo 0,1% de SDS. Após a corrida as proteínas foram reveladas com nitrato e os

géis escaneados para análise. Perfis eletroforéticos distintos foram observados entre as cultivares selecionadas

como GR e GNR, destacando-se a presença de uma proteína a 6,5 kDa apenas no grupo GNR mostrando esta

proteína potencial para ser utilizada como marcadora do GNR. Os resultados se mostram bastante promissores

pois abrem perspectiva para identificação de proteínas e ou peptídios relacionados com a recalcitrância dos

genótipos, podendo posteriormente serem utilizados como sondas para facilitar os trabalhos de transformação

genética de algodão.

APOIO Embrapa Algodão, Capes

86


PROTEÔMICA DE CANA-DE-AÇÚCAR SUBMETIDA A ESTRESSE FOTOOXIDATIVO E SECA VIA

2D-PAGE/MS

Fabiana Aparecida Cavalcante Silva1; Amanda Emanuella Rocha de Souza

1; Elton Pedro Nunes Pena

2; Tercilio

Calsa Junior1.


(1)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Departamento de Genética, UFPE;

(2)Laboratório de

Genômica e Proteômica de Plantas (UFPE); Mestrando do Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e

Molecular Aplicada (UPE)

RESUMO A cana de açúcar (Saccharum spp.) é uma cultura de importância econômica mundial. Seca e alta incidência de

radiação UVA/UVB (280-320 nm) são fatores limitantes da produção vegetal, ocasionando grandes perdas de

produtividade de culturas economicamente importantes. Quando associados estes fatores causam inibição da

fotossíntese, danos ao material genético e alterações morfológicas e fenológicas, interferindo no acúmulo de

biomassa e, consequentemente, na produção de etanol. Este estudo tem como objetivo identificar proteínas

diferencialmente expressas em folhas de cana-de-açúcar (acesso RB92579), sob déficit hídrico, com níveis

elevados (Tratamento A) ou baixos (Tratamento B) de radiação UVA/UVB. Proteínas totais de cada tratamento

foram extraídas em triplicata através do método ADP (Pirovani et al., 2008), baseado em ácido tricloacético, em

associação com o método de limpeza SDS-fenol (Wang et al., 2003) e, em seguida, as amostras foram

quantificadas utilizando o Kit Quant-2D (GE Life Sciences). As amostras foram submetidas a eletroforese

bidimensional em gel SDS-PAGE 12,5%. A digitalização dos géis foi realizada em scanner de transparência

Image Scanner III, e as imagens foram analisadas nos programas LabScan e Image Master 2D Platinum v.7.05

(GE Life Sciences) possibilitando a identificação de proteínas diferencialmente expressas (DEPs). As DEPs foram

excisadas dos géis, submetidos a uma digestão tríptica e enviados para espectrometria de massas para identificação

presumível em analisador AutoFlex III ToF/ToF (Bruker Daltonics, Bremen, Alemanha), baseado na ionização por

dessorção a laser assistida por matriz (MALDI/ToF). Foram identificados uma média de 300 peptídeos por gel dos

quais 48 diferencialmente expressos sendo 20 exclusivos no tratamento alta UVB e 28 encontrados no tratamento

baixa UVB. Foram identificados peptídeos envolvidos no metabolismo de carboidratos/proteínas, proteínas

relacionadas com o crescimento e defesa/proteção. A identificação de marcadores proteômicos na cana-de-açúcar

fornece informações ao nível molecular e é uma ferramenta poderosa no melhoramento genético da cultura

canavieira.

APOIO CNPq

87


RELATIVE EXPRESSION OF CRY10 IN GM COTTON LINES RESISTANT TO BOLL WEEVIL

Roseane Cavalcanti dos Santos1; Carliane Rebeca Coelho da Silva

2; Taiza da Cunha Soares

2; Jose Jaime

Vasconcelos Cavalcanti1; Liziane Maria de Lima

1; Érica Soares Martins

3; Rose Monnerat

3.



(2)Renorbio, UFRPE;

(3)Embrapa Cenargen

RESUMO Boll weevil (Anthonomus grandis) is a serious pest of cotton crop in several parts of world. The control is done by

synthetic pesticides that increase the management costs. Embrapa coordinates an important research involving

development of GM cotton resistant to boll weevil, by genetic transformation. Seven line (T0-8H) containing a Bt-

cry 10 have been identified by feeding bioassays and ELISA, which showed reasonable toxicity against adult boll

weevils. In this work, these lines were used in order to estimate the presence and relative expression of cry 10 by

PCR and RT-qPCR, respectively, from young buds of 50d-plants. RT-qPCR assays were performed, by using

Syber Green Rox Plus Master Mix 2X (LGC). Three endogenous cotton gene (GhACT, GhUBQ14 and GhPP2A)

were used as a standard control. At first, 95°C/15 min and 40 cycles of 95°C/ 20 sec, 60°C/ 20 sec and 72°C/ 20

sec. Then, a curve of denaturation (melting curve) was performed after conclusion of amplification, at 95°C/15

sec, 60°C/15 sec, rising 2°/min until reaching 95°C. All reactions were carried out with experimental and

biological replications. The threshold cycle (Ct) and PCR efficiency was estimated by Real-time PCR Miner

program. The analyses were performed by using qBASEPlus program. Graphics, Cqs and Melt curve were

automatically generated, based on the normalization method with a reference gene, ΔΔCq. Varied levels of

expression were found in GM lines, too low in 8H-269 and 8H-357, mid in 8H-282 and 8H-346 and high in 8H-

336 (14x). These data agreed with previous results obtained by ELISA assays. Eleven lines derivate from 8H-336

(T1) were analyzed by PCR assays with genomic DNA, using 2 primer combinations. More than 50% showed

amplicons confirming the presence of gene in selected lines. Taking in account that a reasonable level of resistance

should overcoming 2 ug of protein/g tissue, we suggested that 8H-366 is the best genotype for control the cotton

boll weevil. This material will be further advanced for entomological assays with larvae and adults of boll weevil.

APOIO Embrapa, CNPq, CAPES.

88


SELEÇÃO DE PRIMERS DE ISSR PARA A CARACTERIZAÇÃO DA DIVERSIDADE GENÉTICA DE

ACESSOS DE FEIJÃO-CAUPI [VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.]

Karla Pereira da Silva1; Katiane da Rosa Gomes da Silva

2; Amaro de Castro Lira Neto

2; Antonio Félix da Costa

2.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco - URPPE, Recife, PE;

(2)Instituto Agronômico de Pernambuco -

IPA, Recife, PE

RESUMO O feijão-caupi possui grande importância socioeconômica, pois ajuda a suprir as necessidades nutricionais das

populações mais pobres. No Brasil, este feijão é cultivado principalmente nas regiões Norte e Nordeste, devido às

suas adaptações ao clima tropical. No entanto o seu cultivo ainda é caracterizado pelo emprego de baixa tecnologia

e a utilização de sementes de qualidade inferior, refletindo, desta forma, numa menor produtividade. Este fato

pode estar relacionado com o pequeno número de cultivares melhoradas, quando comparado com outras culturas

anuais no país. Assim, é clara a necessidade do fortalecimento de programas de melhoramento genético que

possibilitem ao agricultor familiar o acesso a cultivares produtivas, adaptáveis e estáveis para o cultivo. Os

marcadores moleculares contribuem para acelerar os estudos de diversidade genética e na obtenção de novas

cultivares, funcionando como ferramenta indispensável ao melhoramento genético vegetal. A extração de DNA

genômico foi conduzida mediante a aplicação do protocolo de CTAB 2%. A seleção dos melhores iniciadores foi

realizada com sete primers de ISSR (Inter Simple Sequence Repeats). Para os testes, foram utilizados dez

indivíduos representantes de dez acessos distintos: Arcoverde 1, Arcoverde 2, Arcoverde 4, Arcoverde 5,

Arcoverde 6, Arcoverde 7, Arcoverde 8, Canapu Verdadeiro, Canapu PE, Canapuzinho. A eficácia dos iniciadores

ISSR na estimativa da variabilidade genética foi avaliada pelos índices de informatividade (Conteúdo de

Informação Polimórfica-PIC; Índice do Marcador-MI; Poder de Resolução-RP) e diversidade genética (DG).

Também foram levados em consideração o número e a distribuição dos loci. O sistema representado por sete

primers gerou um total de 663 fragmentos com uma média de 63,3 por acesso. O número total de loci foi 79, com

média de 11,286 por primer, dos quais 60,76% foram polimórficos. Pode-se observar moderados a elevados

valores de diversidade genética com variação que vai de 30,77% (UBC881) até 82,35% (UBC890). Os menores

valores foram encontrados para o primer UBC881 (DG, PIC, e MI). Este resultado está relacionado com a baixa

diversidade genética encontrada neste marcador (UBC881). No entanto, o UBC836 foi o que apresentou o menor

RP, devido à quantidade reduzida de fragmentos gerados. Para todos os índices de informatividade o iniciador com

os maiores valores foi o UBC890. Pode-se relacionar este resultado ao número de bandas totais e ao número de

bandas polimórficas.

APOIO Facepe-CNPq

89


SELEÇÃO DE CANDIDATOS A GENES REFERÊNCIA PARA ESTUDOS DE EXPRESSÃO GÊNICA

EM STYLOSANTHES SCABRA

Flávia Tadeu de Araújo1; Valesca Pandolfi


1; Rômulo Fonseca dos Santos

1;

Carolina Vianna Morgante2; Natoniel Franklin de Melo


1.


(1)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal - Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE;

(2)Embrapa

Semiárido, BR-428, Km 152, Petrolina, PE

RESUMO Stylosanthes scabra é uma importante leguminosa amplamente empregada como forrageira. Por apresentar

características de tolerância à seca e adaptação a solos com baixa fertilidade, destaca-se como uma espécie de

grande interesse em análises de expressão de genes responsivos ao déficit hídrico. Nesse contexto, a PCR

quantitativa em tempo real (RT-qPCR) tem mostrado ser uma eficiente técnica para validação da expressão de

genes diferencialmente expressos sob determinadas condições fisiológicas, tecido-específicos ou relacionados ao

tempo cronológico após o estresse. Esse trabalho teve como objetivo selecionar e testar um conjunto de genes com

potencial uso como candidatos a genes de referencia (responsáveis pela normalização das populações de

transcritos nas distintas situações estudadas) a serem utilizados para a validação da expressão via RT-qPCR de

experimentos de RNA-Seq de S. scabra mediante déficit hídrico. Seis pares de primers (que ancoram em

transcritos codificadores de proteínas envolvidas em processos celulares basais) foram desenhados para amendoim

(Arachis hypogaea), enquanto para soja (Glycine max) foram desenhados 11 pares. Esse conjunto de primers foi

testado via PCR convencional usando como template cDNAs sintetizados a partir de RNA total de folhas e raízes

de S. scabra. Dos 17 primers testados, 29,4% (ADH3, 60s, ELF1B, G6PD, RHA1) apresentaram funcionalidade e

especificidade em ambos os tecidos analisados. Quando comparados os tipos de tecidos, foi verificado que 53%

dos primers foram funcionais no tecido radicular, ao passo que 35,3% dos primers amplificaram somente no

tecido foliar. O maior índice de transferabilidade foi obtido a partir de pares de primers desenhados para

sequências de amendoim (83,3%), contra os 45,4% dos pares de primers desenhados para soja. Tal fato pode estar

associado à maior sintonia entre S. scabra com o amendoim, uma vez que essas espécies apresentam-se

filogeneticamente mais próximas comparativamente à soja. Devido à importância de S. scabra como fonte de

genes importantes na tolerância a seca e, por ainda não existirem informações sobre a espécie em bancos de dados

públicos, os resultados obtidos neste estudo representam um valioso conjunto de genes para uso em RT-qPCR

como candidatos a genes de referência para análises de expressão de S. scabra em resposta ao déficit hídrico.

APOIO CAPES, CNPq.

90


SELEÇÃO DE GENES CANDIDATOS ASSOCIADOS À RESISTÊNCIA AO VÍRUS DO MOSAICO

SEVERO EM FEIJÃO-CAUPI

Ayug Bezerra Lemos1; Roberta Lane de Oliveira Silva

1; Mitalle Karen da Silva Matos


1;

Marianne Firmino de Oliveira1; Mireli de Santana Rêgo


1.



RESUMO O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], está entre as culturas mais importantes do Norte e Nordeste, tanto

no aspecto econômico quanto nutricional. O ataque de agentes patogênicos, especialmente o vírus do mosaico

severo (CPSMV, Cowpea Severe Mosaic Virus) tem gerado perdas significativas na cultura devido às dificuldades

de controle e forma de disseminação da doença, acarretando perdas no seu rendimento e qualidade dos grãos. O

objetivo do presente trabalho foi selecionar primers para a amplificação de análogos a genes de resistência e

fatores de transcrição da família MYB em acessos (IT85F-2687 e BR14-Mulato) de feijão-caupi contrastantes

quanto à resistência ao CPSMV. Diante disso, foi realizada a extração do RNA total do tecido foliar utilizando o

Kit "SV Total RNA Isolation System" (Promega), de acordo com instruções do fabricante. A verificação da

integridade do RNA extraído foi feita por eletroforese em gel de agarose 1,5%, em corrida a 60 V por 90 minutos.

Em seguida, as amostras foram quantificadas em fluorímetro Qubit e os RNAs purificados foram convertidos em

cDNAs usando o Kit QuantiTect Reverse Transcription (Qiagen®) seguindo as recomendações do fabricante. Os

primers utilizados na análise foram desenvolvidos por meio do programa Primer3Plus, seguindo os seguintes

parâmetros: conteúdo de GC 50%, tamanho do fragmento entre 70 e 200 pb, temperatura de Melting entre 40 e 60°

e junção exon-exon. As reações foram realizadas seguindo condições descritas na literatura, com temperatura de

anelamento de 58° C. Os produtos da PCR foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 1,5 %, corado com

Blue-Green Loading Dye (LGC Biotecnologia). Dos 36 pares de primers testados, 15 (41,66 %) apresentaram

resultados positivos exibindo bandas nítidas no gel. Desse total, 13 (36,11 %) amplificaram de acordo com o

esperado (entre 100 e 200 pb) e dois (5,55 %) apresentaram bandas inespecíficas acima de 250 pb. Os resultados

obtidos contribuem para futuros testes de validação em PCR em tempo real (RT-qPCR), bem como para

confirmação dos dados in silico observados nas bibliotecas de RNA-Seq geradas pelo grupo e poderão

disponibilizar novas informações para os programas de melhoramento genético da espécie.


91

Genética, Evolução e Melhoramento de Plantas - Melhoramento Genético

TOXICIDADE DA PROTEÍNA CRY1IA EM EVENTOS DE ALGODÃO GM CONTRA A SPODOPTERA

FRUGIPERDA

Rosa Maria Mendes Freire1; Marilia de Macedo Freire Duarte

2; Luana Camilla Cordeiro Braz

3; Misael Mendes

Soares4; Liziane Maria de Lima

1; Maria Auxiliadora Lemos Barros

1; Terezinha Fernandes Duarte

1; Eduardo

Domingos Vasconcelos1; Roseane Cavalcanti dos Santos

1.



(2)UEPB;

(3)UFCG;

(4)UFPB

RESUMO Insetos lepdópteros são danosos a várias lavouras devido ao ciclo curto de reprodução e alimentação de qualquer

tecido da planta. A lagarta militar (Spodoptera frugiperda) é uma das mais sérias porque ataca várias lavouras e se

alimenta de ciclo de apenas 30 dias. O controle é feito com inseticidas sintéticos. O algodão, uma grande

commodity de ciclo longo (150-160 dias) tem predisposição a reincidentes ataques da lagarta. Vários

cotonicultores têm adotado cultivares de algodão GM, com resistência a lepidópteros, com vistas a minimizar os

custos de produção. A equipe de Biotecnologia da Embrapa Algodão desenvolveu um evento de algodão GM

contendo um gene Bt (cry1Ia), com resistência a lagarta militar, por meio de transformação direta. Em ensaios

prévios com a população T1 selecionada, cinco eventos foram avançados em ensaios moleculares e ELISA, por

apresentarem alta taxa de mortalidade de larvas e concentração da proteína acima de 2 µg/g de tecido. Trinta

sementes T2 de cada população foram cultivadas em casa de vegetação para estimar a estabilidade dos materiais

para posterior avanço nos trabalhos de melhoramento. As plantas foram cultivadas em fileiras, previamente

fertilizadas e regadas diariamente. A partir da floração (50-55 dae), tiveram início os bioensaios de alimentação,

usando larvas de 2º e 3º instars em placas de 24 poços. Adicionalmente, foram conduzidos ensaios de alimentação

em placas de petri contendo dieta artificial e folhas liofilizadas (2 mg de tecido/mL de dieta). Todos os ensaios

foram conduzidos em BOD, em 5 repetições. Em todas as populações analisadas, a média de mortalidade das

larvas situou-se entre 55-65%, com redução de toxicidade de 33 a 44% da população T1 (média de mortalidade de

91%). Em campo, utilizando-se culturas comerciais da Bollgard I, produtores de MT e GO têm registrado redução

da toxicidade da Cry1Ia na faixa de 30%, o que tem levado a adotar, adicionalmente, o controle químico para

minimizar os danos na lavoura. Esse achado coincide com o encontrado na literatura, sendo justificado pela

variabilidade natural imputada à lagarta militar, advinda de adaptação natural e/ou induzida, considerando-se a

maquinaria endógena dos insetos para tolerar pesticidas naturais ou sintéticos, durante seu ciclo de evolução.

APOIO Embrapa, Capes, Cnpq

92


ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE DE HÍBRIDOS DE MELÃO CANTALOUPE NO AGROPOLO

MOSSORÓ-AÇU

Francisco Linco de Souza Tomaz1; Elaíne Welk Lopes Pereira Nunes

1; José Maria da Costa

1; Anânkia de

Oliveira Ricarte1; Ana Carolina de Assis Dantas

2; Isabel Macedo Guimarães

1; Juliana Maria Costa da Silva

1;

Fernando Antônio Souza de Aragão3; João Cândido de Souza

4; Glauber Henrique de Sousa Nunes

1.


(1)Universidade Federal Rural do Semi Árido;

(2)Campus São Raimundo das Mangabeiras;

(3)Embrapa

Agroindústria Tropical; (4)

Universidade Federal de Lavras

RESUMO O presente trabalho teve como objetivo realizar a avaliação genotípica de três grupos de híbridos de melão do Tipo

Cantaloupe no Estado do Rio Grande do Norte no período de 2010 a 2015. O delineamento experimental utilizado

em todos os experimentos foi o de blocos completos casualizados com três repetições. Os caracteres avaliados

foram produtividade e teor de sólidos solúveis. Os parâmetros genéticos foram estimados pela metodologia

REML/BLUP, e a seleção dos genótipos baseou-se no método da média harmônica da performance relativa dos

valores genéticos (MHPRVG), a partir do contexto de modelos mistos. Verificou-se interação genótipos x

ambientes para as duas variáveis em todos os grupos de híbridos avaliados, indicando comportamento diferencial

dos híbridos em função das condições ambientais. Observou-se baixa correlação genotípica nos diferentes

ambientes (< 0,13) para as duas características, indicando predomínio da parte complexa da interação (63%) e, por

consequência maior dificuldade no processo seletivo. De acordo com o agrupamento de estabilidade,

adaptabilidade e produtividade, os híbridos HC-02, HC-10 e HC-12 foram responsivos com estimativas de

MHPRVG superior 1,20 vezes ao ambiente no qual forem plantados. Os referidos híbridos destacaram-se como

promissores para o cultivo no Agropolo Mossoró-Açu na época seca (julho a dezembro) em razão da elevada

produtividade (> 27 mg ha-1

) e alto teor de sólidos solúveis (>10%).

APOIO UFERSA e CNPq.

93


ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE PARA FERRO, ZINCO E PRODUÇÃO DE GRÃOS EM

LINHAGENS DE FEIJÃO-CAUPI DE PORTE ERETO

Danillo Olegario Matos da Silva1; Carlos Antonio Fernandes Santos

2; Sirando Lima Seido

3; Rejanildo Robson

Cândido de Sousa1; Washington Carvalho Pacheco Coelho

1; Deisy Aiane Lima de Aquino

3; Jamille Cardeal da

Silva4.


(1)Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais - Universidade Estadual de Feira de Santana, BA;

(2)Embrapa

Semiárido; (3)

Pós-graduação Universidade Federal Rural de Pernambuco; (4)

Universidade de Pernambuco -

Campus Petrolina

RESUMO O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa cultivada em várias partes do mundo. Nas

regiões semiáridas tem sido um dos alimentos mais consumidos, fornecendo nutrientes importantes como proteína

e minerais. A biofortificação de feijão-caupi com elevados teores de Fe e Zn é de relevante importância em

programas de melhoramento que visam à obtenção de grãos com maior conteúdo nutricional. O presente trabalho

teve como objetivo estimar parâmetros de adaptabilidade e estabilidade da produção de grãos e minerais em

linhagens de feijão-caupi para possibilitar a recomendação e registro de novas cultivares para região do semiárido

brasileiro. Vinte e um genótipos foram avaliados em sete ambientes irrigados ou dependentes de chuvas, em

delineamentos de blocos casualizados, com três repetições. Sementes de 147 amostras foram trituradas e

analisadas em duplicatas, de acordo com procedimento padrão da AOAC, utilizando espectrofotômetro de

absorção atômica de chama. Os resultados foram expressos em mg.kg-1

para Fe e Zn de matéria seca dos grãos. A

produção de grãos foi corrigida pelo método da covariância com o stand médio de plantas das parcelas do

experimento. Aplicou-se o teste de médias de Scott e Knott a 5% de significância. As avaliações de adaptabilidade

e estabilidade dos genótipos foram realizadas utilizando os métodos de Eberhart e Russell e de Lin e Binns,

disponíveis no programa Genes. Foram observadas diferenças estatísticas significativas dos quadrados médios de

genótipos, dos ambientes e das interações genótipos x ambientes para os três caracteres. As linhagens que

apresentaram os maiores teores de Fe e Zn apresentaram produção de grãos abaixo da média geral. Os métodos de

Eberhart e Russell e Lin e Binns apresentaram resultados semelhantes quanto à seleção de genótipos superiores. A

linhagem C2J apresentou produção de grãos igual à média geral de 1.030 kg ha-1

do experimento, com valores

médios de Fe e Zn superiores aos valores das cultivares avaliadas, bem como estabilidade ampla e boa

previsibilidade na série de ambientes avaliados, tendo grande potencial para ser recomendada como nova cultivar

para a região do Vale do São Francisco.

APOIO CNPq

94


ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE PARA POTÁSSIO, CÁLCIO E PRODUÇÃO DE GRÃOS EM

LINHAGENS DE FEIJÃO-CAUPI DE PORTE ERETO

Danillo Olegario Matos da Silva1; Carlos Antonio Fernandes Santos

2; Sirando Lima Seido

3; Rejanildo Robson

Cândido de Sousa1; Washington Carvalho Pacheco Coelho

1; Deisy Aiane Lima de Aquino

3; Jamille Cardeal da

Silva4.


(1) Pós-graduação em Recursos Genéticos Vegetais - Universidade Estadual de Feira de Santana, BA;

(2)Embrapa

Semiárido; (3)

Pós-graduação Universidade Federal Rural de Pernambuco; (4)

Universidade de Pernambuco -

Campus Petrolina

RESUMO O feijão-caupi (Vigna unguiculata (L.) Walp.) é uma leguminosa cultivada em várias partes do mundo, e em

regiões semiáridas é um dos alimentos mais consumido, fornecendo nutrientes importantes como proteína e

minerais. A seleção e recomendação de cultivares de feijão-caupi é de relevante importância em programas de

melhoramento que visam grãos com maior conteúdo nutricional. O presente trabalho teve como objetivo estimar

parâmetros de adaptabilidade e estabilidade da produção de grãos e minerais em linhagens de feijão-caupi, para

possibilitar a recomendação e registro de novas cultivares para região do semiárido brasileiro. Vinte e um

genótipos foram avaliados em sete ambientes irrigados ou dependentes de chuvas, em delineamentos de blocos

casualizados, com três repetições. Sementes de 441 amostras foram trituradas e analisadas em duplicatas, de

acordo com procedimento padrão da AOAC, utilizando espectrofotômetro de absorção atômica de chama. Os

resultados foram expressos em g kg-1

para K e Ca de matéria seca dos grãos. A produção de grãos foi corrigida

pelo método da covariância com o stand médio de plantas das parcelas do experimento. Aplicou-se o teste de

médias de Scott e Knott a 5% de probabilidade. As avaliações de adaptabilidade e estabilidade dos genótipos

foram realizadas utilizando os métodos de Eberhart e Russell e de Lin e Binns, disponíveis no programa Genes.

Foram observadas diferenças estatísticas significativas dos quadrados médios de tratamentos, dos ambientes e das

interações genótipos x ambientes para as três variáveis. Os métodos de Eberhart e Russell e Lin e Binns

apresentaram resultados semelhantes quanto à seleção de materiais superiores. A linhagem C3O apresentou

produção superior à média geral de 1.030 kg ha-1

do experimento, com valores médios de K e Ca superiores aos

valores das cultivares avaliadas, bem como estabilidade ampla e boa previsibilidade na série de ambientes

avaliados, tendo grande potencial para ser recomenda como nova cultivar para a região do Vale do São Francisco.

APOIO CNPq

95


ADAPTABILIDADE E ESTABILIDADE PARA PRODUÇÃO DE VAGEM VERDE DE FEIJÃO-CAUPI

(VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.)

Deisy Aiane Lima de Aquino1; Carlos Antonio Fernandes Santos

2; Danilo Olegario Matos da Silva

3; Sirando

Lima Seido1; Rejanildo Robson Candido Sousa

3; Washington Carvalho Pacheco Coelho

3.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE/PPGMP, Recife-PE. Brasil;

(2)Embrapa Semiárido,

Petrolina-PE, Brasil; (3)

Estadual de Feira de Santana, UEFS/PPGRGV, Feira de Santana-BA. Brasil

RESUMO A literatura apresenta muitos estudos de genótipos de feijão-caupi com ampla adaptabilidade e estabilidade para

produção de grão seco. Porém, a produção de grão e vagem verde é realizada de forma independente pelos

agricultores, sem estudos que indiquem qual a melhor cultivar para esse mercado, levando em consideração as

preferências regionais. O objetivo do presente trabalho foi estimar parâmetros de adaptabilidade e estabilidade em

acessos de feijão-caupi para produção de grão e vagem verde, de forma a permitir a recomendação de cultivares

para a região do vale do Rio São Francisco. Foram avaliados 30 genótipos de feijão-caupi, sendo quatorze

linhagens da Embrapa, seis cultivares comerciais e dez variedades locais coletadas de agricultores dos municípios

de Juazeiro-BA e Petrolina-PE. Os experimentos foram conduzidos no segundo semestre, nos anos de 2013, 2014

e 2015, nos campos experimentais de Bebedouro, Petrolina-PE, e de Mandacaru, Juazeiro-BA, totalizando seis

ambientes. O delineamento adotado foi de blocos casualizados, com três repetições, em parcela com área total de 6

m2. O espaçamento adotado entre plantas foi de 1,0 m x 0,1 m, correspondendo à densidade populacional de

100.000 plantas/ha. Para a análise de adaptabilidade e estabilidade, utilizou-se o método de efeitos principais

aditivos e interação multiplicativa (AMMI) baseado em componentes principais. Na análise de variância conjunta,

observou-se diferença estatística significativa pelo teste F (P<0,01) para os efeitos de ambientes (A), genótipos (G)

e interação GxA. Utilizando o método multivariado AMMI, a interação GxA foi decomposta em cinco

componentes principais da interação (CPI) para produção de vagem verde. Porém, apenas o primeiro eixo (CPI1)

teve seu resíduo significativo pelo teste F (p<0,01). A interpretação gráfica da adaptabilidade e da estabilidade foi

realizada apenas com o CPI1, via biplot AMMI1. O primeiro componente principal da interação explicou 43,49%

para produção de vagem verde. O ambiente Mandacarú13 foi o que apresentou a maior produção de vagem verde

durante os três anos avaliados. Os genótipos P-209, P-303, P-508 e PC950409D02E apresentaram alta produção e

boa estabilidade, apresentando maior potencial para recomendação de cultivo para produção de grãos verdes de

feijão-caupi.

APOIO Ao CNPq e a FACEPE

96


ADAPTABILIDADE, ESTABILIDADE E TOLERÂNCIA DE ACESSOS DE MELOEIRO À

SALINIDADE

Antonia Eliziana Augusta da Silva1; Alex Rodrigues Ferreira

1; Elaíne Welk Lopes Pereira Nunes

1; Cheyla

Magdala de Sousa Linhares1; José Maria da Costa

1; Anânkia de Oliveira Ricarte

1; Adriano Ferreira Martins

1;

Francisco Lincon1; José Francismar de Medeiros


1.


(1)Elizenir Alves

RESUMO O objetivo do presente trabalho foi verificar a adaptabilidade e estabilidade de acessos de meloeiro à salinidade.

Foram avaliados 13 acessos e três híbridos simples em quatro condições salinas em blocos completos casualizados

com três repetições sendo a parcela constituída por uma linha de oito plantas no espaçamento 2,0 x 0,4 m. Os

ambientes se diferenciaram quanto à condutividade elétrica da água de irrigação, sendo definidos quatro níveis

salinos (S1: 0,91 dS m-1

,S2: 2,14, dS m -1

, S3: 2,90 dS m-1

e S4: 3,92 dS m-1

). As variáveis analisadas foram: peso

médio do fruto, número de frutos, produtividade, espessura da polpa, firmeza da polpa e sólidos solúveis. Utilizou-

se a metodologia multivariada GGE Biplot para identificar os genótipos adaptados e estáveis. Também se utilizou

o índice de eficiência de produção para classificar os acessos quanto à tolerância à salinidade. Para todas as

variáveis, verificou-se que o modelo GGE Biplot com dois eixos, explicou mais de 90% da variação GGE

(genótipo + interação genótipo x ambiente). Observou-se diferenças genotípicas quanto à adaptabilidade e

estabilidade, com destaque para os acessos/cultivares A-29, A-50, A-13, A-14, A-39, (LPS-12 Pele de Sapo), Najd

I e A-7, considerados adaptáveis e estáveis à salinidade com escores reduzidos no gráfico GGE Biplot. Utilizou-se

o índice de eficiência de produção de frutos para classificar os genótipos quanto à tolerância à salinidade.

Conforme esse critério, genótipos com valores inferiores a 0,5 são classificados como sensíveis à salinidade. Nesta

classe estão os acessos A-8, A-16 e os híbridos Iracema, Olimpic e Noy Israel. Os acessos A-06, A-10 e A-27,

com índices entre 0,5 e 1,0, foram classificados como moderadamente tolerantes. Os referidos genótipos das duas

classes possuem características como prolificidade, espessura da polpa e firmeza da polpa e são promissores para

utilização em programas de melhoramento genético ou como porta-enxertos para cultivo em condições de

salinidade elevada.

APOIO Ufersa; Capes

97


ANÁLISE DA VIABILIDADE POLÍNICA DO GERGELIM (SESAMUM INDICUM L.) A PARTIR DA

VARIAÇÃO DO HORÁRIO DE COLETA

Hirisleide Bezerra Alves1; José Genilson Ribeiro Junior

1; Nair Helena Castro Arriel

2; Julita Maria Frota Chagas

Carvalho1.


(1)Laboratório de Cultivo de Tecido, Embrapa Algodão, Campina Grande, PB;

(2)Embrapa Algodão, Campina

Grande, PB

RESUMO O gergelim (Sesamum indicum L.), pertencente à família das Pedaliaceae, corresponde a uma das oleaginosas mais

importantes no cenário brasileiro devido ao seu potencial econômico, visto que suas sementes possuem cerca de

50% de óleo de ótima qualidade, o qual pode ser usado na indústria alimentar, química e farmacêutica. A demanda

pelo gergelim, por parte dos produtores, gera a necessidade de que sejam identificadas cultivares com alto

rendimento e teor de óleo, a fim de expandir o cultivo com ênfase na fertilidade das mesmas. Nesse contexto, a

análise da viabilidade dos grãos de pólen é imprescindível à obtenção de informações acerca da fertilidade das

cultivares, permitindo avaliar a probabilidade de ocorrer a formação de distintas combinações entre os alelos à

medida que aumenta a viabilidade polínica, denotando o grau de variabilidade genética e o consequente potencial

de reprodução de uma população. Objetivou-se por meio deste trabalho analisar a viabilidade polínica do gergelim

com ênfase na variação do horário de coleta a fim de determinar a relação entre viabilidade dos grãos de pólen x

horário de coleta. No presente trabalho foram utilizados dois acessos de gergelim (BRS ANAHI e BRS SEDA) ,

cuja análise da viabilidade polínica foi realizada mediante coloração com corante Cloreto 2,3,5-Trifenil Tetrazólio

(CTT) a 1%, considerando-se viáveis os grãos que adquiriram coloração marrom-avermelhada, com exina intacta e

protoplasma bem corado. Os botões florais foram coletados a cada uma hora no intervalo das 07:30 às 15:30

horas, realizando-se a análise a partir contabilização de 100 grãos de pólen/lâmina/genótipo com três repetições,

perfazendo 300 grãos de pólen de cada genótipo por hora. Os acessos BRS ANAHI e BRS SEDA apresentaram

viabilidades polínicas de 80% e 72%, respectivamente, considerando todo o período de análise. As taxas de

viabilidade foram maiores no intervalo de 10:30 às 12:30 horas, para ambos os genótipos, denotando percentual

correspondente a 79% (BRS ANAHI) e 70% (BRS SEDA), no horário supracitado, observando-se decréscimo

relevante a partir das 14:30 horas, denotando percentual de viabilidade 20% inferior. Os resultados obtidos

elucidam a alta viabilidade dos grãos de pólen dos acessos analisados, verificando-se redução dos índices a partir

da extensão do horário de coleta, enfatizando a influência deste fator abiótico sobre a viabilidade.

98


ANÁLISE DE DIFERENTES PROTOCOLOS DE EXTRAÇÃO DE PROTEÍNAS TOTAIS SOLÚVEIS

DE FOLHAS DE ALGODOEIRO COLORIDO

Geisenilma Maria Gonçalves da Rocha1; Melquisedec de Sousa Oliveira


2; Fabiana

Aparecida Cavalcante Silva1; Liziane Maria de Lima

3; Roseane Cavalcanti dos Santos


1.



Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, PE; (2)

Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas,

Departamento de Genética, Centro de Biociências, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, PE;

Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de Pernambuco, UPE, Recife, PE; (3)

Centro Nacional de Pesquisa

do Algodão, Empresa Brasileira de Pesquisa Agropecuária, Campina Grande, PB

RESUMO Algodão colorido é uma cultura que apresenta fibras curtas de coloração natural e hipoalergênica, de cultivo em

sistema agroecológico no modelo de agricultura familiar. Para esta cultura, há poucas informações sobre os

mecanismos de expressão gênica em condições de estresses bióticos e abióticos. Portanto, análises destes

mecanismos por diferentes ferramentas moleculares podem contribuir para o melhoramento do algodão colorido.

Dentre estas ferramentas, destaca-se a análise proteômica que contribui para caracterizar quali e quantitativamente

o proteoma diferencial. A etapa primordial para esta análise é a extração de proteínas solúveis totais. Objetivou-se

com este trabalho selecionar um método para extração de proteínas solúveis de duas cultivares de algodão

naturalmente colorido (BRS Rubi e BRS Verde), visando a análise proteômica. O material vegetal (folhas) foi

macerado em N2 líquido e submetido a quatro métodos de extração: (I) Fenol - tampão (EDTA 0,05 M; Tris-HCl

0,5 M pH 7,5; sacarose 0,7 M; β-mercaptoetanol 2%; PMSF 0,002 M; KCl 0,1 M), fenol saturado, metanol

contendo acetato de amônio (0,1 M) e lavagens com acetona a 80%; (II) Fenol/SDS - método I seguido de uma

etapa de limpeza em tampão SDS denso (Sacarose 30%; SDS 2%, Tris-HCl 0,1 M pH 8,0; β-mercaptoetanol 5%),

fenol saturado, metanol contendo acetato de amônio (0,1 M) e lavagens com acetona (80%); (III) TCA -

precipitação das proteínas com TCA/acetona (10%), seguido de lavagens com acetona (80%); (IV)

TCA/Fenol/SDS - método III (TCA) seguido do método II (limpeza com tampão SDS denso). Por fim todos os

extratos protéicos foram solubilizados em tampão de ressuspensão (uréia 7 M e tiouréia 2 M). As amostras foram

quantificadas pelo método de Bradford e separados em gel SDS-PAGE 1D (12,5%). Dentre os métodos testados,

destacou-se o IV por promover maior integridade das proteínas para as duas cultivares e um rendimento proteico

de 713,1 µg/g para BRS Rubi e 589,2 µg/g para BRS Verde. O método III também promoveu um bom rendimento

proteico de 702,0 µg/g e 731,4 µg/g, respectivamente, para BRS Rubi e BRS Verde, porém não preservou muito a

integridade das proteínas como foi observado em gel SDS-PAGE. Sendo assim, o método IV é o mais

recomendando para a cultura do algodão naturalmente colorido, uma vez que a obtenção de proteínas íntegras é

fundamental para as etapas posteriores de eletroforese bidimensional e espectrometria de massas.

APOIO Embrapa Algodão, UFPE, RENORBIO.

99


ANÁLISE DIALÉLICA PARA PRECOCIDADE EM GENÓTIPOS DE ALGODOEIRO HERBÁCEO

Damião Raniere Queiroz1; Francisco José Correia Farias

2; José Jaime Cavalcante Vasconcelos

2; Luiz Paulo de

Carvalho2; Lucas da Silva Santos de Souza

3; José Henrique de Assunção

2.


(1)UEPB / Embrapa Algodão;


(3)UFPB Areia / Embrapa Algodão

RESUMO A obtenção de genótipos de algodoeiro de ciclo curto e com rápida maturação tem sido a principal estratégia

utilizada no melhoramento desta malvácea. Visando a convivência com a seca na região semiárida do Nordeste e

a redução dos danos causados pela praga do bicudo do algodoeiro, este trabalho foi realizado com o objetivo de

estimar as capacidades combinatórias CGC e CEC dos genitores e das combinações híbridas e selecionar

genótipos precoces de algodoeiro para a região semiárida do nordeste. Foram realizados cruzamentos entre seis

genótipos de algodoeiro herbáceo no ano de 2014 para a obtenção das sementes híbridas F1's. Os híbridos F1's

foram plantados no ano agrícola de 2015 em Patos - Paraíba, sendo o delineamento utilizado o de blocos ao acaso

com 3 repetições. Foram avaliadas as seguintes características para a precocidade (Aparecimento da primeira flor -

APF e Aparecimento do primeiro capulho - APC), procedeu-se a análise dialélica balanceada, segundo o modelo I

e o método II de Griffing (1956), em que se estimou a CGC e a CEC dos genitores e dos híbridos. Foram

observados pela análise de variância diferenças significativa a 1% e 5% de probabilidade pelo teste F entre os

genótipos. Para as características agronômicas APF e APC, os genótipos apresentaram as seguintes médias

respectivamente: 43,07 dias e 85,44 dias, seguidos dos seguintes Coeficientes de Variação 3,72% e 1,79%. As

estimativas das capacidades combinatórias revelaram que, de modo geral, a CGC foi mais importante que a CEC,

tanto para APF como para APC, revelando uma maior importância dos efeitos aditivos no controle destas

características. No caso da CGC, o genótipo TAMCOT-CAMD-E obteve a menor estimativa (-2,06 e -3,10) para

APF e APC, sendo indicado para compor populações em que se desejam desenvolver genótipos precoces. As

combinações CNPA 04-2080 x TAMCOT-CAMD-E e FM 993 x CNPA 04-2080 mostraram-se com estimativas

altas e negativas da CEC (-0,70 e -1,09) e genitores com estimativas da CGC negativa, sendo importante para a

determinação da precocidade.

APOIO Embrapa Algodão.

100


ANÁLISE FENÉTICA DE SEQUÊNCIAS DE CICLOTÍDEOS ISOLADAS DE MILHO (ZEA MAYS) E

CENTEIO (SECALE CEREALE)

Sheyla Carla Barbosa da Silva Lima1; João Pacífico Bezerra Neto

1; Marx Oliveira de Lima

1; Ana Maria Benko

Iseppon1; Valesca Pandolfi

1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Centro de Ciências Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE,

Brasil.

RESUMO Os ciclotídeos pertencem a uma classe de peptídeos expressos geralmente em resposta ao ataque de patógenos,

chamados de peptídeos antimicrobianos (AMPs). Esta família de AMPs subdivide-se em duas subfamílias:

bracelete e möbius. Apresentam 28 a 37 resíduos de aminoácidos, sendo seis deles resíduos de cisteína altamente

conservados e envolvidos em três ligações dissulfeto. Dada sua importância para a defesa vegetal frente a

patógenos, neste trabalho foram analisadas quatro sequências de ciclotídeos isoladas em Zea mays e Secale

cereale, ambas da família Poaceae. Foram selecionadas no GenBank/NCBI 15 sequências de ciclotídeos isolados

de diferentes espécies e famílias vegetais, sendo gerado um alinhamento múltiplo através do UGENE, o qual foi

editado no MEGA 6 para uso na análise fenética pelo método de Neighbor-Joining. Os seguintes parâmetros

foram adotados: bootstrap com 1.000 repetições e o modelo p-distance de substituições. Quando realizada a

construção da árvore fenética, o grupamento composto pelas sequências de interesse (Zeamays5, Zeamays6,

Secalecereale7 e Secalecereale9) se manteve agrupado, o que aponta para uma alta similaridade entre as mesmas.

Foi observada a formação de um grupamento entre Steinchisma laxum, Viola baoshanensis e Oldenlandia affinis,

pois estes compartilham resíduos de aminoácidos característicos da subfamília möbius, onde uma prolina antecede

a 6ª cisteína e uma treonina ocorre antes da 3ª cisteína. Outro caráter digno de menção refere-se à existência de

uma tirosina entre a 4ª e 5ª cisteína, como observado na sequência de Hedyotis biflora. Adicionalmente, com

exceção das espécies Viola baoshanensis e Hybantus floribundus, todas as outras espécies pertencentes à família

Violaceae formaram um cluster com todas AMPs agrupadas, indicando similaridade estrutural. Alguns bootstraps

apresentaram valores razoáveis (85 %) de confiabilidade dos clados, mas os grupos basais apresentaram valores

baixos. Em vista da maior conservação apenas das regiões que definem as pontes de cisteína, os resultados obtidos

são esperados, especialmente considerando que AMPs evoluem mais rapidamente que outras proteínas, face à

pressão seletiva patógeno-hospedeiro. Os ciclotídeos candidatos identificados representam interessantes alvos para

futuros estudos envolvendo expressão heteróloga e síntese, com potencial biotecnológico.

APOIO CAPES, CNPq e FACEPE.

101


ANÁLISE TRANSCRIPTÔMICA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO EXPRESSOS SOB ESTRESSE DE

DÉFICIT HÍDRICO EM CANA-DE-AÇÚCAR.

Manassés Daniel da Silva1; George André de Lima Cabral

2; Rahisa Helena da Silva

3; Jorge Luís Bandeira da

Silva Filho4; Éderson Akio Kido

5.


(1)Programa de Pós-graduação em Genética - CB - UFPE;

(2)RENORBIO - UFPE;

(3)Aluna de Graduação em

Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (4)

Aluno de Graduação em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (5)

Professor

Associado do Departamento de Genética - CB - UFPE

RESUMO Complexos mecanismos regulatórios estão envolvidos na indução e repressão de genes em resposta aos fatores

ambientais. Nesta regulação, interações entre fatores de transcrição (FTs) e elementos cis-regulatórios na região

promotora dos genes são cruciais na expressão gênica. A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma cultura de

extrema importância industrial, amplamente cultivada em países tropicais e subtropicais. Nessa cultura, a seca é

um dos estresses ambientais responsáveis por danos significativos à produção. Portanto, a identificação de FTs

expressos em cana-de-açúcar durante o déficit hídrico é importante para o sucesso de estratégias biotecnológicas

que visem uma resposta estresse-específica. Este trabalho almejou identificar o conjunto de fatores de transcrição

diferencialmente expressos na seca (24 h após supressão de rega) em relação ao controle sem estresse, de acessos

tolerantes e sensíveis ao estresse. Para tanto, foram alinhadas, via BLASTn (com no máximo um mismatch), 1.734

sequências nucleotídicas de (FT) de cana-de-açúcar (Saccharum spp.) do banco de dados GRASSIUS

(www.http://grassius.org), contra transcritos de quatro bibliotecas SuperSAGE (205.975 unitags válidas (26 pb),

geradas de RNAs totais de raízes de um bulk de genótipos sensíveis e outro de tolerantes ao estresse) que

evidenciaram os fatores de transcrição diferencialmente expressos (p-value < 0,05, teste Audic-Claverie). Foi

obtido um total de 2.264 alinhamentos unitag-FT aceitáveis, envolvendo 1.833 unitags em 582 FTs. Os FTs

identificados abrangeram 38 das 41 famílias de FTs disponíveis para a cana-de-açúcar. Dos 582 FTs, 264 foram

diferencialmente expressos, com base nas unitags do pool de acessos tolerantes em relação ao respectivo controle

negativo, sendo 146 induzidos e 118 reprimidos. As famílias mais abundantes foram AP2/EREB (48 transcritos),

bZIP (48), bHLH (38) e ZIM (36). A partir de diagrama de Venn foi possível quantificar transcritos FTs

exclusivamente induzidos (116 FTs contendo apenas unitags induzidas) e reprimidos (88 FTs contendo apenas

unitags reprimidas) nos acessos tolerantes. Esses FTs, expressos em raízes de cana-de-açúcar sob déficit hídrico,

estão sendo validados por RTqPCR e servirão para auxílio de outros ensaios de expressão gênica, bem como são

candidatos naturais para estudos de transgenia.

APOIO CAPES, FINEP, CNPq

102


ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM GENÓTIPOS DE ALGODOEIRO SUBMETIDOS A DÉFICIT

HÍDRICO NA FASE INICIAL DE CRESCIMENTO

Vandré Guevara Lyra Batista1; Samara Lima Brito

2; Pedro Dantas Fernandes

3; Péricles de Albuquerque Melo

Filho4; Roseane Cavalcanti dos Santos


5.


(1)Doutorando/RENORBIO/UFRPE;

(2)Mestranda/Ciências Agrárias/UEPB;

(3)Doutor/Engenharia Agrícola/UFCG;

(4)Doutor/Agronomia/UFRPE;

(5)Doutora/Laboratório de biotecnologia/EMBRAPA Algodão

RESUMO Apesar da alta adaptabilidade do algodoeiro a condições adversas, um dos principais fatores para perdas na

produção é o déficit hídrico. Esse tipo de estresse resulta em vários danos às plantas, entre eles, a oxidação celular

causada pelo aumento das espécies reativas de oxigênio (EROs). Como defesa, as plantas utilizam seu sistema

antioxidativo formado por várias enzimas além de metabólitos não enzimáticos. Objetivou-se analisar a atividade

dessas biomoléculas em genótipos sensíveis e tolerantes ao déficit hídrico na fase inicial de crescimento. Quatro

genótipos oriundos do BAG da Embrapa algodão foram investigados, dois considerados sensíveis (Delta Opal e

Precoce 1) e dois tolerantes (Mocó 1 e Mocó 2). O experimento foi conduzido em casa de vegetação localizada na

Embrapa algodão (Campina Grande-PB). As sementes foram plantadas em tubetes (288 mL) preenchidos com

substrato comercial para mudas (BASIPLAN). O delineamento experimental foi em blocos casualizados, em

esquema fatorial 4 x 2, com 4 repetições, sendo testados dois manejos: irrigado e não irrigado. A suspensão da

rega foi iniciada no 13º dia após emergência. As folhas verdadeiras foram coletadas no 3º e 6º dia de estresse

hídrico (DEH) e utilizadas para extração proteica e estudo das enzimas superoxido dismutase (SOD) de acordo

com Giannopolitis e Ries, 1977 e catalase (CAT) de acordo com Sudhakar et al, 2001 e o aminoácido prolina

(PRO) seguiu metodologia descrita por Bates et al, 1973. De acordo com a ANOVA, houve diferença significativa

(p<0,01) para interação genótipo e regime hídrico, indicando que houve influência dos tratamentos nas atividades

da SOD, CAT e PRO. Observou-se um aumento gradativo na atividade dessas biomoléculas em todos os genótipos

à medida que aumenta o déficit hídrico, fato esse esperado, pois em resposta ao estresse, as plantas produzem

EROs que por sua vez são neutralizados pelo seu sistema antioxidativo. Em relação ao aparato enzimático, no 6º

DEH, Precoce 1 obteve a melhor resposta com um incremento de 263% para a SOD e 171% para a CAT, seguido

do Mocó 1 com 136% para SOD e 78% para CAT. Para PRO, no 6º DEH, Mocó 1 apresentou um incremento de

1650% seguido do Precoce 1 com 100%. As enzimas SOD e CAT e a PRO apresentam-se como boas indicadoras

de déficit hídrico, os genótipos Precoce 1 e Mocó 1 obtiveram a melhor resposta em relação a atividade

antioxidante das enzimas e prolina.

APOIO Embrapa Algodão, UFRPE, RENORBIO, Capes.

103


ATIVIDADE ANTIOXIDANTE EM GENÓTIPOS DE AMENDOIM INOCULADOS COM

BRADYRHIZOBIUM E SUBMETIDOS A ESTRESSE HÍDRICO

Samara Lima Brito1; Daniela Duarte Barbosa


2; Paulo Ivan Fernandes Júnior

3.


(1)Programa de Pós Graduação em Ciências Agrárias;

(2)CNPA Biotecnologia - Embrapa Algodão ;

(3)Embrapa

Semiárido

RESUMO O déficit hídrico é um dos fatores abióticos que mais afeta a cultura do amendoim. Nessas condições, a planta

ativa mecanismos que envolvem enzimas, açúcares e aminoácidos responsáveis por gerar uma cascata de respostas

antioxidantes. Microrganismos como Bradyrhizobium, a partir da fixação biológica de nitrogênio, podem

proporcionar um aumento da tolerância ao déficit hídrico. Objetivou-se nesse trabalho avaliar a interação de

isolados de Bradyrhizobium com genótipos de amendoim submetidos a déficit hídrico, baseada em respostas

bioquímicas. O experimento foi conduzido em casa de vegetação na Embrapa Algodão. Foram utilizados três

genótipos de amendoim (IAC Runner 886, 2012-33 e 2012-47), quatro tratamentos (duas estirpes de

Bradyhrizobium - ESA 123 e SEMIA 6144, com e sem nitrogênio químico) e duas condições hídricas (controle e

estresse), com esquema fatorial de 3 x 4 x 2 e 6 repetições. As plantas foram cultivadas em bacias de 32 L

contendo solo franco arenoso e inoculadas com Bradyhrizobium no momento da semeadura, 15 e 30 dias após a

semeadura (DAS). A irrigação foi suspensa no 20° dia após a emergência (DAE) e o estresse mantido até o 28°

DAE. Ao final do experimento (28 DAE), o material foi coletado, armazenado a -80°C e em seguida, usado para

extração de proteínas (3mL de tampão fosfato para 0,500mg de folha) e análise das enzimas Catalase (CAT),

realizada de acordo com Azevedo et al. (1998), Superóxido Dismutase (SOD) de acordo com Bulbovas et al.

(2005), Ascorbato Peroxidade (APX) por Nakano e Asada (1981) e do aminoácido Prolina (PRO) de acordo com

Bates et al. (1973). Os dados foram submetidos a análise de variância pelo teste F e a comparação de médias pelo

teste de Tukey a 5% de significância, utilizando-se o programa estatístico SISVAR, versão 5.6. A 1% de

probabilidade, APX e PRO foram significativos estatisticamente para todas as fontes de variação analisadas, como

também, SOD e CAT para a fonte de variação genótipo e condição hídrica. Em condições de estresse, APX

aumentou no genótipo 2012-33 com a estirpe ESA 123, SOD aumentou no genótipo IAC RUNNER 886 e 2012-47

com a estirpe ESA 123 como também nos tratamentos com e sem nitrogênio químico em todos os genótipos. O

teor de PRO foi elevada em todos os genótipos sob estresse hídrico, sugerindo sua ação na osmorregulação celular.

A interação planta x microrganismo favoreceu na atividade de algumas enzimas, principalmente a interação com a

estirpe ESA 123.

APOIO UEPB e CAPES

104


ATUAÇÃO DO HERBICIDA IMAZAPYR NA REGENERAÇÃO IN VITRO DE CULTIVARES DE

FEIJÃO-CAUPI [VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.]

Paulo Vitor Galdino da Silva1; José Diogo Cavalcanti Ferreira

2; Hayana Millena de Arruda Azevedo

2; Ana

Maria Benko Iseppon2.


(1)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal (LGBV) - Centro de Ciências da Saúde Universidade. Federal

de Pernambuco (UFPE), Recife, Pernambuco, Departamento de Genética.; (2)

Laboratório de Genética e

Biotecnologia Vegetal (LGBV) - Centro de Ciências da Saúde. Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),

Recife, Pernambuco, Departamento de Genética.

RESUMO O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], amplamente cultivado no país, apresenta diversas características

atrativas para os produtores, porém, a sua produtividade ainda é baixa devido aos estresses ambientais. Visando à

obtenção de indivíduos tolerantes às adversidades ambientais, faz-se uso de ferramentas como a transgenia.

Contudo, é necessária a adequação do protocolo da regeneração in vitro, auxiliando na determinação das

concentrações de fitormônio e do agente de seleção. O presente estudo avaliou o uso do herbicida Imazapyr como

agente seletivo de feijão-caupi, a fim de estabelecer as condições ideais para futuros experimentos realizados com

esta leguminosa com o gene Atahas que confere resistência ao herbicida supracitado. Dessa forma, embriões foram

cultivados em Meio MS de indução em diferentes concentrações de Imazapyr (0, 200, 250, 300, 500 e 1000 nM)

sob fotoperíodo de 16 h a 28ºC. Cada tratamento foi realizado em triplicata (três cultivares distintas), contendo

sete embriões por frasco, cujas folhas primárias foram removidas. Após três semanas, os embriões foram

analisados quanto ao crescimento. Por se tratar de uma espécie recalcitrante, a taxa de necrose foi alta nos

controles negativos (0 nM), sendo 14,2%, 19,1%, 23,8% para as cultivares Boca Negra, BRS Tumucumaque e

Novaera, respectivamente. Nas concentrações de 500 e 1000 nM, o crescimento dos embriões foi inibido, o que

seria prejudicial, dado que pode impedir a regeneração tanto das plântulas não transformadas quanto das

transgênicas com tolerância ao herbicida. A dosagem de 300 nM foi a mais eficiente para retardar o crescimento,

sendo responsável por reduzir o seu desenvolvimento em relação aos controles negativos em 34% (Boca Negra),

24% (Tumucumaque) e 25% (Novaera), além de impedir a formação de folhas e raízes. Em trabalhos de

regeneração in vitro realizados com feijão-caupi, feijão-comum, soja e algodão foi visto que a concentração de

Imazapyr varia para diferentes espécies e cultivares, desse modo quanto mais acurada for a etapa de otimização do

protocolo, maior a chance de sucesso no processo seletivo. A concentração mínima estabelecida por este estudo foi

de 300 nM, pois reduz a taxa de escape gênico e quimerização dos exemplares transformados. A cultivar que

mostrou melhores resultados foi a Boca Negra por apresentar menor recalcitrância na cultura in vitro do controle

negativo e maior retardamento no crescimento das plântulas.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES); Conselho Nacional de

Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq); Fundação de Amparo à Ciências e Tecnologia do Estado de

Pernambuco (FACEPE).

105


AVALIAÇÃO DA EMERGÊNCIA DE PLÂNTULAS DE MELANCIA PROVENIENTES DA

AGRICULTURA TRADICIONAL DO SERTÃO PERNAMBUCANO.

Kecia Mayara Galvão de Araújo1; Antonio Elton da Silva Costa

1; Fábio Sanchez da Cunha

1; Francine Hiromi

Ishikawa1.


(1)Universidade Federal do Vale do São Francisco, UNIVASF, Petrolina, PE

RESUMO O trabalho teve como objetivo avaliar a emergência de 14 genótipos de melancia provenientes de agricultores

tradicionais do sertão pernambucano. O estudo foi conduzido no telado pertencente ao Laboratório de

Fitopatologia da Universidade Federal do Vale do São Francisco. O delineamento utilizado foi o de blocos ao

acaso, com três repetições e dez sementes por repetição. As sementes foram imersas em solução de hipoclorito de

sódio a 0,5% por 30 segundos e então lavadas com água destilada, em seguida foram semeadas. Para o semeio foi

utilizado uma bandeja de poliestireno de 200 células juntamente com o substrato comercial Topstrato. A avaliação

ocorreu durante 14 dias, sendo realizada a contagem de sementes emergidas diariamente, quando os cotilédones

estavam visíveis. Após a contagem foi realizado o calculo do índice de velocidade de emergência (IVE) e

porcentagem de germinação. Estes parâmetros foram submetidos ao teste de Bartlett e Shapiro-Wilk à 5% de

significância para verificar a homogeneidade das variâncias e normalidade dos erros, respectivamente. A ANOVA

foi realizada e os dados submetidos ao teste de Scott-Knott à 5% de significância com o auxílio do programa

estatístico R Core Team. A porcentagem de emergência não seguiu às premissas da ANOVA, contudo todos os

tratamentos obtiveram porcentagem de germinação acima de 90% e coeficiente de variação de 5,59%. Foi possível

realizar a análise de variância para o IVE constatando diferenças entre os tratamentos, sendo que os tratamentos

T6, T10, T13, T1, T2, T4 e T14 não tiveram diferenças estatísticas pelo teste de Scott-Knott à 5% de significância

e obtiveram os maiores índices, variando de 1,72 à 1,55 indicando que esses tratamentos emergem mais

rapidamente quando comparado aos demais. Além disso, todos esses tratamentos apresentaram percentual de

emergência superior à 93,3%. É importante a caracterização de acessos visando o conhecimento dos mesmos e

facilitar futuros trabalhos. Considerando que todos os acessos utilizados nesse estudo tiveram alta porcentagem de

emergência, podemos concluir que as sementes tem bom vigor.

APOIO CNPq pela apoio financeiro e a CAPES pelas bolsas de pós-graduação

106


AVALIAÇÃO DA RESISTÊNCIA À RIZOCTONIOSE EM GENÓTIPOS DE MELANCIA

PROVENIENTES DA AGRICULTURA TRADICIONAL

Fábio Sanchez da Cunha1; Antonio Elton da Silva Costa

1; Kecia Mayara Galvão de Araújo

1; Izaias da Silva Lima

Neto1; Francine Hiromi Ishikawa

1.



RESUMO O trabalho teve como objetivo avaliar a reação de acessos de melancia à Rhizoctonia solani. O trabalho foi

conduzido no telado do laboratório de Fitopatologia na Universidade Federal do Vale do São Francisco com 72

acessos do Banco de Germoplasma de Hortaliças da Univasf, 2 acessos do Banco Ativo de Germoplasma da

Embrapa Semiárido e a cultivar comercial Crimson Sweet como controle positivo, totalizando 75 acessos com 10

repetições por acesso. Os acessos foram inoculados com o isolado CMM-1053 de Rhizoctonia solani. Para o

preparo do inóculo, foi utilizado como meio de cultura arroz parbolizado. Para isso, Erlenmeyers de 250 ml

contendo 50g de arroz parbolizado e 30ml de água destilada foram autoclavados (120ºC, 15 min, 1atm). Resfriado

o arroz, foi adicionado ao meio 3 discos de micélios de 5 mm de diâmetro do fungo crescido por 7 dias em BDA.

Após 5 dias de incubação, o arroz colonizado foi utilizado como fonte de inóculo. Os acessos foram semeados em

bandejas de 200 células, utilizando o substrato comercial Topstrato®. As plântulas foram inoculadas quando a

primeira folha verdadeira estava completamente expandida, a inoculação se deu com a adição de um grão de arroz

infestado próximo ao hipocótilo da plântula e 15 após a inoculação foi realizada a avaliação, para isto, foi utilizada

uma escala de notas descritiva própria para o patossistema, as notas variando de 0 a 5 sendo que: 0= plantas sem

sintomas; 1= pequenas lesões nas raízes e/ou no hipocótilo; 2= lesões circundando o hipocótilo, sem ocorrência de

constrição; 3= início da constrição, destruição parcial dos tecidos sem damping-off; 4= tecidos necrosados com

damping-off pós-emergente; 5= Damping-off pré-emergente. Após a classificação foi calculada a média dos

tratamentos e então classificados em: 0 = imune; 0,1 a 1,0 altamente resistente; 1,1 a 2,0 resistente; 2,1 a 3,0

moderadamente resistente; 3,1 a 4,0 suscetível; 4,1 a 5,0 altamente suscetível. De acordo com as médias dos 75

genótipos avaliados apenas 4 acessos foram considerados moderadamente resistentes, com média entre 2,1 a 3,0,

estes resultados demonstram a dificuldade de se encontrar acessos com resistência à rizoctoniose devido à

agressividade do ataque do patógeno. Os acessos encontrados com moderada resistência servirão de base para o

desenvolvimento de cultivares resistentes à rizoctoniose.

APOIO à CAPES pelas bolsas fornecidas ao primeiro e segundo autor e CNPq pelo financiamento do projeto.

107


AVALIAÇÃO FÍSICA DE FRUTOS EM VARIEDADES VITIS VINIFERA NA MICRORREGIÃO DE

BREJÃO-PE

Rodrigo Leite de Sousa1; Rosimar dos Santos Musser

2; Mairon Moura da Silva

3; Patricia Coelho de Souza Leão

4;

Jesuito Bernardo de Araujo5.


(1)PPGAMGP, Depto. de Agronomia, Univ. Federal Rural de Pernambuco;

(2)Depto. de Agronomia, Univ. Federal

Rural de Pernambuco; (3)

Unid. Acadêmica de Garanhuns, UFRPE; (4)

Embrapa Semiárido; (5)

Inst. Agronômico de

Pernambuco

RESUMO A videira cada vez mais importante na Fruticultura brasileira vem ampliando de cultivo exclusivo de zonas

temperadas para uma grande alternativa em regiões tropicais. O objetivo do trabalho foi avaliar atributos físicos de

cacho e baga em 10 variedades de Vitis vinifera L. na Microrregião de Brejão-PE para produção de Vinhos Finos.

O experimento foi implantado em setembro de 2013, em área com altitude média 900m e temperatura média anual

22,8ºC, com apenas 1 ciclo produtivo ao ano. O delineamento foi em blocos casualizados, com 5 repetições e

parcelas de 8 plantas, no sistema de espaldeira em duplo cordão esporonado, espaçamento 3,0m x 1,0m irrigadas

por microaspersão. Após a colheita (jan-fev/2016), os cachos foram levados ao Laboratório da Unid. Acadêmica

de Garanhuns - UFRPE, onde análises físicas foram realizadas em amostras de 5 cachos coletados em disposições

diferentes de cada 2 plantas previamente marcadas por parcela. No laboratório foi aferido o peso, largura e

comprimento dos cachos, após foram retiradas 100 bagas sendo 20 de cada cacho, feita aferição do volume de 100,

onde 50 destas seguiu a aferição do peso e extração do mosto por esmagamento para pesagem da casca e semente

possibilitando o cálculo do percentual de rendimento do mosto. Os resultados foram submetidos a Análise de

Variância - ANOVA e teste de média de Tukey (p≤0,05) no Programa GENES. Para todos os caracteres avaliados

os valores foram significativos a 1% de probabilidade. No teste de média para peso do cacho a Muscat Petit

(124,45g) apresentou diferença significativa da Merlot Noir, Sauvignon Blanc, Viognier e Syrah (43,77g) e não

diferiu da Cabernet Sauvignon, Malbec e Petit Verdot. No comprimento do cacho a Cabernet Sauvignon

(12,82cm) obteve resultado significativo diferindo da Muscat Petit, Malbec, Viognier, Sauvignon Blanc e Syrah

(7,98cm), e não diferiu da Petit Verdot e Merlot Noir. Para largura do cacho a média da variedade Petit Verdot

(8,74cm) diferiu significativamente das demais. No volume de bagas a Malbec (197,2 ml) não diferiu da Muscat

Petit sendo significativamente diferente das demais. Para rendimento do mosto a Muscat Petit (76,6%), Malbec,

Sauvignon Blanc, Viognier, Syrah, Petit Verdot e Merlot Noir não diferiram significativamente entre si, entretanto

a Merlot Noir não diferiu da Cabernet Sauvignon (62,4%). Os resultados são preliminares, devendo ser

confirmados após alguns ciclos produtivos das variedades na região.

APOIO CAPES/EMBRAPA SEMIÁRIDO

108


AVALIAÇÃO MORFOLÓGICA DE COTILÉDONES EM GENÓTIPOS DE MELANCIA

Fábio Sanchez da Cunha1; Antonio Elton da Silva Costa

1; Kécia Mayara Galvão de Araújo

1; Francine Hiromi

Ishikawa1.



RESUMO O objetivo do presente trabalho foi avaliar genótipos de melancia quanto ao formato e intensidade da cor de

cotilédones, características utilizadas como descritores na cultura. O trabalho foi conduzido no telado pertencente

ao Laboratório de Fitopatologia da Universidade Federal do Vale do São Francisco. O delineamento utilizado foi

de blocos ao acaso com três repetições, e a parcela experimental foi constituída por dez plântulas. Foram avaliados

14 genótipos coletados junto a agricultores tradicionais do semiárido de Pernambuco. Todos os genótipos

utilizados apresentaram resistência à fusariose, causada pelo patógeno Fusarium oxysporum f. sp. niveum em

avaliação anterior. A avaliação do formato e intensidade da cor ocorreu após a emergência e o aparecimento da

primeira folha verdadeira. Quanto ao formato do cotilédone as plântulas foram classificadas como formato elíptico

estreito, elíptico médio e elíptico largo; e para a intensidade da cor os cotilédones foram classificados como

intensidade da cor verde claro, verde médio e verde escuro. Como são caracteres qualitativos optou-se por aplicar

o teste do Qui-quadrado para verificar se existe diferença entre tratamentos. Os resultados foram significativos

para ambas características indicando haver variabilidade genética entre os acessos resistentes à fusariose. Para

característica formato, observou-se uma maior freqüência do formato elíptico médio, seguido pelo formato elíptico

estreito e menor frequência do elíptico largo. Para o caráter cor dos cotilédones, observou-se apenas duas classes:

verde escuro e verde claro. Essas informações são úteis na caracterização morfoagronômica dos acessos de

melancia resistentes à fusariose pertencentes ao Banco de Germoplasma de Hortaliças (BGH) da Univasf e

indicam que a agricultura tradicional apresenta acessos com grande variabilidade genética.

APOIO à CAPES pela bolsa de pós-graduação do primeiro e segundo autor, CNPQ pelo financiamento do projeto

109


CAPACIDADES COMBINATÓRIAS EM GENÓTIPOS DE ALGODOEIRO HERBÁCEO PARA A

PRODUTIVIDADE

Damião Raniere Queiroz1; Francisco José Correia Farias

2; José Jaime Cavalcante Vasconcelos

2; Luiz Paulo de

Carvalho2; Lucas da Silva Santos de Souza

3; José Henrique de Assunção

2.


(1)UEPB / Embrapa Algodão;


(3)UFPB Areia / Embrapa Algodão

RESUMO O método de análise dialélica é amplamente utilizado por melhorista com o objetivo de selecionar genitores,

cruzamentos apropriados e determinar as capacidades de combinação geral (CGC) e específica (CEC). Este

trabalho foi realizado com o objetivo de selecionar genótipos de algodoeiro para a produtividade para a região

semiárida do nordeste e estimar as capacidades combinatórias CGC e CEC. Foram realizados cruzamentos entre

seis genótipos de algodoeiro herbáceo (Gossypium hirsutum) no ano de 2014 para a obtenção das sementes

híbridas F1's. Os híbridos foram plantados no ano agrícola de 2015 em Patos - Paraíba, o delineamento utilizado

foi de blocos ao acaso com 3 repetições. Foram avaliadas as seguintes características (Produtividade - PROD;

Produtividade de Fibra - PRODF e Porcentagem de Fibra - PF), procedeu-se a análise dialélica balanceada,

segundo o modelo I e o método II de Griffing (1956), em que se estimou a CGC e a CEC dos genitores e dos

híbridos. Foram observados pela análise de variância diferenças significativa a 1% e 5% de probabilidade pelo

teste F entre os genótipos. Para as características agronômicas PROD, PRODF e PF, os genótipos apresentaram as

seguintes médias respectivamente: 4518,46 Kg/ha, 1881,51 Kg/ha, 41,57%, seguidos dos seguintes Coeficientes

de Variação 21,48%, 21,96% e 2,03%. As estimativas das capacidades combinatórias revelaram que a CGC foi

mais importante que a CEC, para a PF, revelando uma maior importância dos efeitos aditivos no controle desta

característica. Para PROD e PRODF, a CEC foi mais importante que a CGC, apontando uma maior importância

dos efeitos não aditivos no controle destas características. No caso da CGC, os genótipos FM 993 e CNPA 04-

2080 obtiveram as maiores estimativas para PROD (372,93 e 197,72), PF (0,87 e 0,68) e PRODF (190,51 e

112,24). Para a produtividade e produtividade de fibra, a combinação híbrida FM 993 x PSC 355, apresentou as

melhores estimativas positivas da CEC (3188,25 e 1302,13) acompanhadas de genitores com estimativas altas e

positivas para CGC e valores de médias altas, sendo indicadas para a melhoria do rendimento. Já para a

porcentagem de fibra, as melhores combinações foram: PSC 355 x IAC 26 (1,27) e CNPA 04-2080 x PSC 355

(1,10), respectivamente, com um dos genitores possuindo estimativas positivas para CGC.

APOIO Embrapa Algodão

110


CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DE GENES PR-10 EM VITIS VINIFERA L.

Jéssica Barboza da Silva1; Carolline de Jesús Pires

1; Marianne Firmino de Oliveira

1; Roberta Lane de Oliveira

Silva1; Ana Maria Benko Iseppon

1.



Vegetal, Recife, PE

RESUMO As proteínas PR representam componentes adicionais do arsenal de defesa das plantas e têm sido rotineiramente

utilizadas como marcadores da SAR - Systemic Acquired Resistance. Após o contato com organismos patogênicos,

essas proteínas são codificadas por genes que são rapidamente induzidos por infecções patogênicas e pelo acúmulo

de ácido salicílico, ácido jasmônico e etileno. As proteínas PR da classe-10 (PR-10), apesar de já serem bastante

estudadas e possuírem ampla distribuição em todo o reino vegetal, ainda não possuem uma função biológica

definida. Diante disso, este estudo se propôs a identificar e caracterizar genes PR-10 promissores e relacionados

aos processos de defesa em Vitis vinifera. Para tanto, foi realizada uma busca no UniProt com as palavras-chave

"e;PR-10 AND Viridiplantae"e;, sendo selecionada uma sequência de Medicago truncatula para ser utilizada

como sonda. Essa sequência foi submetida a um tBLASTn no banco de dados do NCBI, visando selecionar

sequências candidatas na espécie com e-value igual ou inferior a e-10

. Cada sequência candidata foi anotada,

traduzida e teve seus domínios conservados identificados com o auxílio das ferramentas BLAST, ORF-Finder e

CD-Search no NCBI. A ancoragem dessas proteínas foi realizada no banco de dados Phytozome. A predição do

peso molecular e o ponto isoelétrico das sequências proteicas foi realizada a partir do JVirGel 2.0 e a localização

subcelular, por meio do Cell-PLoc 2.0. Foram localizadas sete sequências candidatas do gene PR-10 em V.

vinifera com níveis significativos de similaridade (e-value ≥ e-10

) e bitscore entre 97.1 e 164 . Foi observado que

as proteínas PR-10 candidatas são proteínas pequenas e que variaram de 109 a 168 aa. Os melhores quadros de

leitura foram +2 e +3. Foram identificados domínios Bet_v1-like, sendo seis completos e um incompleto na região

C-terminal. As PR-10 candidatas possuem ponto isoelétrico entre 4,57 e 8,68 e peso molecular variando entre 2,11

a 8,68 kDa, localização subcelular citoplasmática e todos os genes foram ancorados no cromossomo 5. As PR-10

são descritas na literatura como proteínas pequenas (?160 aa), intracelulares, uma vez que são expressas apenas no

citoplasma, reforçando os resultados encontrados. Os dados obtidos em nossas análises podem auxiliar no

entendimento dos mecanismos moleculares envolvidos no processo de defesa de videira, disponibilizando novas

informações acerca dessa classe de genes.


111


CARACTERIZAÇÃO DE SUBAMOSTRAS DE FEIJÃO-FAVA

Ramos, na1; Silva, Gc

1; Magalhães, Ta

1.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE

RESUMO Objetivou-se avaliar por meio da caracterização morfoagronômica a diversidade existente em 12 subamostras de

feijão-fava, oriundas da coleção de germoplasma do Departamento de Agronomia da Universidade Federal Rural

de Pernambuco-UFRPE. O experimento foi conduzido em delineamento inteiramente casualizado. A parcela

experimental foi uma fileira de três metros de comprimento, com espaçamento 1,0 x 1,0m. Após abertura da cova

e adubação com esterco curtido, foram semeadas quatro sementes por cova. Quando as plantas apresentaram três

folhas definitivas, foi realizado o desbaste deixando uma planta por cova a qual foi tutorada com uma estaca de

seringueira. Para a caracterização das subamostras, foram utilizados 16 descritores morfoagronômicos. As

características avaliadas referentes à semente foram: forma, comprimento, largura, espessura, cor de fundo, cor

padrão, segunda cor padrão, padrão do tegumento e a massa de 100 grãos; referente à planta: orientação dos ramos

e número de dias até a floração; referente à vagem: comprimento, largura, número de lóculos e número de

sementes. Todas as sementes apresentaram forma esférica e perfil achatado ou semi-achatado; o comprimento

ficou entre 11,22mm e 17,94mm para FA-02 e FA-01 respectivamente; a maior e menor largura foi de 9,28mm

(FA-02) e 13,58mm (FA-01). A cor do fundo das sementes variou em cinzento, branco, castanho, amarelo, preto

ou vermelho escuro; a cor padrão foi preto, castanho claro ou ausente, já a segunda cor padrão foi preto, marrom

ou ausente. Para o padrão do tegumento, os grupos definidos foram A, B e D2. A massa de 100 grãos variou entre

50g a 80g. Todas as subamostras foram classificadas com ramificações 3 ou 5. A floração mais precoce foi da FA-

03, com 93 dias, e a mais tardia, da FA-01 com 110 dias para florescer. Quanto as vagem; devido ao alto índice

pluviométrico na época de frutificação, nenhuma subamostra obteve produção de vagens úteis e suficientes para

realizar a caracterização. Existe variabilidade nas subamostras avaliadas, o que possibilita promover seleção. As

subamostras mais produtivas e precoces podem ser utilizadas como parentais para aumentar a médias desses

caracteres nas populações segregantes.

APOIO Apoio: Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq

112


CARACTERIZAÇÃO E IDENTIFICAÇÃO DE SUBAMOSTRAS DE FEIJÃO-FAVA

CONTRASTANTES PARA HÁBITO DE CRESCIMENTO VISANDO ESTUDO DE HERANÇA

Ramos, na1; Magalhães, Ta

1; Silva, Gc

1.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE

RESUMO Objetivou-se avaliar a diversidade de subamostras de feijão-fava (Phaseolus lunatus L.) visando identificar

materiais de hábito de crescimento contrastantes para fins de estudo de herança. Foram utilizadas 20 subamostras

de feijão-fava em experimento conduzido em delineamento inteiramente casualizado. A parcela experimental foi

constituída por uma fileira de três metros de comprimento, com espaçamento 1,0 x 1,0m. Quando as plantas

apresentaram três folhas definitivas, realizou-se o desbaste, ficando uma planta por cova, a qual foi tutorada com

estaca de seringueira. Utilizaram-se 16 descritores morfoagronômicos. As características avaliadas referentes à

semente foram: forma, comprimento, largura, espessura, cor de fundo, cor padrão, segunda cor padrão, padrão do

tegumento e a massa de 100 grãos; referente à planta: orientação dos ramos e número de dias até a floração;

referente à vagem: comprimento, largura, número de lóculos e número de sementes. Para as características das

sementes, as médias para todas as subamostras foram comprimento 14,09mm; largura 9,87mm; espessura 6,50mm.

Todas apresentaram forma esférica e perfil achatado ou semi-achatado. Houve variação para cor de fundo das

sementes (cinzento a castanho claro), cor padrão e segunda cor padrão (vermelho a ausente). Para o padrão do

tegumento os grupos definidos foram A, B, C2, D2, E1 e E2. A massa de 100 grãos variou de 15g e 55g. A

subamostra mais precoce foi a FA-16 e a mais tardia foi a FA-30. Devido ao alto índice pluviométrico na época de

frutificação, apenas a subamostra FA-25 obteve produção de vagens úteis e suficientes para avaliação. Quanto ao

hábito de crescimento, todas as subamostras foram classificadas como tipo 3 (um caule principal com ramos

laterais a começar dos primeiros nós), e tipo 5 (dois ou três caules principais a começar nos primeiros nós). Para o

estudo de herança é necessária a utilização de no mínimo dois parentais contrastantes, neste caso, sendo um deles

uma subamostra tipo 1 (um caule principal, ramos laterais curtos, raros ou inexistes), não encontrado no material

em estudo.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico-CNPq

113


CARACTERIZAÇÃO FÍSICA E MORFOLÓGICA DE ACESSOS DE FEIJÃO-FAVA NO ESTADO DO

CEARÁ

Lays Laianny Amaro Bezerra; Bezerra, L. L. A.1; José Ribamar de Assunção Filho; Assunção Filho, J. R.

2;

Railany Brito de Lucena; Lucena, R. B.1; Leandro Alves Pinto; Pinto, L. A.

1; Silvério de Paiva Freitas Júnior;

Freitas Jr., S.p.1.


(1)Universidade Federal do Cariri;

(2)Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz

RESUMO A espécie Phaseolus lunatus ou feijão-fava, como é popularmente conhecido, é um alimento com relevante

produção e consumo principalmente na região Nordeste do Brasil. Essa leguminosa, pertencente à família

Fabaceae, tem grande potencial proteico e é utilizada em muitos costumes regionais como uma alternativa ao

consumo do feijão comum. Por outro lado, a cultura é pouco pesquisada, consequentemente faz com que os

conhecimentos do feijão-fava sejam limitados e poucos são os relatos sobre a caracterização morfoagronômica.

Dessa forma, o presente experimento teve como intuito realizar a caracterização física e morfológica de dez

acessos de feijão-fava obtidos de agricultores, caracterizando-se, portanto, como sementes crioulas. O trabalho foi

realizado no campus experimental da Universidade Federal do Cariri, na cidade de Crato-CE, no ano de 2015.

Utilizou-se o delineamento inteiramente casualizado, plantando-se três sementes por cova e cada acesso teve três

repetições, onde 0,50 cm separavam as plantas e 0,50 cm, parcelas. Além disso, irrigou-se diariamente por

arpersão, realizou-se adubação orgânica (esterco bovino) e química (NPK), desbaste e capinas e para dar suporte

ao vegetal foram utilizadas varas de bambu. Todos os acessos foram avaliados quanto ao comprimento e largura

de vagens e sementes, quantidade de lóculos, de sementes por vagem, peso de 100 sementes, formato e cor da

semente e os resultados foram submetidos às análises estatísticas pelo algoritmo de Gower, seguido pelo

agrupamento de UPGMA utilizando-se o programa GENES-UFV. Pelo agrupamento de Tocher, os genótipos

foram divididos em apenas três grupos, os acessos 2, 3, 5 e 9 alocados no grupo I, os acessos 1, 4, 6, 7 e 10 no

grupo II e o acesso 8 no grupo III. Estes resultados não corroboram com o agrupamento via UPGMA, pois, neste

apenas o acesso 8 de manteve em um grupo isolado. Este acesso, por sua vez, recebe destaque por possuir maior

comprimento de vagens e sementes e maior peso de grãos em relação aos outros. Foram obtidos valores de

distância máxima de grupos pelo acesso 3 e mínimo para o acesso 6, valores de distância máxima para os acessos

2 e 4 e os acessos 2 e 5 obtiveram para valores de distância mínima.

APOIO CNPq, FUNCAP, NEFIMP e UFCA.

114


CARACTERIZAÇÃO MORFO-AGRONÔMICA DE GENÓTIPOS DE PHASEOLUS LUNATUS.L NA

REGIÃO SUL DO CEARÁ

Ítalo Bruno Bezerra Mota ; Mota,i.b.b.1; José Ribamar de Assunção Filho; Assuncao Filho, J. R.

2; Rysley

Fernandes de Souza; Souza, R. F.1; Ana Larissa Raynara da Silva; Silva, A. L. R.

1; Silvério de Paiva Freitas

Júnior; Freitas Junior, S.p.1.


(1)Universidade Federal do Cariri Crato-CE/BRASIL;

(2)Escola Superior de Agricultura Luiz de Queiroz da

Universidade de São Paulo; ESALQ/SãoPaulo-SP/Brasi

RESUMO Phaseolus lunatus é uma leguminosa conhecida popularmente como fava ou feijão-fava (lima been, em inglês).

Não obstante, seja bastante produzida e consumida no Brasil, em especial na região Nordeste. Seu cultivo é anual

e praticado de modo tradicional, não raro, em sistemas de consórcio com a cultura do milho. A cultura da fava não

dispõe de pacotes tecnológicos e variedades melhoradas destinadas ao cultivo. Visando subsidiar o início de

programas de melhoramento, foram caracterizados por meio de descritores morfológicos dez genótipos de fava

provenientes no banco de germoplasma da Universidade Federal do Cariri. Os descritores avaliados seguiram o

guia do IPGRI (2001), entre eles: tamanho e largura de vagem, quantidade de lóculos, largura da semente,

quantidade de semente por vagem, altura e largura de sementes, cor do tegumento, formato da semente e peso de

100 grãos. O experimento foi conduzido na Universidade Federal do Cariri, na cidade do Crato-CE no ano de

2015, no qual foram semeados 72 genótipos, divididos em parcelas totalizando três por genótipo,com espaçamento

de 0,50 cm entre linhas e entre covas. As plantas foram tutoradas com varas de bambu e aos 21 dias foram

realizados desbaste e utilizadas adubação química e orgânica (esterco bovino), de acordo com as recomendações

da análise de solo. Os resultados foram obtidos através da análise feita pelo algoritmo de Gower, posteriormente,

realizou-se o agrupamento pela ligação média entre grupos (UPGMA), através do programa GENES- UFV. Pelo

agrupamento de Tocher, os genótipos foram divididos em apenas dois grupos, o acesso 6, alocado isoladamente no

grupo dois e os demais acessos no grupo 1, dados estes confirmados pelo agrupamento UPGMA disposto no

dendrograma. As maiores e menores distâncias foram observadas entre os acessos um e seis e os acesso dois e

oito, respectivamente. O genótipo seis destacou-se devido às características morfológicas, comprimento de vagem

e de sementes, obtendo maiores médias, e maior peso de grãos.


115


CASA DE SEMENTES, AMBIENTE DE FORTALECIMENTO DAS ORGANIZAÇÕES

COMUNITÁRIAS E DE RESGATE E PRESERVAÇÃO DAS SEMENTES CRIOULAS

Rysley Fernandes de Souza1; Marcelo Moura Chaves

1; Cícero Secifram da Silva

1; João Esdras Calaça Farias

1;

Silvério de Paiva Freitas Júnior1.


(1)Universidade Federal do Cariri-UFCA

RESUMO O uso de sementes adaptadas às condições edafoclimáticas das diferentes regiões do país, tais como as sementes

crioulas, é indispensável para garantir a autonomia dos camponeses que praticam a agricultura familiar. O resgate

dessas sementes torna-se indispensável para a manutenção da biodiversidade, como também por se tratar de

materiais potenciais, fontes de genes importantes para um programa de melhoramento. Nesse sentido, o trabalho

teve como objetivo fazer um levantamento das casas de sementes do Cariri Cearense e espécies preservadas em

casas da comunidade rural Baixio das Palmeiras, Crato-CE. Atualmente, existem 12 casas de sementes da região

do Cariri Cearense, estando apenas 7 delas em funcionamento nas comunidades Baixio das Palmeiras, Batateira,

Jenipapo, Vila São Francisco, Triunfo e Lagoa dos Faustino no município do Crato-CE e São Vicente no

município de Várzea Alegre-CE. A casa de sementes Baixio das Palmeiras foi fundada em 2011 e atualmente tem

15 famílias cadastradas. Em parceria estão a associação comunitária local e ONG'S como Cáritas Diocesana e

ACB (associação cristã de base). A partir do levantamento realizado foram identificadas em estoque sementes de

Gergelim (Sesamum indicum L.), Feijão (Phaseolus vulgaris L.), Fava (Vicia faba L.), Milho (Zea mays L.),

Amendoim (Arachis hypogaea L.), Arroz (Oryza sativa L.), Soja (Glycine max (L.) Merrill.), Fumo (Nicotiana

tabacum L.), Andu (Cajanus cajan (L.) Millsp.), Quiabo (Abelmoschus esculentus (L.) Moench.), Romã (Punica

granatum L.), Mamão (Carica papaya L.), Melancia (Citrullus lanatus (Thumb.) Mansf.), Jerimum (Curcubita

pepo L.), Pimenta (Capsicum spp), Cabaça (Lagenaria siceraria Ser.), Girassol (Helianthus annuus L.), Pepino

(Cucumis sativus L.), tendo as seguintes quantidades de acessos respectivamente, 6; 6; 4; 6; 4; 6; 6; 2; 2; 2; 3; 7; 3;

1; 7; 2; 7; 7. Na comunidade foi realizado acompanhamento, com palestras e orientações quanto ao

armazenamento adequado, viabilidade das sementes e teste de germinação. Foram realizadas capacitações visando

esclarecer a importância da manutenção e reposição das sementes preservadas nessas casas. É importante notar

que a função desses bancos vai além do armazenamento de sementes, sendo necessário desenvolver iniciativas de

resgate de variedades perdidas ou em risco de erosão genética, bem como a introdução de campos de multiplicação

dessas variedades resgatadas.

APOIO Núcleo de pesquisa em fitotecnia e melhoramento de plantas-Nefimp, Conselho Nacional de Pesquisa-CNPQ e

Universidade Federal do Cariri-UFCA

116


COMPARAÇÃO DE PROGÊNIES OBTIDAS NO PRIMEIRO CICLO DE SELEÇÃO RECORRENTE

DE MILHO COMUM NO CARIRI CEARENSE.

Cicero Aritana Wilton Ferreira1; Antonio André Silva Alencar

2; João Esdras Calaça Farias

1; Sydney Pereira

Galvão1; Silvério de Paiva Freitas Júnior

3.


(1)Universidade Federal do Cariri;

(2)Mestrando em Genética e Melhoramento de Plantas-UENF;

(3)Professor

Adjunto-Centro de Ciências Agrárias e da Biodiversidade-UFCA

RESUMO O índice de seleção é uma técnica multivariada que associa informações relativas a várias características de

interesse agronômico com propriedades genéticas da população avaliada. A partir do índice de seleção é formado

um valor numérico, de caráter adicional e teórico, resultante da combinação das características sobre as quais se

deseja proceder à seleção simultânea. No presente trabalho, objetivou-se selecionar as melhores famílias de irmãos

completos por meio do índice de seleção de Smith (1936) e Hazel (1943), com a condução do primeiro ciclo de

seleção recorrente em famílias de irmãos completos de milho comum no genótipo crioulo Salva Terra. O ensaio de

competição foi realizado no campo experimental do Centro de Ciências Agrárias e da Biodiversidade da

Universidade Federal do Cariri, quando foram avaliadas as 210 famílias de irmãos completos. O plantio foi

realizado em maio de 2015, utilizando-se o modelo de delineamento em blocos casualizados com repetições dentro

de 'sets'. Utilizaram-se sete 'sets', com duas repetições, sendo que cada 'set' conteve 30 tratamentos. O espaçamento

utilizado foi de 3 m de comprimento da fileira, com 1 m de espaçamento entre elas, com 15 plantas em cada fileira

distanciadas em 0,2 m. Aos 21 dias após a emergência foi realizado o desbaste, deixando-se uma planta por cova.

Para estimativas dos ganhos percentuais preditos para o índice de seleção de Smith e Hazel foram utilizados como

pesos econômicos: coeficiente de variação genético (CVg), desvio-padrão genético (DPg), índice de variação

(CVg/CVe), herdabilidade (h2) e pesos atribuídos por tentativas (PA) (1, 50, 50, 1 e 100). Procurou-se obter na

seleção as famílias mais produtivas e que apresentaram redução nas médias de: número de plantas quebradas e

acamadas(TOMB), número de espigas mal empalhadas(EMP), número de espigas atacadas por pragas(EP) e

doenças(ED). No índice de Smith e Hazel, a característica ED apresentou ganho negativo, algo interessante, pois

almeja-se uma população com menor ataque de doenças. Para as características EMP e EP os ganhos obtidos

foram positivos, ou seja, características indesejáveis, possivelmente no próximo ciclo haverá menor qualidade nos

grãos, pois espigas mal empalhadas facilitam o ataque de pragas. Vale ressaltar que para a característica TOMB,

todos os pesos foram igual a zero, ou seja, nenhum dos pesos econômicos utilizados foi capaz de proporcionar

ganho, sendo a estratégia de seleção para essa característica ineficiente.

APOIO MAPA, NEFIMP e UFCA.

117


CORRELAÇÕES GENOTÍPICAS, FENOTÍPICAS E AMBIENTAIS EM GENÓTIPOS DE BERINJELA

EM SISTEMA DE CULTIVO ORGÂNICO

José Carlos da Costa1; Alisson Jalles da Silva

2; Emyliane Maria de Medeiros Lima

3; Severino Ramos da Costa

2;

Dimas Menezes2; José Luiz Sandes de Carvalho Filho

2.


(1)IFPE;

(2)UFRPE;

(3)UFPE

RESUMO Na agricultura, vêm ganhando espaço, as iniciativas que buscam conciliar a produção agrícola com a conservação

ambiental e os preceitos da segurança alimentar. Produtos orgânicos, agroecológicos, ambientalmente limpos ou

de alto valor biológico são apresentados como frutos da agricultura sustentável. A berinjela, Solanum melongena

L. é uma cultura que se encontra em fase de expansão, principalmente pelas propriedades medicinais dos seus

frutos na diminuição dos níveis de colesterol e pressão arterial. Este trabalho teve como objetivo avaliar

correlações genotípicas, fenotípicas e ambientais em genótipos de berinjela em sistema de cultivo orgânico. O

experimento foi conduzido no decorrer do ano de 2012 na área experimental da Estação Experimental Luiz Jorge

da Gama Wanderley - IPA em Vitória de Santo Antão, PE, localizada na Mesorregião da Mata Pernambucana. Os

genótipos foram avaliados em sistema de de cultivo orgânico conduzidos em delineamento de blocos casualizados.

A parcela útil foi constituída por uma área de 4,8 m2 contendo seis plantas, transplantadas no espaçamento de 1,0

m X 0,8 m, em seis repetições. As variáveis estimativas foram, diâmetro médio dos frutos, comprimento médio

dos frutos, massa média dos frutos por planta e número de frutos por planta. A partir dos componentes de

variância foram estimados os coeficientes de correlação fenotípica (rF) e genotípica (rG) e ambiental(rA). A

característica diâmetro médio dos frutos apresentou estimativas de correlação fenotípica significativa com a

característica comprimento médio dos frutos, no entanto foi de sinal negativo (rF=-0,97**

), com relação a

correlação genotípica para mesma característica, foi alta e com sinal negativo (rG=-0,99). Também foi verificada

correlação fenotípica significativa para diâmetro médio dos frutos x massa média dos frutos (rF=0,90**

), a

correlação genotípica para mesma característica também foi alta, (rG=0,93). A correlação fenotípica para

comprimento médio dos frutos x massa média dos frutos foi significativa (rF=-0,82*). As correlações das variáveis

em estudo que se destacaram e que podem ser utilizadas para fins de melhoramento foram: diâmetro médio dos

frutos x comprimento médio dos frutos e diâmetro médio dos frutos x massa média dos frutos por planta.

118


DESEMPENHO DA INFECTIVIDADE DO NEMATÓIDE DAS GALHAS EM GENÓTIPOS DE

MELANCIA NO SEGUNDO SEMESTRE NO SEMIÁRIDO NORDESTINO

Paloma Clementino da Cruz Lubarino1; Rita de Cássia Souza Dias

1; José Mauro da Cunha e Castro

1; Maria de

Fátima Correia Pontes1; Janderson Brito de Oliveira

2; Joice Simone dos Santos

1; Alison Borges Vitor

3.


(1)EMBRAPA SEMIÁRIDO ;

(2)Universidade de Pernambuco-UPE ;

(3)Universidade Federal do Recôncavo

Baiano- UFRB

RESUMO As altas temperaturas podem influenciar na redução da infectividade dos nematóides das galhas em plantas de

melancia. Neste bioensaio, o objetivo foi avaliar a influência das altas temperaturas em genótipos de Citrullus

lanatus L. com diferentes índices de resistência a Meloidogyne enterolobii. Para isto, o trabalho foi desenvolvido

nos meses mais quentes do ano, de setembro a novembro, utilizado-se nove genótipos de melancia, sendo três

linhas de melancia forrageira com maiores índices de resistência a nematóide, duas linhas de melancia comerciais

suscetíveis e quatro F1s provenientes do cruzamento das linhas comerciais com as melancias forrageiras. E foram

analisadas, a influência da temperatura registrada com a presença de galhas no sistema radicular de plantas

inoculadas, e a correlação do índice de galhas com os índices das clorofilas a, b e total (a + b), comprimento e

peso da parte aérea, e, comprimento e peso da raiz. O índice de galhas foi determinado utilizando a escala de notas

adaptada do "International Meloidogyne Project - IMP". No presente trabalho, a escala de cinco notas foi adaptada

até a nota quatro de infecção. Para a quantificação dos índices de clorofila foi utilizado o método indireto, através

de três leituras realizadas no florescimento pleno, sempre na primeira folha completamente expandida (do topo do

dossel para a base). Com relação aos dados do índice de galhas, esperava-se para as linhas comerciais suscetíveis,

a nota quatro, que corresponde a um alto grau de suscetibilidade. No entanto, estes apresentaram notas dois e três.

Sendo que, no mês de outubro foi registrada temperatura de 45 ºC no turno da manhã. O qual explica a

desinfestação do solo, pelo método de solarização, influenciando na baixa presença de galhas e o aparente

comportamento de resistência das plantas suscetíveis inoculadas. Assim, não seria prudente afirmar neste trabalho

a resistência dos genótipos com índice dois, pois o mesmo sofreu interferência das altas temperaturas. No estudo

da correlação, observou-se que das 28 combinações possíveis entre os oito caracteres, apenas nove foram

significativas. As altas temperaturas registradas interferiram no desenvolvimento das galhas implicando em uma

menor associação dos caracteres. Portanto, é recomendável que os estudos da resistência de plantas a nematóides

instalados na região do semiárido, sejam feitos no primeiro semestre do ano, quando as temperaturas são mais

amenas.

119


DESENVOLVIMENTO E SELEÇÃO DE PRIMERS PARA VALIDAÇÃO DE GENES RESPONSIVOS À

VIROSE EM VIGNA UNGUICULATA (L.) WALP.

Mireli de Santana Rêgo1; Roberta Lane de Oliveira Silva

1; Mitalle Karen da Silva Matos

1; Flávia Tadeu de

Araújo1; Jéssica Barboza da Silva

1; Ayug Bezerra Lemos

1; Andreia Cristiny Cezarino de Araújo

1; Marianne

Firmino de Oliveira1; Ana Maria Benko Iseppon

1.



Vegetal, Recife, PE

RESUMO O feijão-caupi é uma leguminosa que possui grande importância socioeconômica para o sistema agroindustrial

brasileiro, especialmente no que se refere ao Norte e Nordeste do Brasil, por se tratar de um alimento amplamente

consumido pelas populações de baixa renda. No entanto, a cultura tem sido constantemente afetada por uma

variedade de doenças e pragas que ocasionam perdas significativas em sua produtividade. Neste sentido, o

desenvolvimento de acessos resistentes às principais doenças, como o Potyvírus (Cowpea Aphid Borne Mosaic

Virus, CABMV), tem se tornado de grande importância para o setor agrícola no Brasil. Dessa forma, objetivou-

se desenvolver primers adequados para utilização em ensaios de PCR em tempo real (RT-qPCR) envolvendo a

validação de genes candidatos representativos no transcriptoma do feijão-caupi infectado por CABMV.

Inicialmente foi realizada a extração do RNA total do tecido foliar dos acessos IT85F-2687 e BR 14-Mulato

(resistente e susceptível à infecção pelo Potyvírus, respectivamente), seguido da quantificação e conversão em

cDNAs. Os primers usados na análise foram desenvolvidos por meio do programa Primer3plus, de acordo os

parâmetros default, com algumas modificações. As reações foram realizadas seguindo condições descritas na

literatura, com temperatura de anelamento de 58° C e em seguida os produtos da PCR foram submetidos à

eletroforese em gel de agarose 1,5 %. Foram desenhados 36 pares de primers, sendo 20 pares para fatores de

transcrição da família MYB e 16 para a família NBS-LRR de genes de resistência. Deste total, 19 apresentaram

produtos de amplificação, onde 10 primers amplificaram bandas em 200 pb, cinco apresentaram fragmentos

abaixo de 200 pb, um apresentou banda em 250 pb e três apresentaram bandas inespecíficas. Apesar do desenho

não ter sido tão eficiente, levando em consideração o percentual de amplificação observado nas amostras testadas

(44,44 %), as reações ainda poderão ser otimizadas aumentando a temperatura de anelamento para 60 e 62° C.

Contudo, os resultados foram condizentes com o esperado, uma vez que tais primers foram desenhados para

amplificar em regiões de aproximadamente 200 pb. Os primers selecionados representam candidatos promissores

para validação da expressão gênica via RT-qPCR e se eficientes poderão ser utilizados para saturação do mapa

genético do Potyvírus, sendo alvos potenciais para o melhoramento genético do feijão-caupi e espécies

relacionadas.

APOIO Apoio: CNPq; CAPES; Facepe.

120


DIVERGÊNCIA GENÉTICA EM ACESSOS DE SISAL BASEADA EM CARACTERES

MORFOAGRONÔMICOS

Silmara Chaves de Souza1; Jean Pierre Cordeiro Ramos


3; José Jaime

Vasconcelos Cavalcanti4; Liziane Maria de Lima

3.


(1)Mestranda em Ciências Agrárias, UEPB;

(2)Doutorando em Agronomia, UFPB;

(3)Pesquisadora da Embrapa

Algodão; (4)

Pesquisador da Embrapa Algodão

RESUMO RESUMO - O sisal (Agave sisalana) é a principal fonte de fibra dura produzida no mundo. No Brasil, a produção

concentra-se nos estados da Bahia, Paraíba e Rio Grande do Norte. Apesar da produção, são poucos os genótipos

de sisal disponíveis para cultivo, portanto, é importante estudar a divergência genética dos acessos do BAG a fim

de identificar progenitores que possam gerar materiais superiores. Neste contexto, o objetivo deste trabalho foi

estimar a diversidade genética de 37 acessos da coleção de germoplasma de sisal da Embrapa Algodão, com base

em caracteres morfoagronômicos. O experimento foi realizado no município de Monteiro-PB, no ano de 2016, em

delineamento experimental inteiramente casualizado, com 6 repetições. Os caracteres utilizados foram: número de

folhas (NFO), altura da planta (ALT), comprimento de folha (CFO), peso da folha (PFO), peso da mucilagem

fresca (PMF), peso da mucilagem seca (PMS), peso da fibra fresca (PFIF), peso da fibra seca (PFIS) e

comprimento da fibra (CFI). A quantificação da dissimilaridade entre os acessos foi estimada por meio da

Distância de Mahalanobis e o agrupamento pelo método hierárquico UPGMA. A análise indicou alta variabilidade

entre os 37 genótipos de sisal, com um coeficiente de correlação cofenética de 91% e significativo a 1% de

probabilidade. Na análise de agrupamento verificou-se a formação três grupos: Grupo 1, representado por 81% dos

acessos, incluindo o híbrido 400 folhas e o híbrido 11648, que possuem vantagem quanto a produção de folhas e

fibra; Grupo 2 com 5 acessos, incluindo o A. foucroydes bastante explorado por sua qualidade de fibra; Grupo 3, o

mais divergente, representado apenas pelos acessos Tatuí 4 e Tatuí 1, que se destacam, principalmente, pela

grande quantidade de mucilagem que geram. Os resultados obtidos neste trabalho podem ser aplicados no

programa de melhoramento do sisal visando a obtenção de genótipos com qualidades superiores.

APOIO EMBRAPA/CAPES/CNPq

121


ESTIMATIVA DE DISTÂNCIA GENÉTICA ENTRE ACESSO DE FAVA PHASEOLUS LUNATUS L.

José Tiago Barroso Chagas1; Silvério de Paiva Freitas Junior

1; Artur Mendes Medeiros

1; Cicero Aritana Wilton

Ferreira1; Tainá Macêdo dos Santos

1; Thalyta Batista Clementino

1.


(1)Universidade Federal do Cariri

RESUMO A espécie Phaseolus lunatus L. é bastante disseminada e conhecida no Brasil, especialmente na região nordeste.

Sua produção e consumo são restritos às regiões específicas do cerrado, sertão nordestino, chapadas, serras,

sempre associadas a pequenos cultivos e a agricultura de subsistência, logo, melhorias na condução do cultivo são

essenciais para a renda do produtor e consequente manutenção do homem no campo. O objetivo do presente

trabalho consiste em caracterizar dez acessos de fava disponíveis no banco de germoplasma da UFCA (Núcleo de

Estudos em Fitotecnia e Melhoramento de Plantas - NEFIMP), por intermédio da estimativa da distância genética

entre os acessos. Foram utilizadas XX características quantitativas e XX qualitativas. A área experimental

utilizada foi a do Centro de Ciências Agrárias e da Biodiversidade localizada à latitude -7.234056 e longitude -

39.369500. Foram cultivados 10 acessos, à profundidade de 3 a 5 cm, com espaçamento de 45 cm a 1 m entre

linhas e 23 cm a 50 cm entre plantas a depender do cultivar e, em cada genótipo, foram feitas seis covas. A análise

das variáveis qualitativas foi realizada utilizando os descritores do International Plant Genetic Resources Institute

(IPGRI). Os dados foram analisados utilizando o algoritmo de Gower e para o método de agrupamento de

Unweighted Pair Group Method with Aritmetic Mean (UPGMA). Segundo as análises, o genótipo 6 ficou mais

distante do genótipo 7, o que representa a divergência genética entre eles. A menor distância encontrada foi entre

os acessos genótipos 1 e 2. Os agrupamentos hierárquicos das análises individuais e simultâneas em função das

matrizes das distâncias sugerem que cruzamentos gerados entre os acessos 6 e 7, podem levar a maior

disponibilização de variabilidade para seleção. Por outro lado, os acesso 1 e 2, pela sua similaridade, só devem ser

considerados em cruzamentos em separado, caso apresentem alguma caraterística de interesse. O dendrograma

UPGMA corrobora com a estimativa de distância e ressalta o acesso como mais divergente, agrupado

isoladamente dos demais.


122


FEIJÃO TRANSGÊNICO: RISCOS PERCEBIDOS, RISCOS REAIS E SEGURANÇA AMBIENTAL E

ALIMENTAR

Paulo Paes de Andrade1; Marília Andreza Ferreira

1; Diego Sotero de Barros Pinagé

2; Marcia Maria Almeida de

Melo1; Amaro de Castro Lira Neto

3.


(1)Centro de Saúde e Tecnologia Rural, UFCG, PATOS, PB;

(2)Departamento de Botânica, UFPE, RECIFE, PE

Brasil; (3)

Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA, RECIFE, PE, Brasil

RESUMO Em 2011 a CTNBio aprovou o evento EMBRAPA 5.1 de feijão (Phaseolus vulgaris L.) geneticamente modificado

resistente ao mosaico dourado através do mecanismo de interferência de RNA. Durante e após a avaliação da

CTNBio vários perigos foram apontados por diferentes interessados, refletindo uma percepção desfavorável ao

produto por parte de certos setores dentro e fora do país. Neste trabalho os perigos percebidos foram reavaliados

através da construção de novas rotas aos danos, seguindo a metodologia consensual estabelecida nos últimos anos

para a avaliação de risco de OGMs e obedecendo uma formatação rígida que permite constatar de forma direta a

abrangência, profundidade e pertinência da nova avaliação de risco. Entre os perigos originalmente avaliados

listamos como exemplo a mudança composicional dos grãos, o impacto sobre insetos não alvo e a perda de

eficiência do cultivar por mutações do vírus ou da planta. Quanto aos perigos novos, repetidamente veiculados na

mídia após a aprovação do cultivar pela CTNBio, enfatizamos a hipotética interferência do siRNA com o

metabolismo humano. As rotas ao dano para cada perigo, que não foram claramente desenhadas no parecer

original da CTNBio, foram agora construídas com base em hipóteses plausíveis, classificando-se assim as

probabilidades de dano para cada perigo. Por sua vez, os danos foram classificados com base na proposta da FAO.

Os riscos foram finalmente classificados com o emprego do algoritmo tabular do OGTR, com base nas

probabilidades e danos previamente classificados. O resultado de nossa avaliação aponta apenas riscos

negligenciáveis para todos os perigos trazidos pelos diferentes stakeholders, confirmando e estendendo os

resultados da avaliação feita pela CTNBio e trazendo um formalismo mais rigoroso, assim como maior

transparência da avaliação de risco e de suas conclusões.

APOIO TargetDNA

123


GERAÇÃO E SELEÇÃO DE CLONES DE PENNISETUM SPP. PARA O SEMIÁRIDO

PERNAMBUCANO*

Maria da Conceição Silva1; Mário de Andrade Lira

2; Mércia Virginia Ferreira dos Santos

3; Erinaldo Viana de

Freitas4; Alexandre Carneiro Leão de Mello

5; Djalma Cordeiro dos Santos

6; Eduardo Bruno Afonso Ferreira

Pita7.


(1)Pesquisadora do IPA, [email protected];

(2)Professor da UFRPE, bolsista do IPA,

[email protected]; (3)

Professora da UFRPE, bolsista do CNPq, [email protected]; (4)

Pesquisadores

do IPA, [email protected]; (5)

Professor da UFRPE, bolsista do CNPq, alexandre.lmello@ufrpe; (6)

Pesquisadores do IPA, [email protected]; (7)

Zootecnista, M.Sc/in memorian

RESUMO O trabalho foi executado na Estação Experimental do IPA, em Serra Talhada-PE, objetivando gerar e selecionar

clones de Pennisetum spp. para o Semiárido pernambucano. Foi implantado um bloco de cruzamento para geração

de genótipos, utilizando como progenitores masculinos, os cultivares de capim elefante (P. purpureum Shum)

Taiwan A-146, Taiwan A-25, Pusa Napier 472-76, Guaçu IZZ, Cuba 116, IRI 381, Pusa Napier SEA, Elefante

Roxo, Merker SEA, e como feminino, o Milheto IPA Bulk-1-BF (P.glaucum (L.) Leeke) de forma que a

inflorescência do milheto era protegida e polinizada quando receptível. As sementes foram plantadas em

bandejas/estufa agrícola, e as plântulas transplantadas para o campo onde se eliminou milheto/autofecundação e

híbridos com produção inferior a 100g MV/touceira. Na Fase I foram avaliadas 241 combinações híbridas e

classificadas em três categorias: baixa %MS (inferior a 20), média %MS (entre 20 e 26) e alta %MS (superior a

26), selecionando-se as 12 mais produtivas para a Fase II. O experimento/Fase II foi implantado em Fev/2011

utilizando os híbridos e seus progenitores masculinos no delineamento de blocos ao acaso com 4 repetições, em

parcelas de 3m lineares/2m de área útil e espaçamento de 1m entre linhas. O corte de uniformização foi realizado

em Jun/2011 e após 60 dias, realizada avaliação quanto à produtividade, %MS e sobrevivência. A sobrevivência

foi determinada utilizando a escala de notas: 1. Morto, 2. Sobrevivência baixa/até 25% da parcela, 3.

Sobrevivência média/entre 26 e 50%, 4. Sobrevivência alta/até 75% e 5. Sobrevivência muito alta/acima de 75%.

Diante das precipitações pluviométricas em 2011 de 16,3mm/Março; 120,0mm/Abril; 20,5mm/Maio;

39,0mm/Junho; 16,2mm/Julho; 0,0mm/Agosto; 0,0mm/Setembro e 31,7mm/Outubro; o crescimento dos genótipos

foi comprometido, impossibilitando avaliações aos 60 dias, sendo a segunda e a terceira avaliação, realizadas em

intervalo de 106 dias, em nov/2011 e mar/2012, respectivamente. Os híbridos 36A (Taiwan A-146 x Milheto),

38A (Taiwan A-146 x Milheto), 48 (Merker SEA x Milheto) e 54 (Napier 472-76 x Milheto) foram superiores

(P<0,05) quanto à produtividade e sobrevivência, para os quais se obteve, respectivamente, produções de 1,42;

1,3; 0,99 e 1,18 kg de MS/parcela. Estes genótipos se mostraram superiores a seus progenitores masculinos quanto

à %MS, sendo o 36A classificado como de alta %MS (28,48). Assim, é possível selecionar clones Pennisetum spp.

com potencial para o Semiárido pernambucano.

APOIO *Trabalho financiado pelo CNPq, IPA e UFRPE

124


HERANÇA DA COR DO MESOCARPO EM MELOEIRO

Adriano Ferreira Martins1; Anânkia de Oliveira Ricarte


1; Elaíne Welk Lopes Pereira

Nunes1; Antônia Eliziana Augusta da Silva

1; Karmita Thainá Correia Ferreira

1; Cheyla Magdala de Sousa

Linhares1; Francisco Linco de Souza Tomaz

1; Ana Carolina de Assis Dantas

2; Glauber Henrique de Sousa

Nunes3.


(1)Universidade Federal Rural do Semi-Árido;

(2)IFNR - Campus São Raimundo das Mangabeiras;

(3)DCV -

Universidade Federal Rural do Semi-Árido

RESUMO O meloeiro (Cucumis melo L.) é a cucurbitácea de maior importância mundial em termos econômicos, tendo

grande relevância para o Brasil, mais precisamente para a região Nordeste que responde por mais de 90% da

produção nacional. Em programa de melhoramento genético do meloeiro muitas características são consideradas,

em especial àquelas relacionadas com o fruto, como a cor do seu mesocarpo. O conhecimento do controle genético

dessa característica é fundamental para auxiliar o melhorista no processo seletivo e na tomada de decisão sobre

qual estratégia será mais indicada para atingir seus objetivos. Foram realizadas poucas investigações com o intuito

de estudar a coloração da polpa do melão, assim o objetivo do presente trabalho foi estudar o controle genético da

cor do mesocarpo em frutos de meloeiro. Para estudar a herança da coloração do mesocarpo foram realizados

todos os cruzamentos possíveis entre as linhagens PV (mesocarpo verde), A-16 (mesocarpo branco) e OL-13

(mesocarpo salmão). A partir das gerações F1 e F2, juntamente com as linhagens genitoras, foi avaliada a cor do

mesocarpo do fruto. O experimento foi conduzido em blocos casualizados, com três repetições. Em razão da

variabilidade genética presente em cada geração, as parcelas foram constituídas pelos seguintes número de plantas:

15 (genitores e F1), 120 (geração F2). Foram testados possíveis modelos genéticos para explicar o controle

genético da cor do mesocarpo no fruto de melão, sendo aplicado o teste Qui-quadrado (χ2) com o nível de 5% (α =

0,05) de erro tipo I, e as análises foram processadas pelo software R. Concluiu-se que o controle genético da cor

do mesocarpo no melão não segue o modelo de dois genes epistáticos recessivos. A coloração branca é dominante

sobre a coloração verde, enquanto que a cor salmão é dominante sobre as cores branca e verde.

APOIO CNPq UFERSA

125


HERANÇA DA RESISTÊNCIA DO ACESSO AC-02 À RAÇA 1 DE PODOSPHAERA XANTHII EM

MELOEIRO

Anânkia de Oliveira Ricarte1; Elaíne Welk Lopes Pereira Nunes

1; Jose Maria da Costa

1; Juliana Maria Costa da

Silva1; Adriano Ferreira Martins

1; Ana Carolina de Assis Dantas

2; Isabel Macedo Guimarães

1; Karmita Thainá

Correia Ferreira1; Francisco Linco de Souza Tomaz


1.


(1)Universidade Federal Rural do Semi Árido;

(2)IFMA-Campus São Raimundo das Mangabeiras

RESUMO O oídio é a principal enfermidade de natureza fúngica da parte aérea das cucurbitáceas em todo o mundo.

Podosphaera xanthii é a principal espécie causadora dessa doença, a mesma ocorre principalmente nos períodos

de baixa umidade relativa do ar e elevadas temperaturas, causando perdas significativas na produção do melão. As

populações desse fungo são geneticamente heterogêneas e formadas por raças fisiológicas. Este fato é um grande

problema para os programas de melhoramento genético visando à resistência ao oídio, pois o patógeno está sempre

se especializando, ocasionando o surgimento de novas raças, quebrando a resistência nos genótipos em cultivo. A

identificação de fontes de resistência no germoplasma disponível é uma das primeiras ações para se obter

cultivares resistentes. Uma vez identificado acessos com alelos que conferem resistência às novas raças ou

prevalentes em determinada região produtora, o próximo passo é saber o controle genético da resistência. O

conhecimento do controle genético é importante porque auxilia o processo de melhoramento utilizado para a

introgressão de alelos de resistência em genótipos com excelente qualidade de fruto. O objetico do presente

trabalho foi estudar a herança da resistência do acesso AC-02 à raça 1 de Podosphaera xanthii em meloeiro. Foi

realizado o cruzamento entre a cultivar suscetível 'Védrantais'com a cultivar resistente AC-02, e em seguida

obtidas as populações segregantes. O experimento foi conduzido em casa de vegetação na Universidade Federal

Rural do Semi-Árido (UFERSA), na cidade de Mossoró-RN, no ano de 2015. Adotou-se o teste de Qui-quadrado

(χ2) para testar modelos genéticos visando explicar a herança da resistência. As razões de segregações de

resistência/suscetibilidade observadas nas diferentes populações (F1, F2, RC1 e RC2) indicaram que a herança da

resistência do AC-02 à raça 1 é controlada por um gene composto por dois alelos, de modo que o alelo que confere

resistência domina o alelo para suscetibilidade.

APOIO Comissão de Aperfeiçoamento de Pessoal do Nível Superior-(CAPES) e Universidade Federal Rural do Semi

Árido-(UFERSA)

126


HERANÇA DO TEOR DE SÓLIDOS SOLÚVEIS EM MELÃO

Juliana Maria Costa da Silva1; José Maria da Costa

1; Karmita Thainá Correia Ferreira

1; Anânkia de Oliveira

Ricarte1; Antonia Eliziana Augusta da Silva

1; Cheyla Magdala de Sousa Linhares

1; Alcileide Vieira Barreto

1;

Elaine Welk Lopes Pereira1; Isabel Macedo Guimaraes

1; Elaine Renata de Castro Viana Pereira

1; Patricia Ligia

Dantas de Morais1; Glauber Henrique de Sousa Nunes

1.


(1)UFERSA

RESUMO O teor de sólidos solúveis é o principal caráter relacionado à qualidade do fruto do meloeiro. O conhecimento da

herança auxilia o melhorista na tomada de decisão sobre qual a melhor maneira de promover o melhoramento

genético do referido caráter. O objetivo do presente trabalho foi estudar a herança do teor de sólidos solúveis em

melão. Os genitores contrastantes 'Vedrantais' (P1), com elevado sólidos solúveis (>10%), e A-16 (P2), com

reduzido sólidos solúveis (<6%), e as gerações F1, F2 e retrocruzamentos (RC1 e RC2) foram avaliados em

delineamento em blocos casualizados com três repetições. Os frutos foram colhidos por planta e devidamente

identificados. Em cada fruto de cada planta foi medido o teor de sólidos solúveis em refratômetro digital a partir

de alíquotas de suco homogeneizado. As análises foram feitas conforme a metodologia de Mather e Jinks (1984) a

partir do procedimento PROC MIXED do programa SAS® Versão 9.2. Observou que a presença de efeitos

aditivos e não aditivos na herança do teor de sólidos solúveis. A herança é poligênica com pelo menos 34 locus

envolvidos.

APOIO UFERSA e CAPES.

127


HERANÇA PARA COR DE TEGUMENTO DO GRÃO EM DUAS CULTIVARES COMERCIAS DE

FEIJÃO-CAUPI

Sirando Lima Seido1; Carlos Antonio Fernades Santos

2; Danilo Olegario Matos da Silva

3; Deisy Aiane Lima de

Aquino1; Rejanildo Robson Candido Sousa

3; Washington Carvalho Pacheco Coelho

3.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE/PPGMP, Recife-PE. Brasil;

(2)Embrapa Semiárido,

Petrolina-PE, Brasil; (3)

Universidade Estadual de Feira de Santana, UEFS/PPGRGV, Feira de Santana-BA. Brasil

RESUMO A cor do tegumento do feijão-caupi é uma das principais características de consumo da cultura no Nordeste.

Atualmente, essa necessidade é ainda maior, já que a cultura esta diante de uma expansão de mercado tanto interno

quanto externo. Além disso, a biodisponibilidade de minerais nos grãos pode ser influenciada pela cor do grão. O

objetivo desse estudo foi avaliar a herança genética que controla a coloração do tegumento do feijão-caupi para

facilitar o desenvolvimento de cultivares. O cruzamento artificial foi realizado em casa de vegetação com a coleta

de pólen (flor aberta) pela manhã, conservação em refrigerador. A emasculação e polinização do botão floral

foram realizadas no fim da tarde, 14 horas antes de sua antese natural. As duas cultivares que compõem os

parentais foram a BRS Carijó (grãos brancos, com grande halo preto) e a BRS Acauã (grão marrom claro e hilo

esverdeado). A cultivar BRS Carijó foi utilizada como genitor masculino. Nas plantas F1 não foi observada

segregação para cor de tegumento do grão, sendo observados 100% das sementes com tegumento do grão preto

sólido. As 180 plantas F2:3 avaliadas apresentaram uma segregação variada de pigmentação de preto para branco.

Foram identificados dez grupos de cores sólidas no tegumento do grão das sementes. No entanto, 17 grupos de

cores no tegumento do grão da população não puderam ser classificados por exibirem uma variação contínua de

cores. A cor Preta é relatada como sendo dominante sobre o marrom. Desta forma, a região com halo preto da

cultivar BRS Carijó apresentou dominância sobre a cultivar BRS Acauã, com cor preta sólida em todas as plantas

F1. O teste de qui-quadrado para averiguar a hipótese de segregação independente para coloração de tegumento do

grão foi rejeitado por não poder ser ajustado a nenhuma proporção esperada, indicando que muitos genes podem

estar envolvidos na herança do caráter.

APOIO A CAPES

128


IDENTIFICAÇÃO DE QTLS RELACIONADOS À QUALIDADE DE FRUTOS DE MELÃO

Karmita Thainá Correia Ferreira1; Ana Carolina de Assis Dantas

2; Elaine Welk Lopes Pereira Nunes

1; Anânkia

de Oliveira Ricarte1; Juliana Maria Costa da Silva

1; Antonia Eliziana Augusta da Silva

1; Alcileide Vieira

Barreto1; Adriano Ferreira Martins



1.


(1)Universidade Federal Rural do Semiárido ;

(2)Campus São Raimundo das Mangabeiras (IFMA)

RESUMO A identificação de marcadores moleculares ligados a genes controladores de características quantitativas (QTLs)

no meloeiro pode auxiliar os programas de melhoramento, aumentando sua eficiência e agilidade. Com base nisso,

realizou-se este trabalho objetivando identificar, em duas avaliações, marcadores SSR ligados aos locos gênicos

(QTLs) controladores de seis caracteres relacionados à qualidade de melão. Foram avaliadas 100 famílias F2:3 do

cruzamento entre os genitores 'Hales Best Jumbo' (HBJ) e 'MR-1'. Essas linhagens foram avaliadas nos anos de

2011 e 2013 em época tradicional de cultivo do meloeiro (julho a outubro), em Mossoró, RN. Para a avaliação

fenotípica das famílias, foram conduzidos dois experimentos, nos quais foi utilizado o delineamento em blocos

casualizados com três repetições. Cada parcela foi constituída por uma linha com cinco plantas, com espaçamento

de 2,0 m entre as linhas e 0,3 m entre plantas. Foram avaliadas as características peso médio do fruto, índice de

formato, espessura da polpa, firmeza da polpa, sólidos solúveis e porcentagem de rachadura do fruto. Pelos

resultados, foi possível a identificação de marcadores moleculares estáveis ligados a caracteres de qualidade de

fruto de melão, através do processo de regressão múltipla. Os caracteres são: peso médio do fruto, índice de

formato, espessura da polpa, firmeza da polpa, sólidos solúveis e porcentagem de rachadura do fruto. Os

marcadores CMMS22-2, CMCTN4 e CMMS4-3 foram os mais estáveis nas duas avaliações. Os marcadores

CMGAN3, CMAGN33, CMSTN4, CMMS4-3, CMMS22-2 foram aqueles que destacaram como os mais

promissores para seleção assistida, visando o melhoramento da qualidade de melão.

129


IDENTIFICAÇÃO EM COLMO DE CANA-DE-AÇÚCAR DE PROTEÍNAS COM EXPRESSÃO

DIFERENCIADA EM RESPOSTA A GLUCONACETOBACTER DIAZOTROPHICUS

Rayssa Guedes Gomes da Silva1; Melquisedec de Sousa Oliveira


2; Renata Rodrigues

de Almeida1; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva

1; Tercilio Calsa Jr.

1.



Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE; (2)

Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de

Pernambuco, Recife, PE

RESUMO A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma planta C4 pertencente à família Poaceae, apresentando extrema

importância na economia do Brasil em razão, basicamente, da produção de açúcar e etanol. Entretanto, fatores

bióticos ou abióticos podem influenciar no aumento ou redução do potencial produtivo da cultura sucroalcooleira.

A interação endofítica entre Gluconacetobacter diazotrophicus (GD) e a cana-de-açúcar é benéfica, auxiliando na

fixação biológica de nitrogênio (FBN) e também no aumento significativo da biomassa da planta. O presente

trabalho visou analisar o proteoma do colmo da cana-de-açúcar envolvido na resposta ao simbionte. Foram

extraídas proteínas totais de colmo da variedade RB867515, não-inoculada (controle) ou inoculada com GD

(tratamento). As amostras de proteínas foram separadas via SDS-PAGE 10% unidimensional, seguida de análise

pelo programa Gel Analyzer. As bandas que apresentaram maior razão de variação quantitativa na comparação

controle x tratamento foram excisadas, submetidas à digestão com tripsina e os peptídeos foram identificados via

espectrometria de massas (MS). As proteínas foram presumivelmente identificadas por meio do programa Mascot

contra base de dados de Saccharum, Gluconacetobacter, Viridiplantae e Actinobacteria. Os resultados da

eletroforese apontaram que das 37 bandas encontradas no controle e 44 no tratamento com GD, foram

identificadas 10 quantitativamente diferenciais, cuja anotação presumível dos peptídeos mais abundantes

(teoricamente correspondentes às proteínas mais abundantes nas bandas) permitiu associá-los a respostas ao

estresse, hidrólise do ATP, transporte de prótons, microtúbulos, microfilamentos de citoesqueleto e transporte

núcleo-citoplasma. A utilização complementar de 2D-PAGE para identificação mais ampla de proteínas

diferenciais deverá contribuir com programas de melhoramento genético da cana-de-açúcar através do

desenvolvimento de variedades com maior eficiência na simbiose com GD para fixação biológica de nitrogênio.

APOIO CNPq

130


INTERAÇÃO GENÓTIPO X AMBIENTE EM CARACTERES PRODUTIVOS DE BERINJELA

José Carlos da Costa1; Dimas Menezes

2; José Luiz Sandes de Carvalho Filho

2; Roberto de Albuquerque Melo

2;

Sevrino Ramos da Costa2.


(1)IFPE;

(2)UFRPE

RESUMO A berinjela, Solanum melongena L. é uma cultura que se encontra em fase de expansão, principalmente pelas

propriedades medicinais dos seus frutos na diminuição dos níveis de colesterol e pressão arterial. Este trabalho

teve como objetivo avaliar a interação genótipo X ambiente em caracteres produtivos de berinjela em diferentes

sistemas de cultivo, identificando os mais adaptados à Mesorregião da Mata Pernambucana. O experimento foi

conduzido no decorrer do ano de 2012 na área experimental do Departamento de Agronomia da Universidade

Federal Rural de Pernambuco - UFRPE, Recife, PE, e na Estação Experimental Luiz Jorge da Gama Wanderley -

IPA em Vitória de Santo Antão, PE, localizada na Mesorregião da Mata Pernambucana. Foram avaliadas duas

cultivares de polinização aberta e seis híbridos de berinjela em três sistemas de cultivo: convencional, orgânico e

hidropônico. Os caracteres avaliados em frutos comerciais foram: massa média de frutos, comprimento, diâmetro e

número de frutos por planta. Utilizou-se o delineamento experimental em blocos ao acaso, com oito tratamentos e

seis repetições, em cada um dos três sistemas. O sistema de cultivo hidropônico apresentou os melhores resultados

em todos os genótipos nas variáveis estudadas. As correlações das variáveis que se destacaram e que podem ser

utilizadas para fins de melhoramento foram: diâmetro médio dos frutos x comprimento médio dos frutos; diâmetro

médio dos frutos x massa média dos frutos por planta e massa média dos frutos por planta x produção média de

frutos por planta. A interação significativa genótipo x ambiente massa média dos frutos por planta e número de

frutos por planta sugerem que estratégias específicas devem ser adotadas para o melhoramento e manejo de

variedades para cada sistema de cultivo.

131


INVESTIGAÇÃO SOBRE VARIAÇÃO SOMACLONAL EM ANFIDIPLÓIDES DE AMENDOIM

CULTIVADO IN VITRO

Julita Maria Frota Chagas de Carvalho1; Taiza da Cunha Soares

2; Mauricélia Macário Alves

3; Iara Cristina da

Silva Lima3; Rosa Maria Mendes Freire


1.



(2)UFRPE-RENORBIO;

(3)UEPB

RESUMO O cultivo de tecidos in vitro permite que células, embriões ou pequenos fragmentos retirados de uma planta, bem

como semente de baixa viabilidade em condições convencionais sejam regeneradas em meio de cultivo

apropriado, obtendo-se plantas idênticas à doadora. A variação somaclonal pode gerar mudanças na planta

proporcionando, valiosa fonte de variabilidade genética para a melhoria das culturas. Embora, não seja um evento

frequente, alguns exemplos promissores são reportados na literatura. Sementes de amendoim anfidiplóide com

baixa viabilidade foram previamente desinfestadas e em seguida imersas em solução de Ácido giberélico (GA3) a

0,5 mg.L-1

por 24 e 48 h, que após a imersão os eixos embrionários foram inoculados em meio MS. Com bases

nos dados de comprimento da radícula, comprimento do eixo apical e tamanho das plântulas, verificou-se que a

embebição prévia das sementes em solução aquosa, contendo GA3 (0,5 mg.L-1

) por 24 h, seguida de inoculação

dos eixos embrionários em meio MS, possibilitou melhor resposta para recuperação da capacidade germinativa. As

sementes obtidas das plantas regeneradas (população 1) foram posteriormente cultivadas em casa de vegetação

para investigação quanto a possível ocorrência de variação somaclonal, baseando-se em caracteres fenotípicos

(emergência, ínicio de floração, ínicio formação e maturação completa de vargens, altura da harte principal,

número de vagens por planta, peso de cem vagens, peso de cem sementes e número de sementes por vagens) e

nutricionais (porcentagens de óleo, proteina e cálcio). Para fins comparativos, utilizaram-se sementes viáveis do

mesmo germoplasma obtidas de cultivo em campo (população 2). Nenhuma alteração significativa foi verificada

nas duas populações, indicando que os tratamentos utilizados não provocaram alterações somaclonais nas plantas

recuperadas in vitro.

APOIO Embrapa Algodão e CAPES

132


ISOLAMENTO DO PROTEOMA SOLÚVEL DE FOLHA E RAIZ DE STYLOSANTHES SCABRA

VOGEL. PARA ANÁLISE DIFERENCIAL

Sheyla Carla Barbosa da Silva Lima1; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva


2;

Melquisedec de Souza Oliveira1; Natoniel Franklin de Melo


4; Valesca Pandolfi

4;

Tercílio Calsa Júnior1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Centro de Biociências, Departamento de Genética, Laboratório de

Genômica e Proteômica de Plantas, Recife, PE, Brasil; (2)

Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Centro de

Biociências, Departamento de Genética, Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Recife, PE, Brasil;

Universidade de Pernambuco, Recife, PE, Brasil; (3)

Embrapa Semiárido, Petrolina, PE, Brasil.; (4)

Universidade

Federal de Pernambuco - UFPE, Centro de Biociências, Departamento de Genética, Laboratório de Genética e

Biotecnologia Vegetal, Recife, PE, Brasil

RESUMO A Stylosanthes scabra é uma leguminosa com ocorrência no semiárido brasileiro, com características de

resistência à baixa fertilidade do solo, pH ácido, seca, entre outros. Identificar as proteínas acumuladas

principalmente em condição de déficit hídrico é relevante para entender a expressão de genes que as torna

tolerante à seca. Não são descritos métodos sobre extração de proteínas em S. scabra, assim este trabalho teve

como objetivo testar processos para esta espécie, acesso 85/UNEB. Foram testados três métodos com amostras de

folha e raiz. A primeira etapa foi igual para todos os métodos, a maceração com nitrogênio líquido até pó fino, em

seguida diferenciando em: método 1: ao tubo foi adicionado tampão de extração (EDTA 50 mM, Tris HCl 0,5

M pH 7,5, β-mercaptoetanol 2%, sacarose 0,7 M, PMSF 2 mM e KCl 0,1 M), manteve-se sob agitação em gelo,

seguiu-se pela adição de fenol saturado pH 6,8 e agitação em vortex. Após centrifugação, foi adicionado à fase

fenólica metanol com 0,1 M de acetato de amônio, incubando-se por 16 h a -20 °C. Em seguida foram feitas

lavagens com metanol contendo 0,1 M de acetato de amônio e acetona 80%, e ressuspensão em ureia (7M);

tioureia (2M). Método 2: foi adicionado à amostra TCA 10% e armazenada em freezer por 10 min, em seguida

centrifugada e o sobrenadante com TCA descartado, repetindo-se esta etapa duas vezes. Logo após, seguiu-se com

o método 1. Método 3: à amostra foi adicionado tampão de lise (ureia 7M/tioureia 2M, 4% CHAPS, 1% DTT), a

mesma foi centrifugada e o sobrenadante transferido para novo tubo. Após a ressuspensão, em todos os métodos o

material foi dividido em dois tubos com quantidades iguais. Uma parte das amostras foi submetida à limpeza com

tampão SDS denso, fenol saturado pH 6,8 e metanol contendo acetato de amônio (0,1 M), lavagens com este e

acetona 80%, seguidas de ressuspensão em ureia (7M); tioureia (2M). Com base no rendimento, o método 1 sem

limpeza adicional, apresentou-se mais eficiente para ambos tecidos 3212,83 µg/g (folha) e 1314,73 µg/g (raiz). O

gel SDS-PAGE 1D foi realizado de acordo com o manual do equipamento (cuba para eletroforese vertical,

OMNIPHOR) e em análise deste gel, tais amostras também apresentaram melhor qualidade (definição de bandas e

resolução). Assim, conclui-se que o método 1 é o mais recomendado para extração de proteínas totais foliares e

radiculares de S. scabra, possuindo quantidade e qualidade adequadas, sendo o mais apropriado para análise

proteômica subsequente.

APOIO Apoio: CAPES

133


MÉTODO PARA EXTRAÇÃO DE DNA DE DISCOS FOLIARES DE MELANCIA SEM USO DE

COMPONENTES TÓXICOS

Antonio Elton da Silva Costa1; Fábio Sanchez da Cunha

1; Amanda Rodrigues da Silva

2; Patrícia Gonçalves

Castro Cabral3; Alexandre Sandri Capucho

1; Francine Hiromi Ishikawa

1.


(1)Programa de Pós-Graduação em Agronomia - Produção Vegetal, UNIVASF, Petrolina, PE;

(2)Colegiado

Engenharia Agronômica, Campus Ciências Agrárias, UNIVASF, Petrolina, PE; (3)

Departamento de Fitopatologia,

UFV, Viçosa, MG

RESUMO A análise genética usando fragmentos de DNA possibilita caracterizar populações de plantas de forma rápida e

segura. A escolha do método de extração é importante, pois a depender do material vegetal usado, pode exigir

muito tempo, devido as várias etapas necessárias, e ainda expor o usuário a substancias de risco. O custo das

análises é outro fator importante, como o uso de kits comerciais que eleva os custos da extração. É desejável o uso

de metodologias de fácil manuseio, com substancias não contaminantes e de baixo custo. Para isso, adaptou-se um

protocolo para extração de DNA de folhas de melancia. Discos de 1,5 cm de diâmetro em folhas jovens foram

coletados e secos em estufa por 8 horas a 50 ºC. Após secagem cada disco foi transferido para microtubos

contendo 3 beads (1,5 mm) de zircônio, o tecido foi triturado em micro homogeneinizador por 25 segundos a 300

rpm. Para extração do DNA adicionaram-se 240 µL de NaCl e 360 µL do buffer [40% (v/v) de NaCl 5M e 60% de

buffer (40 mL de Tris/HCl 0,5M; 5 mL NaCl 5M; 5 mL EDTA 0,5M; 1 mL SDS 5%; 49 mL H2O)] em cada

microtubo. Na etapa seguinte, os microtubos foram mantidos sob temperatura de 60°C por 30 minutos, com leve

agitação a cada 10 min. Em seguida foram centrifugados por 5 min a 2.500 x g (14000 rpm), com transferência de

270 µL do sobrenadante para tubos eppendorf de 2,5 mL com adição de 270 µL de 2-propanol. Os tubos foram

mantidos a -20 °C por 15 min e, centrifugados por 5 min a 2.500 x g. O 2-propanol foi decantado e adicionaram-se

200 µL de etanol 70%, com centrifugação por 5 min. O DNA foi ressuspendido em 50 µL de água. O método de

extração foi testado em 19 genótipos de melancia. Os valores da relação A260/A280 variaram entre 1,3 e 2,4. A

concentração observada oscilou entre 17,39 e 77,91 ng µL-1

. Um parâmetro considerado na qualidade do DNA,

são valores da relação A260/A280 próximos a 1,8. Nesse estudo não foi usado RNase na extração, e a maioria das

amostras apresentou baixa contaminação com proteínas. Foi realizada PCR com primer RPS10F/RPS10R

(AGGCTCACCCTAAAAGAAGG/GGTCAACACAAGGATCTTACT) com a amplificação do fragmento de

interesse mesmo em amostras com menor quantidade de DNA. Portanto, o método estudado é aplicável a extração

de DNA de melancia, realizado de forma mais rápida quando comparada a protocolos já estabelecidos, além da

não exposição a materiais tóxicos comumente usados na extração de DNA de plantas como clorofórmio, fenol e β-

mercaptoetanol.

APOIO CNPq e Capes

134


PERIGOS PERCEBIDOS E RISCOS REAIS DO EUCALIPTO TRANSGÊNICO PARA CRESCIMENTO

RÁPIDO

Marília Andreza da Silva Ferreira1; Paulo Paes de Andrade

2; Diego Sotero de Barros Pinange

1; Marcia Almeida

de Melo2; Amaro de Castro Lira Neto

3.


(1)UFPE;

(2)UFCG;

(3)IPA

RESUMO As preocupações com os impactos dos transgênicos são denominadas perigos e derivam da percepção de risco,

plasmada por diferentes fontes de informação. Os perigos nem sempre se concretizam em danos: se a rota ao dano

inexiste, o perigo jamais se concretiza em dano e o risco é nulo. Se existe, pode-se estimar a probabilidade com

que ele se concretize e a magnitude dos danos e assim classificar o risco associado ao perigo percebido. Apenas os

perigos derivados da biologia do OGM interessam ao avaliador de risco, cabendo a análise das questões sócio-

econômico-culturais a outros especialistas. Os perigos identificados no caso da variedade de eucalipto de

crescimento rápido que expressa as proteínas Cel1 (permite o crescimento rápido) e NptII (permite a seleção de

plântulas transformadas pelo uso de neomicina) foram: (1) Desenvolvimento de resistência a antibióticos em

humanos pelo consumo do mel GM e da mesma forma, (2) resistência da flora do tubo digestivo de abelhas devido

à elaboração de mel a partir de flores de eucalipto GM; (3) Morte de abelhas devido ao contacto com o pólen de

eucalipto transgênico; (4) redução da biodiversidade em microbacias devido à redução de disponibilidade hídrica

causada pelo crescimento rápido da variedade H421 de Eucalyptus e (5) fluxo gênico e fixação do transgene em

variedades de eucalipto sem controle do agricultor. Os riscos precisaram então ser determinados estabelecendo

rotas ao dano plausíveis. Para o primeiro risco, avalia-se que quem causa resistência a antibióticos é o próprio

antibiótico. A presença da proteína NptII, que fosforila a neomicina e outros antibióticos, inativando-os, é

irrelevante porque a NptII não atua no ambiente extracelular; a enzima não pode ser transportada para dentro das

bactérias do trato digestivo, onde talvez pudesse ter esta ação; a enzima está presente em concentrações

nanomolares no mel; seu gene não pode ser transferido do pólen para bactérias e mesmo assim, o gene está sob

controle de um promotor de planta. Por tudo isso, a rota ao dano que liga este perigo ao aparecimento de

resistência a antibióticos em humanos não se concretiza e o risco é nulo. Rotas similares foram construídas para

todos os outros perigos. A conclusão final foi que, de todos os riscos biológicos o único que não é nulo ou

negligenciável é o impacto sobre a biodiversidade de microbacias. Por outro lado, fica evidente que o impacto

(eventual dano) será restrito no tempo e no espaço e, portanto, o risco será pequeno.

APOIO TARGET DNA

135


REGENERAÇÃO IN VITRO DE SEMENTES DE CARTHAMUS TINCTORIUS L.

José Genilson Ribeiro Júnior1; Hirisleide Bezerra Alves

1; Nair Helena Castro Arriel

2; Julita Maria Frota Chagas

Carvalho1.


(1)Laboratório de Cultivo de Tecido, Embrapa Algodão, Campina Grande, PB;

(2)Embrapa Algodão, Campina

Grande, PB

RESUMO Cártamo (Carthamus tinctorius L.), pertencente à família Asteraceae, constitui uma cultura oleaginosa cuja

matéria-prima é destinada para produção de óleo na alimentação humana e na indústria para diversos fins. Os

teores de óleo dos grãos de cártamo podem chegar a 50%, e apresentam altas concentrações de ácidos linoleicos e

oleicos, sendo considerados de ótima qualidade tanto para consumo humano como para produção de biodiesel.

Apesar de ser uma cultura com grande potencial produtivo, o cártamo até então tem pouca expressão econômica

no Brasil, em virtude da escassez de conhecimentos técnicos com relação ao seu cultivo e a falta de cultivares

melhoradas e adaptadas. As sementes de cártamo são muito sensíveis a fatores ambientais onde todo excesso, de

água e temperatura, provoca decréscimo na germinação, visto que impede a penetração do oxigênio e reduz todo o

processo metabólico resultante. Nesse contexto, o cultivo in vitro expõe relevante aplicabilidade na regeneração de

sementes, visando à propagação e expansão de culturas de cártamo. Objetivou-se por meio deste trabalho

regenerar in vitro acessos de cártamo com baixa viabilidade, a partir do estabelecimento de um protocolo de

regeneração intrínseco à cultura. Foram utilizados 15 acessos de cártamo, com 10 repetições por acesso, cujas

sementes foram desinfestadas e, decorrido o período de 24 horas, cada semente inoculadas no tubo de ensaio em

meio de cultura MS semi-sólido, sendo incubadas a 27 ± 2°C e fotoperíodo de 24h. Germinaram dois acessos

correspondendo a 13,3%; destes acessos, quatorze sementes germinaram correspondendo a 70%, apresentando

uma variação na germinação dos acessos mencionados, mas com tempo de germinação de seis dias em

comparação ao plantio convencional que não houve nenhuma germinação dos acessos citados. Denotando a

eficácia do protocolo a partir da utilização de acessos viáveis. Posteriormente, as plântulas com raízes foram

transferidas para substrato turfa: vermiculita (2:1) para aclimatização, observando-se aspecto e crescimento

normal.

APOIO Embrapa Algodão

136


RESISTÊNCIA A FUSARIOSE EM GENÓTIPOS DE MELANCIA CULTIVADOS NA AGRICULTURA

FAMILIAR NO SERTÃO DE PERNAMBUCO

Antonio Elton da Silva Costa1; Fábio Sanchez da Cunha

1; Mayara de Souza Silva

2; Alan da Cunha Honorato

1;

Alexandre Sandri Capucho1; Izaías da Silva Lima Neto

1; Francine Hiromi Ishikawa

1.


(1)Programa de Pós-Graduação em Agronomia - Produção Vegetal, UNIVASF, Petrolina, PE;

(2)Colegiado

Engenharia Agronômica, Campus Ciências Agrárias, UNIVASF, Petrolina, PE

RESUMO O cultivo de melancia é uma importante atividade agrícola em diversos países. No Brasil, a Região Nordeste se

destaca com a produção do fruto, sendo também essa região reconhecida como centro secundário de diversidade

da espécie. As características de cultivo por parte dos pequenos agricultores contribuíram com a conservação da

variabilidade para diversos caracteres, dentre os quais está a resistência doenças, a exemplo das ocasionadas por

fungos habitantes do solo como a fusariose, causada pelo fungo Fusarium oxysporum f. sp. niveum. Assim o uso

de genótipos advindos da agricultura familiar é uma importante base para busca de fontes de resistência, sendo

esse o objetivo do estudo realizado. Foram usados para inoculação 54 genótipos de melancia do Banco de

Germoplasma de Hortaliças da Universidade Federal do Vale do São Francisco, e a variedade comercial Sugar

Baby como testemunha, com e sem inoculação. Os acessos foram coletados em municípios das mesorregiões do

Sertão e São Francisco Pernambucano. A inoculação ocorreu no semeio em substrato contendo clamidósporos, em

copos descartáveis de 250 mL. Foram usadas cinco repetições para cada tratamento, o semeio da testemunha sem

o fungo foi em substrato somente enriquecido com caldo BS mas sem inóculo. Após o semeio os copos foram

mantidos em sala com iluminação contínua por sete dias. Posteriormente os copos foram postos em delineamento

inteiramente casualizado em um telado com cobertura de sombrite 50% com irrigação diária até serem avaliados

22 dias após a inoculação. A avaliação foi segundo escala de notas com 5 níveis variando de 0 a 4. A reação foi

classificada em duas classes, resistente quando a média das notas fosse inferior a 2 e suscetível quando superior a

2. Com os dados de reações foi calculado o Índice de doença de McKinney pela equação Id = [Somatório(nota da

repetição x frequência) / (número de repetições x nota máxima da escala) ] x100. Entre os 54 genótipos

inoculados, 42 foram classificados como resistentes, não sendo observados dentre eles classificação de reação

semelhante a imune, ou seja, sem presença de lesões nas plantas. Os valores do Índice de Doença de McKinney

variaram entre 10 e 70% para os genótipos avaliados. A partir dos resultados observa-se a existência de

variabilidade e possíveis fontes de resistência à fusariose entre os genótipos cultivados por pequenos agricultores

na região que poderão ser utilizados no melhoramento visando resistência à fusariose.

APOIO CNPq e Capes

137


TRANSFERIBILIDADE E MAPEAMENTO IN SILICO DE MARCADORES MICROSSATÉLITES

ENTRE THEOBROMA CACAO E T. GRANDIFLORUM.

Analine dos Santos Nascimento1; Karina Peres Gramacho

2; Rafael Moysés Alves

3; Lucília Helena Marcellino

4;

Didier Clément5.


(1)UESC;

(2)SEFIT/CEPEC-CEPLAC;

(3)EMBRAPA;

(4)EMBRAPA-CENARGEN;

(5)CIRAD-CEPLAC

RESUMO Das 22 espécies que compõem o gênero Theobroma, duas são amplamente cultivadas no Brasil, T. cacao e T.

grandiflorum. Ambas apresentam características que as tornam importantes economicamente. A primeira, ao

contrário da segunda, é amplamente estudada, principalmente, por sua interação com o fungo Moniliophthora

perniciosa, agente causador da vassoura-de-bruxa do cacaueiro (VBC). Com os avanços dos estudos com

marcadores moleculares é possível compartilhar informações genéticas entre espécies aparentadas, realizando

estudos de mapeamento genético em espécies pouco estudadas a partir de informações conhecidas de outra

espécie. Nesta premissa, os objetivos desse trabalho foram: i) testar a transferibilidade de marcadores

microssatélites SSR, desenvolvidos para T. cacao em T. grandiflorum, ii) posicionar in silico, no genoma do

cacaueiro, os marcadores SSR específicos para T. grandiflorum. Foram testados 181 marcadores específicos de

cacaueiro, em uma população de cupuaçuzeiro segregante para diversas características, entre elas, resistência a

VBC. Após amplificação, os fragmentos foram revelados por eletroforese em gel de poliacrilamida denaturante a

6% e corados em nitrato de prata. Do total, 107(56,91%) dos marcadores não amplificaram e 78 (43,09%) foram

transferíveis ao cupuaçuzeiro, destes, 42 (56,41%) foram polimórficos. Foi realizado um mapeamento, in sílico, de

149 sequências SSR específicas de T.grandiflorum com sequências conhecidas do genoma do cacaueiro através da

ferramenta genome browser (Cocoagen DB/Gbrowser). Vinte delas apresentaram alinhamento completo das

sequências (forward e reverse) sendo identificadas e posicionadas nos cromossomos do mapa genético consenso

do cacaueiro. Para testar transferibilidade cruzada, nove SSRs foram amplificados em cinco clones do cacaueiro

representativos da diversidade da espécie (B97; SCA6; ICS1, SIC864 e CCN51) mostrando diferentes alelos. Os

marcadores alinhados serão, posteriormente, analisados quanto a posição de genes referentes à resistência a VBC.

Os resultados do presente trabalho poderão ser utilizados como ferramentas de auxílio para programas de

melhoramento genético, bem como, na construção de mapas genéticos para a espécie T. grandiflorum.

APOIO CAPES-EMBRAPA

138


TRANSFORMAÇÃO GENÉTICA DE VIGNA UNGUICULATA COM UM GENE CODIFICANTE DE

DEFENSINA DE MOMORDICA CHARANTIA

José Diogo Cavalcanti Ferreira1; Hayana Millena de Arruda Azevedo

2; Luís Carlos Belarmino

2; Ana Maria

Benko Iseppon2.


(1)Docente do Instituto Federal de Pernambuco - IFPE;

(2)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal,

Departamento de Genética, UFPE, Recife, PE

RESUMO A produtividade agrícola é impactada negativamente por estresses bióticos e abióticos, reconhecidos como os

principais responsáveis pelas perdas na produção de feijão-caupi (Vigna unguiculata). Para se defenderem dos

estresses bióticos, os vegetais desenvolveram sofisticados mecanismos, incluindo o sistema de defesa pré-

invasivo, localizado nas partes externas dos vegetais, impedindo a entrada do patógeno e ativando a imunidade

inata, que reconhece estruturas fundamentais dos micro-organismos e induz a produção de proteínas de combate

aos patógenos. Dentre os elementos dessa linha de defesa, as defensinas destacam-se por sua ação antimicrobiana,

inviabilizando o estabelecimento de agentes invasores. Por sua vez, o melão-de-são-caetano (Momordica

charantia) dispõe de transcriptoma sequenciado, sendo conhecido pelas propriedades medicinais, como agente

antimicrobiano e anti-inflamatório. A partir de análises in silico no transcriptoma dessa espécie foram

selecionados cinco genes-candidatos da classe das defensinas. Destes, o gene McDef1 apresentou domínio

conservado completo com predição de atividade antifúngica. McDef1 exibe regiões conservadas na maioria das

defensinas de plantas incluindo oito cisteínas, uma serina na posição 8, um aminoácido aromático na posição 11 e

resíduos de glicina nas posições 13 e 34. Após análise fenética a McDef1 foi agrupada com outras defensinas já

descritas com atividades antifúngicas in vitro e/ou in vivo, o que reforça a predição revelada pelas análises in

silico. Um vetor pAHASMCDEF1, portando o gene McDef1 e Atahas, que confere resistência ao herbicida

Imazapyr, foi construído e utilizado para bombardear 880 embriões de feijão-caupi através da técnica de

biobalística. Destes, sete plantas transformadas foram geradas, com eficiência de transformação semelhante àquela

de trabalhos anteriores com feijão-caupi. As próximas etapas compreendem a multiplicação das plantas

transformadas até a geração T3, após o que as mesmas serão inoculadas com fungos fitopatogênicos, os quais

podem causar perdas de até 50% na produção em feijão-caupi.

APOIO CAPES, FACEPE e CNPq.

139


UTILIZAÇÃO DE AZOSPIRILLUM BRASILENSE PARA POTENCIALIZAR A PRODUTIVIDADE DE

MILHO COMUM CRIOULO

Rysley Fernandes de Souza1; Silvério de Paiva Freitas Júnior

1; Francisca Dayanne de Oliveira Alcantara

1; Ítalo

Bruno Bezerra Mota1; Marcelo Moura Chaves

1.


(1) Universidade Federal do Cariri-UFCA

RESUMO O milho (Zea mays L.) é uma das culturas mais apreciadas no Brasil, não só do ponto de vista econômico, em

função da extensa área cultivada, mas também nutricional com destaque para a alimentação humana e animal. O

presente trabalho teve como objetivo avaliar o desenvolvimento do milho com a bactéria Azospirillum brasilense

inoculada via sementes em associação com doses de Nitrogênio. Os experimentos foram conduzidos no segundo

semestre de 2014 no município de Crato-CE. O delineamento utilizado foi o de blocos casualizados com 16

tratamentos e 4 repetições em 2 linhas de 5m com um espaçamento entre linhas de 0,9 m e entre plantas 0,2 m.

Foram avaliados a variedade BGHM54 e o hibrido BRS2022 sob a influência da adubação nitrogenada e da

inoculação com Azospirillum, quanto aos seguintes caracteres agronômicos: altura de planta, peso de espiga, peso

de grão e diâmetro de espiga. O experimento foi composto por um ensaio com delineamento experimental de

blocos casualizados, em esquema fatorial triplo. O fator 1, dois níveis: sem e com aplicação da solução da bactéria

Azospirillum brasilense; fator 2, quatro doses totais de nitrogênio: 0, 50, 100 e 150 kg/ha1

e o fator 3 dois

genótipos: a variedade crioula Newton Pequeno e o híbrido duplo BRS2022. Para a análise genético-estatística dos

resultados, foi utilizado o Programa GENES versão 2013.5.1 (CRUZ, 2013). Pela análise de variância a variedade

BGHM54 apresentou maiores médias para altura de planta, com e sem inoculante quando comparado ao Híbrido

BRS2022. Peso de espiga e peso de grãos denotam resultados positivos e superiores para o genótipo BRS2022,

comparado à variedade BGHM54 nas situações com e sem inoculante. Os ganhos médios gerais para os genótipos

inoculados e sem inoculação, em produtividade o incremento para PG foi de 19,62 % para a variedade e 9,18 %

para o híbrido, representando em valores de média 401,35 kg ha1 para a variedade e 252,18 kg ha

1 para o híbrido

quando inoculado. Nota-se que para diâmetro de espiga as médias apontam que o híbrido sobressai à variedade

utilizando a adubações de 50 kg/ha1 e 100 kg/ha

1. Pelos dados avaliados, a inoculação com Azospirillum foi

significativa para a produção com níveis menores de adubos nitrogenados, garantidos pelo aumento do peso de

grãos e diâmetro de espigas na condição de não adubação, bem como nas demais condições apresentando

aumentos graduais.

APOIO Núcleu de pesquisa em fitotecnia e melhoramento de plantas-Nefimp, Conselho Nacional de pesquisa-CNPQ e

Universidade Federal do Cariri-UFCA.

140


UTILIZAÇÃO DE AZOSPIRILUM BRASILIENSE PARA POTENCIALIZAR A PRODUTIVIDADE DE

MILHO PIPOCA CRIOULO

João Esdras Calaça Farias1; Francisca Dayanne de Oliveira Alcantara

2; Jakson dos Santos Nascimento

1;

Antônio Eduardo Peixoto dos Santos1; Silvério de Paiva Freitas Junior

3.


(1)Graduando em agronomia na Universidade Federal do Cariri ;

(2)Mestranda em Desenvolvimento Sustentável, na

Universidade Federal do Cariri; (3)

Professor no curso de Agronomia, na Universidade Federal do Cariri

RESUMO Os Estados Unidos da América detêm a produção mundial de milho pipoca, com 500 mil toneladas/ano. A

produção brasileira encontra-se em segundo lugar, com 80 mil toneladas/ano, e uma movimentação de US$ 130

milhões. Apesar de o Brasil ocupar o segunda lugar mundial, a produção brasileira é modesta. Um dos principais

motivos para isso é o fator econômico, que limita o acesso a insumos agrícolas para muitos agricultores. O

nitrogênio (N) é o nutriente que mais frequentemente limita a produtividade em várias culturas agrícolas e

principalmente na cultura do milho, exigindo aproximadamente 20 kg ha-1

por tonelada de grão produzido. A

inoculação com bactérias diazotróficas pode ser uma alternativa biotecnológica na procura pela sustentabilidade

dos sistemas agrícolas, em razão de que pode promover incrementos na produção das lavouras com menor

dependência de fertilizantes nitrogenados sintéticos. Nessa perspectiva o presente trabalho teve como objetivo

avaliar a capacidade produtiva da inoculação com bactérias diazotróficas em milho pipoca crioulo, com diferentes

níveis de adubação nitrogenada. O experimento foi conduzido na área experimental da Universidade Federal do

Cariri/UFCA, Campus Crato, Crato/CE. Avaliou-se o genótipo de milho crioulo em duas condições, com e sem

inoculação com A. brasilense (estirpe AbV5 e AbV6). Os dois tratamentos foram submetidos a quatro diferentes

níveis de adubação nitrogenada sendo 0 50, 100 e 150 kg/ha1 e outro sem adubação nitrogenada. Utilizando-se o

delineamento experimental em blocos ao acaso, foram avaliados 8 tratamentos com quatro repetições. A análise

foi feita com 6 características: Altura de planta (ALTP), diâmetro de espiga (DE), comprimento de espiga (CES),

peso de grão (PG), peso de espiga (PE) e peso de 100 grãos (P100). Todas apresentaram interações significativas

para o inóculo (I), doses de adubação (A) e para interação (A x I). Pelos dados avaliados, a inoculação com

Azospirillum foi determinante na manutenção da produção com níveis menores de adubos nitrogenados, garantidos

pelo aumento do peso de grãos e diâmetro de espigas na condição de não adubação, bem como nas demais

condições apresentando aumentos graduais, contudo, há ganhos representativos até na ausência de adubação de

cobertura.

APOIO NEFIMP, CNPq, Funcap e UFCA.

141


VARIABILIDADE GENÉTICA DA FAVA PHASEOLUS LUNATUS L. POR MEIO DA DISTANCIA

ENTRE OS ACESSOS

Antonio Eduardo Peixoto dos Santos1; Jose Tiago Barroso Chagas

1; Laura Leopoldina Sousa

1; Damião

Francisco de Sales1; Artur Mendes Medeiros

1.


(1)Universidade federal do cariri-CE

RESUMO Apesar de cultivada em todos os Estados e de apresentar capacidade de adaptação e cultivo mais ampla que o

feijão-comum Phaseolus vulgaris L. O feijão fava Phaseolus lunatus L. é pouco produzido no Brasil, pois ainda há

vulnerabilidade dos sistemas de produção do feijão fava. O presente trabalho teve o objetivo de estudar a

variabilidade genética do banco germoplasma da Universidade Federal do Cariri-CE, por intermédio da estimativa

da distância genética entre 10 acesos, utilizando XX características quantitativas e XX características qualitativas.

O experimento foi conduzido na área experimental do campus de ciências agrárias da universidade Federal do

Cariri. Foram plantadas seis covas de cada um dos dez genótipos à fundidade de 3 a 5 cm, com espaçamento de 45

cm à 1m entre linhas e 23 cm à 50 cm entre plantas. Os caracteres quantitativos e qualitativos foram avaliados com

base nos descritores do International Plant Genetic Resources Institute (IPGRI). Utilizou-se o algoritmo de Gower

e o método de otimização de tocher para o agrupamento das médias dos acessos avaliados. Os acessos foram

alocados em seis grupos. grupo l foi composto pelos acessos 8,9,3 e 4 o grupo ll com os genótipos 1 e 5, o grupo

lll com o genótipo 10, grupo lV genótipo 2, grupo V genótipo 7 e grupo Vl genótipo 6. Estudos posteriores

visando explorar a variabilidade genética presente no Banco de Germosplasma do NEFIMP - UFCA, pode utilizar

como genitores os genótipos 1 e 2, pois foram os mais distantes.


142

Genética, Evolução e Melhoramento Animal

ANÁLISE PRELIMINAR DAS MUTAÇÕES CAUSAIS PARA A SÍNDROME DO CORDEIRO ARANHA

E LISENCEFALIA E HIPOPLASIA CEREBELAR EM OVINOS DA RAÇA WHITE DORPER

Flávia Caroline Moreira Bezerra1; Pâmela Raiele Pinheiro Moreira

2; Rafael Batatinha Rocha

3; Samla Marques

Freire Cunha3; João José de Simoni Gouveia

4.


(1)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Participante

do Programa Institucional de Voluntários de Iniciação Científica (PIVIC/UNIVASF).; (2)

Grupo de Pesquisa em

Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Bolsista do Programa Institucional de

Bolsas de Iniciação Científica (PIBIC/CNPq/UNIVASF).; (3)

Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada,

Universidade Federal do Vale do São Francisco.; (4)

Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada,

Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Docente, Colegiado Acadêmico de Zootecnia, Universidade

Federal do Vale do São Francisco.

RESUMO A evolução da genômica tem possibilitado um enorme avanço na caracterização de mutações associadas ao

aparecimento de doenças genéticas em animais de produção. Entretanto, ainda são poucos os estudos no Brasil que

visam compreender a distribuição destas mutações nas raças ovinas. A Síndrome do Cordeiro Aranha (SLS) é uma

doença autossômica recessiva causada por uma transversão (T>A) no nucleotídeo 69 do éxon 17, do gene do

receptor do fator de crescimento de fibroblastos 3 (FGFR3). A Lisencefalia e Hipoplasia Cerebelar (LHC) também

é uma doença autossômica recessiva e sua mutação causal consiste em uma deleção de 31pb no éxon 36, do gene

da reelina (RELN). O objetivo do presente estudo foi identificar, através de métodos moleculares, animais

portadores das mutações causais tanto para a SLS quanto para a LHC em ovinos da raça White Dorper. Para isso,

foram coletadas amostras de sangue de 73 animais de rebanhos localizados nos estados da Bahia, São Paulo e

Sergipe. O DNA foi extraído utilizando um protocolo de extração salina. Para a genotipagem da mutação causal da

SLS, foi realizada uma PCR, utilizando os primers 5'-CCTTGTTTGACCGCGTCTAC-3' e 5'-

ATGTACCTGGGGGACATGC-3', seguida de digestão utilizando a enzima BTGI. Para a genotipagem da

mutação causal da LHC, foi realizada uma PCR utilizando os primers 5'-TTGCCTTCTCCGGTTTAATG-3' e 5'-

AGGGATTTGTGATGCTGGAC-3'. Os amplicons e produtos de digestão foram submetidos à eletroforese em gel

de agarose 3% por 3h a 80V e corados com brometo de etídeo. Todos os animais foram identificados como

homozigotos sadios para as mutações causais responsáveis pela Síndrome do Cordeiro Aranha e Linsencefalia e

Hipoplasia Cerebelar. A SLS foi inicialmente identificada em animais da raça Suffolk, nos Estados Unidos e,

posteriormente em outras raças, como a Hampshire Down. Já a LHC teve sua mutação causal descrita em animais

da raça Churra na Espanha. Trabalhos recentes indicam altos níveis de admixture entre raças modernas de ovinos,

o que pode aumentar a probabilidade de que as mutações causais associadas a doenças genéticas não segreguem

apenas em raças nas quais foram inicialmente descritas. Além disso, a identificação de animais heterozigotos em

raças cuja doença ainda não foi descrita pode permitir a implementação de estratégias de controle/erradicação da

mutação causal, antes que ocorram prejuízos financeiros advindos destas enfermidades.

APOIO CNPq

143


ESTIMATIVAS DE VARIABILIDADE E ESTRUTURA GENÉTICA EM POPULAÇÕES DA FORMIGA

CORTADEIRA ATTA SEXDENS (HYMENOPTERA:FORMICIDAE) PRESENTES EM FRAGMENTO

DE CAATINGA NO SUDOESTE DA BAHIA, BRASIL.

Carla Faine Matos de Oliveira1; Tarcísio dos Santos Cardoso

2; Cibelle Dias

3; Mikael Gabriel Zimmermann

3;

Neidson Silva Rodrigues3; Elisa Susilene Lisboa Santos

4; Carlos Bernard Moreno Cerqueira Silva

4.


(1)Programa de Pós-Graduação em Ciências Ambientais;

(2)Curso de Ciências Biologicas, Universidade Estadual

do Sudoeste da Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000; (3)

Curso de Ciências Biológicas, Universidade Estadual do

Sudoeste da Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000; (4)

Departamento de Ciências Exatas e Naturais, Universidade

Estadual do Sudoeste da Bahia, Itapetinga, Bahia, 45700-000

RESUMO Atta sexdens é uma formiga cortadeira conhecida por seu hábito de cortar folhas para o cultivo do fungo

simbionte. Em ambientes antropizados, tendem a aumentar a densidade de ninhos o que influencia

consideravelmente a intensidade de sua atividade forrageadora, tornando-as pragas agrícolas. A presença dessa

espécie no ambiente tem ocasionado mudanças de importância ecológica e econômica, fato que desperta o

interesse por estudos ecológicos e genético-moleculares com vistas ao entendimento das populações de formigas

cortadeiras. Com intuito de contribuir para o avanço de estudos genéticos para a espécie A. sexdens este trabalho

teve como objetivo estudar a diversidade genética das populações de A. sexdens com marcadores ISSR. Foram

estudados 17 ninhos (aqui considerados populações, representadas por um conjunto de 15 formigas operárias,

medindo em média de 1,5 cm), pertencente à Fazenda Lagoa das Covas (FLC) (13°54´S, 41°07Ó), região da zona

de amortecimento da Floresta Nacional Contendas do Sincorá (FNCS), município de Contendas do Sincorá, Bahia.

Primeiramente testou-se 23 marcadores ISSR dos quais foram selecionados 12 com melhor padrão de visualização

cujo percentual polimórfico variou entre 20% (TriAGA3'RC) e 100% (DiCA 3'YG). A diversidade de A. sexdens

foi acessada através de seis primers ISSR (DiGA3'C, DiGA3'T, TriCAC 3'RC, TriCAC3'YC, TriCAC5'CY,

TriTGT3'YC) que genotiparam um total de 44 bandas nas populações, cujo percentual polimórfico variou entre

43% (DiGA3'C) e 100% (TricAC5'CY, TriTGT3'YC), sendo 83% a média geral do polimorfismo. A Análise

Molecular de Variância (AMOVA) apresentou elevados valores de estruturação (média de 0,47) bem como,

apresentou elevada variação intrapopulacional (84%) para as populações da FLC-FNCS. De acordo com a Análise

Bayesiana, as populações estudadas estão compostas e estruturadas por três pools gênicos (K = 3). Em síntese, os

primers ISSR comprovaram sua eficácia para estudos genético-moleculares de formigas cortadeiras e em relação à

diversidade genética, os resultados mostraram que apesar das populações estarem estruturadas, observou-se

elevada variabilidade intrapopulacional (i.e., em cada um dos ninhos), fato que pode ser explicado em partes pelo

acasalamento poliândrico (cópula de uma rainha com vários machos no período reprodutivo) existente em

formigas cortadeiras.

APOIO À Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia (FAPESB)

144


ADAPTAÇÃO DE PROTOCOLO PARA CARIOTIPAGEM DE CÉLULAS DE RUMINANTES

Ludymila Furtado Cantanhêde1; Luana Oliveira dos Santos

2; João Carlos Farias Santana da Silva

2; Sérgio Alves

do Nascimento3; Maiana Silva Chaves

1; Priscila Germany Corrêa da Silva

1; Pábola Santos Nascimento

1; José

Carlos Ferreira da Silva1; Maysa Ceci Soares Muniz

1; Valeska Andréa Ático Braga

1; Marcelo Tigre Moura

1;

Marcos Antônio Lemos de Oliveira1.


(1)Laboratório de Biotécnicas aplicadas à Reprodução Animal - UFRPE;

(2)Laboratório de Genética e Citogenética

Animal - UFPE; (3)

Laboratório de Virologia Animal - UFRPE

RESUMO A análise citogenética contribui para a avaliação da viabilidade embrionária, visto que alterações cromossômicas

podem causar baixa viabilidade neonatal e perda na produção. A partir da análise do protocolo de cariotipagem em

ruminantes, este trabalho teve como objetivo adaptar o protocolo de cariótipo de células de ovinos e bovinos a um

protocolo mais simples, bem estabelecido, utilizado em células humanas. Linfócitos ovinos foram obtidos de

sangue periférico e posteriormente tratados com fitohemaglutinina para estimular a mitose. A linhagem

imortalizada de células MDBK foi utilizada para a cariotipagem de bovinos. Os cultivos celulares foram feitos

com meio RPMI adicionado de 5% de SFB. As células foram tratadas com 0,0016% de colchicina por duas horas

para sincronização em metáfase. As amostras foram centrifugadas a 700xg por cinco minutos, o sobrenadante foi

descartado e adicionado solução hipotônica de KCl a 37 °C por 15 minutos e novamente centrifugados. O

sobrenadante foi retirado e a solução de fixação (3:1 metanol e ácido acético) foi gotejada, permanecendo por 20

minutos. Após nova centrifugação e descarte do sobrenadante, a suspensão de células foi gotejada em lâminas e

corada com 5% de Giemsa por 10 minutos. A cariotipagem de células em ovinos foi o mesmo protocolo descrito

para humanos. As células ovinas obtidas em metáfase tinham boa nitidez, apesar do baixo percentual de células

sincronizadas. Os cromossomos encontravam-se com boa coloração, individualizados, facilitando a observação

morfológica de seis cromossomos metacêntricos e 48 telocêntricos, totalizando os 54 cromossomos da espécie (2n

= 54). Em bovinos, o protocolo necessitou de algumas modificações no momento da preparação das células para

sincronização do ciclo celular. As células MDBK foram repicadas 24 horas antes da cariotipagem, para obter

maior percentual de células em mitose antes do tratamento com a colchicina. Esta modificação permitiu obter

células em metáfase, mas com difícil visualização dos cromossomos. Em algumas células, os cromossomos

encontravam-se individualizados, mas com cariótipo incompleto. Outras células apresentavam cromossomos

justapostos, impossibilitando a análise morfológica ou contagem. Ajustes na fixação deverão permitir a correta

visualização das metáfases em bovinos. O cariótipo de células de ovinos pode ser realizado com o protocolo

desenvolvido para humanos, embora seja necessário algumas adaptações para realizar o cariótipo de células de

bovinos.

APOIO CNPq; CAPES; FACEPE

145


ANÁLISE DA VARIABILIDADE GENÉTICA EM CURIÓS (SPOROPHILA ANGOLENSIS) CRIADOS

NO VALE DO SÃO FRANCISCO

Joel Fonseca Nogueira1; Eulália Alves Barros

2; João José de Simoni Gouveia

2.


(1)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco /Graduando

em Medicina Veterinária, Universidade Federal do Vale do São Francisco; (2)

Grupo de Pesquisa em Genética

Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco /Docente, Colegiado Acadêmico de Zootecnia,

Universidade Federal do Vale do São Francisco

RESUMO O curió (Sporophila angolensis) é uma ave canora nativa da fauna brasileira bastante cobiçada pelos criadores.

Devido à importância econômica e cultural que a espécie possui, o entendimento das questões referentes à sua

evolução genética merece destaque. Tais informações podem ser acessadas por análise do pedigree, que são

facilmente obtidos uma vez que são animais criados em cativeiro. O objetivo do presente trabalho foi analisar,

utilizando informações genealógicas, a estrutura populacional e a variabilidade genética de S. angolensis oriundos

de dois criatórios localizados no Vale do São Francisco. Foram analisadas informações de 59 indivíduos de dois

criatórios particulares (devidamente registrados no IBAMA), localizados nas cidades de Petrolina-PE e Paulo

Afonso-BA. Após tabulação das informações, foi realizada a análise de consistência dos dados e geração de

gráficos utilizando os pacotes kinship2 e Pedigree, do ambiente estatístico R. O software Endog v4.8 foi utilizado

para obtenção dos seguintes parâmetros populacionais: número efetivo de fundadores (fe), número efetivo de

ancestrais (fa), contribuição de cada ancestral para a variabilidade genética da população, coeficiente de

parentesco médio (AR), coeficiente de endogamia médio (F) e estatísticas F de Wright (FIS, FST e FIT). O

pedigree final consistiu de 557 indivíduos, distribuídos em nove gerações. Os valores estimados de fe e fa foram

88 e 64, respectivamente. Ao todo 34 animais foram identificados como responsáveis por 50% da variabilidade

genética da população. A diferença observada entre os valores de fe e fa indica que está ocorrendo o uso

desbalanceado de reprodutores, sendo este um dos fatores que pode levar a diminuição da variabilidade genética

de uma população. O coeficiente de parentesco médio (AR) e o coeficiente de endogamia médio (F) para

população total foram respectivamente, 1,09% e 1,02%. Quando analisados separadamente, os valores de AR e F

estimados para o criatório de Paulo Afonso foram 1,31% e 0,89%, e para o criatório de Petrolina 1,68% e 1,13%,

respectivamente. Estes valores indicam que, embora o número de reprodutores seja reduzido, os acasalamentos

endogâmicos não estão ocorrendo de forma intensa. Para as subpopulações estudadas, os valores da estatística F

de Wright observados foram Fis= - 0,0218; Fst= 0,0134 e Fit= - 0,008, indicando que não é possível diferenciar

geneticamente as subpopulações e que a variabilidade genética tem se mantido dentro dos criatórios.

146


ANÁLISE PRELIMINAR DA MUTAÇÃO CAUSAL PARA O RAQUITISMO HIPOFOSFATÊMICO EM

OVINOS DAS RAÇAS DORPER E WHITE DORPER

Sávio Luiz Pereira Nunes1,21; João José de Simoni Gouveia1,3

2.


(1)1Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco; 2Bolsista

do Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica (PIBIC/CNPq/UNIVASF).; (2)

1Grupo de Pesquisa em

Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco; 3Docente, Colegiado Acadêmico de

Zootecnia, Universidade Federal do Vale do São Francisco.

RESUMO Os programas de melhoramento genético permitem a seleção de genótipos mais produtivos. Todavia, a presença

de alelos recessivos deletérios nas populações, junto à utilização desbalanceada de reprodutores e os

acasalamentos endogâmicos podem contribuir para o aparecimento de doenças genéticas nos rebanhos. Diversas

doenças genéticas já possuem mutação causal descrita em ovinos, tais como o Raquitismo Hipofosfatêmico,

Astenia Cutânea, Síndrome do Cordeiro Aranha e Lisencefalia e Hipoplasia Cerebelar. O Raquitismo

Hipofosfatêmico foi descrito em animais da raça Corriedale e a mutação causal descrita é uma transição (C>T) na

posição 145 do gene da Fosfoproteína 1 Acídica da Matriz da Dentina (DMP-1), que leva ao aparecimento de um

stop codon prematuro, ocasionando a produção de uma proteína truncada na região C-terminal. Dentre os

sintomas, podem ser citados: deformidades angulares nos membros, lordose torácica e redução do crescimento.

Assim, o objetivo do presente estudo foi identificar, através de PCR-RFLP, animais portadores da mutação causal

para o Raquitismo Hipofosfatêmico em rebanhos das raças Dorper e White Dorper. Para isso, foram coletadas

amostras de sangue de 48 indivíduos, sendo 22 da raça Dorper e 26 da raça White Dorper. O DNA foi extraído

utilizando um protocolo de extração salina. Para a genotipagem foi realizada uma PCR utilizando os primers 5'-

ATGGAAAATGGGGTGACTTG-3' e 5'-CATCCCTTCATCGTCGAACT-3', seguida de digestão utilizando a

enzima NlaIII. Os produtos de digestão foram submetidos à eletroforese em gel de agarose 3% por 3h a 80V e

corados com brometo de etídeo. Todos os 48 animais genotipados foram identificados como homozigotos sadios

para o Raquitismo Hipofosfatêmico, caracterizados pelo genótipo CC. Apesar de não ter sido detectado o alelo

mutante nos animais amostrados, não se pode afirmar a ausência dele nas raças estudadas. Pois, como dito

anteriormente, a doença ora analisada foi descrita inicialmente na raça Corriedale e não nas raças estudadas neste

trabalho, porém a história de formação e os níveis de admixture encontrados nas raças de ovinos modernas

permitem propor que mutações causais associadas a doenças genéticas segreguem em raças diferentes da raça

inicialmente descrita. Dessa maneira, métodos de detecção dessas mutações se prestam como ferramentas

importantes no combate ao aparecimento de doenças genéticas que prejudiquem a produção.

APOIO CNPq

147


CONECTIVIDADE GENÉTICA ENTRE POPULAÇÕES DE DROSOPHILA NEBULOSA (DIPTERA,

DROSOPHILIDAE) DA FLORESTA AMAZÔNICA E CAATINGA, DEMONSTRADA PELO

COMPARTILHAMENTO DE INVERSÕES CROMOSSÔMICAS

Rafaela Alves de Oliveira1; Geórgia Fernanda Oliveira

1; Claudia Rohde

1.



RESUMO Drosophila nebulosa é uma espécie que pertence ao grupo willistoni, sendo a única do grupo com elevada

ocorrência no ambiente semiárido da Caatinga. Isso demonstra sua alta plasticidade ecológica, já que é uma

espécie amplamente distribuída em variados ambientes da região Neotropical, desde o sul dos Estados Unidos, até

a porção central da Argentina. Por ser uma das espécies de drosofilídeos mais abundantes na Caatinga, objetivou-

se caracterizar a diversidade genética das populações locais deste bioma, em paralelo com investigações da

diversidade genética de populações de ambientes úmidos, em especial a Floresta Amazônica. Abordagens

anteriores feitas com sequências de genes mitocondriais não revelaram variabilidade capaz de diferenciar as

populações da Amazônia e da Caatinga. Na continuidade dos estudos, este trabalho se propôs a investigar as

mesmas populações quanto ao padrão de rearranjos cromossômicos, presentes no cromossomo III da espécie. As

lâminas contendo cromossomos politênicos foram preparadas a partir de células da glândula salivar de larvas em

terceiro estágio, mantidas em cultivo no Laboratório de Genética da UFPE-CAV. As coletas foram realizadas em

2008 e 2013 na Caatinga, e em 2015 na Floresta Amazônica. Os resultados indicaram que as populações da

Amazônia compartilharam rearranjos com as populações da Caatinga, especialmente uma das inversões,

denominada inv. III-C, que encontrou-se fixada nos indivíduos dos dois ambientes e não em amostras do sul do

Brasil. Os dados de ocorrência e frequência de inversões reforçam importantes premissas a respeito da

conectividade entre as florestas úmidas do Brasil (Atlântica e Amazônica) no passado e da importância dos

corredores ecológicos existentes nas regiões centrais do Brasil, dominadas nos tempos atuais pela Caatinga e

Cerrado. O fato de as populações de D. nebulosa da Caatinga possuírem os mesmos rearranjos que as populações

da Amazônia abre caminho para um aprofundamento dos padrões de conectividade, investigado por meio deste

marcador genético, visto que a presença de inversões cromossômicas está sob seleção natural devido à manutenção

de blocos gênicos, que não sofrem recombinação. A ocorrência de inversões interfere não só no sucesso de

colonização dos indivíduos que as portam, mas também na manutenção e na diferenciação genética das

populações. Assim, este estudo indica que há relação genética entre os ambientes da Amazônia e a Caatinga.

APOIO PROPESQ-UFPE.

148


DESCRIÇÃO CARIOTÍPICA DE PROCYON CANCRIVORUS (CARNIVORA: PROCYONIDAE)

Elianderson Gomes de Sá1; Palloma Lima de Oliveira

1; Gabriela Félix do Nascimento Silva

2; Kyria Cilene de

Andrade Bortoleti1; Helen Maria Duarte do Rêgo Barros

3.


(1)UNIVASF / Colegiado de Ciências Biológicas;

(2)UNIVASF / Centro de Conservação e Manejo de Fauna da

Caatinga; (3)

Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO O gênero Procyon está constituído por três espécies encontradas no continente Americano: P. lotor (Linnaeus,

1758), P. pygmaeus (Merrian, 1901) e P. cancrivorus (Cuvier, 1798), sendo esta última amplamente distribuída

entre as Américas Central e do Sul, incluindo todos os biomas brasileiros. Estudos citogenéticos estão disponíveis

somente para P. lotor, que apresenta número diploide 2n = 38 cromossomos e cariótipo constituído principalmente

por cromossomos de dois braços. A descrição do cariótipo de um táxon representa um passo inicial para o estudo

de comparações citogenéticas e, portanto, para o entendimento das alterações cromossômicas que surgem durante

a evolução dos organismos. Nesse sentido, esse trabalho teve como objetivo descrever o cariótipo de P.

cancrivorus (mão-pelada), mediante análise convencional e impregnação por nitrato de prata (AgNO3), a fim de

comparar seu complemento cromossômico com o de P. lotor. Amostras de sangue foram coletadas de sete

indivíduos de mão-pelada (quatro fêmeas e três machos) provenientes dos estados do Ceará, Pernambuco e Bahia,

mantidos no Centro de Conservação e Manejo de Fauna da Caatinga (CEMAFAUNA), em Petrolina/Pernambuco.

Para as análises cromossômicas, as preparações citológicas foram realizadas a partir da cultura de linfócitos do

sangue. Procyon cancrivorus apresentou 2n = 38, XX ou XY, com predominância de cromossomos metacêntricos

e submetacêntricos, cromossomo X de tamanho médio com morfologia metacêntrica e um pequeno Y

acrocêntrico, semelhante ao cariótipo de P. lotor. Devido à presença de 17 pares de cromossomos com dois braços

e um par com um braço, o número fundamental (NF) foi de 70, diferindo do descrito para P. lotor (16 pares com

dois braços e dois pares com um braço; NF = 74). Sítios das regiões organizadoras de nucléolo (Ag-RON) ativos

foram detectados nos braços curtos de um par de autossomos, coincidindo com o que tem sido reportado para a

espécie P. lotor. Os dados obtidos nesse estudo demonstram uniformidade no número diploide entre os

procionídeos cariotipados até o momento (quatro espécies). No entanto, diferenças no tamanho em alguns braços

cromossômicos foram observadas entre as duas espécies do gênero Procyon, as quais serão melhor investigadas

por meio de outras técnicas de coloração diferencial, permitindo um estudo citogenético comparativo mais

detalhado entre P. lotor e P. cancrivorus.

APOIO Ministério da Integração Nacional

149


DETECÇÃO DE GENES DA FAMÍLIA 'DPPA' EM EMBRIÕES E CÉLULAS SOMÁTICAS DE

BOVINOS

Pábola Santos Nascimento1; Marcelo Tigre Moura


1; Ludymila Furtado

Cantanhêde1; José Carlos Ferreira Silva

1; Maiana Silva Chaves

1; Maysa Ceci Soares Muniz

1; Elizabete Julia da

Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva


2; Cláudio Coutinho Bartolomeu

1; Marcos

Antonio Lemos de Oliveira1.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, Departamento de Medicina Veterinária, Laboratório de Biotécnicas

Aplicadas à Reprodução, Recife, PE.; (2)

Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética,

Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Recife, PE.

RESUMO A família de genes DPPAs foi identificada em embriões no período antes da implantação e posteriormente no

epiblasto, células germinativas e células-tronco embrionárias (CTE). Os DPPAs são classificados como genes

relacionados à pluripotência (GRP), ou seja, contribuem para manutenção do estado indiferenciado de embriões e

CTEs. No entanto, os DPPAs ainda não foram caracterizados em ruminantes. Objetivou-se detectar os DPPA2,

DPPA3 e DPPA4 em células do cumulus e em blastocistos bovinos. Ovários bovinos foram coletados e

transportados ao laboratório. Foi realizada a aspiração dos folículos de 2-8 mm para obtenção dos complexos-

cumulus-oophorus (CCO). Os CCOs foram selecionados quanto à presença de mais de uma camada de células do

cumulus e citoplasma homogêneo do ovócito. As células do cumulus foram obtidas através de pipetagem em PBS

e imediatamente criopreservadas em freezer -80º C. Posteriormente, CCOs foram maturados em estufa com

umidade saturada, 5% de CO2 em meio TCM199 suplementado a 38,5º C por 24 horas. Em seguida, os CCOs

foram co-incubados com espermatozóides por 18 horas, enquanto que os embriões foram cultivados em meio SOF

por sete dias nas mesmas condições descritas acima. O RNA total foi extraído de pools de 16 blastocistos ou

500.000 células do cumulus através do kit ReliaprepTM

(Promega). A síntese de cDNA foi realizada utilizando o

kit QuantiTect® (Qiagen). Os primers foram desenhados a partir de sequências de ovinos e bovinos no Genbank.

As reações de PCR foram realizadas em termociclador (Techne), com desnaturação inicial de 94º C por 5 minutos,

seguido por 35 ciclos de 94º C por minuto, 58º C por um minuto e 72º C por 1 minuto, e extensão final de 72º C

por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados em gel de agarose 1,5% corados com Blue-Green Loading Dye

(LGC Biotecnologia). A eletroforese ocorreu a 80V, 120A por 40 minutos. O gene β-actina foi utilizado como

controle positivo. Apesar do DPPA3 ser essencial para a produção de oócitos através da repressão da transcrição e

da condensação da cromatina, o mesmo não foi detectado em células do cumulus de bovinos. Por ser expresso em

ovinos, isso sugere uma diferença espécie específica. A detecção do DPPA2 e DPPA3 em blastocistos sugere

perfil de expressão semelhante em embriões e CTEs em mamíferos. Os genes DPPA2 e DPPA4 foram detectados

em células do cumulus, sugerindo possíveis efeitos parácrinos sobre os ovócitos em estádio de vesícula

germinativa.

APOIO FACEPE, CNPq e CAPES

150


DETECÇÃO DE GENES MARCADORES DE CÉLULAS DO CUMULUS E FIBROBLASTOS EM

PEQUENOS RUMINANTES

Ludymila Furtado Cantanhêde1; Marcelo Tigre Moura

1; Roberta Lane de Oliveira Silva

2; Priscila Germany

Corrêa da Silva1; Maiana Silva Chaves


1; José Carlos Ferreira da Silva

1; Maysa

Ceci Soares Muniz1; Valeska Andréa Ático Braga


2; Marcos Antônio Lemos de

Oliveira1.


(1)Laboratório de Biotécnicas aplicadas à Reprodução Animal - UFRPE;


Biotecnologia Vegetal - UFPE

RESUMO Genes com expressão tecido-específica contribuem para monitorar o processo de reprogramação celular ou

caracterizar tecidos heterogênios. O objetivo foi testar primers para genes com expressão tecido-específica em

células do cumulus e fibroblastos de pequenos ruminantes. Ovários de caprinos e ovinos foram coletados em

abatedouros. Após aspiração dos folículos em meio TCM-199 Hank's suplementado, os complexos-cumulus-

oophorus foram selecionados para maturação in vitro em meio TCM-199 com sais de Earle's suplementado em

estufa com 5% de CO2, umidade saturada a 38,5 °C por 24 horas. Após a maturação, os ovócitos foram

desnudados com 0,2% de hialuronidase e as células do cumulus foram armazenadas a -80 °C. Por sua vez, os

fibroblastos foram cultivados em meio DMEM suplementado em estufa, sob as condições descritas acima. Os

cultivos de fibroblastos foram repicados uma vez por semana, caracterizando uma passagem. Assim, na quinta

passagem, estas células foram armazenadas a -80 °C. O RNA total foi obtido com o kit ReliaprepTM

(Promega) e

realizou-se posteriormente a síntese de cDNA com o kit QuantiTect®

(Qiagen), de acordo com as recomendações

dos fabricantes. Para as reações de PCR, o cDNA foi desnaturado e a enzima Taq polimerase foi ativada a 94° C

por cinco minutos em termociclador (Biorad). Foram realizados 35 ciclos de PCR, com desnaturação a 94 °C por

um minuto, anelamento a 58 °C por um minuto, extensão a 72 °C por um minuto e a etapa final de extensão a 72

°C por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados em gel de agarose a 1,5% a 70V, 120 A por 40 minutos. Os

primers testados foram desenhados para seis genes candidatos com expressão tecido-específica: PTGS2 e HAS2

em células do cumulus, enquanto que THY1, SNAI2, AQP3 e TLR4 em fibroblastos. Foi observada a expressão

de PTGS2 em células do cumulus das duas espécies, porém HAS2 foi detectado apenas em ovinos, possivelmente

devido a polimorfismos na sequência amplificada ou baixo nível de expressão em caprinos. Apesar de THY1 não

ter sido detectado, SNAI2 foi expresso em fibroblastos de caprinos e ovinos. Este fato demonstra que SNAI2 é um

bom marcador molecular para fibroblastos de pequenos ruminantes. Os genes TLR4 e AQP3 são considerados

com expressão tecido-específica em queratinócitos na epiderme, mas TLR4 foi detectado em fibroblastos de

caprinos e ovinos. Conclui-se que os primers para os genes PTGS2, TLR4 e SNAI2 podem ser utilizados como

marcadores tecido-específicos em pequenos ruminantes.

APOIO CNPq; CAPES; FACEPE

151


DIAGNÓSTICO MOLECULAR DA LISENCEFALIA E HIPOPLASIA CEREBELAR EM OVINOS DA

RAÇA SANTA INÊS NO ESTADO DA BAHIA

Nara Nagle Vieira Gonçalves Matos1; Jean Victor Nunes Hissette

2; Flávia Caroline Moreira Bezerra

3; João José

de Simoni Gouveia4; Gisele Veneroni Gouveia

5.


(1)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Mestranda

em Ciência Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco. Bolsista da Fundação de Amparo à Ciência e

Tecnologia de Pernambuco (FACEPE).; (2)

Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade

Federal do Vale do São Francisco/ Bolsista do Programa Institucional de Bolsas de Iniciação Científica

(PIBIC/CNPq/UNIVASF).; (3)

Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do

São Francisco/ Participante do Programa Institucional de Voluntários de Iniciação Científica (PIVIC/UNIVASF); (4)

Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Docente,

Colegiado Acadêmico de Zootecnia, Universidade Federal do Vale do São Francisco.; (5)

Grupo de Pesquisa em

Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco/ Docente, Colegiado Acadêmico de

Zootecnia, Universidade Federal do Vale do São Francisco

RESUMO A ovinocultura vem se expandindo no nordeste brasileiro, contudo, faz-se necessário o desenvolvimento de

estudos que fomentem as criações. A Lisencefalia e Hipoplasia Cerebelar (LHC) é uma doença autossômica

recessiva associada à má formação do sistema nervoso central dos ovinos, devido a uma deleção de 31pb no éxon

36 do gene da reelina, que está associado à organização neuronal durante a embriogênese. O desenvolvimento das

raças modernas de ovinos está associado a altos níveis de admixture, sugerindo que mutações podem segregar em

raças diferentes das quais foram inicialmente relatadas. A história de formação do Santa Inês indica a participação

de animais originados da Península Ibérica, região onde a mutação causal foi primariamente descrita. O objetivo

deste estudo foi identificar, através de testes moleculares, animais portadores da mutação causal da LHC em

ovinos da raça Santa Inês. Para isso, foi colhido sangue de 101 animais de três propriedades no estado da Bahia.

Obteve-se o DNA utilizando-se um protocolo de extração salina. Para genotipagem, foi realizada uma PCR

utilizando os primers 5'-TTGCCTTCTCCGGTTTAATG-3' e 5'-AGGGATTTGTGATGCTGGAC-3' seguida de

eletroforese em gel de agarose a 3%, por 3h, a 80V e corados com brometo de etídeo. Todos os animais

genotipados foram identificados como homozigotos para o alelo selvagem (livres da mutação causal para a LHC).

Todavia, vale salientar, que a amostragem é relativamente pequena para que se possa inferir que não há esta

mutação na raça Santa Inês, tendo em vista que, mesmo nas raças onde já existe a descrição da doença, a

frequência do alelo mutante é relativamente baixa. A identificação de indivíduos portadores de mutações quando

realizada antes do aparecimento de animais afetados pode evitar prejuízos. Por isso, faz-se necessário que se avalie

um número maior de animais para a mutação em questão para quantificar de forma mais precisa este risco.

Portanto, torna-se evidente a importância de estudos com testes moleculares que possam identificar possíveis

mutações, guiando a realização dos acasalamentos e reduzindo possíveis prejuízos diretos e indiretos aos animais e

aos produtores.

APOIO FACEPE

152


DIVERSIDADE CARIOTÍPICA EM HYPSIBOAS (ANURA: HYLIDAE): O QUE OS CROMOSSOMOS

PODEM NOS DIZER SOBRE A EVOLUÇÃO DO GÊNERO

Millena Santos Figueredo1; Marcelle Amorim Carvalho

2; Miguel Trefault Rodrigues

3; Caroline Garcia

1.


(1)Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia;

(2)Instituto de Nacional de Pesquisas da Amazônia;

(3)Universidade

de São Paulo

RESUMO Hypsiboas é um gênero da família Hylidae, composto por 92 espécies com ampla variação morfológica. No Brasil,

estudos citogenéticos deste grupo são escassos, com apenas 20 espécies com caracterização citogenética. Este

gênero apresenta conflitos taxonômicos e filogenéticos, sendo necessária a sua análise citogenética a fim de

esclarecer mecanismos de modificação cromossômica envolvidos na diferenciação do grupo e verificar a

ocorrência de diversidade críptica, contribuindo para elucidar suas relações evolutivas. No presente estudo foram

analisadas quatro espécies de Hypsiboas (H. albomargintaus, H. crepitans, H. faber e H. pombali) de quatro

municípios da Bahia (Jequié, Maracás, Uruçuca e Santa Cruz Cabrália) e um município do Espírito Santo (Santa

Teresa), a partir da técnica de Bandamento C e de impregnação por nitrato de prata. A análise comparativa

demonstrou a manutenção de número diploide padrão para a família com 2n = 24 e NF = 48. Apesar da

semelhante morfologia cromossômica, os padrões de distribuição de heterocromatina variam tanto entre

populações quanto entre espécies diferentes. É possível observar a manutenção de blocos de heterocromatina na

região centromérica. Foi encontrada variação intraespecífica em H. albomarginatus e H. crepitans, que pode ser

reflexo de diversidade críptica. Foram observadas similaridades na distribuição de heterocromatina em populações

geograficamente próximas nestas duas espécies. Variações na localização da RON foram evidenciadas em H.

albomarginatus e H. crepitans. Além disso, H. albomarginatus apresenta as RONs no par 2 precedidas de blocos

heterocromáticos, além de distribuição de heterocromatina concentrada na região pericentromérica, com exceção

da população de Santa Teresa-ES, mais distante geograficamente; o mesmo ocorre em H. crepitans, que apresenta

maior similaridade na distribuição dos blocos heterocromáticos na região pericentromérica, além de braços

heterocromáticos nas populações da Bahia. Os resultados descritos demonstram a ocorrência de inversões

pericêntricas e paracêntricas, caracterizadas pela variação na distribuição de heterocromatina, além fissões e fusões

que resultam na diferenciação morfológica e localização das RONS. Adicionalmente, este estudo sugere relação

filogeográfica no grupo. Destaca-se a necessidade de se ampliar os estudos para outras espécies e populações, a

fim de se obter maiores evidências para estabelecimento dos mecanismos de evolução cromossômica no grupo.

APOIO CAPES

153


DIVERSIDADE GENÉTICA DE ESPÉCIES DE ACESTRORYNCHUS (CHARACIFORMES,

ACESTRORHYNCHIDAE) (BLOCH, 1794) DO RIO GURUPI MARANHÃO

Iraine Duarte de Souza1; Luis Fernando Carvalho Costa

1; Wiiliam Rodrigues de Lima

1; Israel Higino de Sousa

1.


(1)UFMA

RESUMO Os peixes da ordem Characiformes fornecem um exemplo dos complexos padrões evolutivos e biogeográficos

geralmente vistos nas faunas tropicais e subtropicais. Dentro de Characiformes, a família Acestrorhynchidae é

composta por apenas um único gênero, Acestrorhynchus. Há poucos dados sobre a ocorrência e diversidade das

espécies de Acestrorhynchus em rios do Maranhão, principalmente, quanto ao seu status taxonômico e seus níveis

de variabilidade genética. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi avaliar os níveis de diversidade genética de

espécies de Acestrorhynchus no rio Gurupi, utilizando a região controle como marcador molecular. Foram

coletados exemplares de duas espécies nas bacias do Gurupi, A. lacustris e A. heterolepis. A análise revelou 12

haplótipos diferentes para as duas espécies, com uma diversidade haplotípica de 0,000 para A. lacustris e 0,514

para A. heterolepis. O segmento da região controle do mtDNA permitiu a identificação de apenas um grupo

monofilético para as duas espécies estudadas, pois observou-se compartilhamento de haplótipos ou haplótipos

muito parecidos entre indivíduos de A. lacustris e A. heterolepis. A árvore de máxima verossimilhança mostrou

que as espécies A. heterolepis e A. lacustris formam um único clado monofilético altamente suportado. A distância

genética entre A. lacustris e A. heterolepis foi zero. Estes resultados são passíveis de diferentes interpretações.

Durante edição das sequências foi perdida uma pequena parte da região inicial polimórfica, o que poderia explicar

uma baixa diversidade haplotípica, porém, não explica porque A. lacustris e A. heterolepis se comportam como

uma única espécie. Quanto a identificação morfológica, as duas espécies são bastante diferentes entre si, de modo

que erros de identificação seriam quase improváveis. Outra hipótese é a hibridização interespecífica, pois A.

heterolepis e A. lacustris podem ter hibridizado no mtDNA, mas mantendo suas morfologias inalteradas,

pois existem similaridades reais entre os espécimes identificados como A. lacustris e A. heterolepis, que coexistem

na mesma bacia e se comportam molecularmente como uma única espécie. Entretanto, são necessários outros

marcadores nucleares para confirmar a hipótese de introgressão e uma reanálise da morfologia dos indivíduos para

rejeitar a hipótese de erro de identificação.

APOIO SISBIOTA UFMA LABGEM

154


EFEITOS GENÉTICOS SOBRE A PRODUÇÃO IN VITRO DE EMBRIÕES BOVINOS

Pábola Santos Nascimento1; Marcelo Tigre Moura


1; Ludymila Furtado

Cantanhêde1; José Carlos Ferreira Silva


1; Valeska Andrea Ático Braga

1; Maysa Ceci

Soares Muniz1; Joyce Patu de Oliveira Maciel

1; Matheus Cavalcanti Farias

1; Cláudio Coutinho Bartolomeu

1;

Marcos Antonio Lemos de Oliveira1.



Aplicadas à Reprodução, Recife, PE.

RESUMO A produção in vitro (PIV) permite aumentar o número de descendentes de fêmeas com desempenho zootécnico

superior ou com distúrbios reprodutivos adquiridos. Os procedimentos para PIV já estão relativamente definidos,

onde diversos fatores ambientais foram identificados, como composição dos meios e condições laboratoriais, que

são constantemente aperfeiçoados para elevar a produtividade da tecnologia. Apesar disso, a eficiência da PIV

permanece muito variável, quando avaliada pela quantidade e qualidade dos embriões produzidos e seu potencial

de estabelecimento de gestações. No entanto, a influência dos aspectos genéticos sobre a eficiência da PIV

permanecem pouco investigados. O objetivo foi avaliar se há efeito genético sobre a produção in vitro de embriões

bovinos. Ovários foram coletados em abatedouro e transportados ao laboratório. Folículos entre 2-8mm foram

aspirados para obtenção dos complexos-cumulus-oophorus (CCO). Os CCOs foram selecionados e maturados em

meio TCM 199 suplementado, em atmosfera de umidade saturada com 5% de CO2 a 38,5ºC por 24 horas. Em

seguida, CCOs foram submetidos à fecundação in vitro (FIV) ou ativação partenogenética (AP). Para a FIV, os

ovócitos foram co-incubados com espermatozóides do Touro 1 (T1), Touro 2 (T2), ou Touro 3 (T3) por 18 horas.

Os demais ovócitos foram desnudados com 0,2% hialuronidase para AP. Em seguida, os ovócitos foram ativados

com 5µM ionomicina por 5 minutos e depois com 2mM 6DMAP por 4-5 horas. Os zigotos foram cultivados em

meio SOF em estufa sob as condições descritas acima. No dia 3, as estruturas foram avaliadas quanto a taxa de

clivagem, no dia 5 quanto a taxa de mórulas e no dia 7 quanto a taxa de blastocistos. Os resultados foram:

clivagem AP= 88,78%A ; T1= 58,33%

B; T2=89,38%

A ; T3= 77,77%

A , mórulas AP= 28,03%

A; T1= 31,66%

A;

T2=53,09% B

e T3= 51,11% B

e blastocistos AP= 51,04%A; T1= 31,66%

B; T2= 40,70%

AB e T3= 33,33%

B. Houve

diferença entre AP e as médias de clivagem dos três touros (p=0,022); mórulas (p=0,0012) e blastocistos

(p=0,011), demonstrando a influência genética sobre o desenvolvimento e sobrevivência embrionária. Outra

evidência desta hipótese foi a diferença entre os touros quanto ao desenvolvimento nos estádios iniciais (clivagem

e mórula), apesar dos três touros terem desempenho semelhante na produção de blastocistos. Conclui-se que

fatores genéticos tem efeito sobre a eficiência da produção in vitro de embriões bovinos.

APOIO FACEPE, CNPq e CAPES.

155


ESTRUTURA POPULACIONAL EM OVINOS DA RAÇA DORPER ORIUNDOS DE REBANHOS

LOCALIZADOS NA REGIÃO NORDESTE DO BRASIL

João Luiz Pereira de Souza Filho1; Joel Fonseca Nogueira

2; Eulália Alves Barros

3; Taís Jobard Silva e Macedo

4;

João José de Simoni Gouveia3.


(1)Grupo de Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco;

(2)Grupo de

Pesquisa em Genética Animal Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco / 2Graduando em

Medicina Veterinária, Universidade Federal do Vale do São Francisco; (3)

Grupo de Pesquisa em Genética Animal

Aplicada, Universidade Federal do Vale do São Francisco / Docente, Colegiado Acadêmico de Zootecnia,

Universidade Federal do Vale do São Francisco; (4)

Doutoranda em Biotecnologia em Agropecuária, Rede Nordeste

de Biotecnologia

RESUMO A ovinocultura possui um importante papel econômico na região Nordeste do Brasil e a raça Dorper tem se

destacado, principalmente, em cruzamentos como alternativa para incrementar a produção de carne. Os estudos

buscando entender os efeitos da endogamia em ovinos da raça Dorper no Brasil podem ser considerados

incipientes. Assim, o objetivo deste estudo foi estimar parâmetros populacionais em ovinos da raça Dorper em três

rebanhos localizados na região Nordeste do Brasil. Para isso, foram utilizadas informações genealógicas de 537

animais da raça Dorper pertencentes a três rebanhos localizados nos estados de Sergipe, Pernambuco e Bahia. A

identificação única de cada animal foi utilizada para acessar as informações genealógicas disponíveis no banco de

dados da Associação Brasileira de Criadores de Ovinos (ARCO) e o pedigree final consistiu de 1200 animais. A

análise de consistência dos dados e a geração dos pedigrees foram realizadas utilizando os pacotes kinship2 e

Pedigree do ambiente estatístico R, e o software Endog v4.8 foi utilizado para o cálculo dos seguintes parâmetros

populacionais: número efetivo de fundadores e ancestrais, coeficientes de endogamia, contribuição de cada

ancestral para a variabilidade genética da população e estatísticas F de Wright. O número efetivo estimado de

fundadores (fe) foi 86 e de ancestrais (fa) 64. A diferença encontrada entre os valores de fe e fa sugere uma

diminuição na variabilidade genética na população em decorrência do uso desbalanceado de reprodutores. Apenas

25 ancestrais foram responsáveis por 50% da variabilidade genética, o que também indica a utilização de forma

mais intensa de poucos reprodutores na formação da população estudada. Entretanto, o coeficiente médio de

endogamia (F) para a população foi de 0,0095 e os valores de F estimados para os três rebanhos separadamente

foram 0,019; 0,020 e 0,000, respectivamente. Tomados em conjunto, os valores de F juntamente com os valores

do coeficiente de endogamia de Wright (-0,024; 0,021 e -0,003, para FIS, FST e FIT, respectivamente) sugerem

que embora a base genética para formação dos rebanhos analisados seja pequena, a subdivisão populacional é

fraca e os acasalamentos estão sendo conduzidos de forma a evitar o aumento da endogamia. Por fim, deve-se

ressaltar que o presente estudo deve ser expandido para permitir a compreensão mais profunda da estrutura

populacional e da variabilidade genética de ovinos da raça Dorper na região Nordeste do Brasil.

APOIO Univasf.

156


ESTUDO CROMOSSÔMICO EVOLUTIVO DE EURYSTERNUS HIRTELLUS (COLEOPTERA:

SCARABAEIDAE)

Moara Rodrigues Costa1; Igor Costa de Amorim

1; Rita de Cássia de Moura

1.


(1)Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Universidade de Pernambuco (UPE); Programa de Pós-

Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE)

RESUMO O gênero Eurysternus (Coleoptera: Scarabaeidae) possui 53 espécies e é endêmico da região Neotropical. Nesse

gênero, a análise citogenética foi realizada apenas em duas espécies e revelou a presença de cariótipos derivados,

sendo 2n=12, Xyp em E. hirtellus e 2n=8, neo-XY em E. caribaeus. Nesta última espécie também foi feito o

mapeamento de alguns genes de famílias multigênicas. O objetivo deste trabalho foi mapear as sequências de

DNAr 18S, 5S e histona H3 em E. hirtellus e comparar com os resultados observados em E. caribaeus, visando

esclarecer os mecanismos envolvidos na evolução cromossômica do gênero Eurysternus. Nesse estudo foram

analisados seis indivíduos coletados na RPPN Mata Estrela - RN. A FISH foi realizada usando sondas de DNAr

18S, 5S e histona H3, marcadas com biotina-14-dATP (Invitrogen) ou digoxigenina-11-dUTP (Roche) e

detectadas com FITC-avidina (Invitrogen) ou com rodamina associada a anti-digoxigenina (Roche). Os resultados

revelaram a localização do DNAr 18S na região pericentromérica do terceiro par acrocêntrico, enquanto que

DNAr 5S e histona H3 foram co-localizados na região pericentromérica do segundo par submetacêntrico. Estes

resultados diferem do observado em E. caribaeus, onde esses genes estão restritos aos cromossomos sexuais,

estando o DNAr 18S localizado no X e no Y, enquanto o DNAr 5S e histona H3 estão co-localizados no X. Os

dados da localização das famílias multigênicas e a análise dos cariótipos das duas espécies indicam que a redução

do número diploide 2n=20, Xyp, considerado ancestral para Coleoptera e família Scarabaeidae, para 2n=12, Xyp

em E. hirtellus foi devido, provavelmente, a ocorrência de inversões pericêntricas seguidas de fusões cêntricas

entre autossomos, mantendo assim o mecanismo sexual. Já a redução para 2n=8, neo-XY em E. caribaeus foi

decorrente de inversões pericêntricas seguidas de fusões cêntricas autossomos-autossomos e de uma fusão cêntrica

entre o terceiro par autossômico e o X, alterando o mecanismo sexual e transferindo o sítio de DNAr 18S para os

cromossomos X e Y de E. caribaeus. Em relação aos genes de DNAr 5S e histona H3, a localização desses sítios

no cromossomo X de E. caribaeus está, provavelmente, relacionada à recombinação ectópica ou elementos

transponíveis, diferindo do encontrado para E. hirtellus. Os dados apresentados neste estudo contribuíram para

uma melhor compreensão da evolução cariotípica em espécies do gênero Eurysternus.

APOIO FACEPE, CNPq e CAPES.

157


EVIDÊNCIAS CROMOSSÔMICAS E MOLECULARES DE ESPECIAÇÃO CRÍPTICA EM

EUCHROMA GIGANTEA (BUPRESTIDAE, COLEOPTERA)

Crislaine Xavier1; Rógean Vinícius Santos Soares

2; Diogo Cavalcanti Cabral de Mello

3; Rita de Cássia de

Moura2.


(1)Programa de Pós-graduação em Genética, Centro de Biociências, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),

Recife -PE / Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade

de Pernambuco (UPE), Recife-PE ; (2)

Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Instituto de Ciências

Biológicas, Universidade de Pernambuco (UPE), Recife-PE ; (3)

GECEA, Departamento de Biologia, Instituto de

Biociências/IB, Universidade Estadual Paulista (UNESP), Rio Claro-SP

RESUMO Euchroma Solier, 1833 (Buprestidae, Coleoptera) é um gênero monotípico para E. gigantea, que possui grande

polimorfismo cromossômico com seis cariótipos descritos. Neste trabalho, espécimes coletados em Recife-PE,

Maceió-AL, Belém-PA, Ribeirão Preto-SP e Brasília-DF foram cariotipados e analisados por hibridização in situ

fluorescente (FISH) com sondas de DNAr 18S e histonas (H3/H4), a fim de analisar a distribuição dos marcadores

nos cariótipos e os rearranjos envolvidos na evolução cariotípica da espécie. Além disso, os indivíduos foram

analisados filogeneticamente a partir de um fragmento do gene Citocromo oxidase I. Foram observados os

números diploides 2n=22(DF), 24(DF), 26(SP),32(PA), 34(PE,PA), 35(AL) e 36(AL,PE), com mecanismo sexual

múltiplo com cinco, seis ou oito cromossomos em cadeia. Apenas os cariótipos 2n=22 e 24(DF) não apresentaram

cromossomos B. A localização dos sítios de DNAr variou entre os diferentes cariótipos e indivíduos com mesmo

cariótipo. Espécimes de DF, SP e PE apresentaram dois sinais em autossomos, os de PA variaram de quatro a seis

sinais em autossomos e os de AL exibiram de dois a quatro sinais em autossomos e no X3. Os sítios de histonas

foram observados nas regiões centroméricas de todos os cromossomos de diferentes cariótipos. As análises

filogenéticas indicaram a formação dos grupos Norte, Nordeste e Centro Oeste/Sudeste, onde indivíduos de

distintos cariótipos compartilharam haplótipos e espécimes com mesmo número diploide apresentaram-se em

grupos diferentes. O alto grau de polimorfismo, considerando os números diploides apresentados por E. gigantea,

deve-se à ocorrência de rearranjos como inversões pericêntricas, fusões e fissões, além de translocações

robertsonianas, que são responsáveis pela variação nas cadeias de cromossomos sexuais. A variabilidade na

distribuição de sítios de DNAr e a conservação dos sítios de histonas não contribuíram na indicação do tipo de

rearranjo predominante. Esta variação pode ser decorrente de mecanismos como recombinações ectópicas ou

atividade de elementos de transposição. Por sua vez, a presença de Bs em todos os cariótipos, exceto nos de DF

sugere que fatores ambientais podem estar atuando na dinâmica desses elementos. Os dados apresentados indicam

a ocorrência de especiação críptica no gênero Euchroma. Assim, visando confirmar o status taxonômico de E.

gigantea e elucidar os mecanismos responsáveis pelo alto polimorfismo, outros marcadores genéticos estão sendo

utilizados.

APOIO CAPES, CNPq, FACEPE, FAPESP.

158


EXPRESSÃO DOS FATORES DE TRANSCRIÇÃO ZFX, ZFP281 E RONIN EM BLASTOCISTOS DE

BOVINOS

Priscila Germany Corrêa da Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva


1; Ludymila Furtado

Cantanhêde1; José Carlos Ferreira da Silva



1; Maiana

Silva Chaves1; Ana Maria Benko Iseppon

2; Marcos Antonio Lemos de Oliveira

1.


(1)Laboratório de Biotécnicas Aplicadas à Reprodução, Departamento de Medicina Veterinária, Universidade

Federal Rural de Pernambuco; (2)

Laboratório de Genética Vegetal e Biotecnologia Vegetal, Departamento de

Genética, Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO Os genes que controlam o desenvolvimento embrionário inicial de mamíferos são representados, quase que

exclusivamente, por fatores de transcrição (FT). Os genes ZFX, ZFP281 e RONIN são FTs caracterizados em

diversos tipos celulares de camundongos e humanos, incluindo embriões e células-tronco embrionárias. Estes FTs

regulam processos celulares como metabolismo e controle do ciclo celular. Apesar disso, apenas ZFX tem sido

caracterizado em bovinos, sendo utilizado em ensaios para sexagem de embriões. O objetivo foi avaliar a

expressão dos genes ZFX, ZFP281 e RONIN em blastocistos bovinos. Ovários foram coletados em abatedouros e

os complexos cumulus oophorus (CCO)s foram aspirados em meio TCM-199 Hank's suplementado com 10% de

soro fetal bovino (SFB), 2mM L-glutamina e antibióticos. Os CCOs foram selecionados e maturados em TCM-

199 com sais de Earle's suplementado com 10% SFB, 2mM L-Glutamina, e antibióticos em estufa com 5% de

CO2, umidade saturada e 38,5 °C por 24 horas. Os CCOs foram submetidos a fecundação in vitro por 18 horas em

estufa conforme descrito acima. Os presumíveis zigotos foram cultivados em meio SOF em estufa conforme

descrito acima por nove dias (D9). O RNA total foi extraído com kit ReliaprepTM

(Promega) a partir um pool de

16 blastocistos D9. A síntese de cDNA foi realizada utilizando o kit QuantiTect® (

Qiagen), conforme o fabricante.

As reações de PCR foram realizadas com desnaturação inicial a 94° C por 5 minutos, seguido por 35 ciclos de 94°

C por 1 minuto, anelamento a 58 °C por 1 minuto e extensão a 72 °C por 1 minuto. A etapa final de extensão foi a

72 °C por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados através da eletroforese em gel de agarose a 1,5% corados

com Blue-Green Loading Dye (LGC Biotecnologia) a 80V, 120 A por 40 minutos. Os genes TBP e SDHA foram

utilizados como controles positivos nas reações de PCR. Os genes ZFX, ZFP281 e RONIN foram detectados em

blastocistos, sugerindo que tenham funções importantes neste estádio do desenvolvimento bovino. Em conclusão,

ZFX, ZFP281 e RONIN são fatores de transcrição expressos em blastocistos bovinos antes do período de

implantação. A análise por PCR em tempo real durante as fases iniciais do desenvolvimento embrionário permitirá

uma melhor caracterização destes genes.

APOIO UFRPE, CAPES, CNPq e FACEPE.

159


EXPRESSÃO DE GENES RELACIONADOS À PLURIPOTÊNCIA DURANTE O

DESENVOLVIMENTO EMBRIONÁRIO DE OVINOS

Marcelo Tigre Moura1; Roberta Lane de Oliveira Silva

2; Ludymila Furtado Cantanhêde

1; Jéssica Barboza da

Silva2; Priscila Germany Corrêa da Silva


1; José Carlos Ferreira Silva

1; Maysa Ceci

Soares Muniz1; Valeska Andrea Ático Braga



2; Marcos

Antonio Lemos de Oliveira1.




Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética,


RESUMO Os genes relacionados à pluripotência (GRP) atuam na formação dos gametas e controle do estado indiferenciado

de embriões e células-tronco embrionárias. As funções dos GRPs têm recebido grande atenção em camundongos

e humanos, porém em ovinos, apenas alguns GRPs foram detectados em embriões e suas atividades são pouco

conhecidas. Deste modo, objetivou-se analisar a expressão de GRPs OCT4, SALL4, DPPA3, RONIN, KLF4,

KLF5 e ZFP281 em ovócitos e embriões de ovinos. Ovários foram coletados em abatedouros e transportados ao

laboratório. Folículos de 2-6 mm foram aspirados para obtenção dos complexos-cumulus-oophorus (CCO), os

quais foram selecionados e posteriormente maturados em meio TCM199 com sais de Earle's, suplementado com

10% de soro fetal bovino, 5µg mL-1 de pFSH, 2mM de L-glutamina e antibióticos, sendo armazenados em estufa

com umidade saturada, 5% de CO2 a 38,5 °C, por 24 horas. Em seguida, os ovócitos foram desnudados com 0,2%

de hialuronidase e pipitagem, sendo ativados com 5µM de ionomicina por 5 minutos e 2mM de 6-DMAP por 3

horas. Os presumíveis zigotos foram cultivados em meio SOFaa em estufa com umidade saturada, 5% de CO2 a

38,5 °C. Os embriões foram avaliados no terceiro dia (D3) de cultivo quanto à taxa de clivagem e no sétimo dia

(D7) quanto à formação de blastocistos. O RNA total foi extraído com kit ReliaprepTM

(Promega), a partir de pools

de 50 ovócitos ou 15 embriões D3 ou dois embriões D7. A síntese de cDNA foi realizada com o kit QuantiTect®

(Qiagen), conforme recomendações do fabricante. Por sua vez, as reações foram realizadas em termociclador

(Techne) com desnaturação inicial de 5 minutos a 95 °C e 35 ciclos de 95 °C por um minuto, 58 °C por um

minuto, 72 °C por um minuto, e extensão final a 72 °C por 10 minutos. Os amplicons foram visualizados por meio

de eletroforese em gel de agarose a 1,5% a 60V, 120A por 40 minutos. Os genes detectados em ovócitos foram

RONIN, ZFP281, SALL4, KLF4, KLF5 e SOX2, bem como estes GRPs foram detectados em embriões clivados e

blastocistos. OCT4 não foi detectado, sugerindo baixa expressão em gametas e embriões ovinos. Em conclusão,

diversos genes relacionados à pluripotência foram detectados durante o desenvolvimento embrionário de ovinos e

apresentaram perfil de expressão semelhante em embriões de diferentes estádios de desenvolvimento.

APOIO UFRPE, CAPES, CNPQ e FACEPE.

160


EXPRESSÃO ENDÓGENA DE GENES RELACIONADOS À PLURIPOTÊNCIA EM FIBROBLASTOS

DE PEQUENOS RUMINANTES

Marcelo Tigre Moura1; Roberta Lane de Oliveira Silva

2; Ludymila Furtado Cantanhêde

1; Priscila Germany

Corrêa da Silva1; José Carlos Ferreira da Silva



1;

Maysa Ceci Soares Muniz1; Maiana Silva Chaves


2; Marcos Antonio Lemos de

Oliveira1.




Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética,


RESUMO A atividade dos genes relacionados à pluripotência (GRP) mantém o estado indiferenciado de embriões e células-

tronco pluripotentes. Além disso, a expressão exógena dos GRPs OCT4, SOX2, C-MYC e KLF4 em células

somáticas permite convertê-las em células pluripotentes induzidas. Apesar da crescente elucidação sobre a

atividade e funções dos GRPs em embriões e células-tronco pluripotentes, pouco se conhece sobre os GRPs em

células somáticas. Assim, objetivou-se analisar a expressão de 25 GRPs em fibroblastos de caprinos e ovinos. Os

fibroblastos foram isolados e cultivados em meio DMEM suplementado com 10% de soro fetal bovino e

antibióticos, em estufa com 5% de CO2, umidade saturada e 38,5 °C. Cultivos de fibroblastos de ovinos na quinta

passagem e fibroblastos de caprinos na primeira passagem foram usados para a análise da expressão gênica por

PCR. A extração do RNA total foi feita através do kit ReliaprepTM

(Promega), utilizando pools de

aproximadamente 500.000 células. Para a síntese de cDNA foi utilizado o kit QuantiTect®

(Qiagen), usando 500

ng/µL de RNA. Por sua vez, as reações de RT-PCR foram realizadas em termociclador (Techne). A ativação da

Taq polimerase foi realizada a 94 °C por 5 minutos, seguido por 35 ciclos de 94 °C por 1 minuto, anelamento a

58-60 °C por 1 minuto, extensão a 72 °C por 1 minuto, com a etapa final de extensão a 72 °C por 10 minutos. Os

amplicons foram visualizados em gel de agarose a 1,5%, corados com Blue-Green Loading Dye (LGC

Biotecnologia) em eletroforese a 70V, 120A por 40 minutos. Os genes TBP e SNAI2 foram utilizados como

controles positivos da RT-PCR. Oito GRPs dos 25 analisados foram detectados em fibroblastos ovinos (32%), os

quais foram RONIN, ZFP281, KLF4, KLF5, DPPA2, C-MYC, ZFX e TCF3. As análises em caprinos

demonstraram que os mesmos oito GRPs foram expressos na espécie, indicando que o perfil de expressão dos

GRPs é conservado em pequenos ruminantes. Conclui-se que um grande percentual dos genes relacionados à

pluripotência são expressos em células somáticas de pequenos ruminantes, possibilitando que este conhecimento

contribua para elucidar os mecanismos de pluripotência e reprogramação celular neste grupo de animais.

APOIO UFRPE, CAPES, CNPQ e FACEPE.

161


FILOGEOGRAFIA DE ARTIBEUS PLANIROSTRIS (CHIROPTERA, PHYLLOSTOMIDAE):

INFLUÊNCIA DOS ANDES E DA DIAGONAL SECA NEOTROPICAL

Francisco Geraldo de Carvalho Neto1; Maria de Mascena Diniz Maia

2; Ana Cristina Lauer Garcia

3; Valdir de

Queiroz Balbino1; Martin Alejandro Montes

2; Neide Santos

1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco. Avenida Prof. Moraes Rego, 1235. Recife -

PE, Brasil; (2)

Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco. Rua Dom Manoel de

Medeiros, s/n. Recife - PE, Brasil; (3)

Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco. Rua

Alto do Reservatório, s/n.Vitória de Santo Antão, Recife - PE, Brasil

RESUMO A Região Neotropical sofreu diferentes eventos naturais que causaram uma complexa dispersão da biota. A Ordem

Chiroptera, que é uma das mais representativas na região, em termos de número de espécies, apresenta forte

relevância no campo da Biogeografia, já que exibe distintas histórias evolutivas quando comparada a outros

mamíferos. Esta diferenciação deve-se a capacidade de voo, que garante alta vagilidade e variedade de guildas que

permitiu a radiação do grupo. Artibeus planirostris Spix, 1823 é uma das espécies mais comuns em levantamentos

de fauna e ocorre ao longo da América do Sul e Antilhas, contudo não há estudo que avaliou especificamente sua

filogeografia. Diante deste cenário, este estudo objetivou descrever o padrão filogeográfico, estrutura populacional

e história demográfica de A. Planirostris com base no gene mitocondrial Citocromo B. Foram captadas do

genbank 90 sequências e mais 22 haplótipos foram gerados neste estudo. A partir de um conjunto de dados de 112

sequências de 41 localidades, que compreendem toda a distribuição da espécie, foram geradas árvores

filogeográficas com os algoritmos de Inferência Bayesiana, Máxima Verossimilhança e Neighbor Joining. A

estrutura populacional foi avaliada a partir de Análise Molecular de Variância (AMOVA) e a história demográfica

foi observada com base em testes de neutralidade e datação molecular. Nossos resultados mostraram topologia

idêntica para as árvores. Elas apresentaram uma divisão em dois grupos principais datada em 3,4 milhões de anos,

o primeiro com amostras exclusivas da porção oeste dos Andes e o segundo com amostras ao leste dos Andes. Este

sudivide-se na diagonal seca neotropical em 2,12 milhões de anos com amostras da porção leste da Amazônia mais

Antilhas e Florestas secas mais Floresta Atlântica. Com base nesta divisão, a AMOVA revelou forte estruturação

(Fst=0,47) e os testes de neutralidade (Tajima e Fs) indicaram expansão populacional. Nosso estudo sugere que a

diferenciação genética de A. planirostris é reflexo de efeitos de vicariância causados pela elevação dos Andes e

formação do cinturão seco na América do Sul, pois as datações coincidem com os eventos.

APOIO CAPES; UFPE; UFRPE.

162


FLUXO GÊNICO E DIFERENCIAÇÃO GENÉTICA ENTRE POPULAÇÕES NATURAIS DE

DICHOTOMIUS (L.) AFF. IRINUS (COLEOPTERA: SCARABAEIDAE)

Félix, Ap1; Amorim, Ic

2; Cruz, Gas

1; Moura, Rc

1.


(1)Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, ICB, Universidade de Pernambuco, UPE;

(2)Programa de

Pós-graduação em Genética, CB, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE

RESUMO A espécie Dichotomius (L.) aff. irinus é endêmica da Mata Atlântica e desempenha um papel ecológico importante

no funcionamento do ecossistema através da aeração do solo e decomposição de matéria orgânica. O objetivo do

presente estudo foi analisar a estrutura genética de quatro populações de D. (L.) aff. irinus ocorrentes em

fragmentos de Mata Atlântica, por meio da utilização do marcador ISSR (Inter Simple Sequence Repeat). Foram

coletados 120 indivíduos por meio de armadilhas do tipo pitfall, sendo 30 representantes de cada população de:

RECD (Igarassu - PE), SAT (Tamandaré - PE) e ALD (Aldeia - Camaragibe) localizadas em fragmentos de Mata

Atlântica stricto sensu e BMD (Brejo da Madre de Deus - PE) e de brejo de altitude. As análises foram realizadas

a partir da extração do DNA, seguida de amplificação via PCR (Polymerase chain reaction) a partir da aplicação

de seis primers, com duas reações independentes para testar a reprodutibilidade do marcador. Foram analisados o

índice de diversidade genética (Dg), Heterozigosidade esperada (HE), índice de fixação (FST), distribuição da

variância molecular (AMOVA) além da realização de teste de Mantel. O valor de Dg=53% e HE=0.32 indicaram

níveis moderados de diversidade genética. O valor de FST=0.08 somado a distribuição da variância molecular

(AMOVA) onde foi observado que 92.2% está dentro das populações e apenas 7.8% entre essas, sugerem ausência

de diferenciação genética entre as populações. Por outro lado, considerando os valores pairwise de FST foi

observado índices moderados de diferenciação genética entre as populações de BMD-ALD=0.11 e RECD-

ALD=0.09. O teste de Mantel indicou que não existe correlação positiva entre as distâncias genética e geográfica.

Os dados obtidos indicaram evidência de fluxo gênico histórico entre as populações SAT e RECD, porém apontam

para diferenciação genética entre BMD-ALD e entre RECD-ALD, apesar destas duas últimas serem próximas

geograficamente. Para fins de conservação, inicialmente os dados sugerem que as populações SAT e RECD

formam uma unidade de manejo, devendo BMD e ALD serem manejadas separadamente. Estudos

complementares baseados em um maior número de populações e marcadores estão sendo realizados, com o intuito

de contribuir na determinação do status de conservação de D. (L.) aff. irinus.

APOIO CNPq, CAPES e FACEPE

163


GENÓTIPOS DO GENE LACTOPEROXIDASE ASSOCIADOS A VARIAÇÃO DA PRODUÇÃO

LEITERA EM BOVINOS DA RAÇA GIROLANDO 5/8 E HOLANDÊS

Edyjoelson Phelipe de Morais Luna1; Wellington Bizarria dos Santos

1; Wellison Jarles da Silva Diniz

2; Luciana

Florêncio Vilaça1; Maria das Dores Silva Araújo

1; Kleber Régis Santoro

1; Sebastião Inocêncio Guido

3; Júlio

César Vieira de Oliveira4.


(1)UFRPE/UAG Universidade Federal Rural de Pernambuco Unidade Acadêmica de Garanhuns;

(2)UFSCAR

Universidade Federal de São Carlos; (3)

IPAARCOVERDE Instituto Agronômico de Pernambuco; (4)

IPA SÃO

BENTO DO UNA Instituto Agronômico de Pernambuco

RESUMO O gene Lactoperoxidase (LPO) está ligado a funções bactericidas, além de estar associado à resistência à mastite e

produção de leite, tornando-o candidato para identificação de marcadores genéticos. Assim, este trabalho teve por

objetivo avaliar os polimorfismos do LPO e associá-los à produção de leite em animais da raça Girolando e

Holandês, em Pernambuco. Foram coletadas 38.040 observações de produção de leite diária em litros/dia (média

20,73±6,65), no período de 2006 a 2014, provenientes de 119 animais, os quais 37 da raça Holandesa e 82 da raça

Girolando. Foi realizada análise de variância dos dados por meio da ANOVA e utilizando um modelo linear misto

pelo procedimento MIXED do SAS 9.3., retiramos os efeitos aditivos de outros genótipos e estimamos os efeitos

de cada genótipo, possibilitando a associação dos polimorfismos à produção de leite. As diferenças entre os

valores dos perfis médios dos padrões foram testadas por meio do test t (LSD) a 5% de significância. As

frequências genotípicas observadas resultaram em três genótipos: aa, bb e ac, onde, respectivamente, os valores

encontrados para as frequências no rebanho Girolando foram: 64,24%, 24,79% e 10,97%, e para o Holandês:

81,08%, 10,81% e 8,11%, destacando a maior frequência genotípica ao aa em ambos rebanhos. Os resultados da

análise de variância para ambos os rebanhos, demonstraram que o efeito dos polimorfismos sobre a produção de

leite foi significativo (p <0001). Realizado o teste t de médias produtivas (l/dia) para os três genótipos: aa, bb e ac,

onde, respectivamente, os valores encontrados no rebanho Girolando foram 8,1455, 10,6204 e 7,3357 e para o

Holandês 19,7282, 17,4235 e 18,9783. Observou-se que para o rebanho Girolando, o genótipo bb esteve associado

à maior produtividade leiteira e ac à menor produtividade, já para o rebanho Holandês os resultados diferiram do

outro rebanho, aa à maior produtividade leiteira e bb à menor produtividade. Portanto, determinar polimorfismos

associados à produção de leite é relevante, pois poderá ser utilizado como ferramenta para a seleção e

melhoramento dos rebanhos leiteiros, possibilitando obter o possível aumento da produtividade por meio de

ganhos genéticos.

APOIO Cnpq, Ufrpe

164


IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO DE SEQUÊNCIAS REPETITIVAS NO GENOMA DE

DICHOTOMIUS (LUEDERWALDTINIA) SCHIFFLERI (COLEOPTERA: SCARABAEIDAE) E

FILOGENIA DOS ELEMENTOS GYPSY E TC1-MARINER

Igor Costa de Amorim1; Rita de Cássia de Moura

1; Gabriel da Luz Wallau

2.


(1)Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Pernambuco;

Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos - Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de

Pernambuco, Recife, PE - Brasil; (2)

Departamento de Entomologia, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães -

FIOCRUZ, Recife, PE, Brasil

RESUMO O genoma dos eucariontes é formado em grande parte por sequências repetitivas que estão organizadas in tandem

ou dispersas, como os elementos de transposição (TEs). Os TEs têm sido relacionados à evolução do genoma de

diversas espécies, uma vez que seu mecanismo de mobilização pode gerar variabilidade genética no genoma do

hospedeiro. O objetivo desse estudo foi sequenciar e caracterizar o genoma repetitivo de Dichotomius

(Luederwaldtinia) schiffleri (Coleoptera), visando selecionar elementos transponíveis conservados e, que

possivelmente estejam ativos e relacionados com o dinamismo da heterocromatina constitutiva no gênero

Dichotomius. O sequenciamento foi realizado na plataforma Illumina e a caracterização das sequências repetitivas

no RepeatExplorer. Além disso, foi realizada uma busca por elementos homólogos no NCBI e uma análise

filogenética dos elementos com maior número de domínios conservados. As árvores filogenéticas foram

construídas a partir de máxima verossimilhança. O sequenciamento e a caracterização do genoma repetitivo

revelaram uma alta proporção de sequências repetitivas. Em relação aos elementos transponíveis, foi identificada

uma maior abundância de retrotransposons em relação aos transposons de DNA, 13 superfamílias de elementos e

diferentes domínios conservados, sendo a transcriptase reversa e o DDE (região com três aminoácidos,

Asparagina-Asparagine-Glutamina), mais comuns para os retrotransposons e transposons de DNA,

respectivamente. Os elementos com maior quantidade e diversidade de domínios conservados pertencem às

superfamílias Gypsy e Mariner. Além disso, foi observada uma similaridade com as sequências de elementos de

espécies filogeneticamente distantes, incluindo fungos e vertebrados. A análise filogenética dos elementos Gypsy

e Tc1-Mariner indicou possíveis eventos de transferência horizontal desses elementos. O sequenciamento e

caracterização das sequências repetitivas de Dichotomius (L) schiffleri permitiu identificar possíveis elementos

ativos no genoma dessa espécie.

APOIO CAPES; FACEPE; CNPq

165


IDENTIFICAÇÃO GENÉTICA DAS SEMENTES DE OSTRAS OBTIDAS ATRAVÉS DE COLETORES

ARTIFICIAIS NO MUNICÍPIO DE RAPOSA-MA

Elidy Rayane de Rezende França1; Bruno Leite Rodrigues

2; Rodolf Gabriel Prazeres Silva Lopes

1; Ícaro Gomes

Antonio1.


(1)Universidade Estadual do Maranhão (UEMA);

(2)Universidade Federal do Maranhão (UFMA)

RESUMO As ostras do gênero Crassostrea (Sacco 1897) são exploradas rudimentarmente pelas comunidades tradicionais,

sem a preocupação da utilização de medidas de manejo que garantam um uso sustentável. A obtenção de sementes

através de coletores artificiais não distingue entre as espécies coletadas, podendo obter sementes de todas as

espécies de ostras presentes no ambiente natural. O presente trabalho teve como objetivo analisar as sementes

obtidas no ambiente natural através de coletores artificiais, avaliando a influência do tipo de coletor, bem como do

local de coleta, sob a especificidade das sementes coletadas. Para isso, foram utilizados marcadores mitocondriais

com o intuito de caracterizar as espécies coletadas em função das variantes utilizadas na coleta. As sementes de

ostras foram coletadas no município de Raposa-Maranhão. Estas sementes foram obtidas em dois locais de coleta

(Mangue-Porto), os quais diferem principalmente em relação à salinidade e a força da corrente. Em cada local de

coleta foram utilizados 2 tipos de coletores, com 3 repetições cada. As sementes coletadas foram separadas por

coletor e local de coleta, e preservadas em álcool absoluto, em seguida foram iniciados os procedimentos de

extração do DNA genômico. Avaliou-se a sensibilidade e especificidade do protocolo utilizado, detectando DNA

da C. gasar em baixas concentrações de DNA, e Crassostrea sp. em concentrações bem menores. Os resultados

demonstram que a técnica de PCR Multiplex se mostrou eficaz na detecção de DNA, em concentrações

equivalentes a de uma única semente de cada espécie, separados e combinados, ou quando misturado com extrato

de DNA total de uma amostragem. O protocolo proposto representa uma importante ferramenta para o

monitoramento contínuo do ciclo de vida das espécies, detectando variações temporais e espaciais das sementes

disponíveis no local de coleta para cada espécie. Assim, confirmando a aplicabilidade da metodologia, a

ferramenta se torna importante para a aquicultura ou em programas de conservação, que permitam o

monitoramento contínuo do ciclo de vida de C. gasar e Crassostrea sp., detectando os períodos certos de liberação

larval e de assentamento das espécies.

APOIO FAPEMA

166


IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE WOLBACHIA PIPIENTIS EM AMOSTRAS RECENTES DE

DROSOPHILA WILLISTONI (DIPTERA, DROSOPHILIDAE)

Zilpa das Graças Silva de Melo1; Ana Patrícia da Costa

2; Wedja Kelly de Melo Vasconcelos

2; Rita de Cássia de

Moura3; Cláudia Rohde

2.


(1)Programa de Pós-Graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE);

(2)Laboratório de

Genética, Centro Acadêmico de Vitória, UFPE; (3)

Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos,

Universidade de Pernambuco (UPE)

RESUMO Wolbachia pipientis é um endossimbionte comum de insetos, e algumas cepas são conhecidas por proteger seus

hospedeiros de alguns vírus e outros parasitas. Este efeito foi relatado pela primeira vez em Drosophila e tem sido

extensivamente estudado principalmente em duas espécies do velho mundo (Drosophila simulans e Drosophila

melanogaster) onde a presença da infecção foi relacionada com o aumento da sobrevivência dos drosofilídeos e

redução das infecções virais. Por outro lado, diferentes cepas da bactéria, como as denominadas wRi e wHa,

podem induzir incompatibilidade citoplasmática de seus hospedeiros, influenciando seu desenvolvimento, a

dinâmica populacional e evolução das espécies. A identificação de estirpes de Wolbachia com ocorrência em

populações naturais de Drosophila pode ser útil para entender processos e mecanismos evolutivos associados às

espécies de drosofilídeos. O objetivo deste trabalho foi conhecer melhor a dinâmica evolutiva entre o

endossimbionte e o hospedeiro Drosophila willistoni, considerada uma das espécies mais abundantes nas florestas

úmidas do Brasil. Vinte e cinco linhagens pertencentes a oito populações recentemente coletadas de D. willistoni

oriundas dos estados do Pará, Pernambuco, Paraíba, Minas Gerais, Rio de Janeiro e Distrito Federal, tiveram seus

DNAs extraídos para amplificação de sequências parciais (610 pb) do gene wsp (Wolbachia surface protein).

Todas as linhagens testadas apresentaram infecção positiva pela bactéria Wolbachia, sendo todas da estirpe

denominada wWil. Este resultado está de acordo com o descrito pela literatura, reforçando a ideia de que todas as

linhagens modernas da espécie estão universalmente infectadas e sugerindo elevada eficiência da transmissão

vertical desta variante de Wolbachia em populações naturais de D. willistoni.

APOIO FACEPE, CNPq e PROPESQ-UFPE

167


IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE ESPÉCIES DE FLEBOTOMÍNEOS (DIPTERA, PSYCHODIDAE,

PHLEBOTOMINAE) EM ÁREA ENDÊMICA DE LEISHMANIOSE NO MARANHÃO, BRASIL.

Bruno Leite Rodrigues1; José Manuel Macário Rebêlo

1; Jorge Luiz Pinto Moraes

2; Luís Fernando Carvalho

Costa1.



(2)Laboratório de Entomologia e Vetores

RESUMO Os flebotomíneos são insetos que habitam regiões, predominantemente rurais, e são incriminados como vetores

biológicos das leishmanioses. Sua correta identificação é de grande importância epidemiológica, visto que

espécies diferentes podem transmitir patógenos diferentes do gênero Leishmania. Entretanto, a taxonomia do

grupo pode ser confusa por conta da complexidade dos caracteres morfológicos. Assim, o uso de ferramentas

moleculares, como o DNA Barcoding, que usa um fragmento do gene mitocondrial da citocromo oxidase

subunidade I (COI), é essencial para complementar a identificação morfológica. Assim, o objetivo desse trabalho

foi identificar as espécies de flebotomíneos, que ocorrem em algumas áreas endêmicas de leishmaniose no Estado

do Maranhão, utilizando sequências de COI. Os indivíduos foram capturados com armadilhas luminosas (CDC)

nos municípios de Barreirinhas e São Luís, e identificados usando-se chaves de identificação. O DNA total dos

indivíduos foi extraído e o fragmento de COI amplificado e sequenciado. As sequências foram analisadas nos

programas Bioedit e Mega. As relações filogenéticas entre as espécies foram estimadas pelo método de Neighbor-

joining. Para a identificação molecular, as sequências foram comparadas no banco de dados BOLD Systems.

Foram analisadas 86 sequências (592 pares de base) para sete espécies de flebotomíneos identificadas

morfologicamente (Lutzomyia longipalpis, L. whitmani, L. termitophila, L. sordellii, L. migonei, L. lenti e

Brumptomyia avellari). Todas as espécies do gênero Lutzomyia foram identificadas com êxito, atingindo valores

de similaridades entre 96,9 e 99,8% com sequências dessas espécies presentes no BOLD (valor de referência da

literatura: ≥ 94%). A média das distâncias genéticas intraespecíficas foi de 0,11%, enquanto a divergência média

entre as espécies foi de 12,2% (11,5% a 17,1%). As sequências de B. avellari não encontraram correspondência no

BOLD porque não havia sequências dessa espécie depositadas na plataforma. A árvore filogenética formou oito

clados distintos, altamente suportados, que correspondiam às sete espécies identificadas morfologicamente.

Portanto, os dados demonstram a eficiência da ferramenta na identificação das espécies do grupo, e irão contribuir

para preencher a lacuna existente no BOLD Systems para B. avellari.

APOIO Fundação de amparo à pesquisa do estado do Maranhão (FAPEMA).

168


INDUÇÃO À TRIPLOIDIA EM CURIMATÃ-PACU (PROCHILODUS ARGENTEUS AGASSIZ,1829)

Larissa Monteiro de Vasconcelos1; Athiê Jorge Guerra Santos

1; Maria Raquel Moura Coimbra

1.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco

RESUMO A manipulação cromossômica, apresenta-se como uma ferramenta promissora nos programas de criação de peixes

e de conservação biológica. Dentre elas, a indução à triploidia apresenta benefícios que vão desde a otimização da

produção à minimização dos impactos causados na natureza pelos escapes de peixes cultivados. Tais benefícios

ocorrem, principalmente, em virtude da característica mais provável dos triploides: a esterilidade; que permite que

o gasto energético antes empregado no desenvolvimento gonadal seja realocado para o crescimento somático,

podendo resultar em taxas de crescimento mais elevadas e na melhoria da qualidade do filé. A curimatã-pacu

(Prochilodus argenteus) é um peixe endêmico do rio São Francisco muito apreciado por sua carne, que tem sua

abundância comprometida pelos barramentos das hidrelétricas dessa bacia, e que apresenta grande potencial para a

aquicultura extensiva. A eficiência de um método para indução à triploidia por choque térmico foi avaliada, por

meio de citometria de fluxo e o crescimento desses animais foi avaliado até o terceiro mês de cultivo. Os choques

foram aplicados 5 minutos após a fertilização (m.a.f), sendo os choques frios (1 a 4 °C) mais eficientes que os

choques quentes, cuja eclosão foi inexistente nas temperaturas de 39, 40 e 41 °C. Para os choques frios, 100% de

triploides foram obtidos a partir do choque térmico de 25 minutos de duração. Para os choques de 20, 15 e 10

minutos de duração, as taxas de triploidização obtidas foram de 82, 76,92 e 63,33%. Até o terceiro mês de vida, as

diferenças de crescimento (comprimento total e peso) entre diploides e triploides não apresentaram diferença

significativa (p>0,05). Acredita-se que tal característica, quando presente, deve se manifestar nas proximidades do

período de maturação sexual dos indivíduos, que nesse caso, ocorre próximo ao término do segundo ano de vida.

No presente estudo, como os animais ainda não atingiram essa idade, as diferenças de performance ainda não

puderam ser comparadas. No entanto, este é um dos poucos protocolos para espécies brasileiras cujas taxas de

triploidização obtidas chegam a 100%.

169


LOCALIZAÇÃO DAS REGIÕES ORGANIZADORAS DE NUCLÉOLO (RONS) EM POPULAÇÕES DE

KERODON RUPESTRIS (WIED-NEUWIED, 1820) OCORRENTES EM PERNAMBUCO

Deborah Alcantara de Araújo1; Palloma Lima de Oliveira

2; Elianderson Gomes de Sá

2; Patricia Avello Nicola

Pereira2; Helen Maria Duarte do Rêgo Barros

3; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti

2.


(1)Universidade de Pernambuco;


(3)Universidade Federal de

Pernambuco

RESUMO Kerodon rupestris (Wied-Neuwied, 1820), popularmente conhecido como mocó, é uma espécie endêmica da

Caatinga e apresenta-se em status de vulnerabilidade de extinção. Possui ampla distribuição geográfica no

semiárido brasileiro, ocorrendo associada a afloramentos rochosos como populações disjuntas, o que pode

favorecer variação intraespecífica e ocasionar mecanismos de diferenciação cromossômica. Neste sentido, o

presente trabalho visou identificar o número de Regiões Organizadoras de Nucléolo (RONs) ativas e inativas em

duas populações de K. rupestris ocorrentes nos municípios de Salgueiro e Floresta (Pernambuco). Para isto, o

número de 10 indivíduos foi coletado, sendo três de Salgueiro (um macho e duas fêmeas) e sete de Floresta (três

machos e quatro fêmeas), os quais foram submetidos à extração de células da medula óssea para obtenção de

preparações cromossômicas mitóticas. Os sítios Ag-RON ativos foram identificados pela impregnação com nitrato

de prata e a Hibridização in situ Fluorescente (FISH) foi empregada na tentativa de observar sítios de DNAr 18S,

com sondas obtidas do DNA genômico da espécie, mediante amplificação por PCR utilizando os primers

Sca18SF/Sca18SR e marcação com digoxigenina-11-UTP. O número cromossômico diploide 2n=52, XX ou XY,

foi notado em ambas as populações, as quais apresentaram RONs ativas em pelo menos quatro pares de

autosossomos: 1) braço curto do par metacêntrico 9; 2) braço longo do par submetacêntrico 21; 3) braço curto do

par acrocêntrico 23; e 4) braço longo do par acrocêntrico 24. A FISH revelou sinais em alguns cromossomos;

entretanto, marcações mais evidentes foram observadas na região pericentromérica do par metacêntrico 4 e na

região intersticial do braço longo do par sumetacêntrico 16, as quais parecem não corresponder aos sítios Ag-

RON, mas a um padrão de distribuição de outro tipo de sequência repetitiva, uma vez que a marcação apresentou-

se colocalizada com bandas C+ no par 16. Assim, faz-se necessário o sequenciamento do fragmento amplificado, a

fim de caracterizá-lo e compreender seu padrão de distribuição. Por fim, os dados obtidos, principalmente em

relação aos sítios Ag-RON, indicam que as populações estudadas apresentam diferenças cariotípicas frente aos

dados relatados para outras populações, o que pode estar associado a processos de diferenciação, devido

principalmente à distribuição fragmentada da espécie na Caatinga.

APOIO Ministério da Integração Nacional

170


NEXT GENERATION SEQUENCING DATA UNCOVER THE EVOLUTIONARY HISTORY OF NEO-

XY CHROMOSOMES OF THE GARASSHOPPER RONDEROSIA BERGI

Diogo Milani1; Octavio Manuel Palacios Gimenez

1; Diogo Cavalcanti Cabral de Mello

1.


(1)Depto de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP, Rio Claro, São Paulo, Brasil

RESUMO The neo-sex systems arose independently, including in related species, evolving from an ordinary autosomal pair.

A remarkable characteristic for non-recombining sex chromosomes is the accumulation of repetitive DNAs in the

Y or W chromosomes. Among grasshoppers, the occurrence of derived sex systems, like neo-XY, was noticed

mainly in Melanoplinae, including the species Ronderosia bergi. In order to a better understanding of neo-sex

chromosomes evolution, here we characterized through Illumina sequencing and graph-based clustering the most

abundant tandem repeats of R. bergi, 2n = 22, neo-XY?. The analyses revealed the occurrence of ten families of

satDNAs comprising about 1.071% of the male genome. All the satDNAs recovered were distributed mainly on C-

positive regions of autosomes. For the neo-sex chromosomes variable patterns were revealed, like occurrence of

centromeric or interstitial signals on the neo-X. Four of the satDNAs occurred in the neo-Y, in which two were

located exclusively in this chromosome, Rber248 and Rber299. The analysis of mitotic embryo cells and meiotic

cells from adults using the Rber248 and Rber299 revealed the occurrence of multiple paracentric inversions in the

neo-Y, revealing four variants. Moreover the occurrence of an enlarged neo-Y was noticed, showing amplification

of two satDNAs, i.e. Rber1 and Rber59. Finally an intriguing fragmented neo-Y was noticed in one adult

individual that probably is resultant from multiple inversion events. The satellitome suggested the differentiation

between the neo-sex chromosomes, considering their composition and distribution of satDNAs. The sequenced

genomic data associated with cytogenetic mapping give us the opportunity of hypothesizes the possible events

involved in the evolution of neo-XY in R. bergi. Moreover it was possible a better understanding of neo-sex

chromosome dynamic in grasshoppers, revealing the occurrence of multiple additional rearrangements involved in

the neo-Y evolution of R. bergi.

APOIO FAPESP and Cnpq

171


ORGANIZAÇÃO DO GENOMA MITOCONDRIAL DE RHAMMATOCERUS BRASILIENSIS

(ORTHOPTERA: ACRIDIDAE) E ANÁLISE FILOGENÔMICA

Adriana de Souza Melo1; Igor Costa de Amorim


2; Rita de Cássia de Moura

1.


(1)Laboratório de Biodiversidade e Genética de Insetos, Instituto de Ciências Biológicas, Universidade de

Pernambuco, Recife, PE, Brasil. ; (2)

Departamento de Entomologia, Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães -

FIOCRUZ, Recife, PE, Brasil.

RESUMO O gafanhoto Rhammatocerus brasiliensis (Bruner 1904) (Acrididae, Gomphocerinae) tem sido estudado através da

citogenética clássica e molecular. Apresenta cariótipo 2n=23,XO, com cromossomos acrocêntricos e em algumas

populações de Pernambuco ocorrência de supernumerários. Com relação a outras abordagens genéticas, como

análises de estrutura populacional e/ou filogenética até o momento não há registros. O objetivo deste trabalho foi

caracterizar o DNA mitocondrial (mtDNA) de R. brasiliensis e estabelecer o posicionamento filogenético da

espécie na família Acrididae. Além disso, adicionalmente esse trabalho subsidiará a seleção de genes

mitocondriais adequados para estudos populacionais. Um exemplar da espécie R. brasiliensis, oriundo de

Itamaracá-PE, Brasil, foi sequenciado por baixa cobertura na plataforma Illumina Hiseq 2000. A montagem do

genoma foi realizada com o auxílio do pacote SOAP (Short Oligonucleotide Analysis Package) e a caracterização

no MITOS WebServer. Na análise filogenética foram utilizadas as sequências proteicas do mtDNA de 50 espécies

pertencentes a 12 subfamílias, sendo seis do grupo externo, e estando todas depositadas no NCBI. Para a

reconstituição da árvore filogenética foi utilizada a inferência Bayesiana com o auxílio do programa MrBayes

3.1.2. Os resultados demonstraram que o mtDNA de R. brasiliensis possui 16.596 pb e apresenta 37 genes, sendo

13 genes codificadores de proteínas, 22 RNAs transportadores (tRNA), dois genes de RNA ribossomais (rRNA).

A organização desses genes é semelhante a maioria das espécies de Acrididae analisadas, mostrando assim que o

mtDNA de Acrididae é estruturalmente conservado. No entanto, rearranjos nos genes de tRNA (tRNA - Lys e

RNAt - Asp) entre COII e ATP8, observados em R. brasiliensis, tem sido relatados frequentemente na subordem

Caelifera (Orthoptera). A análise filogenômica mostrou que R. brasiliensis se encontra na região basal entre os

gomphocerineos e a árvore está de acordo com outras árvores realizadas para Acrididae. Três espécies

pertencentes a diferentes famílias (Lentulidae, Ommexechidae e Romaleidae) do grupo externo não se mostraram

bem estabelecidas, como observado em trabalhos anteriores baseados em mtDNA, mostrando que apesar de serem

de diferentes famílias estão proximamente relacionadas.

APOIO FACEPE; CNPq; CAPES

172


PRIMEIRA DESCRIÇÃO CARIOTÍPICA DE CONEPATUS SEMISTRIATUS (BODDAERT, 1785)

(CARNIVORA: MEPHITIDAE) E CARACTERIZAÇÃO CROMOSSÔMICA DE PUMA

YAGOUAROUNDI (É. GEOFFROY SAINT-HILAIRE, 1803) (CARNIVORA: FELIDAE) E CERDOCYON

THOUS (LINNAEUS, 1766) (CARNIVORA: CANIDAE) EM EXEMPLARES PROVENIENTES DA

CAATINGA

Palloma Lima de Oliveira1; Elianderson Gomes de Sá

1; Gabriela Félix do Nascimento Silva

2; Kyria Cilene de

Andrade Bortoleti1; Helen Maria Duarte do Rêgo Barros

3.



(2)UNIVASF / Centro de Conservação e Manejo de Fauna da

Caatinga; (3)


RESUMO Vários estudos têm reportado o uso da citogenética em trabalhos sobre evolução cariotípica e filogenia na ordem

Carnivora. Entretanto, em relação às espécies com distribuição no Brasil, estudos são escassos sobre

caracterização cromossômica, incluindo espécies que ainda não foram sequer descritos os cariótipos, a exemplo de

Conepatus semistriatus. Diante disso, o presente trabalho analisou citogeneticamente as espécies Puma

yagouaroundi, Cerdocyon thous e Conepatus semistriatus, a fim de realizar comparações interpopulacionais e

adicionar dados cromossômicos à literatura. Amostras de sangue foram coletadas de 10 indivíduos, sendo cinco de

P. yagouaroundi (três machos e duas fêmeas), três de C. thous (um macho e duas fêmeas) e dois de C. semistriatus

(um macho e uma fêmea), provenientes da região de Caatinga e mantidos no Centro de Conservação e Manejo de

Fauna da Caatinga (CEMAFAUNA), em Petrolina/Pernambuco. As análises cromossômicas foram realizadas a

partir da cultura de linfócitos do sangue, sendo as lâminas coradas em solução de Giemsa 10%. O complemento

cromossômico de P. yagouaroundi mostrou-se semelhante ao descrito na literatura, com número diploide 2n = 38,

XX ou XY, morfologia cromossômica metacêntrica e submetacêntrica, bem como cromossomo X submetacêntrico

médio e o Y submetacêntrico pequeno. O número fundamental encontrado foi de NF = 72, diferindo do reportado

na literatura (NF = 76). Por sua vez, o cariótipo de C. thous foi constituído de 2n = 74, XX ou XY, NF = 106 (17

pares de cromossomos metacêntricos e submetacêntricos e 19 pares de acrocêntricos), X submetacêntrico grande e

Y acrocêntrico pequeno. O número de pares de autossomos em relação a essas morfologias diferiu de outras

populações estudadas, assim como o NF. Em se tratando de C. semistriatus, este trabalho relata a primeira

descrição cariotípica para a espécie, notando-se 2n = 46 e NF = 80, resultante da presença de 18 pares de

cromossomos metacêntricos e submetacêntricos e quatro pares de acrocêntricos, diferente do reportado para C.

leuconotus (2n = 46 cromossomos, sendo 19 pares com dois braços e três com um braço). O cromossomo X foi

submetacêntrico, diferindo da morfologia de C. leuconotus (metacêntrico); não foi possível a determinação do par

sexual do macho. Os resultados obtidos reforçam a importância de estudos cariotípicos, contribuindo para o

conhecimento e a conservação da biodiversidade no Brasil.

APOIO Ministério da Integração Nacional.

173


REGISTRO DE INFECÇÃO PELA BACTÉRIA INTRACELULAR WOLBACHIA PIPIENTIS EM

POPULAÇÕES NATURAIS DE DROSOPHILA STURTEVANTI (DIPTERA, DROSOPHILIDAE)

Taiane de Lima Silva1; Gleyse Audria de França Nascimento

1; Rita Dayane Coutinho da Silva

1; Renan Paulino

Guimarães1; Claudia Rohde

1.



RESUMO No presente trabalho, houve uma análise molecular e a caracterização da bactéria intracelular Wolbachia pipientis

em populações naturais de Drosophila sturtevanti, que pertence ao grupo saltans, da família Drosophilidae.

Wolbachia é gênero de bactérias endossimbionte encontrada muito comumente em artrópodes, com estimativa de

70% de infecção entre as espécies. A infecção é herdada pela linhagem materna e é responsável por uma série de

alterações, entre elas, a reprodução dos seus hospedeiros e a incompatibilidade citoplasmática. Devido à grande

importância da dinâmica expansiva de infecção que inclui a transmissão horizontal entre as espécies hospedeiras,

Wolbachia tem sido extensivamente estudada no gênero Drosophila. No entanto, pouco se sabe sobre a ocorrência

dessa bactéria entre as espécies nativas da região Neotropical, especialmente no grupo saltans e no grupo

willistoni. O objetivo deste estudo foi realizar um levantamento inicial da presença de Wolbachia em 20

isolinhagens recentemente coletadas de populações de D. sturtevanti de várias localidades de estados da região

Nordeste do Brasil (como REBIO Saltinho/PE, Goiana/PE, REBIO Guaribas/PB, Reentrâncias Maranhenses/MA,

Jiquiriçá/BA) além do Norte (Belém/PA) e Sudeste (Rio de Janeiro/RJ). Após as coletas, identificação taxonômica

da espécie, e estabelecimento de cultivo das linhagens em laboratório, foi extraído o DNA de moscas adultas e

amplificado o gene cópia única wsp (Wolbachia surface protein) por PCR, com primers específicos. O gene wsp é

exclusivo de Wolbachia e permite a caracterização, após sequenciamento, de qual é a extirpe do endossimbionte

presente nos drosofilídeos. Todas as amostras testadas de D. sturtevanti se mostraram positivas para a presença de

Wolbachia. Além disso, foi possível verificar a elevada titulação do endossimbionte nas amostras, revelada pela

forte coloração das bandas no gel de agarose, em relação aos grupos controle positivo e negativo. Os resultados

abrem caminho para o aprofundamento da caracterização molecular da extirpe do endossimbionte e para

investigação em outras espécies, como a Drosophila prosaltans, com elevada ocorrência na região Nordeste.

APOIO FACEPE

174


SATELLITE DNA EVOLUTION IN A AND B CHROMOSOMES OF ABRACRIS FLAVOLINEATA:

INTEGRATING CYTOGENETIC AND GENOMIC DATA

Diogo Milani1; Erica Ramos

2; Vilma Loreto

3; Dardo Andrea Martí

4; Adauto Cardoso

2; Cesar Martins

2; Diogo

Cavalcanti Cabral de Mello1.


(1)Depto de Biologia, Instituto de Biociências, UNESP - Univ Estadual Paulista, Rio Claro, Brazil;

(2)Depto de

Morfologia, Instituto de Biociências, UNESP - Univ Estadual Paulista, Botucatu, Brazil; (3)

Depto de Genética,

Centro de Ciências Biológicas, UFPE - Univ Federal de Pernambuco, Recife, Brazil ; (4)

Laboratorio de Genética

Evolutiva, IBS, Facultad de Ciencias Exactas, Químicas y Naturales, Universidad Nacional de Misiones, Posadas,

Argentina

RESUMO Satellite DNAs (satDNA) are sequences repeated hundred to thousand times tandemly arrayed, being enriched

mainly in heterochromatin located in centromeres and telomeres, or intercalary regions and moreover they could

populate specific chromosomes, like B chromosomes. Here we isolated through restriction enzymatic digestion the

first satDNA in the grasshopper Abracris flavolineata, named AflaSAT-1. The sequence was characterized by

integration of cytogenetic, molecular and genomic approach, aiming to understand the structural organization,

evolution in A and B chromosomes and possible functionality of this sequence. The AflaSAT-1 is a satDNA

shared with other grasshopper species, but our data suggests that it is exclusively enriched in the genome of A.

flavolineata. The AflaSAT-1 monomers recovered from individuals belonging to six populations and from the

microdissected B chromosome (μB-DNA) presented almost no variation between populations, but four exclusive

mutations in μB-DNA were noticed, reflecting the common higher mutational rate in B chromosomes. The

analysis using the sequenced genome revealed distinct organization for the satDNA with occurrence of clusters

containing only the AflaSAT-1 or containing the AflaSAT-1 associated to other satDNA, named AflaSAT-2, but

AflaSAt-2 was never found alone. Chromosomically in the population from Rio Claro/SP the AflaSAT-1 and

AflaSAT-2 were interglimed each other forming large blocks in centromeres of almost all chromosomes, except

the smallest element (pair 11). In the B chromosome only a small centromeric signal was noticed. At populational

point to view the chromosomal distribution for AflaSAT-1 showed slightly variations, like absence of some marks,

additional clusters and heteromorphism. This variation was reflected in AflaSAT-1 copy number estimated

through qPCR, suggesting dynamic for expansion or elimination of this satDNA. Finally, the cDNA analysis

revealed constitutively transcription signals for AflaSAT-1 in distinct tissues of adults, and in distinct life cycle

phases, besides in individuals harboring B chromosome.

APOIO FAPESP and Cnpq

175


SELEÇÃO DE MARCADORES MOLECULARES SSR E ISSR INFORMATIVOS PARA ESTUDOS

GENÉTICOS POPULACIONAIS DE PROCHILODUS COSTATUS (VALENCIENNES, 1850)

Aparecida Jayane Sampaio Miranda1; Keyla Vitória Marques Xavier

1; Liliane Gallindo Dantas de Oliveira

2;

Geyner Alves Cruz3; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti

1.



(2)UNIVASF / Colegiado de Ciências da Natureza/Campus

Senhor do Bonfim; (3)

UPE / Instituto de Ciências Biológicas / Campus Recife

RESUMO Prochilodus costatus (curimatã-pioa) é uma espécie endêmica da bacia do rio São Francisco e destaca-se na

atividade pesqueira de subsistência e comercial. Apresenta um papel fundamental na ciclagem de matéria orgânica

em ecossistemas límnicos devido aos seus hábitos bentopelágicos e detritívoros, enfatizando sua importância em

programas de conservação. O presente trabalho teve como objetivo selecionar marcadores moleculares

informativos para futuras análises da estrutura genética populacional de P. costatus. Foi testado um locus SSR

(Simple Sequences Repeats) (Pcos14) em 51 indivíduos coletados em três sub-bacias do rio São Francisco

[Moxotó - Arcoverde/PE (PM11); Brígida - Parnamirim/PE (PM16) e Terra Nova - Terra Nova/PE (PM17)], bem

como três loci ISSRs (Inter Simple Sequence Repeat) (817, 848 e 862) em seis indivíduos capturados nas sub-

bacias Moxotó e Brígida (três indivíduos/sub-bacia). Para isso, DNA genômico foi extraído a partir de tecido

muscular, amplificado por PCR e a genotipagem dos indivíduos foi realizada em gel desnaturante de

poliacrilamida a 6% corado com nitrato de prata (SSR) e gel de agarose 1,5% corado com brometo de etídeo

(ISSR). Em relação ao SSR, o número de alelos, as heterozigosidades observada (HO) e esperada (HE) e índice de

diferenciação genética (FST) foram obtidos mediante o programa Arlequin (v. 3.5.2.2). Por sua vez, a capacidade

informativa de cada primer ISSR foi definida a partir do número total de bandas amplificadas; índice de

diversidade genética (Dg) e PIC (Polymorphism Information Content). O locus SSR mostrou alta variabilidade

alélica, sendo observados 21 alelos variando entre 120-250pb. As populações analisadas apresentaram alto nível

de heterozigosidade intrapopulacional, a qual variou entre Ho=1 (PM16 e PM17) a 0,878 (PM11), ressaltando

elevado índice de diversidade genética; adicionalmente, o baixo valor de FST=0.135 sugere a ocorrência de fluxo

gênico ou o isolamento recente entre essas populações. Os três loci ISSRs apresentaram índice Dg de 57%,

entretanto, o locus 848 destacou-se como o mais polimórfico nas amostras testadas, conforme notado pela

frequência de polimorfismo (92%). Os valores de PIC encontrados foram de 0,35, 0,17 e 0,13 para os ISSR848,

862 e 817, respectivamente. Os dados encontrados indicam que todos os primers SSR e ISSRs testados são úteis

em futuros estudos genéticos populacionais envolvendo P. costatus.

APOIO UNIVASF e Ministério da Integração Nacional

176


THE EVOLUTIONARY CONSERVATION OF THE BRCT DOMAINS IN BRCA1 THROUGHOUT

DIFFERENT MAMMALS AND NON-MAMMALS: AN IN SILICO EVALUATION

Penelopy Rodrigues de Macêdo1; Lis Souza Rocha

2; Susan Smith

3.



(2)Universidade Federal de Viçosa;

(3)Kennesaw State University

RESUMO The breast cancer is one of the most harmful cancers in women. Breast and Ovarian Cancer Susceptibility Gene

One (BRCA1) is a well-known gene responsible for producing tumor suppressor proteins, and for receiving

signals from other proteins in order to directly repair damages in DNA. In the BRCA1 protein, there are two

conserved motifs known as BRCA1 C-terminal 1 and 2 (BRCT1 and BRCT2). Herein both domains were

observed. In order to study their conservation, multiple sequence alignments of 33 mammal and non-mammal

species were performed using the editing software Jalview 2.8.1b1. All sequences were obtained from the NCBI

database using Reference Proteins (Refseq_protein), NP_009225.1 as the query sequence, maximum target

number of 5000 sequences, and default parameters (blastp program, word size of 3, expect value 10, BLOSUM62

matrix and a threshold of 11). Afterwards, the sequences were selected as the identity and query cover were in a

good average (e-value= 0). The distance tree presents three different groups of mammals: odd-toed ungulates,

ungulates and primates. The ungulate group includes all animals with hooves and are whales or dolphins, whereas

odd-toed ungulates are those with an odd number of toes. The identity and query cover among those primates were

very similar to the Homo sapiens sequence due to their evolutionary relationship. Curiously, Homo sapiens (Query

cover 100% - Identity 100%) and Chlorocebus sabaeus (Query cover 41% - Identity 89%), which are both

primates, do not have the same similarity. This evolutionary distance might exist because C. sabaeus belongs to

the Family Cercopithecidae instead of Hominidae. Thus, the BRCT conservation throughout evolution was

probably before the group of aminiotes had split into Reptiles and Mammals. Through the distance tree analysis, it

can be predicted that the entire BRCA1, or part of it, might be evolutionary conserved among chordata because the

gene is seen in reptiles, mammals and birds species. Since it is not exclusive to humans, it is predictable that this

gene may work in general control of cell proliferation, and reinforces its function in cycle cell checkpoints,

concluding that mutations on its conserved motifs may result in other types of cancer besides breast cancer.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de

Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).

177

Genética Humana e Médica

AIM2 POLYMORPHISMS AND SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS SUCEPTIBILITY IN

PATIENTS FROM STATE OF PERNAMBUCO

Andrezza Emily Monteiro Luz1; José Eduardo Adelino Silva

2; Heidi Lacerda Alves da Cruz

1; Alessandra

Pontillo3; Sérgio Crovella

2; Jaqueline de Azevêdo Silva

2; Paula Sandrin Garcia

2.


(1)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Departamento de

Genética - Universidade Federal de Pernambuco; (3)

- Departamento de Imunologia - Universidade de São Paulo

RESUMO INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is a chronic autoimune disease of uknown etiology.

Genetic, epigenetic, gender-related and environmental factors contributes to the pathogenesis of this disease. SLE

affects several organs and systems, including skin, kidneys, cutaneous and nervous system. The activation of

interferon (IFN)-stimulated genes (ISGs) is involved in SLE pathogenesis. One type of ISGs is the Ifi200-family

that includes the AIM2 protein, encoded by AIM2 gene. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) in AIM2 can't

alter the expression or function of AIM2 in SLE. OBJECTIVE: The purpose of this study is investigate the

possible association between AIM2 gene and SLE development. METHODOLOGY: Genotyping was performed

using the Taqman probe C__25762446_10 for the SNP rs2276405 [C/T], using Real Time PCR 7500 ( Applied

Biosystems). A total of 132 SLE Brazilian patients were selected at the Clinical Hospital, Federal University of

Pernambuco, and 154 healthy individuals, matched for sex and age were enrolled as controls. Fisher's Exact Test

was used to evaluate the possible association between the polymorphism and the development of SLE (considering

p.value<0,05). All statistical analyses were performed with RStudio software. RESULTS: No significant

diferences were found by comparing T alelle and the development of SLE (OR = 0.83 CI = 0.20 - 3.48 p.value =

1). CONCLUSION: The SNP rs2276405 [C/T] in AIM2 gene is not associated with development of SLE in

patients from State of Pernambuco. Therefore, is required evaluate if these SNPs can be associated with SLE in

another populations.

APOIO Financial Support: CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico) and FACEPE

(Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco).

178


ARHGAPS FAMILY HISTORY: ENRICHED NEIGHBOURHOODS

Hallana Souza Santos1; Pamela Laiz Paré da Rosa

2; Maria Cátira Bortolini

2; Vanessa Rodrigues Paixão Cortes

1.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA ;

(2)UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

RESUMO Several comparative genome studies have shown that there is a chromosome synteny conservation in the different

species, and eukaryotic organisms that have diverged recently have homologous DNA segments that containing

genes in the same position, relatively. This shared neighborhood demonstrates that these genes may have

important functional relations or shared regulatory mechanisms and were kept together during evolution. From this

assumption it is possible to unravel the gene families evolution patterns, and how they may influence the

organization of the human genome. A comparative analysis of the neighborhood of human chromosomes that have

ARHGAPS genes ( RHO GTPase activating protein) using the browser Genomicus (V.84), with a distance of 15

genes flanking the both sides was carried out. Using the boundaries of the regions observed, we retrieved

information of the expression variation of these regions with UCSC table browser, with the track Allen brain.

These values were evaluated in GREAT program as a functional enrichment of cis-regulatory regions. For some

ARHGAPs regions no significant enrichment was found. While, that most vicinity of the ARHGAPs are enriched

with genes and regulatory regions that are associated with different types of tumors. As hepatocellular carcinoma,

in ARHGAP12 neighborhood on chromosome 10 (p= 3.01555e-10). On chromosome 17 have enrichment of genes

associated with neuralgic amyotrophy in the region of ARHGAP23 (p=1.44650e-7) a hereditary disease of the

peripheral nervous system. One of its features is facial abnormalities, this can be explained because the

ARHGAP27 region which is also on chromosome 17, this region is enriched with genes that participate in the

morphological development of facial and cranial nerves (p = 1.44650e-7). The region where the ARHGAP19 on

chromosome 10 is enriched with genes that metabolize and distribute xenobiotics (p = 5.91901e-23). The

enrichment of many ARHGAPs regions for terms related to tumors may be related to the fact that these genes

encode signal proteins, mainly involved in remodeling of the cytoskeleton, and as tumors can be compared to stem

cells (embryonic and adult), regions involved with migration and cell differencing that can be co-opted by tumor

cells.

APOIO FAPESB

179


HLA-C SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISM ASSOCIATES WITH INCREASED VIRAL LOAD

LEVEL IN HIV-1 INFECTED PATIENTS FROM NORTHEAST BRAZIL

Rodrigues, Jessyca Kalynne Farias1; Moura, Ronald Rodrigues

1; Coelho, Antonio Victor Campos

1; Arraes, Luiz

Cláudio2; Brandão, Lucas André Cavalcanti

3; Crovella, Sergio

1; Guimarães, Rafael Lima

1; Celerino da Silva,

Ronaldo1.


(1)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil.; (2)

Institute of

Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil.; (3)

Department of Pathology,

Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA),

Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil.

RESUMO Individual variation in susceptibility to human immunodeficiency virus type 1 (HIV-1) acquisition, control of viral

replication, and rate of disease progression has been studied. The underlying biological mechanisms to individual

susceptibility are multifactorial, with contributions from host genetic factors in addition to viral factors and

environmental exposures. Variations in genes as Human leukocyte antigen C (HLA-C) and Zinc ribbon domain

containing 1 (ZNRD1), have been associated with to influence the HIV-1 replication and disease progression. In

this sense, we evaluated the distribution of HLA-C (rs10484554, rs9264942) and ZNRD1 (rs3869068, rs8321)

single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 266 HIV-1-infected and 223 unexposed and uninfected individuals

from Northeast Brazil and their relationship with HIV-1 susceptibility, CD4 T cells count, and viral load. HLA-C

SNPs were in Linkage Disequilibrium (D'=0.84), constituting four possible haplotypes. Our results showed that

HLA-C and ZNRD1 SNPs as well as HLA-C haplotypes frequencies were not significantly different between HIV-

1-infected and healthy controls individuals. In addition, we analyzed HLA-C and ZNRD-1 considering CD4+

counts and viral load before the antiretroviral treatment. Individuals carrying HLA-C rs9264942 CC genotype

showed a significant increased level of HIV-1 viral load pre-treatment, in comparison with individuals carrying the

TT genotype (p-value = 0.0092). Finally we stratified our findings according to CCR5 ?32 allele presence along

with the studied SNPs: no statistically significant influence over viral load pre-treatment has been found. The

association between HLA-C rs9264942 SNP and viral load prior treatment in an admixed population from North

East Brazil was in agreement with findings from previous studies obtained on different ethnic groups; however

more studies should be conducted in order to clarify how HLA-C impair the HIV-1 replication.

APOIO CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE.

180


HLA-G 14 PB INS/DEL POLYMORPHISM AND THEIR RELATION WITH IMMUNOLOGICAL

RESPONSE IN HIV-1 INFECTED INDIVIDUALS UNDER ANTIRETROVIRAL THERAPY

Rodrigues, Jessyca Kalynne Farias1; Coelho, Antonio Victor Campos

1; Arraes, Luiz Claudio

2; Crovella, Sergio

1;

Celerino da Silva, Ronaldo1.


(1)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil.; (2)

Institute of

Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil.

RESUMO The human leukocyte antigen G gene (HLA-G), located at 6p21.3, encodes a non-classical molecule of major

histocompatibility complex with important immunomodulatory properties. On HIV-1 infection, high serum levels

of soluble forms have been associated with immunosuppression and progression to AIDS. On the other hand,

decreased serum levels, due to the antiretroviral therapy (TARV) use, has been related with the immune

reconstitution, favoring the return of cytotoxic activity of CD8+ T lymphocytes and the progressive increase of

CD4+ T lymphocytes. The 14pb insertion/deletion polymorphism in the 3'UTR region of HLA-G has been related

to the messenger RNA (mRNA) instability. The insertion of 14pb in HLA-G has been related to reduced mRNA

levels, consequently, HLA-G low levels. The present study aims to check the possible relationship of the 14pb

ins/del polymorphism in HLA-G with immunological recovery in HIV-1 infected individuals in TARV. In this

study were selected 113 HIV-1-infected individuals with TARV regular and therapeutic success for over a one

year, divided into two groups: success (55) and immunological failure (58), in according with CD4+ T cell count

recovery in one year. The genotyping was performed by conventional PCR and electrophoresis in agarose gel

electrophoresis to 3%. About clinic-epidemiological characteristics, individuals with success and immunological

failure, respectively, were mostly women (69.1% and 62.1%), with median ages of 37.4 years, with median viral

load baseline of 4.51 and 4.30 log10 copies/mL, median of CD4+ T lymphocytes count baseline of 264 and 284

cells/mm3

and in of Non-Nucleoside Reverse Transcriptase Inhibitors (NNRTI) use (52.7% and 58.6%). No

significant differences were observed as the clinical-epidemiological characteristics (p>0.05). In relation to the

polymorphism, we found that the D allele (deletion of 14 pb) was more common among individuals with success

(50%) and immunological failure (56%). Among the genotypes, the D/I heterozygous was the more common both

groups studied (success [45.4%] and failure [50%]). Despite the percentage differences, no significant differences

were observed (p>0.05) in the comparison of groups, as the genotype and allele frequencies. Further studies

should be carried out in other populations and with the largest number of individuals.


181


IMMUNE MODULATING GENES PTPN22, CTLA4 AND MBL2 POLYMORPHISMS PROFILE IN

TURNER SYNDROME PATIENTS

Luana Oliveira dos Santos1; Adriana Valéria Sales Bispo

1; Juliana Vieira de Barros

1; Raysa Samanta Morais

Laranjeira1; Jaqueline de Azevêdo Silva

1; Andréa de Rezende Duarte

2; Jacqueline Araújo

3; Paula Sandrin

Garcia1; Sergio Crovella

1; Marcos André Cavalcanti Bezerra

4; Maria do Socorro Cavalcanti

5; Neide Santos

1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco. Av. da Engenharia, s/n, Cidade Universitária,

50740-600, Recife, PE, Brasil. ; (2)

Serviço de Genética Médica, Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando

Figueira (IMIP), Rua dos Coelhos 300 Boa Vista. 50070-050, Recife, PE, Brasil; (3)

Serviço de Endocrinologia

Pediátrica, Hospital das Clínicas HC/UFPE, Av. da Engenharia, s/n, Cidade Universitária, 50740-600, Recife, PE,

Brasil.; (4)

Departamento de Biofísica e Radiobiologia, Universidade Federal de Pernambuco. Av. da Engenharia,

s/n, Cidade Universitária, 50740-600, Recife, PE, Brasil.; (5)

Instituto de Ciências Biológicas, Rua Arnóbio

Marques 310, Santo Amaro, 50100-130, Recife, PE, Brasil.

RESUMO Turner's syndrome (TS) is characterized by the presence of one X chromosome and a total or partial loss of second

sex chromosome. TS individuals display a set of clinical conditions such as dyslipidemia, obesity and autoimmune

diseases. Herein we performed a genetic association study enclosing polymorphisms in genes involved in

inflammatory and autoimmune processes, namely MBL2, CTLA4 and PTPN22 in TS patients from a Northeast

Brazil population. Additionally, we performed a thorough clinical characterization in these patients and whether

any clinical parameters were in fact related to those genetic variants assessed. Our study aimed to determine

whether PTPN22, CTLA-4 and MBL2 polymorphisms confer any differential susceptibility to clinical conditions in

TS patients. A total of 87 TS patients and 179 healthy individuals (as control group) were assessed. All groups

studied were from the same geographical region, State of Pernambuco. Genotyping assays were performed using

TaqMan flourogenic probes Taqman Universal Master Mix and for MBL2 exon 1 (A/O) we used SYBR Green

protocol assay. No significant differences in allele and genotype frequencies from PTPN22 +1858G/A

(rs2476601) were detected in TS and control group or any clinical conditions in those patients. For CTLA-4

+49A/G (rs231775) analysis, a trend of association was observed for A/G genotype (p=0.04, 95%CI=0.3-1.02 and

OR=0.56), indicating differential distribution for this SNP in TS patients. When assessing clinical features CTLA-4

G/G genotype was associated to overweight/obesity in TS patients (p-value=0.02, 95%CI=1.3927.13 and

OR=6.13). MBL2 promoter region -550(H/L) (rs11003125) presented H/L genotype frequency significantly higher

in TS patients when compared to healthy controls (p=0.01, OR=2.00, 95%CI=1.13-3.57), indicating that this

particular variant may influence upon this feature in TS patients. Furthermore, H/H genotype indicated differential

distribution in TS patients when compared to healthy controls (p=0.01, OR=0.23, 95%CI=0.04-0.82). No

differences in distribution of -221(X/Y) (rs7096206) and MBL2 exon 1 (A/O) alleles and genotypes were observed

in TS subjects and its clinical features nor when comparing to control group. Our results indicated that there is a

differential distribution of important variants within key inflammatory regulating genes in TS patients, which

might be a potential new line of research to improve quality of life in those patients.

APOIO CNPq and FACEPE

182


NLRC4 POLYMORPHISM IS NOT ASSOCIATED WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS

Andrezza Emily Monteiro Luz1; José Eduardo Adelino Silva


1; Alessandra

Pontillo3; Sérgio Crovella



2.


(1)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Departamento de

Genética - Universidade Federal de Pernambuco; (3)

Departamento de Imunologia - Universidade de São Paulo

RESUMO Keywords: NLRC4, SLE, polymorphism, inflammasomeINTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus

(SLE) is an inflammatory autoimmune associated with genetic, hormonal, environmental and immunological

factors, that involves a wide spectrum of immune cells and presents a several clinical manifestations by affects

multiple organs and systems. Inflammasomes is a multiproteic complex activated in response to cellular damage-

associated molecular patterns (DAMPs). Detection of DAMPs can occur via the NOD-like receptor (NLR)

NLRC4. The NLRC4 inflammasome induces secretion of pro-inflammatory cytokines involved in the

pathogenesis of LES. OBJECTIVE: According this background, it is important to assess if SNPs in NLRC4 gene

is associated with susceptibility to SLE. METHODOLOGY: Genotyping was performed using the Taqman®

probe C_2486339_1_ for the SNP rs455060 [G/A], using Real Time PCR 7500 (Applied Biosystems). A total of

132 SLE Brazilian patients were selected at the Clinical Hospital, Federal University of Pernambuco, and 154

healthy individuals selected by gender and age, were included as controls. Fisher's Exact Test was used to

evaluate the possible association between the polymorphism and SLE development (considering p.value<0,05).

All statistical analyses were performed with RStudio software. RESULTS: No statistically significant

differences were found by comparing allelic and genotype frequencies between SLE patients and controls for SNP

rs455060 (OR = 0.837; CI; 0.57 - 1.21; p.value = 0.369) and no association was observed with the development of

SLE. CONCLUSION: The SNP in NLRC4 gene is not associated with SLE development in patients from

Pernambuco state.

APOIO Financial Support: CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico) and FACEPE

(Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco).

183


VDR POLYMORPHISMS MAY INTERFERE IN IMMUNOLOGICAL RESPONSE IN INDIVIDUALS

HIV-1+ UNDER ANTIRETROVIRAL THERAPY

Alves, Neyla Maria Pereira1; Celerino da Silva, Ronaldo

2; Pereira; José Jorge de Souza

1; Coelho, Antonio Victor

Campos1; Arraes, Luiz Claudio

3; Brandão, Lucas André Cavalcanti

4; Crovella, Sergio

1; de Azevêdo Silva,

Jaqueline1.


(1)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife,

Brazil; Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.; (2)

Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil; (3)

Institute of

Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil.; (4)

Laboratory of Immunopathology

Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil; Department of Pathology,

Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.

RESUMO Antiretroviral therapy introduction has changed the landscape of Human Immunodeficiency Virus (HIV) treatment

in the last years, boosting immune function, reducing morbidity and mortality due to suppression of HIV

replication. However, some individuals receiving HIV care are not able to suppress the viral load to undetectable

levels as expected, a shortcoming known as virological failure. In some cases, despite the effectiveness in viral

load control, some individuals do not achieve quasi-normal CD4+ T-cell counts (immunological failure). These

two phenomena might be due to several factors, including host genetics, immunological and viral profiles. Vitamin

D (vit D) acts immunomodulating several immune system cells through vitamin D receptor (VDR). In HIV-1

infection, Vit D displays a dual effect depending on infection stage: it decreases the immune activation in acute

phase, or induces a less effective helper T lymphocytes response in chronic phase. Additionally, antiretroviral

therapy itself may alter the circulating levels of 25(OH)D, the metabolic precursor of Vit D, since sharing common

cytochrome P450 enzymes in their synthesis (Vit D) and excretion (antiretroviral drugs) metabolic pathways. Here

we evaluated VDR SNPs and treatment or immunological responses in HIV-1 infected (HIV-1+) individuals under

antiretroviral therapy (ARV). Two functional VDR SNPs were assessed: rs2228570 (Fok1) and rs11568820

(Cdx2) in 508 HIV-1+ individuals stratified into four groups according to drug treatment and immunological

response. All individuals were recruted in Institute of Integral Medicine Professor Fernando Figueira (IMIP-PE)

and genotyped by fluorogenic allele specific probes (Taqman) using real time PCR. Median age and therapeutic

regimen were associated to treatment failure (p-value<0.05). No statistically significant differences were observed

for the tested SNPs regarding treatment responsiveness. In relation to immunological response, the C allele, C/C

genotype of rs11568820 and GC (rs2228570-rs11568820) allelic combination were associated to immunological

failure (p-value<0.05). Our findings suggest a possible role for VDR SNPs on immunological failure in HIV-1+

individuals under ARV.


184


PAPEL DO POLIMORFISMO DE NUCLEOTÍDEO ÚNICO DO IFN-γ (RS2069705) NA

SUSCEPTIBILIDADE E PROGRESSÃO DA OSTEOPOROSE PRIMÁRIA PÓS-MENOPAUSA

Camilla Albertina Dantas de Lima1; Anna Paula Oliveira de Souza

2; Natássia Rodrigues Javorski

1; Heitor

Horlando Sampaio Araújo da Silva2; Madson Allan de Luna Aragão

2; Weberson Lima Guaraná

2; Alexandre

Domingues Barbosa3; Paulo Roberto Eleutério de Souza

4; Jaqueline de Azêvedo Silva


1.


(1)Departamento de Genética, CB - UFPE; Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE;

(2)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE;

(3)Hospital das Clínicas, HC - UFPE; Laboratório

de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE; (4)

Universidade Federal Rural de Pernambuco - UFRPE

RESUMO Introdução: O IFN-γ foi uma das primeiras proteínas relacionadas à Osteimunologia mas a compreensão dos seus

mecanismos pleiotrópicos ainda permanece um desafio frente às suas atuações antagônicas no ambiente ósseo.

Polimorfismos de um único nucleotídeo (SNP) em regiões codificantes do IFN-γ podem auxiliar no entendimento

da sua forma de atuação, bem como do seu possível papel como marcador de susceptibilidade, prognóstico e

terapia em doenças ósseas degenerativas, como a Osteoporose (OP). Objetivo: Verificar a possível associação

entre os diferentes genótipos do IFN-γ (rs2069705) e a susceptibilidade à OP, fraturas ósseas por fragilidade,

níveis séricos e adesão terapêutica. Metodologia: Foram selecionadas 244 mulheres diagnosticadas com OP

primária e 112 mulheres saudáveis com ausência de qualquer distúrbio osteometabólico, ambos grupos no período

pós-menopausa. Para o estudo de associação foram analisadas as frequências alélicas e genotípicas entre pacientes

e mulheres saudáveis, além da verificação de relação entre os genótipos e presença de fraturas. Um total de 52

mulheres tiveram níveis séricos da proteína mensurados através do soro por citometria de fluxo e comparados

entre os dois grupos. Para o estudo de adesão terapêutica 69 mulheres em terapia anti-catabólica foram

acompanhadas por um período de 1-4 anos para análise de variação da densidade mineral óssea (DMO) e sua

relação com as variantes genotípicas da citocina. Resultados: Observamos uma maior frequência do alelo G no

grupo de pacientes, associando o alelo com susceptibilidade à OP (p = 0,04; OR = 1,42; IC 95% 1,01-2,02). Em

relação à terapia, o SNP apresentou relação com aumento da DMO no fêmur total (p=0.016) após 3 anos de

tratamento e diminuição no colo de fêmur (p=0.019) após 4 anos de tratamento. Além disto, níveis de INF-γ se

mostraram correlacionados ao aumento de DMO na coluna lombar após 2 anos de tratamento (rho=0,867, p =

0.012). Conclusões: O polimorfismo IFN-γ (rs2069705) apresentou relação significativa com a susceptibilidade à

OP primária e variações de DMO em pacientes em tratamento anti-catabólico. Associado a isto, o aumento dos

níveis da proteína esteve correlacionado ao aumento dos níveis da DMO no segundo ano de terapia. Desta forma, a

citocina se mostrou como um importante elemento no estabelecimento e progressão da OP, sugerindo o

polimorfismo estudado como um candidato a possível marcador para cuidados profiláticos e possibilidade de

acompanhamento terapêutico.

APOIO CAPES / CNPq / Facepe

185


A 3'UTR SNP IN NLRP3 GENE IS ASSOCIATED WITH SUSCEPTIBILITY TO SYSTEMIC LUPUS

ERYTHEMATOSUS

Matheus da Silva Mesquita1; José Eduardo Adelino Silva


2; Heitor Horlando de

Luna Aragão1; Wlisses Henrique Veloso de Carvalho da Silva

2; Alessandra Pontillo

3; Sergio Crovella

2; Jaqueline

Azevêdo Silva2; Paula Sandrin Garcia

2.


(1)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, LIKA, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife,

Brasil ; (2)

Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, Brasil; (3)

Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo,São Paulo, Brasil

RESUMO INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by production

of autoantibodies leading to inflammation and tissue damage. Its pathogenesis remains unclear but has

the contribution of genetic, hormonal and environmental factors. The activation of NLRP3 is involved with

inflammatory responses by proteolytic activation of caspase-1 resulting in secretion of mature proinflammatory

cytokines that plays key role in maintenance of chronic inflammation in SLE. SNPs are genetic variants that can

alter genic expression or function and has been used to understand the genetic susceptibility involved in disease

development. OBJECTIVE: Since SLE is a disease with a strong genetic component and NLRP3 is an important

pathway in inflammatory response, it is necessary evaluate if polymorphisms in NLRP3 is associated with

SLE susceptibility. METHODOLOGY: We recruited 132 SLE patients from Division of Rheumatology,

University Hospital of the Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil. The control group was composed by

154 healthy individuals from the same geographical area (Recife, Pernambuco, Brazil). Genomic DNA was

extracted from peripheral blood samples using a Salting Out Method. The genotyping was performed

using TaqMan probes; The PCR for detection of SNP was carried out according to the manufacturer's instructions

using Applied Biosystems 7500 Real-Time PCR System. The polymorphism studied was the rs10754558 [G>C]

located at 3'UTR. Allelic and genotype frequencies of patients and controls were compared using a Fisher's Exact

Test in R Software. RESULTS: We found an association between C allele (OR = 0,67; CI= 0,46 - 0,95; p.value=

0,023) and CC genotype (OR = 1,10; CI: 0,15- 0,84; p value= 0,011) showing a protection

against SLE susceptibility. CONCLUSION: In accordance with the location of SNP rs10754558 associated

at 3'UTR, we suggested that this may be able to change its expression leading to an increase

in maturation of proinflammatory cytokines involved in SLE.

APOIO FINANCIAL SUPORT: FACEPE and CNPq

186


A GENETIC POLYMORPHISM WITHIN IL-18 IS ASSOCIATED WITH MALAR RASH IN PATIENTS

WITH SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS FROM STATE OF PERNAMBUCO

Guaraná, Wl1; Adelino Silva, Je

2; Cruz, Hla

2; Crovella, S

2; Sandrin Garcia, P

2.


(1)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ;

(2)Laboratório de

Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; Departamento de Genética,

Universidade Federal de Pernambuco - Brasil

RESUMO INTRODUCTION: IL18 gene encodes a pro-inflammatoy cytokine, interleukin 18 (IL-18), which acts in innate

and adaptative immunity. IL18 is expressed by a high spectrum of immune cells, such as natural killer (NK),

dendritic cells and macrophages. SLE is a chronic autoimmune disease that affects kidneys, joints and skin. In

addition to skin symptoms, SLE patients present malar rash (MR), a subtype of chronic Cutaneous Lupus

Erythematosus (CLE). Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) are genetic variants that can alter the expression

or function of the protein. Additionally, SLE is a systemic autoimmune disease caused by multiple enviromental

and genetic factors. OBJECTIVE: In this context, it is important to assess if polymorphisms in the IL18 gene may

contribute to the development of SLE and/or their clinical manifestations. METHODOLOGY: Genotyping was

performed using the Taqman® probe C_2898459_20 to analyze the SNP rs1946519 [C>A] in a exon region of the

IL18 gene. The assays were done using Real Time PCR 7500 (Applied Biosystems). A total of 136 SLE Brazilian

patients were recruited at the Division of Rheumatology of Clinical Hospital, Federal University of Pernambuco of

these 89 were positive and 47 negative for MR). 154 healthy individuals matched for age and sex with SLE

patients from the same geographical area, without previous familial history of autoimmune disorders, were also

enrolled as controls. Fisher's Exact Test was used to evaluate the association between the polymorphism and the

SLE susceptibility (considering p.value<0.05). All statistical analyses were performed with R software.

RESULTS: Significant differences were found by comparing allelic and genotype frequencies between SLE/MR+

patients and controls for SNPrs1946519 and the delopment of malar rash: A/C genotype (OR = 2.34; CI = 1.07 -

5.35; p.value = 0.024) A/A genotype (OR=4.65; CI =2.0 - 11; p. value = 9.49e-05). CONCLUSION: The SNP in

IL18 gene shows association with malar rash in SLE patients compared with healthy individuals. IL-18 contributes

to malar rash is SLE through angiogenesis and leukocyte recruitiment. According our results, it is possible that

polymorphism rs1946519 [C>A] enhances the properties of IL18 As a result, the polymorphism can be a possible

genetic marker to the development of malar rash.


187


A GENETIC VARIANT WITHIN CASP1 GENE IS NOT A GENETIC FACTOR FOR SYSTEMIC

LUPUS ERYTHEMATOSUS SUSCEPTIBILITY

Heitor Horlando Sampaio Araujo da Silva1; José Eduardo Adelino Silva


1;

Alessandra Pontillo3; Sergio Crovella


2; Matheus da Silva Mesquita

1; Madson Allan de

Luna Aragão1.


(1)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami;

(2)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami, Departamento de

Genética; (3)

Departamento de Imunologia, Universidade de São Paulo, São Paulo

RESUMO INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus is a multifactorial autoimune disorder with a chronic

inflammatory state. This inflammation occurs through pyropotosis, a type of inflammatory programmed cell death

that results in release of proinflammatory molecules. Pyroptosis is mediated by caspase1 protein, encoded by

CASP1 gene, and is enhanced in macrophages from human and murine SLE individuals. OBJECTIVE: Since SLE

is an autoimmune disease with genetic component, it is importante to evaluate if Single Nucleotide

Polymorphisms (SNPs) within CASP1 is associated with SLE. METHODOLOGY: This is a case-control study

where enrolled a total of 132 SLE patients recruited from Division of Rheumatology, University Hospital of

Federal University of Pernambuco, used as case; and 154 healthy individuals from the same geographical area,

was used as controls. DNA was extracted using the DNA Extraction Kit (PROMEGA). Genotyping of SNP

rs572687 [G>A] was performed through Taqman probes using Real Time PCR in ABI 7500 platform (Applied

Byosistems). Statistical analyzes were perfomed using Fisher Exact's Test in R Software. RESULTS: We do not

found statistical association between the studied SNP and SLE susceptibility (OR=1.07; CI = 0.66 - 1.72; p.value

= 0.818). CONCLUSION: In this study, rs572687 SNP [G>A] was not associated with SLE susceptibility. Thus,

this genetic variant do not contributes to SLE pathogenesis in the studied population.

APOIO CNPq; Facepe;

188


A GENETIC VARIANT WITHIN IL10 GENE IS ASSOCIATED WITH A LOWER SEVERITY OF

RHEUMATOID ARTHRITIS AND UPREGULATES IL10 LEVELS

José Eduardo Adelino Silva1; Camilla Albertina Dantas de Lima

1; Patrícia D'emery Alves dos Santos

2; Madson

Allan de Luna Aragão2; Heitor Horlando Sampaio Araújo da Silva

2; Maria Helena Queiroz de Araújo

3; Eliézer

Rushansky4; Sérgio Crovella



1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil;

(2)Laboratório de

Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil; (3)

Centro de Infusão de

Imunobiológicos, Hospital Oswaldo Cruz, Universidade de Pernambuco, Recife, Brasil; (4)


Imunobiológicos, Hospital Oswaldo Cruz, Universidade de Pernambuco, Recife, Brasi

RESUMO INTRODUCTION: Rheumatoid Arthritis (RA) is an autoimmune and inflammatory disease characterized by

synovitis and joint damage. Its etiology is unknown, but involves genetic, environmental and immunologic factors,

such a proinflammatory cytokine network. Interleukin 10 (IL10) is an anti-inflammatory cytokine that

downregulates key proinflammatory cytokines in RA pathogenesis, such as TNFα, interleukin 1β, and thus inhibits

the degradation of bone and cartilage. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) are genetic variants that can alter

the expression or function of several genes. OBJECTIVE: In this context, this study had a two aims: evaluate if the

SNP rs1800896 [T>C], within IL10, is associated with RA susceptibility and also assess if this SNP can alter the

IL10 levels. METHODOLOGY: A total of 126 RA patients were recruited at Oswaldo Cruz Hospital, Pernambuco

University. Clinical status assessement of RA patients were collected according criteria defined by American

College of Rheumatology (ACR). Genotyping was performed using Real Time PCR in ABI 7500 platform

(Apllied Byosistems) to evaluate the SNP rs1800896 [T>C] located at promoter region of IL10 gene. Genotype-

guided levels of IL10 were assessed using CBA (Cytokine Bead Array) in FACSCalibur Flow Cytometry (BD

Biosciences). Statistical analyses were perfomed using Anova Test and Binary Regression Logistic in SPSS

Program, considering p.value < 0.05. RESULTS: We found an association between C/C genotype and a low

severity of RA, measured by Clinical Disease Activity Index score (CDAI) (p.value = 0.016). We also found an

association between C/C genotype and higher IL10 levels compared with CT (0.020) and TT (0.032) genotypes.

CONCLUSION: C/C genotype upregulates IL10 levels and then inhibits proinflammatory pathways leading to a

mild manifestations of RA, reflecting in a low severity disease index.

APOIO FACEPE and CNPq

189


A SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISM WITHIN CARD8 IS NOT ASSOCIATED WITH

SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS SUSCEPTIBILITY?

Matheus da Silva Mesquita1; José Eduardo Adelino Silva


2; Madson Allan de Luna

Aragão1; Alessandra Pontillo

3; Sergio Crovella

2; Jaqueline de Azevedo Silva


2.


(1)Laboratório de?Imunopatologia?Keizo?Asami, LIKA, Universidade Federal de Pernambuco, UFPE,

Recife,?Brasil ; (2)

Departamento?de Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife, Brasil?? ; (3)

Departamento de Imunologia, Instituto de Ciências Biomédicas, Universidade de São Paulo, São Paulo, Brasil?

RESUMO INTRODUCTION:? Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized

by autoantibodies against self-nuclear antigen, deposition of immune complexes and an exacerbated production of

pro-inflammatory cytokines that induces tissue damage in multiple organs. Its etiology is unknown, but several

factors contribute to its development, such genetic and environmental factors. CARD8, encoded by CARD8 gene,

down regulates the activation of IL-18 and IL1β, a pro-inflammatory cytokines with a important role in

maintenance of a chronic inflammatory state in SLE patients. CARD8 is also responsible by inhibiting activity

of NF-κB, a transcription factor responsible for the expression of TNFα, also important in SLE pathogenesis.

OBJECTIVE:?Since SLE is a disease with a strong genetic component and CARD8 is an important pathway

that?inhibits?key mediators to maintenance chronic inflammation in SLE pathogenesis, it is necessary

evaluate?if?polymorphisms?in CARD8 gene is associated with SLE. METHODOLOGY: We recruited 132 SLE

patients from Division of Rheumatology, University Hospital of the Federal University of Pernambuco, Recife,

Brazil. The control group was composed by 154 healthy individuals from the same geographical area

(Recife, Pernambuco, Brazil). Genomic DNA was extracted from peripheral blood samples using

a Salting Out Method. The genotyping was performed using TaqMan probes using Applied Biosystems 7500 Real-

Time PCR System. The polymorphism studied was the rs2043211?[A>T] that promotes a nonsense mutation by

change the amino acid arginine to a stop codon in exon 2. Allelic and genotype frequencies of patients and

controls were compared using a Fisher's Exact Test in R Software. RESULTS: No association was found between

this SNP (OR = 1.10; CI = 0.72 - 1.68;p.value = 0.611) and the susceptibility to SLE. CONCLUSION: According

to the present result, the polymorphism studied do not contributes to SLE pathogenesis in studied population.

APOIO FINANCIAL SUPORT: FACEPE and?CNPq

190


ANÁLISE DA ALFA-DEFENSINA 3 (HNP-3) EM COMPARAÇÃO AOS DIFERENTES TIPOS DE

DEFENSINAS HUMANAS E SUAS VARIANTES EM PRIMATAS

Beatriz de Lucena Villa Chan Cantalupo1; Pedro S. Pereira


1.



RESUMO As defensinas são peptídeos antimicrobianos, cujas subfamílias principais compreendem α-defensinas (HNPs) e β-

defensinas (DEFBs). Devido à localização cromossômica, a suas estruturas gênicas e ao fato de seus peptídeos

precursores serem semelhantes, é provável que todas as defensinas de vertebrados tenham surgido a partir de um

precursor gênico comum. Procurou-se estudar a sequência de nucleotídeos e/ou de aminoácidos da HNP-3

humana, comparando-a com os demais tipos de defensinas humanas e suas variantes em diferentes espécies de

primatas. Utilizando o banco do NCBI, buscou-se sequências de HNPs 1, 2, 3 e 4 e DEFBs 1 e 2 para posterior

análise comparativa entre elas. Cada sequência-sonda serviu como base na busca por segmentos com similaridades

em mais dez espécies primatas. O melhor quadro de leitura da HNP-3 humana foi encontrado usando o ORF-

Finder e corresponde ao frame +3, com 285 pb. Os domínios conservados das sequências selecionadas foram

identificados através do Batch CD-Search. Foi gerado um gel 2D virtual no JVirGel, na qual as HNP-2, DEFB-2 e

DEFB-1 apresentaram valores mais baixos, com 3,33 kDa, 4,35 kDa e 5,10 kDa, respectivamente. A ancoragem

gênica da HNP-3 humana foi realizada usando o Genome Browser. Verificou-se que os genes que a codificam

estão localizados em um cluster no cromossomo 8. Realizou-se busca pelo peptídeo sinal da HNP-3 humana

usando o SignalP, que foi removido para gerar seu modelo 3D no Swiss-Model. O modelo gerado foi submetido à

análise estereoquímica através dos diagramas de Ramachandran, concluindo-se que 98% dos aminoácidos estão

localizados em zonas favoráveis. As duas subfamílias principais diferem no comprimento de seus segmentos

peptídicos, entre as seis cisteínas e seus emparelhamentos, associadas por ligações de dissulfeto. O alinhamento

das sequências das defensinas humanas usando o MEGA 7.0 mostrou a conservação das posições das cisteínas.

Foi gerada uma árvore fenética contendo as sequências de defensinas humanas e demais primatas, usando como

grupo externo uma sequência de defensina de Drosophila melanogaster, a fim de polarizar as análises, adontando

um bootstrap de 1000 repetições. Os nós mais basais apresentaram valores de bootstrap baixos, indicando que o

programa teve dificuldade em agrupar sequências similares nestas regiões. Alguns agrupamentos terminais,

porém, apresentaram valores de bootstrap altos, mostrando similaridades significativas.

APOIO CAPES e FACEPE.

191


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-126 EM 03 LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER

HEMATOLÓGICO ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.

Filipe de Albuquerque Silva1; Italo Alves Santos

1; Suzanne Pinheiro Vieira

2; Orlando Ronaldy da S. Santos

3;

Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Elizabeth Andrade Noé da Silva

2; Arthur Cardoso Almeida

4.


(1)Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de

Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia - FOUFAL. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.

Maceió, AL. Brasil.; (2)

Aluna de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças

Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia

- ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)

Aluno de Iniciação Científica.

LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em

Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas -

UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (4)

Professor de Citologia Clínica e Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC -

Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola

de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.

RESUMO INTRODUÇÂO:MicroRNAs (miRNAs) são pequenas sequências de ribonucleotídeos não codificadores de

proteínas que modulam processos fisiológicos como apoptose, proliferação e diferenciação celular. No câncer,

atuam como oncogenes ou como genes supressores de tumores. Assim, a análise da expressão gênica de miRNAS

tem se tornado uma ferramenta para o diagnóstico, prognóstico e identificação de novos alvos terapêuticos para

vários tipos de neoplasia.OBJETIVO:Avaliar a expressão do miR-126 em 3 linhagens celulares específicas de

câncer hematológico após o tratamento com daunorrubicina, citarabina e cisplatina.MATERIAL E

MÉTODOS:Foram usados as linhagens MOLM13, HL60 e U937. As culturas foram mantidas a 37°C em estufa de

CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das mesmas. Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia

das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) nas linhagens, procedendo-se à determinação da IC50 de

cada uma isoladamente e combinadas entre si (Daunorrubicina+Citarabina; Daunorrubicina+Cisplatina;

Citarabina+Cisplatina; Daunorrubicina+Citarabina+Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema

automatizado-Maxwell®Promega. Por fim, os níveis de expressão do miR-126 foram avaliados por qRT-PCR nas

amostras tratadas e nos controles (linhagens não tratadas). O GAPDH foi usado como gene

constitutivo.RESULTADOS:A expressão do miR-126 se mostrou alterada e estatisticamente significante nas

linhagens tratadas com daunorrubicina, citarabina e na combinação dessas 2 drogas(p<0,05),comparando-se aos

controles. Nas linhagens tratadas com cisplatina, teve uma leve (0.1FC), porém não significativa alteração em

relação aos controles. Contudo, quando combinada com daunorrubicina e ou citarabina, a expressão do miR-126

se mostrou alterada em relação aos controles(p<0,05),mas inferior se comparado aos níveis de expressão nas

linhagens tratadas com daunorrubicina e ou citarabina, isoladas e combinadas entre si(média de diferença de

1.02FC;p<0.05).CONCLUSÕES:Os níveis alterados de expressão do miR-126 nas 3 linhagens após o tratamento

com daunorrubicina e citarabina, isoladas e combinadas, podem estar associados a um mecanismo de indução de

quimioresistência, onde o miRNA torna as células resistentes à quimioterapia. A cisplatina (não é uma droga de

primeira escolha), parece inibir, revertendo o efeito de indução de quimioresistência mediado pela daunorrubicina

e pela citarabina. Contudo, estudos serão necessários para definir esses mecanismos.

APOIO CNPQ.

192


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-126 EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA.

Filipe de Albuquerque Silva1; Italo Alves Santos



2;

Gabriella Lombardi de Almeida Sales2; Elizabeth Andrade Noé da Silva

2; Carlos Arthur Cardoso Almeida

3.



Graduação em Odontologia. Faculdade de Odontologia. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL.

Brasil.; (2)

Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e

Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.

Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)

Professor de Citologia Clínica e Hematologia

Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso

de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas -

UFAL. Maceió, AL. Brasil.

RESUMO INTRODUÇÂO:MicroRNAs são curtas sequências de ribonucleotídeos que não codificam proteínas e apresentam

funções biológicas como apoptose, proliferação, diferenciação celular e regulação pós-trancricionais. Os miRNAs

são alterados em processos neoplásicos, pois podem reduzir ou aumentar miRNA transcritos dos genes supressores

de oncogenes, portanto, essas moléculas modulam a proliferação e a diferenciação das células de um

organismo.OBJETIVO:Avaliar a expressão do miR-126 em uma linhagem celular de câncer de boca após

tratamento com as drogas daunorrubicina, citarabina e cisplatina.MATERIAL E MÉTODOS:Foi usado a linhagem

H413. As culturas foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das

mesmas. Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e

Cisplatina) nas linhagens, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma isoladamente e combinadas entre si

(Daunorrubicina+Citarabina; Daunorrubicina+Cisplatina; Citarabina+Cisplatina;

Daunorrubicina+Citarabina+Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema automatizado - Maxwell ®

Promega. Por fim, os níveis de expressão do miR-126 foram avaliados por qRT-PCR nas amostras tratadas e nos

controles (linhagens não tratadas). O GAPDH foi usado como gene constitutivo.RESULTADOS:A expressão do

miR-126 se mostrou alterada e estatisticamente significante (p<0,005) nas amostras tratadas com as drogas

isoladas e combinadas, comparando-se com as amostras controles. A linhagem tratada com cisplatina teve a maior

diferença de expressão (FC:3.7) em relação aos controles (FC:1,69). A daunorrubicina e a citarabina (não são

drogas de primeira escolha) tiveram uma pequena diferença na expressão do miR-126, isoladas (FC:2.1 e 1.9

respectivamente) e combinadas (FC:1,99). Porém, nas células tratadas com as 3 drogas combinadas, houve um

aumento na expressão do miR-126 quase que ao mesmo nível das células tratadas com cisplatina

(FC:3.66).CONCLUSÕES:A daunorrubicina e a citarabina tem pouco efeito sobre as células H413, mesmo assim,

houve uma leve diferença de expressão do miR-126 nas células tratadas com essas drogas. Nas células tratadas

com Cisplatina foi onde houve o maior nível de expressão do miR-126 em relação aos controles. É possível que

haja uma participação deste microRNA em um mecanismo de quimioresistência, processo no qual as drogas

perdem sua efetividade. Porém, novos estudos deverão ser realizados a fim de esclarecer esse mecanismo.

APOIO CNPQ

193


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-146A EM 03 LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER

HEMATOLÓGICO ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS

Guilhermie Duarte de Melo1; Italo Alves Santos


2; Gabriella Lombardi de

Almeida Sales3; Suzanne Pinheiro Vieira

3; Elizabeth Andrade Noé da Silva


4.





Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia

Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.


Aluna de Iniciação Científica. LADITEC -

Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências

Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.





RESUMO INTRODUÇÃO: Os miRNAs são pequenas moléculas de RNAs não codificantes. Uma das suas funções nas

células é modular a expressão gênica e podem atuar promovendo diferenciação, proliferação, apoptose e outros

processos biológicos. Alterações nas atividades desempenhadas por eles podem provocar patologias, como o

desenvolvimento de neoplasias malignas. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do miR-146a em 3 linhagens

celulares específicas de câncer hematológico após o tratamento com drogas antitumorais. MATERIAL E

MÉTODOS: Foram usados as linhagens MOLM13, HL60 e U937. As culturas foram mantidas a 37°C em estufa

de CO2 e repassadas a cada 72h. Foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina

e Cisplatina) nas linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma isoladamente e

combinadas entre si. A extração do RNA foi feita em Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o protocolo

do fabricante. Os níveis de expressão do miR-146a foram avaliados por qRT-PCR nas amostras usando o GAPDH

como gene constitutivo. RESULTADOS: Comparados aos controles, os níveis mais alterados e estatisticamente

significantes (p<0,05) de expressão do miR-146a foram observados nas linhagens tratadas com daunorrubicina,

citarabina e na combinação dessas 2 drogas. Nas linhagens tratadas somente com cisplatina, houve uma leve

alteração em relação aos controles (p=0.00598), contudo, quando combinada com a daunorrubicina e ou com a

citarabina, as linhagens tratadas apresentaram níveis de expressão do miR-146a mais elevados que os controles

(p<0,05), porém mais baixos se comparados com os das linhagens tratadas apenas com daunorrubicina ou

citarabina (p<0,05). Com as três drogas combinadas, as células têm o nível de expressão do miR-146a volta a se

elevar, aproximando-se do nível das linhagens tratadas com daunorrubicina e citarabina combinadas (p<0,005).

CONCLUSÕES: Existem poucos relatos sobre a relação do miR146a e a quimioresistencia com as drogas nas

linhagens celulares estudadas. Os altos níveis de expressão do miR-146a nas 03 linhagens após o tratamento com

daunorrubicina e citarabina, isoladas e combinadas, pode sugerir um mecanismo de indução de quimioresistencia.

Entretanto, a ação da cisplatina quando combinada com a daunorrubicina e ou com a citarabina, parece inibir esse

efeito de quimioresistencia pois existe uma clara redução dos níveis de expressão do miR-146a. Faz-se necessário

estudos para elucidar esses mecanismos.

APOIO CNPQ.

194


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-146A EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA

ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.

Guilhermie Duarte de Melo1; Italo Alves Santos


2; Gabriella Lombardi de

Almeida Sales3; Suzanne Pinheiro Vieira

3; Elizabeth Andrade Noé da Silva


4.





Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia

Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.


Aluna de Iniciação Científica. LADITEC -

Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências

Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL.





RESUMO INTRODUÇÂO: Os miR-146a são pequenos RNAs não codificantes, no entanto, são moléculas fundamentais

para o desempenho de processos celulares por atuarem no controle da expressão dos genes. O potencial dos

miRNAs atuarem como moduladores para as atividades de manutenção celular foi de grande importância para o

desenvolvimento de pesquisas. Quando esses sofrem alterações, podem ser os responsáveis pelo desencadeamento

de várias patologias, considerada uma das mais preocupantes é a proliferação celular desordenada dando origem

ao câncer. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do miR-146a em uma linhagem celular de câncer de boca após o

tratamento com drogas quimioterápicas. MATERIAL E MÉTODOS: Neste estudo foi usado a linhagem H413. As

culturas foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das mesmas.

Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) nas

linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma isoladamente e combinadas entre si.

A extração do RNA foi feita em sistema automatizado - Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o

protocolo do fabricante. Por fim, os níveis de expressão do miR-146a foram avaliados por qRT-PCR nas amostras

usando como gene constitutivo o GAPDH. RESULTADOS: Estatisticamente não houve alteração nos níveis de

expressão do miR146a na linhagem estuda em relação ao controle após o tratamento com daunorrubicina,

citarabina, daunorrubicina + citarabina, citarabina + cisplatina, daunorrubicina + cisplatina e das 03 drogas

combinadas. Apenas nas amostras tratadas com cisplatina houve um leve aumento da expressão (0.25 Fold) em

relação aos controles (FC: 1,0) (p<0,05). CONCLUSÕES: A literatura relata dados controversos em relação à

expressão do miR-146a em CA de boca relacionando-o tanto o aumento de expressão quando a diminuição com o

grau de agressividade do tumor. Nesse estudo, leve diferença de expressão apresentado pelo miR-146a quando

tratado com cisplatina pode sugerir um efeito de indução de quimioresistência. Esses dados são interessantes e

merecem atenção especial porque existem poucos estudos na literatura relacionando a quimioresistencia do miR-

146a com essa linhagem celular. Entretanto, estes resultados precisam ser repetidos para descartar qualquer falha

técnica do experimento e caso seja confirmado esse aumento de expressão, mais estudos serão necessários para

melhor definir esse mecanismo.

APOIO CNPQ

195


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-22 EM 03 LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER

HEMATOLÓGICO.

Orlando Ronaldy da S. Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales

2; Italo Alves Santos

3; Suzanne Pinheiro

Vieira2; Elizabeth Andrade Noé da Silva


4.


(1)1- Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de

Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de

Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (2)

2- Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de

Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola

de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)

3-

Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de


Brasil.; (4)

4- Professor de Citologia Clínica e Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de

Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem

e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.

RESUMO INTRODUÇÃO: Os micro-RNAs possuem cerca de 22 nucleotídeos distribuídos em um filamento único. Atuam

na regulação gênica, sendo fundamental para a diferenciação tecidual, ciclo celular, proliferação e apoptose. Além

de inúmeras evidências da sua importância em processos celulares vitais, no entanto, a desregulação na expressão

dos miRNAs está relacionada à diversas patologias em humanos, como doenças neurodegenerativas, problemas

cardíacos e vários tipos de câncer. A expressão dos miRNAs depende das características do tipo de câncer, do

estágio, dentre outras condições clínicas. O conhecimento sobre miRNAs tem propiciado aplicações ao

diagnóstico, prognóstico e terapia do câncer. OBJETIVOS: Avaliar a expressão do miRNA 22 em 03 linhagens

celulares específicas de câncer hematológico; avaliar a sensibilidade, a eficácia e a IC50 da daunorrubicina, da

citarabina e da cisplatina nas linhagens celulares selecionadas. MATERIAIS E MÉTODOS: Neste estudo foram

usadas as linhagens MOLM13, HL60 e U937. As culturas foram mantidas à 37°C em estufa de CO2 e repassadas

a cada 72h para manutenção das mesmas. Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas

(Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) nas linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da IC50 de

cada uma isoladamente e combinadas entre si (Daunorrubicina + Citarabina; Daunorrubicina + Cisplatina;

Citarabina + Cisplatina; Daunorrubicina + Citarabina + Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema

automatizado - Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o protocolo do fabricante. Por fim, os níveis de

expressão do miR-22 foram avaliados por qRT-PCR nas amostras antes e após tratamento com as drogas.

RESULTADOS: Houve alteração na sensibilidade as drogas testadas isoladas e combinadas, sendo a Cisplatina a

que provocou a menor sensibilidade nas 03 linhagens testadas, mesmo combinada com as demais drogas. A

expressão do miR-22 também se mostrou alterada em relação aos controles (linhagens sem as drogas),

principalmente nas linhagens tratadas com Daunorrubicina, Citarabina e na combinação dessas 2 drogas.

CONCLUSÕES: A Cisplatina tem pouco efeito sobre as linhagens estudas; apesar de naturalmente expresso nas

03 linhagens estudadas, após o tratamento com Daunorrubicina e Citarabina houve uma queda nos níveis de

expressão do miR-22 em relação aos controles (linhagens não tratadas), sugerindo um efeito antitumoral onde as

células se tornaram mais sensíveis à ação da droga.

APOIO CNPq

196


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-24 EM LINHAGENS CELULARES DE CÂNCER

HEMATOLÓGICO ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.

Italo Alves Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales


2; Elizabeth Andrade Noé da

Silva2; Orlando Ronaldy da S. Santos


3.





Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças



Professor de Citologia Clínica e

Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia

Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal

de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.

RESUMO Introdução. Dentre os mais de 1800 microRNAs já identificados em humanos, foi demonstrada a participação do

miR-24 em várias linhagens de câncer, incluindo tumores do sistema hematopoiético. Porém, muito pouco ainda

se conhece sobre a expressão e função desta molécula no câncer hematológico quando submetido à ação de drogas

antitumorais. Sabe-se que os microRNAs podem exercer influência no comportamento de células tumorais,

funcionando como oncomirs, ou seja, estimulando o desenvolvimento do tumor, ou como supressores tumorais,

inibindo seu desenvolvimento. Dessa forma, avaliar o padrão de expressão de um microRNA é uma boa

abordagem de estudo de sua função na patogênese do câncer, tendo em vista sua potencial utilização como

marcadores moleculares para diagnóstico, prognóstico e terapêutica. Dada a importância do estudo da expressão

de microRNAs em diferentes tipos de tumores quando submetidos a terapêutica medicamentosa, este trabalho teve

como objetivo avaliar a expressão do miR-24 nas linhagens celulares de câncer hematológico Molm-13, HL-60 e

U937, antes e depois de tratadas com as drogas Citarabina, Daunorrubicina e Cisplatina. Materiais e métodos.

Inicialmente foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas nas linhagens selecionadas, procedendo-se à

determinação da IC50 de cada uma isoladamente e das drogas combinadas entre si. Foi realizado, então, RT-PCR

quantitativo nas amostras tratadas com as drogas antitumorais a fim de analisar os níveis de expressão para o miR-

24. Resultados e discussão. O miR-24, naturalmente expresso nas 3 linhagens estudadas, apresentou-se

superexpresso em todas as amostras após o tratamento com daunorrubicina e citarabina, isoladas e combinadas,

em relação aos controles (linhagens não tratadas). Nas amostras tratadas apenas com cisplatina, o miR-24

apresentou um pequeno aumento de expressão em relação ao grupo controle. No entanto, nas amostras tratadas

com cisplatina combinada com as outras drogas, os níveis de expressão do miR-24 caíram em relação às amostras

tratadas somente com daunorrubicina e citarabina, isoladas ou combinadas. Conclusão. A superexpressão do miR-

24 sugere um efeito de quimiorresistência dos tumores, mediado pelo microRNA. Isoladamente, a cisplatina

exerce pouco efeito sobre as linhagens estudas. Quando, porém, combinada com daunorrubicina e citarabina, a

cisplatina parece funcionar como um inibidor do efeito de quimiorresistência do miR-24.

APOIO CNPq

197


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIR-24 EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA

ANTES E APÓS O TRATAMENTO COM DROGAS ANTITUMORAIS.

Italo Alves Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales


2; Elizabeth Andrade Noé da

Silva2; Carlos Arthur Cardoso Almeida

3.





Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças



Professor de Citologia Clínica e

Hematologia Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia

Celular. Curso de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal

de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.

RESUMO Introdução. Alguns tipos de câncer merecem especial atenção por sua agressividade e pelo impacto de suas

consequências na vida social dos pacientes. O câncer de boca é um dos mais traumáticos por suas consequências

após os tratamentos. Além disso, a imagem corporal também é uma causa de estresse psicológico, já que o

desfiguramento pós-cirúrgico dificilmente pode ser disfarçado. Estilo de vida e exposição a radiações e a agentes

químicos e físicos funcionam como fatores de expressão do câncer associados a fatores genéticos. O microRNA-

24, funcionam como reguladores gênicos, podendo modificar o comportamento da célula. Os microRNAs, são

pequenas moléculas com reconhecida ação sobre diversos tipos de câncer, podendo estimular o desenvolvimento

do tumor ou funcionar como supressores tumorais. Porém, muito pouco ainda se conhece sobre a expressão e

função desta molécula no câncer de boca quando submetido à ação de drogas antitumorais. Objetivo. Avaliar a

expressão do miR-24 em uma linhagem celular de carcinoma de células escamosas oral, H413 (ECACC

06092007), antes e depois de tratada com as drogas Citarabina, Daunorrubicina e Cisplatina. Materiais e métodos.

As células foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72 h para sua manutenção. Inicialmente

foram testadas a estabilidade e a eficácia das drogas nas linhagens selecionadas, procedendo-se à determinação da

IC50 de cada uma isoladamente e combinadas entre si (Daunorrubicina + Citarabina; Daunorrubicina + Cisplatina;

Citarabina + Cisplatina; Daunorrubicina + Citarabina + Cisplatina). A extração do RNA foi feita em sistema

automatizado - Maxwell ® Promega, usando os kits e seguindo o protocolo do fabricante. Por fim, foi avaliado o

nível de expressão do miR-24 por qRT-PCR nas amostras antes e após tratamento com as drogas. Resultados. O

miR-24 se mostrou aumentado nas linhagens tratadas com drogas isoladamente e combinadas em relação aos

controles. Nas células tratadas somente com cisplatina, porém, o miR-24 teve um nível de expressão bem maior.

Conclusões. Os altos níveis de expressão do miR-24 nas 3 linhagens após o tratamento com daunorrubicina,

citarabina e cisplatina, isoladas e combinadas, sugere um mecanismo de indução de quimiorresistência, sendo que

este efeito foi maior nas células tratadas somente com cisplatina. A queda dos níveis de expressão do miR-24 na

associação da cisplatina com as outras drogas parece funcionar como um inibidor do efeito de quimiorresistência

do miR-24.

APOIO CNPq

198


ANÁLISE DA EXPRESSÃO DO MIRNA-22 EM UMA LINHAGEM CELULAR DE CÂNCER DE BOCA

Orlando Ronaldy da Silva Santos1; Gabriella Lombardi de Almeida Sales

2; Italo Alves Santos

3; Suzanne Pinheiro

Vieira4; Elizabeth Andrade Noé da Silva


5.


(1)1- Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de

Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de

Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (2)

2- Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de

Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola

de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas - UFAL. Maceió, AL. Brasil.; (3)

3-

Aluno PIBIC. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso de


Brasil.; (4)

Aluno de Iniciação Científica. LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e

Terapia Celular. Curso de Graduação em Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR.


4- Professor de Citologia Clínica e Hematologia

Clínica. Coordenador LADITEC - Laboratório de Diagnósticos de Doenças Complexas e Terapia Celular. Curso

de Ciências Farmacêuticas. Escola de Enfermagem e Farmácia - ESENFAR. Universidade Federal de Alagoas -

UFAL. Maceió, AL. Brasil.

RESUMO INTRODUÇÃO: MicroRNAs (miRNAs) são sequências curtas de nucleotídeos que participam da regulação de

processos biológicos fundamentais, tais como diferenciação e apoptose, tendo, dessa forma, importante

participação em diversas patologias, incluindo o Câncer. O câncer de boca é um dos tipos de câncer mais

prevalentes em todo o mundo e alguns estudos têm investigado o papel dos miRNAs na fisiopatologia desta

doença; porém, as informações ainda são escassas e este mecanismo permanece pouco esclarecido. Outro

mecanismo associado aos miRNAs é a indução de quimioresistência. Quimioresistência é o processo no qual as

drogas usadas no tratamento do câncer perdem sua efetividade, com as células transformadas adquirindo

resistência às mesmas, tornando o tratamento ineficiente. OBJETIVO: Avaliar a expressão do miRNA-22 em uma

linhagem celular de câncer de boca.MATERIAL E MÉTODOS: Neste estudo foi usado a linhagem H413. As

culturas foram mantidas a 37°C em estufa de CO2 e repassadas a cada 72h para manutenção das mesmas.

Inicialmente foi testada a estabilidade e eficácia das drogas (Daunorrubicina, Citarabina e Cisplatina) na linhagem

selecionada, procedendo-se à determinação da IC50 de cada uma e de combinações delas. A extração do RNA foi

feita em sistema automatizado - Maxwell® Promega, usando os kits e seguindo protocolo do fabricante. Por fim, os

níveis de expressão do miRNA-22 foram avaliados por qRT-PCR nas amostras tratadas e nos controles (amostras

não tratadas). O GAPDH foi usado como gene constitutivo. RESULTADOS: A expressão do miRNA-22 se

mostrou alterada (p<0,05) em todas as amostras tratadas. A cisplatina apresentou o maior nível de expressão

dentre as drogas isoladas (3,4 fold); controle (1,7 fold); daunorrubicina (2,0 fold) e citarabina (1.88 fold). As

amostras tratadas com as 3 drogas combinadas também apresentaram um alto nível de expressão (3,68 fold),

superior ao da cisplatina. CONCLUSÕES: O miRNA-22 encontra-se naturalmente expresso nas células H413.

Após o tratamento com as drogas, houve um aumento nos níveis de expressão do miRNA-22, principalmente nas

células tratadas com cisplatina, que está entre as drogas de primeira escolha para o tratamento do câncer de boca, e

com as 3 drogas combinadas. Os resultados desse trabalho sugerem a participação deste miRNA em um

mecanismo de quimioresistência nas células da linhagem em estudo, contudo, mais estudos serão necessários para

elucidar este mecanismo.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

199


ANÁLISE DA FREQUÊNCIA DO POLIMORFISMO DO GENE MTRR EM AMOSTRAS DE

CARCINOMAS DUCTAL INVASIVO DA MAMA

Verena Silva Santos1; Aurélio Anderson Lopes Saraiva

2; Sandra Mara Bispo Sousa

2; Claudia Leal Macedo

2;

Patrícia Santos Pereira Lima2.


(1)Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Campus Vitória da Conquista - UESB; Universidade de São Paulo,

Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto - USP-FMRP; (2)

Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia, Campus

Vitória da Conquista - UESB

RESUMO O carcinoma de mama é o segundo tipo de câncer mais frequente no mundo, sendo o que mais afeta as mulheres.

De origem multifatorial, compreende fatores externos ou ambientais e fatores internos, sejam hormonais ou

genéticos. Mecanismos epigenéticos como a metilação do DNA também são importantes no estudo do câncer. O

padrão normal de metilação do DNA pode ser modificado devido a alterações em vias essenciais a este processo,

como a via do folato, essencial aos processos de síntese e metilação do DNA. Dentre as enzimas pertencentes a

esta via, a metionina sintase redutase (MTRR) é umas das responsáveis pela biossíntese da metionina, sendo esta

precursora da molécula doadora universal do grupo metil. O gene MTRR possui o polimorfismo funcional A66G,

no qual acarreta diminuição da atividade enzimática da MTRR. Diante disso, o objetivo deste trabalho foi verificar

o polimorfismo A66G do gene MTRR em amostras de carcinoma ductal invasivo da mama em mulheres do

Sudoeste da Bahia, avaliando as frequências alélicas e genotípicas do polimorfismo, correlacionando-os com o

câncer de mama e com os fatores clínicos e histopatológicos como idade das pacientes, grau histológico, tamanho

tumoral e comprometimento linfonodal. Foram avaliadas 62 amostras pela técnica de PCR-RFLP. As frequências

alélicas do polimorfismo do gene MTRR foram calculadas pelo software GenePop 4.2, verificando a associação

dos alelos e genótipos do polimorfismo com dados clínicos e histopatológicos. A frequência do alelo A na

população foi de 0,31 e do alelo G foi 0,69. As frequências genotípicas AA, AG e GG foram respectivamente

0,09, 0,43 e 0,47. As amostras estudadas não se encontram em aderência ao Equilíbrio de Hardy-Weinberg

(p=0,03), no entanto não houve associação do polimorfismo A66G com os fatores estudados. Assim sendo, o

desvio relacionado ao EHW pode ser explicado pelo excesso de heterozigotos existentes no grupo de amostras

(p=0,02), consequência do tamanho amostral (n=62). Diante dos resultados obtidos, faz-se necessário ampliar o

número amostral, avaliar este polimorfismo com outros polimorfismos de genes da via do folato, verificar a

associação do polimorfismo A66G com a dieta do folato e nível de homocisteína sanguíneo e realizar um estudo

caso/controle, contribuindo assim para um maior entendimento acerca dos polimorfismos da via do folato com o

carcinoma de mama.

APOIO Universidade Estadual do Sudoeste da Bahia. Campus Vitória da Conquista - UESB Fundação de Amparo à

Pesquisa do Estado da Bahia - FAPESB

200


ANÁLISE DE ASSOCIAÇÃO DO POLIMORFISMO SDF-1 3'A COM A SUSCEPTIBILIDADE À

INFECÇÃO PELO HIV-1: UMA META-ANÁLISE GLOBAL

José Leandro Andrade Santos1; Wlisses Henrique Veloso Carvalho Silva

1; Matheus da Silva Mesquita

2; Antonio

Victor Campos Coelho1; Rafael Lima Guimarães

1.


(1)Programa de Pós-Graduação em Genética (PPGG), Departamento de Genética, CB - UFPE, Recife - Brasil.;

(2)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami/LIKA - UFPE, Recife - Brasil.

RESUMO Estima-se que cerca de 37 milhões de pessoas estejam infectadas pelo HIV-1, o agente etiológico da AIDS. O

ciclo do HIV-1 é dependente de receptores para a entrada na célula, os quais fisiologicamente desempenham

importantes funções na resposta imunológica por serem sítios de ligação de quimiocinas. Assim, estas moléculas

atuam como antagonistas do HIV-1. Entre esses receptores, destaca-se o CXCR4, que além de ser correceptor do

HIV-1 apresenta como molécula de ligação a quimiocina SDF-1, desempenhando inúmeras funções

imunomodulatórias e hematopoiéticas. Um polimorfismo no gene SDF-1 tem sido alvo de estudos, o rs1801157

(G>A, também chamado de SDF-1 3'A), localizado na região 3'-UTR, torna seu RNAm mais estável, aumentando

a síntese proteica e sua interação com o receptor. Dessa forma, o objetivo deste trabalho foi realizar uma meta-

análise para avaliar se há associação do polimorfismo SDF-1 3'A com a susceptibilidade à infecção pelo HIV-1. A

pesquisa consistiu na busca por estudos de associação genética acerca da suscetibilidade ao HIV-1 envolvendo o

polimorfismo SDF-1 3'A publicados entre 1996 e 2016, indexados nos bancos de dados PubMed, Scielo, SNPedia

e Google Scholar, que apresentassem contagens alélicas nos grupos caso (indivíduos vivendo com o HIV-1) e

grupos controle (indivíduos não infectados pelo HIV-1). Foram extraídos dos artigos nome do primeiro autor, ano

de publicação, localização das populações estudadas e a contagem de genótipos e alelos. A meta-análise foi

realizada através do programa R. A partir dos critérios de inclusão, foram selecionados 28 estudos, de 15 países

diferentes distribuídos ao longo dos continentes, englobando um total de 11.682 indivíduos (6.258 casos e 5.424

controles). As frequências observadas para o polimorfismo nos grupos caso e controle foram de 22,9% e 24,7%,

respectivamente (OR=1,10; IC-95%=1,03-1,17; p=0,002). A heterogeneidade observada no estudo foi considerada

alta (I2=72,5%, Q=0,0918 p=<0,0001), indicando que os tamanhos amostrais das populações em estudo variaram

significativamente. A meta-análise não mostrou associação significativa entre a presença do polimorfismo SDF1-

3'A com a susceptibilidade à infecção pelo HIV-1 (OR=1,00; IC de 95%=0,87-1,15). Estes resultados sugerem

que, sozinho, o polimorfismo SDF-1 3'A não exerce influência significativa na susceptibilidade à infecção pelo

HIV-1. Assim, mais estudos necessitam ser realizados para que os mecanismos deste fenômeno venham a ser

elucidados.

201


ANÁLISE DO PERFIL DE EXPRESSÃO GÊNICA DA SMAD7 NO DESENVOLVIMENTO DE

ÚLCERAS MALEOLARES EM PACIENTES COM ANEMIA FALCIFORME

Diego Arruda Falcão1; Igor de Farias Domingos

1; Diego Antônio Pereira Martins

1; Luana Priscilla Moraes

Laranjeira2; Thais Helena Chaves Batista

2; Gabriela da Silva Arcanjo

2; Jaqueline Cabral Peres

3; Aderson da

Silva Araújo3; Antônio Roberto Lucena Araújo


1.


(1)Departamento de Genética/ UFPE- Universidade Federal de Pernambuco;

(2)UFPE- Universidade Federal de

Pernambuco; (3)

Fundação HEMOPE

RESUMO As úlceras de membros inferiores são uma das manifestações clínicas mais comuns na anemia falciforme (AF),

uma doença monogênica, de caráter multifatorial, e com uma grande diversidade clínica entre os pacientes. Estão

presentes entre 8% a 10% dos pacientes homozigotos, atingindo percentual maior que 50% em pacientes que

residem em áreas tropicais. Essas úlceras ocorrem devido a vaso-oclusão, hipóxia tecidual, hemólise e fatores

genéticos, apresentando cicatrização lenta e alta taxa de recorrência, além de grande susceptibilidade à infecção.

Estudos recentes, têm evidenciado que seu desenvolvimento pode estar relacionado com diversos genes da via do

TGFβ, que parece exercer um papel fundamental na cicatrização destas lesões, entre eles, o gene da SMAD7. A

SMAD7 faz parte da via inibitória da via do TGFβ, e sua expressão aumentada pode estar relacionada com a não

ativação de genes alvo essenciais no processo de cicatrização e reepitelização. Dessa forma, o objetivo do estudo

foi investigar o perfil da expressão da SMAD7, e o seu papel no desenvolvimento da úlcera de membros inferiores

em pacientes com AF. Foram analisados 36 pacientes com AF cadastrados na Fundação HEMOPE, coletadas

amostras de sangue periférico e realizada extração de RNA. Destes, 18 pacientes estavam com a úlcera ativa no

momento da coleta, e não apresentavam nenhuma das outras manifestações clínicas da AF. Os outros 18 pacientes

com AF, não tinham nenhuma das principais manifestações clínicas da AF. Foram utilizados ainda, 12 pacientes

controle com HbAA. A análise da expressão do gene da SMAD7 foi realizada por qPCR através de quantificação

relativa, utilizando o gene constitutivo GAPDH, pelo método de 2-ΔΔCt

. Foi visto que os pacientes com úlceras de

membros inferiores apresentam expressão de SMAD7 maior que os pacientes com AF sem manifestações clínicas

(P=0.036, FC=4,0), que por sua vez, apresentam expressão de SMAD7 maior do que os pacientes controle com

HbAA (p=0,0051, HbAA vs HbSS FC=2,5, Úlcera vs Sem manifestação FC=4,0). Diante dos resultados obtidos, a

expressão aumentada da SMAD7 parece estar relacionada com o desenvolvimento de úlceras de membros

inferiores nos pacientes com AF, confirmando o papel importante da via do TGFβ no desenvolvimento e

manutenção dessas lesões.

202


ANÁLISE DOS CASOS DE EPIDERMÓLISE BOLHOSA HEREDITÁRIA NA REGIÃO SUDOESTE DA

BAHIA, UM ENFOQUE PARA O ACONSELHAMENTO GENÉTICO.

Thiago Lima Melo1; João Victor Saback

1; Gabriela Santos

1; Jader Mesquita

1; Alessandra Nunes

1; Patricia

Santos Pereira Lima1; Débora Gusmão Melo

2; Maria Esther Ventim Oliveira Prates

1; Sandra Mara Bispo Sousa

1.


(1)DCN - UESB;

(2)DM - UFSCAR

RESUMO As epidermólises bolhosas hereditárias (EBH) se caracterizam por formar um grupo de doenças em que bolhas

surgem sobre a pele, podendo afetar também a mucosa. Mutações no DNA que acometem os queratinócitos são as

principais causas de EB hereditárias. Atualmente as EBH são classificadas em quatro grupos: simples, juncional,

distrófica e a síndrome de Kindler. É considerada uma doença genética rara, afetando 19 em um milhão de

nascidos vivos, mas com uma alta frequência na região sudoeste da Bahia. Com o objetivo de levantar e analisar

os casos de EBH na região sudoeste da Bahia e o tipo de epidermólise bolhosa com base nos dados clínicos, foram

obtidos os dados das famílias com aplicação de questionários sócio-demográficos e também com as informações

clínicas dos prontuários para a elaboração dos heredogramas das famílias. Até o presente momento, foram

analisadas 15 pacientes distribuídos em 15 famílias, sendo que, deste total 73% são meninos e 27% meninas, com

faixa etária entre 02 meses e 25 anos. Ao todo 53,3% são brancos, 33,3% mulato claro e 13,3% são pardos. Das 15

famílias analisadas, 66% apresentam outros casos de EBH e 73% são consanguíneas. Sendo esse último um dos

fatores que explicariam o grande número de casos nessa região do estado da Bahia. De acordo com as análises

iniciais dos heredogramas das famílias e com base nos dados clínicos e anatomopatológicos, o subtipo que ocorre

na região, na maioria dos casos é o distrófico recessivo. Esses pacientes vêm sendo acompanhados por uma equipe

multidisciplinar para garantir uma melhoria nas suas qualidades de vida, numa perspectiva para o aconselhamento

genético junto às famílias.

APOIO UESB, FAPESB

203


ANÁLISES GENÉTICAS ESPECÍFICAS PARA PACIENTES COM SUSPEITA CLÍNICA DE

DISTÚRBIOS GENÉTICOS NO ESTADO DO MARANHÃO

Silma Regina Ferreira Pereira1; Antonio Augusto Lima Teixeira Júnior

1; Raissa Lacerda Pontes

1; Vanessa

Ribeiro Moreira1; Maria Santana Pereira Viegas

1.


(1)Universidade Federal do Maranhão

RESUMO Introdução: a realização de exames genéticos e a correta identificação de alterações cromossômicas e moleculares

têm sido importantes ferramentas diagnósticas na prática médica, permitindo uma melhor conduta terapêutica.

Objetivo: o presente trabalho é um estudo retrospectivo dos exames citogenéticos e moleculares prestados pelo

Serviço de Genética Humana do Laboratório de Genética e Biologia Molecular (LabGeM) da Universidade

Federal do Maranhão, no período de 2002 a setembro de 2016. Metodologia: as análises citogenéticas foram

realizadas em cultura temporária de linfócitos de sangue periférico, pela técnica de bandamento GTG e as análises

moleculares e as análises moleculares foram conduzidas em pacientes com distúrbios da diferenciação sexual,

utilizando-se primers para sequências Y-específicas (genes SRY, DAZ e AMGY), além de β-Globina como

controle positivo reacional. Foram atendidos 583 pacientes, dos quais 385 realizaram exame citogenético, 81

pacientes realizaram análise molecular para sequências Y específicas e em 165 pacientes foi feita extração de

DNA para realização de outros exames moleculares específicos de acordo com as suspeitas clínicas. Resultados:

aas análises citogenéticas, 105 casos (27,2%) apresentavam alterações numéricas, 26 (6,7%) apresentavam

alterações estruturais e 65,9% cariótipo normal. Dentre as alterações numéricas, 47,6% dos casos apresentaram

cariótipo compatível com Síndrome de Turner, dos quais 54% com cariótipo 45,X, 42% eram mosaicos e 4%

outras alterações. Das alterações estruturais, as mais frequentes foram translocação (34,6%) e marcador (34,6%),

seguidas por deleção (15,3%), isocromossomo (7,7%) e cromossomo em anel (7,7%). Das análises moleculares,

16 pacientes (18,5 %) possuíam sexo cromossômico incompatível com o sexo de registro civil, dos quais 11

possuíam sexo de criação feminino, mas revelaram presença de gene SRY, e ausência de SRY em 4 pacientes com

sexo de criação masculino. Conclusão: os resultados deste projeto mostram a necessidade da assistência

laboratorial aos portadores de doenças genéticas para o diagnóstico etiológico, monitoração clínica e tratamento

adequado desses pacientes.

APOIO Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão ? FAPEMA.

204


APOBEC3G AND CUL5 POLYMORPHISMS : IMPLICATIONS WITH HIV-1 INFECTION AND

ANTIRETROVIRAL THERAPY IN A BRASILIAN POPULATION.

Jeanne Lucy Freitas Bastos1; Antônio Victor Campos Coelho

2; Ronald Rodrigues Moura

2; Luiz Claudio Arraes

3;

Lucas André Cavacanti Brandão4; Rafael Lima Guimarães

2; Sergio Crovella

2; Ronaldo Celerino da Silva

2.


(1)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife,

Brazil; (2)

Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil. Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil; (3)

nstitute of

Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil; (4)

Department of Pathology,


Federal University of Pernambuco (UFPE) Recife, Brazil

RESUMO Apolipoprotein B mRNA-editing enzyme catalytic polypeptide like 3G (APOBEC3G) cause hypermutation of

proviral DNA leading to degradation or replication-incompetent HIV-1. The HIV-1 viral infectivity factor (Vif)

suppresses APOBEC3G activity through the Cullin 5 complex. APOBEC3G and CUL5 polymorphisms have been

involved with modulation of susceptibility to HIV-1 infection. In our study we evaluated the distribution of

selected SNPs in APOBEC3G (rs3736685, rs2294367) and CUL5 (rs7117111, rs7103534, rs11212495) genes,

among 264 HIV-1 infected (HIV-1+) and 259 unexposed uninfected individuals from Northeast Brazil, looking for

a possible association with susceptibility to HIV-1 infection, viral load, CD4+ T cell count and success of

antiretroviral therapy. We observed that the rs11212495 CUL5 G allele and the CUL5 rs7103534-rs7117111 CG

haplotype were more frequent among unexposed uninfected individuals than in HIV-1 infected individuals,

suggesting an association with a lower susceptibility to HIV-1 infection. Moreover, the APOBEC3G rs2294367

C/G genotype correlated with delayed viral load suppression. Being aware that our findings showed some

differences with those reported in the literature, confirming the heterogeneity of the associations described,

possibly depending upon the different ethnicities analyzed and the low number of individuals enrolled in all

studies, and also considering that our HIV-infection susceptibility control group was constituted by unexposed

uninfected individuals instead of exposed uninfected individuals (individuals quite rare and difficult to be

enrolled), our findings report novel genetic variants associated with susceptibility to HIV-1 (CUL5 rs7103534,

rs7117111) and partial viral load control (APOBEC3G rs2294367). Replica studies performed on higher number

of subjects and subsequent validation of the functional role of CUL5 and APOBEC3G genetic variants associated

with HIV-1 infection and viral replication are envisaged to confirm our and the literature findings.

APOIO CNPq, CAPES and FACEPE

205


ASSOCIAÇÃO DA HEMOGLOBINA S COM A HEMOGLOBINA N-BALTIMORE

Thais Helena Chaves Batista1; Rodrigo Marcionilo de Santana


1; Gabriel Maia dos

Santos1; Jessica Maria Florencio de Oliveira

1; Diego Antônio Pereira Martins

1; Aderson da Silva Araújo

2; Ana

Claúdia dos Anjos2; Jaqueline Cabral Peres

2; Antonio Roberto Lucena de Araujo

1; Marcos André Cavalcanti

Bezerra1.


(1)Núcleo de Hematologia Clínica e Laboratorial - UFPE;

(2)Fundação HEMOPE

RESUMO Introdução: A Hemoglobina (Hb) S é uma variante da globina β que, na posição 6 da cadeia β, tem o aminoácido

ácido glutâmico substituído pela valina. A Hb N-Baltimore é uma variante estrutural da Hb que não confere

sintomatologia clínica em heterozigose, sendo os portadores assintomáticos. Resulta de uma mutação no códon 95

da globina β, ocorrendo substituição do aminoácido lisina por ácido glutâmico. Objetivo: Tendo em vista que na

literatura existem poucos relatos da associação dessas variantes estruturais da Hb, o presente estudo teve como

objetivo estudar a interação da Hb S com a Hb N-Baltimore em uma paciente procedente do hospital HEMOPE.

Material e Métodos: O portador destas variantes é uma paciente de 1 ano, do sexo feminino, procedente do

programa de triagem neonatal para hemoglobinopatias, e encaminhado ao hospital HEMOPE. Foi realizado o

hemograma, a eletroforese alcalina de hemoglobinas para verificar a separação das cadeias globínicas,

quantificação das hemoglobinas por meio da cromatografia líquida de alta performance (HPLC) e sequenciamento

do gene da globina β. Resultados e Discussão: O hemograma da paciente demonstrou microcitose e normocromia.

A eletroforese alcalina de hemoglobinas revelou migração de uma banda mais lenta que Hb A (sendo S-like-

confirmada por teste de solubilidade) e uma banda mais rápida que a Hb A, estas foram quantificadas por HPLC

de troca catiônica (56,5 % - Hb F, 28,8% - Hb X, 13,0% - Hb S e 1,7% - Hb A2). O sequenciamento do gene da

globina β revelou mutação no códon 95 (AAG ? GAG), em heterozigose, caracterizando a Hb N-Baltimore, bem

como mutação no códon 6 (GAG ? GTG), relativo à Hb S. O estudo molecular familiar revelou a presença da Hb

S em heterozigose no genitor e, Hb N-Baltimore, também em heterozigose, na genitora. Observou-se também que

o portador destas mutações associadas, aparentemente não apresenta sintomas clínicos característicos de doença

falciforme, sendo, portanto, um quadro oligoassintomático. Conclusão: Na literatura, existem escassos estudos a

respeito dessa interação e este é o primeiro relato no Brasil. Contudo, as possíveis interações intermoleculares

entre as variantes, deverão ser estudadas do ponto de vista de dinâmica molecular e funcional para melhor

compreensão desta associação.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico- CNPq

206


ASSOCIAÇÃO DE POLIMORFISMOS NO GENE MBL2 COM OSTEONECROSE EM PACIENTES

COM ANEMIA FALCIFORME

Isabela Cristina Cordeiro Farias1; Gabriela da Silva Arcanjo

2; Diego Arruda Falcão

2; Luana Priscilla

Laranjeira Prado2; Mariana Barros Souto de Souza

2; Kleyton Palmeira do Ó

1; Gabriel Maia dos Santos

2;

Taciana Furtado de Mendonça Belmont1; Luydson Richardson Silva Vasconcelos

3; Patricia Muniz Mendes Freire

de Moura1; Maria do Socorro de Mendonça Cavalcanti


2.




(3)Universidade de

Pernambuco/FIOCRUZ

RESUMO Introdução: A anemia falciforme (AF) é caracterizada por manifestações clínicas graves como vaso-oclusão, AVC

e osteonecrose (NACF). O gene MBL2, que codifica a lectina ligadora de manose (MBL), tem sido associado com

doenças vasculares. Objetivo: Determinar a frequência dos polimorfismos da região promotora -221 e -550 e do

éxon 1 do gene MBL2 em pacientes com AF e verificar a sua associação com a NACF. Materiais e Métodos: No

éxon 1 do MBL2, existem três mutações de ponto nos códons 52, 54 e 57 e estas variantes alélicas são designadas

coletivamente de "O". A genotipagem dos polimorfismos do éxon 1 e da região promotora do MBL2 foram

realizados por PCR em tempo real utilizando Syber Green® (Melting Temperature Assay) e o sistema Taqman

®,

respectivamente. Foram selecionados 171 pacientes com AF do HEMOPE. Destes, 73 com evidências de NACF,

formando o grupo caso, e 98 sem evidências de NACF, sendo o grupo controle. Resultados: A frequência dos

genótipos relacionados com alta produção de MBL foi de 60% (n=88) no grupo caso e de 57% (n=111) no grupo

controle. Nos genótipos relacionados à intermediária produção de MBL a frequência foi 13% (n=19) nos casos e,

24% (n=47) nos controles. A frequência dos genótipos relacionados com baixa produção de MBL foi de 27%

(n=39) nos casos e de 19% (n=38) nos controles. A associação dos genótipos de baixa com os de intermediária

produção de MBL entre os casos e controles apresentou diferença significativa (p=0,013). A frequência dos

haplótipos relacionados à alta produção de MBL (HYA/HYA, HYA/LYA, LYA/LYA) foi 33% (n=24) nos casos e

de 33% (n=32) nos controles. Nos haplótipos relacionados à intermediária produção de MBL (HYA/ HYO,

HYA/LXA, HYA/LYO, LXA/LXA, LYA/LXA, LYA/LYO) nos casos e controles foi de 55% (n=40) e 53%

(n=52), respectivamente. A frequência dos haplótipos relacionados à baixa produção de MBL (HYO/HYO

HYO/LXA, HYO/LYO, LXA/LYO, LYO/LYO) foi 12% (n=9) nos casos e de 14% (n=14) nos controles. A

associação entre os grupos estudados com os haplótipos relacionados à baixa e intermediária/alta produção de

MBL não mostrou diferença estatística (p=0,88). Quando analisados os polimorfismos, foi encontrada associação

apenas com a região promotora -221, com uma maior frequência do alelo "X" no grupo controle (p=0,0162).

Conclusão: Este estudo foi o primeiro trabalho a avaliar o gene MBL2 em pacientes com AF que desenvolveram

NACF, e estudos futuros são necessários para elucidar o real papel deste gene na AF.

APOIO FACEPE e CNPq

207


ASSOCIAÇÃO DO POLIMORFISMO IVS-14-1046 C>T NO GENE ANXA2 COM O

DESENVOLVIMENTO DO ACIDENTE VASCULAR CEREBRAL EM PACIENTES PEDIÁTRICOS

COM ANEMIA FALCIFORME

Rayssa Leal Borges de Medeiros1; Diego Antonio Pereira Martins

1; Betânia Lucena Hatzlhofer

1; Igor Farias

Domingos1; Renata Cunha Azevedo

2; Ana Claudia Mendonça dos Anjos


2; Aderson da

Silva Araujo2; Antonio Roberto Lucena Araujo


1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Fundação de Hematologia e Hemoterapia de

Pernambuco - HEMOPE

RESUMO INTRODUÇÃO: Diante do acometimento vascular no desenvolvimento de acidente vascular cerebral (AVC)

principalmente em crianças com anemia falciforme (AF), é possível que alterações na via fibrinolítica possam

influenciar na oclusão dos vasos intracranianos. Estudos recentes demostraram que camundongos nocautes para o

gene anexina A2 (ANXA2) apresentam acúmulo generalizado de fibrina no interior dos vasos, com consequente

estenose. OBJETIVO: Avaliar a frequência do polimorfismo IVS-14-1046 C>T (rs7163836) no gene ANXA2 e

associar esses achados com a frequência de AVC em pacientes pediátricos com AF. CASUÍSTICA e

METODOLOGIA: Entre janeiro de 2003 a julho de 2016, 196 pacientes acompanhados pela Fundação HEMOPE

foram incluídos. Com base na velocidade do fluxo sanguíneo cerebral (Doppler transcraniano, DTC), pacientes

foram agrupados em: DTC normal (137 pacientes; 70%), DTC condicionante (39 pacientes; 20%) e DTC alto

risco (20 pacientes; 10%). Utilizando a metodologia TaqMan®, a genotipagem do polimorfismo IVS-14-1046

C>T do gene ANXA2 (MAF: 47%) foi possível em 182 pacientes (93%). RESULTADOS: Com um seguimento

médio de 12 anos, a taxa de AVC foi de 4% (oito pacientes). Cinquenta pacientes (27%) apresentaram o genótipo

homozigoto selvagem (CC), seguido por 97 pacientes (53%) com o genótipo heterozigoto (CT) e 35 pacientes

(19%) com o genótipo homozigoto variante (TT). A frequência de AVC foi significativamente maior nos pacientes

com genótipo TT (14%) (P=0,005). Além disso, pacientes com esse genótipo apresentaram um menor tempo para

o desenvolvimento de AVC (10,9 anos, 95%IC: 10-11,8 anos) comparado com pacientes dos grupos CT (12,8

anos, 95%IC: 12,5-13 anos) e CC (12,5 anos, 95%IC: 12-13,1 anos) (P=0,016). Não houve associação entre a

velocidade do fluxo sanguíneo e o polimorfismo IVS-14-1046 C>T (P=0,308). Contudo, quando analisados

separadamente, pacientes alocados no grupo DTC normal com o genótipo homozigoto variante TT apresentaram

uma maior frequência de AVC (15%; P=0,006). O polimorfismo IVS-14-1046 C>T não teve impacto na

frequência de AVC para os pacientes dos grupos DTC condicionante (P=0,096) e DTC alto risco (P=0,991).

CONCLUSÃO: A genótipo homozigoto variante TT do gene ANXA2 está associado com o desenvolvimento de

AVC nos pacientes com AF.

APOIO CNPq

208


ASSOCIAÇÃO INÉDITA DO SNP RS2125739 NO GENE ABCC10 A EFEITOS ADVERSOS

NEUROPSIQUIÁTRICOS EM PACIENTES HIV POSITIVOS SUBMETIDOS À TERAPIA COM

EFAVIRENZ NO ESTUDO DE COORTE BRASILEIRO.

Msc. Josué Jeyzon de L. S Valeriano1; Msc. Antônio V. C. Coelho

1; Msc. Ronald R. de Moura

1; Phd. Luiz Cláudio

A. de Alencar2; Phd. Lucas A. C. Brandão

3; Phd. Sérgio Crovella

1; Phd. Rafael L. Guimarães

1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami

(LIKA) ; (2)

Instituto de Medicina Integral Professor Fernando Figueira (IMIP). Laboratório de Imunopatologia

Keizo Asami (LIKA); (3)

Departamento de Patologia, Universidade Federal de Pernambuco. Laboratório de

Imunopatologia Keizo Asami (LIKA)

RESUMO A Terapia Antirretroviral Altamente Ativa (HAART) foi uma revolução que mudou drasticamente a evolução da

infecção pelo HIV/AIDS, transformando uma doença fatal em uma doença crônica. Efavirenz é um antirretroviral

muito eficiente, mundialmente prescrito, presente no tratamento de primeira linha HAART, mas que apresenta

uma alta frequência de efeitos neuropsiquiátricos que afetam a adesão ao tratamento, prejudicam a saúde e a

qualidade de vida dos pacientes. Neste sentido, este estudo visa identificar polimorfismos genéticos associados à

ocorrência de efeitos neuropsiquiátricos relatados no tratamento com Efavirenz em doses padrão. Através da

análise retrospectiva dos prontuários dos 162 pacientes HIV positivos que utilizavam Efavirenz, 82 (50,6%)

apresentaram efeitos adversos neuropsiquiátricos relacionados, dentre os quais: tonturas, cefaleia, insônia e

depressão se mostraram os mais frequentes. Nesta coorte, o uso do Efavirenz foi associado ao risco de

aproximadamente nove vezes para a ocorrência de efeitos adversos neuropsiquiátricos (OR: 8,9; p-valor <0,0001).

A análise de sobrevivência demonstrou que o uso de Zidovudina combinado ao Efavirenz, ao invés de Tenofovir

(HR: 2,7; p-valor: 0,04), e o sexo feminino (HR: 3,5; p-valor: 0,05) aumentam o risco de tonturas e depressão,

respectivamente, ao longo do tempo. Entretanto não houve diferenças significativas no risco de ocorrência de

tonturas entre o uso de Zidovudina ou Tenofovir, sem a presença do Efavirenz (OR: 1,9; p-valor: 0,6). Dez

polimorfismos em sete genes (CYP2B6, ABCB1, ABCC1, ABCC2, ABCC10, NR1I2 e NR1I3) foram analisados.

Apenas o polimorfismo no gene ABCC10 (rs2125739), alelo C, foi associado à ocorrência de efeitos adversos

neuropsiquiátricos no tratamento com Efavirenz (OR: 2,6; p-valor: 0,03). Análises por regressão logística ajustada

para variáveis demográficas, clínicas e genéticas, esta última relacionada ao aumento nas concentrações

plasmáticas do Efavirenz, mostraram que os genótipos CT ou CC no rs2125739 estavam ainda mais associados

com um risco elevado (OR: 5,1; p-valor: 0,007). Os resultados poderão contribuir para minimizar os riscos de

ocorrência de efeitos neuropsiquiátricos na terapia com Efavirenz, mantendo sua eficácia, identificando pacientes

susceptíveis e auxiliando na escolha da HAART combinada.

APOIO CNPq, CAPES, FACEPE

209


ASSOCIATION BETWEEN INTERLEUKIN-6 G-174C POLYMORPHISM AND STROKE

DEVELOPMENT IN SICKLE CELL ANEMIA

Igor de Farias Domingos1; Diego Antonio Pereira Martins

1; Juan Luiz Coelho da Silva

1; Rayssa Leal Borges de

Medeiros1; Diego Arruda Falcão

1; Renata Cunha Azevedo

2; Ana Claudia Mendonça dos Anjos

2; Taciana Furtado

Mendonça Belmont3; Maria do Socorro Mendonça Cavalcanti

3; Aderson da Silva Araujo

2; Antonio Roberto

Lucena de Araujo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra

1.


(1)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil;

(2)Department of Internal Medicine,

Hematology and Hemotherapy Foundation of Pernambuco, Recife, Brazil; (3)

Department of Medical Sciences,

University of Pernambuco, Recife, Brazil

RESUMO There is sufficient evidence in the literature to support the idea that specific genetic variants contribute to the

development of cerebrovascular disease in sickle cell anemia (SCA). With this in mind, several genotype-

phenotype association studies have identified promising novel genetic modifiers that are associated with a high

risk of stroke in SCA, albeit without a full understanding of their prognostic significance. Here, our focus was to

deduce the prognostic relevance of IL6 G-174C polymorphism and its association with cerebrovascular disease.

169 patients were followed from birth until December 2015 in a single reference center in northeast Brazil.

Ischemic stroke was defined as a regional loss of cerebral blood flow due to stenotic or occluded cerebral

vasculature, as subsequently confirmed by imaging exams. Genomic DNA from peripheral blood was extracted by

phenol-chloroform extraction. IL6 G-174C (rs1800795) polymorphism was detected by real-time PCR using the

TaqMan assay (Applied Biosystems), according to the manufacturer's instructions. Fisher's exact test or Chi-

square test, as appropriate, were used to compare categorical variables, with the Wilcoxon rank-sum test used to

compare continuous variables. Cumulative incidence curves were constructed reflecting time to stroke

development as competing risks, with the Gray test used for comparison of curves. All P-values were two sided

with a significance level of 0.05. The median age of our cohort was 18 years (range: 6-27 years), with 71 males

(42%) and an estimated stroke rate of 14% (23 patients). Seventy-three patients (43%) were older than 18 years.

The entire cohort was fully characterized for the IL6 G-174C polymorphism: 103/169 patients (61%) carried the

IL6 GG genotype, while 60/169 (35%), and 6/169 (4%) presented with the GC and CC genotypes, respectively.

The frequency of stroke was higher in patients with IL6 CC (67%), compared to patients with the GC (17%), or

GG (9%) genotypes (P<0.001). The cumulative probability of stroke was significantly higher for patients with the

IL6 CC genotype (75%), compared to patients with either the IL6 GG (11%), or IL6 GC genotypes (21%),

(P<0.001). Our data suggest that IL6 G-174C may independently predict a higher risk of stroke in patients with

SCA.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq: Grant #483714/2013-5)

210


ASSOCIATION OF THE PNPLA3 POLYMORPHISM (RS738409) WITH LIVER FIBROSIS AND

HEPATOCELLULAR CARCINOMA (HCC) IN PATIENTS INFECTED WITH HEPATITIS C (HCV)

João Victor Cordeiro Farias1; Penelopy Rodrigues de Macedo

1; Raul Emídio de Lima

1; Isabela Cristina Cordeiro

Farias2; Leila Maria Moreira Beltrão Pereira

3; Patrícia Muniz Mendes Freire de Moura

1; Luydson Richardson

Vasconcelos4.


(1)Instituto de Ciências Biológicas - Universidade de Pernambuco (ICB/UPE);

(2)Faculdade de Ciências Médicas -

Universidade de Pernambuco (FCM/UPE); (3)

Instituto do Fígado e Transplantes de Pernambuco (IFP); Faculdade

de Ciências Médicas - Universidade de Pernambuco (FCM/UPE); (4)

Instituto do Fígado e Transplantes de

Pernambuco (IFP); Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães (FIOCRUZ-PE)

RESUMO The hepatitis C virus infection (HCV) is a worldwide issue, affecting more than 170 million people around the

world, representing about 3% of the worldwide population. The chronic infection by the HCV is the most common

cause of chronic liver diseases, such as fibrosis and hepatocellular carcinoma (HCC). The liver fibrosis is a

common hallmark to assess the progression of chronic liver diseases. There are some predisposing genetic factors

for the rapid progression of liver fibrosis. One key genetic factor is considered a determinant factor, which is the

adiponutrin variant (PNPLA3 rs738409; C>G), that leads to a product with lower hydrolase catalytic activity,

therefore could be considered a risk factor for liver chronic diseases. The p.I148M adiponutrin variant of PNPLA3

is already known to be a key genetic factor for non-alcoholic fatty disease (NAFLD) and alcoholic liver disease

(ALD). According to the METAVIR scale, there are four fibrosis levels, which are F0, F1, F2, F3 and F4. Our

patients were classified as mild fibrosis (F0-F2) severe fibrosis (F3-F4), and HCC. In our study, 580 patients were

analyzed, 173 within the mild fibrosis group, 299 with severe fibrosis, and 108 with HCC. The polymorphism was

genotyped by using the PCR real time method (TaqMan). We analyzed the basal and biochemical features of the

patients, such as Body Mass Index, Sex, alanine aminotransferase (ALT), aspartate aminotransferase (AST),

gamma glutamyltranspeptidase (gGT), alpha-fetoprotein (AFP) and platelets counts. The patients with mild

fibrosis were significantly younger when compared to severe fibrosis and HCC (mean age 62.6 ±8.7, 57.8 ±8.9

and 52.4 ±12.2, respectively; p = 0.0212). The male gender was more prevalent in the HCC group (70.3%) and in

the mild fibrosis group (50.8%); however, it was slightly less prevalent in the severe fibrosis group (47.2%).

Bilirubin, AST, gGT and AFP were all higher in the HCC group (p = <0.0001). The association analysis was

performed by dividing the genotypes as with or without the minor allele [C] (CC/CG vs GG). The differences were

statistically significant when comparing mild fibrosis vs severe fibrosis and mild fibrosis vs HCC, respectively: p

= 0.0276 (OR: 2.876; CI: 1.166 - 7.093) and p = 0.0105 (OR: 3.500; CI: 1.272 - 9.627). In conclusion, we

observed that the presence of GG genotype was associated with the risk to develop liver fibrosis and HCC in

patients infected with HCV.

211


ASSOCIATION STUDY OF CCR5DELTA32 POLYMORPHISM WITH THE SUSCEPTIBILITY TO

HIV-1 INFECTION IN POPULATIONS FROM STATE OF PERNAMBUCO

Wlisses Henrique Veloso Carvalho Silva1; José Leandro Andrade Santos

1; Madson Allan de Luna Aragão

2; Heitor

Horlando Sampaio Araújo da Silva2; José Eduardo Adelino Silva

2; Antonio Victor Campos Coelho

1; Rafael Lima

Guimarães1.


(1)Genetics Post-Graduation Program (PPGG), Department of Genetics, CCB - UFPE, Recife - Brazil;

(2)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami/LIKA - UFPE, Recife - Brazil

RESUMO Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS) is consequence of an infection by the Human Immunodeficiency

Virus type 1 (HIV-1), which destroys CD4+ T cells. To enter the cell, HIV-1 uses CD4 as a receptor and CCR5 as

co-receptor. CCR5 is a chemokine receptor widely expressed by several immune cells that are engaged in

inflammatory responses. Some populations have individuals exhibiting a 32 base-pairs deletion in the exon 3 of

the CCR5 gene (CCR5delta32) that produces a truncated non-functional protein and not expressed on the cell

surface. This polymorphism, also known as rs333, is more commonly found in European populations, but rare in

African, Asian and Amerindian populations; moreover, the CCR5delta32 allele has been described as a

susceptibility modifier of infections and inflammatory diseases, including HIV/AIDS. Therefore, the objective of

this study was to investigate the possible association of CCR5delta32 polymorphism with the susceptibility to

HIV-1 infection. We enrolled 443 (167 males and 276 females) HIV-1 positive patients at treatment (case group)

and 177 (60 males and 177 females) HIV-1 negative, clinically healthy individuals (control group) from

metropolitan region of Recife, Pernambuco, Northeast Brazil and performed CCR5delta32 genotyping. We

observed that among the 620 individuals, 575 did not have the deletion, 45 were heterozygous and no one was

homozygous for the CCR5delta32 allele. The allelic frequencies of CCR5delta32 were 4.5% (control group) and

3.3% (case group). The genotype distribution of CCR5delta32 allele was in conformity to Hardy-Weinberg

equilibrium in both groups. We did not find any association of CCR5delta32 polymorphism with the susceptibility

to HIV-1 infection (OR=0.72, 95%CI=0.37-1.42, p=0.31). These results suggested that

the CCR5delta32 polymorphism does not have significant influence on susceptibility to HIV-1 infection in the

studied population. Brazilian populations show a high genetic diversity because of the elevated degree of

admixture among Europeans, Africans and Amerindians. As a result, it might affect association studies with

the CCR5delta32 allele. This could explain the allele low frequency found in the studied population and,

consequently, the absence of association.

APOIO CNPq FACEPE

212


AVALIAÇÃO DE POLIMORFISMO NO GENE VDR NA SUSCEPTIBILIDADE AO

DESENVOLVIMENTO DE OSTEONECROSE EM PACIENTES COM ANEMIA FALCIFORME

Mariana Barros Souto de Souza1; Diego Antonio Pereira Martins


1; Thais Helena

Chaves Batista1; Gabriel Maia dos Santos

1; Jessica Maria Florencio de Oliveira

1; Rodrigo Marcioniolo de

Santana1; Aderson da Silva Araujo

2; Antonio Roberto Lucena Araujo

1; Marcos Andre Cavalcanti Bezerra

1.




RESUMO Introdução: A osteonecrose é uma complicação crônica e progressiva da anemia falciforme (AF) e ocorre devido a

vaso-oclusão na microcirculação óssea, com infarto das superfícies articulares, especialmente de ossos longos

(fêmur e úmero). Sabendo que a ocorrência da osteonecrose possui uma base multifatorial, variantes polimórficas

de diversos genes, dentre eles o VDR, tem sido bastante estudados. Estudos envolvendo o FokI, encontraram uma

ligação entre este polimorfismo e a densidade mineral óssea de crianças e adolescentes. É possível que as

variações na função do receptor da vitamina D afetem diretamente a absorção do cálcio, resultando em alterações

na formação óssea. Assim o objetivo do nosso trabalho é avaliar se existe associação entre o polimorfismo FokI

com a frequência de desenvolvimento da osteonecrose nos pacientes com AF. Materiais e Métodos: O estudo foi

conduzido por comparação de grupos e as análises foram realizadas numa amostra de 188 pacientes HbSS, os

quais foram divididos em casos (n=77), os pacientes que apresentaram osteonecrose e controles (n=111) pacientes

acima de 18 anos e que não apresentaram o desfecho clínico avaliado. A genotipagem do polimorfismo foi

realizada por RT-PCR utilizando o sistema TaqMan®. Resultados: O polimorfismo FokI (rs2228570) mostrou-se

associado à uma menor taxa de desenvolvimento da osteonecrose (P=0,028; OR: 0,201; IC95%: 0,04-0,91). Na

nossa amostra 73% e 7% dos pacientes com genótipo selvagem mais heterozigoto (CC + CT) e homozigoto

variante (TT), respectivamente, para o polimorfismo FokI, desenvolveram osteonecrose. Avaliando o risco

cumulativo para o desenvolvimento da osteonecrose, observamos que os pacientes com genótipo CC + CT

apresentaram uma maior taxa de desenvolvimento de osteonecrose (73%) que os TT (7%) (P=0,005). Dessa

forma, o genótipo homozigoto variante para esse polimorfismo pode indicar um fator protetor contra o

desenvolvimento da osteonecrose. Conclusão: Diante do exposto concluímos que o polimorfismo do VDR FokI

(rs2228570), mostrou-se, em seu genótipo homozigoto variante, como fator de proteção para a ocorrência de

osteonecrose na amostra populacional estudada. A compreensão desses fatores de risco genéticos para o

desenvolvimento da osteonecrose torna-se necessária para fornecer novos conhecimentos sobre a patogênese desta

doença e, eventualmente, oferecer oportunidades para o seu tratamento, que atualmente é limitado.

213


AVALIAÇÃO DO IMPACTO DO POLIMORFISMO RS685417 E DA EXPRESSÃO DO GENE KLOTHO

NAS COMPLICAÇÕES CLÍNICAS DA ANEMIA FALCIFORME

Jéssica Vitória Gadelha de Freitas Batista1; Diego Antonio Pereira Martins

1; Luana Priscilla Laranjeira Prado

1;

Thaís Helena Chaves Batista1; Gabriela da Silva Arcanjo


2; Fábia Michelle Rodrigues

de Araújo Callado2; Thales Allyrio Araújo de Medeiros Fernandes


2; Antonio Roberto

Lucena de Araújo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra

1.



(2)Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco ;

(3)Universidade do Estado do Rio Grande do Norte

RESUMO Embora a anemia falciforme (AF) seja uma condição monogênica, é marcada por intensa heterogeneidade

fenotípica. Além de fatores ambientais e econômicos, moduladores genéticos também influenciam no curso clínico

da doença nos indivíduos. Por isso, é interessante que genes candidatos a moduladores sejam pesquisados a fim de

auxiliar na indicação prognóstica dos pacientes e, assim, permitir um melhor acompanhamento clínico. Nesse

contexto, mostra-se interessante o gene KLOTHO (KL), o qual é envolvido em mecanismos importantes na

fisiopatologia da AF, como a inflamação, estresse oxidativo e expressão de moléculas de adesão. Dessa forma,

objetivamos avaliar a associação do polimorfismo intrônico rs685417 (G>A) com a frequência das principais

complicações clínicas da AF e investigar se o KL é diferencialmente expresso na AF e se os genótipos do

polimorfismo estudado influenciam nessa expressão Nosso estudo, então, foi realizado por comparação de grupos,

os quais foram compostos por indivíduos AF acompanhados na Fundação HEMOPE (Recife/PE) divididos em

casos e controles. Deles, foram extraídas amostras de DNA e RNA para realização dos ensaios de genotipagem

utilizando sondas TaqMan® (ensaio disponível no site https://www.thermofisher.com/order/genome-database

C__2983081_10) e também ensaio de expressão gênica relativa utilizando como referência o gene constitutivo

GAPDH. Para os ensaios de expressão foram utilizados também 23 indivíduos sem anemia falciforme, com padrão

de hemoglobina normal (HbAA). Com uma coorte de 346 pacientes com AF, percebeu-se que, aplicando o modelo

de associação sobredominante, houve associação do genótipo GA com uma maior frequência de úlceras de perna

(P=0,006; OR=2,44; IC(95%)=1,31-4,55), osteonecrose (P=0,036; OR=2,2; IC(95%)=1,09-4,42) e priapismo

(P=0,048; OR=2,39; IC(95%)=1,06-5,37). Quanto aos ensaios de expressão, os pacientes com AF mostraram

hipoexpressão do KL quando comparados aos indivíduos HbAA (P=0,001) e não foram encontradas diferenças

dos níveis de expressão entre os indivíduos com diferentes genótipos para o polimorfismo rs685417 (G>A). Diante

de nossos resultados, podemos concluir que pacientes com o genótipo GA do polimorfismo avaliado mostraram

maior frequência de úlceras de perna, osteonecrose e priapismo. Além disso, concluímos também que o nosso

gene alvo se mostra hipoexpresso nos pacientes com anemia falciforme.

APOIO CNPq - Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico

214


AVALIAÇÃO DO POLIMORFISMO DO GENE TGFA COMO FATOR DE RISCO PARA AS FISSURAS

LABIOPALATAIS EM PACIENTES COM PAIS SOROPOSITIVOS PARA LEISHMANIOSE E

ANÁLISE CARIOTÍPICA DOS FISSURADOS

Raysa Samanta Moraes Laranjeira1; Juliana Vieira de Barros

1; Rafaella do Nascimento Pinto

1; Arnoldo

Vasconcelos de Alencar Filho2; Maria das Graças Figueiredo

2; Aronita Rosenblatt

2; Neide Santos

1; Merilane da

Silva Calixto3.


(1)Laboratório de Genética e Citogenética Animal e Humana- CB/UFPE;

(2)Odontopediatria/FOP/UPE;

(3)Unidade

Acadêmica de Ciências Biológicas/Centro de Saúde e Tecnologia Rural/UFCG

RESUMO As fissuras labiopalatais (FL/P), estão entre as malformações congênitas de maior frequência que acometem o ser

humano. Os fatores etiológicos podem ser hereditários, ambientais, congênitos, genéticos, doenças virais ou por

protozoários. Atualmente, há relatos de doenças infecciosas como fatores de risco para FL/P, contudo doenças

negligenciadas, como a Leishmaniose, não têm sido estudada. No entanto, alguns genes têm sido implicados com a

ocorrência de FL/P. Genes relacionados ao desenvolvimento embriológico de fendas orofaciais, como o TGFA,

representam maior importância entre os estudos de ligação e associação, além de serem expressos durante o

período crítico da palatogênese. A associação entre FL/P e o polimorfismo do gene TGFA foi encontrada em

algumas populações, e estudos de interações gene-ambiente sustentam a hipótese do papel do gene como um fator

modificador da FL/P. Este estudo teve como objetivo definir o cariótipo dos pacientes com FL/P, não associados a

síndromes, assim como verificar associação entre o polimorfismo do gene TGFA com o desenvolvimento das FL/P

nos pacientes com genitores diagnosticados como soropositivos para Leishmaniose. Amostras de sangue coletadas

de 20 indivíduos fissurados e de seus pais (pai e/ou mãe) em áreas endêmicas de Leishmaniose em Pernambuco

passaram por confirmação imunológica pela reação de imunofluorescência indireta (IFI). A análise cariotípica

realizada pelo bandeamento G em 20 pacientes fissurados mostrou que 16 indivíduos analisados apresentaram

cariótipo normal, sendo 46,XX no sexo feminino e 46,XY no sexo masculino e quatro indivíduos apresentaram

alteração cromossômica envolvendo os cromossomos 9 e 16. O DNA genômico foi obtido pela técnica de fenol-

cloroformio e o polimorfismo foi detectado através da técnica de PCR em tempo real. As análises estatísticas para

estimar as frequências alélicas e genotípicas foram realizadas através do equilíbrio de Hardy-Weinberg, a partir do

teste exato de Fisher, X2, sendo considerado significativo p <0,05. Após análise estatística foi obtido um p value =

0,43 não sendo possível observar a associação entre essas duas condições. Os resultados sugerem que o

polimorfismo estudado não contribui diretamente para o surgimento das fissuras labiopalatais em pacientes que

possuem pais soropositivos para a Leishmaniose, reforçando sua origem multifatorial, com variantes ambientais,

teratogênicas e genéticas.

APOIO CNPq e FACEPE

215


CARACTERIZAÇÃO CLÍNICA, IMUNOMOLECULAR E CITOGENÉTICA DOS PORTADORES DA

LEUCEMIA DE CÉLULAS MADURAS B (LLA-L3) DA INFÂNCIA DO CEONHPE/HUOC/UPE

Izabelle Aguiar Pereira1; Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

1; Edinalva Pereira Leite

2; Elizângela

Ferreira da Silva2; Maria Luiza Rocha da Rosa Borges

3; Maria Luiza Macedo Silva

4; Mariana Tavares de

Souza4; Mariluze Oliveira da Silva

2; Eliane Maria Soares Ventura

2; Terezinha de Jesus Marques Salles

3.


(1)Instituto de Ciências Biológicas;

(2)Hospital Universitário Oswaldo Cruz;

(3)Faculdade de Ciências Médicas;

(4)Instituto Nacional de Câncer

RESUMO Introdução: A Leucemia de células B maduras (LLA-L3) é a forma disseminada do linfoma de Burkitt (LB), um

tumor de alto grau de malignidade de células B pequenas não clivadas. A LLA-L3 apresenta a t(8;14)(q24.1;q32)

em 85% dos casos e em 15%, suas variantes t(2;8)(p12;q24) e t(8;22)(q24;q11.2). Alterações cromossômicas

adicionais (ACA) são descritas em 70% dos LB e envolvem principalmente os cromossomos 1, 2, 6, 7, 8, 13, 17,

22 e X. As técnicas de citogenéticas podem detectar estas alterações que são importantes para diagnóstico, e

prognóstico da doença. Objetivos: Descrever as características clínicas, imunofenotípicas e citogenéticas da LLA-

L3, na idade entre 0-18 anos, diagnosticadas no CEONHPE no período de 2004 a 2015. Metodologia: O

diagnóstico foi dado pela morfologia LLA-L3 seguindo a classificação FAB e a imunofenotipagem, pelo encontro

da sIgM nas células leucemias. Os dados clínicos-laboratoriais foram obtidos dos prontuários médicos. O cariótipo

através do bandeamento G e técnica de FISH/MCB. Resultados: Foram diagnosticados 10 pacientes com LLA-L3.

Houve prevalência do sexo masculino (70%) e os principais sintomas foram febre (30%), desconforto abdominal

(30%) e perda de peso (5-10kg) (30%). Massas tumorais ocorreu em 50% dos casos (60% tumor abdominal).

Infiltração de medula óssea ocorreu em 50% dos casos. Um paciente tinha SNC envolvido. O hemograma em 2

casos mostrou leucócitose ≥17.02x103/uL, 4 casos plaquetopenia (≤72.000/mm

3). Três pacientes tinham blastos no

SP ≥30%. A IMF foi negativa para IgMs em 2 pacientes. A t(8;14)(q24.1;q32) foi encontrada em 90% e a

t(2;8)(p12;q24) em 10%. Foram observadas ACA em 5 pacientes, sendo em 2 casos dup(1q), em 1 caso add(11q),

em 1 caso dup(13q) e em 1 caso t(11q;14q). Dos 5 casos que apresentaram ACA, 3 foram a óbito e 2 estão vivos.

Conclusão: A principal translocação encontrada foi a t(8;14)(q24.1;q32). A citogenética molecular (FISH e MCB)

foram importantes para definir alterações cromossômicas adicionais, rearranjos intersticiais e confirmação de

anormalidades do MYC. Os pacientes com LLA-L3 e alterações cromossômicas adicionais apresentaram alta taxa

de óbito 60%.

APOIO PFA/UPE

216


CDX-2 VITAMIN D RECEPTOR (VDR) POLYMORPHISM UP REGULATES VDR MRNA LEVELS IN

SILICO AND IN VIVO

Maria Eduarda Bezerra de Albuquerque Borborema1; Jorge José de Souza Pereira

1; Sérgio Crovella

1; Paula

Sandrin Garcia1; Jaqueline de Azevêdo Silva

1.


(1)Departamento de Genética - UFPE

RESUMO Vitamin D exerts immunomodulatory actions through interaction with its specific receptor named vitamin D

receptor - VDR, a 50kDa nuclear protein, and determines genomic responses by regulating transcription of several

genes. Polymorphisms within VDR gene are associated with immune related diseases development and its

maintenance, becoming a potential marker for several immune misbalances. VDR is located on chromosome 12

(12q13.11) being highly polymorphic with more than sixty described polymorphisms, which may lead to altered

gene function and/or expression and therefore compromising vitamin D function. The Cdx-2 polymorphism

(rs11568820), one of the most studied VDR polymorphism, is located within the promoter region (exon 1) and

consists of a Guanine by Adenine (G> A) change, with a 0,98 minimum allele frequency (MAF) in YRI and 0,22

in CEU populations. In silico analyses have shown that the presence of Cdx-2 A allele leads to a more effective

transcription factor TFIIB binding at the transcriptional complex, thereby increasing VDR expression. Herein we

aimed assess whether VDR expression in vivo were in fact modulated by individuals genotype and vitamin D

serum levels. We evaluate the expression levels of VDR mRNA from 27 samples including all 3 possible Cdx-2

genotypes (G/G, G/A, A/A - 6, 15 and 6 individuals respectively) with the G/G genotype as reference in our study

population. The expression assay was performed using VDR Taqman probe (Hs00172113_m1) and two reference

genes Actin-beta and GAPDH (Hs02758991-81 and Hs99999903_m1, respectively). The RNA input for cDNA

syntesis was 500ng for all samples and for expression analysis we used 2 -ΔΔCT

method. Our results indicated that

VDR Cdx-2 A/A genotype individuals were up regulated 6.7 fold change when comparing to G/G genotype. The

Cdx-2 A/G genotype individuals presented up regulation of 3.37 fold change when comparing to VDR Cdx-2 G/G.

Therefore, herein we confirm that in fact there is a higher transcriptional activity in Cdx-2 A/A and A/G genotype

suggested by in silico previous analysis.


217


COMORBIDADE ENTRE DISTÚIRBIOS GENÉTICOS E SÍNDROMES MIELODISPLÁSICAS (SMD)

EM PACIENTES ATENDIDOS EM PROGRAMA DE GENÉTICA COMUNITÁRIA

Érica Vieira Alcântara1; Ana Luiza Afonso Maltez dos Santos

1; Vinícius Magalhães Borges

1; Rafaela Marocci

Lima Pimenta1; Lucy Freitas

1; Monica Jacobina Fonseca Vieira

1; Lilia Maria de Azevedo Moreira

1.


(1)Universidade Federal da Bahia

RESUMO Estudos de mutagênese mostram que quebras e alterações cromossômicas são eventos iniciais de processos de

carcinogênese que embora sejam mais frequentes em idades avançadas, afetam indivíduos de todas as faixas

etárias. Alguns distúrbios gênicos, além de estarem associados a características fenotípicas típicas, mostram

predisposição dos cromossomos em formar rearranjos ou apresentar outras alterações citogenéticas. Tanto a

instabilidade cromossômica quanto a ocorrência de genes mutados podem causar complicações na medula óssea.

Dentre as síndromes genéticas, observa-se que 50% dos casos de Anemia de Fanconi apresentam comorbidade

com SMD. Já na síndrome de Down há um risco de desenvolver câncer cerca de seis vezes maior que a população

geral, especialmente para neoplasias hematopoiéticas, observando-se que cerca de 10% dos recém-nascidos

desenvolvem uma forma de leucemia megacarioblastica. O objetivo deste estudo foi verificar a associação entre

distúrbios genéticos e síndromes mielodisplásicas em atendimentos do Programa Genética & Sociedade da

Universidade Federal da Bahia que abrange o atendimento genético laboratorial e atividades educativas/inclusivas

realizadas junto às atividades curriculares em comunidade e sociedade ACCS BIO456 (Genética e Diversidade

Humana) e ACCS BIOA94 (Inclusão: Contribuição da Genética e da Educação). Os pacientes foram

encaminhados por instituições parceiras ou procuraram diretamente o programa. Foram preenchidas fichas de

anamnese e realizados exames de cariótipo e, em suspeita de instabilidade cromossômica foi feito adicionalmente

estudo de quebras cromossômicas com Diepoxibutano. Em 818 atendimentos verificaram-se 04 casos de Anemia

de Fanconi, 02 casos de Síndrome de Down, com leucemia linfoide aguda e um caso de displasia ectodérmica

hipoidrotica com a mesma morbidade. Conclui-se pela importância da atenção à possibilidade de presença da

comorbidade distúrbios genéticos/mielodisplásicos em atendimentos genéticos, tendo em vista promover o

diagnóstico precoce e encaminhamento dos resultados a centros de tratamento.

APOIO Pró-Reitoria de Extensão - Universidade Federal da Bahia

218


CONTRIBUÇÃO DA MUTAÇÃO CCRΔ32 PARA A SUSCEPTIBILIDADE DE DOENÇAS

NEUROLÓGICAS EM PACIENTES HIV-1: ESTUDO PILOTO

Klaudia Emanuela Ramos Tenório1; Wlaldemir Roberto dos Santos

1; Evandra Santos Pontes

1; Sergio de Sá

Leitão Paiva Júnior1; Paulo Sergio Ramos de Araujo

2; Valdir de Queiroz Balbino

1.



(2)Universidade Federal de Pernambuco/Centro de Pesquisas Aggeu

Magalhães/FIOCRUZ

RESUMO Introdução. O CCR5 atua na resposta inflamatória aumentando a resposta imunológica adaptativa, influenciando

no desenvolvimento de diversas infecções. Nas pessoas vivendo com HIV as infecções neurológicas são as mais

frequentes morbidades encontradas. Contudo, a presença destas infecções está associada a resposta imunológica

do hospedeiro, dependente de diversos fatores entre eles as quimiocinas e seus receptores, como o CCR5. O CCR5

pode apresentar uma deleção de 32 pares de bases que gera uma proteína truncada. Indivíduos com a deleção em

homozigose (Δ32/Δ32) apresentam a resistência ao HIV-1 e defesa contra outros patógenos, influenciando na

susceptibilidade de algumas doenças infecciosas. Objetivo: Investigar a associação entre a mutação CCRΔ32 e o

risco de desenvolvimento de infecções neurológicas causadas por Toxoplasmose, sífilis e citomegalovirose em

indivíduos vivendo com HIV. Metodologia: o estudo foi realizado com 298 indivíduos com HIV, em uso da

terapia antirretroviral, com e sem infecções neurológicas. O diagnóstico das infecções neurológicas foi obtido

através da análise dos prontuários. A presença da mutação CCRΔ32 foi determinada por PCR e associada com o

aparecimento ou não de infecção neurológicas. O estudo de associação foi realizado pelo SNPStats verificando

Odds ratio (OR) com intervalo de confiança de 95%, nível de significância p <0,05. Resultados: observou-se que

18.63% dos indivíduos apresentavam algum tipo de infecção neurológica (neurotoxoplasmose, neurossifilis,

neurocitomegalovírus). A frequência do alelo CCR5Δ32 nos indivíduos com infecção neurológica foi de 3%, já os

sem infecção neurológica foi de 4%. A análise genotípica total e dos indivíduos com e sem infecções neurológicas

não mostraram associação. Porém, quando foi analisado com fator de risco o sexo do indivíduo, o genótipo

selvagem (wt/wt) sugere maior susceptibilidade ao desenvolvimento de infecções neurológicas no sexo masculino,

com Or de 2.40 (1.06 - 5.42). Conclusões: sugerimos que a presença do alelo CCR5Δ32 pode ter um efeito

protetor no desenvolvimento de doenças neurológicas em indivíduos com HIV do sexo masculino. Esse fato pode

ser associado a negligência no diagnóstico da toxoplasmose em indivíduos do sexo masculino já que em mulheres

há uma maior vigilância epidemiológica relacionada ao risco de toxoplasmose congênita. Entretanto, sugerimos

novos estudos com amostras maiores para evidenciar a associação encontrada.

APOIO Cnpq

219


DC-SIGN AND APOBEC3G POLYMORPHISMS IN HIV-1 INFECTED AND UNEXPOSED

UNINFECTED INDIVIDUALS OF SOUTHERN BRAZIL

Jeanne Lucy Freitas Bastos1; Sergio Crovella

2; Ronaldo Celerino da Silva

3; Anselmo Jiro Kamada

3; José Artur

Bogo Chies4.


(1)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.;

(2)Department of Genetics,


Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife,; (3)

Department of Genetics, Federal University of Pernambuco

(UFPE), Recife, Brazil and Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of

Pernambuco (UFPE), Recife; (4)

Department of Genetics, Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto

Alegre, Brazil

RESUMO Host genetic factors play a major role in determining the outcome of HIV-1 infection. Dendritic-cell-specific

intercellular adhesion molecule-3 grabbing non-integrin (DC-SIGN) is a membrane receptor found in

macrophages and dendritic cells, responsible for HIV-1 internalizing cell through its interaction with the gp120.

While apolipoprotein B mRNA editing enzyme catalytic polypeptide-like 3G (APOBEC3G), a restriction factor,

can cause destruction of the viral RNA or inserting mutations in the viral DNA after reverse transcription. Some

studies have associated variations in these genes with HIV-1 susceptibility. We evaluated the distribution of single

nucleotide polymorphisms (SNPs) in the DC-SIGN (rs4804803 and rs735239) and APOBEC3G (rs2294367 and

rs373685) in HIV-1 infected and healthy individuals of Porto Alegre (Brazil). We selected 160 HIV-1-infected

(HIV-1+) and 160 unexposed and uninfected individuals (healthy controls). The genotyping was performed with

allele specific fluorescent probes using real-time PCR. Allelic and genotypic frequencies were estimated by direct

count. Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) and associations were determined by X2-square and Fisher Exact Test

using R program. All SNPs were in HWE, except for rs4804803 (DC-SIGN) in healthy controls. In the DC-SIGN,

the A allele and AA genotype of rs4804803 were the most frequent in healthy controls (95.9% and 93.8%) and

HIV-1-infectd individuals (94.7% and 90%). For the rs735239, the A allele and AG genotype were the most

frequent in healthy controls (64.4% and 50.6%) and HIV-1-infectd individuals (60.9% and 49.4%). For the

APOBEC3G gene, the G allele and GC genotype of rs2294367 were the most in healthy controls (54.7% and

50.6%) and HIV-1-infectd individuals (54.7% and 49.4%). For the rs3736685, the T allele and TT genotype were

the most frequent in healthy controls (92.8% and 86.3%) and HIV-1-infectd individuals (95.9% and 91.9%).

Although the percentage differences between HIV-1 infected and healthy individuals, were not observed

significant differences (p> 0.05), suggesting that these SNPs are not related with the HIV-1 infection susceptibility

in the population studied. However, it is necessary to replicate studies with other populations and with a greater

number of individuals.

APOIO CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE

220


DELEÇÕES DOS GENES GSTM1 E GSTT1 E ASSOCIAÇÃO COM CÂNCER NO MUNICÍPIO DE

MONTE SANTO-BA

Cardoso Junior, Lm1; Carozo, Po

2; Nascimento, Ilo

3; Machado Lopes, Tmb

4; Bomfim, Tf

4; Acosta, Ax

1; Abe

Sandes, K4.


(1)Serviço de Genética Médica, Hospital Universitário Prof. Edgard Santos, UFBA, Salvador, Bahia;

(2)Laboratório

de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, UFBA, Salvador, Bahia; Programa de pós-

graduação em Biotecnologia em Saúde e Medicina Investigativa, Fundação Oswaldo Cruz, Salvador, Bahia; (3)

Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Instituto de Ciências da Saúde, UFBA, Salvador, Bahia;

Núcleo de Oncologia da Bahia, NOB, Salvador, Bahia; (4)

Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular,

Instituto de Ciências da Saúde, UFBA, Salvador, Bahia

RESUMO As enzimas glutationa-S-transferases são responsáveis pela detoxicação de compostos xenobióticos, assim,

polimorfismos nos genes que codificam estas proteínas, como a deleção completa destes genes, podem aumentar a

suscetibilidade a diferentes tipos de câncer. O município de Monte Santo apresenta alta taxa de consanguinidade e

frequência aumentada de doenças genéticas, incluindo o câncer. O objetivo deste trabalho foi verificar a possível

associação entre as deleções nos genes GSTM1 e GSTT1 com o câncer em uma amostra da população de Monte

Santo-BA. O trabalho foi aprovado em comitê de ética em pesquisa e a análise estatística (cálculo de odds ratio,

intervalo de confiança e valor de p) foi realizada no programa WinPepi 11.26. Foram selecionados 76 indivíduos

com diferentes tipos de câncer e 76 indivíduos controle. Análise molecular foi realizada por PCR-Multiplex com

visualização em gel de agarose a 2,5% corado com brometo de etídio. A amostra foi composta em sua maioria por

indivíduos classificados fenotípicamente como brancos ou mulatos claros. Os principais tipos de câncer da

amostra foram de próstata (35,5%), mama (19,7%), pele (10,5%), útero (7,9%) e neoplasias hematológicas (6,6%).

O grupo dos casos foi composto de 52,6% de homens e 47,4% de mulheres, com idade média de 61,3 anos.

História familiar de câncer (69,7%) e tabagismo (48,7%) foram associados ao risco de câncer entre os casos. Os

genótipos GSTT1 [-] e GSTM1 [-] tiveram frequência de 22,4% e 63,2% entre os casos e 36,8% e 52,6% entre os

controles, mas essa diferença não foi significativa quando comparada entre os grupos. A frequência do genótipo

combinado GSTT1 [+] / GSTM1 [-] foi de 50% nos casos e 32,9% nos controles, mostrando associação

significativa com o risco de câncer nessa amostra (OR = 1,66; IC95% = 1,31 - 5,27; p <0,005). As frequências

obtidas no estudo foram compatíveis com as observadas em outras populações no estado da Bahia, na região

nordeste e sudeste. Além disso, a população de Monte Santo possui elevada contribuição europeia e os dados são

compatíveis com o observado para este grupo populacional. Não foi calculado o equilíbrio de Hardy-Weinberg,

uma vez que o método permite obter apenas as frequências genotípicas. Apesar do limitado tamanho amostral e do

agrupamento de diferentes tipos de câncer no grupo caso, foi observada a associação das deleções combinadas dos

genes GSTT1 e GSTM1 com câncer.

APOIO FAPESB, CNPq

221


DESENVOLVIMENTO DE UM KIT DIAGNÓSTICO DE CAPTURA DE ANTICORPOS PARA

FILARIOSE LINFÁTICA.

André Pastor1; Abraham Rocha

2; Paula Ancântara

3; Maria Rosângela Grilis

2; Marli Tenório

4; Maressa

Rhuama5; Antonio Rezende

4; Osvaldo Pompilio

5; Ernesto Marques

4; Rafael Dhalia

5.


(1)1- Fundação Osvaldo Cruz - FIOCRUZ, PE. 2- Universidade Federal de Pernambuco - UFPE. 4-Instituto

Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Sertão Pernambucano - IFSertão-PE.; (2)

1- Fundação Osvaldo Cruz

- FIOCRUZ, PE. 3- Serviço de Referência Nacional em Filarioses - SRFN. ; (3)

1- Fundação Osvaldo Cruz -

FIOCRUZ, PE. 3- Serviço de Referência Nacional em Filarioses - SRFN. ; (4)

1- Fundação Osvaldo Cruz -

FIOCRUZ, PE; (5)

1- Fundação Osvaldo Cruz - FIOCRUZ, PE. 2- Universidade Federal de Pernambuco - UFPE.

RESUMO A Filariose Linfática (FL) é uma doença que afeta 120 milhões de pessoas no mundo, sendo a Wuchereria

bancrofti (WB) o agente etiológico no Brasil. O diagnóstico apresenta inúmeras dificuldades, como horário de

coleta para exames parasitológicos (entre 23h-1h) e dificuldades de importação e altos custos para kits de

imunodiagnóstico. Sendo assim, o objetivo detse trabalho é o desenvolvimento de um teste nacional de captura de

anticorpos para a FL. Primeiramente, o gene sintético do antígeno WbX foi clonado no vetor pRSET-A e expresso

em E. Coli BL21. Após isso, a proteína purificada foi usada para padronizar o teste de captura de anticorpos IgG4

através da técnica de ELISA, denominado de ELISA antiWbX. A microplaca (96 wells, Corning 3690, Costar®,

USA) foi sensibilizada com 50μl do antígeno a 20μg/ml, 100μl do soro de cada paciente por poço (1:100 em PBS

0,5% BSA, pH 7.2) foi utilizado e a placa foi incubada a 37°C por 1h, lavada e incubada novamente por 1h com

50μl de HRP-Mouse Anti human IgG4. Por fim, foi usado o substrato BD OptEIA TMB (BD Biosciences, USA)

por 15min e a reação foi parada com 50ul/ul da solução de H2SO4 1N. As placas foram lidas a 450nm no

espectrofotômetro e os resultados foram expressos em densidade óptica (OD). O projeto foi aprovado pelo Comitê

de Ética em pesquisas com Seres humanos da FIOCRUZ-PE (CEP - 45085215.0.0000.5190), pois foram utilizados

soros de indivíduos divididos em 5 grupos: Infecatdos filarêmicos com WB (IF), pacientes crônicos (PC),

infectados com Strongyloides (IS), endêmicos normais (EN), não endêmicos normais (NEN). O ELISA antiWbX

apresentou sensibilidade de 90% e especificidade de 96,87%, o qual reconheceu 27 dos 30 pacientes do grupo IF e

apenas um indivíduo dos 32 do grupo NEN. Na comparação com o teste comercial (CELISA), o antiWbX

apresentou a mesma sensibilidade e maior especificidade, já que o comercial reconheceu como positivo 13

indivíduos do grupo NEN. Diante dos resultados, conclui-se que o ELISA antiWbX é um teste diagnóstico

eficiente e promissor, inclusive apresentando melhores resultados de especificidade do que o kit comercial

CELISA nas nossas amostras. Como perspectivas temos uma submissão de patente em andamento além de um

artigo científico em preparação. A expectativa é que o teste torne-se um kit comercial e possa diminuir os custos e

a dependência tecnológica brasileira na área de diagnóstico da filariose linfática.

APOIO FACEPE/FIOCRUZ.

222


DISTRIBUTION OF CHEMOKINES POLYMORPHISMS IN HIV-1+ INDIVIDUALS AND HEALTHY

CONTROLS FROM NORTHEAST BRAZIL AND THEIR POTENTIAL ASSOCIATION WITH HIV-1

INFECTION PROTECTION

Soares, André Luiz Bormann1; Arraes, Luiz Cláudio


1; Guimarães, Rafael

Lima1; Crovella, Sergio

1; Celerino da Silva, Ronaldo

1.


(1)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil and Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.; (2)

Institute of

Integral Medicine of Pernambuco Professor Fernando Figueira, Recife, Brazil

RESUMO Human immunodeficiency virus type-1 (HIV-1) entry in host cell is done mainly through CD4

+ T-lymphocyte

cells, by interactions among the viral envelope proteins, CD4 receptor and HIV-1 coreceptors, as CCR5 and

CXCR4. Variations in the genes encoding HIV-1 coreceptors and their natural ligands (chemokines) have been

shown to modify HIV-1 infection susceptibility and disease progression. In this sense, we analysed the distribution

of chemokines (CCL3, CCL4, CCL5) single nucleotide polymorphisms (SNPs) in 268 HIV-1 infected (HIV-1+)

and 221 unexposed and uninfected individuals (healthy controls) of Northeast Brazilian, and their possible

association with HIV-1 infection susceptibility. The genotyping were performed through allele specific

fluorogenic probes using real time PCR. Allelic and genotypic frequencies were estimated by direct count. Hardy-

Weinberg equilibrium and associations were determined by Chi-square and Fisher Exact Test, using R program.

Linkage disequilibrium (LD) and haplotypic frequencies were evaluated by Haploview software. All

polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium, except for SNP rs2107538 (CCL5) in HIV-1+ individuals.

Two SNPs, located in CCL3 (rs1719134) and CCL4 (rs1719153) genes, showed significant differences among

HIV-1+ individuals and healthy controls. We observed that the GA genotype of rs1719134 CCL3 SNP were more

frequent in healthy controls (33.3%) than in HIV-1+ individuals (24.6%; OR=0.64; 95%CI=0.42-0.98; p-

value=0.033). For rs1719153 CCL4 SNP, the T allele and AT genotype were more frequent in healthy controls

(19.8% and 35.0%, respectively) than in HIV-1+ individuals (T allele: 14.1%; OR=0.67; 95%CI=0.47-0.95; p-

value=0.020 and AT genotype: 24.4%; OR=0.59; 95%CI=0.39-0.90; p-value=0.012). The rs1719134 (CCL3) and

rs1719153 (CCL4) SNPs presented linkage disequilibrium (D'=0.83). The AT haplotype frequency was increased

in healthy controls (17.3%) in relation to HIV-1+ individuals (11.0%; OR=0.60; 95%CI=0.41-0.89; p-

value=0.008). Since our results revealed an increased frequency of alleles and genotypes of CCL3/CCL4 SNPs and

haplotype (CCL3-CCL4) among healthy controls, we suggest a potential role these variations in modulation of

susceptibility to HIV-1 infection.


223


DUPLICAÇÃO (XQ) ASSOCIADA À SÍNDROME DE TURNER: DOIS RELATOS DE CASOS

Juliana Vieira de Barros1; Luana Oliveira dos Santos

1; Adriana Valéria Sales Bispo

2; Raysa Samanta Moraes

Laranjeira1; Rafaella do Nascimento Pinto

1; Kamylla Ramos da Silva

1; Andrea de Rezende Duarte

3; Neide

Santos1.


(1)1Laboratório de Genética e Citogenética Animal e Humana - Departamento de Genética/CCB/UFPE - Recife,

PE; (2)

Instituito Federal de Educação Ciência e Tecnologia do Sertão Pernambucano- Campus Salgueiro,PE; (3)

Serviço de Genética Médica, Instituto de Medicina Integral Prof. Fernando Figueira - Recife, PE

RESUMO A Síndrome de Turner (ST) é uma cromossomopatia caracterizada pela perda total ou parcial do segundo

cromossomo sexual ou por alterações estruturais do X, atinge cerca de 1:2500 recém-nascidos vivos do sexo

feminino. Cerca de 40% a 60% das pacientes com ST possuem uma linhagem celular 45,X sem mosaicismo

detectável e 25% apresentam mosaicismo 45,X/46,XX mas também podem existir outros cariótipos mosaicos,

sendo os mais comuns 46,X,i(Xq), 46,X,del(Xp), ou 46,X,dup(Xq). Duplicações parciais Xq são raras e ocorrem

com mais frequência nas regiões Xq12?q24 e Xq26.3?qter. Neste trabalho descrevemos as características clínicas

e genéticas de duas pacientes (19 e 22 anos) com suspeita clínica da ST atendidas no Serviço de Genética Médica

do Instituto Medicina Integral Prof. Fernando Figueira (IMIP), apresentando ao exame clínico: baixa estatura,

amenorréia primária, pouco desenvolvimento mamário, útero com volume reduzido para faixa etária e ovários não

visualizados, pescoço curto, cúbito valgo bilateral, unhas com implantação profunda e dificuldade de

aprendizagem. Cerca de 25 metáfases mitóticas, obtidas através da cultura de linfócitos de sangue periférico,

foram analisadas através do bandeamento G para cada paciente. O cariótipo descrito para as duas pacientes foi

46,X,dup(Xq)[25] e 46,X,dup(Xq)[18]/45,X[10], compatíveis com ST. Os efeitos clínicos das duplicações Xq

estão diretamente ligados ao tamanho do seguimento duplicado, ou seja, quanto maior for a duplicação mais

alterações fenotípicas serão observadas. Em conclusão, os resultados gerados pela análise citogenética permitiram

estabelecer um diagnóstico complementar para cada paciente, permitindo o direcionamento para a conduta

terapêutica.

APOIO FACEPE e UFPE

224


ESTRUTURA DO RECEPTOR PPARGC1A HUMANO (PEROXISOME PROLIFERATOR-

ACTIVATED RECEPTOR GAMMA COACTIVATOR 1-ΑLFA) E COMPARAÇÃO COM

DIFERENTES ESPÉCIES

Beatriz de Lucena Villa Chan Cantalupo1; Pedro Silvino Pereira


1.



RESUMO O PPARG (Peroxisome Proliferator-Activated Receptor GAMMA) é um receptor nuclear, originalmente descrito

no tecido adiposo, que controla a expressão de um grande número de genes reguladores no metabolismo de

lipídios e de sensibilização à insulina. Quando na presença do Coativado alfa-1 (C1A), forma o PPARGC1A, que

protege contra o ganho de peso, inflamação, perda de massa muscular e óssea e melhora a sensibilidade à insulina,

promovendo efeitos favoráveis sobre o metabolismo e resistência a doenças metabólicas. Em vista do melhor

conhecimento deste receptor em outras espécies, a presente pesquisa teve como objetivo caracterizar in silico a

estrutura do receptor PPARGC1A humano comparativamente a diferentes espécies com dados disponíveis em

bancos de dados. As análises foram feitas, a partir do banco do NCBI (National Center of Biotechnology

Information), através da sonda PPARGC1A, a partir de um tBLASTn específico para o organismo Homo sapiens.

A partir desta sonda, buscaram-se sequências para organismos de outras classes (Reptilia, Pisces, Mammalia e

Aves). As sequências foram alinhadas no ClustalW e em seguida submetidas a uma análise de domínios

conservados no CD-Search e à análise de localização subcelular no Cell-PLoc. Utilizando o Circoletto foi possível

comparar as sequências utilizadas. A análise fenética foi feita a partir da geração de alinhamento e das topologias

das árvores de Neighbor Joining e UPMGA. Através da busca de domínios conservados com o CD-Search, foi

observado que o PPARGC1A, não apresentava o domínio esperado na espécie Pan troglodytes (chipanzé). A

análise de localização subcelular das sequências, incluindo a sonda, indicou localização associada ao núcleo. A

investigação do pH e do peso molecular da proteína nas espécies, mostrou que a maioria apresenta propriedades

similares, com ponto isoelétrico e pH ácido com valores próximos. Na análise fenética, os nós mais basais

apresentaram valores de bootstrap satisfatórios entre as classes de indivíduos envolvidos. Os grupamentos

terminais apresentaram plena consonância com a classificação taxonômica dos grupos analisados. Além disso, o

Circoletto evidenciou conservação entre as sequências, já confirmada pela fenética. Apesar da descoberta dos

PPARs, ainda pouco se sabe sobre eles. Desta forma, faz-se necessário reunir e exaurir a maior quantidade

possível de dados que possam fornecer subsídios para maior compreensão destes receptores nucleares.

APOIO CAPES e FACEPE.

225


ESTUDO DE CASO EM GENÉTICA DE POPULAÇÕES: A CAPACIDADE DE ENROLAR A LÍNGUA

EM UMA POPULAÇÃO INDÍGENA NO MUNICÍPIO DE PALMEIRA DOS ÍNDIOS/AL, BRASIL

João Antonio dos Santos Neto1; David Joseph Ferreira Tenório de Almeida

1; Thalita Ferreira Tenório de

Almeida2; Ebenézer Bernardes Correia Silva

1.


(1)Instituto Federal de Alagoas - IFAL;

(2)Centro Universitário CESMAC-AL

RESUMO Os índios Xucurú-Karirí estão situados no município de Palmeira dos Índios/AL, em área de transição

fitoecologica (ecótono) entre a mata atlântica e a caatinga. Estas comunidades isoladas não são alvos de estudos

populacionais dirigidos, tornando escasso o conhecimento a respeito da miscigenação desses indivíduos ao longo

do tempo. Dessa forma, o presente estudo teve como objetivo identificar e quantificar as frequências fenotípicas,

alélicas e genotípicas da capacidade de enrolar a língua (herança autossômica dominante), e analisar se a

população encontra-se em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Este estudo foi realizado na Fazenda Canto, Palmeiras

dos Índios/AL. Foram entrevistados 112 indivíduos, de ambos os sexos, com a faixa etária entre 06 a 64 anos.

Durante a entrevista, os voluntários foram solicitados para executar o movimento de enrolar a língua sem o auxílio

dos dentes. Em relação à população, a frequência fenotípica dominante foi representada por 95 indivíduos, que

corresponde a 0,85; enquanto a frequência fenotípica da característica recessiva apresentou 17 indivíduos e

correspondeu a 0,15. A frequência do alelo recessivo (a) correspondeu a 0,39, e a do dominante (A) 0,61. A

frequência genotípica calculada ficou de 0,15 (17 indivíduos) para homozigoto recessivo (aa), 0,48 (54 indivíduos)

para heterozigotos (Aa) e 0,37 (41 indivíduos) para homozigoto dominante (AA). Para o cálculo de χ2 foi

encontrado o valor de 0,018, bem menor que o valor crítico de tabela a 5% (3,84). Sendo assim, caracterizou-se a

população em equilíbrio de Hardy-Weinberg. Estudos nas demais populações poderiam confirmar como

ocorreram os processos de formações dessas aldeias. Embora em análise superficial, e apesar de preliminar, esta

análise é importante para auxiliar a compressão dos aspectos evolutivos e histórico das diversas etnias que

compõem a população brasileira.

226


ESTUDO PRELIMINAR DO SNP -174 G/C E PERFIL DE METILAÇÃO DO GENE INTERLEUCINA-6

EM PACIENTES COM ARTRITE REUMATOIDE

Isaura Isabelle Fonseca Gomes da Silva1; Francisco Geraldo Carvalho Neto

2; Hildson Dornelas Angelo

3; Eliezer

Rushansky4; Maria Helena Mariano

4; Paulo Roberto Eleuterio de Souza

5; Martin Alejandro Montes

5; Maria de

Mascena Diniz Maia5.


(1)Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada da Universidade de Pernambuco, UPE,

Recife, PE; (2)

Programa de Pós-graduação em Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife,

PE; (3)

Instituto Federal de Pernambuco, Garanhuns, PE; (4)

Ambulatório de Reumatologia Clínica, Hospital

Universitário Oswaldo Cruz, Recife, PE.; (5)

Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de

Pernambuco, UFRPE, Recife, PE

RESUMO Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune e progressiva caracterizada por causar inflamação nos tecidos

sinoviais. Sua etiologia não é bem esclarecida, mas sabe-se que fatores genéticos, epigenéticos e ambientais

podem estar relacionados à etiopatogênese da doença. Desordens nos mecanismos epigenéticos tais como,

alterações no nível de metilação do DNA, modificação de histonas, RNAs não codificantes, entre outros, podem

interferir na expressão de genes importantes para o funcionamento do processo inflamatório. A Interleucina-6 (IL-

6) é uma citocina que modula a resposta inflamatória, incluindo a diferenciação de Linfócitos T e B. Alterações

nos níveis de expressão da IL-6 podem amplificar o processo inflamatório e desencadear a resposta característica

da AR. O objetivo deste estudo foi verificar se existe relação entre o SNP -174 G/C e perfil de metilação de quatro

dinucleotídeos CpG (?1069, ?1061, ?1057 e ?1001) do gene IL-6 com o desenvolvimento de AR na população de

Pernambuco. Para o estudo foram utilizadas amostras de 30 pacientes com AR e 30 controles saudáveis atendidos

no Hospital Universitário Oswaldo Cruz - UPE. O DNA genômico foi extraído a partir de sangue periférico e foi

realizada a genotipagem do polimorfismo por PCR-RFLP, utilizando a enzima de restrição Hsp92II. O padrão de

metilação foi avaliado por PCR-MSP (Metilação Específica) após tratamento das amostras com bissulfito de

sódio. A análise univariada dos dados (Teste Qui-quadrado) foi realizada através do programa BioEstat 5.0. Os

resultados mostram que o padrão de metilação foi similar entre pacientes e controles, uma vez que a hipometilação

apareceu em 43.33% dos pacientes e 46.67% dos controles enquanto a hipermetilação apareceu em 6.67% de

ambos os grupos. As análises estatísticas indicam que não há diferença significativa quando comparado o

polimorfismo -174 G/C do gene IL-6 (χ2=1.162; GL=2; p=0.559) e perfil de metilação nos dinucleotídeos CpG

(?1069, ?1061, ?1057 e ?1001) (χ2=0.072; GL=2; p=0.965), com desenvolvimento da AR. Portanto não foi

possível estabelecer correlação entre esses dados e o desenvolvimento da AR. É válido destacar que são

incipientes os estudos que relacionam de maneira conjunta os níveis de metilação e polimorfismo da IL-6 em

pacientes com AR. Porém, sabendo que alterações epigenéticas podem ser exploradas como novos biomarcadores

de diagnóstico, é necessária a continuação dos estudos com maior número amostral para afirmar as atuais

conclusões.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).

227


ESTUESTUDO PILOTO DO PERFIL DE METILAÇÃO DOS DINUCLEOTÍDEOS CPG ?628, ?610, ?574

E ?491 DO GENE IL-6 EM PACIENTES COM ARTRITE REUMATOIDE

Amanda Virginia Batista Vieira1; Isaura Isabelle Fonseca Gomes da Silva

2; Francisco Geraldo Carvalho Neto

3;

Géssica Dayane Cordeiro de Lima2; Victor Vasconcelos Costa

4; Eliezer Rushansky

5; Maria Helena Mariano

5;

Paulo Roberto Eleutério de Souza6; Martín Alejandro Montes

6; Maria de Mascena Diniz Maia

6.


(1)Bacharelado em Ciências Biológicas, Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE.;

(2)Programa de Pós-graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco, UPE,

Recife, PE.; (3)

Programa de Pós-graduação em Genética da Universidade Federal de Pernambuco, UFPE, Recife,

PE.; (4)

Bacharelado em Zootecnia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE; (5)

Ambulatório de Reumatologia Clínica, Hospital Universitário Oswaldo Cruz, Recife, PE.; (6)

Departamento de

Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE.

RESUMO Artrite Reumatoide (AR) é uma doença autoimune e crônica. Sua principal característica é a inflamação da

membrana sinovial e formação do pannus. A Interleucina-6 (IL-6) é uma citocina pró-inflamatória que

desempenha importante papel nos processos imunes. Pesquisas evidenciam que a alta expressão de IL-6 contribui

para a etiopatogênese da AR. Sabe-se que a expressão gênica pode ser controlada por processos epigenéticos

como, metilação do DNA, modificações nas histonas, e outros. A região promotora do gene IL-6 possui

aproximadamente 19 sítios CpG que podem sofrer metilação e alterar sua expressão. O objetivo do nosso estudo

foi avaliar o perfil de metilação de quatro dinucleotídeos CpG (?628, ?610, ?574 e ?491) do gene IL-6 (Genbank

No.: AY170325-1) e sua relação com o desenvolvimento de AR na população de Pernambuco. Para a realização

dessa pesquisa foi realizado um estudo tipo caso/controle composto por amostras sanguíneas de 30 pacientes com

AR e 30 controles saudáveis atendidos no Hospital Universitário Oswaldo Cruz - PE. Foi realizada a extração de

DNA dessas amostras e conversão das citosinas não-metiladas utilizando bissulfito de sódio. As amostras pós-

conversão foram submetidas a PCR-MSP (Metilação-Específica) e eletroforese em gel de agarose. Os cálculos

estatísticos utilizados foram Qui-quadrado e Odds Ratio através do programa BioEstat 5.0. Os resultados mostram

que o padrão metilado foi verificado em 76.67% dos pacientes com AR e 40% em indivíduos controles. O perfil

metilado apresentou um aumento significativo da chance de risco de desenvolver AR (OR=4.92; p=0.008).

Sabendo que a IL-6 é pró-inflamatória, esperava-se que o padrão metilado estivesse relacionado à diminuição do

risco de desenvolvimento da AR, devido a possível redução de expressão de IL-6. Contudo, os nossos resultados

indicam o padrão inverso. Dados da literatura indicam que, pela cronicidade da inflamação na AR, o aumento no

nível de metilação pode estar relacionado a maior ativação da DNA metiltransferase (responsável por metilar o

DNA de novo) que busca reduzir a inflamação metilando o DNA dos pacientes com AR. Portanto, pode-se

pressupor que o padrão metilado dos pacientes não está necessariamente ligado a etiologia da AR, porém pode

estar relacionado a uma forma de regulação epigenética para tentar minimizar o processo inflamatório.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES).

228


EXPRESSÃO DE GENES RELACIONADOS À RESPOSTA IMUNOLÓGICA EM PACIENTES COM

REAÇÕES HANSÊNICAS

Natalia Carine Almeida Conceição1; Meydson Benjamim Carvalho Correa

1; Emilly Caroline dos Santos Moraes

1;

Gustavo Henrique Correa Soares1; Patrícia Terra Alves

2; Douglas Eulálio Antunes

3; Isabela Maria Bernardes

Goulart3; Luiz Ricardo Goulart Filho

2; Mayara Ingrid Sousa Lima

4.


(1)Graduandos de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Maranhão;

(2)Instituto de Genética e

Bioquímica, Universidade Federal de Uberlândia; (3)

Centro de Referência em Hanseníase e Dermatologia Sanitária

(CREDESH/UFU); (4)

Departamento de Biologia, Universidade Federal do Maranhão.

RESUMO As reações hansênicas são episódios inflamatórios agudos que podem ser classificadas em tipo 1 ou 2 e podem se

manifestar durante o período de tratamento do paciente ou até mesmo após a cura. Receptores fazem o

reconhecimento dos patógenos durante a infecção e agem como mediadores imunológicos, como: TLR1 e TLR2 e

ainda, várias citocinas participam da resposta imunológica, principalmente IL-10 e IFNy. Assim, com esse estudo

objetivou-se comparar o perfil de expressão de genes relacionados com a resposta imunológica em um grupo de

pacientes não reacionais e reacionais, a fim de avaliar se existe expressão diferencial desses genes. Para isso,

foram obtidas amostras sanguíneas de 26 pacientes (12 não reacionais-NR e 14 reacionais-PR). Na classificação

operacional todos os PR eram multibacilares, já nos NR tinham 3 pauci e 9 multibacilares. No teste de Mitsuda

todos os PR tinham ausência de formação da pápula subcutânea, enquanto os NR eram mais heterogêneos com 5

indivíduos que tinham resposta celular tardia. Foram extraídos o RNA dessas amostras para posterior análise da

expressão dos genes dos receptores TLR1, TLR2 e das citocinas IL-10 e IFNy por PCR em tempo real utilizando

um sistema Taqman®. Os resultados obtidos demonstraram que os TLRs estão diferencialmente expressos nos

pacientes reacionais, utilizando uma analise de quantificação relativa por ΔΔCT e tendo como gene endógeno

GAPDH. A expressão de TLR1 foi maior (p<0,05) no grupo de pacientes reacionais (Média de RQ: 1,60) quando

comparados aos não reacionais (Média de RQ: 1,01), porém não houve diferença significativa ao comparar os

pacientes com reação tipo 1 ou 2. Para o TLR2 houve um aumento estatisticamente significativo (p<0,01) da

expressão desse gene no grupo de pacientes reacionais (Média de RQ: 1,54) quando comparado aos não reacionais

(Média de RQ: 0,56). Após a estratificação do grupo reacional, observou-se que a maior (p<0,05) expressão de

TLR2 era encontrada nos pacientes com reação tipo 2 (Média de RQ: 1,69). Já IL10 e IFNy não apresentaram

expressão significativamente diferenciada entre os grupos. Para IL10 a RQ no PR foi de 0,68 enquanto que nos

NR foi 1,07 (p= 0,4012). E para IFNy o PR teve uma RQ de 0,44 e os NR foi 0,78 (p= 0,0806). Podemos concluir

que existe a expressão diferencial de TLR1 e TLR2 em pacientes reacionais com hanseníase, e com isso é possível

utilizar o nível de expressão desses genes como biomarcadores.

229


FINDING NEW PRIMARY RESISTANCE MUTATIONS OF HIV INTEGRASE GENE ON NAIVE

PATIENTS.

Heitor Horlando Sampaio Araujo da Silva1; Madson Allan de Luna Aragão

1; Ronald Moura

2; Lucas Brandão

3;

Sergio Crovella2; Wlisses Henrique Veloso de Carvalho da Silva

2.


(1)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami;

(2)Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami, Departamento de

Genética; (3)

Laboratorio de Imunopatologia Keizo Asami, Departamento de Patologia

RESUMO INTRODUCTION: The Human Immunodeficiency Virus (HIV) it's an immunodeficiency was described two

years before the discovery of the AIDS, Acquired Immunodeficiency Syndrome (AIDS), which is characterized by

progressive destruction of Lymphocytes TCD4+. The Highly Active Anti-Retroviral Therapy (HAART) in the last

decade provides a better treatment for the patients, reducing the mortality by HIV. For the best treatment with the

HAART it is important to catalogue the resistance mutations. Integrase consists in a protein with three domains

including one catalytic domain that performs the viral integration in the host DNA. The integrase inhibitors (IN)

such as Raltegravir, Elvitegravir and Dolutegravir bind to the catalytic domain, inhibiting the enzyme activity.

Occasionally, mutations on HIV genetic material happens to confer resistance to certain types of drugs which

affects directly the efficacy of the treatment. OBJECTIVE: Cataloging the resistance mutations to discovery what

drugs involved in the HAART of a patient are susceptible to these mutation, thus improving the treatment to

minimize the rate of resistance mutations. METHODOLOGY: We obtained HIV sequences of naïve patients from

HIV Los Alamos database and used Gene Cutter to isolate the Integrase gene. Using Adegenet 2.0 R package, we

listed all mutations and calculated their frequencies. The Stanford HIV Drug Resistance database provide a tool to

analyse the mutation and verify which variants indeed present drug resistance. RESULTS: We obtained 14

mutations (D25E; F100Y; V112T; Q136K; I234L; D278A; G283S) by tracing a threshold on the graphic, getting

the most frequency of the mutations, starting with this, we verify the frequency of this mutations than we compare

with the Stanford DB to discovery what drug is susceptible to the mutation. CONCLUSION: We know that all

Antiretroviral drugs causes a high rate of mutations, discovering new mutations we be able to indicate the right

drug for the patient.

APOIO CNPq

230


GENETIC ASSOCIATION BETWEEN IL1β POLYMORPHISM WITH A LOWER SUSCEPTIBILITY

TO PHOTOSENSITIVITY IN SYSTEMIC LUPUS ERYTHEMATOSUS PATIENTS

Madson Allan de Luna Aragão1; José Eduardo Adelino Silva


3; Alessandra

Pontillo4; Sergio Crovella



2.


(1)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE;

(2)Department of Genetics - UFPE, Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE; (3)

Department of Genetics - UFPE; (4)

Department of Immunology

- USP

RESUMO INTRODUCTION: Systemic Lupus Erythematosus (SLE) is an autoimmune disease characterized by loss of

immune tolerance and production of autoantibodies, leading to inflammation and tissue damage. SLE has a strong

genetic component affecting multiple organs and occurs in genetically predisposed individuals who are exposed to

environmental or stochastic stimuli, such UV light, which can lead to photosensitivity (PS). PS is one the most

common clinical manifestations of SLE, affecting about of 70% of patients with the disease. Interestingly, UV

light upregulates IL1β, a potent proinflammatory cytokine expressed in keratinocytes, contributing to PS in SLE

patients. OBJECTIVE: Since Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) can alter the expression or function of

genes, it is important to assess if SNPs within IL1β is associated with SLE photosensitivity. The aim of this study

was to analyze SNPs within IL1β and correlates the association of the composite genotype with the PS in SLE.

METHODOLOGY: A total of 85 SLE/PS+ patients and 154 healthy individuals from State of Pernambuco, Brazil,

were recruited for the current study. The genomic DNA was extracted from peripheral blood samples using the

Wizard®

Genomic DNA Purification Kit (Promega). Genotyping was performed for the selected SNP rs1143643

[C>T] using TaqMan® probes on Real-Time PCR using ABI-7500 (Applied Biosystems). The statistical analyses

were performed using Fisher' Exact Test in R software (considering p-value < 0.05). All genotype frequencies

were in Hardy-Weinberg equilibrium for SLE patients and controls groups. RESULTS: We found an association

between TT genotype and a lower susceptibility to PS in SLE patients (OR = 0.028; CI = 0.02 - 0.96; p-value =

0.028). CONCLUSION: According our results, TT genotype of SNP rs1143643 confers a genetic advantage by

contributes to a lower susceptibility to PS in SLE patients.

APOIO FACEPE - Foundation for Science and Technology of Pernambuco; CAPES - Coordination for the Improvement

of Higher Education Personnel; CNPq - National Council for Scientific and Technological Development.

231


HIGH LEUKOCYTE MITOCHONDRIAL DNA CONTENT IN SICKLE CELL DISEASE

Guilhermy Victor Sousa de Araujo1; Juan Luiz Coelho Silva

1; Diego Antonio Martins Pereira

1; Pedro Luiz de

França Neto1; Aderson Silva Araujo

2; Ana Claudia dos Anjos

2; Marcos Andre Cavalcanti Bezerra

1; Antonio

Roberto Lucena de Araujo1.




RESUMO A series of epidemiological evidence suggest that mitochondrial DNA (mtDNA) content variations in peripheral

leukocytes can be used as a biomarker to predict the impact of cellular stress. Additionally, several studies have

been show that aberrations in mitochondrial redox signaling and bioenergetics in Sickle Cell Disease (SCD)

contributing to worse clinical outcome in this diseases. Therefore, it is conceivable that variations in mtDNA

content may act as a signaling of differential clinical course in SCD. Here, we evaluated the mtDNA content in

peripheral leukocytes from patients with SCD and healthy donors. Four hundred forty patients with SCD (279

patients HbSS, 88 HbSC and 73 Sb thalassemia) with median age: 30 years (5-77 years and 224 male) were

included. For comparisons, we included 154 healthy donors (HbAA) with no history of hematological disease.

mtDNA content as determinate using qPCR. Briefly, CytB gene was used to represent the mtDNA, and PK1 gene

was used to represent the nuclear DNA. Relative mtDNA copy numbers were assessed after CytB normalization

by the single-copy nuclear gene PK1. First, we analyzed the mtDNA content from patients with SCD. Both SS and

SC-genotyped patients presented higher mtDNA content compared to healthy donors (P<.0001). We next showed

that the Sb+mild

thal patients had a lower mtDNA content compared to Sb+severe

thal and Sb0

thal (P=.004). We

divided all SCA patients into median value of mtDNA content to compare their clinical and laboratory features.

Patients with low mtDNA content exhibited significantly shorter overall survival (OS) (48 years, 95% confidence

interval (CI):45-50 years) than patients with high mtDNA content (58 years, 95%CI:56-60 years) (P=.013). The

multivariate analysis revealed that low mtDNA content was independently associated with shorter OS (HR:3.4,

95%CI:1.3-8.9; P=.012), considering leukocytes count, Hb levels and cholelithiasis as confounders. Of interest,

mtDNA content levels were associated with lower Hb levels and higher hemolysis serum markers (reticulocyte

count and indirect bilirubin) in Sb thalassemia patients (P<.05). To our knowledge, this study was the first to

evaluate the mtDNA content in patients with SCD and to link these findings to clinical outcome. Although the lack

of functional assays in sickle erythroid precursors constitute the main limitation of our study, we provided the first

evidence that mtDNA content was differentially distributed in SCD-genotype leukocytes.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico.

232


INFLAMMASOME GENES POLYMORPHISMS AND EXPRESSION PROFILE IN BRAZILIAN

PATIENTS WITH RHEUMATOID ARTHRITIS

Catarina Addobbati1; José Eduardo Adelino

1; Thiago Sotero Fragoso

2; Alexandre Domingues

3; Angela Luiza

Branco Pinto Duarte3; Renê Donizeti Ribeiro Oliveira

4; Paulo Louzada Júnior

4; Eduardo Antônio Donadi

4;

Alessandra Pontillo5; Jaqueline de Azevedo Silva

1; Sergio Crovella


1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Serviço de Reumatologia, Universidade

Federal de Alagoas; (3)

Divisão de Reumatologia, Universidade Federal de Pernambuco; (4)

Divisão de Imunologia

Clínica, Faculdade de Medicina de Ribeirão Preto, Universidade de São Paulo; (5)

Departamento de Imunologia,

Universidade de São Paulo

RESUMO Rheumatoid arthritis (RA) is an inflammatory and autoimmune disease characterized by joint commitment and

chronic inflammation with exacerbated IL-1β production.The genetic component has a pivotal role in RA etiology

with several genes contributing to immune balance breakdown.IL-1β secretion is induced by the activation of

inflammasomes, which are multiprotein complexes capable of promoting processing and maturation of IL-

1β.Polymorphisms and differential expression of inflammasome have been associated with in?ammatory diseases,

such as Systemic Lupus Erythematosus and hereditary periodic fever, as well as RA.In the present study, we

analyzed 13 single nucleotide polymorphisms within 6 in?ammasome genes (NLRP1, NLRP3, NLRC4, AIM2,

CARD8, CASP1) as well as IL1B and IL18 genes in two different Brazilian populations (from Northeast and

Southeast Brazil).We also evaluated inflammasome genes expression profile in resting and LPS+ATP-treated

monocytes from RA patients and healthy individuals. For genotyping study, 218 RA patients and 307 healthy

controls were genotyped. For gene expression study, inflammasome genes mRNA levels of 12 RA patients and 10

healthy individuals were assessed by RT-PCR. Our results showed that rs10754558 NLRP3 and rs2043211

CARD8 polymorphisms are associated with RA development (p-value=0.044, OR=1.772, statistical power=0.999)

and severity measured by HAQ (Health assessment questionnaire) (p-value=0.03), respectively. Gene expression

analyses showed that RA patients display a chronic activation of CASP1, IL1B and IL1R genes independently of

LPS+ATP activation. In LPS+ATP-treated monocytes, NLRP3 and NLRC4 expression was also significantly

higher in patients compared with controls. Our results, the first reported in Brazilian populations, support the role

of inflammasome in the development of RA.

APOIO This work was supported by the following Brazilian funding agencies: CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento

de Pessoal de Nível Superior), CNPq (Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico),

FAPESP (Fundação Amparo à Pesquisa do Estado de São Paulo) and FACEPE (Fundação de Amparo à Ciência e

Tecnologia de Pernambuco).

233


INFLUENCE OF SOD2 VAL16ALA POLYMORPHISM ON STROKE DEVELOPMENT IN A SICKLE

CELL ANEMIA BRAZILIAN POPULATION

Igor de Farias Domingos1; Diego Antonio Pereira Martins

1; Rayssa Leal Borges de Medeiros

1; Diego Arruda

Falcão1; Betânia Lucena Domingues Hatzlhofer

1; Taciana Furtado Mendonça Belmont

2; Maria do Socorro

Mendonça Cavalcanti2; Anderson Ferreira Cunha

3; Renata Cunha Azevedo


4; Antonio

Roberto Lucena de Araujo1; Marcos André Cavalcanti Bezerra

1.


(1)Department of Genetics, Centre of Biological Sciences, Federal University of Pernambuco, Recife, Brazil;

(2)Department of Medical Sciences, University of Pernambuco, Recife, Brazil;

(3)Department of Genetics and

Evolution, Federal University of São Carlos, São Carlos, Brazil; (4)

Department of Internal Medicine, Hematology

and Hemotherapy Foundation of Pernambuco, Recife, Brazil

RESUMO The National Heart, Lung, and Blood Institute recommendations represent the gold standard for stroke prevention

in sickle cell anemia (SCA); however, they are restricted for children and adolescents with SCA. Therefore,

cerebrovascular disease in adults with SCA continue to be a major cause of morbidity and mortality, with no

evidence-based strategy for prevention. SCA patients are susceptible to increased oxidative stress due to the

constant hemolysis of sickle red blood cells, and it has been suggested that some genetic factors related to

oxidative stress could influence the development of cerebrovascular disease. Here, we genotyped SOD2 Val16Ala

(rs4880) and evaluated the possible prognostic impact in a large series of SCA adults with well-defined stroke

phenotypes. One hundred and ninety-eight patients were followed in a single reference center in northeast Brazil.

Ischemic stroke was defined as a regional loss of cerebral blood flow due to stenotic or occluded cerebral

vasculature, as subsequently confirmed by imaging exams. Genomic DNA from peripheral blood was extracted by

phenol-chloroform extraction. SOD2 Val16Ala (rs4880) polymorphism was detected by real-time PCR using the

TaqMan assay (Applied Biosystems), according to the manufacturer's instructions. Fisher's exact test or Chi-

square test, as appropriate, were used to compare categorical variables. Cumulative incidence curves were

constructed reflecting time to stroke development as competing risks, with the Gray test used for comparison of

curves. All P-values were two sided with a significance level of 0.05. Of 198 unrelated SCA adults, 21 patients

presented ischemic stroke during adulthood. Genetically, patients with the homozygous TT genotype of SOD2

Val16Ala presented a lower risk of developing stroke risk (odds ratio [OR]: 0.22; 95%CI: 0.05 to 0.96; p = 0.042).

Additionally, the cumulative probability of stroke was significantly lower for patients with the SOD2 TT genotype

(12%), compared to patients with the SOD2 TC + CC genotypes (44%), (p < 0.043). In summary, our findings

indicate that the SOD2 Val16Ala polymorphism is associated with the prevalence of stroke in our SCA population.

Other studies in a different population of SCA are needed to determine the true relevance of our findings.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq: Grant #483714/2013-5)

234


INHERITANCE OF THE BANTU/BANTU HAPLOTYPE CAUSES MORE SEVERE HEMOLYSIS AND

INFLAMMATORY RESPONSE IN CHILDREN WITH SICKLE CELL ANEMIA DIAGNOSED

THROUGH THE NEWBORN SCREENING PROGRAM

Alberto de Lima Xavier1; Thais Helena C Batista

1; Rodrigo M Santana

1; Marianny F T Pacheco

1; Gabriela da

Silva Arcanjo1; Gabriel Maia dos Santos

1; Jessica Maria F Oliveira

1; Aderson S Araújo

2; Antonio Roberto

Lucena Araujo3; Diego A Pereira Martins

1; Marcos A C Bezerra

3.


(1)Centro de Biociências - Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE, Brasil;

(2)Fundação HEMOPE, Recife-

PE, Brazil; (3)

Centro de Biociências - Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE, Brasil; Fundação

HEMOPE, Recife-PE, Brazil

RESUMO Introduction: Sickle cell anemia (SCA) has great clinical and epidemiological importance, being considered a publ

ic health problem in Brazil. Characterized by homozygous hemoglobin S (HbSS, HBB: c.20A--

>Trs334) which causes two major pathophysiological processes: hemolysis and vaso-

occlusion. However, the response varies greatly between SCA patients, and the mechanisms involved have not bee

n fully elucidated.

Large genome association studies suggested that genetic modulators, including the haplotypes associated with the

beta S-globin gene cluster (bS-

haplotypes), may be involved in the different clinical outcome, particularly by genetic regulation of fetal hemoglo

bin levels. Objectives: Here, we evaluated the clinical impact of bS-

haplotypes in patients with SCA, diagnosed and followed by a newborn screening

program (NSP) in single reference center from Pernambuco, Brazil.

Materials and Methods: One hundred fifty eight SS-

genotyped patients were enrolled. The median age was 9 years (range: 3-16 years),

with 80 males (51%). The last update occurred in March 2016. The main clinical complications described in patien

ts with SCA and laboratory profile were obtained from medical records. The characterization of bS-

haplotypes was determined by polymerase chain reaction-

restriction fragment length polymorphism as previously described (Domingos I. F. et al, 2014). Results: According

to bS-

haplotypes distribution, 94/158 patients (60%) carried the Bantu/Bantu haplotype, while 64/158 (40%) presented

the non-Bantu/Bantu haplotype (including Benin, Arab-

Indian, Cameroon and other different combination for the polymorphic sites, called

Atypical haplotypes). We next showed that patients with Bantu/Bantu haplotypes had higher levels of hemolysis m

arkers: total (P=0.01) and indirect bilirubin (P=0.004), hemoglobin levels (P=0.02) also compared with non-

Bantu/Bantu patients. A marginal association has been showed

in reticulocytes levels, however no statistical association has been found (P=0.06). Finally, patients with Bantu/Ba

ntu haplotypes had higher leukocytes count (P=0.03), suggesting a higher inflammatory process.

Conclusions: According to our findings, we believe that the hemolytic and inflammatory markers evaluated in this

study were influenced by

the Bantu/Bantu haplotype combination. We suggest that differences in the polymorphic sites are the key element t

o understanding the modulation of haplotypes in respect to the phenotypic expression of SCA patients.

APOIO CNPq

235


INTERAÇÃO DE COMPLEXOS DE RUTÊNIO COM DNA/BSA E INDUÇÃO A MORTE DE CÉLULAS

CANCERÍGENAS

Israel Higino de Sousa1; Linajanne Borges Muniz

1; Vera Lucia Maciel Silva

2; Ana Paula Silva de Azevedo dos

Santos1; Marcio Aurelio Pinheiro Almeida

1; André Alvares Marques Vale

1; Antonio Augusto Lima Teixeira

Junior1; Silma Regina Ferreira Pereira

1.


(1)UFMA;

(2)UEMA

RESUMO Segundo o INCA (Instituto Nacional de Câncer José Alencar Gomes da Silva), o câncer é definido como um

conjunto de mais de 100 doenças, tendo em comum o crescimento desordenado de células que invadem tecidos e

órgãos, podendo espalhar-se para outras regiões do corpo (metástase). A cisplatina e seus análogos são utilizados

no tratamento de diversos tipos de neoplasias malignas atualmente, há limitações neste uso, devido,

principalmente, à toxicidade a células normais e à ineficácia em relação a alguns tipos de câncer. Devido a isso, há

procura por novas drogas, com efeitos de tratamento superiores ou até similares a cisplatina, mas que não possuam

as limitações citadas anteriormente. Nesse sentido, os compostos contendo o metal rutênio têm demonstrado serem

drogas em potencial para uma possível substituição dos compostos de platina utilizados atualmente, devido às suas

boas capacidades terapêuticas e menores taxas de toxicidade para células normais. Este trabalho buscou avaliar as

propriedades de complexos de rutênio associados a aminoácidos e suas ações citotóxicas em linhagens celulares

cancerígenas (DU-145, câncer de próstata) e normais (RAW, macrófago imortalizado; MRC-5, fibroblasto;

leucócitos), assim como suas interações com biomoléculas (BSA, albumina sérica bovina) e DNA, para melhor

entendimento da ação destes compostos, utilizando as seguintes técnicas: MTT, Teste do Cometa, Titulação por

espectroscopia. Na interação de BSA com compostos de rutênio, observou-se essa interação do centro metálico

deste composto com o resíduo de triptofano da albumina. Já a interação DNA resultou em fragmentação do

material genômico. De modo sumário, os resultados obtidos nesta pesquisa mostraram que complexos de rutênio

(II) contendo os aminoácidos prolina e treonina em suas estruturas têm grande potencialidade para uso como

agentes de combate a células cancerígenas, mostrando baixa citotoxicidade relacionada a células normais.

Contudo, outros estudos serão necessários para confirmar os achados em outras linhagens celulares. Uma vez

realizados, e confirmados os resultados positivos, abrir-se-á uma nova oportunidade terapêutica para milhares de

pacientes oncológicos que atualmente sofrem com os efeitos colaterais ou até a ineficácia de seus tratamentos.

APOIO FAPEMA, CNPq

236


MIELOFIBROSE COM METAPLASIA MIELOIDE EM PACIENTE PEDIÁTRICO- UM RELATO DE

CASO.

Maria Luiza Rocha da Rosa Borges1; Izabelle Aguiar Pereira

2; Eliane Maria Soares Ventura

3; Maria Teresa

Marquim Nogueira Cornélio2; Edinalva Pereira Leite


4; Terezinha de Jesus

Marque Salles3.


(1)Faculdade de Ciências Médicas da Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil;

(2)Instituto de Ciências

Biológicas, Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil; (3)

Centro de Oncohematologia Pediátrica, Hospital

Oswaldo Cruz; (4)

Universidade Federal de Pernambuco, Recife/Brasil

RESUMO Introdução: A mielofibrose primária é uma neoplasia mieloproliferativa crônica caracterizada por uma fibrose

medular (aumento de fibra de reticulina e/ou colágeno), que resulta em hematopoese extramedular, citopenias,

desvio leucoeritoblástico e hepatoesplenomegalias. Os principais sintomas clínicos são febre, fadiga, suor noturno,

dor óssea, perda de peso. A incidência da mielofibrose em adultos é de 0,2 - 1,5 casos por 100.000 habitantes. Em

crianças ela é muito rara, existindo cerca de 47 casos publicados em literatura. Este trabalho descreve um caso de

um pre escolar com mielofibrose primária no CEONHPE/HUOC/UPE, através de pesquisa realizada entre os anos

de 2004 e 2016. Todas as informações clínicas e laboratoriais foram retiradas prontuário médico. O estudo

citogenético incluiu o bandeamento G e a técnica de FISH. Relato de caso: Paciente do sexo masculino, um ano de

idade, deu entrada no CEONHPE/HUOC/UPE com febre, palidez e dor abdominal. Ultrassonografia mostrou

esplenomegalia gigante que ocupava todo o abdômen. Seu hemograma mostrou: Hb: 7,6 g/dl; Leuc: 2.330

mil/mm3; plaq: 44.000 fl/L. A hematoscopia havia hemácias em lágrima, eritroblastos e desvio até mielócitos.

Mielograma revelava MO com hiperplasia, deseritropoese importante, muitas mitoses atípicas, cariocinese dos

eritroblastos, proliferação moderada de elementos imaturos de linhagem granulocítica e de elementos

monocitóides jovens. A biopsia da Medula óssea mostrou MO hipercelular com predomínio do setor granulocítico

e monocítico e importante fibrose de reticulina. O cariótipo foi 46,XY. O FISH usando as sonda CEP7/q32 Vysis,

MLL break apart, Vysis e CBFB Break Apart, Vysis, não apresentou anormalidades. O paciente foi diagnosticado

com mielofibrose primária, inicialmente tratado com hemocomponentes e posteriormente com purimethol e araC

em baixas doses, o paciente faleceu com quadro de infecção e sangramento, aguardando o transplante de MO.

APOIO CAPES

237


MODULAÇÃO DO PERFIL PROTEICO DE MACRÓFAGOS COM O ANTÍGENO RECOMBINANTE

SAGDELL DE TOXOPLASMA GONDII

Thaíse Anne Rocha dos Santos1; Jamilly Azevedo Leal Sena

2; Jair Pereira da Cunha Junior

3; Jane Lima dos

Santos4; Carlos Priminho Pirovani

5.


(1)Discente do Mestrado em Genética e Biologia molecular UESC;

(2)Doutora em Genética e Biologia Molecular

UESC; (3)

Pesquisador da UFU; (4)

Docente do curso de Ciências biológicas DCB/UESC; (5)

5Docente do curso de

Ciências biológicas e orientador deste projeto

RESUMO A toxoplasmose é uma doença sistêmica infecciosa causada pelo protozoário intracelular, o Toxoplasma gondii. A

infecção é amplamente difundida em animais e humanos, apresentando grande importância médica e

agroeconômica. Proteínas recombinantes de T. gondii, têm sido utilizadas em diversos modelos experimentais

envolvendo a caracterização imune e diagnóstico da patologia. Uma versão da proteína SAG2A foi clonada e

expressa em Escherichia coli na versão truncada SAG2ADell, correspondente à molécula faltando o epítopo

NDGSSA. Sendo assim, neste trabalho foi avaliado o perfil proteico de células da linhagem de camundongos

BALB/c, após serem submetidas ao contato com a proteína SAG2ADell visando à avaliação quanto ao seu

potencial de indução de imunidade de mucosa e produção de vacinas orais. O perfil proteico das células foi

avaliado por meio de eletroforese em géis uni e bi dimensionais, seguidos pela avaliação dos peptídeos por

espectrometria de massas e análise de similaridade in sílico, utilizando o programa Mascote (com banco de dados

para camundongo) para identificar as proteínas encontradas e o programa Blastogo para identificar os processos

biológicos em que essas proteínas estão envolvidas. Foram detectados 336 matches (combinação entre o grupo

controle e o grupo tratado) dos quais, 147 spots foram exclusivos do controle, 90 spots exclusivos do tratamento e

99 spots em comum entre controle e tratado, sendo 14 proteínas identificadas até o presente momento. Dentre as

quais destacam-se as proteínas Ras-like e ChK1, que tiveram sua expressão inibida significativamente no

tratamento com SAG2ADell em relação ao controle. Estudos demonstram que essas proteínas têm como funções

principais a transmissão de sinais e reparo de danos ao DNA, respectivamente, e, ambas o estão envolvidas em

processos de sinalização celular. Uma imunoglobulina de cadeia pesada foi expressa após o tratamento, estando

envolvida na resposta imune humoral. Estes dados sugerem que a SAG2ADell possui um possível potencial como

antígeno indutor de resposta imune, podendo ser utilizado como candidatos a vacinas orais contra a toxoplasmose.

APOIO Cnpq

238


MYD88 SNP RS6853 IS NOT ASSOCIATED WITH RHEUMATOID ARTHRITIS SUSCEPTIBILITY

AND TNFα LEVELS

José Eduardo Adelino Silva1; Camilla Albertina Dantas de Lima

1; Patrícia D'emery Alves dos Santos

2; Matheus

da Silva Mesquita2; Wlisses Henrique de Carvalho Veloso da Silva

1; Maria Helena Queiroz de Araújo

3; Eliézer

Rushansky3; Sérgio Crovella



1.


(1)Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil;

(2)Laboratório de

Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco, Recife, Brasil; (3)


Imunobiológicos, Hospital Oswaldo Cruz, Universidade de Pernambuco, Recife, Brasil

RESUMO INTRODUCTION: Rheumatoid Arthritis (RA) is a multifactorial and autoinflammatory disorder characterized by

synovitis, joints and cartilage damage. RA pathogenesis involves genetic, environmental and immunologic factors.

Myeloid differentiation primary response gene 88 (MYD88) is an adapter protein activated by Toll-like receptors

pathway (TLRs) and promotes transcription of tumor necrosis factor alfa (TNFα), a potent proinflammatory

cytokine that promotes the degradation of bone and cartilage in RA patients. Single Nucleotide Polymorphisms

(SNPs) are genetic variants that can alter the expression or function of several genes, may thus be involved in the

RA development or progression. OBJECTIVE: In this context, this study had two aims: evaluate if SNP rs6853

[A>G] is associated with RA susceptibility and also assess if this SNP can alter TNFα levels. METHODOLOGY:

A total of 126 RA patients were recruited at Oswaldo Cruz Hospital, Pernambuco University. Genotyping was

performed using Real Time PCR in ABI 7500 platform (Apllied Byosistems) to evaluate the SNP rs6853 located

at 3'UTR region of MYD88 gene. Genotype-guided levels of TNFα were assessed using CBA (Cytokine Bead

Array) in FACSCalibur Flow Cytometry (BD Biosciences). Statistical analyses were perfomed using Anova Test

and Binary Regression Logistic in SPSS Program, considering p.value<0.05. RESULTS: No association was

observed between SNP rs6853 and the susceptibility to RA (OR=0.79; CI: 0.45 - 1.21; p.value = 0.87). We also do

not found any association between the studied SNP and TNFα levels (p.value = 0.731). CONCLUSION: The SNP

rs6853 within MYD88 gene is not associated with RA susceptibility and do not alters TNFα levels, in this studied

population


239


NOVEL VSX1 AND SOD1 MUTATIONS IN ADVANCED BRAZILIAN KERATOCONUS PATIENTS

Rafaela G. da Silva1; Alex F.b. Feitosa

1; Dulceria C. Silva

1; Matheus A. de Oliveira

1; Matheus C. Muniz

1; Diego

N.b. Gadelha1; Bruno L.f. Schamber Reis*

1.


(1)UniFacisa/Campina Grande

RESUMO ABSTRACT:Introduction: Keratoconus is a progressive non-inflammatory deformation of cornea, affecting about

5% of population. When untreated, the disease can lead to severe astigmatism and blurred vision, leading to vision

loss. While environmental factors have been identified in keratoconus, numerous genetic mutations have been

associated with the disease. However, no genetic data was obtained for Brazilian population.Purpose: To perform

mutational screening in VSX1 and SOD1 genes in patients diagnosed with advanced stage of

keratoconus.Methods: Keratoconus patients were recruited at the ophthalmic division of School of

Medicine/UNIFACISA (Campina Grande/PB) and submitted to corneal topographic examination. Clinically

advanced patients matched inclusion criteria defined by KISA and I-S index values greater than 1000% and 2.0.

respectively, in at least one of the eyes. For mutation screening, VSX1 and SOD1 coding regions were

individually PCR-amplified from genomic DNA extracted from peripheral patient's blood and sequenced on an

ABI3130 platform using BigDye v3.1. Eventual missense and nonsense mutations were identified by comparing

sequences with ancestral sequences using ClustalW, and amino acid change impact with PMUT and Poly-Phen2

online tools.Result: Twenty-six patients were enrolled in this study. Average KISA and I-S values for the right eye

were 927.4% (±124.0) and 7.4 (±0.6) respectively; for the left eye, we found 1259% (±235.4) and 5.9 (±0.7). The

average age of patients was 47 years (±4), including males and females. Sequencing of VSX1 showed a change of

aspartate to glutamate at position 105 (D105E) on exon 1 in one patient. No VSX1 mutations were found in

controls. Scores for PMUT (0.66) and Poly-Phen2 (0.99) analysis suggested that this mutation is probably

damaging to VSX1 protein. Mutation D105E wasn't previously described in literature. In addition, two

synonymous changes (S6S and P79P) were found in two other patients and absent in controls, although its

involvement on disease development is still unclear. No mutations were found in SOD1 coding sequence in both

affected and normal volunteers.Conclusion: Mutation D105E in VSX1 gene can be potentially linked to

keratoconus pathogenesis. Additional patients will be recruited for genotyping, as well as verification of mutation

frequency in non-affected individuals. Further analysis is required to validate D105E mutation in this disease

aiming early diagnosis and treatment.

240


PACIENTE COM HETEROZIGOSE PARA AS MUTAÇÕES DO FATOR V LEIDEN, PROTROMBINA

MUTANTE E METILENO: RELATO DE CASO.

Filipe Fonseca Borges1; Ilana de França Azevedo

2; Andreza Pâmela Vasconcelos

1; Bruno Luiz Gomes de

Albuquerque Conceição1; Fárida Coeli de Barros Correia Melo

3; Washington Batista das Neves

3; Raul Antônio

Morais Melo4.


(1)Universidade Federal de Pernambuco - UFPE, Recife, Brasil.;

(2)Universidade de Pernambuco - UPE, Recife,

Brasil.; (3)

Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco - Hemope, Recife, Brasil.; (4)

Universidade de

Pernambuco - UPE, Recife, Brasil. Fundação de Hematologia e Hemoterapia de Pernambuco - Hemope, Recife,

Brasil.

RESUMO Introdução: O risco individual de trombose resulta da interação de vários fatores genéticos e ambientais. A

Trombofilia Hereditária (TH) refere-se à tendência geneticamente determinada para o desenvolvimento de

trombose. A TH decorre de mutações nos genes que codificam proteínas de coagulação e anticoagulantes naturais.

A mutação do Fator V de Leiden (R506Q) é a causa genética mais comum de TH, seguida da Protrombina

Mutante (G20210A). O papel da mutação da Metileno (C677T) na TH é controverso. O presente relato ilustra a

relação entre essas mutações em heterozigose com a ocorrência de eventos trombóticos em paciente jovem.

Relato: JME, 38 anos, masculino foi encaminhado ao Hemope em 2003 com edema em membro inferior e

histórico de trombose venosa profunda fazia três anos. Na ocasião foi anticoagulado e manteve o uso da warfarina

por seis meses. O paciente era vigilante, permanecia muito tempo em pé, e negava tabagismo. Em 2006, foi

internado em outro hospital com tromboembolismo pulmonar e o tratamento anticoagulante reiniciado. O

monitoramento pelo INR foi realizado para ajuste de dose do medicamento, mas, o paciente foi perdido de vista.

Em fevereiro de 2016, o paciente retorna ao Hemope por suspeita de arbovirose. Os testes moleculares para TH

foram realizados pela técnica qPCR para discriminação alélica e detectada heterozigose para as mutações R506Q,

G20210A e C677T. A anticardiolipina, homocisteína e antitrombina foram normais. Um filho do paciente

apresentou heterozigose dupla para R506Q e G20210A. Discussão: A ação sinérgica das mutações encontradas

pode explicar os quadros de trombose do paciente nesta faixa etária. Também, os resultados alertam para o risco

de novos eventos semelhantes e a necessidade de anticoagulação contínua. A dupla heterozigose do filho sugere

acompanhamento médico e extensão do estudo familiar para rastrear trombofílicos assintomáticos.

APOIO FACEPE

241


PERFIL POPULACIONAL DO DISTÚRBIO DE ESPECTRO AUTISTA EM UMA INSTITUIÇÃO

ESPECIALIZADA DE SALVADOR-BA

Vinícius Magalhães Borges1; Érica Alcântara Vieira

1; Marise Souza Barbosa

1; Lília Maria de Azevedo Moreira

1.



RESUMO O Distúrbio do Espectro Autista (DEA) é uma alteração do desenvolvimento caracterizada por anormalidades

abrangentes em três domínios: (1) interação social recíproca, (2) comunicação e (3) presença de um repertório

comportamental de interesses restritos, repetitivo e estereotipado. Este distúrbio encontra-se inserido nos

Transtornos Globais do Desenvolvimento e apresenta causa multifatorial, estimando-se que 90% deva-se a fatores

genéticos. Os estudos sobre o DEA são ainda escassos, embora em número crescente. Pesquisas realizadas na

última década forneceram dados de prevalência, distribuição por sexo e de múltipla ocorrência familiar. Este

trabalho objetivou traçar o perfil populacional de indivíduos autistas, utilizando como instrumento de pesquisa a

análise de dados de 193 indivíduos inscritos em uma instituição dedicada ao autismo em Salvador-BA.

Considerando a totalidade dos indivíduos analisados, verificou-se predominância do sexo masculino com 79,25%

(153) homens e 20,73% (34) mulheres, com taxa de prevalência homem/mulher de 4.5. Recorrência de autismo na

mesma família se fez presente em 6,73% (13) dos casos, comumente primos, verificando-se também autismo em 3

irmãos dizigóticos (1,55%). O número de casos de autismo entre gêmeos monozigóticos foi de 1,03% (2)

enquanto casos de autismo associado à comorbidades corresponderam a 25.38% (49). O autismo associado a

morbidades genéticas foi verificado em 3,10% (6) casos. Enquanto que a taxa de distribuição de autismo

homem/mulher encontrada corrobora com a literatura, que apresenta taxas entre 3.6 até 5.1, a ocorrência de

autismo entre irmãos e gêmeos monozigóticos nas taxas de 1,55% e 1,03% foi diferente da literatura consultada,

cujos valores se apresentam, respectivamente, em 60% e 0%. Os dados de autismo associados à comorbidades não

apresentam valores comparativos na literatura, evidenciando a falta de pesquisas nesta temática. Este estudo faz

parte de um trabalho mais amplo sobre associação de autismo com síndromes genéticas raras e a sua continuidade

poderá trazer novas informações que contribuam para o entendimento do distúrbio de espectro autista.

APOIO Fundação de Amparo à Pesquisa do Estado da Bahia, FAPESB.

242


POLYMORPHISMS IN THE APOPTOSIS EXTRINSIC PATHWAY GENES AND THEIR

RELATIONSHIP TO IMMUNOLOGICAL RESPONSE OF INDIVIDUALS UNDER

ANTIRETROVIRAL THERAPY

Alves, Neyla Maria Pereira1; Silva, Maria Leonilda Gondin


3; de Araújo, Paulo

Sérgio Ramos4; Crovella, Sergio

5; Brandão, Lucas André Cavalcanti


5.


(1)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco,

Brazil.; (2)

Department of Pathology, Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.; (3)

Department of Genetics, Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.; (4)

Hospital of Clinics

(HC-UFPE), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil; (5)

Laboratory of Immunopathology

Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil; Department of Genetics,

Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.; (6)

Laboratory of Immunopathology Keizo Asami

(LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil; Department of Pathology, Federal

University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.

RESUMO The Antiretroviral therapy introduction has changed the Human Immunodeficiency Virus type 1's (HIV-1)

infection history, not being more a fatal disease but a chronic disease. It is able to suppress viral replication to

undetectable levels, thus reducing morbidity and mortality. However, there are some individuals that the

increasing in CD4+ T cell counts to normal levels fails (immunological failure) even with undetectable viral load,

even with good adherence to therapy. Several viral and host factors can be involved in this phenomenon. Viral

infection mechanisms can promote modulation of cell death pathways inducing release of death ligands (TNFα)

and expression of death receptors (TNFR1). These mechanisms can induce both inflammation and cell survival

through common pathway of NF-kB activation, or induce anti-inflammatory molecules recruitment (A20) that

downregulates the NF-kB complex and is able to induce an anti-inflammatory and pro-apoptotic response. Here,

we evaluated the distribution of TNFR1 (rs1800692 and rs767455), A20 (rs22700926), NF-kB (rs8904) and TNF

(rs1800629) SNPs and their relationship to immune recovery of patientes under regular use of Antiretroviral

Therapy. We selected 113 HIV-1 infected individuals who were divided in immunological success (control) or

immunological failure (case) groups, in according with recovery of CD4+ T cells count in one year. All

individuals were recruted in Institute of Integral Medicine Professor Fernando Figueira and genotyped by

fluorogenic allele specifc probes using real time PCR. Our results showed no significant associations between

immunological failure and genetic variants analysed, as well as clinical variants (weight, ethnia, age, gender and

treatment regimen). Although our study did not find association between apoptosis pathway gene SNPs and

immunological failure, further studies, with a larger number of variants and sample size are needed in order to

clarify the real role of these variants in immunological failure in HIV-1 infected individuals under antiretroviral

therapy.


243


POLYMORPHISMS WHITIN NLRP1 ARE NOT ASSOCIATED WITH SYSTEMIC LUPUS

ERYTHEMATOSUS

Guaraná, Wl1; Adelino Silva, Je

2; Cruz, Hla

3; de Azevedo Silva, J

2; Sandrin Garcia, P

2.


(1)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ;

(2)Laboratório de

Imunopatologia Keizo Asami, Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; Departamento de Genética,

Universidade Federal de Pernambuco - Brasil ; (3)

Departamento de Genética, Universidade Federal de Pernambuco

- Brasil

RESUMO INTRODUCTION: NLRP1 is an important member of NOD-like receptors (NLR) family that recognizes

molecular patterns derived from pathogens and damaged cells. When occurs activation of this receptor, it can

recruit the adaptor apoptosis-associated speck-like protein with a caspase activation and recruitment domain

(ASC). As a result, the inflammasome complex is formed. The Inflamassome implicated in production of mature

IL-1β, which is an important proinflammatory cytokine involved in Systemic Lupus Erythematosus (SLE)

pathogenesis. Aditionally, several data suggest that imbalanced IL-1β production may affect the risk of developing

SLE. Single Nucleotide Polymorphisms (SNPs) are genetic variants that can alter the expression or function of

proteins. Moreover, SLE is multifactorial autoimmune disease with a strong genetic component. OBJECTIVE: In

this context, it is important to assess if polymorphisms in NLRP1 may contribute to SLE susceptibility.

METHODOLOGY: Genotyping was performed using the Taqman® probes C__1600689_10 and C__1600653_10

to analyze the SNPs 2670660 [A>G] (global MAF = 0.39) and rs12150220 [A>T] (global MAF = 0.19). A total of

132 SLE Brazilian patients were recruited at the Division of Rheumatology of Clinical Hospital, Federal

University of Pernambuco, 154 healthy individuals matched for age and sex with SLE patients from the same

geographical area were also enrolled as controls. Fisher's Exact Test was used to evaluate the association between

the polymorphisms and the development of SLE (considering p.value<0.05). All statistical analyses were

performed with R software. RESULTS: No significant differences were found between the studied SNPs

rs2670660 [A>G] (OR = 0.982; CI = 0.68 - 1.41; p.value = 0.982) rs12150220 [A>T] (OR = 0.837; CI = 0.58 -

1.24; p.value = 0.876) and SLE susceptibility. CONCLUSION: These SNPs within NLRP1 gene are not

associated with SLE susceptibility. Since the products of activation of NLRP1 have an important role in

inflammation, it is necessary investigate other SNPs and also replicate this study is other populations.


244


POST TRANSCRIPTIONAL IMBALANCE INFLUENCE IN JAK-STAT SIGNALING PATHWAY

TRIGGERING INFLAMMATORY DISORDERS IN GESTATIONAL DIABETES

Nathalia Joanne Bispo Cezar1; Jessica Plaça

2; Juliana Doblas Massaro

1; Claudia Danella Polli

1; Wilson Araújo

da Silva Júnior2; Elaine Móises

3; Geraldo Duarte

3; Eduardo Antonio Donadi

1; Celso Teixeira Mendes Junior

4.


(1)Department of Genetics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil;

(2)Regional

Blood Center - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (3)

Department of

Gynecology and Obstetrics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (4)

Department of Chemistry - Faculty of Philosophy, Sciences and Letters of Ribeirão Preto, University of São

Paulo - Brazil

RESUMO Gestational diabetes mellitus (GDM) is the most common metabolic disorder found during gestation and has been

defined as an abnormal glucose metabolism ?rst diagnosed during pregnancy. Actually, some microRNAs

(miRNAs) have been described to be differentially modulated in GDM. Since the induction of inflammation genes

in pregnant women with GDM has been elucidate and the transcriptional profile in GDM is very similar to that of

Type 1 diabetes (T1D), as previously observed by our research group, it seems possible that imbalance in post

transcriptional expression may be related to inflammatory disorders in GDM. Therefore, we have searched for

differentially expressed miRNAs in GDM patients and their targets (in silico) related to

immunological/inflammatory response. Large scale miRNA expression was evaluated in 32 GDM patients and in

32 healthy pregnant women using Next-Generation sequencing (MiSeq-Illumina), and differentially expressed

miRNAs between GDM and non-GDM pregnant women was detected using the DESeq2 package

(http://bioconductor.org/biocLite.R). MiRNAs targets were predicted by starBase v2.0

(http://starbase.sysu.edu.cn/), mirTARBase (http://miRTarBase.mbc.nctu.edu.tw/) and mirWalk

(http://mirwalk.uni-hd.de/) and enrichment functional analysis was performed by DAVID database

(http://david.abcc.ncifcrf.gov). RNASeq analysis revealed 16 differentially expressed miRNAs between GDM

patients and healthy pregnant women (P < 0.01/ FC > |1.2|). Experimentally validated microRNA-target

interactions (mirTARBase) shows EP300 gene (mediator of classical signaling pathways in diabetes) as target for

hsa-miR-452-5p (down regulated in GDM patients: P = 0.001/ FC = -1.94). Additionally, DAVID functional

analysis revealed EP300 gene participation in JAK-STAT signaling pathway (involved in regulation of

inflammatory processes and obesity development). Although functional analyses are needed, this finding suggests

that the interaction miR-452-5p/EP300 mRNA may influence in JAK-STAT signaling pathway. This correlation

reinforces the hypothesis that inflammation may be associated to imbalance in post transcriptional expression in

GDM, triggering hyperglycemia and insulin sensitivity dysregulation.

APOIO Financial Support: CNPq and FAPESP

245


RARO TRANSCRITO E14A3 DO REARRANJO BCR-ABL1 EM PACIENTE ADULTO COM

LEUCEMIA LINFOBLÁSTICA AGUDA:RELATO DE CASO

Bruno Luiz Gomes de Albuquerque Conceição1; Ilana de França Azevedo

2; Andreza Pâmela Vasconcelos

1; Filipe

Fonseca Borges1; Fárida Coeli de Barros Correia Melo

3; Washington Batista das Neves

3; Raul Antônio Morais

Melo4.




(3)Fundação de Hematologia e

Hemoterapia de Pernambuco-Hemope; (4)

Universidade de Pernambuco/Fundação de Hematologia e Hemoterapia

de Pernambuco-Hemope

RESUMO Introdução: A t(9;22)(q34;q11) com formação do gene quimérico BCR-ABL1 é encontrada em cerca de 25% dos

casos de Leucemia Linfoblástica Aguda (LLA) no adulto. A depender do ponto de quebra cromossômico esse

rearranjo gênico pode dar origem a vários tipos de transcritos. O mais frequente é o e19a2 relacionado à proteína

p190, raramente encontrado em associação com e14a2, e13a2 ou e14a3, relacionados à p210. O presente relato

descreve o caso de um paciente adulto com LLA-B e presença dos transcritos e19a2 e e14a3. Relato do Caso:

F.S.L., masculino, 34 anos, agricultor com queixas de febre, tosse, palidez e visão turva foi diagnosticado e tratado

no Hospital Hemope. O paciente tinha contato com agrotóxicos, era tabagista, etilista crônico e hepatopata. Ao

exame apresentava epistaxe, petéquias e visceromegalias. O hemograma evidenciou anemia, plaquetopenia e

hiperleucocitose com 94% de blastos. O mielograma apresentava 93% de blastos classificados como do tipo

L1/L2. As análises citoquímicas e imunofenotípicas foram compatíveis com o diagnóstico de LLA-B. A conduta

consistiu de citorredução e tratamento com o protocolo quimioterápico HiperCVAD. O paciente não obteve

remissão hematológica completa e evoluiu com insuficiência renal e respiratória, sangramento pulmonar,

infecções bacterianas e foi a óbito devido a choque séptico após 61 dias de seguimento. O material biológico do

paciente mantido em biorrepositório foi analisado pela técnica da Reação em Cadeia da Polimerase Transcrição

Reversa (RT-PCR) um ano após o seu falecimento quando a técnica RT-PCR foi implantada para detecção de

rearranjos. Os resultados mostraram dupla positividade para o rearranjo gênico BCR-ABL1 com presença dos

transcritos e19a2 (p190) e e14a3 (p210). A pesquisa dos rearranjos ETV6-RUNX1, TCF3-PBX1 e MLL-AFF1 foi

negativa. Discussão: O rearranjo BCR-ABL1 é o mais frequente na LLA do adulto e confere prognóstico ruim. Ele

é ainda mais desfavorável com o transcrito e14a3, o mais raro. Assim, a falta de resposta ao tratamento pode ser

explicada pela não efetividade das drogas frente às alterações genéticas encontradas. Atualmente o tratamento

inclui quimioterapia, agentes inibidores da tirosinoquinase e transplante. Os antecedentes de doença hepática

devem ter contribuído para o desfecho. O relato mostra a importância da identificação de marcadores moleculares

prognósticos para orientar tratamentos alvo-dirigidos e melhorar a sobrevida de pacientes adultos com LLA.

APOIO FACEPE

246


RASTREIO DE DOENÇAS GENÉTICAS NO MUNICÍPIO DE MONTE SANTO-BA

Danniel Sann Dias da Silva1; Polyanna Carozo de Oliveira

2; Paula Brito Corrêa

3; Aruanã Mairê Maia Fontes

4;

Angelina Xavier Acosta5; Kiyoko Abe Sandes

6.


(1)Maternidade Climério de Oliveira, Universidade Federal da Bahia ;Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz,

Fundação Oswaldo Cruz; (2)

Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Universidade Federal da Bahia;

Centro de Pesquisa Gonçalo Moniz, Fundação Oswaldo Cruz; (3)

Serviço de Genética Médica, Universidade

Federal da Bahia; (4)

Pós-graduação em Medicina e Saúde, Universidade Federal da Bahia; (5)

Faculdade de

Medicina, Universidade Federal da Bahia; Serviço de Genética Médica, Universidade Federal da Bahia; (6)

Laboratório de Imunologia e Biologia Molecular, Universidade Federal da Bahia

RESUMO Monte Santo é um município baiano localizado no chamado polígono da seca, com população de 52.338

habitantes (IBGE, 2010), desta, 40% vive em situação de extrema pobreza, sendo o mais pobre entre os

municípios baianos com mais de 50.000 habitantes. Foi desenvolvido instrumento para aplicação por agentes

comunitários de saúde (ACS) (Ficha A-GEN) para levantamento de sintomas sugestivos de deficiências/doenças

que podem ter etiologia genética. As equipes do Programa de Saúde da Família do município foram treinadas para

a busca ativa de casos suspeitos e procedeu-se a validação da acurácia do instrumento. Estão sendo estabelecidos

fluxos específicos de investigação molecular para cada grupo de doenças. Mutações patogênicas ou de risco estão

sendo rastreadas em amostragem randomizada para fins de georreferenciamento e reconhecimento de áreas de

risco. Foram coletadas até o momento informações de 2142 famílas (16,2% do total cadastrado), das quais se

buscou casos para o estudo validação e 298 famílias da amostra randomizada (2,3% do total de famílias) das quais

realizamos estimativas de prevalência. Foram realizadas até o momento 58 audiometrias, 70 testes psicológicos de

inteligência e 237 avaliações por geneticista clínico. Os resultados preliminares demonstram sensibilidade e

especificidade, respectivamente, de 59% e 68% para DA, 78% e 53% para DI (Deficiência intelectual), 77% e

70% para DC (Defeitos congênitos), 90% e 95% para TM (Transtornos mentais). A amostra ainda precisa ser

ampliada, mas já se observa que a DA talvez seja a deficiência menos detectável por auto-relato (maior número de

falsos negativos). A prevalência estimada corrigida pelos valores preditivos sob amostra aleatória simples foi de

37,8% de DA, 22,6% de DI, 10,2% de DC e 4,0% de TM, e 1,1% de CA. O índice de consanguinidade observado

na população foi de 13,5%, e etiologia genética foi sugerida em 42,8%, 78,2%, 64%, 63,6% e 66% dos casos

suspeitos de DA (Deficiência auditiva), DI, DC, TM e CA (Câncer), respectivamente. Estes dados mostram que

pode ser viável e eficaz o uso de um instrumento de fácil aplicação para o rastreio de doenças genéticas através da

estratégia de saúde da família.

APOIO FAPESB/PPSUS e CAPES (FIOCRUZ- Programa Brasil Sem Miséria)

247


REGULATION OF EP300 TRANSCRIPT BY HSA-MIR-452-5P INFLUENCE IN GESTATIONAL

DIABETES DISORDERS

Nathalia Joanne Bispo Cezar1; Jessica Plaça

2; Juliana Doblas Massaro

1; Claudia Danella Polli

1; Wilson Araújo

da Silva Júnior2; Elaine Moises

3; Geraldo Duarte

3; Eduardo Antonio Donadi

1; Celso Teixeira Mendes Mendes

Júnior4.


(1)Department of Genetics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil;

(2)Regional

Blood Center - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (3)

Department of

Gynecology and Obstetrics - Faculty of Medicine of Ribeirão Preto - University of São Paulo - Brazil; (4)

Department of Chemistry - Faculty of Philosophy, Sciences and Letters of Ribeirão Preto, University of São

Paulo - Brazil

RESUMO Some microRNAs (miRNAs) have been described to be differentially modulated in gestational diabetes mellitus

(GDM), the most common metabolic alteration observed during pregnancy. Since mechanisms related to GDM

onset remain unclear, it seems possible that post-transcription control of gene expression may be involved in GDM

disorders. Therefore, we have searched for differentially expressed miRNAs in GDM patients and their mRNA

targets (experimentally validated - mirWalk database) related to metabolic alterations. Large scale miRNA

expression was evaluated in 32 GDM patients and in 32 healthy pregnant women using Next-Generation

sequencing (MiSeq-Illumina), and differentially expressed miRNAs between GDM and non-GDM pregnant

women was detected using the DESeq2 package (http://bioconductor.org/biocLite.R). MiRNAs targets were

predicted by starBase v2.0 (http://starbase.sysu.edu.cn/), mirTARBase (http://miRTarBase.mbc.nctu.edu.tw/) and

mirWalk (http://mirwalk.uni-hd.de/) and enrichment functional analysis was performed by DAVID database

(http://david.abcc.ncifcrf.gov). RNASeq analysis revealed 16 differentially expressed miRNAs between GDM

patients and healthy pregnant women (P < 0.01/ FC > |1.2|). Of these, miR-452-5p was down-regulated in GDM

(P = 0.003/FC = -1.95) and targeted EP300 mRNA which presents an essential role in response to pro-

hypertrophic stimuli including hyperglycemia and act as mediator of classical diabetes signaling pathways (Wnt,

Notch, TGF-beta and Jak-STAT). Although functional analyses are needed, this finding suggests that the

imbalance in the regulation miR-452-5p/EP300 mRNA may be one important mechanism to explain arising of

diabetes during pregnancy. These data reinforce the hypothesis that either miR-452-5p or EP300 mRNA may act

as potential targets to control disorders related to GDM.

APOIO Financial Support: CNPq and FAPESP

248


RELAÇÃO DO POLIMORFISMO VAL158MET NO GENE COMT COM A SEVERIDADE DA DOENÇA

DE PARKINSON EM PACIENTES ATENDIDOS NO HOSPITAL DAS CLÍNICAS DE PERNAMBUCO

Maria Eduarda Andrade Lima Martins1; Erinaldo Ubirajara Damasceno dos Santos

2; Tiago Furtado Sampaio

3;

Nadja Maria Jorge Asano4; Andore Guescel Asano

4; Paulo Roberto Euletério de Souza

1.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE PERNAMBUCO;

(2)UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO;

(3)UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO;

(4)HOSPITAL DAS CLÍNICAS

RESUMO A Doença de Parkinson (DP) é um dos transtornos do movimento mais encontrado na população idosa, sendo

considerada a segunda doença neurodegenerativa mais comum. É caracterizada por uma disfunção

monoaminérgica múltipla e clinicamente caracterizada pelo "parkinsonismo clássico": bradicinesia, rigidez, tremor

de repouso e instabilidade postural. A DP é uma doença multifatorial e, portanto, está associada tanto com fatores

genéticos e ambientais. Dentre os fatores genéticos, o gene catechol- O-methyltransferase (COMT) codifica a

enzima COMT, responsável pela biodegração da catecolaminas, incluindo a dopamina. Polimorfismos nesse gene

têm sido constantemente associados com o tratamento da DP. O objetivo do presente estudo foi investigar uma

possível associação do polimorfismo Val158Met no gene COMT com a severidade da DP. A população de estudo

foi composta por indivíduos adultos diagnosticados com a DP e tratados no do Ambulatório Pró-Parkinson do

Hospital das Clínicas da UFPE. A extração do DNA genômico se deu a partir de sangue total periférico e a

genotipagem foi realizada pela técnica de PCR-RFLP. As análises estatísticas de associação foram realizadas

através do programa Bioestat versão 5.0. Cinquenta e nove por cento (59/100) da população era do sexo

masculino, com uma média de idade de 63,14 anos e com um tempo médio de doença 7,28 anos. Os 41% da

população feminina, tinham idade média de 63,22 anos e tempo médio da doença de 7,30 anos. Dentre as

características clínicas avaliadas a mais prevalente na população de estudo foi tremor presente em 71%, seguido de

rigidez (16%), bradicinesia (15%) e dor (9%). Nenhuma associação estatística foi encontrada quando com o

polimorfismo Val158Met no gene COMT foi comparado com a severidade da DP (p>0.05). Nossos resultados

sugerem que o polimorfismo Val158Met no gene COMT não esteja associado com a progressão da DP na

população em estudo. Entretanto, são necessários novos estudos para confirmação deste resultado.

249


RELAÇÃO DOS POLIMORFISMOS DE BASE ÚNICA NOS GENES IL4, IL10 E LY6 COM

DISTÚRBIOS NEUROLÓGICOS EM PACIENTES VIVENDO COM HIV.

Klaudia Emanuela Ramos Tenório1; Wlaldemir Roberto dos Santos

1; Evandra Santos Pontes

1; Sergio de Sá

Leitão Paiva Júnior1; Paulo Sergio Ramos de Araujo

2; Valdir de Queiroz Balbino

1.



(2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/FIOCRUZ

RESUMO Introdução: O HIV causa imunossupressão possibilitando o surgimento de diversas patologias nos indivíduos. O

sistema nervoso central é um dos mais afetados, seja decorrente da ação do próprio HIV ou por infecções

oportunistas como Neurotoxoplasmose (Toxoplasma gondii), Neurossífilis (Treponema pallidum) e a

neurocitomegalovirose (Citomegalovírus). Diversos fatores podem influenciar na predisposição de desenvolver

infecções neurológicas como alterações nos genes do sistema imunológico. Os Polimorfismos de nucleotídeo

único (SNPs) induzem alterações nos genes do sistema imune. O gene Ly6 está associado ao tipo de progressão do

HIV, levando ao surgimento de coinfecções. Pesquisas indicam que as citocinas (IL-4,IL-10) e ativação do sistema

imune tem um papel importante no desenvolvimento de doenças neurológicas. Desta forma, o presente estudo tem

como objetivo avaliar as associações entre polimorfismos em genes relacionados ao sistema imunológico e o

desenvolvimento de infecções neurológicas (neurotoxoplasmose, neurossífilis e neurocitomegalovirose). Material

e Métodos: Foram coletados cinco ml de sangue total de 298 pacientes vivendo com HIV/aids atendidos nos

Hospital das clinicas de Pernambuco. Em seguida, os prontuários destes pacientes foram analisados e divididos em

dois grupos um com infecções neurológicas e o outro sem infecções neurológicas. Foi realizada PCR em tempo

real para os SNPs rs2572886 (Ly6), rs 2243250 (IL4), rs1800896 (IL10). Em seguida os dados foram analisados

através SNPStats, verificando o Odds ratio (OR), considerando o nível de significância de 5% (α>0,05).

Resultados: A análise genotípica de IL4 sugere que o genótipo TT (IL4) mostra maior susceptibilidade (12x) em

pacientes do sexo masculino para o desenvolvimento de doenças neurológicas, entretanto o p =0,053 não foi

significativo que pode ser influenciado pelo número de indivíduos analisados. Para os SNPs Ly6 e IL10 não foi

encontrada nenhuma associação com os distúrbios neurológicos causados por coinfecções em pessoas vivendo

com HIV/aids. Na análise da combinação dos genótipos uma possível associação foi encontrada entre o genótipo

TGC e o desenvolvimento de doenças neurológicas em pessoas vivendo com HIV/aids (OR 2,58 (1.04- 6,37), p-

value = 0.041). Os genes IL4, IL10 e LY6 estão relacionados ao funcionamento do sistema imune e necessitam de

maiores estudos para verificar possíveis associações ao desenvolvimento de infecções neurológicas em pessoas

vivendo com HIV/AIDS.

APOIO CNPQ

250


SÍNDROME DE DELEÇÃO 22Q13.3: ANÁLISE POR SNP-ARRAY

Neulice Correia1; Esmeralda Santos Alves

1; Angelina Xavier Acosta

1; Joanna Meira

1; Acacia Fernandes L de

Carvalho2.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA - Hospital Universitário Prof. Edgard Santos;

(2)UNIVERSIDADE

FEDERAL DA BAHIA - Instituto de Biologia Lab. Genética Humana e Mutagênese

RESUMO Introdução - A síndrome de deleção 22q13, também conhecida como síndrome de Phelan-McDermid (OMIM:

606232), é um distúrbio neurológico caracterizado pela incapacidade intelectual, hipotonia neonatal, atraso

desenvolvimento global, ausência ou atraso grave de fala, comportamento autista e características dismórficas

menores. Objetivo: O objetivo do trabalho foi determinar os genes envolvidos nas dismorfias do paciente.

Casuística: Esse trabalho descreve um paciente com dismorfias e atraso global de desenvolvimento atendido no

Ambulatório de Genética Médica do Hospital Universitário Prof. Edgard Santos (COM-HUPES/UFBA) que foi

identificado pela citogenética clássica com presença de um cromossomo 22 em anel, 46,XY,r(22)(p11;q13).

Metodologia: Foi realizada análise por SNP-Array utilizando os chips HumanCytoSNP-12 BeadChip (Illumina

Inc., San Diego, CA). Resultados: A análise de SNP-array detectou a presença de apenas uma cópia da região

22q13.31-q13.33 (45764874-51169045)x1 com tamanho de 5,4 Mb. Conclusão: Essa alteração envolve vários

genes, com destaque para o gene SHANK3 (também conhecido como ProSAP2) (OMIM: 606230) identificado

como o gene crítico nos aspectos neurológicos e comportamentais observados em pacientes com deleções 22q13.

Mutações nesse gene são causa de transtorno do espectro do autismo (ASD).

APOIO CNPq

251


SÍNDROME DO CROMOSSOMO 21 EM ANEL ASSOCIADO A FISSURA PALATINA E ATRASO

GLOBAL DE DESENVOLVIMENTO

Esmeralda Santos Alves1; Neulice Correia

1; Joanna Meira

1; Angelina Xavier Acosta

1; Acacia F L Carvalho

1.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA - Hospital Universitário Prof. Edgard Santos

RESUMO Introdução: Cromossomo 21 em anel é uma alteração cromossômica congênita rara. Os pacientes que possuem um

cromossomo 21 normal e seu homólogo em anel normalmente apresentam monossomia parcial desse cromossomo

levando a malformações neurológicas, oculares, do trato cardiovascular, digestivo, sistema geniturinário e

distúrbios hematológicos. Objetivo: O objetivo desse trabalho foi caracterizar molecularmente um cromossomo 21

em anel. Casuística: Esse trabalho descreve um paciente atendido no Ambulatório de Genética Médica do Hospital

Universitário Prof. Edgard Santos (COM-HUPES/UFBA) com dismorfias, incluindo fissura palatina e atraso

global de desenvolvimento, que apresentou através da citogenética clássica um cromossomo 21 em anel, cariótipo:

46,XY,r(21q). Metodologia: Foi realizada análise por SNP-array utilizando os chips HumanCytoSNP-12

BeadChip (Illumina Inc., San Diego, CA). Resultado: A análise de SNP-array identificou apenas uma cópia da

região 21q22.3 (43.087.772-48.098.824)x1 com tamanho de 5Mb. Conclusão: O OMIM genes descreve nessa

região cerca de 16 genes associados a doenças: RIPK4, TMPRSS3, RSPH1, CBS, CRYAA , SIK1, CSTB, AIRE,

TSPEAR, ITGB2, COL18A1, COL6A1, COL6A2, LSS, PCNT, FTCD. O DECIPHER relata pacientes com fissura

patina, atraso de linguagem e outras dismorfias, fenótipo também observado no paciente desse estudo.

APOIO CNPq

252


SÍNDROMES MIELOPROLIFERATIVAS / MIELODISPLÁSICAS - RELATO DE 15 PACIENTES

PEDIÁTRICOS

Maria Luiza Rocha da Rosa Borges1; Beatriz Almeida Barp Santos

1; Maria Teresa Marquim Nogueira Cornélio

2;

Edinalva Pereira Leite3; Eliane Maria Soares Ventura


4; Terezinha de Jesus

Marques Salles3.


(1)Faculdade de Ciências Médicas da Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil;

(2)Instituto de Ciências

Biológicas, Universidade de Pernambuco, Recife/Brasil; (3)

Centro de Oncohematologia Pediatrica, Hospital

Oswaldo Cruz; (4)

Universidade Federal de Pernambuco, Recife/Brasil

RESUMO Introdução: As doenças Mielodisplásicas/Mieloproliferativas (SMD/DMP) são malignidades hematopoéticas,

caracterizadas por hipercelularidade de uma ou mais linhagem e pelo menos 20% de blastos na Medula óssea .

Doenças hereditárias como Neurofibromatose, Síndrome de Noonan e Noonan like são observadas

frequentemente. A classificação da SMD na infância se baseia na Orgaização Mundial de Saúde (OMS) 2003. O

diagnóstico da doença é feito pelos dados clínicos, mielograma e estudos genéticos. As anormalidades

cromossômicas são descritas em 35% dos pacientes, as mais encontradas são: Trissomia 8, monossomia 7 e

deleção (20q), sendo a monossomia 7 a mais frequente (25%). Objetivo: Classificar e diagnosticar por estudos

citogenéticos os pacientes com SMD infantis do Centro de oncohematologia pediátrica do Hospital universitário

Oswaldo Cruz (CEONHPE/HUOC) no período de 2004-2016. Material e Método: A partir das características

clínicas do prontuário e dos estudos citogenéticos pela técnicas de banda G e FISH realizadas na MO foram

classificados como Mielodisplásicas/Mieloproliferativas, pela OMS(2003) 15 pacientes pediátricos. Doze

pacientes com Leucemia Mielomonocítica Juvenil (LMMJ), 01 LMMJ com mielofibrose e metaplasia mieloide,

01 com mielopoese anormal transitória (TAM) e 01 com leucemia mieloide da síndrome de Down (SD). Houve

prevalência no sexo masculino (87%), a idade média foi de 3 anos, com exceção do portador de TAM,

diagnosticado aos 14 dias de vida.Um era portador de Neurofibromatose 1 e outro com Sínd. de Noonan-like.

Todos os pacientes com LMMJ apresentaram grande esplenomegalia e o paciente portador da mielofibrose

apresentou hepatoesplenomegalia gigante. Todos os casos tinham hiperplasia e displasia na MO. Os estudos

citogenéticos mostraram 07 casos (47%) com cariótipos normal e 08 (53%)alterados A monossomia 7 foi a

alteração mais frequente (20%). Foram a óbito 67% (10), 9 por doença e 1 decorrente do transplante alogênico de

medula óssea (AloTMO). Cinco pacientes estão vivos, 3 pós AloTMO, um em acompanhamento pós AloTMO em

uso de azaciditina e, outro está aguardando transplante. Os estudos citogenéticos são essenciais no diagnóstico da

SMD. A percentagem de cariótipos normais mostra a necessidade de outros estudos genéticos para doenças

hereditária subjacente e para definir os mecanismos genético e epigenéticos envolvidos nos pacientes com

SMD/SMP da infância.

APOIO CAPES

253


SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS IN CUL5 GENE IN HIV-1 INFECTED INDIVIDUALS OF

SOUTHERN BRAZIL: IMPLICATIONS WITH DISEASE PROGRESSION

Almerinda Agrelli1; Maria Cristina Matte

2; Sabrina Esteves de Matos Almeida

3; Jose Artur Bogo Chies

4; Sérgio

Crovella5; Ronaldo Celerino da Silva

1.



Brazil.; (2)

Department of Genetics, Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, Brazil; (3)

State Foundation of Production and Research in Health, Porto Alegre, Brazil.; (4)

Department of Genetics, Federal

University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, Brazil.; (5)

Department of Genetics, Federal University of

Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.

RESUMO Various host-virus protein-protein interactions are crucial for HIV-1 virus in its life cycle. The APOBEC3G

(apolipoprotein B mRNA editing enzyme, catalytic polypeptide-like 3G) family was discovered to have antiviral

activities of varying degrees leading to highly efficient interruption of HIV-1 replication. To counteract these host

restriction factors, the HIV-1 Vif protein hijacks host Cullin 5 (CUL5), among other proteins from the multi-

subunit E3 ubiquitin ligase complex, to induce APOBEC3G protein ubiquitination and degradation. Therefore,

genetic variations in CUL5 may lead to different upshots in the progression of the disease. In this work, we studied

three SNPs (rs7117111, rs11212495 and rs7103534) in the CUL5 gene that may be related with progression of

HIV-1 infection. Were selected 94 HIV-1 infected (HIV-1+) individuals from Porto Alegre, Brasil, which were

divided in two groups: slow progressors and rapid progressors. The genotyping of SNPs was performed with allele

specific fluorescent probes (TaqMan®) using platform for real-time PCR. Allele and genotype frequencies were

estimated by direct counting. The Hardy-Weinberg and probable associations were determined by X2 test and

Fisher's exact test, using R software. All SNPs were in Hardy-Weinberg equilibrium, except for rs11212495 in

HIV-1 rapid progressors. Among the CUL5 SNPs analysed, the rs7103534 presented significant differences

among slow progressors and rapid progressors HIV-1 individuals. We found that the C allele was significantly

more frequent in slow progressors (11.6%) than in rapid progressors (1.4%, OR = 0.11, 95% CI: 0.002-0.795,

P=0.01). Similarly, the TC genotype was significantly more frequent in slow progressors (11.6%) than in rapid

progressors (2.9%, OR = 0.10, 95% CI: 0.002-0.745, P=0.01). These data suggested that HIV-1 individuals with C

allele and TC genotype of rs7103534 have a lower susceptibility to AIDS progression. Taken together, the results

indicated the importance of CUL5 gene in progresion of HIV-1 infection for AIDS and may contribute to the

understanding of the different upshots of the disease.


254


SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS IN HLA-C AND ZNRD1 GENES IN HIV-1 INFECTED

INDIVIDUALS OF SOUTHERN BRAZIL: IMPLICATIONS WITH DISEASE PROGRESSION

Almerinda Agrelli1; Maria Cristina Matte

2; Sabrina Esteves de Matos Almeida

3; Jose Artur Bogo Chies

2; Sérgio

Crovella4; Ronaldo Celerino da Silva

1.



Brazil.; (2)

Department of Genetics, Federal University of Rio Grande do Sul (UFRGS), Porto Alegre, Brazil.; (3)

State Foundation of Production and Research in Health, Porto Alegre, Brazil.; (4)

Department of Genetics, Federal

University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.

RESUMO Host genetic factors play a major role in determining the outcome of human immunodeficiency virus type-1 (HIV-

1) infection. Multiple host factors have been studied till date, among them, ZNRD1 (zinc ribbon domain-

containing 1) and HLA-C (major histocompatibility complex, class I, C), which have been shown to be strongly

correlated with HIV disease progression. HLA-C has a dual role of presenting antigens to T-cytotoxic cells and as

ligands to immunoglobulin-like receptors (KIRs) on NK (natural killer) cells, acting as a stimulator of the immune

response to the virus, while ZNRD1 is a DNA-dependent RNA polymerase that catalyzes the transcription of

DNA into RNA, and seem to influence HIV replication and viral load. Thus, genetic variations in these genes may

lead to different upshots in the progression of the disease. Here, we investigated the effects of genetic variations in

HLA-C (rs10484554 and rs9264942) and ZNRD1 (rs3869068 and rs8321) genes in progression of HIV-1 infection.

Were selected 94 HIV-1 infected (HIV-1+) individuals from Porto Alegre, Brasil, which were divided in two

groups: slow progressors and rapid progressors. The genotyping of SNPs was performed with allele specific

fluorescent probes (TaqMan®) using platform for real-time PCR. Allelic and genotypic frequencies were

estimated by direct count. Hardy-Weinberg equilibrium and associations were determined by X2 test and Fisher's

exact test, using R software. All polymorphisms were in Hardy-Weinberg equilibrium, except for rs11212495 in

rapid progressors. For the HLA-C gene, the T allele and TT genotype of rs10484554 were the most frequent in

slow (56% and 36.8%) and rapid progressors (68% and 50%). For the rs9264942, the C allele and CC genotype

were the most frequent in slow (83.3% and 72%) and rapid progressors (81% and 70%). For the ZNRD1 gene, the

C allele and CC genotype of rs3869068 were the most frequent in slow (77% and 60%) and rapid (79% and

61.1%) progressors. For the rs8321, the A allele and AA genotype were the most frequent in slow (98% and

96.4%) and rapid (94.5% and 92%) progressors. The variants of HLA-C and ZNRD1 genes have shown not to be

statistical significance associated with the progression of HIV's infection, however further investigations in others

populations with a larger number of samples are needed.


255


SINGLE NUCLEOTIDE POLYMORPHISMS IN HLA-C AND ZNRD1 GENES IN TWO COHORT OF

HIV-1 MOTHER-TO-CHILDREN TRANSMISSION

Soares, André Luiz Bormann1; Guimaraes, Rafael Lima

1; Crovella, Sergio


1.


(1)Department of Genetics, Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil and Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco (UFPE), Recife, Brazil.

RESUMO Humans show heterogeneity in their vulnerability to HIV-1 acquisition and infection, which is under controlling of

genes involved in immunity and virus replication. HLA-C (human leukocyte antigen C) molecules present

antigens to cytotoxic T lymphocytes (CTLs) and inhibit lysis of "natural killer" (NK) cells by inhibitory Killer

immunoglobulin-like receptor interaction; while ZNRD1 (zinc ribbon domain-containing 1) has identified among

250 host factors required for HIV-1 replication. Single nucleotide polymorphisms (SNPs) in these genes have been

related to HIV-1 susceptibility. We evaluated the allelic/genotypic distribution of HLA-C (rs110484554,

rs9264942) and ZNRD1 (rs3869068, rs8321) SNPs and their relationship with HIV-1 mother-to-child transmission

(MTCT) susceptibility in India and Africa individuals. We used a Indian (82 individuals: 51+/31-) and a African

(45 individuals: 27+/18-) cohort of HIV-1 MTCT. Genotyping were performed by real time PCR using allele-

specific probes. Hardy-Weinberg equilibrium (HWE) and associations were estimated, respectively, by X2-square

and Fisher Exact Test. All SNPs were in HWE (Indian - except: rs10484554 in both groups; and African - except:

rs10484554 in HIV-1+ / rs3869068 in HIV-1

-). In Indian, the C allele and CC genotype of HLA-C rs10484554

were, respectively, the most frequent in HIV-1+

(79%/ 72%) and HIV-1- (76%/72%) individuals. For rs9264942,

the T allele and CT genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (50%/45%) and HIV-1

- (53%/40%)

individuals. For ZNRD1 rs3869068, the C allele and CC genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+

(83%/70%) and HIV-1- (74%/ 52%) individuals. In African, the C allele and CC genotype of HLA-C rs10484554

were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (96%/96%) and HIV-1

- (88%/82%) individuals. For rs9264942,

the C allele and CC genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+ (85%/73%) and HIV-1

- (82%/76%)

individuals. For ZNRD1 rs3869068, C alleles and CC genotype were, respectively, the most frequent in HIV-1+

(68%/52%) and HIV-1- (70%/40%) individuals. The ZNRD1 rs8321 was monomorphic in HIV-1

+ and HIV-1

-

individuals of both the cohorts. No significant differences were observed when comparing the allele/genotype

distribution in HIV-1+ and HIV-1

- of India and Africa, suggesting a not associated with HIV-1 MTCT. However,

investigations in others populations and with more samples are needed.

APOIO CNPq (PDJ-402374/2014-2), CAPES and FACEPE

256


TRISSOMIA E TETRASSOMIA 21Q11.2-Q22.11 SEM A REGIÃO CRÍTICA DA SÍNDROME DE

DOWN: CORRELAÇÃO GENÓTIPO-FENÓTIPO.

Camila Capinam Pereira de Jesus1; Esmeralda Santos Alves

2; Gabriela Scheibler

2; Joanna Meira

2; Angelina

Xavier Acosta2; Neulice Correia

2; Acácia Fernandes Lacerda de Carvalho

1.


(1)Universidade Federal da Bahia - Instituto de Biologia - Laboratório de Genética Humana e Mutagênese;

(2)Universidade Federal da Bahia- Hospital Universitário Prof. Edgard Santos

RESUMO Introdução: A síndrome de Down (SD)é a causa mais frequente de deficiência intelectual de origem genética. A

maioria dos casos resulta de trissomia completa do cromossomo 21. No entanto, alguns pacientes apresentam

trissomias parciais e fenótipo da SD. A região crítica responsável pelas principais características da SD tem sido

descrita em 21q22.12 a 21q22.3. Objetivo: Realizar uma correlação genótipo-fenótipo de um paciente com

trissomia e tetrassomia 21q sem a região crítica da SD. Casuística: Esse trabalho descreve um paciente com 8 anos

atendido no Ambulatório de Genética do Hospital Universitário Prof. Dr. Edgard Santos (COMP-HUPES) da

Universidade Federal da Bahia apresentando deficiência intelectual leve e dismorfias. A análise citogenética

clássica com bandamento GTG identificou um cariótipo com presença de um cromossomo adicional de origem

não identificada (47,XY,+mar). Metodologia: Foi realizada análise de SNP-array utilizando os chips

HumanCytoSNP-12 BeadChip (Illumina Inc., San Diego, CA) para caracterizar molecularmente o cromossomo

marcador. Resultados: a análise de SNP array demonstrou a presença de três cópias das regiões 21q11.2q21.1

(14,687,571-16,593,184)x3 e 21q21.2q21.3q22.11 (25,865,342-32,314,514)x3 com 1,9Mb e 6,4 Mb,

respectivamente e quatro cópias da região 21q21.1q21.2 (16,611,077-25,846,325)x4 com tamanho de 9,2 Mb.

Conclusão: Embora a região envolvida na duplicação desse paciente não inclua a região crítica da SD o paciente

apresenta algumas características da síndrome como: deficiência intelectual, atraso de desenvolvimento,

braquicefalia, fendas palpebrais oblíquas, palato em ogiva, orelhas malformadas, cardiopatia entre outras. Esse

trabalho contribui com outros estudos que têm demonstrado que embora a região 21q22.12 a 21q22.3 possua a

maioria dos genes responsáveis pelo fenótipo da SD, outras regiões também podem estar envolvidas na

manifestação do fenótipo.

APOIO CNPq

257


VITAMIN D RECEPTOR (VDR) VARIANT INFLUENCE UPON SPONTANEOUS PRETERM BIRTH

Natassia Javorski Rodrigues1; Camilla Albertina Dantas de Lima

1; Lícia Vasconcelos Carvalho da Silva

2; Sérgio

Crovella1; Jaqueline de Azevêdo Silva

1.


(1)Departamento de Genética - UFPE;

(2)Faculdade Asces

RESUMO Preterm birth condition (PTB) is characterized by less than 37 weeks of gestational age or fewer than 259 days

since the first day of women`s last menstrual period, PTB rates continue to rise, increasing 30% during the last 25

years. This condition can be classified as a multifactorial syndrome and divided into spontaneous preterm birth

(SPTB) and provider-initiated PTB. Even though several aspects are involved in SPTB, immunological and

genetics interactions seem to play a pivotal role in SPTB triggering. The active form of vitamin D in addition to

the effects well described in bone metabolism and mineral homeostasis recently has been associated with immune-

modulatory actions. Vitamin D acts through its receptor VDR, which encodes polymorphisms such as FokI

(rs2228570) described as functionally involved in the immune system. Herein we evaluated whether VDR

polymorphism is associated with the risk of SPTB. For this purpose, we analysed 104 pregnant women with SPTB

and 85 women with normal birth, a protocol was filled in and the blood samples were taken. Genomic DNA was

extracted from peripheral blood using the Mini-Salting out method adapted from Miller et al., 1988. The SNP

rs2228570 A>G of VDR gene was genotyped using commercially available TaqMan probes (Applied Biosystem)

and the samples were run at 7500 Real-Time PCR instrument (Applied Biosystem). Statistical analyses for

association was performed using the Fisher exact test in the program SPSS (version 23) and the confidence

interval in SNPStats program. Statistically significant differences were found when comparing allele and genotype

frequencies in both groups: the A allele (p=0.00014) and A/A genotype (p=0.00013) for rs2228570 was

significantly more frequent in SPTB group than in normal birth group. In conclusion, we found that SNP FokI was

associated with the SPTB syndrome, since it can be influence upon VDR final structure and along with the fact

that vitamin D display a important role in immune-modulatory actions the VDR pathway can be related with the

outcome found in these syndrome.


258

Genética de Microrganismos

EMERGÊNCIA DE RESISTÊNCIA A POLIMIXINA EM ISOLADOS DE KLEBSIELLA PNEUMONIAE

DEVIDO A INATIVAÇÃO DO GENE REGULADOR NEGATIVO MGRB

Hemilly Rayanne Ferreira da Silva1; Anna Carolina Soares Almeida

2; Márcia Maria Camargo de Morais

1.


(1)Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco-UPE;

(2)Programa de Pós Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco-UPE;

Departamento de Biologia, Universidade Federal Rural de Pernambuco-UFRPE

RESUMO O gene blaKPC, frequentemente associado a Klebsiella pneumoniae, está disseminado mundialmente e confere

resistência a quase todos antibióticos beta-lactâmicos, incluindo os carbapenêmicos. Neste contexto, a polimixina

é uma das últimas escolhas no tratamento de infecções causadas por estes micro-organismos, o que demonstra a

necessidade de estudos que caracterizem os mecanismos de resistência a este antimicrobiano. O objetivo deste

trabalho foi caracterizar os mecanismos genéticos envolvidos na resistência a polimixina em dois isolados de K.

pneumoniae produtores de KPC, oriundos do LCR de um paciente de UTI. A pesquisa fenotípica de

carbapenemases foi realizada utilizando o teste de Hodge modificado e o teste de inibição com EDTA. O perfil de

susceptibilidade aos antimicrobianos foi determinado por automação é interpretado segundo o CLSI (2016). O

PFGE e o MLST foram utilizados para analisar a relação clonal dos isolados e para determinação do perfil alélico.

A identificação dos genes que codificam beta-lactamases, bem como a caracterização do integron e os genes

envolvidos na resistência a polimixina (phoPQ, pmrAB e mgrB), foram realizadas por PCR, seguidas de

sequenciamento. A análise do conteúdo plasmidial foi realizada segundo Kieser (1984). Os resultados fenotípicos

mostraram que os isolados são produtores de carbapenemase de classe A, resistentes a todas as drogas testadas,

incluindo polimixina, com exceção de amicacina e gentamicina. Análises moleculares revelaram a presença dos

genes blaKPC-2, blaSHV-11, blaTEM-1, dfrA12 e aadA2, estes últimos, localizados na região variável de um integron de

classe 1. A tipagem molecular por PFGE e MLST mostrou que os isolados eram indistinguíveis, compartilhando o

mesmo perfil alélico, resultando no ST423. A análise plasmidial demonstrou que os isolados compartilhavam

plasmídeos de mesmo tamanho. A caracterização dos genes que compõem os operons phoPQ e pmrAB, bem como

seu gene regulador negativo mgrB, identificou, em ambos isolados, uma transição 449A>G, que resultou na troca

Asp150Gly, no domínio sensor de PhoQ. Além disso, foi identificada uma sequência de inserção, do tipo IS5,

interrompendo o gene mgrB, inativando-o. Estes resultados evidenciam o papel de eventos genéticos no

surgimento de um importante fenótipo de resistência em isolados de K. pneumoniae e alertam para a possibilidade

da disseminação policlonal deste mecanismo, já que não há relatos envolvendo isolados ST423 resistentes a

polimixina.

APOIO FACEPE e CNPq

259


ANÁLISE DA DIVERSIDADE BACTERIANA DO INTESTINO DE TILÁPIAS DO NILO

(OREOCHROMIS NILOTICUS) INFECTADAS COM AEROMONAS HYDROPHILA E SUBMETIDAS À

DIETAS CONTENDO PRODUTOS NATURAIS COMO ALIMENTOS FUNCIONAIS

Riani Ananda Nunes Soares1; Antônio Wilton Cavalcante Fernandes

1; Samira Texeira Leal Oliveira

1; Mateus

Matiuzzi da Costa1; Gisele Veneroni Gouveia

1.


(1)Universidade Federal do Vale do São Francisco, Petrolina,PE

RESUMO As drogas antimicrobianas utilizadas para o controle de doenças nos peixes têm tido sucesso limitado, pois

aumentam a pressão de seleção sobre os microrganismos levando à resistência bacteriana. Assim, outras

estratégias são necessárias para reduzir os impactos econômicos advindos do aparecimento das infecções

bacterianas. O acréscimo de produtos naturais à ração dos animais tem se mostrado promissor, podendo

influenciar a composição de microrganismos do intestino, influenciando na absorção de nutrientes e afetando o

crescimento. O presente trabalho objetivou investigar o efeito da adição à ração do óleo essencial de

orégano(OEO) e do extrato etanólico de própolis (EEP) sobre a diversidade bacteriana do intestino de tilápias do

Nilo (Oreochromis niloticus) desafiadas com Aeromonas hydrophila. Para isso, foi realizado um experimento in

vivo onde todos os animais foram matidos sob as mesmas condições ambientais e inoculados com A. hydrophila.

Os tratamentos constaram de: grupo que recebeu a ração controle, grupo que recebeu ração contendo 2,22 g de

EEP kg ração-1

e grupo que recebeu ração contendo 0,5% de OEO. Três peixes de cada tratamento foram

avaliados. O DNA das bactérias presentes no intestino dos peixes foi extraído e utilizado em Reações em Cadeia

da Polimerase (PCR) utilizando-se o TopTaq Master Mix kit (Qiagen®). Em seguida, foram avaliados pela técnica

DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) com gradiente de 40-75% em gel de acrilamida 8% para análise

de diversidade de bactérias. O grupo suplementado com EEP apresentou quatro bandas caracterizando a maior

diversidade bacteriana encontrada. O grupo suplementado com OEO apresentou um total de duas bandas, sendo

estas em comum com o grupo que recebeu EEP. O grupo que recebeu a ração controle apresentou uma banda

sendo ela em comum com os outros tratamentos, esse grupo representa a microbiota naturalmente encontrada em

tilápias de cativeiro, pois não recebeu nenhum tipo de suplemento. A maior diversidade encontrada no grupo que

recebeu EEP pode ser explicada pelo fato de que o EEP tem efeito antimicrobiano e ativa o sistema imune de

tilápias produzindo uma resposta contra a A. hydrophila contribuindo para um maior equilíbrio do microbioma

intestinal garantindo uma maior diversidade taxonômica e funcional. Porém, é necessário realizar o

sequenciamento dos microrganismos das microbiotas intestinais avaliadas para se identificar e classificar as

bactérias como sendo benéficas ou não para o peixe.

APOIO CNPq

260


ANÁLISE DE GENES CONSTITUTIVOS NA AVALIAÇÃO DA DIFERENÇA DE EXPRESSÃO DE

GENES ENVOLVIDOS COM A RESPOSTA IMUNE EM TILÁPIAS DO NILO VACINADAS CONTRA

A. HYDROPHILA E INOCULADAS COM ESTE PATÓGENO

Laiane Moreira Vianna Magalhães1; Esdras Medeiros Almeida

1; Izabela Pinheiro de Santana Lacerda

1; Mateus


1.


(1)Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Campus de Ciências Agrárias, Universidade Federal do

Vale do São Francisco (Univasf), Petrolina, PE.

RESUMO Um dos maiores entraves para a piscicultura é o processo doença instaurado pela bactéria oportunista Aeromonas,

que por ocorrer naturalmente no ambiente aquático tem seu controle dificultado, se tornando um fator limitante no

desenvolvimento da aquicultura. Uma das alternativas para o controle desse patógeno seria o desenvolvimento de

uma vacina. No entanto, ainda não se conhece como a infecção por Aeromonas em peixes ou a inoculação de

vacina nos mesmos afeta a expressão de genes relacionados com o sistema imune dos animais. Muitos testes são

realizados com a finalidade de analisar perfis de expressão gênica, porém PCR quantitativo em tempo real é

considerado como o mais preciso e viável. No entanto, esta técnica precisa de normalização para que haja uma

correta interpretação dos dados obtidos, a qual é realizada com a utilização de genes constitutivos; que são genes

que possuem expressão uniforme na maioria das células do organismo de estudo, bem como durante as várias

fases de desenvolvimento e sob diferentes condições ambientais. Portanto, a escolha correta do gene constitutivo

leva a uma maior confiabilidade dos resultados da reação. Sendo assim, o objetivo deste trabalho foi o de escolher

o melhor gene constitutivo, entre os genes 18S rRNA, GADPH e UBCE na avaliação da diferença de expressão de

genes envolvidos com a resposta imune em tilápias do Nilo vacinadas contra A. hydrophila e inoculadas com este

patógeno. Para tal, foram utilizados 144 alevinos de tilápias do Nilo, que em um trabalho realizado anteriormente

(de Santana Lacerda, I.P., et al, 2015) foram vacinados contra A. hydrophila e após 15 dias da imunização foi feito

o desafio com esse patógeno. Então, amostras de rim desses peixes foram coletadas no período de junho de 2014

nos tempos: 0 h, 12 h e 24 h após o desafio. Essas tiveram seu RNA total extraído, sendo utilizadas para síntese de

cDNA e na técnica de PCR em tempo real para análise da expressão dos genes. Com os valores de Ct, os genes

foram avaliados através do RefFinder, disponível em http://fulxie.0fees.us/?type=reference, o qual integra os

programas geNorm, Normfinder, BestKeeper, e o método Ct comparativo. Em todas as análises o gene 18s rRNA

se mostrou o mais estável dos genes testados, sendo ele o escolhido como constitutivo para a realização das

análises de expressão gênica em peixes vacinados contra Aeromonas hydrophila e inoculados com esse patógeno.

APOIO CAPES (Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior);CNPQ (Conselho Nacional de

Desenvolvimento Científico e Tecnológico)

261


ANÁLISE DO TRANSCRIPTOMA DA LINHAGEM MUTANTE EM SACCHAROMYCES CEREVISIAE

COM DEFICIÊNCIA DA MVK

Manuella Maria Silva Santos1; Sergio S Paiva

2; Will de Barros Pita

3; Jaqueline de Azêvedo Silva

1; Sergio

Crovella1; Marcos Antônio de Morais Junior

1.


(1)Universiddae Federal de Pernambuco- Departamento de Genética;

(2)Universiddae Federal de Pernambuco-

Departamento de Estatística; (3)

Universiddae Federal de Pernambuco- Departamento de Antibióticos

RESUMO A via da mevalonato quinase (MVK) é crucial na produção de esteróis e de metabólitos intermediários envolvidos

em processos como a respiração. O quadro de deficiência na mevalonato quinase (MKD) em humanos causado

pelos efeitos na mutação do gene MVK (12q24) leva a uma doença auto-inflamatória de consequências clinicas

graves. Na levedura S. cerevisiae a via do mevalonato é essencial para viabilidade celular e síntese de isoprenóide.

As similaridades tanto no funcionamento da via do mevalonato como no fenótipo de mutantes deficientes na

atividade MKV entre células humanos e células da levedura tornam este último organismo um interessante modelo

biológico para se estudar o fenótipo MKD. Em ensaios de crescimento celular aeróbio em meio sintético a

linhagem deficiente Damp-erg12, com atenuação de 90% na expressão do ERG12 (ortólogo do gene humano

MVK), apresentou expressiva diminuição da velocidade de crescimento e biomassa final quando glicerol foi usado

como fonte de carbono em comparação com a linhagem parental BY4743. Por outro lado, nenhuma diferença no

crescimento foi verificado em meio contendo glicose. Amostras da fase exponencial de crescimento foram

coletadas para extração de RNA, síntese de cRNA, marcação diferencial com os fluoróforos Cy3 e Cy5 nas

seguintes combinações: [BY4743 glicerol]x[BY4743 glicose]; [Damp-erg12 glicerol]x[Damp-erg12 glicose];

[Damp-erg12 glicerol]x[BY4743 glicerol]; Damp-erg12 glicose]x[BY4743 glicose]. As misturas de cRNA foram

usadas para análise de expressão gênica relativa pela técnica de microarranjo de DNA. Os resultados foram

tratados por meio de análise estatística muito restritiva e os genes categorizados por meio de agrupamentos de

ontologia gênica. Considerando todas as interpolações entre os tratamentos e combinações, o resultado final

mostra que a mutação Damp-erg12 que atenua em 90% a atividade MVK em S. cerevisiae está relacionada com

defeito na biogênese mitocondrial, com indução da resposta a dados oxidativos e indução da expressão dos genes

de biossíntese dos aminoácidos sulfurados, fonte de moléculas anti-oxidantes intracelulares. Isto aponta para o fato

de que o déficit da via MVK, e/ou dos produtos desta via (isoprenoides e esteróis), resulta na indução de estresse

oxidativo generalizado, o que pode explicar o fenótipo MKD de auto-inflamação em humanos.

APOIO Financiador: Facepe

262


ARDRA IN SILICO: MODELO PARA ANÁLISES DE RIQUEZA EM AMOSTRAS AMBIENTAIS DE

BACTÉRIAS ENDOFÍTICAS

Caio Suzart Argôlo1; Thaís Correia Magalhães

1; Hellen Ribeiro Martins dos Santos

1; Leandro Lopes Loguercio

1.


(1)PPG em Genética e Biologia Molecular, Universidade Estadual de Santa Cruz (UESC)

RESUMO A bioinformática proporciona relevantes recursos e modelos teóricos in silico que auxiliam no estudo de questões

biológicas. É importante estimar mais precisamente a diversidade endofítica real em amostras ambientais, pois

curvas de rarefação vem indicando, para maioria dos estudos, que a riqueza total da amostra não foi atingida. A

técnica ARDRA (Amplified Ribossomal DNA Restriction Analysis) para análise de riqueza microbiana é

reproduzível, acurada e de baixo custo, mas há limitações a serem superadas. O objetivo do trabalho foi estimar in

silico o nº de fragmentos de restrição possíveis de serem visualizados em gel, a partir de um nº conhecido de

sequências bacterianas numa amostra ambiental. A hipótese de pesquisa foi que o nº máximo desses fragmentos

para uma dada comunidade atingirá um platô, independente do aumento no nº de espécies na mesma. Para testar

essa hipótese, usou-se sequências de 16s rDNA de endófitos obtidas no GenBank em diferentes combinações

aleatórias para compor comunidades 'artificiais' com nº definido de espécies. Três conjuntos de sequências foram

acessados: 50 spp endofíticas em geral, 50 de arroz e 35 de feijão. Análises de restrição in silico (enzima Alu I)

foram realizadas com as respectivas regiões de ~630 pb amplificadas pelos primers 799F e 1429R, gerando nº

'teórico' de fragmentos para cada comunidade aleatória. Elaborou-se um script baseado em 4 parâmetros: (i) o

conjunto total de sequências, (ii) o nº de sequências (spp) para compor as diferentes comunidades aleatórias (5, 10,

15, sucessivamente até o total de spp disponíveis em cada conjunto), (iii) o nº de repetições (combinações)

aleatórias de cada comunidade (3 mil neste estudo), e (iv) o nº de nucleotídeos que separa um fragmento do outro

(5 nt). Realizou-se 10 avaliações nestas condições, para os 3 conjuntos de dados, plotando-se a média e erro

padrão das 10 avaliações para cada comunidade, com regressão logarítmica. Os 3 conjuntos de spp mostraram-se

semelhantes, e confirmaram a hipótese de pesquisa. O script deste estudo auxilia a prever o nº máximo de spp

bacterianas em amostras ambientais possíveis de serem identificados por ARDRA. Para validar este modelo,

identificou-se endofíticos cultiváveis obtidos de sementes de cacau por sequenciamento parcial do 16s, digerindo-

os com Alu I. Comparar-se-ão fragmentos de comunidades aleatórias destes endofíticos com os dados in silico,

buscando aprimorar a acurácia de ARDRA para amostras ambientais.

APOIO CAPES

263


AVALIAÇÃO DA ESSENCIALIDADE DE HOMÓLOGOS DA PROTEÍNA DE LIGAÇÃO A CAUDA

POLI-A (PABP) PARA A SOBREVIVÊNCIA DE LEISHMANIA INFANTUM

Kleison da Costa Merlo1; Tamara De' Carli da Costa Lima

2; Christian Robson de Souza Reis

1; Barbara

Papadopoulou3; Osvaldo Pompílio de Melo Neto

1.


(1)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/ FIOCRUZ, Recife-PE;

(2)Faculdade Associação Caruaruense de Ensino

Superior, Caruaru-PE; (3)

Centre de Recherche en Infectiologie/ Université LAVAL, Québec, Canadá

RESUMO Tripanossomatídeos são microorganismos causadores de doenças em humanos, animais e plantas. Eles apresentam

uma complexa regulação da expressão gênica controlada por eventos pós-transcricionais. A proteína de ligação à

cauda poli-A (PABP - Poly-A Binding Protein) é uma das principais proteínas de ligação à mRNAs nos eucariotos

e possui papel crítico na tradução e controle da estabilidade dos mRNAs. Além de interagirem com a cauda poli-

A, as PABPs interagem com outras sequências nos mRNAs e com fatores proteicos, demonstrando o papel central

das PABPs em numerosas etapas da expressão gênica. Em espécies de Leishmania são observados três homólogos:

PABP1, 2 e 3. Dados recentes demonstram que em Leishmania a PABP1 parece ter um papel mais geral na

tradução, executando predominantemente as funções atribuídas a PABP em outros organismos. Já as PABPs 2 e 3

interagem diretamente entre si e parecem estar associadas a mRNAs que são preferencialmente traduzidos durante

a fase S do ciclo celular. Este trabalho teve como objetivo avaliar a essencialidade dos homólogos das PABP 1, 2 e

3, bem como investigar a capacidade de mutantes da PABP1 em complementar a função da proteína nativa em L.

infantum. Foram realizadas construções dos genes das PABPs onde a região codificante foi substituída pelas

marcas de resistência a antibióticos higromicina (SKO - single knockout) e puromicina (DKO - double knockout).

Essas foram obtidas através de PCRs convencionais e por SOE (splicing overlaping extension). Para a construção

dos mutantes da PABP1 (LMW, YGF, duplo LMW/YGF, TGM e mutante de desfosforilação) foram realizadas

alterações em resíduos específicos através de mutagênese sítio dirigida. Todas as construções foram clonadas no

vetor de expressão de Leishmania pSP-BT1-YneoαIR (neomicina). Foram realizadas transfecções em células

selvagens para obtenção dos SKO e DKO dos três homólogos. A partir de clones de SKO da PABP1, fizemos a

complementação com os mutantes e então realizamos os DKOs. Através das transfecções realizadas em formas

promastigotas de L. infantum pudemos observar a essencialidade das PABP 1 e 2 e a não essencialidade da PABP3

para a sobrevivência celular. Todos os mutantes de PABP1 (exceto o duplo LMW/YGF) foram viáveis após DKO,

porém ocorreu duplicação gênica para os mutantes LMW e YGF. Podemos concluir que tanto a PABP1 quanto a 2

são essenciais para a forma promastigota de L. infantum e que os resíduos LMW e YGF são críticos para a função

da PABP1.

APOIO CNPq

264


AVALIAÇÃO DE GENES CONSTITUTIVOS EM AEROMONAS HYDROPHILA SUBMETIDOS A

DIFERENTES CONDIÇÕES AMBIENTAIS

Ruan Emmanuell Franco de Abreu1; Thaís Correia Magalhães

1; Adriana Mércia Guaratini Ibelli

2; João José de

Simoni Gouveia1; Mateus Matiuzzi da Costa

1; Gisele Veneroni Gouveia

1.


(1)Laboratório de Microbiologia e Imunologia Animal, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Campus

Ciências Agrárias, Petrolina, PE; (2)

Embrapa Suínos e Aves. Rodovia BR 153, km 110,Vila Tamanduá, Concórdia,

SC

RESUMO Genes de referência são constitutivamente expressos pelas células e sofrem poucas alterações de expressão em

função de alterações do meio ao qual o organismos é submetido, geralmente codificam fatores/estruturas

indispensáveis para a manutenção da célula. Na RT-qPCR, com a abordagem relativa, o uso destes genes se faz

necessário para comparação da expressão gênica com os genes alvo. O objetivo do trabalho foi avaliar qual gene

constitutivo possui menor variação de expressão em Aeromonas hydrophila submetidas a diferentes condições

ambientais (pH 7,0 e 10,0; temperaturas 28ºC e 31ºC e 0,1 e 0,9 mg/L de amônia). Para se obter os diferentes

pontos de pH foram adicionados ao meio de cultura Trypticase Soy Agar solução ácida (HCl 1M) ou básica

(NaOH 1M), para obtenção dos diferentes pontos de amônia foi adicionado ao mesmo meio solução de amônia

(NH42SO4), e para obtenção das diferentes condições de temperatura foram utilizadas estufas. Seis isolados de A.

hydrophila foram submetidos às condições citadas, crescidos em estufa por 24 horas, seguindo-se da extração do

RNA, com conseguinte transcrição do mesmo para cDNA e análise da expressão gênica por PCR em tempo real.

A RT-PCR em tempo real (genes rRNA 16S, RopD e GyrA) foi realizada com a utilização do KAPA SYBR® Fast

qPCR kit Master Mix (2x) Universal. As reações para os genes rRNA 16S e RopD constaram de 0,4 µM de

iniciadores específicos para cada, 7,5 µl de syber green master mix, 0,1 µl de rox low e 400 ng de cDNA, em um

volume final de 15 µl. Para o gene GyrA o mix da reação constou de 0,8 µM de iniciadores específicos, 7,5 µl de

syber green master mix, 0,1 µl de rox low e 400 ng de cDNA, em um volume final de reação de 15 µl. Todas as

reações constaram de uma desnaturação inicial a 95ºC por 2m, seguida de 40 ciclos de desnaturação a 95ºC por

15s, anelamento a 60ºC por 30s e extensão a 72ºC por 30s. A curva de melting foi obtida pelo ciclo de 65ºC por

20s e 95ºC por 20s. Com os valores de Ct, os genes foram avaliados através do RefFinder, que integra os

programas geNorm, Normfinder, BestKeeper, e o método Ct comparativo. Desta forma foi possível observar que

quando submetidos a diferentes condições ambientais, o gene que apresentou menor variação na expressão gênica,

mais estável, foi o gene 16S rRNA, sendo assim recomendado em estudos com esta bactéria, submetida a

diferentes condições ambientais de pH, temperatura e concentração de amônia.

265


AVALIAÇÃO E OTIMIZAÇÃO DA RT-PCR EM TEMPO REAL PARA A DETECÇÃO DO VÍRUS

CHIKUNGUNYA.

Tâmisa Morais Rêgo1; Klarissa Miranda Guarines

1; Otávio Valério de Carvalho

1; Bruna Varginha Ramos

Caiado1; Rafael Dhalia

1; Ernesto Torres de Azevedo Marques Jr

1.


(1)Departamento de Virologia (Lavite). Fundação Osvaldo Cruz - FIOCRUZ, PE.

RESUMO O vírus Chikungunya (CHIKV) atualmente é um dos arbovírus de grande relevância médica, transmitido aos seres

humanos pela picada do mosquito do gênero Aedes. O Brasil, por já ser considerado alvo de surtos epidêmicos de

Febre Chikungunya, deve se engajar e apresentar medidas de controle e prevenção da doença para um manejo

clínico apropriado. Para a detecção da infecção aguda a estratégia mais eficiente é a detecção do vírus por

transcrição reversa seguida de reação em cadeia da polimerase em tempo real (RT-qPCR), justificando o nosso

objetivo de otimizar (às condições locais) e implementar em nosso laboratório o ensaio desenvolvido pelo Centro

de Controle e Prevenção de doenças (CDC), utilizando amostras de referência oriundas do LACEN-PE. Uma das

aplicações da PCR em tempo real no diagnóstico e pesquisa clínica de vírus, está na construção de uma curva

padrão utilizando concentrações conhecidas de RNA viral, permitindo a quantificação das amostras e

estabelecimento do limite de detecção do ensaio. Até o presente momento, o sistema de RT-qPCR foi otimizado e

a curva padrão foi desenvolvida. Para isso, fragmentos de 126 pares de base (pb) provenientes de um gene

sintético com tamanho de 1416pb foram clonados no vetor pGEM-T Easy. Em seguida, a transcrição in vitro dos

clones foi realizada para obtenção dos transcritos do CHIKV que foram então aplicados em uma curva padrão,

ensaio duplicata, em diluição seriada de fator 10, variando em 108

a 101

ssRNA/μl (móleculas de RNA). Clones

de 126pb foram obtidos e transcritos com fragmentos de 220nt foram produzidos. A curva padrão, que teve por

objetivo avaliar o limite de detecção e a sensibilidade da RT-qPCR, demonstrou uma eficiência de 98%,

amplificando até o último ponto da curva (101), o que representa em número de cópias de moléculas o total de 195

ssRNA/μl, e um CT de 33. A realização desta metodologia dentro do Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães é de

extrema utilidade pública, uma vez que poderá ser acionado para a triagem de indivíduos infectados pelo vírus

Chikungunya, dando suporte ao Ministério da Saúde.

APOIO FACEPE

266


BIOCHEMICAL ANALYSIS OF HOMOLOGOUS RECOMBINATION MACHINERY OF

CHROMOBACTERIUM VIOLACEUM

Daniel Chaves de Lima1; Mauro Modesti

2; Silvia Regina Batistuzzo de Medeiros

1.


(1)Universidade Federal do Rio Grande do Norte;

(2)Centre de Recherche en Cancérologie de Marseille

RESUMO Chromobacterium violaceum is a ß-proteobacteria commonly found around tropical and subtropical regions

throughout the globe. It produces many metabolites with biotechnological properties such as antitumoral peptides,

antibiotics and polymers that have potential to replace the oil-based ones. Although it has been extensively studied

over the past 40 years, there are many aspects of C. violaceum that remains unclear until today. We have

conducted a biochemical study on the homologous recombination (HR) machinery of C. violaceum, mainly in

RecA and its paralog, RadA/Sms. We performed in vitro assays from initial and late steps of HR such as D-loop

formation and branch migration, respectively, with their corresponding molecular actors and how RadA/Sms

influenced each one. We observed cvRadA/Sms influences negatively D-loop formation promoted by cvRecA and

through pull-down assay we have observed an interaction between these two proteins. We also observed the DNA-

binding preference of cvRadA/Sms and cvRecA and observed that this protein binds preferentially to dsDNA

instead ssDNA, unlike cvRecA. No involvement of cvRadA/Sms on branch migration reactions was

detected. These are the first biochemical analysis on HR in C. violaceum and improves our understanding in how

this important pathway works.

APOIO CAPES/COFECUB; CNPq

267


CARACTERIZAÇÃO DA MICROBIOTA ASSOCIADA AO ZOANTÍDEO PALYTHOA CARIBAEORUM

Gustavo Vasconcelos Bastos Paulino1; Leonardo Broetto

2; Ciro Ramon Félix dos Santos Silva

3; Melissa Fontes

Landell4.


(1)Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e Conservação nos Trópicos, Universidade Federal de

Alagoas, Campus A. C. Simões.; (2)

Universidade Federal de Alagoas, Campus Arapiraca; (3)

Universidade Federal

de Alagoas, Campus A. C. Simõ; (4)

1Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e Conservação nos

Trópicos, Universidade Federal de Alagoas, Campus A. C. Simões.

RESUMO Grande parte da rica diversidade genética e metabólica marinha ainda não explorada encontra-se nos recifes de

coral. Além da macrofauna, suportam também diversas bactérias, que em conjunto com outros micro-organismos,

formam uma complexa comunidade hoje denominada coral holobionte. Eles desempenham um importante papel

na saúde do hospedeiro, provendo uma fonte de alimento e ocupando nichos específicos. A espécie Palythoa

caribaeorum é um zoantídeo comum nos recifes do Caribe e do Brasil, apontado como espécie-chave nos recifes

do nordeste, e que até então não possui sua comunidade bacteriana caracterizada. Nosso trabalho visou a descrição

do inventário taxonômico das bactérias associadas ao coral P. caribaeorum através do pirosequenciamento parcial

do gene rRNA 16S. As coletas foram realizadas em março de 2015, em dois locais: recife de coral da Ponta Verde

e recife de arenito da Sereia, ambos em Maceió - AL. Foram cortados fragmentos com cerca de 10 cm2 de três

colônias saudáveis diferentes de P. caribaeorum, então colocados em sacos plásticos estéreis, armazenados em

gelo durante o transporte para o laboratório e congelados a -20ºC até a extração de DNA ser realizada utilizando

protocolo de extração orgânica com fenol-clorofórmio. Após amplificação por PCR, foi realizado o

pirosequenciamento. As sequências obtidas foram analisadas de acordo com o protocolo proposto pelo Projeto

Microbioma Brasileiro. O pirosequenciamento das amostras resultou num total de 26,166 sequências, reduzidas

para 8,988 após o controle de qualidade, gerando um total de 459 OTU's com identidade de 97%. Análises de

diversidade demonstraram que no recife da Sereia a comunidade apresentou uma maior diversidade de OTU's e

uma maior similaridade entre as amostras do que na Ponta Verde, onde as comunidades demonstraram estar

passando por alterações na composição. Em geral, Proteobacteria (57,4%) foi o filo mais abundante, sendo

apontado pela literatura como um dos principais grupos associados à corais, seguido por Actinobacteria (12,1%),

filo encontrado em associação com diversas fontes biológicas, tais como moluscos e esponjas. Concluímos que a

espécie P. caribaeorum possui uma rica e diversa comunidade microbiana associada, havendo variação entre os

dois pontos coletados, possivelmente causada por fatores antrópicos.

APOIO Capes e CNPQ

268


CARACTERIZAÇÃO DAS INTERAÇÕES E DOS MRNAS ASSOCIADOS COM DIFERENTES

PROTEÍNAS DE LIGAÇÃO A RNA EM LEISHMANIA

Ludmila Arruda de Assis1; Larissa Mélo do Nascimento

1; João Ramos da Cruz Silva

2; Fabiola Holetz

3; Tamara

de Carli da Costa Lima2; Osvaldo Pompílio de Melo Neto

2.



(2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães;

(3)Instituto Carlos Chagas

RESUMO A regulação da expressão gênica em tripanossomatídeos ocorre principalmente a nível pós-transcricional e envolve

tanto o controle da estabilidade dos mRNAs quanto a sua tradução. Em ambos os eventos uma participante crítica

é a Proteína de Ligação a Poli-A, ou PABP, que em Leishmania é representada por três distintos homólogos. A

PABP1 parece ser o principal candidato para desempenhar as funções conhecidas da PABP durante a tradução em

outros organismos. O papel funcional da PABP2 e 3 continua indefinido, embora é conhecido que interajam entre

si e se ligam a um conjunto distintos de mRNAs dos que se ligam a PABP1. Como as PABPs, uma grande

quantidade de outras proteínas de ligação ao RNA, as RBPs, com típicos domínios de ligação a RNA, estão

presentes em tripanossomatídeos. Este estudo teve como objetivo identificar os mRNAs alvos de duas RBPs que

estão diferencialmente associadas com PABPs de Leishmania, bem como caracterizar as interações entre estas e os

homólogos de PABP. Para isso, as três PABPs foram submetida a imunoprecipitação (IP) e análises de

espectrometria de massa e RBPs diferencialmente associadas a PABP1 e PABP2 e 3 foram identificadas. A

RBP23 foi encontrada associada com PABP1 e a DRBD2 foi encontrada com PABP2. Para identificar os mRNAs

ligantes a estas duas RBPs, primeiramente foram expressas proteínas fusionadas a HA em células de L. infantum.

Extratos citoplasmáticos destas células foram usados em nova IP e os RNAs ligados a RBP23-HA e DRBD2-HA

foram extraídos e usados para construir uma biblioteca de cDNA e sequenciamento de nova geração. Um grande

número de reads de mRNAs de proteínas ribossomais foi encontrado co-precipitando com a RBP23, o que esta de

acordo com experimentos prévios que mostram estes mesmos mRNAs encontrados preferencialmente associados

com a possível parceira PABP1. Os reads derivados dos experimentos com a DRBD2, entretanto, foram

enriquecidos com sequências codificadoras de histonas, novamente consistente com dados prévios onde mRNAs

de histonas foram encontrados em IP da possível parceira PABP2. Foram também realizados ensaios de interação

proteína-proteína, entre as PABPs fusionadas a GST e estas duas RBPs marcadas radioativamente. Foi visto que

neste ensaio a RBP23 interage diretamente com a PABP1, e a DRBD2 é capaz de interagir diretamente com as três

PABPs. Com estes experimentos espera-se avançar no conhecimento de diferentes RBPs de Leishmania e do seu

papel na tradução de conjuntos distintos de mRNAs.

APOIO CAPES

269


CARACTERIZAÇÃO DO SISTEMA CRISPR EM ISOLADOS CLÍNICOS DE PSEUDOMONAS

AERUGINOSA

Ana Carolina de Oliveira Luz1; Julia Mariana Assis da Silva

2; Maria Paloma Silva de Barros

3; Tereza Cristina

Leal Balbino3.


(1)Programa de Pós-Graduação em Genética - PPGG/UFPE;

(2)Universidade Federal de Pernambuco - UFPE;

(3)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães - FIOCRUZ/PE

RESUMO O locus CRISPR e as genes cas são os principais componentes genéticos do sistema CRISPR/Cas, maquinaria

responsável pelo sistema imune adaptativo encontrado em procariotos e arqueas contra elementos genéticos

móveis invasores. O locus CRISPR é constituído por repetições diretas (DR) intercaladas por espaçadores, sendo

estes provenientes de fagos e plasmídeos com os quais a célula já teve contato previamente. Estes espaçadores,

quando transcritos em RNA CRISPR, funcionarão como guia para a maquinaria de clivagem de DNA (proteínas

Cas). O objetivo do presente trabalho foi caracterizar o sistema CRISPR em isolados clínicos de Pseudomonas

aeruginosa, patógeno humano oportunista, relevante pela resistência que possui a diversos antimicrobianos. Foram

estudados 130 isolados clínicos de P. aeruginosa, resistentes a diferentes antimicrobianos, oriundos de distintos

sítios de infecção e setores de dois hospitais de Recife-PE. Foram identificados por PCR três loci CRISPR

(CRISPR 1, 2 e 3) nos isolados. Dois loci CRISPR de dois isolados foram analisados através de sequenciamento

para identificação do número e tamanho de suas DRs e espaçadores. Foram encontrados 35 (26,9%) isolados

positivos para um ou mais loci CRISPR, corroborando com a literatura de que apenas 20% dos isolados de P.

aeruginosa possuem estes loci. Vinte isolados foram positivos para CRISPR 1, 13 para CRISPR 2, e 27 para

CRISPR 3. Ao total, um isolado comporta os loci 1 e 2; três isolados os loci 1 e 3; e onze, os três loci. Foram

sequenciados os CRISPR 1 dos isolados de P. aeruginosa nomeados 22 e 42, ambos oriundos do mesmo hospital,

do mesmo sítio de infecção (secreção traqueobrônquica) e do mesmo setor hospitalar (UTI). A análise das

sequências permitiu observar: DRs de 28 pares de bases (pb), idênticas para as duas amostras; uma DR atípica, a

primeira, com a mesma substituição de bases (C por T) na mesma posição para ambos os isolados; espaçadores

com 32 pb (10 no isolado 22 e 14 no isolado 42). Tais espaçadores não são iguais entre as amostras analisadas, e

alguns apresentam similaridade com sequências de fagos do gênero Pseudomonas depositados em bancos de

dados. Os resultados demonstram a presença dos loci CRISPR em isolados brasileiros de P. aeruginosa, primeira

descoberta para esta espécie no país. Perspectivas para o trabalho são: sequenciamento de mais loci e análises mais

profundas; avaliação da expressão e do funcionamento do sistema CRISPR/Cas e a relação clonal dos isolados do

estudo.

270


CARACTERIZAÇÃO DOS GENES SODA, SODC E DA ATIVIDADE DA SUPERÓXIDO DISMUTASE

EM ISOLADOS DE CORYNEBACTERIUM PSEUDOTUBERCULOSIS OBTIDOS DE CAPRINOS E

OVINOS NO SEMIÁRIDO DE PERNAMBUCO.

Yasmin da Silva Gonçalves1; Adijailson de Oliveira Neri

1; Evandro Santos Amanso

1; Matheus Lima Meira

1; Deize

Raquel Reis Cruz1; Gisele Veneroni Gouveia

1; Wagner Pereira Felix

1; Mateus Matiuzzi da Costa

1.


(1)UNIVASF

RESUMO Corynebacterium pseudotuberculosis é um bacilo gram-positivo, intracelular facultativo, imóvel e anaeróbico

facultativo, pertencente à família Actinomycetae. É o agente etiológico da linfadenite caseosa, uma das principais

doenças infecciosas de caprinos e ovinos. A compreensão da patogenicidade bacteriana é fundamental para

estabelecer medidas de controle e profilaxia. Esta bactéria possui como um dos principais fatores de virulência a

habilidade de sobreviver ao estresse oxidativo, contribuindo com a permanência do patógeno dentro de

macrófagos. Em outros organismos esta atividade é associada à presença da enzima superóxido dismutase (SOD;

EC 1.15.1.1.). A SOD é classificada em quatro grupos distintos de acordo com o seu cofator: Fe++

(sodB),

Mn++

(sodA), Ni++

(sodD), Cu++

e Zn++

(sodC). O trabalho objetivou detectar a presença de SOD, identificar e

purificar os tipos de superóxido dismutase existentes em cepas de C. pseudotuberculosis oriundas de pequenos

ruminantes, e caracterizar os genes sodA e sodC codificantes das isoformas MnSOD e CuZnSOD. Utilizou-se 30

isolados de C. pseudotuberculosis obtidos em propriedades de diferentes municípios pernambucanos. Realizou-se

extração e quantificação de proteínas, analisando-as por SDS-PAGE para verificar seu perfil eletroforético e

acompanhar as etapas de purificação; PAGE com NBT e riboflavina para determinar a presença da SOD nativa; e

teste de inibição com KCN e H2O2 para identificação do tipo de SOD presente. Três amostras foram escolhidas

para purificação da proteína através das seguintes etapas: precipitação com sulfato de amônio com saturação 60%,

cromatografia de troca iônica (DEAE Sephadex A-50) e cromatografia de afinidade saturada com Cu++

e Mn++

. A

verificação dos genes nos isolados foi por Reação em Cadeia de Polimerase (PCR). Treze amostras foram

positivas para a presença de duas isoformas da superóxido dismutase. Tais amostras foram cromatografadas em

matriz de troca iônica e o pico não retido foi coletado, dialisado e aplicado na coluna cromatográfica de

afinidade HiTrap Chelating Sepharose HP, na qual observou-se o pico devidamente retido, indicando assim tratar-

se de CuZnSOD e MnSOD. Na amplificação dos genes, todos os 30 isolados testados apresentaram resultados

positivos para sodA e sodC. Assim, foram identificados nos isolados clínicos de C. pseudotuberculosis os

genes sodA e sodC, e as isoformas CuZnSOD e MnSOD foram isoladas e caracterizadas.

APOIO CNPq e FACEPE

271


CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DA DINÂMICA DE GRUPOS BACTERIANOS DURANTE A

TRANSIÇÃO ENTRE ÁREA NATIVA E CULTIVADA DE UM ARGISSOLO DA CAATINGA DO

SERTÃO PERNAMBUCANO

Alícia Lie de Melo1; Gisele Veneroni Gouveia

1; João José de Simoni Gouveia

1; Natoniel Franklin de Melo

2;

Mateus Matiuzzi da Costa1; Adriana Mayumi Yano de Melo

1.



(2)Embrapa Semiárido

RESUMO Os micro-organismos são peças-chave na manutenção dos ecossistemas, participando de processos de

decomposição da matéria orgânica, ciclagem de nutrientes e interações com outros organismos. O solo é a

principal fonte de micro-organismos e abriga a maior diversidade do planeta; em decorrência das ações

antropogênicas, particularmente devido ao uso intensivo para atividades agrícolas, este ambiente sofre constante

mudança. Estudos demonstram relação inversa entre intensidade de cultivo e biodiversidade, com mudanças na

estrutura da comunidade microbiana pela conversão de áreas nativas em cultivadas. Porém, mesmo levando ao

desaparecimento de alguns grupos, a atividade agrícola pode não causar perdas na diversidade, pois outros grupos

podem aparecer em razão dessas práticas - essas diferenças na comunidade podem, inclusive, não corresponder a

perdas de funcionalidade. Neste sentido, abordagens moleculares podem ser importantes ferramentas para

compreender a dinâmica dos micro-organismos do solo frente às alterações provocadas pelo homem, considerando

que apenas 1% dos micro-organismos pode ser cultivado in vitro. Assim, buscou-se conhecer a estrutura e as

mudanças ocorridas na comunidade microbiana edáfica de uma área de argissolo do Vale do São Francisco que

passou de área nativa à cultivada. As coletas ocorreram em quatro períodos: 1) mata nativa (MN), 2) 192 dias após

o desmatamento da área nativa (192 DAD), 3) preparo do solo (PS, solo arado e gradeado) e 4) sob cultivo

(maracujá em consórcio com feijão caupi), com quatro repetições, em que cada unidade experimental era

composta por seis subamostras, totalizando 24 amostras por período. Após a extração de DNA das amostras de

solo, estas foram sequenciadas utilizando a tecnologia MiSeq (Illumina®). As sequências foram analisadas

utilizando o software mothur, sendo classificadas em phylotypes. As proporções dos grupos dominantes de

bactérias mudaram ao longo do tempo, em especial os grupos Acidobacteria, Actinobacteria e Proteobacteria. As

Acidobacteria, inicialmente, representavam 52,25% da comunidade (MN), passando para 43,49% (192 DAD),

4,65% (PS) e 22,9% ao longo do tempo. Estes resultados indicam que as práticas de aragem e gradagem, adubação

e a introdução das culturas aumentaram a proporção das Actinobacteria e Proteobacteria, sendo tal fato atribuído

ao maior teor de nitrogênio decorrente destas práticas.

APOIO Facepe e CNPq

272


CARACTERIZAÇÃO MOLECULAR DO PESTALOTIOPSIS GUEPINII E VERIFICAÇÃO DA

PRESENÇA DA ROTA BIOSSINTÉTICA DE PACLITAXEL (TAXOL), ATRAVÉS DE MARCADORES

MOLECULARES

Hortência Farias de Andrade1; Elys Karine Carvalho da Silva

1; Cícero José Luíz dos Ramos Almeida

1; Márcia

Vanusa da Silva1.


(1)UFPE

RESUMO Atualmente as plantas possuem mecanismos promissores, evolutivamente, e que propiciam uma excelente

integração no que diz respeito planta-microrganismo. Esses mecanismos podem ser de natureza química e/ou

biológica e que podem conferir a planta uma função paralela as suas funções naturais. Alguns estudos demonstram

que os microrganismos possuem importantes funções para os seus hospedeiros, pois podem sobreviver em

simbiose e mutuamente. Em 1993 foi registrado pela primeira vez, um fungo produtor de taxol, um diterpenóide e

tem efeito contra o câncer de mama e o útero. O objetivo desse trabalho foi caracterizar, molecularmente, o fungo

Pestalotiopsis guepinii e realizar um rastreamento primário, por meio de genes chaves da via biossintética, a

possível produção do paclitaxel. Para a execução foi utilizado o fungo Pestalotiopsis guepinii depositado na

micoteca - URM na UFPE em 2013, na água. A extração do DNA foi realizada por meio da técnica CTAB, com

algumas modificações. O DNA foi amplificado por PCR com os primers universais ITS 1 e ITS 4. Logo após foi

feita um rastreamento primário com três genes chaves na rota biossintética do paclitaxel por PCR. Os primers

utilizados foram: ts-F, ts-R, dbat-F, dbat-R, bapt-F, bapt-R. A caracterização molecular, sequenciamento, permitiu

a comparação e confirmação do gênero e espécie, através do National Center for Biotechnology Information

(NCBI), usando o BLAST. A confirmação da presença dos genes específicos da biossíntese do paclitaxel através

da técnica de PCR sugere a possível produção deste elemento antitumoral pelo fungo Pestalotiopsis guepinii.

Dessa forma, verifica-se que o fungo pestalotiopsis guepinii possui a rota da biossíntese do paclitaxel e por isso

pode ser um excelente produtor desse antitumoral. Faz-se necessário analises posteriores como: extrato em fase

orgânica para qualificação da produção do paclitaxel, por meio do HPLC.

APOIO CAPES

273


CONSTRUÇÃO DE QUIMERAS DO GENE L1 FUSIONADAS AO GENE E5 DE BPV-1 POR PCR DE

FUSÃO PARA GERAÇÃO DE ANTÍGENOS PROFILÁTICO-TERAPÊUTICOS CONTRA A

PAPILOMATOSE BOVINA.

Thais Moreira Alexandre da Silva1; Filipe Colaço Mariz

1; Antonio Carlos de Freitas

1.


(1)Edna Moreira da Silva e Valdemar Alexandre da Silva Filho

RESUMO O Brasil possui o maior rebanho comercial de bovinos do mundo, possuindo grande destaque na exportação de

carne bovina, na produção de leite e couro. O papilomavírus bovino (BPV) é um vírus altamente disseminado no

mundo em rebanhos bovinos, sendo reconhecido como agente etiológico da papilomatose bovina. A papilomatose

bovina acomete o gado e resulta no aparecimento de lesões benignas na pele e que, se desenvolvidas na bexiga ou

trato gastrintestinal superior, pode levar a carcinomas quando associadas a co-fatores como a ingestão de

samambaia. Contudo, a ausência de dados precisos sobre a doença dificulta o desenvolvimento de medidas de

controle para a papilomatose e potencializa a perda econômica para os pecuaristas. Atualmente não existe vacina

ou tratamento efetivo para o combate a doença. O objetivo do trabalho foi a construção de quimeras do gene L1

fusionadas a epítopos do gene E5 com potencial para geração de antígenos profilático-terapêuticos contra a

papilomatose bovina. A construção das quimeras ocorreu mediante a técnica de PCR de fusão a partir da inserção

de epítopos do gene E5 na região do loop D-E do gene L1 selvagem de BPV-1 não códon-otimizado, clonado

previamente no vetor de expressão pPGKΔ3. A amplificação do fragmento foi realizada utilizando primers

específicos contendo em sua sequência os epítopos de E5 a serem inseridos na região do loop D-E. A análise dos

fragmentos foi feita por eletroforese em gel de agarose 1% para confirmação da construção dos insertos com

tamanho de 1650 pb. As construções foram clonadas no vetor de passagem pGEM-T Easy e a confirmação da

clonagem foi feita por digestão enzimática com as enzimas BamHI e KpnI. A análise do sequenciamento de DNA

foi realizada para confirmação da construção dos insertos por PCR. Os resultados obtidos confirmaram que houve

a correta construção das quimeras de L1/E5, sendo observada na região do loop D-E do gene L1 a presença do

epítopos do gene E5 trabalhado. A obtenção das quimeras irá permitir o desenvolvimento de uma estratégia

vacinal aplicada ao controle/tratamento das doenças relacionadas à infecção pelo BPV.

APOIO Capes

274


DESENVOLVIMENTO DE VACINA DE DNA BASEADA NO GENE L2 DO PAPILOMAVÍRUS

BOVINO

Ana Paula Ferreira Campos1; Marcelo Nazário Cordeiro

1; Anna Jéssica Duarte Silva

1; Rita de Cássia Pereira

Lima1; Gabriel Henrique de Arruda Cardozo

1; Larissa Silva de Macêdo

1; André Luiz Santos de Jesus

1; Antonio

Carlos de Freitas1.



RESUMO Os papilomavírus (PVs) incluem vírus de DNA circular em dupla fita, pequenos, não envelopados, de capsídeo

icosaédrico e, geralmente, envolvidos em lesões benignas de epitélio e mucosas. Apresentam grande disseminação

entre diversos grupos animais, que, uma vez infectados, podem permanecer assintomáticos ou apresentar lesões

como verrugas e papilomas de pele. A papilomatose bovina é uma doença que pode vir a comprometer

severamente a lucratividade do rebanho, pois as suas lesões decorrentes da infecção pelo Papilomavírus Bovino

(BPV) resultam em danos ao couro, susceptibilidade a infecções secundárias e perda de peso com redução da

produção de carne e leite. A proteína L2 é produzida na fase tardia do ciclo de infecção viral, sendo uma das

formadoras da estrutura do capsídeo. A nossa abordagem vacinal baseia-se em imunização genética contra um dos

principais epítopos contidos na proteína L2 (11-200), responsável por resposta cruzada de anticorpos neutralizantes

entre diferentes tipos de PVs. Além disso, a porção inteira do gene L2 será utilizada visando comparação entre as

expressões gênicas. O presente trabalho consiste na construção de candidatos vacinais por meio de vacina de

DNA propondo uma abordagem preventiva contra BPV, além de poder fundamentar modelos experimentais

válidos para imunização contra o papilomavírus humano (HPV). Os genes L2 e L2(11-200), do BPV2,

respectivamente, foram amplificados por PCR e clonados, individualmente, no vetor plasmidial pGEM - T easy

(Promega™) para propagação em Escherichia coli (linhagem DH5α). Em seguida, foram subclonados nos vetores

de expressão pVAX (Invitrogen™) e pCI-neo (Promega™) através dos sítios de restrição EcoRI/Notl. Ambas as

sequências construídas foram avaliadas por digestão enzimática, PCR e seqüenciamento. Ademais, será realizada a

avaliação da expressão das construçoes em cultura de células da linhagem de HEK 293 usando SDS PAGE e

Western-Blot e posteriormente será aplicado o ensaio em modelos pré-clínicos.

APOIO CAPES, FACEPE e CNpQ

275


DIVERSIDADE E TAXONOMIA MOLECULAR DE LEVEDURAS EPIFÍTICAS EM FRAGMENTOS

DE MATA ATLÂNTICA NO ESTADO DE ALAGOAS/BRASIL

Felix, Ciro R1; Casanova, Hector M

1; Paulino, Gustavo

2; Broetto, Leonardo

1; Landell, Melissa Fontes

1.


(1)Universidade Federal de Alagoas - UFAL; Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e

Conservação dos Trópicos - PPG-DIBICT; (2)

Universidade Federal de Alagoas - UFAL; 2Programa de Pós-

graduação em Diversidade Biológica e Conservação dos Trópicos - PPG-DIBICT

RESUMO A diversidade genética é um fator fundamental para manutenção da biodiversidade. Leveduras são organismos

eucariotos, unicelulares, ubíquos e pertencentes ao reino Fungi. O conhecimento sobre a diversidade genética de

leveduras possui potencial para aplicação em diversas áreas: e.g. biotecnologia, taxonomia e evolução. Diante

disto, este trabalho objetivou avaliar a diversidade e realizar a taxonomia molecular de leveduras associadas ao

filoplano de bromélias da Mata Atlântica em Alagoas/Brasil através sequencias da região D1/D2 do gene 26S do

rDNA. As amostras de bromélias foram coletadas em quatro fragmentos da Mata Atlântica: União dos Palmares

(UP), Quebrangulo (Q), Murici (M), Maceió (Ma). Em seguida, foram processadas e os isolados obtidos foram

caracterizados e estocados. O DNA genômico de cada isolado foi extraído e a região D1/D2 foi amplificada por

PCR utilizando os oligonocleotídeos iniciadores NL-1 e NL-4. As análises das sequências e estatísticas foram

realizadas utilizando os softwares Mega 6 e R, respectivamente. Foram obtidos 123 isolados, e identificados até o

momento 117. A riqueza (S) e diversidade (H) foram calculadas pelo índice de Shannon-Weaver, obtendo-se os

seguintes valores para os pontos amostrados:(UP): H=3,072 e S=24; (Q): H=2,726 e S= 16; (M): H=2,59 e S=16;

(Ma): H= 2,97 e S=23. Destaca-se a identificação de 78 polimorfos, que foram analisados relacionando-os com as

diferenças nos tamanhos dos fragmentos (A) dos locais amostrado e com a distância destes da linha do Equador,

procurando um padrão de distribuição latitudinal. Levou-se em consideração as espécies com mais genótipos

distintos: Aureobasidium thailandese (7 isolados, 3 genótipos), Candida bambusicola (4 isolados, 3 genótipos) e

Papiliotrema leoncinii (6 isolados, 3 genótipos). O local com mais genótipos distintos por amostra foi (Q): 3,33 e

A= 30,40 Km², seguido por (UP): 2,88 e A= 27,97 Km²; (M): 1,72 e A= 61,16 Km² e (Ma) :1,28 e A= 1,14Km². O

padrão de distribuição da diversidade genética não mostrou relação estatisticamente significativa com o tamanho

do fragmento e a distância do equador, p=0.85 e 0,19 respectivamente. Porém, foi possível observar uma tendência

da diversidade genética em relação aos dois fatores. A riqueza tendeu a aumentar em relação ao tamanho do

fragmento e diminuir em relação a uma maior distância do Equador. Sendo assim, sugere-se mais estudos em

relação a este componente além de um aumento no esforço amostral de coletas.

APOIO CNPq

276


DIVERSIDADE MOLECULAR DE FUNGOS FILAMENTOSOS ASSOCIADOS À INVERTEBRADOS

MARINHOS

Gustavo Vasconcelos Bastos Paulino1; Ciro Ramon Félix dos Santos Silva

2; Melissa Fontes Landell

1.


(1)Programa de Pós-graduação em Diversidade Biológica e Conservação nos Trópicos, Universidade Federal de

Alagoas, Campus A. C. Simões.; (2)

Universidade Federal de Alagoas, Campus A. C. Simõ

RESUMO Os recifes de coral abrigam uma biota extraordinariamente diversa, incluindo uma ampla variedade de

invertebrados sésseis conhecidos por apresentarem uma grande diversidade de micro-organismos que podem estar

associados à diversos papéis ecológicos, incluindo a participação em ciclos biogeoquímicos, proteção contra

patógenos ou no suprimento de nutrientes. Apesar de frequentemente subestimados, o isolamento e identificação

de fungos derivados de substratos marinhos vem ganhando mais atenção. Ainda assim, mesmo sendo ubíquos e

podendo ser facilmente isolados tanto a partir do tecido interno de esponjas quanto das diversas camadas e muco

que compõem os corais, pouco se sabe sobre a diversidade, natureza das associações e importância ecológica dos

fungos filamentosos associados à invertebrados marinhos sésseis. O presente trabalho visou a identificação

molecular de isolados de fungos filamentosos obtidos à partir de corais e esponjas coletados em dois recifes

diferentes do litoral de Maceió - AL. Quatro coletas foram realizadas entre 2014 e 2016 no recife de coral da

Ponta Verde e recife de arenito da Sereia. Fragmentos dos invertebrados foram cortados, colocados em sacos

plásticos esterilizados e armazenados em gelo durante o transporte para o laboratório, onde foram cortados em 4

fragmentos de 1 cm³ e dispostos de forma equidistante em placas contendo extrato de malte + cloranfenicol. Após

o isolamento e estoque, foi realizada a extração de DNA genômico dos isolados, seguida pela amplificação da

região ITS usando os oligonucleotídeos iniciadores ITS-1 e ITS-4, e posteriormente o sequenciamento dos

fragmentos. As sequências foram analisadas usando a plataforma BLAST. Foram obtidos 95 isolados a partir de

59 amostras, entre corais e esponjas, sendo 52 obtidos na Ponta Verde e 43 obtidos na Sereia. Até o momento, a

identificação preliminar de 39 isolados mostra que os gêneros mais abundantes foram: Aspergillus (n = 21),

Trichoderma (n=7) e Penicillium (n=6), todos grupos comumente encontrados em associação à invertebrados

marinhos sésseis. Dois isolados representam possíveis espécies novas, reforçando ainda mais a importância de se

explorar esse ambiente extremamente promissor e ainda pouco explorado.

APOIO Capes e CNPQ

277


EFEITO DO FLORFENICOL NA DIETA ALIMENTAR SOBRE A DIVERSIDADE BACTERIANA DO

INTESTINO DE TILÁPIAS DO NILO (OREOCHROMIS NILOTICUS) INFECTADAS COM

AEROMONAS HYDROPHILA

Riani Ananda Nunes Soares1; Antônio Wilton Cavalcante Fernandes

1; Samira Texeira Leal Oliveira

1; Mateus


1.


(1)Universidade Federal do Vale do São Francisco, Petrolina, PE

RESUMO Como forma de atender à crescente demanda por alimentos, o controle de doenças em peixes tem se concentrado

no uso de antibióticos, sendo o florfenicol o mais utilizado no combate a infecções bacterianas. O acréscimo de

antibióticos na ração pode influenciar a composição genética de microrganismos do intestino dos peixes que

influenciam na absorção de nutrientes pelo animal. O objetivo do presente estudo foi avaliar o efeito da

suplementação com diferentes concentrações do antibiótico florfenicol sobre a diversidade bacteriana do intestino

de tilápias do Nilo (Oreochromis niloticus) infectadas com Aeromonas hydrophila. Foi montado um

experimento in vivo que constou dos seguintes tratamentos: grupo que recebeu ração controle e peixes inoculados

com solução salina, grupo que recebeu ração controle e peixes inoculados com Aeromonas hydrophila, grupo

recebendo ração contendo 20 mg de florfenicol; grupo recebendo ração contendo 40 mg e grupo recebendo ração

contendo 60 mg de florfenicol, sendo todos os peixes inoculados com A. hydrophila. O DNA das bactérias

presentes no intestino de três peixes de cada tratamento foi extraído e utilizado em Reações em Cadeia da

Polimerase (PCR) com TopTaq Master Mix kit (Qiagen®) e primers universais de bactérias acrescidos de um

grampo GC. Em seguida, foram avaliados pela técnica DGGE (denaturing gradient gel electrophoresis) com

gradiente de 40-75% em gel de acrilamida a 8% para análise de diversidade de bactérias. A análise do DGGE

demonstra que os grupos que receberam ração contendo 40 mg e 60 mg de florfenicol apresentaram cinco bandas

representando a maior diversidade bacteriana encontrada. No entanto, os grupos que receberam ração controle e

foram inoculados com solução salina; que receberam ração controle e que receberam ração contendo 20 mg de

florfenicol (ambos inoculados com A. hydrophila) exibiram três grupos bacterianos, sendo os três em comum. Isso

pode ser explicado pelo fato de que altas doses de antibiótico podem alterar o perfil de microrganismos induzindo

a seleção daqueles que são resistentes à droga, alterando assim a composição da microbiota inicial, sendo que a

ausência de alguns grupos bacterianos pode permitir o aparecimento de novos grupos, por isso os grupos

recebendo as maiores doses de florfenicol podem ter apresentado maior diversidade bacteriana. No entanto, é

necessário realizar o sequenciamento dos grupos encontrados para se identificar as bactérias e verificar a

patogenicidade das mesmas.

APOIO CNPq

278


ENTOMOPATOGENICIDADE DE ISOLADOS DO COMPLEXO DE ESPÉCIES FUSARIUM

INCARNATUM-EQUISETI SOBRE DACTYLOPIUS OPUNTIAE CONFIRMADA POR MARCADOR

MOLECULAR ISSR

Mariele Porto Carneiro Leão1; Patricia Vieira Tiago


3; Neiva Tinti de Oliveira

2.


(1)Departmento de Micologia, Universidade Federal de Pernambuco e Instituto Agronômico de Pernambuco;

(2)Departmento de Micologia, Universidade Federal de Pernambuco;

(3)Instituto Agronômico de Pernambuco

RESUMO O cultivo da palma forrageira Opuntia ficus-indica, importante na sustentabilidade da pecuária regional do estado

de Pernambuco, vem sendo comprometido por uma cochonilha da espécie Dactylopius opuntiae. O uso de fungos

entomopatogênicos poderá ser uma alternativa de baixo impacto ambiental para o controle desse inseto-praga. O

gênero Fusarium tem sido descrito como promissor no controle de insetos. Assim, esse trabalho teve como

objetivos avaliar e confirmar a eficiência/presença em campo de isolados pertencentes ao complexo de

espécies Fusarium incarnatum-equiseti no controle biológico de D. opuntiae, utilizando caracteres morfológicos e

moleculares. Suspenções de 107 conídios/mL dos isolados URM6782, URM6778 e URM681, previamente

avaliados em laboratório como eficientes no controle dessa cochonilha, foram pulverizadas, separadamente, em

um plantio de O. ficus-indica com infestação natural de D. opuntiae. A identificação do isolado

de Fusarium causador da morte do inseto foi realizada pela análise morfológica, aliada à utilização do marcador

molecular de ISSR (Inter Simple Sequence Repeats) UBC 834, anteriormente selecionado para este fim. Com base

nos caracteres morfológicos, os isolados URM6782 e URM6778 causaram 42.66% e 40.66% de

mortalidade, respectivamente, e não diferiram estatisticamente entre si. O isolado URM6811 apresentou uma taxa

de mortalidade de 14%, diferindo significativamente dos demais isolados. Baseado nas características moleculares,

dos 42.66% das cochonilhas mortas no tratamento com URM6778, 84.52% foram exibidos por DNA

fingerprinting ser URM 6782. No tratamento com URM6778, dos 40.66% das cochonilhas mortas, 54.71% foram

exibidos por DNA fingerprinting ser URM6778 e no tratamento com URM6811 dos 14% das cochonilhas mortas,

19.76% foram exibidos por DNA fingerprinting ser URM6811. Os resultados sugerem que os isolados URM6782

e URM6778 são promissores para o controle de D. opuntiae e o iniciador UBC834 pode ser utilizado para

monitoramento desses isolados quando lançados em campo. Esses dados reforçam a necessidade de monitorar os

fenótipos ao nível do genoma, antes e após sua aplicação no campo, a fim de que seja obtida uma resposta

ecológica e uma segurança na certificação da ação efetiva e específica dos isolados utilizados no controle

biológico da cochonilha do carmim.

APOIO CAPES e Facepe

279


EVOLUTIONARY INFERENCE AND MOTIF CONSERVATION BETWEEN DENGUE, ZIKA AND

CHIKUNGUNYA VIRUS FROM THE ENVELOPE PROTEIN GENE.

Fellipe Alves Ozorio do Nascimento1; Michely Correia Diniz

2.


(1)Graduando em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF -

Colegiado de Ciências Biológicas- Campus Ciências A grárias - Petrolina, PE. ; (2)

Professora Doutora do

Colegiado de Ciências Biológicas da Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF - Campus

Ciências Agrárias - Petrolina, PE.

RESUMO Dengue virus (DENV), Zika (ZIKAV) and Chikungunya (CHIKV) became an interest global having as main

vectors Aedes aegypti and Aedes albopictus mosquitoes. The host infection in many cases is associated with the

envelope protein, which interacting with receptors present in the cell surface of vector-mosquitoes and vector-

human. Although they are from different families, they may have submitted to the same evolutionary pressures

that shaped their infection forms through of the envelope protein. This study aimed infer the evolutionary

relationships among DENV serotypes (DENV-1 to DENV-4), ZIKAV and CHIKV and verify the motif

conservation of gene sequences "E", responsible for encoding the structural envelope glycoprotein. The sequences

were extracted of NCBI - National Center for Biotechnology Information. The alignment and the consensus

sequences were performed using the BioEdit 7.2.5 software. The distance analysis, nucleotide composition and

topology construction based on the consensus sequences were performed using the Mega 7 software. We used the

MEME tool, of the suite MEME (Motif-based sequence analysis tools) for verification of conserved motifs. The

Bootstrap method, 100 replications was used to evaluate associations reliability between the branches. The

grouping was the result of the Maximum Likelihood method (ML) with the Jukes-Cantor association model. The

sequences size ranged from 1332 to 2430 bp. Sequences of DENV-1 had an average of 1450 bp; DENV-2 average

of 1456 bp; DENV-3 average of 1322 bp; DENV-4 average of 1477 bp; ZIKAV average of 666 bp and CHIKV

average of 1142 bp. The resulting tree showed topologies well supported by bootstrap with DENV serotypes 1, 2

and 3 closer to each other in the branches. Three conserved motifs have been identified for the Dengue, two for

Chicungunya and one of the Zika. The identified motifs vary between 50 bp and 41 bp. Results may help to

understand the topological relations and conservation motif between viruses. The identification of similar regions

can contribute in the infection mechanism studies and in a near future development of new control strategies that

can inhibit the virus penetration into the cell.

280


EXPRESSÃO DE ANTÍGENOS RECOMBINANTE EM LEISHMANIA TARENTOLAE PARA

UTILIZAÇÃO EM MODELOS VACINAIS CONTRA LEISHMANIOSE VISCERAL CANINA

Santos, W. J. T1; Reis, C. R. S.

2; Magalhães, F.b.

3; de Melo Neto, O. P.

4.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Genética (Pernambuco, Brasil);

(2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães

- Fundação Oswaldo Cruz, MICROBIOLOGIA (Pernambuco, Brasil); (3)

Faculdade ASCES, Bioquimica

(Pernambuco, Brasil).; (4)

Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães - Fundação Oswaldo Cruz, MICROBIOLOGIA

(Pernambuco, Brasil).

RESUMO As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários flagelados da família

Trypanosomatidae e gênero Leihsmania. No Brasil, a Leishmaniose Visceral (LV), forma mais grave da doença, é

causada pela Leishmania infantum e o cão doméstico é o seu principal reservatório. Portanto, uma vacina eficaz

contra a doença no cão é uma das principais estratégias para o controle da LV. Ela deve contar com a geração de

uma imunidade de células T eficiente, predominantemente com resposta Th1 para destruição dos parasitos pelo

sistema imune. Para isto, a utilização de vacinas atenuadas da Leishmania seriam uma boa alternativa, pois

mimetizaria melhor a doença, além de estimular a reposta imunológica desejada. Nesses estudos, a Leishmania

tarentolae, espécie não infectiva em mamíferos, tem sido amplamente utilizada devido a sua alta eficácia como

modelo de expressão de proteica e ao seu potencial de estimulação da resposta imune. Este estudo objetiva montar

ferramentas de expressão de antígenos recombinantes de L. infantum para a estimulação da resposta vacinal em

modelo murino através da sua expressão em L. tarentolae. Primeiramente, foram selecionados três construções

com potencial vacinal (Lci10, Lci13 e Q1), previamente identificadas pelo grupo. Elas foram obtidas a partir de

PCR, clonadas em pGEM-T-Easy e subclonados no vetor pLEXSY-hyg2. Após a confirmação das subclonagens

as construções foram transfectadas em L. tarentolae por eletroporação. A confirmação da integração dos genes no

genoma do parasito foi realizado através de reações de PCR, que liberaram fragmentos no tamanho predito. A

expressão dos antígenos desejados em L. tarentolae foram avaliadas através de ensaios de imunocitoquímica,

frente a anticorpos específicos, e visualizadas em microscópio confocal. Esses resultados demonstram a eficácia

do método de expressão proteica em modelo eucarioto, que serão utilizadas como proposta vacinal para avaliação

da resposta imunológica em modelos murino.

APOIO CAPES

281


EXPRESSÃO DE PROTEÍNAS QUIMÉRICAS CONTENDO EPÍTOPOS NS1 DO VÍRUS DA DENGUE

PARA FINS DIAGNÓSTICOS E VACINAIS

Purificação Júnior, A.f.1; Coêlho, D. F.

1; Caiado, B.v.r.

1; Dhalia, R.

2; Lins, R.d.

2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco - Recife - PE;

(2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães /FIOCRUZ- PE

RESUMO A dengue é uma importante doença de aspecto emergente e um grande desafio para a saúde pública mundial. No

mercado, existe apenas uma vacina licenciada que não é totalmente eficaz na prevenção da doença, além disso,

existe a dificuldade de expressar antígenos virais para o diagnóstico sorológico dessa arbovirose em sistemas

procarióticos, ocasionando um alto tempo de processamento e custo final elevado. O presente estudo, por meio da

engenharia de proteínas, visa propor moléculas alternativas de interesse diagnóstico e/ou vacinal para a dengue, a

um custo reduzido e com alta eficiência de produção. Fazendo uso da metodologia "epitope-scaffolding", através

de ferramentas computacionais, foram selecionadas curtas sequências da proteína NS1 (epítopos) do vírus da

dengue e em seguida inseriu-se na proteína Top7 (scaffold), proteína sintética que não existe na natureza, portanto

sem atividade imunogênica e também conhecida por sua notável estabilidade térmica e ambiental. Usando-a como

carreadora, a proposta foi construir proteínas quiméricas estáveis que continham epítopos de NS1-DENV, de

forma a apresenta-los na mesma conformação encontrada na proteína nativa. Ainda com auxilio dos métodos

computacionais, threading, de novo design e simulação de dinâmica molecular, as estruturas das quimeras foram

preditas e algumas se apresentaram energeticamente e estruturalmente estáveis. Os genes correspondentes a essas

proteínas foram otimizados, sintetizados comercialmente e clonados no vetor de expressão pRSET A. A clonagem

foi confirmada por digestão com enzimas de restrição e sequenciamento. O DNA foi expresso em larga escala e

extraído, sendo posteriormente transformado em células de Eschericha coli BL21 para a produção das proteínas de

interesse. As proteínas tiveram sua expressão confirmada por ensaios de imunoblot com anticorpo contra suas

caudas de histidinas (anti-HIS) e purificadas por cromatografia de afinidade, apresentando alto rendimento e

solubilidade. No entanto, o processo de purificação não foi eficiente para retirar todas as proteínas contaminantes

de E. coli que são reconhecidas por anticorpos presentes nos soros dos pacientes. Apesar disso, os sinais

detectados para as quimeras sugerem que elas são potencialmente imunogênicas. Outros métodos de purificação

estão sendo testados para se obter proteínas recombinantes puras e em seguida será feita a avaliação da

sensibilidade e a especificidade com painéis sorológicos de referência.

APOIO PPSUS, CAPES, CNPq, FACEPE

282


EXPRESSÃO DO ANTÍGENO P24 DO NUCLEOCAPSÍDEO DO VÍRUS DA IMUNODEFICIÊNCIA

HUMANA TIPO 1 (HIV1) EM LEISHMANIA TARENTOLAE

Adalúcia da Silva1; Gustavo Barbosa de Lima

2; Christian Robson de Souza Reis

2.


(1)Programa de Pós-Graduação em Genética PPGG/UFPE. Departamento de Virologia - CPqAM /FIOCRUZ-PE. ;

(2)Departamento de Microbiologia. Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães - CPqAM /FIOCRUZ-PE

RESUMO A Síndrome da Imunodeficiência Humana é uma das principais doenças infecciosas do mundo, seu agente

etiológico é o vírus da Imunodeficiência Humana (HIV), um retrovírus, transmitido por via sexual, vertical e

transfusional. O diagnóstico do HIV é feito pelo uso de antígenos recombinantes que permitem reconhecer

anticorpos produzidos por pacientes infectados com este vírus. Um dos antígenos de maior interesse diagnóstico é

a proteína p24 por aparecer precocemente e permanecer na corrente sanguínea por um longo período de tempo.

Porém a produção de antígenos virais em células procarióticas em muitas situações não é bem sucedida,

justificando o desenvolvimento de novos estudos que utilizem sistemas de expressão alternativos para obtenção de

proteína viral em grandes quantidades, de forma rápida e eficaz. Para isso, o sistema de expressão eucariótico

baseado em Leishmania tarentolae apresenta vantagens como rápido crescimento e capacidade de realizar

modificações pós traducionais. Além disso, esse protozoário é facilmente cultivável em laboratório NB1,

alcançando altas densidades celulares em um curto espaço de tempo. O objetivo desse trabalho é expressar a

proteína p24 do HIV 1 em L. tarentolae. O gene da proteína p24 do HIV 1 foi amplificado por PCR e clonado no

vetor pGEM-T-easy e sequenciado para verificar a integridade da sequência gênica. Em seguida, o gene foi

subclonado no vetor comercial de L. tarentolae pLEXSY hyg2. A partir das construções plasmidiais obtidas foram

obtidos cassetes de integração gênica por meio de digestão dos vetores e em seguida culturas de L. tarentolae

foram transfectadas permitindo a obtenção de duas linhagens transgênicas: uma de expressão episomal e outra de

expressão constitutiva. Para avaliação da expressão do transgene, extratos celulares foram fracionados em gel SDS

PAGE 20% que permitiu a visualização da proteína expressa no tamanho predito e a confirmação da expressão foi

feita por Western blot utilizando anticorpos anti-p24, que demonstrou a presença da proteína em ambas às

linhagens recombinantes de L. tarentolae. Em conclusão, este trabalho conseguiu realizar a expressão da proteína

recombinante p24 do HIV 1 em Leishmania tarentolae, e esse novo sistema de expressão pode ser utilizado para

expressão de outros antígenos virais.

APOIO CAPES, CPqAM /FIOCRUZ-PE

283


GENOMIC IDENTIFICATION AND PATTERNS OF EXPRESSION OF SECONDARY METABOLITE

GENE CLUSTERS IN THE ENTOMOPATHOGEN FUNGUS METARHIZIUM ANISOPLIAE.

Nicolau Sbaraini1; Augusto Schrank

1.


(1)PPGBCM CBiot UFRGS

RESUMO The Metarhizium genus harbors cosmopolitan fungi that infect arthropod hosts. Importantly, while some species

infect a wide range of hosts (host-generalists), other species infect only a few arthropods (host-specialists). This

singular evolutionary trait permits unique comparisons to determine how pathogens and virulence determinants

emerge and evolved. Among the several virulence determinants that have been described, secondary metabolites

(SMs) are suggested to play essential roles during fungal infection. Nevertheless, genes related to SM production

in Metarhizium spp. are scarcely described and little is known about their genomic organization, expression,

regulation and role during host recognition and infection. Here, we have performed a deep survey and description

of SM biosynthetic gene clusters (BGCs) in M. anisopliae and assessed conservation among the Metarhizium

genus. RNA-seq data from fungi grown on cattle-tick cuticles (mimicking infection) was analyzed to evaluated

validate some of the predictions and to access the differential expression of BGCs. Furthermore, our analysis

extended to the construction of a phylogeny for the following three BGCs: a tropolone/citrinin-related compound

(MaPKS1), a pseurotin-related compound (MaNRPS-PKS2), and a putative helvolic acid (MaTERP1). Among 73

BGCs identified in M. anisopliae, 20% were up-regulated during initial tick cuticle infection and presumably

possess virulence-related roles. These up-regulated BGCs include known clusters, such as destruxin, NG39x and

ferricrocin, together with putative helvolic acid and pseurotin- and tropolone/citrinin-related compound clusters as

well as uncharacterized clusters. Concerning host-range several up-regulated BGCs were not conserved in host-

specialist species from the Metarhizium genus, indicating possible differences in the metabolic strategies

employed by generalist and specialist species to overcome and kill their hosts. These differences in metabolic

potential may have been partially shaped by horizontal gene transfer (HGT) events, as our phylogenetic analysis

provided evidence that the putative helvolic acid cluster in Metarhizium spp. originated from an HGT event. In

conclusion, several unknown BGCs are described, and their organization, regulation and origin are discussed,

providing support for the impact of SM on the Metarhizium genus lifestyle and infection process.

APOIO CAPES, CNPq

284


IDENTIFICAÇÃO DE RAOULTELLA ORNITHINOLYTICA PRODUTORA DE CARBAPENEMASE DO

TIPO KPC ISOLADA DE UM HOSPITAL UNIVERSITÁRIO DE RECIFE

Wendell Palôma Maria dos Santos1; Ana Caroline Oliveira Alves Ribeiro

1; Rodrigo Tenório Gomes Pereira

1;

Anna Carolina Soares Almeida2; Márcia Maria Camargo de Morais

1.


(1)Laboratório de Resistência Microbiana, Instituto de Ciências Biológicas - ICB/UPE;

(2)Laboratório de

Resistência Microbiana, Instituto de Ciências Biológicas - ICB/UPE / Departamento de Biologia - UFRPE

RESUMO Introdução: O gênero Raoultella é composto por bacilos gram-negativos, aeróbicos, pertencentes à família

Enterobacteriaceae. Raoultella ornithinolytica é encontrada em ambientes aquáticos e hospitalares. A ocorrência

desta espécie em humanos é rara, mas tem sido reportada em casos de infecções e apresentando resistência a

múltiplas drogas. Objetivos: Determinar o perfil de susceptibilidade a antimicrobianos em um isolado de R.

ornithinolytica proveniente de infecção nosocomial e caracterizar os determinantes gênicos responsáveis pela

resistência aos carbapenêmicos. Materiais e Métodos: Um isolado de R. ornithinolytica foi coletado de uma

amostra de abscesso cavitário de um paciente do Hospital Universitário Oswaldo Cruz (HUOC) - Recife, em

dezembro de 2014. O perfil de susceptibilidade a antimicrobianos foi determinado pelo sistema automatizado

Vitek2® (BioMerieux, Marcy l'Etoile, France) e interpretada segundo o CLSI, 2016. O DNA genômico foi

extraído através do kit BRAZOL, segundo recomendações do fabricante. A detecção do gene de resistência a

carbapenêmicos (blaKPC) e dos genes de ESBLs (blaCTX, blaSHV, blaTEM) foi realizada através da técnica de PCR,

utilizando primers e condições especificas. Resultados e Discussão: O isolado estudado apresentou resistência a 12

dos 16 antimicrobianos testados, dentre eles, a colistina, com CIM (concentração inibitória mínima) >=16mg/mL.

Em relação à caracterização molecular, o isolado foi positivo para os genes blaKPC, blaCTX, blaTEM. Por se tratar de

uma espécie raramente encontrada no ambiente hospitalar, ainda há poucos relatos na literatura de R.

ornithinolytica produtora de carbapenemase do tipo KPC e, além disso, apresentando resistência à colistina, o que

representa grande preocupação, visto que esta é uma das últimas opções terapêuticas para o tratamento de

infecções causadas por microrganismos resistentes aos carbapenêmicos. Estudos posteriores que visem a

caracterização da região codificante dos genes envolvidos na resistência a colistina são necessários para a

compreensão do funcionamento deste mecanismo.

APOIO Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia de Pernambuco - FACEPE; Conselho Nacional de Desenvolvimento

Científico e Tecnológico - CNPq

285


IDENTIFICAÇÃO DE INTERAÇÕES ENTRE HOMÓLOGOS DOS FATORES DE INICIAÇÃO DA

TRADUÇÃO EIF4B E EIF5 DE LEISHMANIA SP. COM DIFERENTES COMPONENTES DA

MAQUINARIA DE SÍNTESE PROTEICA

Irassandra Rooze Pereira Uchôa Cavalcanti de Aquino1; Ludmila Arruda de Assis

2; Tamara De' Carli da Costa

Lima2; Osvaldo Pompílio de Melo Neto

2.


(1)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/Fiocruz, Recife-PE e Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE;

(2)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães/Fiocruz, Recife-PE

RESUMO Os tripanossomatideos são os agentes causadores de doenças de grande impacto mundial, tais como a doença do

sono, doença de Chagas e as diversas formas de leishmanioses. Estes organismos apresentam características

peculiares, raramente encontradas na maioria dos eucariotos, como a regulação da sua expressão gênica que

acontece basicamente a nível pós-transcricional através do controle da estabilidade dos mRNAs e da tradução, esta

última possivelmente na sua etapa de iniciação. Nos eucariotos, a iniciação da tradução envolve diversas proteínas,

denominadas de fatores de iniciação da tradução. Dentre esses, se destaca o complexo eIF4F (eIF4A, eIF4E,

eIF4G) que facilita a montagem do ribossomo junto ao mRNA. No entanto para que essa ação ocorra se faz

necessária a ação de outros fatores como: o eIF4B, que reforça a atividade helicase do eIF4A e o eIF5, que atua a

nível do reconhecimento do códon AUG. Este trabalho teve como objetivo obter as ferramentas necessárias para a

caracterização in vivo dos fatores EIF4B e EIF5 em Leishmania infantum. Os genes EIF4B e EIF5 foram

amplificados a partir de oligonucleotideos desenhados especificamente para cada um, e então clonados no vetor

pGEM T-Easy. Uma vez confirmados por sequenciamento, os genes foram subclonados no vetor de expressão

pSP-BT1-YneoαIR. Posteriormente as proteínas foram superexpressas em L. infantum fusionadas ao epítopo HA.

A superexpressão foi confirmada por ensaios de Western-blot de extratos celulares com anticorpo contra HA. Na

expressão do EIF4B foram observados indícios de fosforilação, característica também observada em mamíferos e

sugerindo uma possível regulação específica no ciclo de vida do parasita. Por fim foram realizados ensaios de

imunoprecipitação utilizando anticorpos policlonais a fim de investigar a associação in vivo do possível homólogo

EIF4B e EIF5 com prováveis parceiros proteicos que atuam na etapa da tradução. Porém não foram observadas

interações entre o EIF4B com as proteínas PABP1, PABP2 e a EIF4AI e, do EIF5 com as proteínas EIF3E e

ribossomais (P0 e L19), esperados parceiros proteicos. A partir destes resultados espera-se entender melhor como

esses fatores atuam na tradução nos tripanossomatídeos, agregando informações relevantes sobre a iniciação da

tradução nestes patógenos.

APOIO Universidade Federal de Pernambuco, Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães/FIOCRUZ e Conselho Nacional de

Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq.

286


IDENTIFICAÇÃO DE LEVEDURAS EM GRÃOS DE KEFIR DE ÁGUA POR METAGENÔMICA

Natália Almeida Onofre1; José Antônio Santos Junior

2; Maria Carolina de Oliveira Souza

3; Cláudia Sampaio de

Andrade Lima3; Ricardo Yara


4.


(1)Departamento de Antibióticos da Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Departamento de Engenharia

Biomédica da Universidade Federal de Pernambuco; (3)

Departamento de Biofísica e Radiobiologia da

Universidade Federal de Pernambuco; (4)

Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO Grãos de kefir são compostos basicamente por bactérias e leveduras simbiontes envoltas por uma matriz

polissacarídica. Estes micro-organismos são responsáveis pelas propriedades probióticas do kefir. O objetivo do

trabalho foi identificar as espécies de leveduras que constituem a mcrobiota dos grãos do kefir através de análise

metagenômica. Para isso, o DNA foi extraído diretamente a partir dos grãos do kefir, as bibliotecas foram

construídas utilizando-se de iniciadores específicos para a região ITS rRNA, e sequenciadas em plataforma

Illumina 2500 HiSeq. As tags brutas, geradas a partir de montagem, foram filtradas e os artefatos quiméricos,

removidos. As sequencias foram então usadas para gerar o conjunto de OTUs e para anotação das espécies, onde

sequências com similaridade ≥ 97% foram atribuídas a uma mesma OTU. Foram ainda estudadas as relações

filogenéticas de diferentes OTUs e a complexidade e diversidade das amostras (duas repetições), avaliadas por

análise de diversidade alfa. No total, 59.055 tags efetivas com anotação foram obtidas, sendo as sequencias

atribuídas a 53 OTUS (assumindo 97% de similaridade). Em media, 100 % das sequencias efetivas puderam ser

agrupadas ao nível de reino e 92% ao nível de filo, classe e ordem, família, gênero e espécie. Com base na análise

da abundância relativa, o filo Ascomycota foi predominante. Análise do Heat map mostrou que Saccharomyces

eubayanus, Dekkera bruxellensis, Torulaspora quercuum, Lachancea fermentati e Candida californica foram as

espécies mais abundantes. A curva de rarefação tendeu à assíntota, sugerindo sucesso no esforço amostral da

diversidade existente. De acordo com a origem dos grãos, do método ou do substrato utilizados para o cultivo, a

composição microbiológica do kefir pode sofrer variações. Este trabalho demonstrou, entretanto, que a análise

metagenômica é um método eficaz na elucidação da composição de leveduras presentes nos grãos de kefir em

estudo.

287


IDENTIFICAÇÃO MOLECULAR DE MATING TYPES DE FUSARIUM SPP., ISOLADOS DE PALMA

FORRAGEIRA.

Tarcio Tomé da Silva.1; Michele Freitas Santiago

2; Alice Maria Gonçalves Santos

3; Delson Laranjeira

4; Tereza

Cristina de Assis5; Amaro de Castro Lira Neto

5.


(1)Instituto de Ciências Biológicas -UPE, Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA;

(2)Lab. Fungos de Solo /

Fitopatologia - UFRPE, Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA; (3)

Lab. De Fitopatologia -UFPI; (4)

Lab.

Fungos de Solo / Fitopatologia - UFRPE; (5)

Instituto Agronômico de Pernambuco -IPA

RESUMO Em eucariotos, como o Fusarium spp., a compatibilidade sexual é controlada por mecanismos moleculares

denominados mating types. Este gênero possui um locus denominado MAT onde se encontra o gene que possui os

idiomorfos MAT-1 e MAT-2 que determinam o mecanismo de mating type. A espécie que apresentar apenas um

desses idiomorfos é dita heterotálica, se ambos, homotálica. Sabe-se que a reprodução sexuada representa um dos

principais fatores responsável pelo aumento e manutenção da variabilidade genética dentro das populações

biológicas. Em Fusarium spp., esse aumento pode resultar em estirpes com maior virulência dificultando, assim,

um manejo mais eficiente das doenças causadas por este patógeno. Neste projeto, objetivou-se identificar através

de métodos moleculares a presença de isolados compatíveis sexualmente baseando-se nos genes localizados no

loco MAT. Foram avaliadas 13 estirpes quanto à presença dos idiomorfos MAT-1 e MAT-2, coletados de palmas

forrageira com sintomas de fusariose nos municípios de Arcoverde, Limoeiro, Surubim e Pedra localizados no

estado de Pernambuco. Essas estirpes foram testadas quanto à patogenicidade, sendo utilizadas somente as

patogênicas. Realizou-se a extração de DNA pelo método CTAB modificado seguido de PCR. Os primers

utilizados foram: fusALPHAfor e fusALPHArev, para MAT-1, fusHMGfor e fusHMGrev para MAT-2. O produto da

PCR foi encaminhado à eletroforese em gel de agarose a 1% para que o peso molecular do DNA amplificado seja

determinado com base em comparações com um marcador molecular 1Kb, com MAT-1 tendo 200pb e MAT-2

tendo 260pb. Verificou-se que dos 13 isolados analisados dez apresentam MAT-2 representando 77% dos isolados

testados e três apresentam MAT-1 representando 23% dos isolados testados. Identificando-se que o MAT-2 se

apresenta em uma proporção três vezes maior do que o MAT-1. Apesar de não terem sido encontrados nesse

estudo, existem estirpes de Fusarium spp., com os dois idiomorfos MAT-1 e MAT-2, no mesmo locus MAT. A

compreensão do processo de reprodução sexuada fornece maiores informações sobre a origem da diversidade

genética e possíveis estratégias para o manejo da fusariose ocasionada por essas estirpes.

APOIO Instituto Agronômico de Pernambuco- IPA.

288


IDENTIFICATION, CHARACTERIZATION AND FUNCTIONAL EVALUATION OF HPV16 E7

POLYMORPHISMS IN NF-κB SIGNALING PATHWAY

Rita de Cássia Pereira de Lima1; Marcelo Nazário Cordeiro

1; Ruany Cristyne de Oliveira Silva

1; Ana Paula

Ferreira Campos1; Daffany Luana Santos

1; Ana Pavla Diniz Gurgel

2; Aldo Venuti

3; Bárbara Simas Chagas

1;

Antonio Carlos de Freitas1.


(1)Department of Genetics, Laboratory of Molecular Studies and Experimental Therapy (LEMTE), Federal

University of Pernambuco, Recife, PE, Brazil.; (2)

2 Department of Ecology, Federal University of Paraíba, Rio

Tinto, PB, Brazil.; (3)

Head HPV Unit. UOSD Tumor Immunology and Immunotherapy. RIDAIT Dept. Regina

Elena National Cancer Institute Rome-Italy

RESUMO Cervical cancer is the second most common neoplasia in women worldwide. Epidemiologic studies indicate that

high-risk human papillomavirus (HPV) persistent infection is the major cause of cervical neoplasia. High risk

HPV E7 proteins alter various aspects of human cell cycle. It is possible that polymorphisms may lead to altered

biological function with clinical consequences. Just a handful of studies have presented some data about HPV

epidemiology in Brazil northeastern population. This study have identified genotypes and its variants as

responsible for different HPV infection profiles in notheastern female population; Also, we have performed one of

the first functional analysis of polymorphisms in HPV based on NF-kB activity, an anti-viral cellular critical

pathway. HPV16 E7 single nuceotide polymorphisms (SNPs) from a high frequent variant have been tested in NF-

kB signaling pathway evaluation model. Thirty-seven HPV16 positive samples were amplified with specific

primers and sequencing has been performed. Comparative analysis of E7 oncogene with HPV16 reference

sequence has revealed that eight isolates presented three SNPs at positions 647, 789 and 795. One mutation was

missense at codon 29 (647) and the two remaining were silent ones. Phylogenetic tree has been generated from

HPV16 sequences and it were clustered into main groups called lineage C and D. Polymorphic E7 genes have

been design with all SNPs together, or only one of each, and have been cloned into pcDNA3.1 vector. Each HEK-

293 cell group was co-transfected with an NF-κB dependent firefly luciferase reporter, known as (κB)3-Luc

plasmid, and a renilla luciferase-expressing plasmid, used as luminescence normalizer. NF-κB activity was

measured by GloMax®

96 Microplate Luminometer. Statistical analysis was performed using ANOVA; p < 0.05

was considered significant. When compared with HPV16 E7 gene without SNPs, the HPV16 E7 that presents

simultaneously three SNPs has dramatically reduced NF-kB pathway activity. However, none of the E7 design

genes with only one SNP have showed significant NF-kB pathway disturb. This found may suggest a strictly

sinergic effect of these SNPs. Ongoing trials should provide data that allow a better characterization of HPV

variants clinical profile and the relevance of polymorphisms in HPV-associated cervical lesions development.

APOIO This research was supported by FACEPE, CNPq and CAPES.

289


INCIDÊNCIA DO PAPILOMAVÍRUS HUMANO (HPV) EM SANGUE PERIFÉRICO DE PACIENTES

SAUDÁVEIS E COM LESÕES CERVICAIS, NO ESTADO DE PERNAMBUCO, BRASIL

Kamylla Conceição Gomes Nascimento1; Ana Pavla Diniz Gurgel

2; Dafne Carolina Alves Quixabeira

3; Ruany

Cristyne de Oliveira Silva1; Rita de Cássia Pereira de Lima

1; Antonio Humberto Pereira Silva Júnior

1; Bárbara

Simas Chagas1; Elyda Gonçalves de Lima

1; Talita Helena Araújo de Oliveira

1; Marcelo Nazário Cordeiro

1;

Jacinto da Costa Silva Neto3; Antonio Carlos de Freitas

1.


(1)Departamento de Genética, Laboratório de Estudos Moleculares e Terapia Experimental (LEMTE) -

Universidade Federal de Pernambuco, Recife, PE, Basil; (2)

Departamento de Engenharia e Meio Ambiente

(DEMA) - Universidade Federal da Paraíba; (3)

Departamento de Histologia e Embriologia - Universidade Federal

de Pernambuco

RESUMO Estudos tem demonstrado o envolvimento do HPV em epitélios e mucosas não cervicais, tais como vagina, pênis,

mama, pulmão, cabeça e pescoço. Essas observações levantam questões sobre como o HPV poderia se estabelecer

nestes tecidos uma vez que não ocorre viremia. Especula-se que as células mononucleares do sangue periférico

(PBMC) infectadas podem se espalhar e infectar outros sítios corporais. Estudos tem demonstrado a presença de

DNA de HPV na corrente sanguínea de pacientes infectados com HPV e também pacientes sem lesões cervicais.

Ainda não está estabelecida a via pela qual o DNA do HPV é liberado na corrente sanguínea, várias suposições

vêm sendo levantadas. Dessa maneira, o objetivo do presente estudo é detectar a presença do DNA de HPVs e

identificar os tipos viriais mais prevalentes em amostras cervicais e sangue de pacientes com lesões e sem lesões

cervicais em mulheres do estado de Pernambuco, Brasil. Um total de 152 amostras de raspagem cervical e sangue

foram coletadas. A detecção do DNA do HPV foi realizada utilizando-se a reação em cadeia da polimerase (PCR)

com iniciadores degenerados MY09/11 seguida de nested com os primers GP05/06. Após a amplificação, as

amostras foram purificadas e sequenciadas. Setenta e duas amostras (47,3%) de sangue foram HPV positiva e

oitenta amostras (52,7%) de sangue foram HPV negativas. Sessenta e cinco amostras (42,7%) cervicais foram

positivas e oitenta e sete (57,3%) foram negativas. Das amostras positivas no sangue, quarenta e quatro (61,1%)

não apresentaram lesões cervicais, oito (11,1%) tiveram CIN I, cinco (6,9%) apresentavam NIC II e quatro (5,5%)

tinha câncer cervical. Foram detectados 5 tipos de HPVs no sangue periférico, nomeadamente os HPVs 16, 18, 33,

58 e 66. Os cinco genótipos virais mais frequentes foram os seguintes: HPV16 (48%), HPV18 (32%), HPV33

(13%), HPV58 (5,4%) e o HPV66 (1,8%). Os HPVs 16 e 31 são os mais frequentemente detectados na região

cervical de mulheres do Nordeste do Brasil. Considerando os tipos de HPVs presentes nos dois sítios pesquisados,

foram observados um percentual de 55% das pacientes apresentaram o mesmo tipo de HPV na região cervical e no

sangue periférico. Por outro lado, 45% das pacientes apresentou tipos de HPVs no sangue diferentes do

observados na região cervical. Esse estudo descreve a presença do DNA-HPV e os genótipos virais mais

frequentes encontrado no plasma de pacientes sem lesões cervicais e com lesões cervicais, no estado de

Pernambuco, Brasil.

APOIO CAPES, FACEPE, CNPq

290


INFLUÊNCIA DA DISPONIBILIDADE DE NITROGÊNIO NA EXPRESSÃO DE GENES DO

METABOLISMO CENTRAL DA LEVEDURA INDUSTRIAL DEKKERA BRUXELLENSIS

Irina Charlot PeÑa Moreno1; Denise Castro Parente

1; Allison Andrade Mendonça

1; Marcos Antonio de Morais

Jr1; Will de Barros Pita

1; Irina Charlot PeÑa Moreno

1.


(1)Programa de Pos graduação em Genêtica, Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO Dekkera bruxellensis é uma espécie de levedura intimamente relacionada a processos de fermentação alcoólica

industrial, sendo encontrada na produção de cerveja, vinhos e em destilarias de etanol combustível. Na maioria

desses processos, incluindo a produção de bioetanol, D. bruxellensis é considerada uma levedura contaminante,

pois compete com Saccharomyces cerevisiae pelos substratos industriais. Na indústria de produção de etanol, a

disponibilidade de nitrogênio é um dos principais fatores limitantes do crescimento microbiano. Estudos prévios

mostraram que D. bruxellensis possui a habilidade de assimilar nitrato, uma fonte secundária de nitrogênio,

apontada como um importante fator de adaptação desta levedura nestes ambientes. Desta forma, é necessário

entender como fatores fisiológicos e genéticos tornam o nitrato um agente capaz de favorecer D. bruxellensis no

cenário industrial. O objetivo do presente trabalho foi descrever a influência da disponibilidade de várias fontes de

nitrogênio na expressão de genes do metabolismo central em D. bruxellensis em anaerobiose. Para avaliar a

expressão dos genes de interesse, células da levedura foram cultivadas em três diferentes combinações de fontes de

nitrogênio, em condições de micro-fermentação com controle de anaerobiose. Os resultados mostraram que os

genes do metabolismo do nitrato em D. bruxellensis são induzidos no meio que contém esta fonte, no entanto, na

presença de amônio no meio, eles não são completamente submetidos à repressão metabólica do nitrogênio, pelo

amônio. Adicionalmente, os genes que codificam permeases foram induzidos de maneira geral quando a

disponibilidade das fontes de nitrogênio estava reduzidas. Dessa forma, os genes do metabolismo central de D.

bruxellensis são regulados principalmente pela disponibilidade de nitrogênio no meio em detrimento à natureza da

fonte.Palavras-chave: metabolismo do nitrogênio; Metabolismo do nitrogênio; anaerobiose; expressão gênica,

fermentação alcoólica .

APOIO CNPq, Capes e Facepe

291


METABOLISMO DOS AMINOÁCIDOS PELA LEVEDURA DEKKERA BRUXELLENSIS

Denise Castro Parente1; Danielli Batista Bezerra Cajueiro

1; Fernanda Cristina Bezerra Leite

2; Will de Barros

Pita1; Marcos Antônio de Morais Júnior

1.



(2)UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE

PERNAMBUCO

RESUMO A levedura Dekkera bruxellensis tem despertado o interesse da comunidade científica devido a sua alta

adaptabilidade no processo industrial de fermentação alcoólica, a qual deve estar associada a sua grande

capacidade de assimilar os nutrientes disponíveis no substrato,especialmente aqueles limitantes ou que são

inacessível para Saccharomyces cerevisiae. No contexto industrial de produção de etanol, a disponibilidade de

nitrogênio é um dos fatores limitantes do crescimento microbiano. Estudos prévios mostraram o padrão diferencial

de assimilação nitrato, glutamato, glutamina e prolina como fonte de nitrogênio de D. bruxellensis. Entretanto,

pouco se sabe sobre o controle genético-metabólico de assimilação dos aminoácidos por essa levedura,

conhecimento de fundamental importância para se compreender os aspectos da adaptação de D. bruxellensis no

ambiente industrial. Diante desse contexto, este estudo avaliou aspectos fisiológicos e genéticos do metabolismo

dos aminoácidos nesta levedura. Os cultivos foram realizados em meio sintético YNB contendo glicose a

110mmol/L, um aminoácido ou uma mistura com todos os aminoácidos como fonte de nitrogênio numa

concentração inicial de 75mmol/L. Os cultivos foram conduzidos em um microfermentador Biolector com

controle de temperatura e humidade, a 30°C durante 72 horas. A disponibilidade de oxigênio foi dependente do

uso de ar comprimido (aerobiose) ou nitrogênio ultrapuro (anaerobiose). Foram avaliados o perfil de crescimento

(velocidade de crescimento exponencial e biomassa final). A extração de RNA, síntese de cDNA, marcação e

ensaio de qPCR foram realizados segundo previamente descritos para os genes de interesse(MEP1, GAP1, PUT4,

GDH1, GDH2, GLT1). Os resultados fisiológicos mostraram que cisteína promoveu o maior crescimento em

anaerobiose, o que é diferente da condição aeróbica na qual este aminoácido inviabiliza o crescimento. Em

aerobiose a asparigina promoveu o maior crescimento. Glutamato e glutamina foram igualmente utilizados em

aerobiose e em anaerobiose. O perfil de expressão gênica relativa revelou a existência de dois mecanismos de

regulação metabólica sobre o metabolismo do nitrogênio, um que controla a expressão dos genes que codificam as

permeases e outro que atua sobre a expressão dos genes que codificam as enzimas. Sendo assim, esses dados

permitem classificar os aminoácidos em diferentes níveis de assimilação e contribuem para entender a alta

adaptabilidade dessa levedura no processo industrial.

APOIO Apoio Financeiro: CNPq e Capes.

292


METAGENÔMICA NA IDENTIFICAÇÃO DAS COMUNIDADES BACTERIANAS PRESENTES EM

GRÃOS DE KEFIR

Natália Almeida Onofre1; José Antônio Santos Junior

2; Maria Carolina de Oliveira Souza

3; Cláudia Sampaio de

Andrade Lima3; Ricardo Yara


4.


(1)Departamento de Antibióticos da Universidade Federal de Pernambuco;

(2)Departamento de Engenharia

Biomédica da Universidade Federal de Pernambuco; (3)

Departamento de Biofísica e Radiobiologia da


Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco

RESUMO Kefir é uma associação microbiana que, através de processo fermentativo produz um liquido de consumo in natura

e um exopolissacarídeo conhecido como kefirana. Técnicas dependentes de cultivo e métodos moleculares

tradicionais vêm sendo usados para caracterizar a microbiota do kefir. Entretanto, grande parte da diversidade não

é recuperada em meios de cultura. Com isso, o trabalho teve como objetivo analisar a população microbiana

presente em uma amostra de kefir de água utilizando método independente de cultivo. O DNA foi extraído

diretamente a partir dos grãos do kefir, as bibliotecas foram construídas utilizando iniciadores específicos para o

gene 16S rRNA e sequenciadas em plataforma Illumina 2500 HiSeq. As tags geradas a partir de montagem foram

filtradas e artefatos quiméricos, removidos. As sequencias foram então usadas para gerar o conjunto de unidades

taxonômicas operacionais (OTUs) e para anotação das espécies, onde sequências com ≥ 97% de similaridade

foram atribuídas a uma mesma OTU. Foram ainda estudadas as relações filogenéticas de diferentes OTUs e a

complexidade e diversidade das amostras (duas repetições), por análise de diversidade alfa. No total, 53.588 tags

efetivas com anotação foram obtidas, e as sequencias, atribuídas a 96 OTUs (assumindo 97% de similaridade). Em

media, 100 % das sequencias efetivas puderam ser agrupadas a nível de reino, filo, classe e ordem; 99% a nível de

família; 90% a nível de gênero e 68% a nível de espécie. Com base na análise da abundância relativa, ao nível do

filo, Proteobacteria (62%), Firmicutes (29%) e Actinobacteria (9%) foram os principais filos presentes. Análise do

Heat map mostrou que Sphingomonas wittichii; Clostridium tyrobutyricum; Ethanoligenens spp;

Bifidobacteriaceae e Clostridiaceae SMB53 foram as espécies mais abundantes, entretanto o gênero com maior

diversidade de espécies foi Lactobacillus. O número de tags efetivas foi suficiente para discriminar a diversidade

da amostra. Comparado com outros estudos que utilizaram abordagem metagenômica, os resultados sugerem que o

perfil da microbiota é variável, sendo possível identificar prevalência de novas espécies, o que amplia o

conhecimento sobre a diversidade microbiana do kefir. A pesquisa demonstrou, assim, que foi possível estabelecer

o padrão de composição bacteriana dos grãos de kefir em estudo.

293


OBTENÇÃO DE LINHAGENS TRANSGÊNICAS DE LEISHMANIA INFANTUM PARA

INVESTIGAÇÃO IN VIVO DA FUNÇÃO DOS HOMÓLOGOS DE FATORES DE INICIAÇÃO DA

TRADUÇÃO EIF4E5 E EIF4E6

Thaíse Yasmine Vasconcelos de Lima Cavalcanti1; Gustavo Barbosa de Lima

2; Amaranta Muniz Malvezzi

2;

Osvaldo Pompílio de Melo Neto2.


(1)PROGRAMA DE PÓS GRADUAÇÃO EM GENÉTICA-PPGG/UFPE;

(2)CENTRO DE PESQUISAS AGGEU

MAGALHÃES/FIOCRUZ-PE

RESUMO Nos tripanossomatídeos o perfil da expressão gênica revela que vários genes são regulados predominantemente a

nível pós-transcricional, envolvendo eventos durante a tradução e pós-traducionais. Na tradução em eucariotos, a

etapa da iniciação é o evento mais regulado e que requer a cooperação de diversos fatores de iniciação,

denominados de eIFs (eukaryotic Initiation Factors). Dentre estes se destaca o complexo eIF4F, formado por três

subunidades (eIF4A, eIF4E e eIF4G). O eIF4E é uma proteína de ligação específica ao cap e que atua estimulando

a tradução cap-dependente participando do recrutamento do mRNA através de sua ligação específica com o

eIF4G, este que atua como âncora do complexo. Em tripanossomatídeos existem dois homólogos do eIF4E de L.

infantum que estão sendo estudados e não foram descritos formalmente, EIF4E5 e EIF4E6. Este trabalho teve

como objetivo a criação de ferramentas para estudar os fatores EIF4E5 e EIF4E6, seus principais domínios de

ligação e a sua importância para a viabilidade celular. Visto que já são conhecidos os sítios de interação do eIF4E

com o cap e com o eIF4G, os seguintes motivos foram mutados: W45A (ligação ao EIF4G), W53A (ligação ao

cap), Y45A (ligação ao EIF4G) e Y53A (ligação ao cap). Para isso, foi utilizada a técnica de Mutagênese por

PCR, subdividida em duas etapas: na primeira o início do gene foi amplificado até onde seria inserido a mutação, e

a mutação desejada foi inserida no primer reverso. Numa segunda PCR foi feita uma amplificação do gene

completo utilizando o produto da primeira PCR como um megaprimer iniciador com o primer reverso comum do

fim do gene. Assim foram obtidos os genes completos com as mutações desejadas. Estes mutantes passaram por

etapas de clonagem gênica no vetor pGEM®-T Easy Vector Systems. Em seguida as construções foram enviadas

para o sequenciamento e também confirmadas por digestão enzimática. Subsequentemente os fragmentos foram

subclonados em plasmídeo de expressão pSP-BT1-Y-Neo-alfa para transfectá-los em L. infantum a fim de analisar

a viabilidade, morfologia e crescimento celular. As células já estão sendo cultivadas para esta finalidade. Para as

análises de imunoprecipitação, foram produzidas e purificadas proteínas recombinantes do E5 e E6. Anticorpos

disponibilizados foram purificados e testados por Western Blot contra proteínas endógenas e recombinantes, estas

ferramentas moleculares geradas são essenciais para a investigação das funções desses fatores. Apoio: CAPES.

APOIO CAPES

294


PADRÕES DE EXPRESSÃO GÊNICA E ALTERAÇÕES MORFOLÓGICAS LIGADAS AO

SILENCIAMENTO DO GENE RHO1 DE MONILIOPHTHORA PERNICIOSA

Franscielly Maria Lopes Nakayama1; Elza Thaynara Cardoso de Menezes Assis

2; Leila de Oliveira Dias

3;

Patricia Alves Casaes Alves4; Virgínia Lúcia Fontes Soares

5; Ana Cristina Caribe dos Santos

5; Acássia Benjamim

Leal Pires6; Fátima Cerqueira Alvim

5.


(1)Discente do curso de Agronomia DCAA/UESC;

(2)Discente de pós-graduação em Genética e Biologia celular

PPGGBM/UESC; (3)

Graduada em Biomedicina - UESC; (4)

Discente de pós-graduação em Biologia e

Biotecnologia de Microrganismos PPGBBM/UESC; (5)

Docente do Curso de Ciências Biológicas DCB/UESC; (6)

Docente do Curso de Ciências Biológicas DCB/UNEB

RESUMO O fungo basidiomiceto Moniliophthora perniciosa é o agente causal da doença vassoura-de-bruxa em Theobroma

cacao. A introdução do M. perniciosa na região cacaueira da Bahia afetou fortemente a produção de cacau. Porém,

essa ainda é a cultura que mais movimenta recursos no sul do estado. Com isso, desenvolver estratégias de

combate à doença é uma necessidade regional. Identificar genes essenciais ao desenvolvimento do ciclo de vida do

patógeno é uma tática importante, visando sugerir alvos moleculares no o progresso da doença. O gene Rho1 foi

detectado em bibliotecas de cDNA, representativas do ciclo de vida do M. perniciosa, tendo a expressão

aumentada no momento da formação do basideoma do fungo. RHO é uma GTPase de membrana, sua atividade foi

relacionada com crescimento e composição da parede celular de diversos eucariotos. Os objetivos deste trabalho

foram obter linhagens de M. perniciosa transgênicas, silenciadas via RNAi para rho1 e analisar as mudanças

morfológicas do micélio com a expressão deste gene diminuída. Foram obtidas 3 linhagens transgênicas e foi

comprovado, via de RTqPCR, que o nível de transcritos de rho era variável nas 3 linhagens. Esse nível foi menor

do que o observado nas linhagens controle (não silenciado), o resultado comprova que houve o silenciamento para

rho mantendo-se, contudo, um nível basal do transgene para que o organismo seja viável. Apesar da redução no

nível dos transcritos de rho1 não houve modificações de crescimento e morfologia do micélio analisadas em

microscopia. O comportamento micelial do M. perniciosa, silenciado e controle, também foi analisado quando

crescido na presença de glicose ou glicerol. Esta iniciativa foi feita pois trabalhos anteriores, sugeriram que o

glicerol poderia atuar como indutor na expressão de Rho1 em M. perniciosa. Análises de RTqPCR, demonstraram

que existe uma resposta diferenciada em nível de expressão gênica a depender da fonte de carbono utilizada pelo

fungo. Observamos que o nível de transcritos de Rho1 em M. perniciosa silenciado crescido em glicerol foi 3x

superior ao do fungo silenciado crescido na presença de glicose. Similarmente o fungo controle, crescido na

presença de glicerol, tem o nível de transcritos de rho aumentado em 6x quando comparado com o crescimento em

glicose. Esses resultados reforçam uma importância do glicerol como um sinalizador para a expressão de Rho1 no

patossistema, sendo esta a primeira vez que uma fonte de carbono é associada a expressão deste gene.

APOIO Fapesb, Finep, Mapa

295


PERFIL DE EXPRESSÃO DE MRNAS CODIFICANTES DA PROTEÍNA DE VIRULÊNCIA GP63 DE

LEISHMANIA BRAZILIENSIS

Artur Leonel de Castro Neto1; Antônio Mauro Rezende

2; Franklin Barbalho Magalhães

3; Osvaldo Pompilio de

Melo Neto2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco - UFPE;

(2)Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães - CPqAM/FIOCRUZ;

(3)Faculdade ASCES-UNITA

RESUMO As leishmanioses são doenças infecto-parasitárias causadas por protozoários flagelados da família

Trypanossomatidae e genêro Leishmania. Para sobreviver no hospedeiro mamífero, esses parasitos produzem

proteases, que os protegem da resposta imune inata do hospedeiro. Dentre essas proteases, a GP63 é a principal

representante, por ser a mais frequente na superfície celular e ter múltiplas funções no escape do sistema imune.

Essa proteína é codificada por múltiplos genes, que possuem quantidades variáveis entre as espécies de

Leishmania, possuindo um maior número nas espécies pertencentes ao subgênero Viannia, principalmente na L.

braziliensis. Este estudo buscou avaliar o perfil de expressão de mRNAs codificantes de GP63 de L. braziliensis,

investigando quantos, entre seus múltiplos genes, são expressos simultaneamente e avaliando diferenças nos níveis

de expressão entre os mesmos. Para isso optou-se pelo sequenciamento em larga escala dos mRNAs usando

ferramentas de sequenciamento de nova geração. Inicialmente, foi extraído o RNA total de células de L.

braziliensis cepa 2904 na fase logarítmica de crescimento de formas promastigota, seguida da construção de

biblioteca de cDNA e sequenciamento utilizando a plataforma Miseq (Illumina). Após o sequenciamento de

biblioteca e análises de bioinformática para obtenção dos resultados, transcritos de todos os genes anotados foram

identificados demonstrando a expressão simultânea de múltiplos genes, dado inédito na literatura. Entretanto, os

níveis dos mRNAs transcritos variaram bastante, sugerindo que alguns deles são preferencialmente expressos em

detrimento de outros. Os dados sugerem que o mecanismo de expressão desses genes não se assemelha ao de

Trypanosoma brucei, onde suas proteínas de defesa contra o sistema imune, as VSG's, apresentam um padrão não

simultâneo de expressão de seus mRNAs. Contudo, esses dados sugerem que a expressão diferencial e preferencial

de genes de GP63 de Leishmania possivelmente também esteja envolvida na evasão do reconhecimento pelo

sistema imune do hospedeiro.

APOIO CAPES e CNPq

296


PREVALÊNCIA E VARIABILIDADE INTRATÍPICA DO GENE L1 E DA REGIÃO LONGA DE

CONTROLE (LCR) DO PAPILOMAVÍRUS HUMANO TIPO 58 EM MULHERES INFECTADAS DA

REGIÃO NORDESTE DO BRASIL

Lígia Rosa Sales Leal1; Ana Pavla Almeida Diniz Gurgel

1; Bárbara Simas Chagas

1; Jacinto da Costa Silva Neto

2;

Maria Tereza Cartaxo Muniz3; Antonio Carlos de Freitas

1.


(1)Laboratório de Estudos Moleculares e Terapia Experimental (LEMTE), Departamento de Genética,


Departamento de Histologia e Embriologia, Universidade Federal de

Pernambuco; (3)

Laboratório de Biologia Molecular, Centro de Oncohematologia Pediátrica, Universidade de

Pernambuco

RESUMO O câncer cervical é o quarto tipo de neoplasia mais prevalente no mundo, e em mais de 90% dos casos está

associado à infecção por Papilomavírus Humano (HPV) de alto risco oncogênico, sendo o HPV 58 um deles. No

entanto, apenas a infecção por HPV não é suficiente para o desenvolvimento de lesões cervicais ou câncer

cervical. Fatores ambientais e genéticos do hospedeiro e do vírus estão também relacionados a carcinogênese

cervical. Dentre os fatores genéticos do vírus, acredita-se que modificações nucleotídicas no gene L1 e na Região

Longa de Controle (LCR) podem estar relacionadas aos diferentes potenciais oncogênicos e capacidade de evasão

ao sistema imune de hospedeiros infectados entre diversos tipos virais. Assim, o presente estudo realizou uma

análise de prevalência do HPV 58 e variabilidade genética do gene L1 e LCR deste vírus em amostras de raspado

cervical de mulheres infectadas nos Estados de Pernambuco, Sergipe e Alagoas. Para isso, foi realizada a detecção

do DNA viral em 357 amostras biológicas, e amplificação de fragmentos do gene L1 e da LCR do HPV 58 através

da técnica da Reação em Cadeia da Polimerase (PCR), que foram posteriormente sequenciados. Com o auxílio de

ferramentas in silico, foram feitas análises em busca de polimorfismos e predições de epítopos de células B e T

para o gene L1, bem como a predição de sítios de ligação de fatores transcricionais celular e viral na LCR. Os

resultados obtidos no presente trabalho demonstram prevalência do HPV 58 de 6,4% em Pernambuco, 13,7% em

Sergipe e 17,9% em Alagoas. A partir da análise de variabilidade genética, foram observadas sete variações não-

sinônimas inseridas em regiões de epítopos de células B e T no gene L1. Além disso, foram encontradas doze

alterações nucleotídicas em sítios de ligação para fatores transcricionais na LCR. Assim, são necessários estudos

funcionais com as alterações nucleotídicas encontradas para esclarecer o impacto dessas variações em relação a

progressão do câncer.

APOIO Este trabalho foi financiado pelo Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq) e pela

Fundação de Amparo à Ciência e Tecnologia do Estado de Pernambuco (FACEPE).

297


PRIMEIRA IDENTIFICAÇÃO DE PRÓFAGO NA LINHAGEM INDUSTRIAL LACTOBACILLUS VINI

JP7.8.9

Tiago Luiz Santana Calazans1; Allyson Andrade Mendonça

2; Marcos Antonio de Morais Jr

3.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Laboratório de genética microbiana;


Pernambuco, pós-graduação em genética; (3)

Universidade Federal de Pernambuco, departamento de genética

RESUMO Lactobacillus vini é uma espécie homofermentadora capaz de fermentar pentoses e hexoses, inicialmente isolada

de mosto de uva da fermentação de vinho. No nordeste brasileiro, L. vini é abundante no final da fermentação

alcoólica(Lucena et al. 2010). O genoma de L. vini JP7.8.9 foi sequenciado e depositado sob o número de acesso

AHZA00000000(Lucena et al. 2012). Foram identificadas ORFs relacionadas a bacteriófago, presentes no contig

com o número de acesso AHZA00000138.1. Por serem associados com a transferência horizontal de genes, os

prófagos podem desempenhar um papel na diversificação dos genomas bacterianos. Este trabalho caracterizou in

silico um elemento profágico encontrado no genoma da linhagem JP 789 de L. vini. Com base nos dados de

anotação da ferramenta RAST foi realizada a montagem in silico do mapa genético do fago, utilizando a

ferramenta PHAST. Para confirmar a presença do fago foram desenhados primers, usando a ferramenta Primer 3

plus, para o gene Head Protein e o amplicon foi sequenciado. A análise in silico do contig AHZA00000138.1

demonstrou a existência de um prófago intacto, com conteúdo GC de 37,96%, semelhante ao fago descrito

em Lactobacillus plantarum Sha1. Os genes foram agrupados em quatro módulos: replicação, empacotamento,

estrutural e de lise. A presença do fago foi confirmada a partir do sequenciamento do gene Head Protein, que

gerou um amplicon com 100% de identidade com a sequência depositada. Com a construção do mapa físico, e a

comparação com os módulos de Sha1 observou-se alta similaridade entre os genes dos módulos estrutural e

empacotamento, os mais conservados entres os fagos da ordem caudovirales. Nesta comparação, apenas a proteína

da fibra da cauda está ausente. Os módulos de lise e replicação não tiveram similaridade significativa, com

exceção da proteína de replicação e o ativador transcricional RinA, indicando que o fago estudado não é Sha1 e

potencialmente uma nova espécie . Em adição, foi notada a ausência do anti-repressor, fator de transcrição

responsável pela ativação de genes da fase lítica. A presença de profagos no genoma bacteriano confere proteção à

infecção por fagos filogeneticamente próximos e pode conferir características seletivamente vantajosas ao

ambiente em linhagens específica. Esta é a primeira identificação de um prófago presente em linhagem industrial

de Lactobacillus vini.

298


PRIMEIRO RELATO DE BLAOXA-143-LIKE EM ISOLADOS CLÍNICOS DE ACINETOBACTER

BAUMANNII NO NORDESTE DO BRASIL

Raíza Gabriela de Souza Santos1; Rodrigo Tenório Gomes Pereira

1; Ana Caroline Oliveira Alves Ribeiro

1;

Wendell Palôma Maria dos Santos1; Anna Carolina Soares Almeida

2; Márcia Maria Camargo de Morais

1; Felipe

Lira de Sá Cavalcanti3.


(1)Laboratório de Resistência Microbiana, ICB/UPE ;

(2)Laboratório de Resistência Microbiana, ICB/UPE e

Universidade Federal Rural de Pernambuco; (3)

Laboratório de Resistência Microbiana, ICB/UPE e Departamento

de Microbiologia, CPqAM/Fiocruz

RESUMO Acinetobacter baumannii é um cocobacilo Gram-negativo não fermentador que pode ser isolado do sangue, trato

respiratório e urinário muitas vezes como causa de infecção nosocomial. Isolados bacterianos resistentes a

múltiplas classes de antimicrobianos tem sido encontrado com frequência no ambiente hospitalar, levando a

necessidade de um maior entendimento a respeito dos mecanismos responsáveis por este fenótipo. Foram obtidos

dez isolados de um hospital de Recife. A identificação da espécie foi feita através de testes bioquímicos e do

sistema automatizado Vitek®. Para a tipagem molecular dos isolados, foi utilizada a REP (Repetitive Extragenic

Panlidromic) PCR. O teste fenotípico para identificação de metalo-beta-lactamases (MBLs) se deu através de

método disco-aproximação com 2-MPA. O DNA genômico dos isolados foi obtido através do kit Instagene. A

identificação dos genes que codificam as OXA (beta-lactamase de classe D), integrases (Intl1 e 2), KPC (beta-

lactamase de classe A) e do elemento de inserção ISAba1 ocorreu por meio de PCRs multiplex e simplex. A

maioria dos isolados mostrou um perfil de resistência extremo às drogas (XDR), sendo sensíveis apenas à colistina

e tigeciclina. Na tipagem, quatro isolados foram considerados clones. O teste de MBL foi negativo para todos os

isolados. Na PCR multiplex, todos os isolados amplificaram o blaOXA-51-like, que se trata de um gene intrínseco,

confirmando a espécie. Também houve amplificação de todos os isolados para o blaOXA-143-like, mostrando a

presença de uma OXA recentemente descrita no Brasil e inédita no Nordeste. Dos nove isolados, um portava

simultaneamente dois genes de OXA adquirida (blaOXA-23 e blaOXA143), caso até o momento nunca descrito na

literatura. O gene blaKPC não foi detectado em nenhum dos isolados. Todos os isolados foram negativos para Intl1,

porém três isolados foram positivos para o Intl2, evidenciando a provável presença de integron de classe 2, que

está relacionado com a resistência a aminoglicosídeos. Houve amplificação de todos os isolados para a sequência

de inserção ISAba1, porém esta não estava associada aos genes de OXA em nenhum dos isolados. Esses achados

mostram que a produção de OXA parece ser um mecanismo de resistência importante em A. baumannii e que

medidas de controle e vigilância precisam ser melhoradas no hospital avaliado, ainda que a presença adicional de

outros mecanismos também deva ser considerada para justificar o perfil de alta resistência encontrado.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico ? CNPq

299


PRODUÇÃO DE GLICOPROTEÍNA DO VÍRUS DA LARINGOTRAQUEITE INFECCIOSA DAS AVES

FUSIONADA A PROTEÍNA LIGANTE DE MALTOSE (MBP) EM BACTÉRIA ESCHERICHIA COLI

Laryssa Hayanne dos Santos Gomes1; Jackeline Gomes da Silva

2; André Luiz Santos de Jesus

2; Karin Florencio

Lins de Paiva Fontes2; Luiz Cosme da Silva Junior

2; Roberto Soares Castro

2.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Centro Universitário Mauricio de Nassau, UNINASSAU,

Recife, PE; (2)

Universidade Federal Rural de Pernambuco, UFRPE, Recife, PE

RESUMO A Laringotraqueíte Infecciosa das Aves (LTI) é uma doença respiratória aguda e altamente contagiosa que

acomete o trato respiratório superior das aves. A infecção causada pelo vírus da laringotraqueíte infecciosa causa

perdas econômicas para a indústria avícola decorrentes da queda na produção de ovos, diminuição no desempenho

de frangos, alta morbidade e mortalidade. O vírus da LTI é um Herpesvírus Gallideo do tipo 1 pertencente à

família Herpesviridae e ao gênero Iltovirus. Este vírus tem uma afinidade com o epitélio respiratório das aves,

causando uma infecção aguda da laringe e traqueia. O genoma viral apresenta genes que codificam glicoproteínas

que atuam como fatores de virulência e sítios de reconhecimento virais para a célula hospedeira. A glicoproteína C

(gC) é uma das mais imunogênicas do LTI e tem sido alvo para a proteção vacinal e o diagnóstico da infecção. O

objetivo deste estudo foi o de produzir a proteína recombinante gC fusionada à proteína ligante de maltose (MBP)

em bactéria Escherichia coli para a identificação de animais infectados com o vírus da LTI. Atualmente, os kits

para diagnóstico da LTI utilizam partículas virais cultivadas em cultura de células, o que gera vários

inconvenientes. A proteína MBP ajudará na solubilidade da proteína recombinante diminuindo as chances de

formação de corpos de inclusão e aumentando a produtividade. Para tal objetivo, uma porção do gene que codifica

a glicoproteína gC foi clonada no vetor de expressão pMAL-c4x. A construção gC/pMAL foi confirmada por

digestão enzimática e sequenciamento. Depois disso, a E. coli estirpe BL21 foi transformada com a construção, a

fim de produzir o gC recombinante. A indução da expressão do gene gC foi realizada por IPTG (0,2 mM), 25º C,

durante 4 horas. O extrato proteico da cultura induzida foi analisado e uma banda de ~ 64 kDa foi detectada por

Western blot utilizando um anticorpo contra uma tag de Histidina adicionada a proteína recombinante. Em

seguida, a proteína gC foi avaliada quanto a sua capacidade para detecção de anticorpos contra o vírus da LTI

como antígeno em ELISA utilizando soros de animais infectados naturalmente com LTI. Os resultados do ELISA

foram satisfatórios com boa relação entre animais positivos e negativos (P/N), que mostra a funcionalidade da

proteína recombinante produzida em E. coli e a sua potencial utilização como antígeno em ELISA para o

desenvolvimento de um kit para diagnóstico da LTI.

APOIO Apoio Financeiro: CNPq e FACEPE.

300


PROSPECÇÃO E OBTENÇÃO DE UM BIOSSURFACTANTE DERIVADO DE UMA BIBLIOTECA

METAGENOMICA

Sinara Carla da Silva Araújo1; Rita de Cássia Barreto Silva Portela

1; Daniel Chaves de Lima

1; Uaska Bezerra da

Silva1; Lucymara Fassarella Agnez Lima

1.


(1)UFRN

RESUMO Os microrganismos apresentam uma imensa diversidade genética e estão presentes em toda biosfera, no entanto

estima-se que apenas 1% das espécies pode ser cultivada por técnicas laboratoriais padrão. Dentro dessa

diversidade existe um enorme pool genético e biológico a ser explorado. A metagenômica tornou possível o acesso

direto aos genomas microbianos derivado de amostras ambientais. A metodologia permite obter informação

funcional de genes e proteínas, assim como a identificação de novos produtos com interesse biotecnológico nas

mais diversas áreas do conhecimento. Áreas contaminadas com petróleo são caracterizadas por um grande

acúmulo de hidrocarbonetos e os surfactantes são utilizados como coadjuvantes em biorremediação. Sendo assim,

a abordagem metagenônima foi utilizada para selecionar genes envolvidos no processo de degradação e

emulsificação de hidrocarbonetos. Em um trabalho anterior, o DNA ambiental (eDNA) foi extraído a partir de

amostras de sedimento coletadas em um rio salino do Rio Grande do Norte (Brasil), a biblioteca metagenômica foi

construída e analisada por seleção funcional. Os clones capazes de degradar o óleo foram avaliados quanto à

capacidade de sintetizar biossurfactante. Vários clones foram sequenciados e analisados, sendo um clone

selecionado para o presente estudo, revelou uma ORF com 897 pb, 298 aminoácidos, referente a uma proteína de

peso molecular próximo a 32 kDa. A busca por homologia no GenBank revelou similaridade com a sequência que

codifica uma proteína hipotética de representantes da família Halobacteriaceae, que foram mostradas recentemente

como produtoras de biossurfactantes. A presença da sequência codificante inserida e do fenótipo adquirido foram

confirmadas. Primers foram desenhados e sua ORFs amplificada por PCR. Em seguida, foram subclonadas em

vetor de expressão pHis-parallel1, que contem uma cauda de histidina, para expressão e posterior purificação da

proteína de interesse. O teste de emulsificação foi realizado, utilizando diferentes fontes de hidrocarbonetos, para

confirmação da atividade e apresentou resultado positivo. O biossurfactante foi purificado através de precipitação

ácida, apresentando também atividade emulsificante. Esse estudo foi o primeiro no Brasil a relatar uma possível

proteína com atividade biossurfactante obtida a partir de uma abordagem metagenômica.

APOIO CNPq e CAPES.

301


PROTEÔMICA DIFERENCIAL DE BACILLUS THURINGIENSIS COM NÍVEIS DISTINTOS DE

PATOGENICIDADE PARA DIATRAEA SACCHARALIS (FABR.) (LEPIDOPTERA: CRAMBIDAE)

Paulo Geovani Silva Martins1; Adauto Gomes Barbosa Neto

2; Amaro de Castro Lira Neto

3; Tercílio Calsa

Júnior2.


(1)Departamento de Genética, CCB, UFPE, Recife, PE;IInstituto Agronômico de Pernambuco, IPA, Recife, PE;

(2)Departamento de Genética, CCB, UFPE, Recife, PE;

(3)IInstituto Agronômico de Pernambuco, IPA, Recife, PE

RESUMO O Bacillus thuringiensis (Bt) é uma bactéria Gram-positiva cosmopolita em forma de bastonete conhecida pela

expressão de cristais proteicos (proteínas Cry) com atividade entomopatogênica. Estes cristais são ativos contra

diversas ordens de insetos e seu mecanismo de ação é iniciado após ingestão, envolvendo receptores específicos

do intestino médio, e outros fatores de virulência expressos pelo Bt com ação sinérgica à das proteínas Cry.

Estudos em nível proteômico têm sido realizados buscando a identificação destes fatores de virulência e/ou

regulação para maior compreensão dos mecanismos envolvidos na sua patogenicidade. Este trabalho teve por

objetivo a comparação dos perfis proteômicos utilizando eletroforese bidimensional (2D-PAGE) dos isolados

Bt.Pri 4.7 e Bt.Pri 4.29; Bt.Pri 4.7 e da estirpe B. thuringiensis subsp. Kurstaki (HD-1), portadores do gene cry2 e

dos isolados Bt.CDi 1.3 e Bt.CDi 1.11, portadores do gene cry9. A escolha dos isolados para a comparação das

proteínas diferencialmente expressas foi atrelada aos graus divergentes de patogenicidade observados in vivo

contra Diatraea saccharalis, uma das mais importantes pragas da cultura da cana-de-açúcar. As proteínas totais

solúveis dos isolados foram extraídas após 48 h de crescimento. Após verificada a integridade em SDS-PAGE, as

proteínas foram focalizadas isoeletricamente, separadas por peso molecular e as imagens dos géis foram

digitalizados em scanner de transparência. Em seguida os géis foram analisados em software de análise

ImageMaster 2D Platinum v.7.05 (GE Life Sciences) que possibilitou a detecção de 1.830 spots, dos quais 229

foram considerados proteínas diferencialmente expressas (DEPs). As DEPs foram digeridas com tripsina para

identificação via espectrometria de massas. Os espectros gerados foram analisados para identificação presumível

das proteínas contra bancos de dados de acesso público através do programa Mascot. Entre as proteínas

identificadas, algumas estão envolvidas em diferentes funções; como fator de elongação G com ação imunogênica,

proteína ribosomal S2 que atua na mediação de toxicidade, shikimato quinase envolvida na produção de proteínas

de toxicidade inespecífica em Bt, e a proteína A do estágio IV de esporulação, necessária na produção de esporos e

cristais proteicos. Os resultados obtidos podem contribuir para o entendimento dos diferentes graus de

patogenicidade entre isolados de Bt que apresentam genes cry de mesma classe.

APOIO CAPES, IPA

302


PROTEOMICS ANALYSIS OF CHROMOBACTERIUM VIOLACEUM SUBMITTED TO SIMULATED

MICROGRAVITY

Jonathas Diego Lima Santos1; Daniel Chaves de Lima

1; Bianca Alves Pauletti

2; Silvia Regina Batistuzzo de

Medeiros1.


(1)Universidade Federal do Rio Grande do Norte;

(2)Laboratório Nacional de Biociências - LNBio

RESUMO Chromobacterium violaceum is a Gram-negative bacteria, which has been found at tropical and subtropical

regions. Some proteomic studies performed with this bacterium have demonstrated its ability to adapt to

environmental challenges such as high iron concentration and oxidative stress exposure. However, no study was

made with this specie submitted to simulated microgravity (SMG). SMG refers to conditions in which the gravity

is artificially reduced to less than 1 G. Life on Earth has evolved at 1 G and study SMG is important to understand

the overall changes that organisms might face in space travels. Therefore, the aim of this study was to characterize

the response of C. violaceum, as free-living model organism, cultured at SMG, using proteomics techniques in

order to understand how this bacterium response to this stress. SMG was achieved by rotating in a horizontal

direction parallel to the gravitational vector on the rotating cell culture systems. SMG was conducted at a speed of

40 rpm for a period of 24 hours to obtain the growth curve every 2 hours. Total protein extraction was made in two

times: 5 and 12 hours, corresponding to early (MG5) and late (MG12) exponential phase, respectively. After

trypsinization, samples were analyzed with Q-TOF mass spectrometer. In our results, we detected 155 proteins

during MG5, from which 18 proteins were upregulated, 19 down-regulated and 17 proteins were exclusive when

compared to GN5. In MG12 were identified 173 proteins, from which 17 were upregulated, 22 down-regulated

and 28 exclusive when compared to control. When comparing the amount of proteins identified in both early (5

hours) and late (12 hours) exponential phase, we detected 212 proteins during MG5 and 193 during MG12 from

which 145 of them are common to both phases. We also observed a decrease of C. violaceum growth at SMG

when compared to bacterial cultures submitted to normal gravity. Proteins correlated with transcriptional processes

and release of energy through aerobic pathways were down-regulated, while proteins involved with the inhibition

of transcription, anaerobic pathway and cell survival had their expression increased, indicating a decrease in

metabolism and proliferation of C. violaceum. SMG can cause alterations in respiratory metabolism, decreasing of

transcription and translation rates and, consequently, C. violaceum proliferation.These data can be understood as a

strategy for maintenance and survival at reduced gravity environment.

APOIO CAPES; CNPq

303


REDUÇÃO NA EXPRESSÃO DE GENES CENTRAIS DA SÍNTESE DO PEPTIDOGLICANO EM

LACTOBACILLUS VINI EM ESTRESSE ÁCIDO SUGERE UM MECANISMO DE CONSERVAÇÃO DE

ENERGIA

Allyson Andrade Mendonça1; Carolina Elztein

2; Will de Barros Pita

3; Marcos Antônio Morais Jr

2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, programa de pós-graduação em genética;


Pernambuco, departamento de genética; (3)

Universidade Federal de Pernambuco, departamento de antibióticos

RESUMO Lactobacillus vini é um importante componente da microbiota contaminante do processo de fermentação alcoólica

industrial predominando na população ao fim da fermentação. Como principal tratamento da contaminação, a

indústria emprega a lavagem com ácido sulfúrico de todos os microorganismos no processo levando a um intenso

estresse ácido. Para que L. vini consiga se estabelecer no processo é necessário que sobreviva a esse tratamento e

que mantenha suas estruturas celulares funcionais. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito do estresse por

ácidos orgânicos (láctico e acético) e por ácido hidroclorídrico na expressão dos genes envolvidos na biosíntese do

peptidoglicano. Foram realizados tratamentos de 1 hora em meio MRS contendo os agentes estressores em

concentrações sub-MIC de 60 mM de lactato, 150 mM de acetato e 300 mM H+ (HCl pH 3.5). Após os

tratamentos as células foram coletadas por centrifugação e o RNA foi extraído com o Trizol e purificado com o Kit

illustra RNAspin (GE). O RNA íntegro foi usado na síntes de cDNA com o kit ImProm-II™ Reverse

Transcription (Promega). Foram analisadas a expressão de genes representantes da via de síntese do

peptidoglicano, do operon DLT, da via de re-assimilação da parede celular e do metabolismo da D-alanina. Os

resultados indicam que o tratamento ácido e com ácido láctico promoveram redução na expressão de genes

centrais para síntese do peptidoglicano, mas não com o tratamento com ácido acético. Por outro lado, os genes da

via de re-absorção estavam levemente mais expressos. Estes dados mostram que os tratamentos promovem

redução na taxa de transcrição de genes importantes para a síntese da parede celular similar ao visto com sais de

bile. Isto sugere que nesses tratamentos a célula diminui o consumo do carbono para síntese da parede, tornando-o

mais disponível para produção de energia. Isto deve aumentar o aporte energético para lidar com os danos

induzidos pelo estresse.

APOIO FACEPE

304


REPORT OF COLLETOTRICHUM SCOVILLEI CAUSING ANTHRACNOSE ON BELL PEPPER IN

BRAZIL.

Emmanuelle Rodrigues Araújo1; Nelson Bernardi Lima

1; Marília Wortmann Marques

1; Rejane Rodrigues Costa

Carvalho1; Delson Laranjeira

1.


(1)Departamento de Agronomia, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, 52171-900, Pernambuco,

Brazil

RESUMO Bell pepper fruits (Capsicum annuum L.) (cv. Atlante) showing anthracnose symptoms were observed in organic

farmings during surveys conducted in Pernambuco state, Brazil, in 2011. The aim of this word was to identify and

characterize molecularly an isolate of Colletotrichum spp. obtained organic peppers. Pieces (5 mm) of necrotic

tissue were surface sterilized for 1 min in 1.5% NaOCl, washed twice with sterile distilled water, and plated onto

potato dextrose agar (PDA). Plates were incubated at 28°C for 10 days and colonies that were morphologically

similar to species of Colletotrichum were transferred to PDA. Identification was made using phylogenetic analysis.

One isolate (CMM 0092) presented colonies that had white aerial mycelia and orange conidial mass, cylindrical,

aseptate and hyaline conidia. Morphological and cultural characterizations were consistent with the description of

Colletotrichum scovillei Damm. PCR amplification by primers GDF1 and GDR1 and partial sequencing of the

gene glyceraldehyde 3-phosphate dehydrogenase (GAPDH) were performed to confirm the identification. Using

published GAPDH data for C. scovillei, a phylogenetic analysis was made via Bayesian inferences, which show

that the isolated fungi belong to the C. scovillei clade. Sequence of the isolate obtained in this study was deposited

in GenBank (KF137639), and culture was deposited in the Culture Collection of Phytopathogenic Fungi of the

Universidade Federal Rural de Pernambuco (CMM, Recife, Brazil). Pathogenicity test was performed with the C.

scovillei strain on bell pepper fruits cv. Bruno. Fruits were wounded at the medium region by pushing the tip of

flamed needle through the surface of the skin to a depth of 3 mm, and 6 μl of conidial suspension (1x106

conidia/ml) was placed in shallow wounds. Sterile water without fungal conidia was used as control. Inoculated

fruits were maintained in humid chamber for 2 days at 25°C. The experiment was arranged in a completely

randomized design with four replicates per treatment (isolate or control) and four fruits per replicate. After 10 days

anthracnose symptoms developed that were typical of diseased fruit in the field. C. scovillei was successfully

reisolated from symptomatic fruits to fulfill Koch's postulates. C. scovillei was recently described from bell pepper

in Indonesia and Capsicum sp. in Thailand. To our knowledge, there are a few reports of C. scovillei causing

anthracnose on bell pepper in Brazil.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico - CNPq

305


SELEÇÃO DE TRICHODERMA SPP. PARA CONTROLE BIOLÓGICO: DIFERENTES MECANISMOS

DE ANTAGONISMO REVELAM VARIAÇÃO FENOTÍPICA INTER- E INTRAESPECÍFICA.

Rodinê de Oliveira Freitas Júnior1; Michael Carvalho Santos Lavigne

1; Ronaldo Costa Argôlo Filho

1; Leandro

Lopes Loguercio1.


(1)Universidade Estadual de Santa Cruz

RESUMO Existem vários fatores que podem interferir na bioprospecção microbiana. O genótipo do organismo, as condições

de incubação e o número de caracterizações são necessárias para tal fim. Trichoderma tem sido amplamente

utilizado como biofertilizante, indutor de resistência em plantas e antagonista de fitopatógenos. Este gênero

contém 256 espécies, mas variações genéticas podem aumentar indefinidamente o número de cepas com genótipos

distintos. O objetivo deste trabalho foi avaliar a relação genótipo-fenótipo de Trichoderma spp. quanto sua ação

antagônica através de diferentes mecanismos. Foram utilizados 28 genótipos caracterizados pelas regiões ITS e

EF1A, sendo: 4 T. asperellum, 4 T. atroviride, 4 T. harzianum, 4 T. longibrachiatum, 4 T. koningiopsis, 3 T.

virens, 2 T. stromaticum, 1 T. ovalisporum, 1 T. viride e 1 T. cremeum. A produção de compostos antagônicos no

sobrenadante (SN), o antagonismo direto em ensaios de cultura dupla e a influência de compostos voláteis (CVs)

produzidos foram avaliados contra Aspergillus clavatus. Os cultivos foram realizados a 25ºC durante sete dias para

todos os experimentos. Os resultados obtidos demonstraram que 36% dos genótipos apresentaram efeito

antagônico significativo do seu SN sobre a germinação de A. clavatus. Todos os genótipos da espécie T.

longibrachiatum foram eficientes, demonstrando o potencial desta espécie especificamente para esse mecanismo.

No ensaio de cultura dupla, 71% dos genótipos cresceram sobre o micélio de A. clavatus, parasitando-o e causando

a interrupção do seu desenvolvimento. Foi observado que 75% dos genótipos produziram CVs antagônicos ao A.

clavatus, com ação fungistática. A maioria dos genótipos (64%) apresentou tanto produção de CVs quanto

micoparasitismo. A análise comparativa entre genótipos demonstrou variações fenotípicas (Efeitos Antagônicos)

tanto entre isolados de espécies diferentes quanto de mesma espécie. Assim, um mesmo genótipo de Trichoderma

pode apresentar diferentes respostas, isto é, ele pode ser um bom micoparasita, mas um mau produtor de

compostos antifúngicos e vice-versa. Portanto, durante processos de triagem em coleções, torna-se necessária a

avaliação de diferentes mecanismos antagônicos simultaneamente. Conclui-se que não somente alguns dos

genótipos avaliados possuem potencial biocontrolador do A. clavatus, mas também que a bioprospecção em

coleções microbianas deve levar em conta as variações genótipo-específicas para evitar descarte prematuro de

bons isolados.

APOIO CAPES, CNPq e Fapesb.

306


SUBTIPOS VIRAIS E CÓDONS DA REGIÃO POL DO HIV-1 ASSOCIADOS À RESISTÊNCIA AOS

ANTIRRETROVIRAIS ISOLADOS EM CENTROS DE TESTAGEM E ACONSELHAMENTO DE

PERNAMBUCO - BRASIL

Kledoaldo Lima1; Élcio Leal

2; Ana M. S. Cavalcante

3; Daniela M. Salustiano

3; Heloísa R. Lacerda

4.


(1)1Pós-graduação em Medicina Tropical. Universidade Federal de Pernambuco (UFPE);

(2)Instituto de

Biotecnologia. Universidade Federal do Pará (UFPA), ; (3)

Setor de Virologia. Laboratório Central de Saúde

Pública de Pernambuco (LACEN-PE); (4)

Pós-graduação em Medicina Tropical. Universidade Federal de

Pernambuco (UFPE),

RESUMO A alta diversidade do HIV-1 causa importantes diferenças nas suas propriedades virológicas e interação com o

organismo hospedeiro, incluindo variabilidade nas taxas de mutações, aquisição de droga-resistência e resposta

aos antirretrovirais utilizados na prática clínica. O objetivo deste trabalho foi avaliar quais os subtipos virais e os

códons da região pol do HIV-1 associados à resistência aos antirretrovirais. Foram obtidas 104 amostras

sanguíneas coletadas, individualmente, de indivíduos atendidos em Centros de Testagem e Aconselhamento

(CTAs) da Região Metropolitana do Recife - Pernambuco / Brasil, no período de 2007 a 2009. Posteriormente,

cada amostra foi sequenciada a região pol do HIV-1. O Subtipo viral foi determinado pelo REGA Automated Tool

for HIV 1 & 2 Subtyping versão 2.0. Mutações de droga-resistência (SDRM) e susceptibilidade aos antirretrovirais

foram determinados através do HIV Drug-Resistance Database e do HIVdb Program, respectivamente, ambos da

Universidade de Stanford. A frequência de resistência antirretroviral foi de 4.8% (05/104). Três cepas do HIV-1

pertenceram ao subtipo B, uma ao subtipo F e outra era um recombinante BF. Apenas um isolado apresentou

mutações maiores aos inibidores de protease (IP) (L82A, L90M), promovendo alto grau de resistência ao

atazanavir, indinavir, nelfinavir e saquinavir. Outra cepa apresentou as mutações V75L, F77L e M184V,

relacionadas à resistência aos inibidores da transcriptase reversa análogos de nucleosídeos (ITRN), o que a torna

resistente à lamivudina e emtricitabina. Quatro cepas apresentaram as seguintes mutações de resistência aos

inibidores de transcriptase reversa não-análogos de nucleosídeos (ITRNN): K101E, K103N, G190A, G190S e

P225H com altos níveis de resistência ao efavirenz e nevirapina. Desta forma, podemos concluir a importância no

sequenciamento e análise dos códons de resistência do HIV-1 com a finalidade de avaliar a susceptibilidade do

vírus aos antirretrovirais e suas possíveis transmissões de resistência.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior ? CAPES ? Ministério da Educação ? Brasil.

307


VARIABILIDADE GENÉTICA DE FUNGOS FITOPATÓGENOS AO FEIJOEIRO USANDO

MARCADORES MOLECULARES ISSR E ITS-RFLP

Luciana Gonçalves de Oliveira1; Mariele Porto Carneiro Leão


1.


(1)Instituto Agronômico de Pernambuco;

(2)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Micologia e

Instituto Agronômico de Pernambuco

RESUMO Os fungos presentes no solo são os principais causadores de doenças para o feijoeiro comum, pois atacam o

sistema radicular, podendo atingir a parte aérea das plantas, causando perdas significativas na produtividade dessa

cultura. Algumas técnicas moleculares como ITS-RFLP e a utilização de marcadores moleculares ISSR têm sido

utilizadas para o conhecimento de fitopatógenos, auxiliando na identificação de genótipos, no estudo da

variabilidade genética, além de caracterizar a diversidade genética em populações de fungos fitopatogênicos,

obtendo diagnósticos mais rápidos e precisos. O trabalho objetivou avaliar a melhor estratégia de análise

da variabilidade genética de fungos de solo, patógenos ao feijoeiro comum, utilizando marcadores moleculares

ISSR e a técnica ITS-RFLP. 62 amostras de fungos, previamente identificadas morfologicamente, foram utilizadas

para o estudo, Fusarium oxysporum f sp. phaseoli (30), Macrophomina phaseolina (16) e Sclertotinia

sclerotiorum (16). Para análise de ISSR foram utilizados os iniciadores: UBC841, UBC817 e UBC881. Para a

amplificação do DNA da região ITS do rDNA foram utilizados os iniciadores ITS4 e ITS5. A digestão enzimática

dos produtos da PCR das regiões ITS do rDNA foi conduzida utilizando-se seis enzimas de restrição (EcoRI,

HaeIII, MspI, PstI, HindIII e AluI) separadamente. Os dendrogramas gerados a partir dos perfis de amplificação

utilizando os marcadores moleculares evidenciaram variabilidade genética intraespecífica, porém o iniciador

UBC841 mostrou maior polimorfismo intraespecífico, para as três espécies analisadas. A amplificação do locus

ITS1-5.8S-ITS2 do rDNA gerou fragmentos de aproximadamente 600pb para todos os isolados de F. oxysporum e

S. sclerotiorum e de aproximadamente 700pb para os isolados de M. phaseolina. A enzima de restrição AluI foi

mais eficiente em demonstrar variabilidade intraespecífica nas três espécies estudada. Os resultados também

demonstraram que os marcadores moleculares de ISSR foram mais eficientes em evidenciar a variabilidade

genética intraespecífica do que as enzimas de restrição. Os resultados indicam que os iniciadores de ISSR

permitem a caracterização e diferenciação intraespecífica de F. oxysporum, M. phaseolina e S. sclerotiorum. A

variabilidade genética observada nesse trabalho é uma característica importante, pois, ao identificar o grau de

diversidade genética, pode-se analisar a ação do agente inibidor in vitro e planejar formas de controle e

monitoramento no campo.

APOIO CNPq-FACEPE

308

Mutagênese e Farmacogenômica

ANÁLISE DA ATIVIDADE PROTETORA DA VITAMINA C (ÁCIDO ASCÓRBICO) SOBRE A

GENOTOXICIDADE DO ANTILEISHMANIAL MILTEFOSINE.

Patricia Valéria Castelo Branco Araujo1; Hugo José Alves

1; Raissa Lacerda Pontes

1; Muryllo Santos Castro

1;

Silma Regina Ferreira Pereira1.



RESUMO A leishmaniose é uma doença infecciosa causada pelo protozoário do gênero Leishmania, amplamente distribuída

pelo mundo, sendo a terceira doença transmitida por vetores de maior relevância. Os medicamentos de primeira

escolha recomendados pelo Ministério da Saúde e Organização Mundial da Saúde (OMS), utilizados para o

tratamento da leishmaniose são constituídos à base de antimônio. Um grande avanço no que diz respeito ao

tratamento da leishmaniose foi o desenvolvimento de uma droga oral efetiva - miltefosine (Impavido®),

facilitando a manutenção do tratamento, incluindo as infecções resistentes à terapia convencional com antimonial

pentavalente. Este trabalho objetivou avaliar a capacidade do antioxidante Vitamina C em reduzir os danos no

DNA causados pelo antileishmanial miltefosine. Para avaliação de genotoxicidade foi utilizado o ensaio do

Cometa e para avaliar o potencial mutagênico utilizou-se o teste do micronúcleo. Foram utilizados 6 grupos de

tratamento, sendo um grupo controle negativo, que recebeu água destilada via oral, um grupo tratado com

miltefosine (70mg/kg), um grupo tratado com Vitamina C (60mg/kg), além de três grupos tratados

simultaneamente com miltefosine (70mg/kg) e Vitamina C nas doses de 30, 60 e 120mg/kg, sendo o tratamento

realizado via oral por 24 horas. Nossos resultados mostraram que a Vitamina C não foi capaz de reduzir os danos

genotóxicos e mutagênicos (p > 0,05) causados ao DNA pelo miltefosine (70mg/kg) em nenhuma das doses

utilizadas no tratamento simultâneo.

APOIO Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico e Tecnológico do Maranhão - FAPEMA

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior - Capes

309


ANÁLISE CITOGENÉTICA DA TOXICIDADE DE AROMATIZANTES ALIMENTARES

SINTÉTICOS, DOS TIPOS ARTIFICIAIS, DE BAUNILHA, BISCOITO E TUTTI-FRUTTI.

Ila Monize Sousa Sales1; Maria Eduarda de Sousa e Silva

1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos

1; Ana Paula

Peron2.


(1)Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas, UFPI, Picos, PI;

(2)Docente Programa de Pós-graduação em

Genética e Melhoramento, UFPI, Teresina, PI

RESUMO Os aromatizantes alimentares são essenciais a indústria alimentícia devido conferirem propriedades sensoriais de

aroma e sabor aos mais variados tipos de alimentos industrializados. No entanto, tais aditivos alimentares são

considerados um avanço polêmico da área de ciência e tecnologia de alimentos por profissionais da área da saúde

em razão da escassez de estudos quanto sua toxicidade, em nível sistêmico e celular. Assim, objetivou-se neste

trabalho avaliar a citotoxicidade e a genotoxicidade de aditivos aromatizantes sintéticos, dos tipos artificiais de

Baunilha, Biscoito e Tutti-frutti. Tais aromatizantes foram escolhidos para análise por serem amplamente

utilizados nas indústria de alimentos na confecção de alimentos industrializados doces. A avaliação de toxicidade

se deu por meio das células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., nos tempos de exposição de 24 e 48 horas,

onde os microingredientes foram analisados individualmente, nas doses de 0,3; 0,6; 0,9 ml. Após os tratamentos,

os meristemas de raízes foram fixados em fixador Carnoy, hidrolisados em ácido cloridrico e corados em orceína

acética a 2%, e em seguida analisados em microscópio óptico, em aumento de 40x, no qual avaliou se para cada

controle e tempo de exposição considerados um total de 5.000 células. Os dados obtidos foram submetidos ao teste

estatístico X2

(p>0,05). De acordo com os resultados observados verificou-se que as três doses do aromatizante de

Baunilha e Biscoito inibiram de forma significativa a divisão celular dos tecidos avaliados. As doses de Tutti-frutti

não alteraram o índice de divisão celular dos meristemas de raízes. Também foi verificado que todas as doses dos

aromatizantes de Biscoito e Tutti-frutti, tal como, a dose 0,6 ml do aditivo de Baunilha, induziram número

significativo de alterações de fuso mitótico, como as metáfases-C e pontes anáfasica e telofásicas, e micronúcleos.

Portanto, nas condições de análises estabelecidas, os aromatizantes de Baunilha e Biscoito demonstraram

expressivo potencial citotóxico e genotóxico, e o de Tutti-frutti, apesar de não citotóxico, apresentou atividade

genotóxica.


310


ANÁLISE DA LETALIDADE E CITOTOXICIDADE DE SUSPENSÕES DE PONTOS QUÂNTICOS DE

CDTE SOBRE MOLUSCOS ADULTOS DE BIOMPHALARIA GLABRATA (SAY, 1818)

Lima, M.v.1; Silva, K.e.m.

2; Pereira, M.i.a.

1; Cabral Filho, P.e.

1; Siqueira, W.n.

2; Melo, A.m.m.a.

1; Fontes, A.

1.


(1)Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE, Recife/PE.;

(2)Departamento de Biofísica e Radiobiologia,

UFPE, Recife/PE. Serviço de Monitoração Ambiental, CRCN, Recife/PE.

RESUMO Introdução: Pontos quânticos (PQs) são nanocristais fluorescentes de semicondutores que vêm sendo cada vez

mais aplicados nas áreas biomédica e eletrônica. Este aumento tem provocado uma inevitável exposição humana e

ambiental aos nanomateriais, surgindo uma preocupação sobre os impactos causados ao meio ambiente e à saúde

humana. Dentro deste contexto, a utilização de bioindicadores ambientais altamente sensíveis, tais como os

moluscos Biomphalaria glabrata, se faz relevante para avaliação destes efeitos. Objetivo: Avaliar a toxicidade de

suspensões de PQs de Telureto de Cádmio (CdTe) em moluscos B. glabrata por meio da taxa de sobrevivência e

análise morfológica dos hemócitos. Metodologia: Foram utilizadas suspensões, em pH 7,0, de PQs de CdTe (3 nm

de diâmetro) estabilizados com ácido mercaptossuccínico (AMS). A síntese foi realizada na proporção de 5:1:6 de

Cd:Te:AMS. O excesso de precursores foi retirado por sucessivas lavagens com colunas de ultrafiltração de 10

kDa. Para análise da sobrevivência, moluscos adultos foram expostos por 24 horas às suspensões nas

concentrações de 62,5; 125 e 250 nM. O grupo controle (C) continha apenas água filtrada e declorada. Para análise

da toxicidade celular das suspensões de PQs frente aos moluscos foram avaliadas as células do sistema

imunológico, os hemócitos. Após a exposição à suspensão de PQs, os moluscos sobreviventes foram submetidos à

retirada e à análise dos hemócitos. Os parâmetros analisados foram células com micronúcleo (MN), binucleação

(BN) e apoptose (AP). A análise estatística foi calculada através do teste de Kruskal-Wallis. Resultados: A taxa de

mortalidade teve uma resposta dose-dependência. O número de moluscos inviáveis para 125 nM foi cerca de 50%

e para 250 nM aproximadamente 70%. As suspensões de PQs induziram alterações nos hemócitos todas as

concentrações testadas, observando a presença de MN, BN e AP. Para os indivíduos expostos a 250 nM foi

observada uma diferença significativa na frequência de AP em relação ao grupo controle e aos demais grupos

testados. Conclusão: O presente estudo indica que os PQs de CdTe induziram toxicidade nos moluscos B. glabrata

devido à letalidade induzida e à AP observada nas células hemocitárias. Contudo, para melhor elucidar os efeitos

tóxicos destas suspensões de nanopartículas ao meio ambiente, mais estudos estão sendo realizados.

APOIO Agradecimentos: CAPES; CNPq; FACEPE.

311


ANÁLISE DE ALTERAÇÕES CROMOSSÔMICAS EM ESTUDO DE EXPOSIÇÃO PARCIAL À RAIOS

X

Aida Mayra Guedes de Andrade1; Mariana Esposito Mendes

2; Fabiana Farias de Lima

3; Julyanne Conceição

Goes de Mendonça4; Suy Ferreira Hwang

3; Lais Melo da Silva

1; Neide Santos

5.


(1)Graduanda da Universidade Federal de Pernambuco (CB/UFPE);

(2)Doutoranda do Departamento de Genética da

Universidade Federal de Pernambuco ((CB/UFPE); (3)

Centro Regional de Ciências Nucleares do Nordeste

(CRCN-NE/CNEN); (4)

Mestranda do Programa de Pós-graduação em Saúde Humana e Meio Ambiente

(CAV/UFPE)); (5)

Departamento de Genética da Universidade Federal de Pernambuco (CB/UFPE)

RESUMO Estudos mostram que a análise de alterações cromossômicas, envolvendo as células sanguíneas, particularmente

os linfócitos, pode fornecer uma estimativa real da dose absorvida após exposição à radiação ionizante. Um ponto

importante a ser observado é o impacto genético, consequentemente clínico, de uma exposição de corpo parcial,

que varia de acordo com a área do corpo exposto, e pode ser substancialmente diferente de uma exposição total do

corpo, mesmo com uma dose idêntica. O presente trabalho tem como objetivo avaliar as frequências de alterações

cromossômicas (dicêntrico, fragmento, anel) simulando irradiações parciais do corpo (25%, 50%). A irradiação do

material biológico coletado foi realizada com feixes de raios X de 250kVp no Serviço de Metrologia do CRCN-

NE com uma dose absorvida de 0,5Gy e 1Gy. Como o estudo simula irradiações parciais, a amostra foi diluída em

duas proporções (25% e 50%). As amostras irradiadas e controles (não irradiadas) tiveram seus linfócitos

cultivados em meios de cultura e, após o processamento do material, foram obtidas as metáfases mitóticas. De

acordo com os resultados obtidos, foi possível confirmar que quanto maior a proporção, maior foi o número de

alterações cromossômicas encontradas. A frequência de dicêntricos na proporção de 25% e 50%, na dose de

0,5Gy, é igual (0,006), mas a de fragmentos isolados encontrados na proporção de 50% é maior (25% - 0,064 e

50% - 0,8), atestando que o número de alterações cromossômicas é maior à medida que a proporção aumenta. Na

dose de 1Gy na proporção de 50% começa a aparecer a alteração cromossômica denominada cromossomo em

anel. A incidência de cromossomo em anel é menor, porque os raios X são caracterizados como uma radiação com

uma baixa transferência linear de energia. As proporções de 100% de 0,5Gy e de 50% de 1Gy estão equivalentes,

mostrando que os achados citogenéticos estão correspondendo corretamente. Os dados apresentados são

preliminares, novas doses e indivíduos serão analisados para confirmar se o padrão visto até agora se manterá e,

assim, atestar as hipóteses levantadas para esse estudo.

APOIO Agradecimentos ao CNPq pelo apoio financeiro

312


APLICAÇÃO DO ENSAIO COMETA PARA AVALIAÇÃO DA ESTERILIDADE DE MACHOS DE

AEDES AEGYPTI ATRAVÉS DA RADIAÇÃO GAMA

Cícero Jorge Verçosa1; Sloana Giesta Lemos Florêncio

2; Edvane Borges da Silva

2; Maria Alice Varjal de Melo

Santos3; Carlos Messias de Mendonça


3; Claudia Rohde

4.


(1)Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco (UPE) e

Laboratório de Genética, Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).; (2)

Departamento de Energia Nuclear (DEN), Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). ; (3)

Departamento de

Entomologia do Centro de Pesquisa Aggeu Magalhães/Fundação Oswaldo Cruz, Recife/PE.; (4)

Laboratório de

Genética, Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).

RESUMO Aedes aegypti é um díptero da família Culicidae e vetor de arboviroses como, dengue, chikungunya e zika no

Brasil. Novas abordagens para o controle desta espécie de mosquito, como a Técnica do Inseto Estéril (TIE), são

importantes para reduzir a incidência destas doenças. A TIE compreende a criação massiva de machos, seguida da

esterilização e liberação em campo, com o intuito de que esses acasalem com as fêmeas selvagens e inviabilizem

suas proles. Um requisito importante na produção dos machos estéreis (ME) é a confirmação da esterilidade, cujo

método convencional consiste na verificação da fertilidade das fêmeas acasaladas com os ME. Este é um método

que além de indireto é laborioso e pode levar 10 ou mais dias para a obtenção dos resultados. Neste contexto, o

objetivo do trabalho foi investigar a eficácia do Ensaio Cometa como indicador direto da eficiência de

esterilização dos machos, submetidos à radiação gama. O Ensaio Cometa permite avaliar as alterações no DNA em

meio alcalino, verificando quebras de fitas-simples e locais álcali-lábeis. Para este estudo, grupos de pupas machos

de A. aegypti, provenientes da Ilha de Fernando de Noronha, expostos às doses de 40 Gy e 50 Gy foram avaliados,

além do grupo controle não exposto. Para aplicação do Ensaio Cometa foram extraídas células da hemolinfa das

pupas e o material foi centrifugado, sendo as lâminas montadas com agarose e expostas a uma solução de lise

celular por 72h. Ao término deste período as lâminas foram submetidas a uma corrida de eletroforese, sendo

depois neutralizadas em solução específica e fixadas em etanol absoluto. O material genético presente nas lâminas

foi corado com Gel RedTM

e analisados em microscopia fluorescente. Os cometas visualizados foram classificados

do menor ao maior em uma escala de dano (0 a 4, respectivamente). A partir dos dados foram calculados o Índice

de Dano (ID) e a Frequência de Dano (FD%). Os resultados demonstraram um significativo aumento de ID tanto

no grupo exposto a 40Gy (p= 0,0463) quanto a 50Gy (p= 0,0493), em relação ao grupo controle. Houve também

diferença significativa entre as duas doses de radiação aplicadas (p= 0,0495). O segundo parâmetro observado,

FD%, também apresentou o mesmo comportamento. Os resultados apontam o Ensaio Cometa como um método

promissor para ser utilizado no controle de qualidade do material biotecnológico produzido para a TIE, com vistas

ao controle populacional de A. aegypti.

APOIO CNPq; CAPES; FACEPE APQ-0345-2.13/13; APQ-1707-2.13/15; APQ- 0416.2.02/15; BCT-0159-2.13/16 e

PROPESQ-UFPE.

313


APLICAÇÃO PIONEIRA DO ENSAIO COMETA COM UMA LINHAGEM SELVAGEM E

INDIVÍDUOS ADULTOS DE DROSOPHILA MELANOGASTER COMO MARCADOR DO DANO

GENÉTICO

Cícero Jorge Verçosa1; Aroldo Vieira de Moraes Filho

2; Ícaro Fillipe de Araújo Castro

3; Robson Gomes dos

Santos3; Kênya Silva Cunha

4; Ana Cristina Lauer Garcia

3; Julio Alejandro Navoni

5; Viviane Souza do Amaral

5;

Claudia Rohde3.


(1)Programa de Pós-Graduação em Biologia Celular e Molecular Aplicada, Universidade de Pernambuco (UPE) e

Laboratório de Genética, Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE).; (2)

Laboratório de Radiobiologia e Mutagênese, Universidade Federal de Goiás (UFG).; (3)

Laboratório de Genética,

Centro Acadêmico de Vitória, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE). ; (4)

Laboratório de Genética

Toxicológica, Universidade Federal de Goiás (UFG).; (5)

Departamento de Biologia Celular e Genética,

Universidade Federal do Rio Grande do Norte (UFRN).

RESUMO O Ensaio Cometa é uma técnica que permite avaliar as alterações no DNA em meio alcalino, verificando quebras

de fitas-simples e locais álcali-lábeis. O organismo-modelo Drosophila melanogaster tem sido cada vez mais

utilizado em testes de genotoxicidade, devido a diversas informações acumuladas sobre seu genoma, rápido ciclo

de vida e facilidade na detecção de fenótipos, além de ser um organismo bem estabelecido como modelo de

estudos de doenças humanas. Na literatura, o uso do Ensaio Cometa utilizando o modelo D. melanogaster está

restrito ao uso da linhagem Oregon e no estágio de larva. O objetivo deste trabalho foi aperfeiçoar a técnica

aplicando-a de forma pioneira em uma linhagem selvagem e em indivíduos na fase adulta. Para tanto, foram

extraídos hemócitos presentes na hemolinfa de larvas da linhagem Oregon e selvagem e também de indivíduos

adultos. Para as larvas a obtenção da hemolinfa se deu depositando-as em uma placa de petri e resfriando-as a 4ºC

. Em seguida foi realizado um corte lateral na cutícula de cada indivíduo, em uma placa escavada, com um bisturi

e uma pinça. Já os indivíduos adultos, foram eterizados e transferidos para uma placa escavada contendo solução

de EDTA. Esse procedimento foi realizado em um microscópio estereoscópico, com uma pinça de relojoeiro nº 5 e

uma seringa de 1 mL. Foram realizadas duas lesões em cada indivíduo, uma no tórax e outra no abdômen. A

hemolinfa depositada no fundo da placa escavada tanto de larvas quanto de indivíduos adultos foi retirada com a

ajuda de uma micropipeta e colocada em um tubo de microcentrífuga. O material extraído foi centrifugado, as

lâminas foram montadas e foram postas em uma solução de lise por 72h. Ao término do período de lise celular as

lâminas foram submetidas a uma corrida de eletroforese, neutralizadas em solução específica e fixadas em etanol

absoluto e em seguida foram analisadas em microscopia fluorescente. Foram aplicados os testes estatísticos de

Kruskal-Wallis e Mann-Whitney, com nível de significância p< 0,05. A aplicação do Ensaio Cometa para a

avaliação do dano genético foi sensível tanto na linhagem Oregon, tradicionalmente empregada nesta

metodologia, como na linhagem selvagem. Os resultados indicam que a linhagem selvagem também pode ser

empregada como modelo de estudo para esse fim. Além disso, o uso de indivíduos adultos de Drosophila

melanogaster também se mostrou como uma alternativa para este bioensaio, abrindo novas perspectivas para

estudos na área.

APOIO CNPq; CAPES; FACEPE APQ- 0416.2.02/15 e PROPESQ-UFPE;

314


ATIVIDADE ANTICÂNCER DE EXTRATOS DE FOLHAS DE SUCUPIRA (BOWDICHIA

VIRGILIOIDES) EM CULTURA DE CÉLULAS

Marcus Vinícius Silva Weigel Gomes1; Tayhana Priscila Medeiros Souza

1; Simone Lara de Omena Silva

1; Heloisa

de Carvalho Matos1; Emiliano de Oliveira Barreto

1; Renato Santos Rodarte

1.


(1)Universidade Federal de Alagoas

RESUMO Introdução: A fitoterapia caracteriza-se pelo uso de matérias-primas vegetais como agentes bioativos para

combater doenças. No Brasil, a utilização de ervas medicinais teve sua base na prática indígena que, influenciada

por culturas imigrantes, teve seu uso popularizado. A fim de comprovar as propriedades farmacológicas de

produtos populamente utilizados como fitoterápicos, o presente trabalho avaliou o potencial anticarcinogênico de

extratos bruto e fracionados de folhas de Bowdichia virgilioides, popularmente conhecida como Sucupira.

Objetivos: Avaliar, in vitro, o potencial anticâncer de extratos bruto e fracionados de folhas de B. virgilioides;

identificar qualitativamente os metabólitos presentes nos extratos. Metodologia: O efeito dos extratos brutos e

frações sobre a proliferação de linhagens tumorais de adenocarcinoma pulmonar (A549), melanoma (MDA-MB-

435) e leucemia linfoblastóide T (CCRF-CEM) foi realizado através do ensaio do MTT utilizando concentrações

de 120 a 0,9 µg/mL, seguido de avaliação dos potenciais genotóxico e apoptótico, pelos ensaios de micronúcleo,

cometa alcalino e apoptose por difusão em agarose. As análises estatísticas foram feitas pelo método One-Way

ANOVA, seguido pelo pós-teste Newman-Kewls, com nível de significância selecionado para p < 0,05. Resultados:

Os dados obtidos mostraram que o extrato bruto inibiu a proliferação da linhagem de adenocarcinoma pulmonar

em relação ao controle negativo, na concentração de 15 µg/mL (58,76 ± 4,32; 100 ± 3,23). O extrato BvF C

diminuiu a viabilidade celular em todas as linhagens testadas, sendo seu maior efeito em CCRF-CEM (IC50 = 110

µg/mL). No entanto, não induziu danos genômicos ou morte por apoptose. Conclusão: A fração clorofórmica

mostrou um potencial efeito anticâncer. Estudos posteriores são necessários para investigar seus efeitos sobre estas

células e em células normais, bem como análises fitoquímicas mais detalhadas para identificação de substâncias

responsáveis por tais efeitos.

APOIO FAPEAL, CNPq e UFAL

315


ATIVIDADE ANTICÂNCER DE EXTRATOS DE FOLHAS DE SUCUPIRA (BOWDICHIA

VIRGILIOIDES) EM CULTURA DE CÉLULAS

Marcus Vinícius Silva Weigel Gomes1; Tayhana Priscila Medeiros Souza

1; Simone Lara de Omena Silva

1; Heloisa

de Carvalho Matos1; Emiliano de Oliveira Barreto

1; Renato Santos Rodarte

1.


(1)Universidade Federal de Alagoas

RESUMO Introdução: A fitoterapia caracteriza-se pelo uso de matérias-primas vegetais como agentes bioativos para

combater doenças. No Brasil, sua utilização teve seu uso popularizado com base na prática indígena. A fim de

comprovar suas propriedades farmacológicas, o presente trabalho avaliou o potencial anticarcinogênico de extratos

bruto e fracionados de folhas de Bowdichia virgilioides, popularmente conhecida como Sucupira. Objetivos:

Avaliar, in vitro, o potencial anticâncer de extratos aquoso bruto e fracionados de folhas de B. virgilioides;

identificar qualitativamente os metabólitos presentes nos extratos. Metodologia: O efeito dos extratos bruto e

frações sobre a proliferação de linhagens tumorais de adenocarcinoma pulmonar (A549), melanoma (MDA-MB-

435) e leucemia linfoblastóide T (CCRF-CEM) foi realizado através do ensaio de MTT utilizando concentrações

de 120 a 0,9 µg/mL, seguido de avaliação dos potenciais genotóxico e apoptótico, pelos ensaios de micronúcleo,

cometa alcalino e apoptose por difusão em agarose, após 24 horas de tratamento. As análises estatísticas foram

feitas pelo método One-Way ANOVA, seguido pelo pós-teste Newman-Kewls, com nível de significância

selecionado para p < 0,05. Resultados: Os dados obtidos mostraram que o extrato bruto inibiu a proliferação da

linhagem de adenocarcinoma pulmonar na concentração de 15 µg/mL em relação ao controle de células sem

tratamento (58,76 ± 4,32; 100 ± 3,23), sendo mais efetivo que o quimioterápico utilizado (cisplatina - 40 μg/ mL

= 65,30 ± 3,40). A fração clorofórmica (BvF C) reduziu a viabilidade celular em todas as linhagens testadas,

inibindo mais de 50% apenas em CCRF-CEM (IC50 = 110 µg/mL). No entanto, não induziu danos genômicos,

nem morte por apoptose na linhagem de leucemia linfoblastóide T. Em células mononucleares normais isoladas de

sangue periférico não mostrou efeito citotóxico. Conclusão: O extrato bruto apresentou potencial anticâncer em

células A549, podendo ser atribuído tais efeitos ao sinergismo dos metabólitos secundários identificados no

extrato, tendo em vista que as frações não mostraram atividade inibitória em A549. A fração clorofórmica

mostrou um efeito seletivo às linhagens tumorais testadas, inibindo a proliferação de células tumorais sem causar

morte celular em células normais. Estudos estão sendo realizados para identificar a(s) substância(s) responsável(is)

por tais efeitos e avaliar os possíveis mecanismos e rotas metabólicas pelos quais os extratos agem.

APOIO Apoio financeiro: FAPEAL, CNPq e UFAL.

316


ATIVIDADE PROTETORA DO EXTRATO DA FOLHA DE POINCIANELLA BRACTEOSA (TUL.) L.P.

QUEIROZ EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE ALLIUM CEPA L.

Bárbara Cristina Silva Holanda Queiroz1; Cleiane do Nascimento Monteiro

2; Regina Maria Silva Sousa

1; João

Gabriel Silva Morais1; Francielle Alline Martins

1; Pedro Marcos de Almeida

1.


(1)UNIVERSIDADE ESTADUAL DO PIAUÍ;

(2)UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ

RESUMO Neonothopanus gardneri Berk. ex Gardner (Marasmiaceae) é considerado o maior fungo bioluminescente do

Brasil e um dos maiores do mundo. As espécies dessa família são ricas em sesquiterpenos citotóxicos, exibindo

atividades antimalárica e antimicobacteriana, além de citotoxicidade contra linhagens celulares de alguns tipos de

câncer. No entanto, não há relatos sobre a atividade citogenotóxica de N. gardneri. Desse modo, o objetivo deste

estudo foi avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato acetato de etila de N. gardneri,

utilizando o sistema-teste Allium cepa L. Espécimes de N. gardneri foram coletadas na cidade de São Francisco,

Maranhão, Brasil. Em seguida, os fungos foram congelados e submetidos à liofilização. Posteriormente, preparou-

se o extrato acetato de etila (Ext. AcOEt), que foi diluído em DMSO 0,2% mais solução salina 0,9%, obtendo-se

as concentrações testes de 50, 100, 250 e 500 µg/mL. Sementes de A. cepa foram germinadas em placas de Petri

contendo água destilada. Posteriormente, as mesmas foram transferidas para os controles e para as concentrações

citadas do Ext. AcOEt por 24 h. Como controle negativo (CN), foi utilizado DMSO 0,2% mais solução salina

0,9% e como controle positivo (CP), o metilmetanossulfonato (MMS, 10 mg/L). Em seguida, as raízes foram

fixadas em metanol: ácido acético (3:1), hidrolisadas em HCl por 10 min, lavadas em água destilada e coradas com

Reativo de Schiff, por 2 h no escuro. Cinco mil células meristemáticas por tratamento, 500 células por lâmina

(total de 10 lâminas), foram analisadas em microscópio óptico (400 x). As análises estatísticas foram avaliadas por

meio do teste de Kruskal-Wallis a 5% de significância no programa BioEstat 5.3. Os valores de CP foram

significativos em relação ao CN para os parâmetros de genotoxicidade e mutagenicidade. Quanto ao índice

mitótico, houve aumento significativo nas concentrações de 50, 250 e 500 µg/mL em relação ao CN, resultando no

efeito citotóxico. Quanto à genotoxicidade e à mutagenicidade, não houve diferença significativa entre as

concentrações e o CN. Os resultados obtidos demonstraram que o Ext. AcOEt de N. gardneri possui efeito

citotóxico na maioria das concentrações testadas e alterações cromossômicas não significativas. Adicionalmente,

análises sobre a composição química de N. gardneri e testes em outros bioensaios fazem-se necessários para a

elucidação da interferência quanto ao ciclo celular.

317


AVALIAÇÃO CITOGENOTÓXICA DE EFLUENTE TÊXTIL SINTÉTICO APÓS TRATAMENTOS

BIOLÓGICOS

Vanessa Cristina de Souza1; Dominick Spindola Correia

1; Osmar Luiz Moreira Pereira Fonseca de Menezes

1;

Sávia Gavazza1; Ana Christina Brasileiro Vidal

1.


(1)UFPE

RESUMO A atividade têxtil no Agreste pernambucano está organizada sob a forma do Arranjo produtivo local de confecção

de jeans, sendo a mais importante atividade industrial desta região. Devido ao crescimento desordenado destas

indústrias, diversos problemas ambientais se desenvolveram. Os efluentes gerados nestes processos contêm, em

geral, elevada concentração de amido (liberado na desengomagem), corantes e sulfato (liberados na etapa de

tingimento). O descarte se dá nos recursos hídricos da região, em especial no rio Ipojuca. Neste trabalho, foi

avaliado o potencial citogenotóxico, mediante sistema-teste Allium cepa L. (cebola), de efluente têxtil sintético

não tratado, e após tratamento via processos biológicos (1) anaeróbio e (2) aeróbio, todos na concentração de

100%. As características físico-químicas também foram analisadas. Sementes de A. cepa foram germinadas em

amostras de efluentes não tratados e tratados, a fim de verificar a eficiência dos diferentes tratamentos. Foram

utilizados como controles negativo (CN), água ultrapura e positivos, o Metil metano-sulfonato (4x10-4

M) e a

Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo). Após germinação, raízes foram fixadas em Carnoy (etanol: ácido

acético, 3:1) e utilizadas na preparação das lâminas. Foram analisadas 5.000 células/tratamento. Os resultados

foram comparados ao CN mediante teste de Kruskal-Wallis seguido do teste de Tukey (p<0,05). Nenhuma das

amostras apresentou potencial citotóxico. Nas amostras do efluente sintético não tratado e tratado por reator

anaeróbio, o número de alterações cromossômicas apresentou diferença significativa em relação ao controle

negativo, indicando atividade genotóxica para os referidos efluentes, porém, não detectada para o efluente sintético

tratado por processo aeróbio. No tratamento anaeróbio, ocorreu redução da cor do efluente pela quebra das

ligações azo (N=N), que são os grupos cromóforos dos corantes azo, porém resultou na formação de aminas

aromáticas, que devem ter sido responsáveis pela genotoxicidade observada. Dessa forma, indica-se que o

tratamento combinado anaeróbio/aeróbio deve ser realizado a fim de se ter maior remoção das aminas aromáticas e

consequentemente menor toxicidade nos corpos hídricos.

APOIO CNPq

318


AVALIAÇÃO DA ATIVIDADE CITOTÓXICA E MUTAGÊNICA DO BARBATIMÃO

(STRYPHNODENDRON ADSTRINGENS) EM BIOENSAIO COM ALLIUM CEPA

Herald Souza dos Reis1; Mary Helen Pestana da Costa

2; Sheyla Michele de Souza Moraes

1; José Augusto

Nascimento Monteiro2; Carlos Alberto Machado da Rocha

1.


(1)Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará;

(2)Instituto de Ciências Biológicas, Universidade

Federal do Pará

RESUMO O barbatimão (Stryphnodendron adstringens) é planta da família Mimosaceae encontrada em várias regiões do

Brasil. Sua casca é intensamente usada na medicina popular principalmente por suas ações cicatrizantes e

antimicrobianas. O uso de produtos naturais sem conhecimento é um perigo à saúde humana. Muitos desses

produtos são dotados de grandes teores tóxicos para a célula e devem ser estudados. No bioensaio com Allium

cepa, após exposição por certo período, é possível avaliar tanto os efeitos citotóxicos pela redução do crescimento

de raízes ou decréscimo do índice mitótico, quanto os efeitos genotóxicos pela análise de micronúcleos ou de

anomalias na divisão celular. O objetivo geral deste trabalho foi identificar os efeitos tóxicos do barbatimão

(Stryphnodendron adstringens) sobre a germinação de sementes e desenvolvimento das raízes de cebola (Allium

cepa). O extrato aquoso foi preparado através da infusão da casca do caule do barbatimão em água destilada por

um período de 10 minutos. As sementes de Allium cepa foram divididas em quatro grupos: controle negativo,

regadas com água destilada; Tratamentos 1 e 2, regadas com extrato do barbatimão nas concentrações de 25% e

50% (m/v), respectivamente; controle positivo, regadas com solução de N-metil-N-nitrosourea (MNU) a 0,1 25

mg.L-1

. Foram analisadas 4.000 células por tratamento, observando-se o número de células em cada fase do ciclo

celular. As mesmas lâminas também foram utilizadas para a contagem das alterações no ciclo celular. Os dados

obtidos foram submetidos a análises de variância, ao nível de significância de 5%. As análises estatísticas foram

efetuadas com o software estatístico BioEstat 5.0. Os quatro grupos não diferiram quanto à taxa de germinação e

ao índice mitótico (p > 0,05), porém as médias de comprimento e peso das radículas foram significativamente

menores no controle positivo (p < 0,05). Em relação aos efeitos genotóxicos, não houve diferenças significas dos

tratamentos com extrato de barbatimão comparados ao controle negativo (p > 0,05). No controle positivo,

entretanto, houve aumento significativo na frequência de micronúcleos (p = 0,0042) e de anomalias do ciclo

mitótico (p = 0,0076). Conclui-se que, nas condições de nosso experimento, o extrato de barbatimão não

apresentou efeitos citotóxicos e genotóxicos frente ao sistema teste de Allium cepa.

319


AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE DAS ÁGUAS DO RIO POTI NA CIDADE DE TERESINA, POR

MEIO DO ENSAIO COMETA EM DROSOPHILA MELANOGASTER

Rayane Santana da Silva1; Ícaro Fillipe de Araújo Castro

1; Samuel Lima de Santana

1; Renata de Barros

Oliveira1; Cícero Jorge Verçosa

1; Rafael Diego Barbosa Soares

2; Alisson dos Reis Barbosa

2; Carlos Ernando da

Silva2; Claudia Rohde

1; Ulisses Ramos Montarroyos

3.



(2)Universidade Federal do Piauí;

(3)Universidade Estadual de Pernambuco

RESUMO As atividades humanas, respaldadas em um estilo de vida de desenvolvimento, têm gerado crescentes danos a

qualidade da água, principalmente pelo lançamentos de efluentes e detritos industriais e domésticos nos recursos

hídricos. O Poti é um importante rio que corta a cidade de Teresina no Piauí, e recebe grande quantidade de

efluentes domésticos e industriais desta capital. Este trabalho objetivou caracterizar o efeito genotóxico associado

às águas do Rio Poti, em células somáticas de larvas de Drosophila melanogaster por meio do Ensaio Cometa. A

água foi coletada em dois pontos de Teresina, sendo um no início da cidade (ponto P0) e outro localizado na saída

da cidade (ponto P1). Após a coleta, a água foi levada ao laboratório em recipientes de vidro e mantida a -20°C.

Como controle negativo do experimento foi utilizada água destilada. Para o Ensaio Cometa, cinquenta larvas de D.

melanogaster em terceiro estágio foram expostas a água dos pontos P0, P1 e à água destilada (controle negativo).

Estas águas (3 mL) hidratam um meio de cultivo constituído por 0,9 gramas de purê de batata instantâneo, onde os

organismos ficaram expostos e se alimentaram por um período de 24 horas. Foram realizadas cinco repetições para

cada tratamento, totalizando uma amostra constituída por 750 indivíduos. Passado o período de exposição, foi

realizada coleta dos hemócitos, que foram processados e a quantificados para o efeito genotóxico ao material

genético, por meio do Ensaio Cometa. Foram calculados o Índice de Dano (ID) e a Frequência de Dano (FD%) e

aplicados os testes estatísticos ANOVA e pós-teste de Bonferroni. Foram observadas diferenças estatisticamente

significativas entre a genotoxicidade gerada no grupo controle negativo e os pontos P0 (p=0,0001) e P1

(p=0,0001), tanto para ID quanto FD%, o que indica que as águas do rio Poti na altura da cidade de Teresina têm

potencial efeito genotóxico. Como não houve diferenças entre as águas dos pontos P0 e P1, que correspondem aos

pontos antes e depois da cidade de Teresina, conclui se que este efeito genotóxico não está restrito apenas a um

local, e que pode estar afetando de forma significativa todo o ecossistema aquático do rio Poti. Por fim, cabe

destacar que o rio é uma importante fonte pesqueira da região, e por isso pode estar causando grande risco à

população Teresinense que se alimentam desses peixes.

APOIO CAPES, CNPQ e FACEPE.

320


AVALIAÇÃO DA GENOTOXICIDADE DE LECTINAS DE MYRACRODRUON URUNDEUVA E

SCHINUS TEREBINTHIFOLIUS

Stéphanny Vanessa de Mesquita1; Matheus Cavalcanti de Barros

1; Larissa Cardoso Corrêa de Araujo Videres

1;

André Mariano Batista2; Jaciana dos Santos Aguiar

1; Teresinha Gonçalves da Silva

1; Patrícia Maria Guedes

Paiva1.



(2)Universidade Federal Rural de Pernambuco

RESUMO As lectinas do cerne (MuHL) e das folhas (MuLL) de M. urundeuva possuem atividade larvicida contra Aedes

aegypti. Já SteLL, lectina obtida das folhas de Schinus terebinthifolius, possui atividade antifúngica

contra Candida albicans. O presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito genotóxico de MuHL, MuLL e

SteLL em células HepG2 (hepatocarcinoma humano). A genotoxicidade foi analisada através do ensaio cometa.

As concentrações utilizadas foram definidas a partir do teste do MTT (resultados prévios). As células foram

plaqueadas (4x104 células/mL) e tratadas com as lectinas, sendo cada tratamento realizado em duplicata. O

controle positivo foi o metilmetanosulfonato. Após 24 horas, uma alíquota das células foi misturada a agarose de

baixo ponto de fusão. Em seguida, esta suspensão celular foi gotejada sobre lâmina coberta com agarose padrão.

Após imersão em solução de lise, foi realizada a corrida de eletroforese (20 min, 40 V, 300 mA). A coloração foi

feita com brometo de etídio e a análise realizada em microscópio de fluorescência. 100 nucleoides por lâmina

foram analisados e classificados, de acordo com o tamanho da cauda, nas classes 0, 1, 2, 3 e 4. O índice de danos

foi calculado pelo somatório do número de células em cada classe multiplicado pelo valor da classe. A análise

estatística foi realizada por ANOVA seguida pelo teste de Newman-Keuls. O índice de danos para os controles

negativo e positivo foi de 28,50±2,88 e 238,75±5,61, respectivamente. Para MuHL o índice de danos foi de

59,50±4,5 na concentração de 25 µg/mL, 56,2 ±8,18 para 50 µg/mL e 60,75±6,39 para 100 µg/mL. Para MuLL o

índice de danos foi de 35,25±0,95 para 12,5 µg/mL, 44,5±3,41 para 25 µg/mL e 60,0±5,47 para 50 µg/mL. O

índice de danos para SteLL foi de 37,25±3,2 para 12,5 µg/mL, 33,0±2,94 para 25 µg/mL e 140,25±4,03 para 50

µg/mL. MuHL promoveu danos classe 1 nas três concentrações testadas. MuLL promoveu danos apenas nas

concentrações de 25 e 50 µg/mL, pertencentes à classe 1 em ambas. STeLL promoveu danos apenas na

concentração de 50 µg/mL, pertencentes à classe 3. Em comparação ao controle negativo, MuLL, MuHL e SteLL

em pelo menos uma das concentrações testadas apresentaram-se potencialmente danosas ao material genético,

sendo necessários outros estudos a fim de verificar a fundo os possíveis efeitos genotóxicos destas lectinas.

APOIO FACEPE

321


AVALIAÇÃO DO POTENCIAL CITOTÓXICO, GENOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO EXTRATO DO

FRUTO DE LIBIDIBIA FERREA (MART. EX TULL) L.P. QUEIROZ VAR. FERREA USANDO

SISTEMA-TESTE ALLIUM CEPA L.

Raisa Ferreira Costa1; Dominick Spindola Correia

1; Ana Rafaela da Silva Oliveira

1; Bárbara Schneyder Oliveira

Pereira da Fonseca2; Mychely Sheila Melo Luna

3; Márcia Vanusa da Silva


1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética;

(2)Universidade Federal Rural de Pernambuco,

Departamento de Genética; (3)

Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Bioquímica

RESUMO Resumo: A Libidibia ferrea (Mart. Ex Tul) L. P. Queiroz (Fabaceae), conhecida como pau-ferro-verdadeiro, jucá e

jucaína, apresenta grande importância medicinal devido a seus metabólitos secundários, que apresentam atividades

antifúngica, antimicrobiana, anti-inflamatória, analgésica e antitumoral. Contudo, há pouca informação sobre suas

propriedades tóxicas. Dessa forma, o presente trabalho visou avaliar o potencial de citotóxico, genotóxico e

mutagênico do extrato aquoso do fruto de L. ferrea, em diferentes concentrações, usando a cebola (A. cepa) como

sistema-teste. Sementes de A. cepa recém-germinadas foram expostas às concentrações de 0,125; 0,25 e 0,5

mg/mL do extrato do fruto de L. ferrea por 24 h. Como controles positivos, foram utilizados o MMS (metil

metano-sulfonato, 4x10-4 M) e o herbicida Trifuralina (0,84 ppm); como controle negativo, utilizou-se água

ultrapura. As raízes foram fixadas em Carnoy (etanol: ácido acético; 3:1) e coradas com Reativo de Schiff. No

total, foram analisadas 5.000 células de cebola por tratamento. Na análise das lâminas, foram consideradas: índice

mitótico em células meristemáticas (citotoxicidade), frequência de alterações cromossômicas em células

meristemáticas (genotoxicidade) e índice de formação de micronúcleos (MN) em células da primeira geração filial

(F1) (mutagenicidade). As concentrações de L. ferrea apresentaram atividades genotóxica, para as concentrações

0,25 e 0,5 mg/mL, e citotóxica e mutagênica, para a concentração mais alta (0,5 mg/mL). Dentre as alterações

cromossômicas encontradas, observou-se diferença significativa para a presença de brotos nucleares e de

micronúcleos, para ambas as concentrações, e de quebras cromossômicas, para a concentração de 0,5 mg/mL.

Dessa forma, sugere-se que o uso medicinal dessa espécie seja feito com cautela, pois concentrações mais elevadas

podem promover instabilidade cromossômica e quebras no DNA.

APOIO Universidade Federal de Pernambuco(UFPE) e CAPES.

322


AVALIAÇÃO DO POTENCIAL MUTAGÊNICO DE EXTRATOS DE ALGAS RODOFÍCEAS

COLETADAS EM FLORESTAS DE MANGUE NA PENÍNSULA DE AJURUTERUA, BRAGRANÇA -

PARÁ

Herald Souza dos Reis1; Mary Helen Pestana da Costa

2; Carlos Fellipe da Silva Carvalho

1; Priscila Cordeiro

Costa da Silva1; Diana do Vale Leão

3; Carlos Alberto Machado da Rocha

1.


(1)Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará;

(2)Instituto de Ciências Biológicas, Universidade

Federal do Pará; (3)

Universidade da Amazônia

RESUMO Uma das principais limitações no processo de desenvolvimento de fármacos anticâncer é o suprimento das

moléculas, tanto para a fase de estudos como para produção em maior escala. Nesse contexto, surgem as

revolucionárias implicações dos estudos com metabólitos secundários de organismos aquáticos. A enorme

biodiversidade brasileira sugere grandes possibilidades para a produção de metabólitos secundários

biologicamente interessantes. O objetivo geral deste projeto foi verificar a possível ação mutagênica do extrato

bruto de Algas Rodofíceas coletadas em florestas de mangue na península de Ajuruterua, Bragrança-Pará. As algas

foram coletadas, lavadas e o extrato foi produzido com o uso do acetato de etila como solvente. Para o teste de

mutagenicidade, foi utilizado o teste com Allium cepa. Foram estudados 5 grupos de tratamentos. Controle

positivo (N-nitroso-n-methylurea [NMU] em concentração de 15mg/ml), Controle negativo (Tratado com água

destilada), Branco (Tratado com Dimetilsulfóxido [DMSO]), 50µg/ml de extrato (Diluído em DMSO), 100µg/ml

de extrato (Diluído em DMSO). Após o período de tratamento as lâminas foram preparadas para a análise do

índice mitótico, anomalias do ciclo mitótico (metáfase irregular, ponte telofásica, ponte anafásica e cromossomo

vagante) e micronúcleos. Os dados obtidos foram submetidos a uma análise de variância (ANOVA). Os

tratamentos não alteraram significativamente os índices mitóticos e nem as frequências de anomalias do ciclo

mitótico. Por outro lado, verificou-se aumento significativo na freqüência de micronúcleos em todos os grupos

tratados, quando comparados ao grupo controle. Entretanto, o maior índice de células micronucleadas ocorreu no

grupo Branco (tratado com DMSO), sugerindo que este solvente interferiu na avaliação do efeito mutagênico do

extrato de rodofíceas. Portanto, para resultados mais eficazes, é necessária a substituição do solvente DMSO (na

diluição do extrato) em testes in vivo com Allium cepa.

APOIO Instituto Federal de Educação, Ciência e Tecnologia do Pará - Diretoria de Pesquisa, Pós-Graduação e Inovação.

323


AVALIAÇÃO DO POTENCIAL MUTAGÊNICO E CITOTÓXICO DO SUCO DE NONI (MORINDA

CITRIFOLIA) EM SISTEMAS DE ALLIUM CEPA

Matheus de Moraes Cunha Gonçalves1; João Marcelo Castro Sousa

1; Leomá Albuquerque Matos

1; Sandra Maria

Mendes de Moura Dantas1; Amanda Carvalho de Barros

1.


(1)Universidade Federal do Piauí

RESUMO As plantas medicinais são usadas como o único recurso terapêutico de uma parcela da população brasileira e de

mais de 2/3 da população do planeta. Porém, a ação das substâncias presentes nessas plantas ainda é pouco

estudada, e muitas dessas podem ser citotóxicas e induzirem alterações no material genético. O noni (Morinda

citrifolia) é usado na medicina popular no tratamento de doenças e/ou distúrbios como diabetes, diarreia,

hipertensão, artrite, estresse e câncer. Este trabalho objetivou avaliar os efeitos citotóxicos e mutagênicos

da Morinda citrifolia em sistemas de Allium cepa utilizando três concentrações do suco do fruto: Tratamento-1;2;3

(T1=180g/L (usual); T2= 540g/L; T3=720g/L), além de um controle negativo (água destilada) e um controle

positivo (sulfato de cobre à 0,006mg/ml), sendo realizados dois tempos de exposição: 24 e 48 horas. Os bulbos

foram enraizados em água destilada até apresentarem raízes de aproximadamente 1 cm, sendo posteriormente

transferidos para os diferentes tratamentos, os bulbos do controle negativo permaneceram na água destilada até o

fim do experimento. Após este tempo de exposição, as raízes foram coletas, fixadas em metanol/acético 3:1 por

24h e coradas com orceína acética 2%. Para a avaliação da citotoxicidade comparou-se o total de células em

divisão dos tratamentos com as dos controles. Para a avaliação de aberrações cromossômicas, foram comparadas

as quantidades de alterações encontradas nos tratamentos com as aberrações observadas nos controles. As

aberrações mais frequentes foram: anáfases e metáfases com pontes e com cromossomos perdidos ou atrasados.

Para a análise estatística foi utilizado o programa Statistica 8.0, onde foi realizado ANOVA unifatorial e Pós-teste

de Fisher LSD, em todos os testes foi considerado o nível de significância de 0,05. Os resultados da análise

citotóxica e de aberrações cromossômicas em células expostas por 24 horas mostraram que apenas as

concentrações de 540g/Le 720g/L foram citotóxicas e nenhuma das três mostrou-se mutagênica. Os resultados da

análise citotóxica e de aberrações cromossômicas em células expostas por 48 horas mostraram que todas as

concentrações foram citotóxicas e apenas a concentração de 540g/L mostrou-se mutagênica. A citotoxicidade e

mutagenicidade pode estar relacionado com os compostos ativos presentes no fruto. A partir dos resultados

obtidos, verifica-se a necessidade de cuidados à serem tomados no preparo e uso do suco de plantas medicinais.

APOIO CNPq - UFPI

324


AVALIAÇÃO O PAPEL DAS VIAS NER E BER NA AGREGAÇÃO POLIGLUTAMÍNICA NO

MODELO TRANSGÊNICO DO CAENORHABDITIS ELEGANS PARA A DOENÇA DE HUNTINGTON

Marlon Barbosa Dantas de Carvalho1; Cesar Orlando MuÑoz Cadavid

2; Lucymara Fassarela Agnez

3; Riva de

Paula Oliveira3.


(1)Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN;

(2)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, RENORBIO,

UFRN, RN; (3)

Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN e Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia,

RENORBIO, UFRN, RN

RESUMO As doenças poli?glutamínicas (poliQ), como a Doença de Huntington (DH) e a atrofia muscular bulbo espinhal,

pertencem a uma categoria de desordens neurodegenerativas caracterizada pela presença de agregados e inclusões

corpusculares no sistema nervoso central originado a partir de proteínas contendo uma expansão anormal de

repetições de glutamina (Q). O aparecimento das primeiras manifestações das doenças poli?glutamínicas e a

severidade delas estão associadas diretamente com tamanho da expansão poliQ. O Caenorhabditis elegans é um

modelo vantajoso e único, com alto grau de conservação com os mamíferos, que permite que os mecanismos

genéticos da formação de agregados poliQ sejam facilmente investigados in vivo. A expressão de proteínas

PoliQn::YFP no C. elegans reproduz os aspectos da formação de agregados de maneira dependente do tamanho da

repetição e da idade como observado na DH. Tem sido demostrado que alterações nas vias de reparo de danos ao

DNA, principalmente via BER (Reparo por Excisão de Bases) e NER (Reparo por Excisão de Nucleotídeos) tem

sido associados a doenças neurodegenerativas como Mal Alzheimer (MA), doença de Parkinson (DP) e doença de

Huntington (DH). O objetivo deste trabalho é avaliar o papel dos sistema de reparo NER e BER na formação de

agregados poliglutamínicos (PoliQ) nos modelos transgênicos de C. elegans. Para isto, as cepas que super-

expressam PoliQ35::YFP e PoliQ40::YFP no músculo foram submetidas ao RNA de interferência (RNAi) para os

genes csb-1 e xpa-1 da via NER e para o gene exo-3 da via BER. Como resultado, observamos que o knockdown

dos genes csb-1 e exo-3 provocou o aumento do número médio de agregados nos animais adultos de 3 dias da cepa

PoliQ35::YFP. Já para a cepa PoliQ40::YFP o knockdown dos três genes aumentou o número médio de agregados

dos animais adultos de 2 dias. Estes dados sugerem que as vias de reparo NER e BER contribuem para a inibição

da agregação poliglutamínica no C. elegans.

APOIO CNPq

325


BIOENSAIO COM ALLIUM CEPA L. SUGERE EFEITO PROTETOR DO EXTRATO ETANÓLICO DE

AMBURANA CEARENSIS FRENTE À AÇÃO GENOTÓXICA DO TWEEN20.

Graziela Laís Maia Carvalho dos Santos1; Ilka Fernanda Mendes Pereira

2; Cinthia Silva Santos

1; Laysla dos

Santos Motta1; Draulio Costa Silva


1.




RESUMO Amburana cearensis (Fabaceae; umburana de cheiro) apresenta efeitos farmacológicos como anti-inflamatório e

antinociceptivo, sendo utilizada para problemas respiratórios no semiárido nordestino. Considerando que seus

efeitos adversos ainda não foram avaliados, o presente trabalho investigou a toxicidade e citogenotoxicidade do

extrato etanólico das vagens de A. cearensis mediante o bioensaio com Allium cepa L. Para isto, sementes de

cebola cultivar 'Vale Ouro' IPA-11 foram germinadas em placas de Petri (30 sementes/placa; quatro

placas/tratamento), sendo expostas às diferentes concentrações do extrato (2,0, 1,5, 1,0 e 0,5 mg/mL), ao Tween20

0,2% (Controle Solvente), à água ultrapura (Controle Negativo), bem como ao MMS (metil metano-sulfonato,

4x10-4 Mv) e ao Herbicida Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo) (Controles Positivos). As raízes germinadas

foram coletadas, medidas e fixadas em Carnoy. Para preparação das lâminas, as raízes foram lavadas, hidrolisadas

em HCL 1N a 60 ºC, coradas com reativo de Schiff e carmim acético 2%. Foram confeccionadas 10

lâminas/tratamento, onde 500 células foram analisadas, totalizando 5000 células/tratamento. O Índice de

Germinação (IG), a Variação do Comprimento Médio das Raízes (VCMR), Índice Mitótico (IM) e Índice de

Alterações Cromossômicas (IAC) foram avaliados estatisticamente pelo teste de Kruskal-Wallis, seguido de um

teste a posteriori de Tukey (p<0,05). A redução dos IGs e das VCMRs, bem como a estimativa da fitotoxicidade

(IGC) sugeriram uma ação tóxica para as concentrações do extrato em comparação à água. Em relação ao IM e

IAC, não foram visualizadas ações citogenotóxicas para as concentrações testadas, com exceção de 0,5 mg/mL, a

qual evidenciou o menor IM (18,09) entre os tratamentos, ressaltando uma ação citotóxica. Entretanto, os testes

indicaram que o Tween20 0,2% induziu a diminuição do IG (44,16%) e VCMR (0,59 cm), sugerindo atividade

tóxica sobre as células de A. cepa, levantando-se a hipótese que a toxicidade das concentrações do extrato seja

decorrente da ação do solvente. Paralelamente, um potencial tóxico foi notado pelo IAC (0,70) para o solvente em

comparação a água (0,46); entretanto, as concentrações testadas do extrato apresentaram os menores IAC, sendo

os valores mais baixos observados para a concentração 2,0 mg/mL. Tal resultado sugere que o extrato de A.

cearensis apresenta um efeito protetor contra o potencial genotóxico do Tween20, fato que necessita ser melhor

investigado.

APOIO CNPq, Ministério da Integração Nacional, UNIVASF

326


CITOTOXIC AND MUTAGENIC EVALUATION OF PYRIPROXYFEN, A NOVEL LARVICIDE USED

TO AEDES AEGIPTY CONTROL

Ataíde de Macedo Vieira Lima1; Lígia Ferreira Teles

1; Larissa de Sousa Soares

1; Victor Alves de Oliveira

1;

Felipe Cavalcanti Carneiro da Silva1; Ana Paula Peron

1; Leonardo Henrique Guedes de Morais Lima

1; João

Marcelo de Castro e Sousa1.


(1)Universidade Federal do Piaui

RESUMO Recently it was released a new larvicide called Pyriproxyfen , which is used in water tanks against Aedes aegipty.

Because of the microcephaly outbreak occurred in various regions of Brazil, it was raised the hypothesis that the

indiscriminate use of the larvicide could be associated with microcephaly, regardless the Zika virus. Given the lack

of studies showing the risks of using Pyriproxyfen for the human population as well as its genotoxic effects, our

study aimed to evaluated the cytotoxic and mutagenic potential of pyriproxyfen through the Allium Cepa test

system. we used a concentration of 10mg/ml (recommended concentration), and two additional concentrations of

5mg/ml and 0.5mg/ml. They were evaluated in three different exposure times (24, 48 and 72hours).Using two

controls: negative control - NC (distilled water) and positive-PC (cooper sulfate 0.0006mg/ml). The results

showed that the concentrations of 0.5 and 10mg/ml were cytotoxic in 48 and 72h, and the concentration 5mg/ml in

24 and 72h all compared in relation to NC. The concentration 5mg/ml and 10mg/ml were statistically equivalent to

CP in 03 TE, showing the high cytotoxic effect of these concentrations. For DNA damage, the concentration 0.5

mg / ml proved to be mutagenic in 72h, 5 mg/ml were mutagenic in 48h and the 10mg/ml was mutagenic in 24 and

48h all compared in relation to NC.None of the evaluated concentrations showed mutagenic effect to PC.

Larvicides contribute to economic growth and pest control, but also are responsible for many cases of poisoning

and genetic diseases in humans, such as cancer. The Pyriproxyfen caused mitotic cycle inhibitions, and genetic

instability through DNA breaks, losses and chromosomal delays which may favor the emergence of cancer in

humans (health workers, farmers and the general population). Therefore, it is concluded that even at low and

permitted concentrations, pyriproxyfen, is able to induce DNA damage, enhancing the importance of constant

evaluation through toxicological and genetic studies of new efficient larvicides potentially harmfull to humans.

Nevertheless, further studies are needed to elucidate the risk of birth deffects of Pyriproxyfen in animal systems,

such as mice.

327


CITOTOXICIDADE, GENOTOXICIDADE E MUTAGENICIDADE DE CLOROFILINA CUPRICA DE

SÓDIO [(CHL-CU(II)NA] EM ALLIUM CEPA

Márcia Ramos Jorge1; Maithon Mareco Rocha

1; Bruno do Amaral Crispim

1; Fabiane Silva Ferreira

2; Alexeia

Barufatti Grisolia3; Anderson Rodrigues Lima Caires

4; Cynthia Suzyhelen Caires

4; Isaías Cabrini

5; Eduardo José

de Arruda1.


(1)Faculdade de Ciências Exatas e Tecnologias, UFGD. Dourados-MS, Brasil.

(2)Programa de Pós Graduação em

Recursos Naturais, UEMS. Dourados-MS, Brasil.; (3)

Faculdade de Ciências Biológicas e Ambientais, UFGD.

Dourados-MS, Brasil. (4)

Instituto de Física - Grupo de Óptica e Fotônica - UFMS - Campo Grande-MS, Brasil. (5)

Instituto de Biologia, UNICAMP, Campinas-SP, Brasil.

RESUMO O uso indiscriminado de inseticidas sintéticos/convencionais contribui para o aparecimento de organismos

resistentes, com sérios impactos na saúde pública. O controle fotodinâmico é uma estratégia emergente para

aplicação antimicrobiana e inseticida por produção de espécies radicais de oxigênio (EROs) "in situ", por interação

entre um fotossensibilizador FS) e irradiação solar e artificial. A clorofilina cúprica de sódio, [Chl-Cu(II)Na], é

uma molécula derivada da clorofila por modificações químicas e complexação com Cu(II), solúvel em água,

utilizada extensamente como corante/aditivo alimentar e que possui comprovado efeito antioxidante, anti-

carcinogênico e radioprotetor. O seu potencial fotossensibilizador tem sido extensamente estudado para

fotoinativação de bactérias gram-positivas e gram-negativas e até para o controle de larvas e adultos de Aedes

aegypti. Entretanto, é necessário garantir que o produto não apresente efeitos adversos, como citotoxicidade,

genotoxicidade e mutagenicidade. O objetivo do estudo foi avaliar a atividade biológica da [Chl-Cu(II)Na] em

diferentes concentrações (50, 100 e 200 mg L-1

), utilizando o teste de Allium cepa. As sementes foram expostas

aos tratamentos por 96h a 22 ± 2°C. Os danos genéticos foram avaliados pelos índices mitótico (IM), alterações

cromossômicas (IAC) e de micronúcleos (IMT). Os resultados da análise genética indicam que não existem

diferenças estatísticas entre as concentrações, para todos os parâmetros, e para as concentrações em relação ao

controle negativo (CN), para IAC e IMT. No IM, verificou-se diferença significativa para as concentrações

testadas em relação ao CN (P < 0.05), tendo a clorofilina potencializado a divisão celular. Deste modo, o bioensaio

indica que a clorofilina sódica cúprica não apresenta potencial citotóxico, genotóxico ou mutagênico em A. cepa.

No entanto, outros testes sem e com irradiação serão realizados para entendimento do comportamento da [Chl-

Cu(II)Na], de forma a usufruir dos seus benefícios sem prejuízos para o ambiente e saúde pública.

APOIO CNPq, CAPES/PROCAD 2013, FUNDECT, UNICAMP, UFMS e UFGD.

328


CROMOSSOMO DICÊNTRICO NA AVALIAÇÃO DE DOSE ABSORVIDA

Mariana Esposito Mendes1; Julyanne Conceição de Goes Mendonça


3; Neide Santos

4.


(1)Estudante de Doutorado do PPG Genética / CB / UFPE;

(2)Estudante de Mestrado do PPG em Saúde Humana e

Meio Ambiente / CAV / UFPE; (3)

Centro Regional de Ciências Nucleares do Nordeste (CRCN-NE/CNEN-PE) /

Laboratório de Dosimetria Biológica; (4)

4Universidade Federal de Pernambuco / Departamento de Genética

(CB/UFPE)

RESUMO O cromossomo dicêntrico é uma das alterações cromossômicas utilizadas como biomarcador na dosimetria

biológica, auxiliando na estimativa de dose absorvida pelo organismo humano após exposição à radiação

ionizante. A média de cromossomos dicêntricos tem uma relação definida com o valor de dose absorvida, chamada

de dose-resposta, sendo representada por curvas de calibração dose-resposta. Estudo sobre a exposição à radiação

com feixes de taxas de dose baixas torna-se importante, pois os cenários acidentais de exposição envolvem

irradiações que diferem em intervalo de tempo, em distâncias e, portanto, simulam diferentes taxas de dose. O

objetivo deste trabalho foi construir a curva de calibração local, obtida no CNEN/CRCN-NE, e comparar os

resultados com diferentes curvas de calibração construídas com feixes de taxas de dose baixas. Testes estatísticos

como ANOVA e Turkey foram realizados nessa comparação. Cada ponto da curva de calibração é representado

por uma dose absorvida, e para cada dose, foi utilizado o teste u de Papworth para avaliar sua conformidade com a

distribuição de Poisson, modelo para esse tipo de radiação. A curva de calibração local apresentou-se de acordo

com a literatura. No estudo da comparação foi observado que quanto menor a taxa de dose há redução na média de

dicêntricos, pois ao diminuir a taxa de dose permite-se que o sistema de reparo celular atue, reduzindo a

probabilidade de encontrar os dicêntricos. Outra diferença encontrada foi o tempo de cultura dos linfócitos para a

análise de dicêntricos em metáfase, sendo necessário cumprir 48h de cultura, pois estima-se que com esse tempo

90% dos linfócitos estarão nessa fase. Logo, as curvas com o tempo abaixo disso reduziram ainda mais as chances

de encontrar os dicêntricos em suas células. Contudo, mesmo com essas diferenças de médias de dicêntrico, todas

as curvas de calibração produzidas estimam doses absorvidas similares, ou seja, sem diferenças estatísticas

confirmadas pelos testes. Assim, propomos que se um laboratório conhece a taxa de dose envolvida na exposição à

radiação e se o background de dicêntrico da região for espontâneo, a curva de calibração local e as demais poderão

ser usadas por qualquer outro laboratório, a fim de reduzir os recursos financeiros e tempo na construção de novas

curvas de calibração para esse tipo de radiação e com essas taxas de doses.

APOIO CNPq, CAPES

329


DANOS GENOTÓXICOS E MUTAGÊNICOS EM OREOCHROMIS NILOTICUS EXPOSTOS A ÁGUAS

DO RIO MUNIM, MA, BRASIL

Muryllo Santos Castro1; Luis Fernando Carvalho Costa

1; Ricardo Luvizotto Santos

1; Marta Regina de Castro

Belfort1; Vanessa Ribeiro Moreira

1; Patrícia Valéria Castelo Branco Araujo


2; Silma

Regina Ferreira Pereira1.




RESUMO Os ecossistemas aquáticos têm sido alvo de várias substâncias que podem ser consideradas genotóxicas e

mutagênicas, desencadeando processos nocivos aos organismos aquáticos. O uso de programas de

biomonitoramento com organismos bioindicadores e testes citogenéticos têm sido utilizados para avaliar a

qualidade ambiental das águas. Este trabalho teve como objetivo avaliar o potencial genotóxico e mutagênico de

amostras de água do rio Munim através dos testes do cometa e do micronúcleo em eritrócitos de peixes da

espécie Oreochromis niloticus. Os bioensaios foram montados com quatro amostras, duas contendo água do rio

Munim (das cidades de Chapadinha e Cachoeira Grande, MA) uma para controle negativo e uma para controle

positivo (ciclofosfamida 50 mg/kg). Os resultados do teste do cometa mostraram que o DNA dos peixes expostos à

água do rio Munim sofreram danos em ambos os pontos analisados. Da mesma forma, os dados do teste de

micronúcleo também indicaram que as amostras de águas do rio Munim foram capazes de causar mutações no

DNA de O. niloticus. As evidências apontam que as amostras de água de ambos os pontos de coleta se mostraram

genotóxicas e mutagênicas para o organismo estudado. O rio Munim tem sido alvo de várias atividades que podem

causar problemas em seu curso, como a proximidade de localidades povoadas, a implementação de projetos

agropecuários e a urbanização de suas margens. Isso vem acarretando sérios problemas ambientais, como o

aumento de compostos xenobióticos como os agrotóxicos e o despejo de esgotos domésticos sendo despejados no

leito do rio, que podem ocasionar danos no DNA dos organismos locais. A maioria dos moradores que residem

próximo ao rio Munim utilizam agrotóxicos para combater as pragas que ameaçam suas plantações. Outro possível

agente que pode estar provocando tais efeitos na água do Munim é o esgoto doméstico. Nas cidades onde foram

coletadas as amostras de água, não há um programa de saneamento básico, problema que acomete todo o Estado

do Maranhão, que possui apenas 11,6% de domicilio com redes de esgoto e 15% com fossas sépticas, resultando

em 73% da população maranhense utilizando meios inadequados para se desfazer do esgoto gerado, que pode estar

sendo lançado no rio. Concluímos que nos pontos amostrados existem substâncias capazes de gerar danos e

mutações no DNA de peixes, que podem estar afetando a biota local.

330


EFEITO ANTIMUTAGÊNICO DO ÁCIDO ASCÓRBICO SOBRE DANOS AO DNA CAUSADOS PELO

ANTILEISHMANIAL GLUCANTIME®

Raissa Lacerda Pontes1; Luis Claudio de Jesus Lima

1; Vanessa Ribeiro Moreira

1; Patricia Valeria Castelo

Branco Araújo1; Marta Regina de Castro Belfort

1; Silma Regina Ferreira Pereira

1.


(1)UFMA

RESUMO As leishmanioses são doenças infecciosas, não contagiosas, causadas por protozoários do gênero Leishmania. O

seu arsenal terapêutico é restrito ao uso do Glucantime® (antimoniato de meglumina), mesmo sendo reconhecidos

seus efeitos tóxicos, inclusive mutagênico, conforme descrito por nosso grupo. O mecanismo pelo qual este

fármaco causa danos ao DNA não são bem compreendidos, mas há evidências que seu efeito genotóxico é baseado

na geração de espécies reativas de oxigênio (ROS). Por outro lado, sabe-se que o ácido ascórbico possui inúmeros

benefícios que são atribuídos ao seu efeito antioxidante e antimutagênico. Assim, este trabalho se propôs a avaliar

se o ácido ascórbico é capaz de reduzir os danos ao DNA causados pelo Glucantime®, em um sistema in vivo, em

condições de pré-tratamento (PRE), pós-tratamento (POS) e tratamento simultâneo (S1, S2, S3). Assim, 45

camundongos da linhagem Swiss foram divididos em 9 grupos experimentais, sendo eles: controle negativo (CN:

água destilada), controle positivo (CP: ciclofosfamida 50mg/kg), Glucantime® (GLU: 810mg/kg), ácido ascórbico

(AA: 60mg/kg), S1 (AA 120mg/kg+GLU 810mg/kg), S2 (AA 60mg/kg+GLU 810mg/kg) e S3 (AA

30mg/kg+GLU 810mg/kg), pré-tratamento (AA 60mg/kg 24 horas antes do GLU 810mg/kg) e pós-tratamento

(AA 60mg/kg 24 horas depois do GLU 810mg/kg). Todos os tratamentos foram realizados via intraperitoneal e as

células foram colhidas 24 horas (tratamentos simultâneos) e 48 horas (pré e pós-tratamento), após o primeiro

tratamento. Os danos genéticos foram avaliados pelo Ensaio do Cometa e Teste do Micronúcleo, e os dados foram

analisados por ANOVA, seguido pelo Teste de Tukey, sendo consideradas significativas as diferenças com

p<0.05. Os resultados deste trabalho mostraram que o ácido ascórbico reduz lesões genômicas e frequência de

células micronucleadas induzidas pelo Glucantime®

(14.4±1.43) em todas as doses do tratamento simultâneo e no

pós-tratamento (8.1±0.96), sendo que a dose de 60mg/kg no tratamento simultâneo (6.4±1.19) apresentou maior

efeito antimutagênico, reduzindo para um nível basal de células micronucleadas observado no controle negativo

(3.5±0.50). A observação de que o ácido ascórbico é capaz de reduzir os danos genéticos causados pelo

Glucantime® reforça as evidências que a geração de ROS é um dos mecanismos de ação da droga, bem como abre

perspectivas para a elaboração de novas abordagens que visem a modulação dos efeitos colaterais do

medicamento, sem afetar a sua ação terapêutica.

APOIO FAPEMA e CNPq.

331


EFEITO ANTIPROLIFERATIVO E GENOTÓXICO DE ADITIVOS ALIMENTARES DE AROMA E

SABOR SINTÉTICOS, IDÊNTICOS AO NATURAL, DE LARANJA E MARACUJÁ.

Ila Monize Sousa Sales1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos

2; Maria Eduarda de Sousa e Silva

2; Ana Paula

Peron3.



(2)Discente do Departamento de Ciências

Biológicas, UFPI, Picos, PI; (3)

Docente Programa de Pós-graduação em Genética e Melhoramento, UFPI,

Teresina, PI

RESUMO Os aromatizantes são aditivos alimentares com propriedades de conferirem e/ou reforçarem o aroma e o sabor dos

alimentos industrializados. Em função de sua relevância tecnológica para a indústria alimentícia, tais aditivos

devem ser constantemente avaliados quanto aos seus potencias toxicológicos. Dessa forma, objetivou-se neste

trabalho analisar o potencial citotóxico e genotóxico de aromatizantes alimentares sintéticos líquidos, idênticos aos

naturais, de Maracujá e Laranja. Esta avaliação foi realizada por meio das células meristemáticas de raízes de

Allium cepa L., nos tempos de exposição de 24 e 48 horas e nas doses de 0,2; 0,4 e 0,6 ml. As raízes foram fixadas

em solução de Carnoy, hidrolisadas em ácido clorídrico e coradas com orceína acética. Analisou-se, em

microscópio óptico em aumento de 40x, um total de 5.000 células para o controle e tempo de exposição de cada

dose. Os resultados da análise foram submetidos ao teste estatístico Qui-quadrado a 5%. A partir dos resultados foi

possível verificar que a dose de 0,2 ml de Maracujá no tempo de exposição 48 horas, e as de 0,4 e 0,6 ml do

aromatizante de Maracujá, bem como as três doses de Laranja, nos dois tempos de análises estabelecidos, foram

citotóxicas as células de meristema de raízes. Ainda, as doses 0,4 e 0,6 ml do aditivo de Maracujá promoveram

distúrbios de fuso mitótico em frequência significativa ao tecido analisado, demonstrando expressiva atividade

genotóxicas. Portanto, nas condições analisadas, os aromatizantes de Laranja e Maracujá alteraram

significativamente o funcionamento do ciclo celular das células meristemáticas de raízes de A. cepa


332


EFEITO DA GENOTOXICIDADE EM PHRYNOPS GEOFFROANUS (TESTUDINAE, CHELIDAE) A

PARTIR DA ANÁLISE DAS ALTERAÇÕES CROMOSSÔMICAS ESTRUTURAIS

João Carlos Farias Santana da Silva1; Paulo Mateus Martins Sobrinho

2; Marcos da Silveira Regueira Neto

3;

Geraldo Jorge Barbosa de Moura2; Vilma Loreto da Silva

1.


(1)Laboratório de Genética e Citogenética Animal e Humana, UFPE, Recife, PE;

(2)Laboratório de Estudos

Herpetológicos e Paleoherpetológicos, UFRPE, Recife, PE; (3)

Laboratório de Bioinformática e Biologia Evolutiva,

UFPE, Recife, PE

RESUMO Os ambientes aquáticos são frequentemente expostos a contaminantes oriundos de efluentes, que muitas vezes

possuem capacidades citotóxicas, genotóxicas ou carcinogênicas. Para estudos de contaminação, quelônios podem

ser utilizados como bioindicadores tendo em vista seus atributos ecológicos. A espécie Phrynops

geoffroanus possui ampla distribuição na América do Sul, e é encontrada em rios e riachos poluídos, contudo

também está presente em ambientes preservados. O objetivo deste estudo foi analisar o cariótipo da espécie e

avaliar as possíveis alterações cromossômicas de P. geoffroanus coletados em ambiente impactado por ação

antrópica (Riacho do Cavouco, Campus UFPE) e comparar com animais coletados em um ambiente preservado

(Açude do Prata - Dois Irmãos, Recife - PE). Foram coletadas amostras sanguíneas de exemplares da espécie para

obtenção das metáfases mitóticas por meio da técnica de cultura de linfócitos. Do ponto de vista cromossômico os

machos apresentaram número diploide 2n=57, as fêmeas possuem 2n=58, no entanto, no presente estudo não foi

determinado os cromossomos sexuais. Para avaliar a ocorrência de alterações cromossômicas foram realizadas

análises de 100 metáfases de dois espécimes de cada ambiente. No ambiente impactado, foram encontradas 33

células com alterações cromossômica, sabendo que algumas células apresentaram mais de uma alteração foram

quantificadas 29 quebras cromatídicas, 7 gaps cromatídicos e 2 quebras cromossômicas. Por sua vez, o ambiente

preservado apresentou 4 células com alterações sendo todas do tipo quebras cromatídicas. A maior parte das

alterações ocorreram em cromossomos acrocêntricos (47,6%) seguidos de metacêntricos (31%) e submetacêntricos

(21,4%). Os dados foram submetidos ao teste exato de Fisher que apresentou p<0,0001 e reforçado com o teste

qui-quadrado (25,05; α=5%) comprovando o aumento significativo no número de células com alterações. Quando

avaliado o grau de dano nos animais expostos ao ambiente poluído, em comparação com os animais coletados no

riacho não poluído, é evidente que houve maior quantidade e complexidade dos danos.

APOIO CNPq

333


ESTUDO DA FREQUÊNCIA DE ALTERAÇÕES CROMOSSÔMICAS INSTÁVEIS EM LINFÓCITOS

DEVIDO À RADIAÇÃO IONIZANTE

Laís Melo da Silva1; Julyanne Conceição Góes de Mendonça

2; Mariana Esposito Mendes

3; Aida Mayra Guedes

de Andrade1; Suy Hwang


4.


(1)graduanda em biomedicina (CB/UFPE);

(2)mestranda em Programa de Pós graduação em saúde e Meio

Ambiente (CAV/UFPE); (3)

doutaranda em Departamento de Genética (CB/UFPE); (4)

Centro Regional de Ciências

Nucleares do Nordeste (CRCN-NE/CNEN)

RESUMO Com o crescente uso dos raios X no meio médico e industrial e a utilização de doses mais elevadas, surge a

preocupação sobre os riscos de exposição excessiva a radiação ionizante. A dosimetria citogenética é uma técnica

biológica muito sensível, que estima a dose absorvida em indivíduos expostos à radiação ionizante por meio da

observação das frequências das alterações cromossômicas encontradas em sangue periférico humano.Esse trabalho

visa analisar as frequências das alterações cromossômicas instáveis induzidas por raios X em duas diferentes doses

absorvidas. Foram coletadas amostras com 10ml de sangue periférico em seringas estéreis descartáveis revestidas

com heparina de um doador saudável e não fumante. As amostras foram aliquotadas a fim de serem destinadas ao

controle (sem irradiação) e serem irradiadas com feixes de raios-X de 250 Kvp. Após o encaminhamento para a

cultura de linfócitos, foram obtidas as preparações citológicas usadas na confecção das lâminas que, foram coradas

com Giemsa para posterior contagem das alterações cromossômicas em microscópios ópticos por no mínimo dois

observadores habilitados. Foram lidas ao menos 1000 metáfases viáveis para cada dose absorvida e para o cálculo

do nível de significância foi utilizado o teste qui-quadrado, considerando diferenças relevantes entre as frequências

quando o valor de p<0,05. Os resultados mostraram que houve diferença significativa das frequências de

cromossomos dicêntricos, a saber, de 0,026 a 0,75Gy para 0,078 a 1,0Gy, entretanto, não houve diferença

estatisticamente significante entre as frequências dos fragmentos acêntricos sendo observada de 0,057 a 0,75Gy

para 0,069 a 1,0Gy e como também cromossomos em anel indo de 0,0069 a 0,75Gy para 0,0060 a 1,0Gy.O

número baixo de anéis encontrados é esperado e justificado, tendo em vista que, em linfócitos humanos irradiados

com radiação de baixa LET,como a usada no trabalho em questão, sua aparição é considerada rara em relação aos

dicêntricos. Quanto aos fragmentos acêntricos, sua aparição é inespecífica e sofre influencia de outros

agentes,sendo explicada assim sua quantidade randômica em relação aos dicêntricos por dose,podendo ou não ter

uma freqüência maior. Portanto, os resultados apontam que dicêntricos são os biomarcadores mais confiáveis na

estimativa de dose após exposição à radiação-X. Esses dois pontos irão compor a curva de calibração dose-

resposta que está sendo construída para o Laboratório de Dosimetria Biológica do CRCN-NE/CNEN.

334


ESTUDO DO EFEITO GENOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO COMPOSTO LIQUÊNICO ÁCIDO

DIVARICÁTICO INVESTIGADO POR MEIO DO TESTE SMART E ENSAIO COMETA, EM

CÉLULAS SOMÁTICAS DE DROSOPHILA MELANOGASTER

Jessica Celerino dos Santos1; Érima Maria de Amorim

1; André Severino da Silva

1; Anadeje Celerino dos Santos

Silva1; Claudia Rohde

1; Emerson Peter da Silva Falcão

1.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DE PERNAMBUCO - CENTRO ACADÊMICO DE VITÓRIA DE SANTO

ANTÃO - UFPE/CAV

RESUMO Os liquens são originados a partir da associação simbiótica entre fungos e algas ou cianobactérias, sendo utilizados

há séculos na medicina popular devido às suas propriedades terapêuticas. Os metabólitos secundários liquênicos

apresentam diversas propriedades, como antinflamatória, antitumoral, antimicrobiana, dentre outras, entretanto,

poucos trabalhos descrevem o potencial mutagênico e/ou genotóxico destes compostos. O ácido divaricático é um

fenol liquênico ainda pouco estudado quanto ao seu potencial biotecnológico, entretanto apresenta atividade

protetora contra radiação UV. Este trabalho teve como objetivo avaliar o efeito tóxico-genético ácido divaricático

através do teste SMART e Ensaio Cometa em células somáticas de Drosophila melanogaster. O Teste de Mutação

e Recombinação Somática (SMART), está baseado na identificação dos fenótipos mutantes flr³ e/ou mwh que se

expressam nos pelos das asas de indivíduos adultos de D. melanogaster. E para o ensaio cometa foram coletados

hemócitos de larvas de D. melanogaster da linhagem Oregon-R. O ácido divaricático foi isolado a partir do extrato

etéreo do liquen Ramalina aspera. A pureza do composto foi avaliada através de cromatografia em camada

delgada e líquida de alta eficiência. Larvas D. melanogaster resultantes do cruzamento padrão (fêmeas flr³ e

machos mwh) foram submetidas ao composto nas concentrações: 0,32, 0,64, 1,26, 2,53, 5,05 e 10,11 mg/mL, no

teste SMART. E para o ensaio cometa, larvas da linhagem Oregon-R, foram submetidas ao ácido divaricático por

24 horas nas concentrações 0,32, 0,64, 1,26, 2,53 mg/mL. Também foram estabelecidos um grupo controle

positivo (mitomicina C a 1mg/mL para o SMART e ciclofosfamida à 1mg/mL no Ensaio Cometa), e um controle

negativo (água destilada, tween80 e etanol) para ambos os experimentos. Os resultados do teste SMART avaliados

por meio do teste condicional binomial de Kastembaum e Bowman indicaram que houve efeito tóxico apenas nas

concentrações 5,05 e 10,11 mg/mL (com morte superior a 70% dos indivíduos tratados) e ausência de efeito

mutagênico nas demais concentrações. E para o ensaio cometa foram utilizados os testes: Análise de Variância

(ANOVA) e o Bonferroni, os quais mostraram que não houve diferença estatisticamente significativa em nenhuma

das concentrações, indicando que nas condições testadas o composto não apresentou ação genotóxica. O conjunto

dos resultados atesta para a segurança do uso do Ácido divaricático, na composição de novos fármacos.

APOIO FACEPE, CNPq, CAPES, PROPESQ-UFPE.

335


GENOTOXICIDADE E MUTAGENICIDADE DO ANTILEISHMANIAL GLUCANTIME® EM

CAMUNDONGOS BALB/C INFECTADOS COM LEISHMANIA INFANTUM CHAGASI

Raissa Lacerda Pontes1; Vanessa Ribeiro Moreira

1; Luis Claudio Lima de Jesus

1; Rossy Eric Pereira Soares

1;

Bruno Araujo Serra Pinto1; Luis Douglas Miranda Silva

1; Antonio Marcus de Andrade Paes

1; Silma Regina

Ferreira Pereira1.


(1)UFMA

RESUMO Leishmaniose é uma patologia infecciosa e crônica não contagiosa, altamente negligenciada, ocasionada por

protozoários parasitas do gênero Leishmania. O arsenal terapêutico contra a leishmaniose é baseado

principalmente nos antimoniais (antimoniato de meglumina-Glucantime® e o estibogluconato de sódio-

Pentostam®). Glucantime® é o fármaco de primeira escolha recomendada pela Organização Mundial de Saúde e,

embora utilizado há mais de sete décadas, os mecanismos de ação dos antimoniais pentavalentes permanecem

obscuros. Nesse sentido, investigamos o mecanismo pelo qual o Glucantime® causa danos ao DNA

em camundongos BALB/c infectados com Leishmania infatum chagasi e tratados com Glucantime®. Os animais

foram divididos em quatro grupos, a saber: animais não infectados que receberam solução salina (CN); G1:

animais infectados sem tratamento com Glucantime®; G2: animais não infectados tratados com Glucantime®

durante 20 dias (20mg/kg/dia) e G3: animais infectados e tratados com Glucantime® durante 20 dias

(20mg/kg/dia) que foram avaliados quanto à frequência de danos genéticos pelo ensaio do cometa convencional

bem como pela sua versão enzimática (Formamidopirimidina-DNA-glicosilase- Fpg e Endonuclease III - ENDO

III), por meio da qual é possível avaliar a ocorrência de danos genéticos por oxidação das bases nitrogenadas do

DNA e a avaliação mutagênica foi realizada pelo ensaio do micronúcleo. Para análise estatística utilizou-se

ANOVA seguido de Tukey para os dados com distribuição normal e para os dados não paramétricos, Kruskal

Wallis seguido de Student New Keuls. Os dados deste trabalho mostraram que os grupos G1 (1.08±0.21), G2

(1.31±0.36) e G3 (0.84±0.17) apresentaram escores de danos maiores que o CN (0.35±0.08) revelando que tanto a

infecção quanto Glucantime® causam lesões genômicas. Observou-se que em todos os grupos houve diferença

significativa ao comparar-se os escores de danos obtidos pelo teste do cometa convencional e enzimático,

sugerindo que a infecção, assim como o Glucantime®, causam lesões genômicas por oxidação de bases

nitrogenadas do DNA. Além disso, os grupos tratados com Glucantime® apresentaram aumento significativo na

freqüência de micronúcleos em relação ao controle negativo, evidenciando que este fármaco é capaz de induzir

mutações. Esses dados sugerem que o antimonial Glucantime® causa danos ao DNA por oxidação de suas bases.

APOIO FAPEMA, CNPq e CAPES

336


GUARANA (PAULLINIA CUPANA) EXTRACT PROTECTS CAENORHABDITIS ELEGANS MODELS

FOR HUNTINGTON AND ALZHEIMER DISEASES THROUGH ACTIVATION OF ANTIOXIDANT

AND PROTEIN DEGRADATION PATHWAYS

Patrícia Ferreira Boasquivis1; Giovana Melo Martins Silva

2; Renata Cristina Resende

3; Riva de Paula Oliveira

4.


(1)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, NUPEB, UFOP, MG;

(2)Depto. Biologia Celular e Genética,

UFRN, RN; (3)

Depto. de Biodiversidade, UFOP, MG; (4)

Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, NUPEB,

UFOP, MG; Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN, RN; Depto. de Biodiversidade, UFOP, MG; Brasil

RESUMO Guarana (Paullinia cupana) is a Brazilian plant which has emerged as a key ingredient in various sports and

energy drinks because of its antioxidant property and several pharmacological activities on the central nervous

system. Composition analysis shows that guaraná contains epicatechin, procyanidins, and phenolic compounds

mainly caffeine. In vitro studies showed that the hydroalcoholic extract of guaraná (HEG) presents strong

antioxidant activity against DPPH (1, 1?-diphenyl -2-picryl-hydrazyl) radicals. Here we investigated the protective

effects of HEG in Caenorhabditis elegans models of Huntington and Alzheimer diseases. HEG decreased

polyglutamine protein (polyQ40) aggregation expressed in the muscle and reduced neurotoxicity polyQ150

expressed in ASH neurons. Also, HEG delayed b-amyloid (Ab) induced paralysis in the transgenic C. elegans

model which expresses human Ab1-42 in the muscle. Inactivation of skn-1 by RNAi blocked the protective effects

of EHG, indicating that transcription factor SKN-1, the ortholog of Nrf2 in mammals is involved in the

mechanism of EHG protection. HEG treatment increased C. elegans tolerance to heat shock independently of any

effect on C. elegans development and bacterial growth. Analysis with GFP reporter strains revealed that HEG

treatment increased the expression of heat shock protein hsp16.2::GFP and superoxide dismutase sod-3::GFP but

not glutathione-S transferase gst-4::GFP. To determine whether the increased thermotolerance and chaperonin

expression induced by HEG has an effect on protein homeostasis, we measured proteasome and lysosomal

activity. HEG increased proteasome degradation activity by 2-fold relative to the control. We also observed the

accumulation of autophagosomes marked by GFP::LGG-1 transgenic line. Taken together, these results suggest

that in C. elegans HEG alleviated polyglutamine protein aggregation and b-amyloid induced toxicity in part,

through up-regulation of heat shock protein, increased protein degradation and SKN-1 pathway.

APOIO UFOP, CAPES, FAPEMIG e CNPq

337


INVESTIGAÇÃO DO POTENCIAL TÓXICO E CITOGENOTÓXICO DA ÁGUA AÇUDE

ENTREMONTES (BACIA DO RIO BRÍGIDA, ESTADO DE PERNAMBUCO) MEDIANTE O

BIOENSAIO COM ALLIUM CEPA L.

Laysla dos Santos Motta1; Ilka Fernanda Mendes Pereira

2; Cinthia dos Santos Silva

1; Draulio Costa da Silva

1;

Paula Tereza da Silva3; Ana Christina Brasileiro Vidal


1.


(1)CCBIO/UNIVASF;

(2)Departamento de Genética/UFPE;

(3)Embrapa Semiárido

RESUMO O açude Entremontes (Parnamirim-PE), pertencente a bacia do rio Brígida, é o segundo maior reservatório hídrico

do Estado, sendo explorado como fonte de sobrevivência pela população de vários municípios do semiárido

nordestino. Dada às atividades de piscicultura e agricultura exercidas na região, o presente trabalho investigou o

potencial tóxico e citogenotóxico de amostras de água coletadas neste açude e dois afluentes, durante as estações

seca (ES; Janeiro/2015) e chuvosa (EC; Maio/2015), mediante o bioensaio Allium cepa L. e sua correlação com

parâmetros físicos e químicos. Amostras de água foram coletadas em três pontos de amostragem: PI (0379175-

9125027 24L UTM), PII (0385931 - 9116125 24L UTM) e no próprio açude PIII (0400921- 9090789 24L UTM).

Variáveis hidroquímicas foram medidas in situ, enquanto que as concentrações de metais pesados em laboratório.

Sementes de A. cepa foram submetidas às amostras coletadas e aos controles negativo (CN; água ultrapura) e

positivo [CP; Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo)]. Após germinação, raízes foram medidas, fixadas em

Carnoy e utilizadas na preparação das lâminas seguindo método de Feulgen. Foram analisadas 5000

células/tratamento. Os resultados foram comparados ao CN mediante teste de Kruskal-Wallis seguido do teste de

Tukey (p<0,05). Em se tratando do comprimento médio das raízes (VCMR), índice mitótico (IM) e índice de

alterações cromossômicas (IAC), os resultados obtidos não mostraram diferenças significativas em comparação ao

CN. Entretanto, uma diminuição do VCMR foi notada para o PII (ES; 0,16 cm) e PI (EC; 0,18 cm), enquanto que

os PIII [(ES; 0,25 cm) e (EC; 0,23 cm)] e PII (EC; 0,25 cm) apresentaram uma maior VCMR frente ao CN (0,21

cm). Em relação à citotoxicidade, as amostras PI (EC; 19,32%), PII [(ES; 19,24%) e (EC; 18,24%)] e PIII (ES;

21,57%) apresentaram IM superiores ao CN (17,5%), enquanto que o PI (ES; 16,86%) mostrou uma diminuição

deste índice. Por sua vez, um potencial genotóxico foi notado para PI (0,92%) e PII (0,82%) durante a ES, em

comparação ao CN (0,74%). Assim, os dados sugerem um potencial tóxico, citotóxico e/ou genotóxico para as

amostras avaliadas, seja inibindo e/ou estimulando a VCMR, IM e IAC, respectivamente. Tal fato pode está

associado às concentrações elevadas de metais pesados encontrados nos pontos amostrados, a exemplo de Ni, Fe,

Cu e Mn, os quais podem interagir de forma sinérgica e/ou antagônica, induzindo as alterações encontradas no

presente estudo.

APOIO Ministério da Integração Nacional, CEMAFAUNA e Univasf.

338


MUTAGENICIDADE EM CARAMUJOS DA ESPÉCIE LITTORARIA ANGULIFERA DO MANGUEZAL

CHICO SCIENCE

Santos, K.m.b1; Silva, K.e.m.

2; Cantinha,r.s.

3; França, E.j.

3; Melo, A.m.m.a.

4.


(1)Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE, Recife/PE; Serviço de Monitoração Ambiental, CRCN,

Recife/PE.; (2)

Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE, Recife/PE. Serviço de Monitoração Ambiental,

CRCN, Recife/PE.; (3)

Serviço de Monitoração Ambiental, CRCN, Recife/PE.; (4)

Departamento de Biofísica e

Radiobiologia, UFPE, Recife/PE.

RESUMO Os manguezais apresentam características ambientais distintas, formando um microclima específico para a

ocorrência de flora e fauna exclusiva, além de ser considerado um berçário para diversas espécies de aves e peixes.

Devido à urbanização, esse ambiente é submetido a grande pressão antrópica, principalmente se localizado

próximo a regiões metropolitanas. Em razão da ausência de informações na literatura sobre a resposta dessa

pressão antrópica em nível genético em espécies de manguezais urbanos em Pernambuco este estudo, por meio do

teste do micronúcleo visou analisar os hemócitos do gastrópode Littoraria angulifera do Manguezal Chico

Science, no Espaço Ciência, em Pernambuco. A metodologia para extração da hemolinfa foi otimizada para esse

trabalho nos quais os hemócitos foram depositados na lâmina de microscopia com EDTA e mantidos em câmara

escura por 30 min. Posteriormente fixada com Gluteraldeído por 10 min e o excesso de reagentes e hemolinfa

removido com água destilada. Os hemócitos após fixação foram corados com Giemsa a 10% durante 7 minutos e

as lâmina com o esfregaço deixadas na vertical para secar em temperatura ambiente à 25ºC. Para obtenção da

frequência de micronúcleos a hemolinfa de quatro animas foram preparadas separadamente e um total de 4.000

hemócitos analisados. A frequência média de micronúcleos observada para L. angulifera nesse trabalho foi 0,35%,

frequência cinco vezes maior que a observada em estudo realizado com indivíduos de B. glabrata criados em

laboratório (0,07%) denotando que a pressão ambiental sofrida pelo ambiente estaria induzindo a mutagenicidade

na espécie. Resultados de um estudo em um manguezal impactado do município de Juréia, São Paulo, também

observou-se frequência de micronúcleo de 0,37% no crustáceo de manguezal Ucides cordatus. Desse modo, há

indícios de que a pressão ambiental sofrida pelos animais está induzindo mutagenicidade.

APOIO Fundação de Amparo a Ciência e Tecnologia de Pernambuco (FACEPE), Comissão Nacional de Energia Nuclear

(CNEN) e ao Conselho Nacional de Desenvolvimento CIentífico e Tecnológico (CNPq).

339


O GENOTÓXICO ANTILEISHMANIAL MILTEFOSINE (IMPAVIDO®) REDUZ CARGA

PARASITÁRIA DE CAMUNDONGOS BALB/C INFECTADOS POR LEISHMANIA INFANTUM

CHAGASI

Patrícia Valéria Castelo Branco1; Raissa Lacerda Pontes

1; Hugo José Alves


2; Silma

Regina Ferreira Pereira1.




RESUMO O miltefosine é um fármaco usado há mais de uma década para o tratamento de leishmanioses em países asiáticos.

É considerado eficaz, de baixa toxicidade e de maior facilidade à adesão ao tratamento por ser administrado por

via oral. Contudo, há carência de trabalhos que investiguem o efeito dessa droga antigenotóxica em animais

infectados com Leishmania infantum chagasi, espécie que acomete os casos de leishmaniose visceral nas

Américas. Assim, foram utilizados 15 camundongos Balb/c infectados na pata com 1 x 107de L. infantum chagasi

(MOM/BR/1970/BH46), distribuídos igualmente em 3 grupos: G1: tratamento com salina; G2: tratamento com

Impavido® na dose de 2,5mg/kg por 28 dias; e, G3: tratamento com Impavido® na dose de 5,0 mg/kg por 14 dias.

O grupo G2 foi tratado com a dose e o tempo recomendados pela Organização Mundial da Saúde, enquanto que o

grupo G3 foi tratado com o dobro da dose pela metade do tempo estabelecido. Todos os tratamentos foram

realizados por via oral. Após o fim dos tratamentos, os animais foram sacrificados e retirados o baço e o linfonodo

poplíteo (linfonodo que drenou a lesão da pata infectada) para determinação da carga parasitária por diluição

limitante. Para tanto, foram feitas duplicatas dos tecidos amostrados em placas de 96 poços, os quais foram

analisados sob microscópio invertido, após 7 e 14 dias, para verificar qual o último poço da diluição que continha

pelo menos um parasito ativo. Nossos resultados mostraram que o medicamento foi capaz de reduzir mais de 80%

da carga parasitária (p < 0,05) nos linfonodos, tanto em 7 quanto em 14 dias de análise, em ambos os grupos. Em

relação ao baço, foi observada redução apenas nos animais do grupo G3 (p < 0,05), tratados com a dose de 5,0

mg/kg, no qual foi observado 99% de redução, tanto na análise de 7 quanto de 14 dias. Dessa forma, concluímos

que o Impavido® é eficiente na redução da carga parasitária de L. infantum chagasi e que a administração de uma

dose maior de miltefosine por um menor tempo de tratamento foi mais eficaz, o que pode ser importante para

diminuição do surgimento de cepas resistentes ao miltefosine. Estudos posteriores são necessários para avaliar o

efeito genotóxico dessa dose mais eficaz, de modo que os malefícios dessa droga não venham a ser maior que os

benefícios para os pacientes.

APOIO Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico do Maranhão Fundação CAPES

340


POTENCIAL ANTIMUTAGÊNICO DA TIAZOLIDINONA LPSF/SF-13 MEDIANTE SISTEMA-TESTE

ALLIUM CEPA L.

Erlânia Alves Siqueira1; Silvany de Souza Araújo

2; Dominick Spindola Correia

2; Marina Galdino da Rocha

Pitta2; Ivan da Rocha Pitta

2; Maria do Carmo Alves de Lima

2; Moacyr Jesus Barreto de Melo Rego

2; Ana

Christina Brasileiro Vidal2.


(1)Universidade Federal Rural de Pernambuco;

(2)Univesidade Federal de Pernambuco

RESUMO As tiazolidinas são constituídas por anéis heterocíclicos e apresentam múltiplas aplicações biológicas, destacando-

se diferentes atividades farmacológicas. Dentre os derivados tiazolidínicos, a molécula (5Z)-5-(3-bromo-

benzylidene)-3-(4-nitro-benzyl)-thiazolidine-2,4-dione LPSF/SF-13 vem sendo estudada para aplicação na terapia

combinada contra o câncer, uma vez que essa molécula mostrou atividade anticâncer significativa em quatro

linhagens celulares (HepG2, NG97, Jukart e Raji). Dessa forma, o presente trabalho visou avaliar o potencial

antimutagênico da molécula LPSF/SF-13 mediante sistema-teste Allium cepa L (cebola). Para realização do

experimento, sementes de cebola foram germinadas em água ultrapura e pré-tratadas com as concentrações da

molécula (50, 100 e 150 µM) por 24 h. Em seguida, foram transferidas para o Metilmetano sulfonato (MMS, 4x10-

4 M), substância de reconhecida ação mutagênica. Posteriormente, as raízes foram fixadas e coradas com reativo

de Schiff. Foi utilizado como controle positivo (CP) o MMS e como controle negativo (CN) a água ultrapura.

Cinco mil células meristemáticas de cebola foram analisadas por tratamento. A atividade citotóxica foi

significativa apenas na concentração de 150 µM, havendo aumento do índice mitótico (26,36%) quando

comparado ao CN (18,21%). Porém, nenhuma concentração apresentou potencial genotóxico ou mutagênico.

Deste modo, foi analisada a atividade antimutagênica, observando-se uma redução de dano [RD = (média CP -

média CN)/ (média CP - média CN) x 100] significativa para alterações cromossômicas causadas pelo MMS para

a concentração de 100 µM (redução de 35,48%). Portanto, podemos inferir que a molécula LPSF/SF-13 apresenta

potencial protetor contra agentes mutagênicos e mostra-se promissora para terapia preventiva contra o câncer,

especialmente na concentração de 100 µM.

APOIO PIBITI/CNPq-UFPE; PROPESQ/ UFPE

341


POTENCIAL CITOGENOTÓXICO DO EXTRATO ETANÓLICO DAS FOLHAS DE POINCIANELLA

BRACTEOSA (TUL.) L.P. QUEIROZ EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE ALLIUM CEPA L.

Regina Maria Silva Sousa1; João Gabriel Silva Morais

1; Francielle Alline Martins

1; Pedro Marcos Almeida

2.


(1)Centro de Ciências da Natureza (CCN), Universidade Estadual do Piauí, Laboratório de Genética, Teresina, PI. ;

(2)Centro de Ciências da Saúde (CCS), Universidade Estadual do Piauí (UESPI/FACIME), Departamento de

Genética, Laboratório de Genética, Teresina, PI.

RESUMO Poincianella bracteosa (Tul.) L.P. Queiroz, conhecida popularmente como ''catingueira'', é uma leguminosa da

família Fabaceae, endêmica do Nordeste brasileiro e usada popularmente no tratamento de verminoses, flatulência,

diarreia, bronquite e resfriado. No entanto, compostos químicos presentes nesta planta podem ser tóxicos,

genotóxicos e/ou carcinogênicos. Dentre os métodos disponíveis para análise, destaca-se o bioensaio Allium cepa

L, por apresentar baixo custo, confiabilidade e concordância com outros testes de genotoxicidade. Sendo assim, o

presente trabalho teve como objetivo avaliar o efeito citogenotóxico do extrato etanólico das folhas de P.

bracteosa em células meristemáticas de A. cepa. As folhas da P. bracteosa foram secas em estufa (45°C) durante

cinco dias. Posteriormente, as mesmas foram trituradas, submetidas à extração em álcool etílico e rotaevaporadas

até obtenção do extrato etanólico bruto das folhas. Em seguida, o pó do extrato foi diluído em dimetilsulfóxido

(DMSO) a 1% e colocado em banho ultrassônico durante 6 h. O material foi filtrado obtendo-se as quatro

concentrações (2, 4, 8 e 16 mg/mL). As raízes previamente germinadas foram expostas aos controles, negativo

(DMSO 1%) e positivo (Metilmetanosulfonato, 10 mg/mL) durante 24 h. As raízes foram fixadas em metanol:

ácido acético (3:1), hidrolisadas em HCl por 10 min., lavadas em água destilada e coradas com Reativo de Schiff,

por 2 h no escuro. Um total de 2000 células meristemáticas, 500 células por lâminas (total de 4 lâminas) foram

analisadas em microscópio óptico (400 x) para avaliar o efeito citotóxico (índice mitótico) e genotóxico (alterações

cromossômicas) do extrato das folhas. Os dados foram analisados pelo teste de Kruskal-Wallis seguido "a

posteriori" pelo teste de Student-Newman-Keuls (p < 0,05) no programa BioEstat 5.3. Os resultados do presente

estudo evidenciaram que o controle positivo (CP) foi significativo apenas para as alterações cromossômicas em

relação ao controle negativo (CN). Quanto ao índice mitótico (IM), apenas a menor concentração (2 mg/mL) foi

citotóxica. Enquanto, na média total das alterações cromossômicas houve um aumento significativo apenas na

maior concentração (16 mg/mL). Desta forma, o uso da mesma deve ser realizado com prudência, para fins

terapêuticos. Adicionalmente, estudos com os fitoquímicos desta espécie são necessários para elucidar o

mecanismo de ação no ciclo celular e na formação de alterações cromossômicas.

APOIO Uespi

342


POTENCIAL CITOTÓXICO E GENOTÓXICO DE AROMATIZANTES SINTÉTICOS, DOS TIPOS

IDÊNTICOS AO NATURAL, DE UVA E AMEIXA.

Ila Monize Sousa Sales1; Maria Eduarda de Sousa e Silva

1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos

1; Ana Paula

Peron2.


(1) Acadêmica do Curso de Ciências Biológicas, UFPI, Picos, PI;

(2)Docente Programa de Pós-graduação em

Genética e Melhoramento, UFPI, Teresina, PI

RESUMO Os aromatizantes são considerados imprescindíveis para indústria alimentícia em razão de conferirem

propriedades sensoriais de aroma e sabor aos mais diversos tipos de alimentos industrializados. Apesar de

normatizados quanto a utilização por órgãos de segurança alimentar como o Food and Agriculture Organization

(FAO) e a Agência Nacional de Vigilância Sanitária (ANVISA), tais aditivos, em geral, não possuem índices de

ingestão diária (IDA) estabelecidos em decorrência da escassez de estudos quanto a seus efeitos tóxicos,

principalmente a nível celular. Assim, objetivou-se no presente estudo avaliar o potencial citotóxico e genotóxico

de aromatizantes alimentares sintéticos, idênticos aos naturais, de Uva e Ameixa, muito utilizados na indústria na

confecção de balas, gomas, sorvetes, sucos, entre outros alimentos. A avaliação foi realizada por meio das células

meristemáticas de raízes de Allium cepa L., nos tempos de exposição 24 e 48 horas, no qual cada aditivo foi

avaliado nas doses de 0,2; 0,4 e 0,6 ml. Após os tratamentos, as raízes foram fixadas, hidrolisadas, coradas e

analisadas em microscópio óptico, onde se analisou para cada controle e tempo de exposição um total de 5.000

células. Os dados obtidos foram submetidos ao teste estatístico Qui-quadrado (p<0,05). A partir dos resultados

verificou-se que a dose 0,2 ml do aromatizante de Uva, no tempo de exposição 48 h, e as doses 0,2; 0,4 e 0,6 ml

dos aditivos de Ameixa, nos tempos de exposição 24 e 48 h, ocasionaram significativo efeito antiproliferativo aos

tecidos estudados. Ainda, a dose 0,2 ml de Uva no tempo de exposição 48 h, bem como as doses 0,2; 0,4 e 0,6 ml

de Ameixa, nos dois tempos de exposição estabelecidos, causaram aberrações celulares, como metáfases-C, pontes

anáfásicas e telofásicas, amplificações e micronúcleos, em número significativo aos meristemas de raízes.

Portanto, com base nas análises realizadas verificou-se que os aditivos de Uva e Ameixa foram citotóxicos e

genotóxicos as células meristemáticas de raízes de A. cepa.


343


POTENCIAL CITOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO LARVICIDA BENZOUREIA UTILIZADO PARA O

CONTROLE DO AEDES AEGYPTI

Ataide Macedo Vieira Lima1; Larissa de Sousa Soares

1; Lígia Ferreira Teles

1; Victor Alves de Oliveira

1; Felipe

Cavalcante Carneiro da Silva1; Ana Paula Peron

1; Leonardo Henrique Guedes de Morais Lima

1; João Marcelo

de Castro e Sousa1; Euclides Xavier Leal

1.


(1)Núcleo de Estudos em Oncologia e Genética molecular - NEOGEM. Departamento de Ciências Biológicas,

Universidade Federal do Piauí, Picos-PI.

RESUMO O uso contínuo ou esporádico de inseticidas de síntese utilizados em campanhas de controle de vetores ou na

agricultura podem causar efeitos adversos ao homem a nível celular e sistêmico. Assim, o presente estudo visou

avaliar, utilizando o sistema teste animal (camundongos), o potencial citotóxico e mutagênico da Benzoureia,

composto químico utilizado atualmente no controle do Aedes aegypti. Os animais foram expostos durante sete dias

consecutivos ao produto, via gavagem, com diferentes concentrações: C1 - 0,006 g/ml; C2 - 0,012 g/ml; C3 -

0,024 g/ml (concentração de uso). Foram utilizados dois controles: Negativo - água destilada e Positivo -

ciclofosfamida (50 mg/kg). O bioensaio utilizado foi o teste do micronúcleo em sangue periférico coletado 48, 72

e 168 horas após o inicio do tratamento. Os resultados mostraram que as concentrações C1, C2 e C3 apresentaram

resultados significativos (p < 0,05) quanto à citotoxicidade no primeiro tempo de exposição (24h). A concentração

01 também apresentou resultados significantes (p < 0,05) no tempo de 72h e a concentração 03 no tempo de

168hs. Quanto à mutagenicidade desse larvicida, todas as concentrações foram significativas (p < 0,001) nos

tempos de exposição de 48 e 72hs quando comparados com o controle negativo. Muitos dos compostos químicos

utilizados com fins de controle de pragas são causadores de alterações significativas no DNA. A preocupação está

na utilização dos mesmos em larga escala e de forma não controlada, principalmente quando são utilizados em

reservatórios de água para consumo humano. Esse tipo de uso pode oferecer riscos à saúde humana, podendo

ocasionar algumas doenças, tais como câncer, devido à capacidade de causar problemas no ciclo celular e

instabilidade genética, como observado com a Benzoureia. Portanto, estudos do potencial toxicológico desses

compostos químicos sempre serão necessários para evitar intoxicações e futuras doenças genéticas humanas.

344


POTENCIAL GENOTÓXICO E MUTAGÊNICO DO FUNGO BIOLUMINESCENTE

NEONOTHOPANUS GARDNERI BERK. EX GARDNER EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE

ALLIUM CEPA L.

Bárbara Cristina Silva Holanda Queiroz1; Cleiane do Nascimento Monteiro

2; Regina Maria Silva Sousa

2; João

Gabriel Silva Morais2; Maria das Dores Alves de Oliveira


2; Francielle Alline

Martins2; Joaquim Soares da Costa Júnior

3.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DO PIAUÍ;

(2)UNIVERSIDADE ESTADUAL DO PIAUÍ;

(3)INSTITUTO

FEDERAL DO PIAUÍ

RESUMO Neonothopanus gardneri Berk. ex Gardner (Marasmiaceae) é considerado o maior fungo bioluminescente do

Brasil e um dos maiores do mundo. As espécies dessa família são ricas em sesquiterpenos citotóxicos, exibindo

atividades antimalárica e antimicobacteriana, além de citotoxicidade contra linhagens celulares de alguns tipos de

câncer. No entanto, não há relatos sobre a atividade citogenotóxica de N. gardneri. Desse modo, o objetivo deste

estudo foi avaliar o potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato acetato de etila de N. gardneri,

utilizando o sistema-teste Allium cepa L. Espécimes de N. gardneri foram coletadas na cidade de São Francisco,

Maranhão, Brasil. Em seguida, os fungos foram congelados e submetidos à liofilização. Posteriormente, preparou-

se o extrato acetato de etila (Ext. AcOEt), que foi diluído em DMSO 0,2% mais solução salina 0,9%, obtendo-se

as concentrações testes de 50, 100, 250 e 500 µg/mL. Sementes de A. cepa foram germinadas em placas de Petri

contendo água destilada. Posteriormente, as mesmas foram transferidas para os controles e para as concentrações

citadas do Ext. AcOEt por 24 h. Como controle negativo (CN), foi utilizado DMSO 0,2% mais solução salina

0,9% e como controle positivo (CP), o metilmetanossulfonato (MMS, 10 mg/L). Em seguida, as raízes foram

fixadas em metanol: ácido acético (3:1), hidrolisadas em HCl por 10 min, lavadas em água destilada e coradas com

Reativo de Schiff, por 2 h no escuro. Cinco mil células meristemáticas por tratamento, 500 células por lâmina

(total de 10 lâminas), foram analisadas em microscópio óptico (400 x). As análises estatísticas foram avaliadas por

meio do teste de Kruskal-Wallis a 5% de significância no programa BioEstat 5.3. Os valores de CP foram

significativos em relação ao CN para os parâmetros de genotoxicidade e mutagenicidade. Quanto ao índice

mitótico, houve aumento significativo nas concentrações de 50, 250 e 500 µg/mL em relação ao CN, resultando no

efeito citotóxico. Quanto à genotoxicidade e à mutagenicidade, não houve diferença significativa entre as

concentrações e o CN. Os resultados obtidos demonstraram que o Ext. AcOEt de N. gardneri possui efeito

citotóxico na maioria das concentrações testadas e alterações cromossômicas não significativas. Adicionalmente,

análises sobre a composição química de N. gardneri e testes em outros bioensaios fazem-se necessários para a

elucidação da interferência quanto ao ciclo celular.

APOIO CAPES FAPEPI

345


POTENCIAL MUTAGÊNICO DO EXTRATO ETANÓLICO DE PINHÃO BRAVO (JATROPHA

MOLLISSIMA) (POHL) BAIL

Cleidiane Macêdo Santos1; Ana Luisa de Oliveira Lima

1; Kelvim Crist Araújo Rocha

1; Pedro Marcos de

Almeida2; Francielle Alline Martins

1.


(1)Universidade Estadual do Piauí-UESPI- Centro de Ciências da Natureza-CCN;

(2)Universidade Estadual do

Piauí-UESPI- Centro de Ciências da Saúde-CCS

RESUMO Jatropha mollissima é uma planta endêmica do nordeste com ampla utilização medicinal. Estudos recentes da

avaliação do potencial bioinseticida do extrato foliar do pinhão bravo sobre as larvas do mosquito Aedes aegypti

revelaram atividade larvicida satisfatória do mesmo quando comparado ao Diflubenzuron, o inseticida

recomendado pelo Ministério da Saúde. Contudo a recomendação e uso do extrato de pinhão bravo não deve ser

realizada sem antes um estudo do potencial toxicológico desse ao ambiente e à saúde humana. Desta forma o

objetivo deste estudo foi avaliar o potencial mutagênico do extrato etanólico das folhas de J. mollissima em células

somáticas de Drosophila melanogaster por meio do teste SMART (Somatic Mutation and Recombination Test).

As folhas foram secas durante cinco dias em temperatura ambiente. Posteriormente, as mesmas foram trituradas e

submetidas à extração em álcool etílico (PA) até obtenção do extrato etanólico bruto. Em seguida, o extrato foliar

foi diluído em água destilada em banho maria ultrassônico por 30 min, filtrado e as soluções preparadas nas

concentrações 0,01, 0,1, 1, 10 e 100 mg/mL. Como controles, negativo (CN) e positivo (CP), foram utilizados

água destilada e doxorrubicina (0,125 mg/mL), respectivamente. Larvas no 3º estágio de desenvolvimento do

cruzamento padrão (Standard - ST), entre machos da linhagem mwh e fêmeas virgens da linhagem flr3, foram

tratadas com 5ml de cada solução. Após eclosão dos adultos as moscas foram fixadas em álcool 70%, as asas

destacadas e avaliadas ao microscópio quanto à quantidade de manchas simples pequenas, manchas simples

grandes e manchas gêmeas. Os dados foram avaliados de acordo com o teste binomial condicional. A frequência

para as três categorias de manchas avaliadas não diferenciou entre os tratamentos e o controle negativo, desta

forma não foi observada atividade mutagênica para o extrato nas concentrações avaliadas as quais apresentaram

atividade larvicida em estudos anteriores. Assim, o extrato etanólico foliar de Jatropha mollissima não representou

risco a saúde ambiental.

APOIO Universidade Estadual do Piauí-UESPI

346


POTENCIAL MUTAGÊNICO DO EXTRATO ETANÓLICO FOLIAR DE JATROPHA MOLLISSIMA

(POHL) BAILL EM CÉLULAS MERISTEMÁTICAS DE ALLIUM CEPA L.

João Gabriel Silva Morais1; Regina Maria Silva Sousa

1; Francielle Alline Martins


2.


(1)Centro de Ciências Naturais (CCN), Universidade Estadual do Piauí (UESPI), Laboratório de Genética,

Teresina, PI.; (2)

Centro de Ciências da Saúde (CCS), Universidade Estadual do Piauí (UESPI/FACIME),

Departamento de Genética, Laboratório de Genética, Teresina, PI.

RESUMO Jatropha mollissima (Pohl) Bail (Euphorbiaceae), conhecida como pinhão bravo, é uma espécie nativa do

semiárido brasileiro que se destaca pelo seu uso medicinal como cicatrizante, antitumoral e antifúngica. Contudo

estudos quanto à toxicidade ainda são incipientes. Sendo assim, o presente estudo teve como objetivo avaliar o

potencial citotóxico, genotóxico e mutagênico do extrato etanólico das folhas de J. mollissima nas células

meristemáticas de Allium cepa L. As folhas foram secas em temperatura ambiente, trituradas, submetidas à

extração em álcool etílico e rotaevaporadas até obtenção do extrato etanólico bruto das folhas. O extrato foi

solubilizado em dimetilsulfóxido (DMSO) a 1% e colocado em Banho Ultrassônico durante 10 h. Em seguida, o

material foi filtrado em papel de filtro e realizou-se uma diluição seriada em DMSO 1% para obter as cinco

concentrações (100; 10; 1; 0,1 e 0,01 mg/mL). Como controles negativo (CN) e positivo (CP) foram utilizados o

DMSO 1% e o metilmetanossulfonato (MMS, 10 mg/L), respectivamente. As raízes de A. cepa foram expostas aos

controles e ao extrato foliar por 24 h. As mesmas foram fixadas em metanol: ácido acético (3:1), hidrolisadas

(HCl) por 10 min., lavadas em água destilada e coradas com Reativo de Schiff, por 2 h. Um total de 2000 células

meristemáticas foram analisadas em microscópio óptico (400 x) para avaliar o efeito citotóxico (índice mitótico),

genotóxico (alterações cromossômicas) e mutagênico (células com micronúcleos, MN). Os dados foram analisados

no teste de Kruskal-Wallis seguido "a posteriori" pelo teste de Student-Newman-Keuls (p < 0,05). Quanto ao

índice mitótico, houve aumento significativo nas concentrações de 0,1 (289,24 ± 47.46); 10 (310,48 ± 48,71) e 100

mg/mL (463,70 ± 19,15) em relação ao CN (63,48 ± 26,61), resultando no efeito citotóxico. A média total de

alterações cromossômicas nas concentrações de 0,01 (9,59 ± 1,93); 0,1 (5,67 ± 2,50) e 100 mg/mL (7,58 ± 3,41)

foram significativamente maiores quando comparadas com o CN (0,67 ± 0,87). A média de MN foi significativa

apenas na concentração de 0,01 (7,17 ± 2,62). Os resultados obtidos demonstraram efeito citotóxico, genotóxico e

mutagênico do extrato etanólico foliar de J. mollissima em determinadas concentrações. Ressalta-se ainda que

experimentos com camundongos estão sendo realizados pelo mesmo grupo de pesquisa para permitir uma

avaliação complementar sobre o possível efeito genotóxico e/ou mutagênico desse extrato.

APOIO PIBIC/UESPI

347


POTENCIAL TÓXICO E CITOGENOTÓXICO DA ÁGUA E SEDIMENTO COLETADOS NO RIO SÃO

FRANCISCO, POLO PETROLINA (PE) / JUAZEIRO (BA), MEDIANTE BIOENSAIO COM ALLIUM

CEPA L.

Ilka Fernanda Mendes Pereira1; Cinthia Silva dos Santos

2; Laysla dos Santos Motta

2; Draulio Costa Silva

2; Ana

Christina Brasileiro Vidal1; Kyria Cilene de Andrade Bortoleti

2.




RESUMO Petrolina (PE) e Juazeiro (BA) destacam-se pelo desenvolvimento industrial, urbano e prática intensiva da

agricultura irrigada. Tais atividades geram resíduos despejados inadequadamente, que afetam a sanidade do

principal recurso hídrico da região, o rio São Francisco. Este trabalho visou avaliar o potencial tóxico e

citogenotóxico de possíveis contaminantes presentes nas águas e sedimentos do rio, em duas áreas receptoras de

efluentes urbano-agrícola (A1/Juazeiro) e urbano-industrial (A2/Petrolina), mediante bioensaio Allium cepa L. e

sua correlação com parâmetros físicos e químicos. Assim, amostras compostas de água e sedimento foram

coletadas em triplicata em cada área (estação seca - Agosto/2015), sendo determinados três pontos de amostragem:

à montante (M), no despejo (E) e à jusante (J) do efluente. Variáveis hidroquímicas foram medidas in situ e

concentrações de nutrientes (água) e metais pesados (água e sedimento) em laboratório. Sementes de A.

cepa foram submetidas às amostras coletadas e aos controles negativo (CN; água ultrapura) e positivos [Metil

metano-sulfonato (4x10-4

M) e Trifluralina (0,84 ppm de princípio ativo)]. Após germinação, raízes foram

medidas, fixadas em Carnoy e utilizadas na preparação das lâminas seguindo método de Feulgen. Foram

analisadas 7500 células/tratamento. Os resultados foram comparados ao CN mediante teste de Kruskal-Wallis

seguido do teste de Tukey (p<0,05). Em relação à toxicidade, observou-se uma diminuição do índice de

germinação nas amostras de água [(MA1; 64,7%); (EA2; 61,3%); (JA2; 60,7%)] e sedimento [(MA2; 68%); (JA2;

57,6%)], bem como no comprimento médio das raízes na maioria dos tratamentos analisados, exceto para uma

amostra de água (JA2; 0,77 cm) e duas de sedimento [(MA1; 0,67 cm); (MA2; 0,70 cm)]. A citotoxicidade, por

sua vez, foi observada para três amostras de sedimento [(EA1; 12,83%); (EA2; 11,40%); (JA2; 7,08%)], notada

pela diminuição do índice mitótico. Adicionalmente, a genotoxicidade foi evidenciada pelo aumento do índice de

alterações cromossômicas, visualizado em duas amostras de água [(EA1; 1,17%); (JA1; 0,92%)], em todas as

amostras de sedimento da A1 e em uma amostra de sedimento da A2 (MA2; 1,12%). Sugere-se que a interação

entre nutrientes e metais pesados (Ni, Pb, Cu, Fe, Zn, Mn e Cr), das amostras de água e/ou sedimento

influenciadas pelos efluentes, seja responsável pelas alterações no material genético de A. cepa, ressaltando a

importância do monitoramento ambiental deste rio.

APOIO Facepe, Ministério da Integração Nacional, Universidade Federal do Vale do São Francisco, Centro de Manejo de

Fauna da Caatinga.

348


SÍNTESE E ENSAIO CITOTÓXICO DE COMPLEXOS DE RUTÊNIO COM POTENCIAL USO NA

TERAPIA ANTITUMORAL.

Augusto Lima Teixeira Júnior1; Ana Cristina Gomes Rodrigues

1; Israel Higino de Sousa

1; Vera Lucia Maciel

Silva1; Ana Paula Silva de Azevedo dos Santos

1; André Alvares Marques Vale

1; Márcio Aurélio Pinheiro

Almeida1.



RESUMO Cânceres são caracterizados como um grupo de doenças que têm em comum o crescimento desordenado das

células. Sabe-se que o desenvolvimento dessas patologias está intrinsicamente associado a instabilidade genética,

ocasionado em geral por mutações que afetam genes importantes envolvidos no controle do ciclo celular. Na busca

pela compreensão de drogas capazes de inibir a atividade de células cancerígenas, estudos com complexos de

rutênio vêm demonstrando maior especificidade destes em relação a compostos a base de platina. O presente

trabalho visa sintetizar complexos de rutênio contendo na sua estrutura difosfina 1,4-bis (difenilfosfina) butano,

2,2-bipiridina e aminoácidos (iso-leucina e fenil-alanina) e realizar testes quanto sua capacidade antitumoral, bem

como avaliar a atividade citotóxica dos complexos de rutênio (II) em linhagens de câncer de mama (MCF-7). Os

complexos de rutênio, diferem no tipo de aminoácido inserido em sua estrutura, e foram sintetizados a partir do

precursor cis-[RuCl2(dppb)(bipy)] PF6, segundo metodologia descrita por Almeida (2009). A linhagem MCF-7 de

câncer de mama, foi obtidas do Banco de Células do Rio de Janeiro-Brasil (BCRJ-BR). Os ensaios de

citotoxicidade foram conduzidos pelo teste colorimétrico de redução do MTT 3-(4,5-Dimetiltiazol-2-il)2,5-Difenil

Brometo de Tetrazolium), descrito por Mosman (1983) que consiste em medir indiretamente a viabilidade celular

pela atividade enzimática mitocondrial das células vivas e posterior análise de viabilidade por absorbância (540

nm). O valor de IC50 foi determinado por meio da curva dose resposta utilizando o programa estatístico GraphPad

Prism 6.02. Foram obtidos dois novos compostos inéditos com estrutura [Ru(Ile)(dppb)(bipy)]PF6 e

[Ru(Phe)(dppb)(bipy)]PF6, os quais foram testadas cinco concentrações (100 µM, 50 µM, 25 µM, 12,5 µM, 6,25

µM) quanto a atividade citotóxica. Ambos os compostos apresentaram atividade citotóxica para a linhagem de

célula MCF-7, contudo, o composto [Ru(Phe)(dppb)(bipy)]PF6 apresentou melhor atividade biologica com IC50 de

12,5 μM, enquanto o composto [Ru(Ile)(dppb)(bipy)]PF6 27,0 μM, o qual foi atribuído maior graus de

lipofilicidade. Os resultados deste trabalho reforçam a utilização de complexos de rutênio com alto potencial

citotóxico em células cancerígenas

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq)

349


SUCO LIOFILIZADO DE LARANJA (CITRUS SINENSIS L. OSBECK) DIMINUI A PARALISIA

INDUZIDA PELO PEPTÍDEO B-AMILOIDE NO NEMATODO CAENORHABDITIS ELEGANS

Flávia Toscano Moura1; Ricardo Basílio de Oliveira Caland

2; Leandro PeÑa

3; Riva de Paula Oliveira

4.


(1)Depto. Biologia Celular e Genética, UFRN, RN;

(2)Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, RENORBIO,

UFRN, RN; (3)

Fundo de Defesa da Citricultura (Fundecitrus), Araraquara, SP; (4)

Depto. Biologia Celular e

Genética, UFRN, RN e Programa de Pós-Graduação em Biotecnologia, RENORBIO, UFRN, RN

RESUMO O Mal de Alzheimer (MA) é uma doença neurodegenerativa progressiva crônica do sistema nervoso central e é a

causa mais comum de demência nos idosos. O acúmulo de espécies reativas de oxigênio (ERO) e o depósito de

agregados b-amiloide 1-42 (Ab1-42) são considerados os principais responsáveis pelo agravamento dos sintomas

nos pacientes com MA. Um número crescente de trabalhos têm mostrado que antioxidantes nutricionais, tais como

compostos flavonóides e fenólicos, são capazes de bloquear a morte neuronal e diminuir efeitos neurotóxicos. A

laranja contem uma variedade de compostos antioxidantes, incluindo carotenoides e vitamina C. Já foi demostrado

que o tratamento com suco de laranja aumenta a resistência do organismo modelo Caenorhabditis elegans ao

estresse oxidativo. Neste trabalho, nós investigamos o efeito protetor do suco de laranja liofilizado (SLL) sobre o

perfil de paralisia induzido pela super-expressão do peptídeo Ab1-42 no tecido muscular em C. elegans. Nós

observamos que o tratamento 2, 5 e 10% de SLL retarda de maneira dose dependente a progressão da paralisia em

comparação com animais não tratados. Uma vez que é sabido que Escherichia coli, alimento para C. elegans, tem

um efeito patogênico sobre ele, o que afeta seu tempo de vida e resistência ao estresse, nós investigamos se o

efeito protetor do SLL observado era resultado da inibição de crescimento bacteriano. Nós observamos que o

crescimento de E. coli OP50 ao longo de 5 horas foi inibido com as 3 concentrações testadas do SLL. Apesar

disto, quando os animais que foram alimentados com E. coli previamente morta com Kanamicina, o tratamento

com 2% de SLL ainda continuou retardando o perfil de paralisia dos animais transgênicos com super-expressão do

peptídeo Ab1-42. Estes resultados indicam que o tratamento com SLL protege contra o toxicidade induzida pelo

peptídeo Ab1-42 de maneira independente do seu efeito bactericida.

APOIO Fundecitrus

350


TESTE DA QUALIDADE DA ÁGUA DE EMBALAGENS PLÁSTICAS AVALIADA POR MEIO DO

ENSAIO COMETA EM DROSOPHILA MELANOGASTER

Renata de Barros Oliveira1; Rayane Santana da Silva

1; Ícaro Fillipe de Araújo Castro

1; Samuel Lima de

Santana1; Cícero Jorge Verçosa

1; Claudia Rohde

1; Jéssica Celerino dos Santos

1.



RESUMO Dentro do mercado de bebidas, o consumo de água mineral apresentou um grande salto nos últimos cincos anos.

Em decorrência desse crescimento expressivo, a embalagem PET (Tereftalato de Etileno) surgiu como uma nova

tendência por ser prática e barata para as indústrias. Apesar disso, a embalagem pode estar associada a riscos de

contaminação ao consumidor pela capacidade de liberar substâncias e alterar as propriedades físicas e químicas da

água mineral embalada. O objetivo deste trabalho foi analisar o efeito genotóxico da água contida em garrafas

PET, após as embalagens serem submetidas a diferentes condições de armazenamento. Para o experimento, foi

testada a água mineral da marca Santa Joana, embalada há sete dias e mantida a 25°C dentro do laboratório

(denominada Tratamento 1, ou controle negativo); a mesma água transferida por cinco dias a 25°C para outra

garrafa Santa Joana, porém com 6 meses de fabricação (Tratamento 2); e água Santa Joana de embalagem de sete

dias, porém deixada por cinco dias no interior de um carro e exposta a elevadas temperaturas (Tratamento 3). Para

os testes in vivo, larvas de Drosophila melanogaster (Insecta, Diptera) foram expostas a cada um dos Tratamentos

(1, 2 e 3) por meio de ingestão e metabolização da água que hidratou o meio de cultivo dos insetos, constituído de

0,9 gramas de purê de batata instantâneo e 3mL de água. As larvas permaneceram neste meio por um período de

24 horas. Para cada Tratamento foram expostas 250 larvas, divididas em cinco grupos (réplicas). De cada grupo

foram retirados hemócitos presentes na hemolinfa, que foram processados, analisados e quantificados para o efeito

genotóxico, por meio do Ensaio Cometa, sendo comparados estatisticamente os resultados do Índice de Dano (ID)

e a Frequência de Dano (FD%). O Tratamento 1 e o Tratamento 2 não diferiram estatisticamente, o que significa

que, nas condições experimentais deste estudo, as garrafas PET Santa Joana antigas não representam um risco

genotóxico. Entretanto, houve diferenças significativas nas comparações entre os resultados do Tratamento 1 e o

Tratamento 3, tanto para ID (p=0,0001) quanto para FD% (p=0,0001). Neste caso, conclui-se que garrafas PET

expostas a elevadas temperaturas dentro de veículos, por alguns dias, representam um risco genotóxico à saúde da

população. Os resultados apontam para a necessidade de mais estudos nesta linha de pesquisa, para que haja

garantia da segurança do consumo de água diário pela população.

APOIO PROPESQ-UFPE, FACEPE e CAPES

351


TOXICIDADE DE AROMATIZANTES ALIMENTARES SINTÉTICOS, DOS TIPOS ARTIFICIAIS DE

BAUNILHA, BISCOITO E TUTTI-FRUTTI, ASSOCIADOS ENTRE SI, AO CICLO CELULAR DE

MERISTEMAS DE RAÍZES DE ALLIUM CEPA L..

Ila Monize Sousa Sales1; Fabelina Karollyne Silva dos Santos

2; Maria Eduarda de Sousa e Silva

2; Ana Paula

Peron3.



(2)Discente do Departamento de Ciências

Biológicas, UFPI, Picos, PI; (3)

Docente Programa de Pós-graduação em Genética e Melhoramento, UFPI,

Teresina, PI

RESUMO Os aromatizantes são substâncias com propriedades odoríferas e/ou sápidas capazes de promoverem ou

intensificarem o aroma e/ou sabor dos alimentos industrializados. Entretanto, tais aditivos contribuem

significativamente para o empobrecimento da dieta, e suscitam uma série de dúvidas quanto aos seus potenciais

efeitos citotóxicos e genotóxicos, uma vez que, estudos sobre a toxicidade em nível celular de tais ingredientes são

praticamente inexistentes na literatura científica. Dessa forma, foi objetivo do presente trabalho avaliar a

citotoxicidade e genotoxicidade de aromatizantes artificiais, de Biscoito, Tutti-frutti e Baunilha, aditivos

comumente encontrados associados em biscoitos recheados, bolachas wafer, cakes, cookies, flans, entre outros

alimentos industrializados. As doses de análise de cada aromatizante, determinadas com base nas especificações

de suas embalagens comerciais, foram três, 0,3; 0,6 e 0,9 ml. Já as associações estabelecidas foram

Biscoito/Tutti/frutti, Biscoito/Baunilha e Baunilha/Tutti-frutti. Para cada associação de aromatizantes estipulou-se

três tratamentos em combinações de doses iguais, ou seja, para cada combinação associou-se uma dose de um

aromatizante a mesma dose do outro aromatizante. Assim, as combinações de doses ou tratamentos definidos para

cada associação foram 0,3 ml + 0,3 ml; 0,6 ml + 0,6 ml e 0,9 ml+ 0,9 ml. Para a avaliação toxicológica de tais

tratamentos utilizou-se as células meristemáticas de raízes de Allium cepa L., e cada combinação de doses foi

avaliada nos tempos de exposição 24 e 48 horas. Cada tratamento foi constituído de cinco bulbos de cebolas,

previamente enraizados em água destilada. Antes de colocar as raízes em contato com os seus respectivos

tratamentos, coletou-se raízes que serviram de controle do próprio bulbo. Após cada tempo de exposição, raízes

foram coletadas, fixadas, hidrolisadas, coradas e analisadas em microscópio óptico, no qual se avaliou para cada

grupo controle e grupo tempo de exposição 5.000 células. Os resultados obtidos foram analisados pelo teste Qui-

quadrado, a 5%. Todas as combinações analisadas reduziram drasticamente a divisão celular e ocasionaram

número estatisticamente significativo de alterações de fuso mitótico e micronúcleos nas células do sistema teste

utilizado. Dessa forma, os aromatizantes alimentares de Tutti-frutti, Biscoito e Baunilha nas condições de análises

estabelecidas foram citotóxicos e genotóxicos as células de meristemas de raízes de A. cepa.


352


VITAMINA C NÃO REPARA LESÕES GENÔMICAS INDUZIDAS PELO MILTEFOSINE

(IMPAVIDO®) EM CAMUNDONGOS INFECTADOS COM LEISHMANIA INFANTUM CHAGASI

Patrícia Valéria Castelo Branco1; Muryllo Santos Castro

1; Iraine Duarte de Souza


1;

Silma Regina Ferreira Pereira1.



RESUMO O miltefosine (Impavido®), droga inicialmente desenvolvida para ser antitumoral, é um fármaco promissor para o

tratamento das leishmanioses. Pouco se conhece sobre seu mecanismo de ação e sua interação com o material

genético. Recentemente, nosso laboratório demonstrou que o miltefosine causa danos ao DNA por oxidação de

bases, além de apoptose e necrose em célula de mamíferos. Assim, este trabalho objetivou avaliar o potencial

antimutagênico da vitamina C sobre danos genômicos causados pelo Impavido® em camundongos infectados com

Leishmania infantum chagasi (MOM/BR/1970/BH46). Realizou-se o teste do COMETA alcalino em células do

sangue periférico de camundongos Balb/c infectados. Foram utilizados 30 animais infectados na pata com 1 x 107

do parasito, tratados por via oral, e distribuídos igualmente em 6 grupos: G1: controle infectado tratado com água

destilada; G2: tratamento com Impavido® (2,5mg/kg por 28 dias); G3: tratamento com Impavido® (5,0 mg/kg por

14 dias); G4: tratamento com Impavido® (2,5 mg/kg) + Ácido Ascórbico (15 mg/kg) por 28 dias; G5: tratamento

somente com Ácido ascórbico (15 mg/kg por 28 dias) e, G6: controle não infectado tratado com salina. O grupo

G2 foi tratado com a dose e o tempo recomendados pela Organização Mundial da Saúde (OMS), enquanto que o

grupo G3 foi tratado com o dobro da dose pela metade do tempo estabelecido. Nossos resultados ratificaram o

efeito genotóxico do Impavido® na dose recomendada pela OMS (p < 0,05) e aumento significativo desse dano

com o aumento da dose (p < 0,0001). A Vitamina C não foi genotóxica na dose testada, porém seu efeito

antioxidante não foi observado no grupo tratado simultaneamente com a droga (p > 0,05), embora tenha havido

uma redução de 37,5% dos danos. Dessa forma, concluímos que a Vitamina C na dose de 15mg/kg por 28 dias,

não é capaz de reparar os danos genômicos do antileishmanial Impavido®, sendo necessários testes com doses

mais elevadas.

APOIO Fundação de Amparo à Pesquisa e ao Desenvolvimento Científico do Maranhão- FAPEMA Fundação CAPES

353

Genômica, Bioinformática e Biologia de Sistemas

ANÁLISE FILOGENÉTICA DE PRASIOLA CRISPA BASEADA NOS GENES MARCADORES RBCL E

PSAB

Filipe Zimmer Dezordi1; Evelise Leis Machado

1; Luiz Fernando Duarte da Silva

1; Laís Ceschini Machado

1;

Pablo Echeverria Macedo1; Darlene Lopes Rangel

1; Jessica Silva Tápia

1; Thalita Fonseca Araujo

1; Marcos

Paulo Figueiró Wanderley França1; Marlon dos Reis Matsumoto

1; Paulo Marcos Pinto

1.


(1)Laboratório de Proteômica Aplicada, Universidade Federal do Pampa

RESUMO A alga verde Prasiola crispa (Lightfoot) Kützing, presente em áreas de degelo da Antártica, tolera repetidos ciclos

de congelamento/descongelamento, temperaturas negativas e altos níveis de radiação UV. Contudo ainda são

poucos estudos taxonômicos sobre P. crispa. O posicionamento filogenético de espécies que sobrevivem à

condições ambientais extremas é essencial para compreender as possíveis adaptações que possuem. Análises

filogenéticas em plantas utilizam genes plastidiais, como rbcL e psaB, para inferir as relações evolutivas entre

grupos de organismos. Estes genes apresentam sequências altamente conservadas, com baixa taxa de mutações,

além de fácil amplificação e alinhamento. O objetivo deste estudo foi realizar uma análise filogenética de P. crispa

baseada nos genes marcadores rbcL e psaB. As sequências dos genes rbcL e psaB foram obtidas do banco de

dados NCBI. A análise filogenética foi realizada com os genes codificantes para rbcL de 136 espécies de

organismos e genes codificantes para psaB de 96 espécies organismos. As sequências gênicas foram alinhadas

com MAFFT, editadas com Gblocks e concatenadas com Phyutility 2.2.6. A reconstrução filogenética bayseana

foi realizada com MrBayes 3.2.1. Nossa análise filogenética para rbcL, com Acutodesmus obliquus e Dunaliella

salina como grupo externo, posiciona P. crispa (aLTR-like=1) dentro do clado Prasiola crispa, composto por 19

espécies deste gênero. Todas as análises apresentaram alto suporte de ramo exceto no nó do agrupamento dos

isolados P. crispa Galway, Columbia, Ireland, Cork, Switzerland, P. crispa P25, P24, P23 e P21 (aLTR-

like=0,6752). Na filogenia para psaB, com Acutodesmus obliquus como grupo externo, P. crispa agrupou

consistentemente (aLTR-like=1) com outros organismos do mesmo gênero dentro do clado P. crispa, composto

por 13 espécies. No clado P. crispa todas as análises para psaB apresentaram alto suporte de ramo, exceto no nó

do agrupamento P. crispa P29, P13 e Prasiola calophylla (aLTR-like=0,5526). No presente trabalho nós

estabelecemos o posicionamento filogenético de P. crispa com base nos genes marcadores plastidiais rbcL e psaB.

Nosso estudo posicionou P. crispa no clado P. crispa, composto por isolados do mesmo gênero. Os resultados

deste estudo fornecem novos e substanciais insights sobre o posicionamento de P. crispa que podem ser bases para

estudos futuros e corrobora a aplicabilidade dos genes rbcL e psaB como marcadores para estudos filogenéticos.

APOIO Capes;Fapergs;NCT-APA

354


ANÁLISE EVOLUTIVA DE ELEMENTOS DA SUPERFAMILIA PENELOPE PRESENTES NO

GENOMA DA VESPA PARASITÓIDE LEPTOPILINA BOULARDI

Filipe Zimmer Dezordi1; Alexandre Freitas da Silva

2; Elgion Lúcio da Silva Loreto

3; Paulo Marcos Pinto

4;

Gabriel da Luz Wallau5.


(1)Laboratório de Proteômica Aplicada, Universidade Federal do Pampa;

(2)Técnico Bolsista, Fundaçao Oswaldo

Cruz-CpqAM; (3)

Professor Associado; Universidade Federal de Santa Maria; Santa Maria; (4)

Professor Adjunto;

Universidade Federal do Pampa; (5)

Departamento de Entomologia - Fundação Oswaldo Cruz CPqAM.

RESUMO Elementos Transponíveis (TEs, do inglês Transposable Elements), foram descobertos em Zea mays por

McClintock em 1940 e desde então, têm sido descritos em uma grande variedade de eucariotos. Vespas

parasitóides são fortes candidatos como organismos modelo no estudo de processos de Transferência Horizontal

de Transposons, (HTT, do inglês Horizontal Transposon Transfer), evento no qual ocorretransferência de material

genético entre organismos de espécies isoladas sexualmente, uma vez que durante a inoculação do veneno são

inoculadas juntamente partículas virais que podem atuar como vetores para TEs. Análises preliminares

determinaram a existência de TEs pertencentes a 15 superfamílias distintas no genoma de uma vespa parasitoide,

Leptopilina boulardi, sendo uma delas a Penelope, uma superfamília envolvida em diversos processos de HTT

entre espécies do gênero Drosophila. Desta forma, este trabalho tem como objetivo a análise da história evolutiva

de elementos da superfamília Penelope. Foi realizado sequenciamento via sistema Solexa Illumina Hiseq 2000,

gerando um dataset de 30912162 reads de 100pb, estes reads foram então agrupados em clusters e relacionados à

diferentes superfamílias de TEs através de análises da plataforma RepeatExplorer, reads correspondentes à

superfamília Penelope foram montados em contigs com a ferramenta CAP3, foi realizada uma análise na literatura

e no banco de dados RepBase de sequências correspondentes à elementos Penelope e foi utilizada a ferramenta

ORF-Finder para obtenção de sequências de aminoácidos de proteínas estruturais, foi utilizado o software MAFFT

que permite o alinhamento múltiplo de sequências, a ferramenta AliView para remoção de gaps, o ProtTest para

identificar o melhor modelo de substituição de aminoácidos e a ferramenta PhyML 3,0 do software Seaview para

montagem da árvore filogenética. Ocorreu a formação de um clado com alto suporte de ramo aLRT (1.0)

composto por um elemento da superfamília Penelope de L. boulardi, com elemento Penelope-1 de Nasonia

vitripennis, e um elemento ainda não caracterizado de outra vespa parasitoide (Trichogramma pretiosum). Vespas

parasitoides são organismos próximos evolutivamente e a similaridade entre TEs de diferentes vespas verificada

na análise pode ser explicada por eventos de co-evolução destes diferentes elementos com seus respectivos

genomas hospedeiro. Portanto, não foram apresentadas evidências que indiquem a ocorrência de HTT de

elementos da superfamília Penelope.

APOIO CNPq

355


ANÁLISE INTERESPECÍFICA IN SILICO DE GENES RELACIONADOS À PLURIPOTÊNCIA

Priscila Germany Corrêa da Silva1; Jéssica Barboza da Silva


1; Ludymila Furtado

Cantanhêde1; Valeska Andrea Ático Braga



1; José Carlos

Ferreira Silva1; Roberta Lane de Oliveira Silva


2; Marcos Antonio Lemos de

Oliveira1.



Aplicadas à Reprodução, Recife, PE. ; (2)

Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética,

Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Recife, PE.

RESUMO As células pluripotentes possuem a capacidade de se diferenciar em todos os tecidos que formam o feto. A

manutenção da pluripotência é controlada por diversos fatores, dentre eles, os genes relacionados à pluripotência

(GRP). Apesar do crescente entendimento sobre os GRPs em humanos e camundongos, pouco se conhece em

ruminantes. O objetivo foi analisar e caracterizar in silico de genes relacionados à pluripotência de ovinos e

bovinos, para estimar a similaridade quanto as funções entre estas espécies. As sequências dos GRPs SOX2,

OCT4, SALL4, RONIN, REX1 e NANOG foram submetidas no NCBI via tBLASTn para selecionar sequências

candidatas com e-value igual ou inferior a e-10

. As sequências foram anotadas, traduzidas e tiveram seus domínios

conservados identificados com o auxílio das ferramentas BLAST, ORF-Finder e CD-Search no NCBI. A partir do

JVirGel 2.0 foi realizada a predição do peso molecular o ponto isoelétrico das sequências proteicas, já a

localização subcelular foi obtida pelo Cell-PLoc 2.0. Foi obtida apenas uma sequência para cada GRPs nas

espécies analisadas, embora os genes NANOG, SALL4 e REX1 tenham apresentado duas isoformas em ovinos.

Foi verificado que 77,78% e 16,66% representavam sequências preditas para ovinos e bovinos, respectivamente.

As proteínas candidatas apresentaram grande variação quanto ao tamanho, de 285 a 1063 aminoácidos. Os

melhores quadros de leitura foram +1, +2 e +3. O ponto isoelétrico variou de 4,68 e 10,40 e o peso molecular de

32,54 a 110,78 kDa. Os domínios identificados nos genes OCT4, SOX2, REX1 e RONIN são completos e

conforme descrito em outras espécies. O domínio PGC7-Stella na isoforma X2 do RONIN ovino possui variação

quanto à região C-terminal. A isoforma X1 do SALL4 ovino apresenta quatro zinc fingers, enquanto que as demais

sequências de SALL4 apresentam seis. Os GRPs foram descritos como proteínas nucleares em humanos, embora

SOX2 e REX1 possam ser encontrados no citoplasma e núcleo. As duas isoformas do REX1 apresentaram maior

similaridade entre si do que com a de bovinos. No entanto, NANOG e SALL4 de ovinos apresentaram uma

isoforma (X1) mais conservada em relação aos bovinos, enquanto que a isoforma X2 apresentou maior variação

entre elas. As análises in silico demonstram que os GRPs são muito conservados entre ovinos e bovinos, embora a

variação entre algumas sequências sugira que ovinos possam apresentar variações quanto ao controle da

pluripotência, possivelmente mediados por isoformas específicas.

APOIO CNPq; CAPES; Facepe

356


IDENTIFICAÇÃO IN SILICO DE AQUAPORINAS EM CALOTROPIS PROCERA

Maria Reis Velois Coêlho1; Rebeca Rivas


2; Valesca Pandolfi

2; Stephani Soares

Rodrigues dos Santos2; Ana Maria Benko Iseppon

2; Mauro Guida Santos

1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Botânica, Laboratório de Fisiologia Vegetal, Recife,

PE.; (2)

Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório Genética e Biotecnologia

Vegetal, Recife, PE

RESUMO As aquaporinas (AQPs), proteínas de membrana transportadoras de água (MIP, Membrane Intrinsic Protein), estão

envolvidas com a homeostase hídrica, influenciando fatores relacionados com o crescimento e desenvolvimento do

vegetal. A prospecção de aquaporinas em plantas é de grande importância, principalmente visando a obtenção de

genótipos mais tolerantes as condições de seca e salinidade. O objetivo deste trabalho foi identificar sequências de

aquaporinas no transcriptoma de Calotropis procera sob condições de salinidade. Para tanto, foi realizada a

extração de RNA total do tecido foliar de plantas de C. procera expostas a salinidade (NaCl 100 mM) por 0h, 30

min, 2 h, 8 h, 45 dias após à imposição do sal e controle 45 dias (sem sal). Após o sequenciamento (via HiSeq2500

Illumina) foi realizada uma montagem 'de novo' via ferramenta Trinity, para a obtenção do transcriptoma da

espécie. Sequências de aquaporinas (obtidas no banco de dados NCBI e UNIPROT) foram usadas como sondas

para busca (via tBlastn) de aquaporinas no transcriptoma de C. procera (programa BioEdit). As sequências

identificadas, após traduzidas pela ferramenta ORFinder, foram submetidas ao CD-Search para a seleção de

sequências com domínio MIP completo. Por meio do programa MEGA foi realizado um alinhamento com

sequências de aquaporinas de C. procera, Arabdopsis thaliana e Hevea brasiliensis, e construída uma árvore

fenética, utilizando o método de Neighbor Joining (Bootstrap 1.000 repetições). Foram identificadas 33

sequências como possíveis aquaporinas, sendo nove com o domínio MIP completo. O alinhamento das sequências

permitiu a detecção dos motivos conservados NPA, localizados nos loops B e E de aquaporinas de C. procera,

com exceção das XIPs que apresentaram o resíduo alanina substituído pelo de valina no loop B. A análise fenética

das sequencias foram distribuídas em três grupos ortólogos, sendo PIP (seis membros), NIP (um membro) e XIP

(dois membros). Porém, não permitiu a identificação dos grupos de aquaporinas TIP e SIP, ambos encontrados em

plantas. Houve a formação de clusters menores para PIP, que foi subdivida em dois subgrupos: PIP 1 e PIP 2.

Com base nesse estudo, foi possível identificar e caracterizar membros das subfamílias MIP igualmente

importantes para outras espécies da família Apocynaceae.

APOIO Financiamento: CAPES, CNPq.

357


ARHGAPS FAMILY HISTORY: GAIN AND LOSS OF THE PROTEIN DOMAINS

Hallana Souza Santos1; Pamela Laiz Paré da Rosa

2; Maria Cátira Bortolini

2; Vanessa Rodrigues Paixão Côrtes

1.


(1)UNIVERSIDADE FEDERAL DA BAHIA;

(2)UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SUL

RESUMO The ARHGAP (RHO GTPASE ACTIVATING PROTEIN) family has 41 paralogs genes involved in various

processes of cellular signaling as the SLIT-ROBO pathway and the activation of proteins RhoGTPases. Some of

them are active during the neurodevelopment of humans and other vertebrates. In this group, there are 4 genes

(SRGAP2B, SRGAP2C, SRGAP2D and ARHGAP11B) that were associated with the emergence of human

cognitive adaptive novelties. To describe the evolutionary history of this family, we performed a comparative

analysis of synteny and neighborhood of the human chromosomes that have ARHGAPs genes using the browser

Genomicus (84V), with a distance of 15 flanking genes to both sides. The sequences of all human ARHGAPs were

collected from Ensembl (v.84) and aligned using the MUSCLE algorithm available in Mega7. The PHYLOGENY

web server was used for the construction of a maximum likelihood phylogenetic tree, with 500 Bootstrap. We

found 150 gene families present in the neighborhood of the ARHGAPs, ranging from 8 to 31 in to pairwise shared

genes. The ARHGAP28 shares 31 family genes with the ARHGAP36 and ARHGAP9. It may indicate that these

genes may have arisen from duplication of a same chromosome segment. In addition, they share 3 protein domains

(PH, RHO-GAP, SH3), which suggests that perhaps these genes may have the same origin, that data are not

supported by the phylogenetic tree. The ARHGAP19 shared few neighbor genes with the ARHGAP25 and

ARHGAP1, and are 8 and 9 genes, respectively, indicating an unconserved neighborhood. Analyzing the tree,

some branches have a high confidence (100%), these are the branches where proteins share more domains, such as

the SH3BP1, ARHGAP17, ARHGAP44, which have in common F-BAR AND RHO-GAP domains. The proteins

SRGAP2A, SRGAP2B, SRGAP2C, SRGAP2D, SRGAP1, SRGAP3, and ARHGAP4 also were grouped with

100% of support, they all share the same domains (RHO-GAP, F-BAR and SH3). All of them are expressed

during the formation, maturation and migration of neurons. The ARHGAPs are very different among themselves

and there is no domain shared by all of them. This may occur due to the diversity of roles that these genes have

and the various cell compartments where they are expressed. Further analyzes are needed to relate the molecular

changes lead to evolutionary innovations.

APOIO FAPESB

358


IN SILICO MODELING OF THE SOYBEAN SEED ALCOHOL DEHYDROGENASE (ADH) PROTEIN

Oliveira, Lailson Kavein Ruas1; Siqueira, Giovano Sousa

2; Barbosa, Rafael Marani

3; Pirovani, Carlos Priminho

4.


(1)Graduando em Engenharia Agronômica, Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC, Rodovia Jorge Amado,

Km 16, Bairro Salobrinho, CEP 45662-900. Ilhéus/BA. ; (2)

Mestrando em Genética e Biologia Molecular,

Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC, Rodovia Jorge Amado, Km 16, Bairro Salobrinho, CEP 45662-900.

Ilhéus/BA. ; (3)

Professor Adjunto, Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC, Rodovia Jorge Amado, Km 16,

Bairro Salobrinho, CEP 45662-900. Ilhéus/BA.; (4)

Professor Titular, Universidade Estadual de Santa Cruz - UESC,

Rodovia Jorge Amado, Km 16, Bairro Salobrinho, CEP 45662-900. Ilhéus/BA.

RESUMO Although there are many problems found in deteriorated seeds, injuries and other problems in the cellular

membrane systems are pointed out as the main changes that occur when deterioration starts taking place,

especially the damages caused to the inner mitochondrial membrane. This leads to aerobic metabolism failure and

decreases the oxidative phosphorylation, reducing energy production and by so affecting the development

metabolism of seeds. Under such conditions, cells start producing energy through anaerobic fermentation releasing

ethanol at the end of the process. The enzyme Alcohol Dehydrogenase (ADH) plays an important role therefore, as

it metabolizes the ethanol, functioning as an important biological marker for the physiological quality of seeds.

Homology models of proteins are of great interest for planning and analyzing biological experiments when no

experimental three-dimensional structures are available. In order to better understand the metabolic pathway of

fermentation in soybean seeds, the homology modeling of the three-dimensional structure of the ADH protein was

performed by using gene sequences available in the GENOSOJA database. The ADH protein is a constitutive

enzyme and it is present in many living organisms such as plants, animals, and microorganisms. For the in silico

modeling of the soybean seed ADH protein (GmADH1), the ADH PDB:4RQT mold of Arabidopsis thaliana var.

columbia (AtADH1) was used with 83,96 % of sequence identity. With a 748 amino acids (aa) residues sequence,

the GmADH1 protein has 2 chains, 36 segments on beta sheets and 32 alpha helices. Many common features and

high similarity were observed between the two proteins (GmADH1 vs. AtADH1), including the conservation of

key residues required to allow the interaction with Zn2+

ions. The generated model was validated with

PROCHECK, in which Ramachandran graph showed 100% of aa located in favorable energy regions. Analysis

using ANOLEA revealed an energy of -1,131.79 E / kT and the QMEAN server, a score of 0,80. Our results

showed that both models presented functional domains and structure similarity with the AtADH1 protein, as well

as many common conserved sequences with similar configuration.

359


A STUDY ON ECO-GEOGRAPHICAL INFLUENCE ON HYDROCARBON-DEGRADING AND

SURFACTANT PRODUCING GENE DIVERSITY USING PUBLIC-DATA

Jorge S. Oliveira1; Wydemberg J. Araújo

2; Ricardo M. Figueiredo

3; Rita C. B. Silva Portela

2; Alaine de Brito

Guerra2; Sinara Carla da Silva Araújo

2; Carolina Minnicelli

2; Aline Cardoso Carlos

2; Ana Tereza Ribeiro de

Vasconcelos4; Ana Teresa Freitas

3; Lucymara F. Agnez Lima

2.


(1)Laboratório de Biologia Molecular e Genômica, Departamento de Biologia Celular e Genética, Centro de

Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, Brazil a; INESC-ID/IST Instituto de

Engenharia de Sistemas e Computadores/Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal b; (2)

Laboratório de Biologia Molecular e Genômica, Departamento de Biologia Celular e Genética, Centro de

Biociências, Universidade Federal do Rio Grande do Norte, Natal-RN, Brazil; (3)

INESC-ID/IST Instituto de

Engenharia de Sistemas e Computadores/Instituto Superior Técnico, Universidade de Lisboa, Lisboa, Portugal ; (4)

Laboratório de Bioinformática, Laboratório Nacional de Computação Científica, Petrópolis, RJ, Brazil

RESUMO Introduction: The symbiotic action of biosurfactants and degradation enzymes in crude oil bioremediation has

been in the spotlight, mainly due to the awareness for ecosystem pollution, caused by crude oil accidents and use.

Initially, the scientific community studied the role of individual microbial species by characterizing and

optimizing its biosurfactant and oil degradation genes, studying their distribution one by one. However, with the

advances in genomics, especially with New-Generation-Sequencing and Metagenomics, these new techniques,

allow gene studies in different pathways and their interaction with other genes. Objective: It is, thus a new

opportunity to reveal and understand the interconnected role of microorganisms, and the natural role of

degradation and biosurfactant genes in an ecosystem, allowing the development of new biotechnological and

bioinformatics tools for bioremediation. Now it is possible, notwithstanding more challenging, to obtain the DNA

information of an entire microbial community and automatically characterizing it. Methods: In this work, 71

metagenomes, spanning 22 different biomes, obtained from different research projects were first analyzed. Our

pipeline contains a common part, containing quality control in the beginning, clustering and statistics in the end

and two parallel approaches in between: (1) A more sensitive domain-specific database alignment performed using

the BioSurfDB website, that uses blastp and (2) a global approach using the RefSeq non-redundant protein

database and a less sensitive alignment program - LAST. This combined approach enabled more efficient

processing of such large amount of data, when compared with traditional pipelines. Results: The function-based

clustering clearly separated some microbiomes based on their richness of genes involved in biodegradation and

biosurfactant production. These biomes have one thing in common - they are near the equatorial region. Statistical

tests confirmed these results. Conclusion: This work takes advantage of the value of public data, performing a

global-wide microbioecological study, using DNA-seq samples from terrestrial and aquatic ecosystems all across

the globe The results presented, suggest that latitude affects the biodegradation and biosurfactants production gene

abundance, which is also a starting point for further research in other areas of environmental microbiology,

including in the development of new bioremediation strategies.

APOIO This work was supported by the Conselho Nacional de Desenvolvimento Cientí?co e Tecnológico (CNPq-Brazil),

Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES-Brazil), Fundação de Amparo à Pesquisa

do Rio de Janeiro and Fundação para a Ciência e a Tecnologia (FCT) with reference UID/CEC/50021/2013.

360


ABORDAGEM METAGENÔMICA DA RIZOSFERA DE SISAL (AGAVE SISALANA) E DO AGAVE

HÍBRIDO 11648 CULTIVADOS NO SEMIÁRIDO DA BAHIA

Caroline Lopes Damasceno1; Eliane Leal Candeias

2; Maria Luíza do Carmo Santos

2; Lorena Brito Pimental

Rodrigues dos Santos2; Jeferson dos Santos de Souza

2; Thiago Alves Santos de Oliveira

2; Elizabeth Amélia Alves

Duarte2; Lenaldo Muniz de Oliveira

1; Ana Cristina Fermino Soares

2.


(1)PPGBiotec, Universidade Estadual de Feira de Santana (UEFS);

(2)CCAAB, Universidade Federal do Recôncavo

da Bahia (UFRB)

RESUMO O sisal (Agave sisalana Perrine Ex Engelm) caracteriza-se por ser uma espécie adaptada a climas semiáridos,

inclusive do nordeste do Brasil. A partir das folhas de sisal são obtidas as fibras duras as quais abastecem 70% do

mercado mundial de diversos segmentos industriais e artesanais. Contudo, nos últimos anos tem ocorrido declínio

na produção de sisal devido a doença podridão vermelha causada por Aspergillus niger. Devido a robustez da

cultura e ausência de manejo e tratos culturais o controle biológico é a alternativa viável para retomada da

produção de sisal. Para tanto, faz-se necessário conhecer a comunidade microbiana do patossistema, sobretudo

com abordagem metagenômica. Destarte, foi realizado o estudo da comunidade de bactérias da rizosfera de sisal

(A. sisalana) e do Agave Hibrido 11468 por NGS para fins de comparação da dinâmica populacional de ambas.

Considerando que a podridão vermelha é reportada em A sisalana e esporadicamente no Hibrido 11468 coletou-se

amostras de raiz de sisal com (COMD) e sem (SEMD) sintomas da doença e do Agave Hibrido 11468 SEMD,

coletadas de cultivos em Conceição do Coité, Bahia, Brasil. Para extração do DNA total de raízes utilizou-se o kit

UltraClean®

Microbial DNA Isolation (MoBio). A integridade e a quantidade do DNA foi verificada no Qubit 2.0

Fluorometer (Invitrogen®). As bibliotecas foram construídas a partir das amplificações com os primers 515F e

806R da região V4-V5 do gene 16S rRNA, enriquecidas e aplicadas no Ion 318™ Chip Kit v2 para

sequenciamento na plataforma Ion Torrent PGM do laboratório de Bioquímica de Microrganismos e Plantas,

UNESP - Jaboticabal. As OTUs (Unidade Taxonômica Operacional) foram definidas utilizando o Mothur v.1.32.0

após filtrar as sequências a partir do MiSeq SOP, adotando a distância genética de 3% para agrupar as sequências

em OTUs e assim, classificar os microrganismos. De maneira geral os filos: Proteobacteria, Cyanobacteria,

Actinobacteria e Acidobacteria foram abundantes tanto em raiz de A. sisalana quanto do Híbrido 11648. Ao nível

de gênero destacou-se o grupo Burkholderia sp. com maior representatividade nos tecidos radiculares do agave

Híbrido 11648 (26,2%) seguido e em menor taxa em A. sisalana COMD (11,4%) e SEMD (1,7%). Burkholderia

spp. são microrganismos saprófitas, cuja associação com A. sisalana e o Híbrido 11648 pode estar relacionada à

atuação do grupo enquanto promotores do crescimento vegetal, antagonistas à fitopatógenos e produtores de

antimicrobianos.

APOIO UFRB, CNPq, CAPES e FAPESB

361


ABUNDÂNCIA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO DA FAMÍLIA AREB/ABF EM FEIJÃO-CAUPI SOB

DESIDRATAÇÃO RADICULAR

João Pacífico Bezerra Neto1; Artemisa Nazaré Costa Borges


1; José Ribamar Costa

Ferreira Neto1; Ana Maria Benko Iseppon

1.



Recife, PE, Brasil.

RESUMO Proteínas AREB/ABF são fatores de transcrição (TFs) pertencentes à superfamília bZIP que se ligam ao

elemento cis ABRE, presentes na região promotora de vários genes regulados por ABA (ácido abscísico). São

conhecidos por seu envolvimento na regulação da resposta vegetal frente ao estresse hídrico. O presente estudo

objetivou analisar in silico a abundância de potenciais TFs AREB/ABF em diferentes acessos de Vigna

unguiculata [Pingo de Ouro (PO) - tolerante e Santo Inácio (SI) - sensível] sob condições de déficit hídrico. Para

isto, uma sequência de TF AREB/ABF (Uniprot: Q9M7Q3) foi usada como sonda contra bibliotecas de RNA-Seq

(banco NordEST) via tBLASTn (cut off ≤ e-05). Os transcritos identificados foram analisados em relação à sua

abundância nas três bibliotecas utilizadas na montagem do transcriptoma (T0 - controle, T75 - desidratação

radicular 75 min e T150 - desidratação radicular 150 min). Para isso, os valores de RPKM (Reads Per Kilobase

Million) foram usados para gerar um heat-map com os programas Cluster 3.0 e TreeView. Foram identificadas 81

sequências candidatas com domínio completo, sendo 19 encontradas em PO e 60 em SI. Os TFs AREB/ABF

mostraram-se expressos em todas as bibliotecas, indicando que a família de TFs estudada apresenta expressão

basal tanto em condições normais como sob estresse. Sabe-se que apenas alguns membros dessa família estão

relacionados diretamente à sinalização por intermédio de ABA no estresse hídrico. Com relação à abundância de

reads nos genótipos contrastantes, observou-se que em PO, as bibliotecas sob estresse foram mais similares entre

si quando comparadas com o controle, conforme observado para o transcrito PO16223.1 que apresentou maior

RPKM (70,62 e 62,06) nas bibliotecas T75 e T150 em relação à biblioteca controle T0 (14,3). Em contrapartida,

para SI observou-se que a biblioteca T75 é mais relacionada com o controle, indicando que a modulação

transcricional frente ao estresse aplicado ocorre tardiamente no genótipo sensível, enquanto que no genótipo

tolerante uma resposta precoce parece promover a ativação de mecanismos relacionados à tolerância. Assim, o

presente trabalho agrega informações valiosas a respeito da abundância e expressão de fatores AREB/ABF em

feijão-caupi sob desidratação radicular, fornecendo valiosos recursos genéticos com aplicabilidade em programas

de melhoramento e mapeamento genético da referida cultura.

APOIO CAPES, CNPq e FACEPE.

362


ACUMULAÇÃO PREFERENCIAL DE SEQUÊNCIAS REPETITIVAS DO TIPO

RETROTRANSPOSONS LTR TY3/GYPSY NO GENOMA DE PAYPAYROLA BLANCHETIANA TUL.

(VIOLACEAE)

Mariana Báez1; Marcus Braun

1; Magdalena Vaio


1.


(1)UFPE;

(2)Universidad de la República

RESUMO O gênero Paypayrola Aubl. compreende seis espécies, sendo P. blanchetiana endêmica da Mata Atlântica do

leste do Brasil. Esta espécie habita o sub-bosque de florestas úmidas de baixada, onde ocorre localmente em

densidades altas. Nenhuma informação citogenética está disponível para o gênero, mas dados genômicos foram

gerados para análises genéticas populacionais. O estudo visa investigar a composição de sequências repetitivas no

genoma dessa espécie para auxiliar o entendimento da evolução genômica. Isto vai facilitar comparações com os

dados populacionais e assim ajudar no entendimento da complexa biologia floral desta espécie. O DNA genômico

foi extraído, purificado e submetido a sequenciamento do tipo Illumina, gerando 331000 reads de 250 pb cada.

Análises das sequências foram realizadas por meio da plataforma Galaxy/RepeatExplorer, o qual agrupa as

sequências com base em similaridade, gerando clusters para diferentes famílias de DNA repetitivo. Essas famílias

foram classificadas através de buscas em várias bases de dados e dos layouts dos gráficos dos clusters gerados.

Foram incluídas no agrupamento 517.214 sequências, num total de 5 Mpb. As sequências foram agrupadas em

27.262 clusters contendo de 2 a 5.105 sequências, correspondendo cada um dos 350 maiores clusters a pelo menos

0,01% no genoma. Em conjunto, todas as famílias repetitivas corresponderam a 28,4% do genoma da espécie,

sugerindo um genoma de pequeno tamanho. As análises permitiram classificar 10 linhagens de elementos

transponíveis do tipo retrotransposons LTR, vários transposons de DNA, sequências LINE e RNA ribossomal. Os

elementos repetitivos mais abundantes foram os retrotransposons do tipo LTR, representando 19,4% do genoma.

Os elementos LTR Ty3/Gypsy representaram mais da metade do total da fração repetitiva no genoma com um

15,1%, excedendo ~8 vezes os elementos Ty1/copia, sendo os dois mais abundantes das linhagens Athila e

Chromovirus com 5,8% e 5,5% respectivamente. Vários clusters da linhagem Chromovirus apresentaram o

domínio específico da região centromérica. Seis linhagens de elementos Ty1/copia também foram identificadas,

constituindo 1,9% do genoma, sendo as linhagens mais abundantes AleI/Retrofit e Maximus com 0,68% e 0,62%

respectivamente. Esta análise permitiu identificar um acúmulo de elementos repetitivos do tipo retrotransposon

LTR Ty3/Gypsy, em particular das linhagens Athila e Chromovirus, sugerindo uma amplificação preferencial

dessa família nessa espécie.

APOIO Suporte financeiro: CNPq/FACEPE

363


ANÁLISE DE SINTENIA DA FAMÍLIA GÊNICA PR-10 DE VIGNA UNGUICULATA NOS GENOMAS

DE VIGNA RADIATA E PHASEOLUS VULGARIS

Bruna Piereck1; Carolline de Jesús Pires


1; Artemisa Nazaré Costa Borges

1; José

Ribamar Ferreira Costa Neto1; Ana M. Benko Iseppon

1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética

RESUMO As proteínas da família PR-10 são pequenas, fortemente acídicas, resistentes a proteases e estão associadas à

resposta a estresses bióticos e abióticos. O presente estudo visou ancorar nos genomas de Vigna radiata

(Vr) e Phaseolus vulgaris (Pv) as sequências de PR-10 identificadas no transcriptoma do feijão-caupi (variedades

tolerante e sensível), observando a sintenia entre as mesmas. Primeiramente, foi realizado um BLASTn

localmente, promovendo a ancoragem dos transcritos contrastantes de V. unguiculata nos genótipos Pingo de Ouro

(PO) e Santo Inácio (SI), tolerante e sensível à seca, respectivamente. De posse dos dados da ancoragem, foram

gerados os links, excluindo os scaffolds, analisando-se as sondas dos genótipos contrastantes separadamente. A

visualização dos dados foi feita a partir de um mapa circular, gerado com o programa Circos. Foram observados

113 loci de PR-10 em V. radiata e 123 em P. vulgaris. Ao se analisar o genótipo tolerante PO foram identificados

49 loci em três cromossomos (5, 7 e 9) de V. radiata, a maioria no cromossomo 9 (20 loci). Por sua vez, em P.

vulgaris o cromossomo 3 foi o mais abundante, com 32 loci de um total de 46, distribuídos nos cromossomos 2, 3

e 19. Para o genótipo sensível SI foi visto um maior número de sítios de sintenia nas duas leguminosas estudadas,

sendo 68 loci localizados nos cromossomos 2, 5, 7 e 9 de V. radiata e 72 loci difundidos em quatro cromossomos

(2, 3, 9 e 11) de P. vulgaris. Os cromossomos mais abundantes foram Vr07 e Pv03 para V. radiata e P. vulgaris,

respectivamente. Esses dados justificam-se em virtude do maior tamanho do genoma de P. vulgaris. Além disso,

foi identificada a formação de clusters dos genes PR-10 e duplicações em tandem. Tal observação já foi relatada

em outras espécies, sendo indicativo de processos evolutivos por meio de duplicação em tandem. Detectou-se que

tanto sondas de SI quanto de PO não distinguem seu padrão de distribuição, havendo uma localização preferencial

no braço longo dos cromossomos de P. vulgaris. Com exceção dos cromossomos Vr09 e Vr02, todos os outros

apresentaram sequências nas porções mais distais do cromossomo (em torno de 30-40 Mb). O presente trabalho

agregou informações a cerca da distribuição dos transcritos de PR-10 de feijão-caupi em outras duas leguminosas

relacionadas, o que reforça a hipótese de que o principal mecanismo de evolução dessa família gênica está

associado a eventos de duplicação gênica.

APOIO Financiamento: CAPES, CNPq, FACEPE.

364


ANÁLISE DE TRANSCRIPTOMA REVELA A PRESENÇA DO GENE ÁCIDO FARNESÓICO O-

METILTRANSFERASE (FAMET) NAS FASES LARVAIS E ADULTA DO MACROBRACHIUM

AMAZONICUM.

Soraia Costa de Carvalho1; Carlos Murilo Maciel

1; Maria Iracilda Sampaio

1; Cristiana Ramalho Maciel

1.


(1)Universidade Federal do Pará, Instituto dos Estudos Costeiros, Bragança-PA

RESUMO A enzima ácido farnesóico O-metiltransferase (FAMeT) catalisa a síntese do hormônio Metil farnesoate (MF), o

qual é considerado o hormônio juvenil dos crustáceos e está envolvido na morfogênese, muda, desenvolvimento e

reprodução de pelo menos oito espécies desse grupo. O Macrobrachium amazonicum é um camarão com elevado

potencial econômico e ecológico, podendo estar sujeito às implicações do gene FAMeT ao longo de seu

desenvolvimento ontogenético. Portanto, esse trabalho teve como objetivo detectar a presença de transcritos do

gene FAMeT em M. amazonicum nas fases larvais (I, V e PL), e adulta nos tecidos ovário, aparelho reprodutor

masculino (testículo e glândula androgênica) e hepatopâncreas, usando a tecnologia do sequenciamento de nova

geração. As larvas e tecidos foram macerados em nitrogênio líquido para posterior extração de RNA. Após o

isolamento dos mRNAs, foi preparada a biblioteca de cDNA seguido pelo sequenciamento no Ion TorrentTM

em

chip 318. Os reads obtidos foram montados no software Trinity numa abordagem De Novo. Os transcritos foram

submetidos ao BLASTx usando o banco de dados de proteínas do Uniref90 e Uniprot. Para a anotação funcional

(Gene Ontology) foi utilizado o software Blast2GO. Foram obtidos 5 transcritos referentes ao gene putativo da

FAMeT e análises no banco de dados Gene Ontology revelaram que este gene é expresso nas fases larvais V e PL

e nos órgãos reprodutores masculino e feminino dessa espécie. Os valores de RPKM (Kilobase de exon por milhão

de reads mapeados) registrados para os órgãos reprodutores foram altos, indicando que a expressão do gene

FAMeT talvez não seja sexo-específica nessa espécie. Além disso, os fragmentos revelaram uma elevada

similaridade (94%) com as FAMeTs de outros crustáceos, sugerindo que a FAMeT de M.

amazonicum possivelmente esteja envolvido nos processos fisiológicos, reprodutivos, de muda e desenvolvimento

dessa espécie. Esse é o primeiro estudo que revela a presença do gene FAMeT na fase larval e adulta de M.

amazonicum e tais informações poderão fornecer subsídios para pesquisas posteriores de caracterização e

expressão do gene FAMeT nessa espécie, além de vislumbrar possíveis estratégias de intervenção em

biotecnologia para M. amazonicum.

APOIO CNPq (Universal Processo 447954/2014)

365


ANÁLISE DE TRANSCRITOS HIPERMODULADOS EM SEMENTES DE ACESSOS

CONTRASTANTES DE MILHO SUBMETIDAS À INFECÇÃO POR FUSARIUM VERTICILLIOIDES

José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Carolline de Jesus Pires

1; Artemisa Nazaré da Costa Borges

1; Gizele de

Andrade Luz2; Maria Fernanda da Costa Gomes



1.




RESUMO Diversos grupos de pesquisa têm utilizado bancos de dados de valor agregado (BDVA) para comparar seus dados

com outros e/ou minerar situações específicas não investigadas em dados publicados. Este trabalho recai sobre a

segunda alternativa. Para tanto, minerou-se informações contidas nos transcritomas de milho estudados no

manuscrito "e;Functional genomic analysis of constitutive and inducible defense responses to Fusarium

verticillioides infection in maize genotypes with contrasting ear rot resistance"e; (PMID: 25155950), disponível

na BDVA Expression Atlas (código "e;E-MTAB-4219"e;). Teve-se como intuito analisar, em sementes, transcritos

hipermodulados (Adjusted p-value cutoff ≤ 0.05 e Log2-fold change cutoff ≥ 3.5), ou seja, aqueles com um número

de cópias, no mínimo, dez vezes maior após a infecção por Fusarium verticillioides, quando comparado à situação

controle (mock). Pressupõe-se que transcritos com tal característica de modulação possam estar intimamente

associados à reposta ao patógeno sob análise. Nesses termos, foram encontrados 533 transcritos para o acesso

resistente (CO441) e 64, para o acesso suscetível (CO354), nas bibliotecas RNA-Seq analisadas. Adotou-se a

estratégia de "e;Gene Set/Pathway Enrichment Analysis"e; (Fisher-exact, FDR < 0,01) para alçar significado

biológico ao conjunto de transcritos identificados. As dez vias metabólicas mais enriquecidas nos dois conjuntos

de transcritos analisados variaram parcialmente. Tal fato seria esperado, uma vez que os acessos analisados são

fisiologicamente contrastantes. Adicionalmente, observou-se que as vias de sinalização dos hormônios jasmonato

e salicílico foram as mais enriquecidas para ambos acessos, demonstrando a importância da participação hormonal

na reposta de milho ao fungo em questão. Das três funções moleculares associadas aos termos GO mais

enriquecidos, duas foram idênticas entre os conjuntos de transcritos analisados: "e;resposta à injúria"e;

(GO:0009611), e o termo genérico "e;atividade de ATPase"e; (GO:0016887). Presume-se que o termo

"e;GO:0009611"e; esteja enriquecido devido à injuria mecânica realizada para a inoculação do fungo no vegetal.

As funções moleculares "e;transporte de cátion"e; (GO:0006812) e "e;biossíntese de ácidos graxos"e;

(GO:0006633), foram específicas para os acessos resistente e suscetível, respectivamente. Tal dado é um

indicativo das especificidades da fisiologia molecular dos acessos analisados e pode atuar na diferenciação dos

mesmos.

APOIO PNPD-CAPES; Rede Intersis

366


ANÁLISE FENÉTICA DE PROTOZOÁRIOS DO GÊNERO LEISHMANIA, AGENTES ETIOLÓGICOS

DAS LEISHMANIOSES

Lucas Christian de Sousa Paula1; Moezio de Vasconcellos Costa Santos Filho

2.


(1)Programa de Pós-graduação em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE;

(2)Programa

de Pós-graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE

RESUMO As Leishmanioses são um grupo de doenças tropicais negligenciadas causadas por protozoários parasitas do

gênero Leishmania. Esta doença está presente em cerca de 98 países causando mais de 1,5 milhões de casos por

ano e levando, aproximadamente, 350 milhões de pessoas ao risco de infecções. O gênero Leishmania pertence à

família Trypanosomatidae que é composta obrigatoriamente por organismos parasitas. Os membros desta família

podem parasitar insetos e outros hospedeiros, incluindo organismos monoxênicos tal como Crithidia, Leptomonas,

Herpetomonas e Blastocrithidia. Durante o ciclo infeccioso no hospedeiro vertebrado, a Leishmania precisa

sobreviver a um rigoroso ambiente oxidante nos macrófagos e o gene TRYR (trypanothione reductase) e seus tióis

subordinados desempenham um papel essencial na manutenção de um ambiente redutor intracelular para proteger

esses parasitas contra danos oxidativos, resultantes do seu metabolismo aeróbico e, externamente, pela resposta

imunitária do hospedeiro mamífero. Tendo em vista este fator, objetivou-se separar espécies de Leishmania

utilizando uma abordagem fenética. Foi realizada uma busca no banco de dados do

NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) e selecionado o gene TRYR de Leishmania infantum. A sequência seed foi

comparada com o banco de dados do próprio NCBI utilizando a ferramenta BLASTn. A partir do BLAST foram

selecionadas oito sequências de espécies diferentes do gênero Leishmania e duas sequências dos gêneros

Leptomonas e Crithidia respectivamente para o outgroup. Para alinhamento das sequências nucleotídicas foi

utilizado o pacote de programas MEGA7 (http://www.megasoftware.net/) e o algoritmo ClustalW e também a

geração de árvore fenética e matriz de distância. O gene TRYR mostrou uma taxa de conservação considerável

dentro do gênero Leishmania. A partir da similaridade das sequências nucleotídicas foi possível agrupar

Leishmania infantum e L. donovani em um clado, o que se era esperado devido a esses organismos fazerem parte

de um complexo de espécies. Todos os ramos do fenograma tiveram nós com valores de bootstrap entre 97-100%.

367


ANÁLISE FENÉTICA DE TFS DA FAMÍLIA MYB EM ANGIOSPERMAS

Danubia Rita de Sá Leal1; Mitalle Karen da Silva Matos



1.


(1)Manoel Fernando Leal e Rita Eloina de Sá Leal

RESUMO Para se adaptar e sobreviver aos estresses ambientais, as plantas são induzidas a produzir uma série de respostas

fisiológicas e bioquímicas. Os fatores de transcrição (FTs) atuam como reguladores centrais da expressão gênica,

desempenhando papel fundamental na resposta de aclimatação e adaptação às condições desfavoráveis. A família

MYB (myeloblastosis) de FT compreende uma das maiores famílias gênicas, sendo o domínio do tipo R2R3-MYB

o mais prevalente em plantas. O presente trabalho objetivou realizar uma análise fenética com os FTs MYB em

vegetais. Para isso, foi realizada uma busca no banco de sequências não-redundantes do NCBI (National Center

for Biotechnology Information) por sequências homólogas à proteína VuMYB_23 do feijão-caupi [Vigna

unguiculata (L.) Walp.], utilizando o algoritmo PSI-BLAST. Foram selecionadas 32 sequências proteicas e

nucleotídicas com base nos melhores valores de e-value (cut-off de 7e-143

), as quais foram alinhadas utilizando a

ferramenta Clustal Ômega contida no Unipro UGENE 1.19. Para as análises fenéticas, foram realizadas edições

manuais no alinhamento, sendo construídos fenogramas no programa MEGA 6, utilizando o método de Neighbor-

Joining, com 1000 replicações de bootstrap. Das 32 sequências de TF MYB selecionadas, 29 sequências

envolveram espécies de dicotiledôneas e 3 do grupo das monocotiledôneas (classe Liliopsida) representando o

grupo externo. No fenograma gerado a partir das sequências proteicas, verifica-se que alguns agrupamentos

formados, em nível de ordem ou níveis menores, apresentaram valores de bootstraps relativamente altos (82% a

100%), como observado nos valores dos agrupamentos que reúnem as sequências proteicas de espécies das

famílias Fabaceae e Rosaceae, indicando que as sequências de TF MYB apresentam-se bastante similares nestes

grupos. Verifica-se ainda uma elevada proporção de similaridade nos nós que representam os agrupamentos

formados pelas espécies de monocotiledôneas (grupo externo) e dicotiledôneas (99% e 96%, respectivamente).

Comparativamente, no fenograma obtido a partir das sequências de nucleotídeos, percebe-se que os organismos

estão agrupados de forma muito semelhante e com proporções de replicações ainda mais elevados nos nós que

formam os agrupamentos citados anteriormente, indicando que as sequências nucleotídicas são mais informativas

para este tipo de análise, comparativamente às sequências proteicas.

APOIO Capes, Facepe, CNPq

368


ANÁLISE IN SILICO DE ESTS DE CANA-DE-AÇÚCAR RESPONSIVOS A SECA NA VIA DE

SINALIZAÇÃO DO ÁCIDO SALICÍLICO (AS).

Samara Alves da Silva1; Amanda Thamires Batista do Nascimento

2; Valquiria da Silva

1; Vinicius Torres Guerra

3;

Elvson Wallacy da Silva3; Éderson Akio Kido

4.


(1)Aluna de Graduação em Ciências Biológicas / Bach - UFPE;

(2)Programa de Pós-graduação em Genética - CB -

UFPE; (3)

Aluno de Graduação em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (4)

Professor Associado do Departamento de

Genética - CB - UFPE

RESUMO A cana de açúcar (Saccharum spp.) é uma gramínea de grande importância agrícola, porém seu cultivo enfrenta

perdas significativas devido à ocorrência de estresses abióticos, principalmente aquele relacionado a seca. Os

fitormônios atuam na indução e repressão de genes, apresentando papel fundamental na resposta da planta sob

estresses (a)bióticos. Em vista disso, o presente trabalho teve como objetivo analisar a expressão, sob estresse de

seca (24 h após supressão de rega), de transcritos de cana-de-açúcar (tags de 26 pb) codificadores de proteínas

participantes da via de sinalização do fitormônio ácido salicílico (AS), um regulador de crescimento endógeno,

cuja a função de sinalizador em estresses (a)bióticos também é relatada. Estavam disponíveis quatro bibliotecas

HT-SuperSAGE [controle negativo vs tratamento (supressão de rega 24 h)] de bulk de quatro acessos tolerantes e

outro sensível ao estresse. As unitags (tags diferentes) foram alinhadas (BlastN; e-value < e-10

) com transcritos de

cana-de-açúcar, que foram previamente alinhados com proteínas de sorgo da via do AS, conforme dados da base

KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes). As análises in silico permitiram mapear sete transcritos de

cana-de-açúcar, codificadores das proteínas NPR1, PR-1 e TGA, com regulações induzidas, reprimidas e não

significativas (n.s; p < 0,05), conforme teste Audic-Claverie. No bulk de acessos sensíveis, o gene PR-1 e o fator

de transcrição TGA tiveram regulação n.s., ao passo que a proteína NPR1 foi reprimida. Já no bulk de acessos

tolerantes, a via foi totalmente induzida. Os fatores de transcrição TGA possuem afinidade por elementos cis

encontrados na região regulatória de genes relacionados com a defesa vegetal, induzindo-os. Dentre esses, destaca-

se o PR-1. Os dados indicam que tal gene pode estar associado a processos regulatórios durante o estresse de seca,

uma vez que o mesmo foi induzido nos tolerantes e n.s. nos sensíveis. O NPR1, por sua vez, está associado ao

aumento na tolerância ao estresse oxidativo, um efeito secundário comum a todos os tipos de estresses (bióticos e

abióticos) já analisados e cujo controle é de extrema relevância para a viabilidade celular. Assim, pode-se sugerir

que os membros da via aqui analisada são atuantes em cana-de-açúcar quando submetida à seca, do modo

aplicado, podendo, assim, auxiliar no processo de tolerância ao estresse estudado. As expressões dos componentes

da via estão sendo atualmente validados por RTqPCR.

APOIO CAPES e CNPq

369


ANALYSIS IN SILICO OF MUTATIONS IN THE BRCT DOMAINS IN BRCA1 USING

BIOINFORMATICS TOOLS: POSITIONS, EVALUATIONS AND PREDICTIONS

Penelopy Rodrigues de Macêdo1; Lis Souza Rocha

2; Susan Smith

3.



(2)Universidade Federal de Viçosa;

(3)Kennesaw State University

RESUMO The breast cancer is one of the most harmful cancers in women. Breast and Ovarian Cancer Susceptibility Gene

One (BRCA1) is a well-known gene responsible for producing tumor suppressor proteins, and for receiving

signals from other proteins in order to directly repair damages in DNA. In the BRCA1 protein there are two

conserved motifs, known as BRCA1 C-terminal one and two (BRCT1 and BRCT2), which together assemble a

pocket binding region (PBR). BRCT1 has a length of 74 amino acids (from position 1650 to 1724) and BRCT2 a

length of 79 amino acids (from position 1763 to 1842). By using bioinformatics tools, point mutations in the

BRCT domains were analyzed, studying their association with cancer, what conditions the disease may develop,

how these mutations could interfere in living cells, and which mutations would affect the structure and function of

the BRCT domains. Herein were observed PRO1771ALA and GLY1801ASP. All sequences were obtained from

the NCBI database using Reference Proteins (Refseq_protein). The crystal structure of BRCT1/2 domains

together was observed through Chimera 1.10rc, PDB entry 1JNX, to predict their impact on the BRCA1 protein.

The PRO1771ALA and GLY1801ASP shifts seem to potentially jeopardize the PBR's catalytic role. This may

happen because the position 1771 is inside the pocket, where many interactions with other proteins happen.

Additionally, the glycine in 1801 position is surrounded by hydrophobic amino acids and threonines, which are

hydrogen donor amino acids. However, when glycine is mutated to aspartic acid, it becomes a hydrogen acceptor

amino acid, establishing hydrogen bonds with the neighbor threonine and inducing a conformational change in the

loop. As a result, any possible interaction involving this region is compromised. In other words, a mutation in the

BRCT domains may potentially result in severe phenotypes such as different types of cancer, and not only breast

cancer.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Superior (CAPES) e Conselho Nacional de

Desenvolvimento Científico e Tecnológico (CNPq).

370


ATIVAÇÃO DOS GENES DA VIA DA AMPK INDUZIDA PELO EXERCÍCIO FÍSICO CRÔNICO E

AGUDO, EM HUMANOS

Isabele da Silva Pereira1; Luiz Henrique Pontes dos Santos

1; José Willian Girão Dias

1; Stela Mirla da Silva

Felipe1; Milca Malgalhães Dias de Carvalho Soares

1; Thiany Vieira do Nascimento

2; Jonathan Elias Rodrigues

Martins1; Sávio Victor Diógenes Mendes

1; Francisco Sérgio Lopes Vasconcelos Filho

1; Christina Pacheco

1;

Juliana Osório Alves1; Vânia Marilande Ceccatto

1.


(1)Universidade Estadual do Ceará;

(2)Faculdade Maurício de Nasssau

RESUMO O exercício físico não apenas é considerado como um fator protetor contra doenças crônico degenerativas, mas

como regulador gênico de várias cascatas de sinalização molecular. Dentre diversas vias de sinalização da

homeostase energética destacamos neste trabalho a cascata gênica de ativação da Proteína Quinase Ativada por

AMP (AMPK). A via completa possui cerca de 138 genes (KEGG) que podem ser regulados positiva ou

negativamente (up ou down-regulation: UR ou DR). Avaliou-se quais e quanto estes genes são induzidos,

verificando-se o índice de regulação gênica (Fold Change - FC), em relação ao indutor exercício. Realizou-se

revisão sistemática de literatura (2009-14) usando os termos 'exercise', 'fitness', 'physical activity ', 'genetics' e

'gene expression', pesquisando no Pub Med, Pub Med Central e Google Scholar. Foram coletadas informações

sobre a expressão de genes da via AMPK (obtidos por técnicas de microarray, qPCR ou RNAseq) relacionados ao

exercício. Após a busca em bancos de dados o conjunto gênico foi caracterizado e sua atuação na via do AMPK foi

estudada através da localização dos genes na via e da análise dos dados de expressão. A pesquisa foi aprovada pelo

Comitê de Ética em Pesquisa com Seres Humanos em 28/04/2015 - Parecer no. 1.040.349. O estudo mostrou

dados de 5.147 genes, em cerca de 57 trabalhos científicos. Dos 138 genes verificados no KEGG para a via

AMPK, 70 deles foram relacionados ao exercício. Destes 70, 35 genes estariam relacionados ao exercício crônico,

16 genes ao exercício agudo e 17 a ambos. Destes 70 genes analisados, 36 genes foram relacionados ao

treinamento de endurance, 15 genes ao exercício de resistência, 17 genes atuariam em ambos os exercícios e 2

genes não teriam classificação específica. Na regulação gênica foram encontrados 18 genes com UR, 24 genes

com DR e 20 genes com UR/DR. Dentre os 20 genes UR/DR, 8 genes aparecem com UR, 9 genes DR e 3 genes

não apresentaram variação. Em relação ao FC, certos genes apresentaram alta indução, como o gene PPARGC1A

com FR 10 vezes UR e o gene SLD com 7,2 vezes UR que o valor basal, visto em indivíduos sedentários. Os

genes negativamente induzidos como o gene PDPK1, mostraram 2,27 DR. Os trabalhos de expressão são

compatíveis com a análise de que, em termos fisiológicos, a sinalização glicogênica da AMPK seria favorecida

pelo exercício de endurance, facilitando o aporte e transporte de glicose para o músculo.

APOIO CNPq, FUNCAP e CAPES.

371


BAIXA RAZÃO ÔMEGA-6/ÔMEGA-3 EM DIETA MATERNA HIPOPROTEICA INDUZ

MODIFICAÇÕES EPIGENÉTICAS EM CÉLULAS NEURAIS DA PROLE QUE FAVORECEM A

TRANSCRIÇÃO GÊNICA

Alinny Rosendo Isaac1; Ingrid Prata Mendonça

1; Emerson Alexandre Neves da Silva

1; Ricielle Lopes Augusto

1;

Giselle Machado Magalhães Moreno2; Paulo Euzébio Cabral Filho

3; Cláudio Gabriel Rodrigues

3; Catarina

Gonçalves Pimentel4; Marcelo Cairrão Araújo Rodrigues

2; Belmira Lara Silveira Andrade da Costa

2; Michelly

Silva de Oliveira2; Débora Barreto Barros

2.


(1)Departamento de Fisiologia e Farmacologia;

(2)Departamento de Fisiologia e Farmacologia, UFPE;

(3)Departamento de Biofísica e Radiobiologia, UFPE;

(4)Department of Basic and Clinical Neuroscience, Maurice

Wohl Clinical Neuroscience Institute, King's College London.

RESUMO Introdução: Ômega-3 presente na dieta induz modificações epigenéticas necessárias à gênese e diferenciação de

neurônios e células gliais. Em contrapartida, a má-nutrição proteica materna pode negativamente modificar

epigeneticamente o genoma fetal.Objetivo: Investigar se uma baixa razão ômega-6/ômega-3 (n-6/n-3) presente na

dieta materna poderia induzir modificações epigenéticas favoráveis em histonas de células neurais da prole,

mesmo em situação de deficiência proteica.Métodos:Ratas foram divididas em grupo controle, alimentadas com

dieta comercial, e grupo experimental, com dieta hipoproteica, 30 dias antes do acasalamento e durante a gestação,

contendo uma razão n-6/n-3 de 1,69. Neurônios e astrócitos do córtex cerebral da prole foram cultivados por 48

horas e 21 dias, respectivamente. Para avaliar se houve acetilação de H3K9 e di-metilação de H3K4, foi feito

citometria de fluxo e imunocitoquímica, e Western blot para GFAP.Resultados: Observou-se expressão similar

da isoforma fosforilada de GFAP com 50kDa em astrócitos de ambos os grupos. Análises por densitometria ótica

mostrou aumento na imunoreatividade para H3K4Me2 em astrócitos de animais malnutridos (Mn) (Mn:

27115±9892 vs. nutrido(N): 22583±6194, dados expressos em unidades arbitrárias -ua,P < 0.005), e nenhuma

diferença em relação a intensidade de H3K9Ac. . Análises por citometria de fluxo não mostraram diferenças entre

as grupos. Por outro lado, o tratamento dos astrócitos por 24 horas com 100µM de DHA promoveu um aumento de

60% na H3K9Ac do grupo malnutrido. imunocitoquímica para H3K9Ac em neurônios mostrou um aumento nos

níveis de fluorescência no grupo malnutrido (Mn: 30107±6789 vs. N: 25257±7562, P = 0.0075), e nenhuma

diferença entre os grupos em relação à H3K4me2. Adicionalmente, não houve ativação do fator de transcrição

gênica NF-kB. O perfil de ácidos graxos do leite materno nos neonatos, mostrou que a razão dos ácidos

linoleico/alfa-linolênico da dieta experimental é mantida. Conclusão: H3K9Ac e H3K4Me2 estão envolvidos com

o aumento de transcrição gênica relacionados à gênese e diferenciação de neurônios e astrócitos. Sugere-se uma

relação favorável entre a baixa razão n-6/n-3 sobre a manutenção desses eventos importantes para o

desenvolvimento do cérebro, mesmo em uma situação de deficiência proteica e que o DHA, importante derivado

da família ômega-3, esteja atuando sobre a acetilação, mantendo-a estável, devido a sua influência sobre as

enzimas que atuam nesse processo.

APOIO Apoio Financeiro: CAPES, CNPq, FACEPE, INCT.

372


CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO DA SUBFAMÍLIA HD-ZIP

CLASSE I EM TRANSCRIPTOMA DE FEIJÃO-CAUPI SUBMETIDO À DESIDRATAÇÃO

RADICULAR

Artemisa Nazaré Costa Borges1; Lívia do Vale Martins


1; Ana Maria Benko

Iseppon1.



Recife, PE

RESUMO A família de fatores de transcrição HD-Zip é dividida em quatro subfamílias. A subfamília HD-ZipI apresenta

grande destaque por ser atuante nas respostas a estresses abióticos. Dessa forma, o presente estudo objetivou

identificar e caracterizar HD-ZipI candidatos nos transcriptomas de acessos contrastantes [Pingo de Ouro

(tolerante) e Santo Inácio (sensível)] de feijão-caupi, submetidos à desidratação radicular e alocados na base de

dados NordEST. Para tal, empregou-se uma sequência HD-ZipI (Uniprot: P46897) de Arabidopsis thaliana como

sonda. Essa foi blastada (TBLASTN; cut off ≤ e-05

) contra o NordEST, para identificação de ortólogos.

Posteriormente, as sequências obtidas foram anotadas contra o banco nr-Protein, do NCBI, através do BLASTX

(cut off ≤ e-10

). Em seguida, os HD-ZipI candidatos foram traduzidos a partir do maior frame de leitura, pela

ferramenta ORF Finder. A análise e integridade de domínios conservados foi executada pelo software Batch CD-

Search. Em seguida, o ponto isoelétrico e o peso molecular das sequências foram preditos através do programa

JVirGel 2.0. A localização subcelular foi predita por meio do Cell-ploc. Por fim, para as sequências oriundas desse

pipeline, foi realizado o alinhamento múltiplo por meio do Clustal Omega, o qual foi visualizado pelo Jalview.

Após mineração no banco de dados NordEST, foram identificados 38 potenciais HD-ZipI. Destes, 29

apresentaram domínio HD-Zip completo, com ORF apresentando, em média, 255 aminoácidos de extensão

(variando de 129-327 aa); enquanto que o ponto isoelétrico foi de 6,17 (variando de 4,47-10,17) e peso molecular

de 29,33 kDa (variando de 15,03-37,05 kDa). Apesar desses valores serem inferiores aos característicos para A.

thaliana, são condizentes com os comumente encontrados para outras leguminosas, como por exemplo, em soja. A

localização de todos os candidatos foi predita como nuclear, refletindo a atuação direta de fatores de transcrição

nessa região. O alinhamento múltiplo indicou elevado grau de conservação nos domínios específicos de HD-ZipI,

observando-se a presença de: hexapepitídio AIWFQN, na hélice 3; resíduos conservados L16, W48, F49, N51 e R53.

Tais informações corroboraram a identidade das sequências. Assim, este estudo identificou a presença de

representantes HD-ZipI no transcriptoma de feijão-caupi submetido à desidratação radicular. As características

observadas dos candidatos são similares às presentes em outra leguminosa (soja), sugerindo alto grau de

conservação.

APOIO Rede Intersis

373


CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DA FAMÍLIA GÊNICA PR-10 NO TRANSCRIPTOMA DE VIGNA

UNGUICULATA (L.) WALP. SUBMETIDO A DESIDRATAÇÃO RADICULAR

Carolline de Jesús Pires1; José Ribamar Costa Ferreira Neto

1; Jéssica Barboza da Silva


1;

Ana Maria Benko Iseppon1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Recife, PE

RESUMO Proteínas PR-10 compreendem um grupo proteico amplamente distribuído no reino vegetal. Estão envolvidas em

muitos aspectos da biologia da planta, como resposta a estresses e processos desenvolvimentais. Diante disso,

visou-se identificar e caracterizar potenciais proteínas PR-10 no transcriptoma de acessos contrastantes (tolerante/

sensível) de feijão-caupi, sob desidratação radicular. Para tal, utilizou-se como sonda uma sequência de PR-10

(P93333), a qual foi alinhada (tBLASTn; cut off ≤ e-05

) contra o banco de dados NordEST. As sequências

selecionadas foram anotadas via BLASTx contra o banco não redundante (nr) do NCBI. Posteriormente, essas

sequências foram traduzidas com o programa ORF finder. Em seguida, domínios e motivos conservados foram

identificados com o auxílio do software Batch CD-search. O peso molecular e o ponto isoelétrico das sequências

proteicas foram preditos via JVirGel 2.0 e a localização subcelular, por meio do Cell-PLoc 2.0. Por fim, o

alinhamento múltiplo das sequências foi realizado no software Clustal Omega. Seguindo-se esse fluxograma de

ações, minerou-se um total de 25 potenciais PR-10 expressas em feijão-caupi sob desidratação radicular. Desse

total, 16 sequências apresentaram domínio completo. A ORF desses candidatos variou de 375 a 567 pb; enquanto

que a massa molecular apresentou entre 13,26 e 20,80 kDa. O ponto isoelétrico variou de 4,25 a 5,95,

demonstrando que tais proteínas são fortemente acídicas. Além disso, as PR-10 preditas no feijão-caupi

apresentaram localização citosólica. O alinhamento das sequências obtidas mostrou que o P-loop de glicina na

posição 46-53, característico da assinatura dos motivos desta família proteica, foi bastante conservado entre as PR-

10 preditas no feijão-caupi. Esse P-loop possui um sítio de ligação de nucleotídeo e a fosforilação nessa área

sugere uma possível associação com atividade de nuclease em algumas proteínas PR-10. O presente trabalho

agregou informações à caracterização estrutural desse importante grupo proteico. As características das PR-10

mineradas em feijão-caupi são partilhadas com outros grupos vegetais, demonstrando a sua conservação.

Adicionalmente, a constatação de sua expressão sob desidratação radicular sugere que essas proteínas podem

participar de processos metabólicos associados à reposta a esse estresse. Entretanto, maiores estudos são

necessários para análise dos processos nos quais tal grupo está envolvido.

APOIO Financiamento: CAPES, CNPq e FACEPE.

374


CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DE PROTEÍNAS DE CHOQUE TÉRMICO (HSPS) DE SACCHARUM

SPP

Ester Alves da Silva Amorim1; Sheyla Silva Lima

1; Fabiana Aparecida Cavalcante Silva

1; Tercilio Calsa Júnior

1.


(1)Laboratório de Genômica e Proteômica de Plantas, Universidade Federal de Pernambuco, Recife-PE

RESUMO As proteínas de choque térmico (HSP- Heat shock protein) são produzidas em resposta a condições de estresse

como calor, seca, frio, salinidade e pressão osmótica. As HSPs atuam como "e;e;chaperonas"e;e;, estabilizando

e/ou remodelando outras proteínas que sofreram modificações na estrutura após estresse. A partir da análise

proteômica de plantas de cana-de-açúcar sujeitas a estresse por déficit hídrico, foram identificados fragmentos das

proteínas HSP18, HSP81-1 e HSP17.5 as quais foram anotadas em Daucus carota (P27397), Arabidopsis thaliana

(P27323) e Zea mays (P24631), respectivamente. O objetivo deste trabalho foi caracterizar e validar as sequências

de aminoácidos obtidas através da espectrometria de massas com o auxílio de ferramentas de bioinformática. Um

fragmento de cada HSP foi usado como query para tBLASTn e em seguida escolhida a sequencia homóloga para

cada, segundo a melhor identidade, e-value e menor número de gaps. Para confirmação e busca da localização do

domínio de HSP foi utilizado o programa CD-Search e em seguida BLASTx a partir dos três dominios para

obtenção das sequências de aminoácidos. Estas foram analisadas quanto ao pI e peso molecular através dos

programas ExPASy, presença de peptídeo sinal pelo SignalP 4.1 e pontes dissulfeto no DISULFIND, bem como

suas estruturas tridimensionais no SWISS-MODEL e posterior alinhamento e comparação no BioEdit 5.0.9. Do

tBLASTn resultaram três sequências de acesso X53852.1, AY105939.1 e XM_002455002.1. O CD-Search

revelou domínios com 275, 860 e 260 nucleotídeos, respectivamente. A partir destes, obtiveram-se cinco

sequências homólogas de organismos diferentes no BLASTx. Para HSP 18 (domínio com 92 resíduos), Daucus

carota foi o organismo de melhor alinhamento (score: 482), com pI 7,93 , peso molecular 18.474,96 kDa e

identidade 81,52%. Já a HSP81-1 (domínio com 505 resíduos), teve como organismo de melhor alinhamento e

similaridade Oryza sativa (score: 2.303), que possui pI 4,99 e peso molecular 80.194,0 kDa e cuja modelagem

mostrou 70,33% de identidade. Por fim, a análise da HSP 17.5 (domínio de 87 resíduos) mostrou Setaria italica

como organismo de melhor alinhamento com score 433, pI 6,86, peso molecular 25.156,75 kDa e identidade

45,98%. Nenhuma sequência apresentou pontes de dissulfeto nem peptídeo sinal. Por fim, os resultados mostraram

domínios conservados, e a modelagem in silico sugere que os fragmentos obtidos via MS derivam de proteínas de

choque térmico.

375


CARACTERIZAÇÃO DE ELEMENTOS DE TRANSPOSIÇÃO PRESENTES NO GENOMA DO VETOR

ANOPHELES EPIROTICUS

Elverson Soares de Melo1; Gabriel da Luz Wallau

2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco-UFPE/Centro de Informática - CIN;

(2)Fundação Oswaldo Cruz

Pernambuco - FIOCRUZ Pernambuco

RESUMO Elementos de transposição (TEs) são parasitas genômicos que se movem ou se duplicam de forma autônoma ou

com auxílio de outros elementos. Eles são capazes de gerar diferenças estruturais e influenciar diretamente o

tamanho dos genomas podendo alterar a estrutura e regulação gênica ao se inserir dentro ou em regiões próximas

aos genes. Os TEs apresentam uma ampla variedade de tipos e correspondem a quase 50% do genoma do Aedes

aegypti, proporção muito diferente da composição em Anopheles gambiae (16%). Contudo, em várias espécies de

mosquitos o conteúdo de TEs não é conhecido, uma delas é o An. epiroticus, vetor da malária nas ilhas e costas do

sudoeste asiático. Dada a importância do vetor e a essa falta de informações, nos propomos a caracterizar seu

conteúdo de TEs. Para isso foi utilizado o TEdenovo, que compõem parte dos pacotes do REPET (URGI). Com

ele foi utilizada ferramenta Blaster que realiza o auto alinhamento do genoma, seguidos por clusterização através

do Grouper, Recon e Piler. Além disso, foi realizada busca estrutural para detectar elementos LTR em grande

proporção. Como input foi utilizado o genoma do An. epiroticus obtido do VectorBase. A classificação dos TEs

foi realizada com auxílio da ferramenta PASTEC, recebendo como input o banco de dados do RepBase. Para o

cálculo do total de TEs, foram removidas as sequências simples e as famílias multigênicas do hospedeiro, também

foi calculada a distância kimura 2 parâmetros para cada família de transposons. Os resultados da análise indicam

que cerca de 5,5% do genoma desta espécie é composto por TEs, dos quais 3,32% são de classe I, 1,6% são de

classe II, e o restante composto por quimeras. Dos TEs de classe I, foram encontradas as superfamílias: Jockey

(15,75%), BEL (10,55%), Gypsy (7,79%), RTE (4,55%), I (3,41%), Copia (2,76%) e L1 (1,79%), já dos TEs de

classe II foram encontradas: Tc1-Mariner (5,36%), hAT (1,46%), CACTA (0,97%), Harbinger (0,65%), Transib

(0,65%), PiggyBack (0,49%), P (0,49%), Merlin (0,32%) e Helitron (0,16%). O fato de mais de 80% dos TEs

apresentarem distância kimura acima de 10 indica que a maioria do TEs são componentes antigos desse genoma.

Com esses resultados podemos associar o pequeno tamanho do seu genoma em relação ao de outros mosquitos,

com a baixa proporção de TEs encontrada. Além disso, comparando-se com outras espécies de mosquito podemos

observar que o mobiloma de An. epiroticus segue a mesma prevalência dos TEs de classe I sobre os de classe II.

376


CONSERVAÇÃO DE QUINASES ENTRE LEGUMINOSAS DOS GÊNEROS VIGNA SAVI E

PHASEOLUS L.

Ana Rafaela da Silva Oliveira1; Bruna Piereck

1; Bruna Rafaelle Bernardo


1; Ana

Maria Benko Iseppon1.



RESUMO Genes codificantes da superfamília de proteínas-quinase (PQs) estão entre os mais abundantes e conservados em

eucariotos, desempenhando papéis-chave em quase todas as funções biológicas, em geral em associação à ativação

de cascatas de sinais. Diversas famílias PQs participam da resposta a diversos estresses bióticos e abióticos, sendo

seu estudo de grande relevância para o melhoramento genético de plantas. Sabe-se que tais sequências evoluíram

por mecanismos de duplicação e neofuncionalização, agrupando-se em regiões genômicas fenotipicamente

importantes e que definem caracteres quantitativos (QTLs, Quantitative Trait Loci). Neste estudo, foram

identificados transcritos de PQ de Vigna unguiculata (Vu, feijão-caupi, 2n = 22), variedade Pingo de Ouro, usando

o programa iTAK. Sequências codificantes de PQ foram usadas como sonda e ancoradas nos genomas de Vigna

radiata (Vr, feijão-mungo, 2n = 22, 333 Mb) e Phaseolus vulgaris (Pv, feijão-comum, 2n = 22, 521 Mb), via

BLASTn com e-value = 1e-50

e word_size = 20, seguido da construção de um mapa circular, com o programa

Circos. Usando 138 sondas de sequências expressas de Vu, observaram-se 183 e 207 sequências que codificam

PQs em Vr e Pv respectivamente, as quais ancoraram nos 11 cromossomos de ambas as espécies. O maior genoma

de Pv pode justificar a diferença no número de genes identificados. Os cromossomos Vr6, Vr8, Pv1 e Pv11

apresentavam maior número de transcritos, variando entre 37 e 29, enquanto que os cromossomos Vr9, Vr11, Pv5,

Pv10 revelaram os menores números com cerca de um a sete transcritos. Foi possível constatar a formação de

diversos agrupamentos (clusters) gênicos em geral em posições subterminais e intercalares dos cromossomos,

abrangendo diversas famílias de quinases, o que é característico dessa superfamília. .Esses resultados reforçam a

existência de microssintenia (conservação de genes) e são uma primeira etapa na compreensão da relações entre

Pv, Vr e Vu. Tais estudos são importantes para o entendimento da evolução de regiões genômicas orquestradoras

de cascatas de sinais, muitas vezes associadas ao desempenho sob condições de estresse, além de revelar a posição

de genes ou QTLs responsáveis por fenótipos importantes em leguminosas cultivadas, como no caso das espécies

avaliadas no presente estudo.


377


CONSERVED MOTIFS AND EVOLUTIONARY TOPOLOGY FROM EPIDERMAL FISH MUCUS

LECTINS

Eden Silva e Souza1; Fellipe Alves Ozorio do Nascimento

1; Monique Ayala A. da Silva

2; Michely Correia Diniz

3.


(1)Graduando em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF -

Colegiado de Ciências Biológicas- Campus Ciências Agrárias - Petrolina, PE.; (2)

Graduanda em Ciências

Biológicas pela Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF - Colegiado de Ciências Biológicas-

Campus Ciências Agrárias - Petrolina, PE.; (3)

Professora Doutora do Colegiado de Ciências Biológicas da

Universidade Federal do Vale do São Francisco - UNIVASF - Campus Ciências Agrárias - Petrolina, PE.

RESUMO Mucus layer, which may contain lectins, covers epithelial fish surface. Functions performed by the lectins are

extremely important for the internal balance and intra and interspecific communication, what suggests that there is

a degree of conservation at the molecular level. The aim of this study was to assess the similarity between the

primary sequences of mucus lectins, seeking conserved motifs and infer an evolutionary topology between species.

14 lectins primary sequences extracted from the epithelial mucus of 9 fish species were retrieved from the National

Center for Biotechnology Information (NCBI) (ncbi.nlm.nih.gov) and aligned in BioEdit 7.2.5. using Clustal W.

Then the sequences were subjected to Multiple Em for Motif Elicitation (MEME 4.11.1) (meme-suite.org), which

discovers conserved motifs. Motifs were analyzed in PSORT (psort.hgc.jp). Finally, we built a phylogenetic

reconstruction using MEGA 7.0.14. The topology was created from the aminoacid sequences, using the Maximum

Likelihood statistical method, the NNI Heuristic Method, Bootstrap 1000 and the Jones-Taylor-Thornton model.

Sequences size ranged from 111 to 378 residues. BioEdit analysis showed that the sequences no have similarity.

MEME showed the presence of six conserved motifs. The motifs 1, 2, 3 and 4 were found in 35.7% of the

analyzed sequences (5 sequences), these motifs are found in lectins of C. myriaster, A. japonica, A. japonica

(lactose affinity), and G. flavimarginatus. The motif 1 has 50 residues, the motif 2 features 32 residues, the motif 3

features 27 residues, and the motif 4 features 29 residues. The motif 5 has 50 residues and is found in sequences

isolated from L. setigerus, T. rubripes, and G. morhua, which represents 21% of the analyzed sequences. Finally,

the motif 6 presents 50 residues was found in the sequences of A. japonica (galactose affinity), C. myriaster

(congerin I) and C. myriaster (congerin II). The PSORT showed that all motifs are found in the cytoplasm, the

probability of 56.5% for the motif 1, 60.9% for the motif 2, 47.8% for the motif 3, 47.8% for the motif 4, 47.8%

for the motif 5, and 34.8% for the motif 6. The generated topology shows a relationship between Anguilliformes

species based of the lectin sequences. Anguilliformes were separated in two branches strongly supported (91, 95).

However, more sequences are needed to present a more robust result for the Actinopterygii.

378


CONSTRUÇÃO DO GENOMA PLASTIDIAL PARCIAL DE QUATRO ESPÉCIES DO GÊNERO

RHYNCHOSPORA VAHL

Iara Costa1; Igor Albuquerque

1; André Marques

1.


(1)Laboratório de Recursos Genéticos, Universidade Federal de Alagoas, Arapiraca - AL

RESUMO O gênero Rhynchospora Vahl (Cyperaceae) possui cerca de 270 espécies bem distribuídos nas Américas com

ocorrência de 157 destas no Brasil, sendo 40 espécies endêmicas. Uma importante característica entre plantas e

algas é a presença do cloroplasto no interior de suas células. O cloroplasto possui DNA circular próprio capaz de

se autoduplicar e independente do DNA nuclear. O objetivo desse trabalho foi obter o genoma plastidial parcial de

quatro espécies de Rhynchospora que apresentam dados de Sequenciamento de Nova Geração (NGS) disponíveis.

Para a obtenção do genoma plastidial de R. ciliata, R. globosa, R. pubera e R. tenuis paired-end reads oriundos de

quatro bibliotecas genômicas de plataforma Illumina Hiseq 2000 foram utilizados. Para isso, o genoma plastidial

de Carex siderosticha Hance (Cyperaceae) (GenBank número de acesso: NC_027250.1) foi utilizado como

referência para o mapeamento dos reads das quatro espécies de Rhynchospora. A proximidade filogenética entre

os gêneros Carex e Rhynchospora possibilitou a obtenção do genoma plastidial parcial de R. ciliata, R. globosa, R.

.ubera e R. tenuis, onde foram observados alguns gaps e a ausência de uma região específica do cloroplasto de C.

siderosticha com aproximadamento 40 Kpb. R. globosa apresentou o menor genoma com cerca de 110 Kpb,

seguido por R. pubera com 137 Kpb e R. ciliata com 142 Kpb, R. tenuis apresentou o maior genoma plastdial com

150 Kpb. A grande diferença observada em R. globosa pode ser explicada por uma maior divergência entre o seu

genoma e o de C. siderosticha, utilizado como referência. Uma comparação entre os genomas plastidiais de

Rhynchospora e outras dez monocotiledôneas revelou a existencia de uma alta colinearidade entre os genomas de

Cyperaceae. A análise filogenética confirmou a relação próxima entre Carex e Rhynchospora, sendo agrupados

num mesmo clado. Análises em andamento estão sendo realizadas para o melhoramento da montagem e anotação

dos quatro genomas plastidiais de Rhynchospora. Espera-se obter o genoma completo para as quatro espécies, que

serão de grande utilidade para estudos de filogenia e evolução para a família Cyperaceae, a qual possui somente o

genoma plastidial de C. siderosticha sequenciado.

APOIO CNPq/FAPEAL

379


DISTRAINDO O RIBOSSOMO: ANÁLISE IN SILICO DOS PADRÕES DE OCORRÊNCIA DE UAUGS

NA REGIÃO 5' UT DE MRNAS DE FUNGOS

Caio Suzart Argolo Lavinsky1; Leandro Lopes Loguercio

1; Ramon Oliveira Vidal

2.


(1)Universidade Estadual de Santa Cruz;

(2)German Center for Neurodegenerative Diseases

RESUMO A compreensão dos mecanismos da regulação da expressão gênica em fungos é relevante devido à diversidade de

suas aplicações na agricultura e na indústria. As regiões 5' não traduzidas de mRNAs (UTRs) podem apresentar

uAUGs a montante do códon de iniciação. Isto origina fases abertas de leitura (5' uORFs) capazes de atenuar as

taxas de tradução de proteínas por competição pelos ribossomos. Pouco se tem estudado sobre a relevância

evolutiva desse mecanismo. Por meio de scripts computacionais, foram extraídas do banco de dados 'RefSeq' as

sequências 5' UT de mRNAs de fungos; buscou-se responder qual o potencial de influência desse mecanismo na

regulação global da expressão gênica. Todas as sequências de mRNAs de fungos do banco 'RefSeq' foram

coletadas e foi criada a taxa 'PU' (Presença de UTRs) que relaciona a quantidade de UTRs identificadas no total de

mRNAs de um genoma. Foram selecionadas 6 espécies de ascomicetos e 4 de basidiomicetos com esta maior taxa

PU (mínimo 60 e máximo 87.1%). Isto corresponde a quantidades médias de 8062 mRNAs e 5567 UTRs (taxa

'PU' média de 69% por espécie). O total de sequências de mRNA das espécies oscilou entre 12836 e 4893 e de

UTRs entre 8379 e 3164. O índice 'uAP' (uAUG Presence) foi definido para indicar a fração de 5' UTRs com ao

menos 1 uAUG. Os fungos basidiomicetos apresentaram um percentual médio de uAP de 46.4%, inferior ao

observado para os ascomicetos (63,2%). A fim de avaliar a possível competição entre os uAUGs e os start códons

legítimos pela maquinaria ribossômica, foi realizada uma comparação entre seus contextos de iniciação. Nas 10

espécies, entre 32 e 60% dos mRNAs demostraram uAUGs com contexto de iniciação mais favorável que o AUG

legítimo. Com o estabelecimento de um grupo amostral robusto, foi possível verificar que a presença de uAUGs

em todas espécies tem elevado potencial de interferência na tradução de proteínas previstas para os respectivos

mRNAs. Essa influência foi reforçada pela incidência frequente de 5' uORFs com contexto de iniciação mais

favorável do que o dos start códons legítimos dos respectivos mRNAs. Desta forma, há uma forte tendência da

maquinaria ribossômica ser parcialmente sequestrada pelas 5' uORFs com melhores contextos de iniciação. Isso

diminuiria a taxa de síntese proteica dos mRNAs, distraindo os ribossomos de sua função principal. Outros estudos

estão em andamento para verificar se há concentração deste fenômeno de regulação em grupos de genes com

funções específicas.

APOIO CAPES

380


DISTRIBUIÇÃO, FUNÇÃO E RELAÇÃO FILOGENÉTICA DA FAMÍLIA DE PROTEÍNAS

HIDROFOBINAS EM GENOMAS DE FUNGOS.

Keila Rayane Nunes de Farias1; Melissa Fontes Landell

2; Leonardo Broetto

1.


(1)Universidade Federal de Alagoas (UFAL) / Campus Arapiraca e Laboratório de Diversidade Molecular (LDM /

UFAL); (2)

Laboratório de Diversidade Molecular (LDM / UFAL)

RESUMO Os fungos são importantes micro-organismos envolvidos em processos de patogenia, causando doenças e perdas.

As análises dos genomas de fungos possuem grande importância para gerar informações e identificar proteínas

associadas aos processos de interações utilizados por fungos para provocar doenças. O presente estudo teve como

objetivo a prospecção e o estudo da família de proteínas hidrofobinas, ubíquas em fungos, envolvidas na virulência

e na patogenicidade. As hidrofobinas são proteínas hidrofóbicas encontradas na superfície celular, que têm como

função principal reduzir a tensão superficial do meio onde o fungo se desenvolve, permitindo a quebra da interface

água-ar para o desenvolvimento de hifas aéreas e troca mais eficiente de gases. A família existe em múltiplas

cópias e são divididas em duas classes, de acordo com suas propriedades físicas. Inicialmente, 22 genomas

preditos de diferentes espécies de fungos dos filos Ascomycota, Basidiomycota e Chytridiomycota foram

coletados para esse estudo. Para prospecção, os genomas coletados foram inquiridos pela presença da família de

proteínas utilizando modelo oculto de Markov, derivado de alinhamentos do banco de dados Pfam, a partir dos

alinhamentos da família de proteínas. Os hits positivos foram submetidos ao procedimento de anotação usando

BLASTP contra o banco de dados de proteínas não redundantes (nr) do NCBI. Os dados foram sumarizados e as

sequências de interesse extraídas para as análises filogenéticas. Os resultados demonstram que as sequências estão

distribuídas entre os filos Ascomycota e Basidiomycota, que se dividem em classe i e ii. No filo Basidiomycota, na

espécie Ustilago maydis foi encontrada apenas classe i. Não foram encontrados hits no filo Chytridiomycota da

espécie Batrachochytrium dendrobatidis. As proteínas hidrofobinas foram agrupadas em 13 clados divergentes,

permitindo a visualização de um possível cenário evolutivo de suas famílias. A proximidade filogenética da

família das hidrofobinas sugere que a duplicação gênica foi o principal fenômeno que contribuiu para o grande

número e variedade das proteínas nos genomas. Muito provavelmente, a radiação de duas possíveis grandes

duplicações em Ascomycota e Basiodiomycota levou à expansão da família. A filogenia das hidrofobinas é

altamente conservada e consistente com a divergência dos táxons de fungos, podendo fornecer evidências sobre a

ancestralidade do reino.

381


DISTRIBUIÇÃO, FUNÇÃO E RELAÇÃO FILOGENÉTICA DA FAMÍLIA DE PROTEÍNAS

TETRASPANINAS EM GENOMAS DE FUNGOS.

Abraão José da Silva Júnior1; Melissa Fontes Landel

1; Leonardo Broetto

2.


(1)Laboratório de Diversidade Molecular (LDM / UFAL);

(2)Universidade Federal de Alagoas (UFAL) / Campus

Arapiraca

RESUMO As tetraspaninas são uma superfamília de pequenas proteínas integrais de membrana, com funções em diversos

processos como adesão celular e diferenciação, podendo ser importantes no processo de patogenicidade em alguns

fungos. Atualmente existem genomas disponíveis para um grande número de fungos, permitindo descobertas

acerca de muitos aspectos da biologia desses micro-organismos. O presente estudo teve como objetivo a

prospecção da família de proteínas tetraspaninas, envolvidas na virulência e na patogenicidade, a partir de uma

coleção de genomas. Inicialmente, 22 genomas preditos de diferentes espécies de fungos dos filos Ascomycota,

Basidiomycota e Chytridiomycota foram coletados a partir dos bancos de dados GenBank do NCBI (National

Center for Biotechnology Information), JGI (Joint Genome Institute) e BI (Broad Institute) para esse estudo. O

pipeline de anotação da família das tetraspaninas nos genomas selecionados foi conduzido em dois passos distintos

de identificação e anotação. O passo de identificação foi realizado utilizando o software HMMER 3.1, a partir do

perfil de modelo oculto de Markov (HMM) derivado de alinhamento flatfile do banco de dados de famílias de

proteínas do Pfam. O cutoff de hits positivos foi selecionado como valor de E de 10-3

. Os hits positivos foram

então submetidos ao procedimento de anotação envolvendo comparação com BLASTP (Stand-alone BLAST

application - BLAST+ 2.5.0) contra o banco de dados de sequência de proteínas não redundantes. Para a

construção das árvores filogenéticas, as proteínas anotadas foram submetidas à alinhamento com o HMMER e o

software FastTree foi utilizando empregando o método maximum-likelihood. A distribuição da família de

tetraspaninas foi diversa dentro dos filos, a análise filogenética revelou que a família gênica é constituída de pelo

menos 8 clados ortólogos ancestrais, os quais sofreram frequentes duplicação e perda nas diferentes linhagens de

fungos durante a evolução. As classes Tsp3 e Pls1 foram expandidas ou retidas nos fungos patogênicos e muito

provavelmente, por suas funções descritas, são importantes durante a infecção no hospedeiro. A alta consistência

dos motivos encontrados nos representantes do reino em nossos resultados sugere um papel central, provavelmente

mantendo funções gerais das proteínas tetraspaninas e resistindo à pressão evolutiva à longo prazo. A filogenia da

família apresenta conservação e consistência, podendo fornecer evidências sobre a história evolutiva do reino.

APOIO UFAL

382


DOCKING IN SILICO SUGERE INTERAÇÃO DO 4-TERPINEOL COM RECEPTOR GABAA:

CONTRIBUIÇÕES PARA O ESTUDO DO MECANISMO DE AÇÃO ANTICONVULSIVANTE

Luana Camilla Cordeiro Braz1; Gersia Gonçalves de Melo

2; Vinicius Costa Amador

2; Liliane Karine Cordeiro

Braz3; Rafael Trindade Maia

4; Franklin Ferreira de Farias Nóbrega

1.


(1)Universidade Federal de Campina Grande - UFCG, CDSA, UAEBB.;

(2)Universidade Federal Rural de

Pernambuco - UFRPE, PPGAMGP.; (3)

Universidade Federal de Campina Grande - UFCG, CCBS.; (4)

Universidade

Federal de Campina Grande - UFCG, CDSA, UAEDUC.

RESUMO O monoterpeno 4-terpineol (4TRP) demonstra ação anticonvulsivante, sendo um potencial biofármaco

antiepiléptico, alternativo aos tratamentos disponíveis, ineficazes em 30% dos casos. Vários anticonvulsivantes

atuam por meio de receptores do ácido γ-aminobutírico (GABA), principal neurotransmissor inibitório. Há

indicativo experimental da interação do 4TRP com essa via. Este trabalho visa contribuir no estudo da

farmacodinâmica do 4TRP por meio do docking in silico com o modelo tridimensional (3D) do receptor GABAAR

α1β2γ2 obtido por Bergmann e colaboradores (2013). As estruturas 3D dos enantiômeros do 4TRP foram obtidas na

ZINC Database. O docking semirrígido foi realizado pelo programa AutoDock 4.2 por meio do algoritmo genético

lamarckiano com os seguintes parâmetros: 10000 réplicas, população de 150 indivíduos, 2500000 avaliações de

energia, 27000 gerações, taxas de mutação e cruzamento de 0,02 e 0,8, respectivamente. Os complexos gerados

foram ranqueados em ordem crescente de energia, selecionados os dez primeiros para cada enantiômero e

analisados no programa Visual Molecular Dynamics. O (-)4TRP exibiu a menor energia livre de ligação de -6,25

kcal/mol, já o (+)4TRP, -5,89 kcal/mol. As menores constantes de inibição (Ki) estimadas foram 26.21 uM para o

(-)4TRP e 47.81 uM para o (+)4TRP. Esses resultados sugerem uma maior atividade do (-)4TRP em relação a esse

subtipo do receptor. Os quatro melhores complexos sugerem a interação do 4TRP na porção extracelular da

subunidade γ2 com uma distância inferior a 4 Å dos aminoácidos LEU31, LEU34, LEU35, TYR38, LEU87,

ASN101, MET102, VAL103, GLY104, LYS105, maioria de natureza hidrofóbica indicando um possível sítio de

ligação, diferente daquele dos benzodiazepínicos. Isso condiz com dados experimentais já existentes. A

subunidade γ2 é expressa em cinco outros subtipos do GABAAR já identificados. Espera-se a interação do 4TRP

com outros subtipos contendo o mesmo sítio da γ2. Porém seu efeito e afinidade podem variar, a exemplo da

metaqualona que atua nos GABAARs podendo ser agonista, modulador ou antagonista dependendo do subtipo. A

sugestão in silico da interação do 4TRP com subtipos do GABAAR, em conjunto com a evidência experimental da

relação do fármaco com o sistema GABAérgico e da sua atividade anticonvulsivante indicam que um possível

mecanismo de ação do 4TRP no Sistema Nervoso é relacionado à subunidade γ2 dos GABAARs, norteando futuros

ensaios experimentais.

383


ESTROGEN RECEPTOR α GENE (ESRα) PVUII AND XBAL POLYMORPHISMS IN SYSTEMIC

LUPUS ERYTHEMATOSUS: A META-ANALYSIS.

Suelen Cristina de Lima1; Sergio Crovella

2; Jaqueline de Azevedo Silva


2.


(1)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami (LIKA), Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco,

Brazil.; (2)

Department of Genetics, Federal University of Pernambuco, Recife, Pernambuco, Brazil.

RESUMO Systemic lupus erythematosus (SLE) is a multifactorial autoimmune disease that predominantly affects women of

reproductive age and the ratio of the women for men affected is 9:1. The fact of SLE incidence predominate in

women raises the question of hormone involvement in the onset of disease process. Estrogen is a steroid hormone

widely studied in association with autoimmune diseases and is presented as a mediator of risk for SLE

development, being directly related to the process associated with the SLE onset, such as IFN pathway. Estrogen

Receptor Alpha (ESRα) mediates the functions of estrogen by binding to a specific cis response element located

within regulatory regions of the target gene. However, some association studies using SNPs to correlate SLE and

ESRα presents contradictory results. Therefore, the aim of our study was to evaluate association between PvuII

(T/C) rs2234693 and XbaI (A/G) rs9340799 polymorphism and SLE by a meta-analysis data, due to both are

related TagSNPs widely studied. The keywords SLE, ESR1, PvuII, XbaI and polymorphism were used as

searching terms in electronic databases including PubMed and Science Direct. The search was done restricted to

the English language publications. Only studies fully published up to 2016 were included in this meta-analysis.

Two reviewers independently assessed the studies using pre-designed criteria. Data were processed with R 3.2

Metafor. Odds ratios (ORs) was performed for the allele, dominant, and recessive genetic models. A chi-square

test was applied to determine Hardy-Weinberg equilibrium (HWE). PvuII (T/C) rs2234693 and XbaI (A/G)

rs9340799 frequencies was considered in SLE patients worldwide. Statistically significant association was found

between PvuII (T/C) rs2234693 considering the allelic model, we observed association to SLE susceptibility

(OR=1,14, CI: 1,02 - 1,27; p = 0,023) when compared T versus C. Instead dominant genetic model shows that TT

genotype confers protection to SLE (OR= 0,77, CI: 0,66 - 0,91; p = 0,0019). No statistically significant association

was found between PvuII (T/C) rs2234693 recessive model or XbaI (A/G) rs9340799. The analysis also indicated

heterogeneity (τ²) of 0.01. No publication bias was detected by using estimate funnel plot assymetry. In

conclusion, our meta-analysis confirms that C allele in PvuII (T/C) rs2234693 polymorphism confers SLE

susceptibility.

APOIO Coordenação de Aperfeiçoamento de Pessoal de Nível Super (CAPES)

384


ESTUDOS IN SILICO E ANÁLISE FENÉTICA DO GENE TRYR EM ESPÉCIES DE

TRIPANOSSOMATÍDEOS BASEANDO-SE NA LEITURA DE REGIÕES CONSERVADAS

Moezio de Vasconcellos Costa Santos Filho1; Lucas Christian de Sousa Paula

2.


(1)¹Programa de Pós-graduação em Genética, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE;

(2)Programa de Pós-

graduação em Ciências Biológicas, Universidade Federal de Pernambuco - UFPE.

RESUMO A família Tripanosomatidae engloba organismos eucariotos, unicelulares e uniflagelados que pertencem à classe

Kinetoplastida, agregando-se ao filo Euglenozoa. Os principais representantes são protozoários dos gêneros

Leishmania e Trypanosoma. Essas espécies possuem importância médica e veterinária devido ao caráter zoonótico

e a ampla distribuição geográfica, ocasionando enfermidades como Doença de Chagas, Doença do Sono e diversas

formas de leishmanioses. Ambos os gêneros são definidos de acordo com parâmetros morfológicos,

caracterizando-se pela presença do cinetoplasto, uma região especializada da mitocôndria que possui moléculas

circulares de DNA. Estes parasitas possuem sistemas peculiares relacionados à defesa contra o estresse oxidadivo,

sendo o gene TRYR (trypanothione reductase) o principal responsável por essa resistência. Este estudo teve como

objetivo a analise das variações do gene TRYR em tripanossomatídeos através de alinhamentos de sequencias

nucleotídicas e de aminoácidos, seguidos pela busca de domínios conservados e estudos de proximidade evolutiva

em 8 espécies que englobaram os gêneros Leishmania (L. infantum, L. donovani, L. amazonenses, L. major, L.

mexicana, L. braziliensis e L. guyanensis) e Trypanosoma (Trypanosoma cruzi). As sequencias nucleotídicas

foram identificadas e retiradas da base de dados do NCBI através no alinhamento BLAST. Para a obtenção das

sequencias de aminoácidos foi utilizado o programa ORF Finder, seguido da identificação dos domínios

conservados através da ferramenta Batch CD-Search. Os fenogramas foram construídos no programa MEGA

7.0.18 seguindo os métodos associados de UPGMA e Neighbor-Joining. As sequencias das espécies selecionadas

apresentaram alguns domínios conservados (Pyr_redox_dim e Pyr_redox), incluindo um multidomínio

(Trypano_reduc). Nos ensaios de análise estrutural e modelagem proteica utilizando os programas Swiss-Model e

Jpred 4, foi observado que a trypanothione reductase possui uma estrurura complexa com duas cadeias, incluindo

estruturas em α-hélice e folha β. Corroborando com os dados de similaridade e seguindo o parâmetro estatístico de

Bootstrap com 1000 replicações, os fenogramas demonstraram uma maior distância de L. braziliensis e L.

guyanensis em relação às outras espécies de Leishmania. No fenograma por UPGMA o Trypanosoma cruzi

apresentou-se como outgroup em relação aos outros organismos, demonstrando a distância entre os gêneros.

385


EVALUATION OF ANIMAL MODELS FOR STUDYING MUTATIONS IN DOPAMINE RECEPTORS:

A COMPARATIVE GENOMICS APPROACH

Camilo Simanca Pumarejo1; Samara Yasmin Silva Rios

1; Vanessa Rodrigues Paixão Cortês

1.



RESUMO Dopamine receptors (DRD) are G protein-coupled receptors divided into two classes: D1 (DRD1, DRD5) and D2

(DRD2, DRD3, DRD4). Class D1 stimulates adenylyl cyclase enzyme activity and class D2 inhibit it. Several

studies have linked mutations in dopamine receptors to some psychiatric disorders like schizophrenia, autism and

attention deficit-hyperactivity disorder. Comparative genomics studies evaluating the best model organism for

psychiatric disorders from an evolutionary perspective are scarce. Hence, the objective of this study is to compare

the number of dopamine receptors homologues and protein sequences in some model organisms used in behavioral

studies, to determine the most appropriate from an evolutionary standpoint. In this work, the number of

homologues genes for dopamine receptors and protein sequences were obtained from Ensembl database for human

and ten model organisms: guinea pig (Cavia porcellus), rhesus monkey (Macaca mulatta), marmoset (Callithrix

jacchus), mouse (Mus musculus), rat (Rattus norvegicus), rabbit (Oryctolagus cuniculus), dog (Canis lupus

familiaris), pig (Sus scrofa), chicken (Gallus gallus) and zebrafish (Danio rerio). Protein sequence alignment was

performed in Guidance2 server. The best substitution model and phylogeny were determined using MEGA7

software. Treegraph2 editor was used for cladogram edition. The number of homologous genes in class D1 varied

from 10 (dog) to 84 (zebrafish) and in class D2 from 13 (marmoset) to 31 (zebrafish). It was detected a tandem

duplication of DRD1 in pig and the absence of DRD4 in dog and rabbit. Protein sequence alignment analysis

recovered the evolutionary relationships of vertebrate phylogeny, with chicken and zebrafish representing the most

divergent clades. Cladogram analysis showed that mouse dopamine receptors are differentiated from those of

primates. Only for DRD5 there was some similarity between Primates and Rodentia orders. Nonetheless, the

number of homologous genes for class D1 were different between human and rodents (14, 23 and 24 for human,

mouse and rat respectively). From a genetic point of view, primates (rhesus monkey and marmoset) were the best

models. The mouse, who has been the most frequent animal model used in psychiatric disease studies, didn't

represent a good model. Nonetheless, its suitability as a model organism is undebatable thanks to its low

maintenance cost, short generation time, small size and relatively large offspring.

386


GENETIC VARIABILITY OF ZIKA VIRUS (ZIKV) 3ÚNTRANSLATED REGION IN SAMPLES

FOUND IN NORTH-EAST BRAZIL

Eclecione Soares da Silva1; Rafaela Raillem Notine Batista

2; Ana Pavla Almeida Diniz Gurgel

3.


(1)Ione Soares da Silva; Edson da Silva ;

(2)Claudenice Lopes Notine Rocha; Antônio Batista da Rocha ;

(3)Maria de

Fátima Diniz; Junior Gurgel

RESUMO Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne flavivirus. In Northeast Brazil, several cases of microcephaly in new born

possible associated with Zika virus infection (ZIKV) were recently reported. Some studies have focused on

structural as well as nonstructural proteins. However, less attention has been given to 3´ untranslated region

(5ÚTR) of ZIKV circulating of North-East Brazil. Aim: The aim of this study was to analyze genetic variation of

3ÚTR region in samples found in North-East Brazil.. Methodology: Viral genome sequences of ZIKV from

Paraiba, Pernambuco, Ceará, Bahia and Rio Grande do Norte of North-East Brazil were obtained from GeneBank.

Sequence comparisons between prototype and isolated samples were performed by using Basic Local Alignment

Search Tool (BLAST) and multiple alignments were carried out by using the CLUSTALW (Mega 7.0) program.

Results: Seventeen single nucleotide changes were observed in 3ÚTR of ZIKV, in which 15/17 were nucleotide

substitutions, 1/17 a deletion and 1/17 an insertion of nucleotide. In addition, we did not observed significant

nucleotide changes between samples from North-East Brazil when compared with South-East from Brazil.

Conclusion: Other studies should be performed to clarify whether these nucleotide changes are associated with

diseases caused by ZIKV.

387


GENETIC VARIABILITY OF ZIKA VIRUS (ZIKV) 5ÚNTRANSLATED REGION IN SAMPLES

FOUND IN NORTH-EAST BRAZIL

Rafaela Raillem Notine Batista1; Eclecione Soares da Silva

2; Ana Pavla Almeida Diniz Gurgel

3.


(1)Claudenice Lopes Notine Rocha; Antônio Batista da Rocha ;

(2)Ione Soares da Silva; Edson da Silva;

(3)Maria de

Fátima Diniz; Junior Gurgel

RESUMO Zika virus (ZIKV) is a mosquito-borne flavivirus. Recently, it was reported in Brazil an association between ZIKV

infection and microcephaly in new born. The complete genome sequence and phylogenetic analysis has shown the

presence of two major substitutions found in nonstructural proteins NS1 and NS4B, suggesting a process of

eventual adaptation of the virus to a new environment. However, less attention has been given to 5´ untranslated

region (5ÚTR) of ZIKV circulating of North-East Brazil. Aim: The aims of this study were to: i) To analyze

genetic variation of 5ÚTR region in samples found in North-East Brazil; ii) To performed a in silico study

evaluating whether these amino acid substitutions are embedded in the binding sites of transcriptional factors

involved in neural developmental process. Methodology: Viral genome sequences of ZIKV found in North-East

Brazil were obtained from GeneBank. Sequence comparisons between prototype and isolated samples were

performed by using Basic Local Alignment Search Tool (BLAST) and multiple alignments were carried out by

using the CLUSTALW (Mega 7.0) program. The PROMO server was used to search within the 5ÚTR for

potential binding sites for cellular viral transcriptional factors. Results: Six single nucleotide changes were

observed in 5ÚTR of ZIKV, in which 5/6 was substitutions and 1/6 was an insertion. In addition, these genetic

variations are embedded in the binding sites of transcriptional factors, such as: AP-1, OCT, Pax-2, JunD, c-Fos, c-

Jun, USF-2b, p300 and POU2F1. Conclusion: Genetic variation in 5ÚTR may be an impact in the pathogenicity

of the ZIKV found in North-East Brazil. Further in vitro studies are necessary to clarify the involvement of the

5ÚTR in diseases caused by ZIKV.

388


IDENTIFICAÇÃO IN SILICO DA EXPRESSÃO DE TRANSCRITOS DE CANA-DE-AÇÚCAR SOB

ESTRESSE DE SECA NAS VIAS DE SINALIZAÇÕES POR FITORMÔNIOS

Amanda Thamires Batista do Nascimento1; Manassés Daniel da Silva


2;

Samara Alves da Silva3; Éderson Akio Kido

4.


(1)Programa de Pós-graduação em Genética - CB - UFPE ;

(2)Pós-doutorado - CB - UFPE;

(3)Aluna de Graduação

em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (4)

Professor Associado do Departamento de Genética - CB - UFPE

RESUMO A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma importante gramínea, sendo utilizada como fonte de energia renovável

a partir da produção do etanol, mas seu cultivo sofre perdas significativas em decorrência de estresses ambientais,

como a seca. Processos de tolerância da planta a estresses são influenciados por genes regulados por fitormônios,

importantes na fisiologia vegetal. Este trabalho objetivou analisar a expressão das vias de sinalização por

fitormônios, a partir de bibliotecas HT-SuperSAGE [controle negativo vs tratamento (supressão de rega 24 h)] de

bulk de quatro acessos tolerantes e quatro sensíveis ao estresse. As unitags (tags diferentes de 26 pb) foram

alinhadas (BlastN; e-value < e-10

) com transcritos de cana-de-açúcar previamente alinhados a proteínas de sorgo

das vias de sinalização de fitormônios do KEGG (Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes). Foi possível

mapear nas vias de sinalização em estudo (de oito fitormônios diferentes), 63 transcritos de cana-de-açúcar

ancorando 137 unitags. Destes, 14 foram induzidos, sete reprimidos e 90 n.s. (Audic-Claverie test, p < 0.05) no

bulk de acessos tolerantes. Já nos acessos sensíveis, 13 transcritos foram induzidos, nove reprimidos e 75 n.s.

Dentre as vias analisadas in silico, a do ácido abscísico (ABA), mensageiro endógeno na regulação da água no

interior da planta, a família PYR / PYL teve regulação reprimida no bulk de acessos tolerantes e induzida nos

sensíveis, enquanto a fosfatase 2C (PP2C), fator de ligação ao ABA (ABF) e serina / treonina-quinase SRK2

(SnRK2) foram reprimidos e induzidos no bulk de acessos tolerantes e sensíveis. A validação por RTqPCR

mostrou a expressão de PP2C reprimida nos acessos tolerantes e n.s. nos sensíveis, ao passo que SnRK2 foi n.s.

nos tolerantes e induzido nos sensíveis. Uma vez que a expressão de PP2C foi reprimida nos acessos tolerantes,

pode-se sugerir que em cana-de-açúcar sob estresse de seca, tal gene pode atuar, por exemplo, no controle do

fechamento de estômatos, garantindo menor troca de água com o meio ambiente, já que a etapa crucial da via na

sinalização ABA-dependente, é a inibição de PP2C pela ligação direta de ABA a família PYR / PYL de

receptores, acarretando na ativação da sinalização do fitormônio. Esses dados devem contribuir para um melhor

entendimento do processo de tolerância ao estresse, com possibilidades de desenvolvimento de marcador funcional

para uso em programas de melhoramento.

APOIO CNPq e CAPES

389


IDENTIFICAÇÃO IN SILICO DAS SEQUÊNCIAS CODIFICANTES DOS GENES DAS PROTEÍNAS

CENTROMÉRICAS CENH3 E CENP-C DE STYLOSANTHES GUIANENSIS (AUBL.) SW.

André Marques1; Igor Albuquerque

1; Iara Costa

1.


(1)Laboratório de Recursos Genéticos, Campus Arapiraca, Universidade Federal de Alagoas

RESUMO Stylosanthes Sw. (Fabaceae) é um gênero de plantas leguminosas que possuem alta importância na recuperação de

solos degradados, adubação verde e potencial forrageiro. O gênero tem no Brasil o seu centro de origem e

diversidade com distribuição principalmente no Cerrado brasileiro. A caracterização de genes centroméricos de

rápida evolução é de grande importância para estudos de estrutura e função cromossômica e caracterização de

espécies originadas de cruzamentos interespecíficos. É sabido que várias espécies de Stylosanthes são poliploides

originados de hibridação (alopoliploides) e, assim, a identificação e caracterização desses genes centroméricos

vem possibilitar um melhor entendimento sobre a origem e evolução dos alopoliploides do gênero. O objetivo

desse trabalho foi identificar in silico os genes das proteínas centroméricas CENH3 e CENP-C de Stylosanthes

guianensis e desenhar sequências de primers para a obtenção das sequências desses genes em outras espécies do

gênero. Para a obtenção das sequências codificantes da CENH3 e CENP-C de S. guianensis foram utilizados os

reads obtidos do sequenciamento Illumina HiSeq 2000 do transcriptoma de S. guianensis disponível no GenBank

(número de acesso: SRR1823061). As sequências completas do DNA codificante da CENH3 de Arachis

duranensis (XM_016082228.1) e da CENP-C de Medicago truncatula (GenBank: AY693784.1) foram utilizadas

como referências para o mapeamento dos reads do transcriptoma de S. guianensis. Dessa forma, foram obtidas as

sequências completas do DNA codificante da CENH3 e da CENP-C de S. guianensis. As sequências completas da

CENH3 e da CENP-C obtidas apresentaram 462 e 2382 pb, respectivamente. A análise filogenética das duas

sequências incluindo a sequência de outras espécies vegetais confirmou a correta identificação, onde ambas foram

posicionadas junto com outras espécies da família Fabaceae. Para a posterior caracterização das sequências dos

genes da CENH3 e CENP-C em outras espécies de Stylosanthes, foram desenhados um par de primers para cada

sequência a partir de uma região conservada dos dois genes. Espera-se que a amplificação e sequenciamento

dessas regiões em outras espécies de Stylosanthes, principalmente nos alopoliploides, gere informações

importantes sobre a origem e evolução das espécies do gênero.

APOIO CNPq/FAPEAL

390


IDENTIFICAÇÃO IN SILICO DE TRANSPORTADORES DE AMINOÁCIDOS EM CANA-DE-

AÇÚCAR SUBMETIDA À DESIDRATAÇÃO

Roberta Lane de Oliveira Silva1; Manassés Daniel da Silva


1; Mireli de Santana Rêgo

1;

Ana Maria Benko Iseppon1; Ederson Akio Kido

2.



Vegetal, Recife, PE.; (2)

Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Laboratório de Genética

Molecular, Recife, PE.

RESUMO Os transportadores de aminoácidos (AATs) são responsáveis por conduzir aminoácidos (aa) através das

membranas, sendo essenciais para o crescimento e desenvolvimento vegetal. Essas proteínas respondem a

estímulos ambientais, podendo ser regulados desde os níveis de transcrição até as regulações pós transcricionais.

Até o momento, pouco se conhece acerca de sua função em Saccharum spp. Nesse sentido, objetivou-se identificar

AATs responsivos a seca em cana-de-açúcar visando selecionar candidatos para validação de expressão por PCR

em tempo real (RT-qPCR). Para tanto, 205.975 tags HT-SuperSAGE (26 pb) obtidas de quatro bibliotecas

(Tolerante Estressada - TE, Tolerante Controle - TC, Sensível Estressada - SE e Sensível Controle - SC) foram

alinhadas contra ESTs de bancos de dados públicos de cana-de-açúcar e outras gramíneas (NCBI e Gene Index).

Os potenciais AATs foram identificados após buscas pela palavra-chave "amino acid transporter". As sequências

candidatas foram anotadas e tiveram seus domínios conservados identificados com o auxílio das ferramentas

BLAST e CD-Search no NCBI. Foram observados 60 alinhamentos unitag/hit (escores 44-52) envolvendo 33

unitags. Desse total, 30 unitags foram associadas à família ATF (sendo 14 com transportadores de aa neutros

dependentes de Na+ ou acoplados ao sódio, 13 com permeases de aa e três com transportadores de prolina) e três

unitags foram relacionadas com transportadores de prolina (família APC). Após teste estatístico (Audic-Claverie,

p < 0,05), foram identificados sete unitags diferencialmente expressas (seis induzidas nos acessos tolerantes e ao

mesmo tempo reprimidas ou não significativas nos sensíveis e uma reprimida nos acessos tolerantes e não

significativas nos sensíveis) nos contrastes TE vs TC e SE vs SC, respectivamente. Foram identificadas, também,

dez sequências que apresentaram diferentes domínios (Aa_trans, AA_permease_C, Cas3_I,

Choline_transport_protein), destes, três domínios foram completos e sete incompletos na região N e/ou C-

terminal. A indução verificada nas análises in silico pode indicar um transporte de aa mais acentuado nos acessos

tolerantes, de modo diferente dos sensíveis, sugerindo um mecanismo de resposta genótipo-específico. Assim, foi

possível identificar representantes das duas superfamílias de AATs descritas em plantas na literatura,

representando alvos promissores, responsivos a esta condição de estresse, para validação via RT-qPCR.


391


IDENTIFICAÇÃO E CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DE TAUMATINAS EM VIDEIRA (VITIS

VINIFERA L.)

Marianne Firmino de Oliveira1; Jéssica Barboza da Silva

1; Roberta Lane de Oliveira Silva

1; Ana Maria Benko

Iseppon1.


(1)UFPE

RESUMO Ao longo da evolução, as plantas desenvolveram vários mecanismos de defesa, que vão desde barreiras físicas até

a ativação de proteínas relacionadas diretamente com a defesa vegetal, após o contato com patógenos. As proteínas

relacionadas com a patogênese (PRs) são reguladas por diversos fatores ambientais, como estresses abióticos,

alterações na luminosidade e fatores de desenvolvimento, desempenhando um papel importante nessas situações.

As taumatinas (Thaumatin Like Proteins, TLPs) fazem parte da família PR-5 e possuem como principais

características a atividade antifúngica e a clivagem de β-glucanases, funções estas já bem descritas na literatura.

Apesar de alguns estudos relatarem a participação das PR-5 em diferentes condições de estresse, seu mecanismo

de ação ainda é pouco conhecido. Diante disso, o objetivo foi identificar e caracterizar genes candidatos da família

PR-5 relacionados à patogenicidade em Vitis vinifera. Uma sequência PR-5 de Arabidopsis thaliana foi

selecionada no banco de dados UniProt para uso como sonda, sendo submetida contra o banco de dados do NCBI

via tBLASTn com cut-off de e-value ≥ e-10, contra V. vinifera. As sequências foram anotadas, traduzidas e

tiveram seus domínios identificados com o auxílio do ORF Finder e CD-search, respectivamente. A predição do

ponto isoelétrico (pI) e do peso molecular foi realizada utilizando o JVirGel 2.0 e a localização subcelular através

do Cell-PLoc 2.0. Foram localizadas 19 sequências candidatas do gene PR-5 em V. vinifera. As proteínas

identificadas apresentaram variação de 225 a 349 aa, com os melhores quadros de leitura +1, +2 e +3. Foram

identificados, também, 16 domínios completos, sendo nove Thaumatin e sete TLP-PA. As PR-5 candidatas

possuem pI entre 3,96 e 8,49, peso molecular variando entre 21,24 a 32,68 kDa e localização subcelular no

citoplasma. Três sequências não apresentaram domínio e estavam direcionadas para o vacúolo. Até o momento,

essas proteínas tinham sido localizadas apenas no apoplasto e vacúolo, sendo este o primeiro relato de sua

localização no citoplasma. Verificou-se que as PR-5 são proteínas de peso molecular de ? 24 kDa, com

características tanto ácidas quanto básicas, corroborando ao descrito na literatura. Os resultados encontrados neste

estudo disponibilizam informações importantes e inéditas sobre a caracterização de taumatinas em V. vinifera.

APOIO Apoio: CNPq; CAPES; Facepe.

392


IDENTIFICAÇÃO E CLASSIFICAÇÃO IN SÍLICO DE ABC TRANSPORTER DE ZEA MAYS [L.]

Jéssica Figueredo Campos de Jesus1; Gisela Formiga Queiroz Nóbrega

2; Rodrigo César Gonçalves de Oliveira

3;

Ana Maria Benko Iseppon3.


(1)Programa de Pós Graduação em Ciências Biológicas, Centro de Biociências, Universidade Federal de

Pernambuco (UFPE), Recife, PE, Brasil; (2)

Programa de Pós Graduação em Ciências Florestais, Centro de Saúde e

Tecnologia Rural, Universidade Federal de Campina Grande (UFCG), Patos, PB, Brasil.; (3)

Centro de Biociências,

Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal, Departamento de Genética, UFPE, Recife, PE, Brasil.

RESUMO As ABC transporter são proteínas transportadoras da membrana pertencentes à superfamília ATP- Binding

Cassette (ABC). Essas proteínas estão presentes em todos os organismos e utilizam a energia do trifosfato de

adenosina (ATP) para realizar o transporte de moléculas através das membranas. Em plantas, essa família proteica

se subdivide em três tipos estruturais e oito subfamílias. O presente trabalho teve como objetivo localizar,

caracterizar e classificar sequências de ABC transporter existentes no genoma de Zea mays. Para a obtenção dessas

sequências foi realizado um Blastp no banco de dados NCBI, utilizando sequências de ABC transporter da espécie

Arabidopsis thaliana como sonda. As sequências obtidas foram selecionadas de acordo com o e-value (<1e-10

) e,

posteriormente, integridade dos domínios conservados, avaliados através do Batch CD-Search, sendo utilizadas

apenas as sequências que apresentaram domínio completo. O alinhamento das sequências foi feito com a

ferramenta Clustal W, utilizando como referência 34 sequências bem caracterizadas de Oryza sativa Japonica.

Posteriormente foi realizada a construção do fenograma pelo método Neighbor-joining no software Mega 7. A

prospecção realizada permitiu a localização de 45 sequências existentes no genoma de Z. mays, entre as quais 24

não apresentaram classificação entre as subfamílias de ABC transporter. A maioria das sequências encontra-se

classificada no terceiro tipo estrutural, com ausência de transmembrane domain (TMD) e presença de dois

nucleotide binding domain (NDB), e apenas três em full-transporter. A análise fenética permitiu classificar as

sequências em três subfamílias: B (3), F (7) e G(14) e revelou grande dissimilaridade entre as subfamílias de ABC

transporter. O presente trabalho demonstrou que mais da metade das sequências de aminoácidos de Z. mays

(53,3%) ainda não foram classificadas e caracterizadas adequadamente, reforçando a necessidade de classificação

das sequências presentes no NCBI para a otimização de estudos posteriores.


393


IDENTIFICAÇÃO E CLASSIFICAÇÃO DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO EM ARACHIS SPP. E SUA

MODULAÇÃO SOB ESTRESSE HÍDRICO

Danubia Rita de Sá Leal1; Luís Carlos Belarmino

1; Ana Maria Benko Issepon

1; Carolina Vianna Morgante

1.


(1)Manoel Fernando Leal e Rita Eloina de Sá Leal

RESUMO Fatores de transcrição (FT) são proteínas que se ligam a sequências específicas na região promotora e possuem a

capacidade de regular a expressão gênica. Conforme o tipo e número de domínio(s) presentes, podem ser

classificados em famílias, sendo algumas exclusivas de plantas. FT desempenham papel fundamental no

desenvolvimento vegetal, aclimatação e adaptação a condições ambientais desfavoráveis. O objetivo deste estudo

foi identificar e classificar FT, por meio de análises in silico, em Arachis e determinar aqueles putativamente

responsivos à seca. Foram utilizadas sequências de quatro espécies obtidas a partir do proteoma conceitual,

baseado no genoma sequenciado de A. duranensis e A. ipaensis, e de sequências de aminoácidos obtidas a partir de

estudos prévios de RNAseq de A. hypogaea e A. stenosperma sob déficit hídrico. A identificação e classificação

destas sequências em famílias de FT foi realizada por meio do alinhamento e busca de similaridade a sequências

de domínios conservados de FT, utilizando-se o método de Modelos Ocultos de Markov. Foram identificados 75

domínios de FT, classificados em 90 famílias. Um número maior de FT foi identificado em A. ipaensis e A.

duranensis, 2.619 e 2.427, correspondendo a 6,25 e 6,61%, respectivamente, do total de proteínas, valores

próximos àqueles preditos para Arabidopsis thaliana. Para A. stenosperma e A. hypogaea foram identificados

1.322 e 1.265 FT, respectivamente. As dez famílias com maior número de representantes em Arachis foram, em

ordem decrescente: FAR1, MYB-related, HLH, AB13VP1, DBP, WRKY, HB, NAC, bZIP e ERF. A busca de

ortologia entre os FT de Arachis e os 816 FT de Arabidopsis reconhecidamente responsivos à seca, listados no

banco "Stress Responsive Transcription Factor Database" revelou 98 grupos de ortólogos em Arachis, sendo 63

comuns às quatro espécies analisadas. As cinco famílias com maior frequência entre os grupos de ortólogos

foram, em ordem decrescente: FAR1, ERF, MYB-related, HLH e NAC. O total de 5/98 ortólogos de FT tiveram

expressão diferencial evidenciada pela análise via RNASeq em A. stenosperma, A. duranensis ou A. hypogaea

submetidas ao estresse hídrico, sendo possíveis candidatos para a validação de sua expressão diferencial. Os

resultados sugerem a conservação de vias de respostas à seca reguladas por FT entre Arabidopsis e Arachis spp.

APOIO CAPES, Embrapa.

394


IDENTIFICAÇÃO E PERFIL DE EXPRESSÃO DE DEFENSINAS EM BIBLIOTECAS DE RNA-SEQ

DE CALOTROPIS PROCERA SOB SALINIDADE

Rebeca Rivas1; João Pacífico Bezerra Neto

2; Maria Reis Valois Coêlho

1; Valesca Pandolfi

2; Stephani Soares

Rodrigues dos Santos2; Mauro Guida Santos


2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco/UFPE, Departamento de Botânica, Laboratório de Fisiologia Vegetal,

Recife, PE; (2)

Universidade Federal de Pernambuco/UFPE, Departamento de Genética, Laboratório Genética e

Biotecnologia Vegetal, Recife, PE

RESUMO Os peptídeos antimicrobianos (AMPs, antimicrobial peptides) compõem o sistema de defesa das plantas contra

bactérias, vírus e fungos. Dentre os AMPs, as defensinas representam a família melhor caracterizada, com

atividade antimicrobiana contra uma gama de microrganismos. A Calotropis procera (Apocynaceae) é

amplamente conhecida pelas suas propriedades medicinais, além de ser altamente tolerante à seca e à salinidade,

destaca-se como uma espécie de grande potencial para investigação de AMPs, principalmente sob tais condições

de estresse. Esse trabalho teve por objetivo identificar, caracterizar e avaliar o perfil de expressão de defensinas no

transcriptoma de C. procera submetida a salinidade. A montagem do transcriptoma foi realizada a partir seis

bibliotecas de RNA-Seq de C. procera submetida a salinidade (NaCl 100 mM), sendo: quatro obtidas em tempo

inicial de estresse (0h-controle, 30 min, 2 h e 8 h) e duas bibliotecas de tempo tardio (45 dias de estresse e

controle). A identificação das defensinas foi realizada pelo uso do script AMP IDENTIFIER v.1.0. A presença e

integridade do domínio conservado foi realizada via CD-search/NCBI, juntamente com a análise das ligações

dissulfeto, via sotware DiANNA e análise de peptídeo sinal para todas as sequências. O alinhamento foi realizado

pelo uso do software MEGA7, sendo a expressão diferencial das defensinas [fold change (FC) >2 e < -2]

realizadas nos diferentes tratamentos. Para verificar a estrutura tridimensional do peptídeo foi utilizada a

ferramenta SWISS-MODEL. Foram detectadas oito sequências de prováveis defensinas, onde sete apresentaram o

domínio conservado (Gamma-Thionin) e seis apresentaram o peptídeo sinal, ambos característicos de defensinas.

As sete defensinas apresentaram conservação das oito cisteínas e as quatro ligações dissulfeto. Após a análise de

expressão, apenas duas defensinas (TR43893|c0_g2_i1 e TR50170|c0_g2_i1) foram presentes em todas as

bibliotecas, na qual apenas a TR50170|c0_g2_i1 foi mais expressa nos tratamentos de 2 horas (FC 3,00) e 8 horas

(FC 3,007) após o estresse. Essas duas defensinas apresentaram um padrão de três folhas beta pregueadas

antiparalelas sobrepostas por uma única α-hélice com similaridade de 74,4 e 70,21, respectivamente. Com base no

estudo foi possível identificar e caracterizar as defensinas em C. procera, além de verificar o aumento da

expressão do gene codificante para um AMP após estresse salino.

APOIO Financiamento: CAPES, CNPq.

395


IDENTIFICAÇÃO, CARACTERIZAÇÃO E MODELAGEM IN SÍLICO DE AQUAPORINAS DE

ABACAXI (ANANAS COMOSUS L. MERR)

Gisela Formiga Queiroz Nóbrega1; Jéssica Figueredo Campos de Jesus


3; Valesca

Pandolfi3; Carlos Eduardo Alves Soares


3.


(1)Programa de Pós Graduação em Ciências Florestais, Centro de Saúde e Tecnologia Rural, Universidade Federal

de Campina Grande (UFCG), Patos, PB, Brasil.; (2)

Programa de Pós Graduação em Ciências Biológicas, Centro de

Biociências, Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Recife, PE, Brasil.; (3)

Universidade Federal de

Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE; (4)

Universidade

Federal Rural do Semi-Árido (UFERSA), Departamento de Ciências Animais (DCAN), Mossoró, RN.

RESUMO As aquaporinas (AQPs) são proteínas de membrana transportadoras de água, membros da superfamília MIP

(Major Instrinsic Protein), presentes em todos os reinos. Sua estrutura é bastante conservada, existindo regiões

específicas que determinam diferenças na seletividade do poro, permitindo classificá-las em cinco subfamílias nas

plantas. O presente trabalho teve como objetivo localizar, caracterizar e avaliar a estrutura proteica de AQPs no

genoma de Ananas comosus. Por meio de tBlastn realizado no banco de dados Phytozome, utilizando como sonda

sequências de AQPs de Arabidopsis thaliana, foram obtidos possíveis homólogos de A. comosus (e-value <1e-10

).

Para caracterização destes candidatos foi avaliada a integridade do domínio conservado, via Batch CD-Search,

presença de motivos e resíduos conservados por meio do Clustal Omega e JalView, identificação dos frames de

leitura e tradução das sequências via ORF Finder, ancoragem cromossômica e estrutura gênica no Phytozome,

bem como a presença do peptídeo sinal via SignalP. Posteriormente foi realizado o alinhamento com 35

sequências de A. thaliana via ClustalW, gerando um fenograma pelo método Neighbor-joining no MEGA 6. Por

fim, foi conduzida a modelagem por homologia via Swiss-Model, com qualidade avaliada via ProSA II,

Ramachandran Plot-RAMPAGE e Jpred4. Ao final, foram identificadas 19 sequências em A. comosus, cujo

comprimento das sequências proteicas variou de 151 a 324 aminoácidos. Destas, 16 apresentaram domínio MIP

completo onde, apenas duas sequências apresentaram domínio incompleto na porção N-terminal, e uma sequência

incompleta em ambas as extremidades. Para os 25 cromossomos de A. comosus, foi observado que 10 apresentam

locus de genes codificantes para AQPs, com estruturas variando entre 2 e 5 éxons. A partir do fenograma, foi

possível observar a formação de três grupos das subfamílias PIPs, TIPs e NIPs, cada constituído por 8, 8 e 3

sequencias, respectivamente. O modelo tridimensional gerado confirmou a estrutura terciária, a formação do poro

pelos resíduos ar/R e motivos NPA, responsáveis pela seletividade das moléculas transportadas. Esses resultados

evidenciam a importância dos mecanismos de especificidade de transporte determinados pelas AQPs, os quais

estão intimamente dependentes da estrutura conservada dessas proteínas. Tais propriedades permitem que esses

genes sejam grandes candidatos para uso biotecnológico, em especial para plantas, que possuem grande

diversificação do grupo.


396


IDENTIFICATION OF CONSERVED DOMAINS IN A LECTIN MODEL

Eden Silva e Souza1; Riani Ananda Nunes Soares


1.



RESUMO Lectins comprise an important family of proteins or glycoproteins with the ability to recognize and bind

selectively and reversibly to sugars. Lectins have been isolated from plasma, skin, epithelial and intestinal mucus

of several fish species. There are few knowledge regarding the structure of the lectin isolated from Takifugo

rubripes epithelial mucus since it has not been resolved yet. Also, it was not found in the Pfam database

(http://pfam.xfam.org/) any protein family regarding this specific lectin sequence. The aim of this study was to

characterize structurally and functionally, via bioinformatics tools, a lectin found in the epithelial mucus of the fish

T. rubripes. For this, the sequence of the lectin was retrieved from the National Center for Biotechnology

Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) under the access code BAC57043, then the in silico model was

created using Modeller 9:16. The model was refined in ModRefiner and the primary sequence was submitted to

the Conserved Domain Database (CDD) at NCBI (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/Structure/cdd/wrpsb.cgi), which

searches for conserved domains. The refined model was submitted to DeepView 4:10, where the domains were

identified in the tertiary structure. CDD indicated the presence of one conserved domain. The conserved domain

found pfam01453 (1.55e-10) ranges from residue 14-80, and is found in proteins or protein complexes with

antibiotic activity, known as bacteriocins (produced by certain strains of lactic acid bacteria). CDD indicates this

domain is part of the B lectin superfamily cl24013 (1.55e-10). The residues ranging from 59-110 correspond to the

superfamily B lectin cl24013 (1.42e-06). This residues anchor a QXDXNXVXY motif, which is involved in the

recognition of mannose alpha-D type. It can be concluded that, according to CCD, there is one conserved domain

involved in mannose recognition. This domain is usually found in plants and bacteria; however, it was detected in

the T. rubripes lectin sequence.

397


IMPORTÂNCIA DA REANÁLISE DE DADOS DISPONÍVEIS DE TRANSCRITÔMICA: EXEMPLO DE

SOJA (GLYCINE MAX) SOB ESTRESSES ABIÓTICOS

José Ribamar Costa Ferreira Neto1; Manassés Daniel da Silva

1; Carolline de Jesus Pires

1; Artemisa Nazaré da

Costa Borges1; Jessica Barbara Vieira Viana



1.




RESUMO Atualmente, os chamados bancos de dados de valor agregado (BDVA) têm ganhado relevância. Esses ancoram

dados processados de arquivos primários, disponibilizando-os em versão mais acessível e informativa. Assim,

grupos de pesquisa podem comparar dados com outros e/ou minerar situações específicas não investigadas em

dados publicados. Este trabalho recai sobre a segunda alternativa. Para tanto, minerou-se informações contidas no

transcritoma de soja abordado no manuscrito "e;e;Comprehensive characterization and RNA-Seq profiling of the

HD-Zip transcription factor family in soybean during dehydration and salt stress"e;e; (PMID:25362847),

disponível na BDVA Expression Atlas (código "e;e;E-GEOD-57252"e;e;), com o intuito de analisar, em tecido

radicular, transcritos induzidos precocemente (60 min de tratamento) para os estresses de desidratação e alta

salinidade (NaCl, 100 mM), evidenciando diferenças transcricionais entre ambas situações. Na presente análise,

considerou-se transcritos como induzidos somente aqueles que obedecessem aos seguintes critérios: Adjusted p-

value cutoff ≤ 0.05 e Log2-fold change cutoff ≥ 2. Desta forma, foram minerados 84 transcritos induzidos para a

resposta à desidratação e 13 para salinidade. Adotou-se a estratégia de "e;e;Gene Set/Pathway Enrichment

Analysis"e;e; (Fisher-exact, FDR < 0,01) para alçar significado biológico ao conjunto de transcritos identificados.

Assim, constatou-se que as funções moleculares (GO0045490 e GO0030599) mais enriquecidas para a resposta

precoce à desidratação radicular estão associadas ao catabolismo de pectinas. Patentes (US 20160010108 A1 e

WO 2013122473 A1) explorando a ação desses compostos perante condições de seca reforçam a importância. Para

salinidade, as funções moleculares mais enriquecidas (GO0000156 e GO0033993) estão associadas genericamente

a fosfatases. No que tange às duas vias metabólicas mais enriquecidas para cada estresse, os dados indicam que a

soja induz precocemente, para ambas, genes associados à síntese do hormônio jasmonato. A segunda via mais

enriquecida diferiu entre os ensaios: (i) sinalização por ABA, para desidratação e (ii) sinalização por ácido

salicílico, para salinidade. Com o exposto, observa-se que, embora os dois estresses analisados causem estresse

osmótico na planta, a resposta precoce da soja varia parcialmente conforme o estresse. Os dados ressaltam,

adicionalmente, a importância de sinalização hormonal em soja submetida às condições em estudo.

APOIO PNPD-CAPES; Rede Intersis

398


IN SILICO EVOLUTIONARY ANALYSIS OF THE DOPAMINE TRANSPORTER SLC6A3 GENE:

IMPLICATIONS FOR NEURODEVELOPMENTAL DISEASES GENETIC ANIMAL MODELS

Samara Yasmim Silva Rios1; Camilo Simanca

1; Vanessa Rodrigues Paixão Côrtes

1.



RESUMO The SLC6A3, a dopamine transporter protein encoding gene, has been pointed as an important candidate gene for

neurodevelopmental disorders. Attention-deficit hyperactivity disorder, schizophrenia, obsessive compulsive

disorder and tourette syndrome are among the most studied disorders. Several neurobiological studies have elected

the rat as their favorite model, preferring it over other species, including the mouse. The present study aims to

investigate the divergence and the numbers of SLC6A3 homologous genes among humans, rat and other possible

animal models using an in silico approach, as well as to suggest the most appropriate species to be used as genetic

animal model for the SLC6A3 gene. Compared the sequences and the genomes between Homo sapiens (human)

and other potential genetic models: Macaca mulatta (rhesus), Callithrix jacchus (marmoset), Mus musculus

(mouse), Rattus norvegicus (rat), Oryctolagus cuniculus (rabbit), Canis lupus familiaris (dog), Sus

scrofa (pig), Gallus gallus (chicken) e Danio rerio (zebrafish). We recovered the SLC6A3 protein sequences

and their homologous through Ensembl, using the human sequence as reference. Also, we applied the Genomicus

browser to identify genes orthologs and paralogs, using the gene symbol as search query. We used the Guidance2

web server for the MAFFT alignment. Similarity comparisons between human and candidate animals protein

sequences were carried out using the LALIGN web tool. The Maximun Likehood phylogenetic analysis was

performed using Phylogeny.fr. Human and the majority of other species have 13 paralogs, rabbit and chicken 14

and zebrafish a total of 27. There was no significant difference between human and possible animal models in

what concerns protein similarity, most showed values of similarity ??above 95%. Mouse and rat sequences

presented the similarity of 98.1% with human. The exception was observed for proteins of zebrafish similarity of

83.7%, which can be explained by its phylogenetic distance from human. Homologous phylogenetic analysis

showed clusterization of the proteins in two large groups with good support the orthologs of SLC6A3 form

independent branch, however the relationship of these orthologs was not well defined. These data suggests that the

studied mammals, except the rabbit, could be considered as suitable genetic models since they have the same

number of paralogs that humans, high protein similarity and an undefined orthologs phylogeny.

APOIO Capes

399


LOCALIZAÇÃO DE GENES NBS-LRR E ELEMENTOS TRANSPONÍVEIS DE VIGNA UNGUICULATA

NO GENOMA DE V. RADIATA

Flávia Araújo1; Bruna Piereck


1; Ana M. Benko Iseppon

1.



RESUMO Embora o feijão-caupi (V. unguiculata) apresente grande importância socioeconômica, sua produtividade ainda é

comprometida por diversos fatores ambientais, entre eles a seca. Nessa condição, a infecção por patógenos é

potencializada, sendo importante identificar sequências associadas às respostas estresse-específicas e cruzadas,

incluindo genes NBS-LRR e elementos transponíveis (TEs), tais como a superfamília CACTA que prevalece em

regiões gênicas. Diante disso, o objetivo desse estudo foi identificar a localização de NBS-LRR e CACTA

expressos em feijão-caupi no genoma de V. radiata (Vr). Para isso, foi feita a ancoragem via tBLASTx (e-90

para

NBS-LRR; e-40

para CACTA) de transcritos provenientes de genótipos contrastantes à seca [tolerante, Pingo de

Ouro (PO); sensível, Santo Inácio (SI)] no genoma de Vr, seguido da construção do mapa circular com o programa

Circos. Entre os genes NBS-LRR, a subfamília TIR apresentou o maior número de loci sintênicos (844),

representada em nove cromossomos, sendo Vr9 (356 loci) o cromossomo mais abundante. Apenas Vr3 e Vr4 não

apresentaram nenhum locus. Na subfamília não-TIR foram localizados 485 sítios sintênicos, distribuídos nos 11

cromossomos, onde Vr1 (90 loci) foi o mais representativo. Espécies como soja (319) e tomate (435) apresentaram

números menores a pesar do tamanho genômico, provavelmente devido a ancoragem completa ou parcial de

sondas no mesmo local. Os elementos CACTA foram analisados nos genótipos PO e SI, mostrando maior sintenia

entre a cultivar sensível e V. radiata, com a identificação de 278 loci, enquanto a cultivar tolerante apresentou

apenas 42 sítios de ancoragem. Os cromossomos mais representativos para SI e PO foram o 7 e 1,

respectivamente. Vr10 não apresentou nenhum locus de ancoragem. Sequências NBS-LRR apresentaram-se

preferencialmente em regiões subterminais ou intercalares dos cromossomos, enquanto os elementos CACTA

mostraram-se dispersos no genoma. Sequências de CACTA da variedade SI se encontraram mais próximos aos

clusters de sequências NBS-LRR, na maioria das vezes com o NBS-LRR imediatamente mais próximo com

distância variando entre menos de 0,1 Mpb até 1 Mpb. Estudos prévios relatam a possível influência dos TEs sobre

os NBS-LRR, por eventos de duplicação gênica ou podendo alterar sua função biológica ou estado epigenético,

devido à transposição. A identificação dessa relação é de grande importância, para elucidar os mecanismos

envolvidos na mudança ou perda de função biológica.


400


MAPEAMENTO DE UNITAGS HT-SUPERSAGE DE CANA-DE-AÇÚCAR (SACCHARUM SPP.) EM

SEQUÊNCIAS CODIFICANTES (CDS) DE SORGO (SORGHUM BICOLOR (L.) MOENCH) E

IDENTIFICAÇÃO DE GRUPOS DE LIGAÇÃO.

Manassés Daniel da Silva1; José Ribamar Costa Ferreira Neto

2; Kássia Regina da Silva Carneiro

3; Rahisa

Helena da Silva3; Éderson Akio Kido

4.


(1)Programa de Pós-graduação em Genética - CB - UFPE;

(2)Pós-doutorado - CB - UFPE;

(3)Aluna de Graduação

em Ciências Biológicas / Bach - UFPE; (4)

Professor Associado do Departamento de Genética - CB - UFPE

RESUMO A cana-de-açúcar (Saccharum spp.) é uma cultura amplamente cultivada em países tropicais e subtropicais. O

déficit hídrico causa danos significativos à sua produção. Apesar da importância econômica da cana-de-açúcar, e

das novas plataformas de sequenciamento de alta performance, seu genoma ainda não está completamente

sequenciado, resultando em demandas não resolvidas de estudos em genômica estrutural para a espécie. O objetivo

deste trabalho foi identificar possíveis grupos de ligação de genes responsivos à seca em genoma de sorgo

(Sorghum bicolor (L.) Moench), diplóide mais próximo da cana-de-açúcar com genoma disponível, através do

mapeamento in silico de transcritos HT-SuperSAGE de cana-de-açúcar, para auxiliar futuros ensaios de genômica

estrutural. Para tanto, 205.975 unitags válidas de HT-SuperSAGE (26 pb) foram alinhadas via BLASTn (com no

máximo um mismatch) contra sequências codificantes (CDS) previstas no genoma de sorgo do banco Phytozome

(http://phytozome.jgi.doe.gov/). Foram encontrados, a partir dos alinhamentos unitag-CDS, 12.585 transcritos em

12.319 loci gênicos distribuídos nos dez cromossomos de sorgo, resultando em uma cobertura de 34% do total de

36.338 loci previstos para este genoma. Após teste estatístico (Audic-Claverie, p < 0,05), 2.076 loci apresentaram

unitags induzidas e 1.656 apresentaram unitags reprimidas observadas no contraste dos acessos tolerantes (bulk de

quatro acessos tolerantes sob condições de supressão de rega por 24 h versus respectivo controle negativo). De

mesma forma, 2.156 loci apresentaram unitags induzidas e 2.130, unitags reprimidas, observadas no contraste dos

acessos sensíveis (bulk de quatro acessos sensíveis sob estresse versus respectivo controle). Foram identificados,

ainda, 899 loci que apresentaram apenas unitags induzidas no contraste dos acessos tolerantes e 569 loci que

apresentaram exclusivamente unitags reprimidas nesse contraste. Todas as unitags se distribuíram nos dez grandes

blocos de ligação gênica. O cromossomo 1 foi o bloco de ligação mais saturado de loci com unitags, apresentando

46% a mais de loci com unitags que o maior cromossomo do genoma de sorgo, cromossomo 2, e 29% de loci com

unitags a mais, quando comparado com o cromossomo 3, de tamanho semelhante. Essas informações obtidas no

genoma de sorgo podem ser utilizadas em ensaios futuros de localização in situ (FISH), mapeamento genômico e

clonagem de genes relacionados à seca na cana-de-açúcar e gramíneas relacionadas.

APOIO CAPES, FINEP, CNPq

401


MAPEAMENTO DE MICROSSATÉLITES (SSR) EM SEQUÊNCIAS GENÔMICAS RELACIONADAS

À GENES DE FATOR DE TRANSCRIÇÃO EM PINHÃO MANSO (JATROPHA CURCAS L.)

George André de Lima Cabral1; Marislane Carvalho Paz de Souza

2; Jorge Luís Bandeira da Silva Filho

3; Nilton

Rodrigues de Araújo Júnior4; Ederson Akio Kido

5.


(1)Doutorando - Rede Nordeste de Biotecnologia - Renorbio. [email protected];

(2)Doutoranda - Rede

Nordeste de Biotecnologia - Renorbio. [email protected]; (3)

Aluno de Graduação em Bacharelado em

Ciências Biológicas. [email protected]; (4)

Aluno de Graduação em Bacharelado em Ciências Biológicas.

[email protected]; (5)

Profº. UFPE. Departamento de Genética - CCB - UFPE - Laboratório de Genética

Molecular. [email protected]

RESUMO Marcadores microssatélites (SSR) são utilizados de forma crescente em programas de melhoramento vegetal,

devido à hipervariabilidade, abundância nos genomas e natureza codominante. No presente estudo, motivos SSR

foram identificados em sequências genômicas de Jatropha curcas relacionadas a promotores de genes de fator de

transcrição (FT), elementos fundamentais na regulação da expressão dos genes. Foram anotadas 335 ESTs de J.

curcas como sendo prováveis FTs, a partir da similaridade (BlastX, e-value < e-10

) com proteínas curadas da base

de dados UniProtKB/Swiss-Prot. Sequências genômicas de Jatropha curcas foram alinhadas contra as ESTs via

BlastN (e-value < e-20

) e posteriormente anotadas (BlastX, e-value < e-10

) pelo banco de sequências proteicas de

referência do NCBI. Foram localizados 128 genes FT. A identificação do loco gênico, sequência nucleotídica

completa e início da região codificadora (CDS) dos genes foi obtida através do painel Graphical Sequence Viewer

do NCBI. A partir do sítio inicial de transcrição (TSS) de cada gene, foi delimitado 1500 pb no sentido 5'UTR.

Motivos variáveis de SSR foram pesquisados, nas sequências genômicas relacionadas aos genes FT e suas

respectivas regiões promotoras, através da ferramenta TRA (Tandem Repeats Analyzer 1.5). Nos promotores

foram encontrados 42 motivos microssatélites em 35 promotores. Foram identificados 25 motivos diméricos, 8

triméricos, 2 tetraméricos e 6 decaméricos nos promotores. SSR diméricos variaram de 9 a 20 repetições, enquanto

os motivos triméricos de 7 a 11 repetições, e os tetraméricos variaram de 5 a 8 repetições. Os SSR decaméricos

foram compostos por duas repetições. Foi detectado um SSR composto no promotor do gene ABF4. Nas

sequências genômicas relacionadas aos genes foram identificados 81 SSR em 44 sequências. Foram encontrados

52 motivos diméricos, 11 triméricos, 4 motivos tetraméricos, 4 hexaméricos e 8 motivos decaméricos. Os SSR

diméricos variaram de 9 a 23 repetições, enquanto os motivos triméricos de 7 a 10. Já os SSR hexaméricos foram

compostos por 4 e 5 repetições. Os SSR tetraméricos foram detectados com 5 repetições e os decaméricos com

duas repetições. Foram identificados dois SSR compostos nos genes GATAD7 e GTF2E1. Estudos posteriores

permitirão verificar a presença de polimorfismos em acessos de J. curcas na sequências relacionadas aos genes FT

que possam interferir na regulação da expressão, assim como nas sequências associadas à conformação de suas

proteínas.

APOIO Capes, Propesq-UFPE.

402


MAPEAMENTO E CARACTERIZAÇÃO IN SILICO DE EPÍTOPOS DE NS1 DO VIRUS ZIKA

Marjorie Caroline Liberato Cavalcanti Freire1; Roberto Dias Lins

1.


(1)Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães - Fundação Oswaldo Cruz (FIOCRUZ/ PE)

RESUMO O vírus Zika (ZIKV) pertence a família Flaviviridae, cujo genoma compreende uma única ORF (Open Region

Frame) que codifica proteinas de envelope (E), de membrana (prM) e sete proteínas não estruturais (NS). O

recente surto de ZIKV no Brasil foi considerado uma emergência de saúde pública de referência internacional,

principalmente devido a sua relação com os casos de microcefalia em recém nascidos e também distúrbios

neurológicos. Atualmente ainda não há vacinas ou tratamentos específicos, e existe uma necessidade de

desenvolvimento de métodos de diagnóstico sorológico de baixo custo e capazes de detectar de forma inequívoca a

presença do vírus, sem ocorrência de reações cruzadas com outros flavivírus. Dessa forma, a proteína NS1 de

ZIKV surge como uma possibilidade, uma vez que já vem sendo utilizada como principal marcador antigênico de

infecções virais pelo vírus da Dengue (DENV) e apresenta cerca de 55% de identidade de sequência com DENV.

Além disso, já encontram comercialmente disponíveis anticorpos monoclonais contra NS1 de ZIKV que não

apresentam reação cruzada com NS1 de DENV. Desta forma, buscou-se identificar regiões imunogênicas em NS1

que serviriam como possíveis epítopos para o reconhecimento de anticorpos. Foram utilizadas ferramentas

computacionais como Kyte-Doolittle para avaliar a hidropatia ao longo da proteína, servidores de predição de

epítopos lineares e conformacionais (ElliPro, Epitopia, DiscoTope), bem como uma avaliação de acessibilidade de

superfície ao solvente. As regiões identificadas foram projetadas na estrutura cristalográfica de NS1 de ZIKV de

forma a mapear essas regiões tridimensionalmente. Os dados indicam que as regiões imunogênicas fazem parte de

três regiões de epítopos conformacionais. Uma análise de identidade das sequências obtidas com sequências dos

quarto sorotipos de DENV, mostrou ainda que as regiões imunogênicas na NS1 de ZIKV apresentam alta

identidade (entre 64 e 100%) com o outro flavivírus.

403


MICROSSINTENIA E MICROCOLINEARIDADE DE QTL DE MILHETO RELACIONADA À

TOLERÂNCIA À SECA EM GRAMÍNEAS

Amanda Cordeiro de Melo Souza1; Kátia Paulino de Sousa

2; Vinicius Torres Guerra

3; Elvson Wallacy da Silva

3;

Valquíria da Silva3; Manassés Daniel da Silva

4; Éderson Akio Kido

5.


(1)Doutoranda em Ciências Biológicas, Depto de Genética, UFPE;

(2)Doutoranda em Biotecnologia, Depto de

Genética, UFPE; (3)

Graduando em Ciências Biológicas, Depto de Genética, UFPE; (4)

Doutorando em Genética,

Depto de Genética, UFPE; (5)

Professor Doutor, Depto de Genética, UFPE

RESUMO As gramíneas da família Poaceae são economicamente importantes, abrindo perspectivas para estudo de genes. A

comparação entre genomas permite predizer, em relação a sintenia e a colinearidade de genes, as relações e inter-

relações entre espécies. O presente trabalho objetivou mapear in silico nos genomas de sorgo (Sorghum bicolor) e

arroz (Oryza sativa), 24 marcadores referentes a um QTL (Quatitative Trait Locus) de milheto (Pennisetum

glaucum), co-localizados em mapa genético, em mesmo grupo de ligação, e relacionados com tolerância à seca.

Para tanto, primers descritos para os marcadores, em análises BlastN contra a base de dados RefSeq RNA (NCBI;

http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) de sorgo e arroz, serviram para identificar sequências similares, as quais foram

alinhadas também por similaridade (BlastN), contra transcritos dessas espécies, da base Phytozome

(https://phytozome.jgi.doe.gov/pz/portal.html), disponibilizando a localização desses genes e confirmando as

anotações. Assim, para sorgo 48 loci foram mapeados, referentes a 21 dos 24 marcadores em estudo, em 10

cromossomos. Em três desses cromossomos (1, 4 e 10), grupos ligados de 10, 11 e 9 marcadores, respectivamente,

representaram 20 dos 21 marcadores mapeados. Em comum nos três cromossomos, somente um marcador foi

observado, enquanto quatro foram comuns aos cromossomos 4 e 10, e um comum aos cromossomos 1 e 4. Logo,

esses blocos, se complementavam, no geral, quanto ao pool de genes. De modo análogo, em arroz, foram

identificados 37 loci, relativo a 21 marcadores (em 10 cromossomos), sendo 18 deles, também mapeados em

sorgo. No arroz, três cromossomos se destacaram (2, 3 e 6), com grupos ligando oito, sete e nove marcadores,

respectivamente, representando 18 dos 21 marcadores mapeados. Em comuns, nos três cromossomos, foi

observado somente um marcador, enquanto que três foram comuns aos cromossomos 2 e 6. Estudar esses blocos

sintênicos, quanto aos possíveis polimorfismos em diferentes acessos das espécies em estudo, pode ser

interessante, visando uma futura associação de marcadores moleculares com fenótipos de tolerância à seca,

conforme se observou com milheto. A continuação deste estudo poderá culminar no desenvolvimento de

marcadores funcionais para tolerância à seca, e que sejam úteis aos programas de melhoramento destas e de outras

gramíneas de importância econômica, na seleção de acessos mais adequados para cultivo em condições de déficit

hídrico.

APOIO FACEPE/ CNPq/ CAPES/ IPA.

404


MOBILOMA DE VESPAS PARASITOIDES

Alexandre Freitas da Silva1; Filipe Zimmer Dezordi

2; Elgion Lucio da Silva Loreto


1.


(1)Departamento de Entomologia, Fiocruz- Centro de Pesquisas Aggeu Magalhães, Recife;

(2)Laboratório de

Proteômica Aplicada - Universidade Federal do Pampa, Campus São Gabriel; (3)

Departamento de Bioquímica e

Biologia Molecular, Universidade Federal de Santa Maria, Santa Maria

RESUMO Elementos transponíveis (TEs) são sequências genéticas capazes de replicarem-se e moverem-se de um local

cromossômico a outro dentro de um genoma. Os TEs podem serem classificados em Tipo 1, os TEs que se

mobilizam através de intermediários de DNA e em Tipo 2, os retrotransposons, que utilizam um intermediário de

RNA. Os retrotransposons podem ainda serem subdivididos em elementos com LTRs (Long terminal repeat) ou

sem LTRs. Devido a mobilização realizada pelos TEs, eles podem gerar diversas alterações no genoma, desde

mutações até expansão genômica. Atualmente com aprimoramento das técnicas de sequenciamento e

desenvolvimento da bioinformática é possível realizar uma melhor investigação do conteúdo de TEs presentes nas

espécies e sua caracterização em larga escala. Hoje existe o RepeatExplorer, uma ferramenta para análise global

de TEs, a partir do uso dos reads do sequenciamento diretamente, permitindo a caracterização de TEs com alto

desempenho. Diante da atuação dos TEs nos genomas, O objetivo do trabalho foi realizar a caracterização

genômica e evolutiva dos TEs presentes nos genomas das vespas parasitoides, Leptopilina boulardi e outra vespa

pertencente a família Braconidae. Para a caracterização genômica, utilizou-se os reads relativos aos genomas

estudados através da ferramenta RepeatExplorer; para a caracterização evolutiva, realizou-se inicialmente a

montagem dos contigs pelo CAP3; utilizou-se a ferramenta ORF Finder; foram recuperadas sequências homólogas

no NCBI, Repbase e na literatura; utilizou-se o MAFFT para alinhamento das sequências; Prottest 3.4 e PhyML

para reconstrução das filogenias. Foi possível caracterizar 15 superfamílias de TEs em L. boulardi e 18

superfamílias em Braconidae, apresentanto um conteúdo de TEs de 5,19% e 5,86% respectivamente. O genoma da

vespa da família Braconidae apresentou um conteúdo maior de TEs do Tipo 1 e Tipo 2 sem LTRs em relação à L.

boulardi. A superfamília mais presente em Braconidae foi a Maverick, enquanto em L. boulardi a Gypsy, com

2,26% e 1,92% do genoma respectivamente. Foi possível reconstruir a história evolutiva das superfamílias

Maverick, Helitrons, Copia, Penelope Gypsy e BEL, identificando possíveis casos de transferência horizontal em

alguns elementos. Diante disso, pode-se observar a presença de de muitos TEs no genoma de ambas as vespas

estudadas, devido ao número de elementos caracterizados, além da da história evolutiva das principais

superfamílias de TEs.

405


MODELING THE TERTIARY STRUCTURE OF THE LECTIN FROM THE EPITHELIAL MUCUS OF

TAKIFUGU RUBRIPES

Eden Silva e Souza1; Riani Ananda Nunes Soares


1.



RESUMO Fish epidermal mucus relates to their vital functions, such as resistance to infectious agents, breathing, osmotic

regulation, locomotion and intraspecific communication. Lectins, which may be present in fish mucus, comprise a

family of proteins or glycoproteins with non-immune origin, characterized by the presence of one or more

domains capable to recognize and bind reversibly to carbohydrates. A lectin from Takifugo rubripes epithelial

mucus was isolated and characterized with 116 residues, and it has affinity for mannose. However, the tertiary

structure of this protein is not yet available. The purpose of this study was to predict in silico a model of the

tertiary structure of this lectin. To achieve this, the amino acid sequence was retrieved from the National Center

for Biotechnology Information (http://www.ncbi.nlm.nih.gov/) under the Protein Number BAC57043.1. The

modeling was performed using Modeller 9.16 (https://salilab.org/modeller/). The models were subjected to

evaluation in the Ramachandran plot (http://mordred.bioc.cam.ac.uk/~rapper/rampage.php) and Verify3D

(http://services.mbi.ucla.edu/ Verify_3D /). Finally, the best model obtained was subjected to ModRefiner

(http://zhanglab.ccmb.med.umich.edu/ModRefiner/) so that its structure was refined. After automatic refinement,

the model was checked again in the Ramachandran diagram. As a result, five models were obtained from Modeller

and according to Ramachandran analysis it was observed that the best model, among these five, features 102

(89.5%) residues in favorable regions, 8 (7%) residues in permitted regions, and 4 residues (3.5%) in regions

energetically unfavorable. Through Verify3D it was observed that 90.52% of the residues scored 0.2 or greater in

the 3D-1D profile, it was considered as good. Ramachandran for the refined model showed that 108 (94.7%)

residues are in favorable regions, 5 (4,4%) in allowed regions, and 1 (0.9%) residue in a region energetically

unfavorable. Verify3D results show that there was a reduction in the 3D-1D profile from 90.52%, in the model

created in Modeller, to 82.76%, for the refined model in ModRefiner, however the refined model is still

considered good because the score was greater than 80%. From the analyzes, the model created can be considered

as good, since the method used is the best to generate a reliable 3D model of a protein from its amino acid

sequence by the fact that evolutionary related proteins share a similar structure.

406


O MISTÉRIO DAS APOLIPOPROTEÍNAS EM AVES!

Caroline Santana Ribeiro1; Flora Maria de Campos Fernandes

2; Gilberto Cafezeiro Bomfim

3; Rodrigo Barban

Zucoluto4.


(1)Graduanda em Ciências Biológicas pela Universidade Federal da Bahia;

(2) Profa. Dra. Flora Maria de Campos

Fernandes, Universidade Federal da Bahia; (3)

Prof. Dr. Gilberto Bomfim, Universidade Federal da Bahia; (4)

Prof.

Dr. Rodrigo Barban Zucoloto, Universidade Federal da Bahia

RESUMO As apolipoproteínas são componentes das lipoproteínas que transportam lipídios no plasma. Todos os vertebrados

conhecidos possuem lipídios e, consequentemente, vias metabólicas relacionadas a essas moléculas. Porém, até o

momento, não identificamos na literatura ou em bancos de dados, qualquer representante da Apolipoproteína E

(Apo E) em Aves. A pergunta se instalou: que proteína faz o papel da Apo E em aves? Somente um estudo da

evolução das apolipoproteínas para responder tal questão. Para tanto, foi feito, primeiramente, um inventário com

o objetivo de delinear a situação atual das publicações de trabalhos sobre o sequenciamento de nucleotídeos e

aminoácidos referentes às apolipoproteínas (Apo) A e E em vertebrados. Foram utilizados filtros para limitar as

buscas, tanto para aminoácidos, quanto para nucleotídeos. Foi feita com a utilização de aspas e determinação dos

grupos, por exemplo: ("Apolipoprotein E" in mammals) ou ("Apolipoprotein A" in fishes). Cada sequência foi

averiguada por ano e organizada de forma cronológica, seguindo a logística: número e o ano da publicação. Dessa

forma, atribuiu-se para cada apolipoproteína, para cada respectivo grupo de vertebrados (aves, mamíferos,

anfíbios, répteis e peixes) e para cada filtro (sequência de aminoácido ou nucleotídeo) a plotagem em um

histograma representando o histórico de submissão de sequências relacionadas a essas proteínas. Não foram

computadas sequências clones, precursoras, receptoras, nem sequências de RNA mensageiro, sequências das

apolipoproteínas. Para o presente estudo, foram eleitas a Apo A e a Apo E pela proximidade permutável

característica dessas proteínas. Desde a década de 80 até os dias atuais, para aves, nada foi encontrado sobre

sequências de Apo E. Com esses dados, levamos a efeito alinhamentos pairwise e locais entre Apo E em

vertebrados (exceto aves) para a localização de possíveis motivos proteicos para investigá-los em outras

apolipoproteínas. Para estes procedimentos foram utilizados os softwares BioEdit e Mega 7, com os algoritmos

implementados em Clustal W e Muscle e penalidades baseadas na matriz de Needlman e Wunch. Até o momento

foram eleitos 71 possíveis motivos que serão confrontados com sequências de Apo A em aves, as quais já foram

coletadas em BDs.

APOIO CNPqUFBA

407


ORQUESTRAÇÃO TRANSCRICIONAL DE TLPS (THAUMATIN-LIKE PROTEINS) EM DIFERENTES

ACESSOS DE FEIJÃO-CAUPI SOB ESTRESSES BIÓTICOS E ABIÓTICOS

Carolline de Jesús Pires1; José Ribamar Costa Ferreira Neto



1.


(1)Universidade Federal de Pernambuco, Departamento de Genética, Recife, PE

RESUMO TLPs são proteínas representantes de uma grande e complexa família gênica envolvida em processos de defesa

vegetal e de resposta a estresses abióticos. Diante disso, visou-se analisar in silico a orquestração transcricional de

potenciais TLPs em diferentes acessos de feijão-caupi sob estresses bióticos e abióticos. Para tanto, sequências

candidatas a TLPs, identificadas e caracterizadas no transcriptoma do feijão-caupi, foram alinhadas contra um

banco de dados local, composto de bibliotecas HT-SuperSAGE (tags de 26 pb), abrangendo quatro ensaios

executados pelo Consórcio do Genoma do Caupi utilizando diferentes genótipos, a citar: desidratação radicular

[Pingo de Ouro (PO), tolerante e Santo Inácio (SI), sensível], alta salinidade [NaCl, 150 mM - Pitiúba (Pt),

tolerante e BR-14 Mulato (BR), sensível), infecção pelo Cowpea Severe Mosaic Virus (CPSMV; BR-14 Mulato,

resistente) e infecção pelo Potyvirus [(Cowpea Aphid-borne Mosaic Virus; CABMV), IT85F-2687, resistente].

Foram aceitos somente alinhamentos BLASTn (tag-ESTs) com score 44-52, sendo que somente um

possível mismatch foi considerado fora do CATG inicial. Somando-se todas as bibliotecas disponíveis, foram

identificadas 63 unitags, ancoradas em 17 ESTs codificadoras de TLPs. A comparação dos ensaios de virose

revelou que as unitags (três) presentes em ambos não foram moduladas da mesma forma, sugerindo especificidade

de ação dessas TLPs em relação às viroses, ou expressão acesso-específica, uma vez que acessos resistentes

distintos foram empregados nos ensaios. Para alta salinidade, foi constatado que os acessos Pt e BR empregam um

arsenal similar de TLPs durante o referido estresse. Três TLPs foram induzidas em ambos os acessos, enquanto

que três foram induzidas, especificamente, em Pt. No que tange à desidratação radicular, o acesso PO apresentou

mais que o dobro (sete) de TLPs induzidas, quando comparado a SI. A comparação desses grupos induzidos

revelou que ambos são distintos, demonstrando que isoformas diferentes são recrutadas pelos acessos analisados

sob desidratação radicular. Com o exposto, observa-se que tal grupo proteico é atuante em feijão-caupi sob

estresses bióticos e abióticos, apresentando especializações quando consideradas as diferentes condições e acessos

analisados. Isso os torna importantes candidatos para estudos de seleção assistida por marcadores moleculares e

importantes alvos biotecnológicos para emprego em programas de melhoramento da referida cultura.

APOIO Financiamento: CAPES, CNPq e FACEPE.

408


PERFIL PROTEICO DE CARAMUJOS BIOMPHALARIA GLABRATA E BIOMPHALARIA STRAMINEA

FRENTE À EXPOSIÇÃO AO SCHISTOSOMA MANSONI.

Nairomberg Cavalcanti Portela Junior1; Elverson Soares de Melo

2; Iany Raissa Silva França

2; Silvia Maria de

Souza1; Roberto Afonso da Silva

1; Fábio André Brayner dos Santos

2; Luiz Carlos Alves

2.


(1)Laboratório de Imunopatologia Keizo Asami - Universidade Federal de Pernambuco.;

(2)Centro de Pesquisas

Aggeu Magalhães - FIOCRUZ PERNAMBUCO.

RESUMO Caramujos do gênero Biomphalaria são de grande importância médica visto que algumas espécies são hospedeiras

intermediárias do Schistosoma mansoni, causador da esquistossomose. Sabe-se que existem diferenças de perfis de

resistência à infecção pelo parasita e que se dão principalmente por aspectos imunológicos do próprio molusco,

composto principalmente por proteínas que agem direta ou indiretamente contra o invasor em questão. Esse

trabalho teve como objetivo analisar o perfil proteico de duas espécies com diferentes perfis de resistência ao

parasita, em condições de pré e pós-exposição ao S. mansoni. A infecção dos caramujos foi feita a partir da

exposição de cada caramujo a 10 miracídios de S. mansoni (cepa LE). A retirada da hemolinfa foi realizada 24

horas após de infecção, seguida da extração e quantificação das proteínas totais pelo 2d Quanti Kit. Estas foram

separadas por eletroforese 2D utilizando fitas de pH imobilizado 3-10 na isoeletrofocalização, e géis de

poliacrilamida 12,5% para a SDS-PAGE. Os géis foram corados com Prata e digitalizados em ImageScanner III.

Foram comparados os géis das condições controle e exposta de cada espécie pelo software ImageMaster 2D

Platinum 7.0. O ponto isoelétrico (pI) e a massa molecular (MW) de cada spot selecionado foram determinados,

assim como suas intensidades, gerando uma lista de spots diferenciais a partir da qual foram realizadas buscas no

UniProtKB/Swiss-Prot e UniProtKB/TrEMBL com auxílio da ferramenta TagIdent (EXPASY - SIB). A

homologia foi estabelecida a partir do pI e MW (Range=2%). As buscas foram feitas a partir dos táxons

Biomphalaria, Mollusca e Eukaryota. Em relação à dosagem proteica, B. glabrata se mostrou estável nas duas

condições, enquanto foi observado aumento em B. straminea exposto ao parasita. Em B. glabrata, 21 proteínas se

mostraram diferencialmente expressas entre sadio e infectado, das quais se destacam Superoxidos dismutases, que

são imulogicamente relevantes. Já em B. straminea foram encontradas 37 proteínas diferenciais, sendo HSP70,

HSP22, Calmodulina-2 e Catepsina-D as mais importantes, estando relacionadas a estresse celular, adesão, e

atividade proteolítica respectivamente. O fato da espécie B. straminea possuir maior diversidade de proteínas

imunorrelevantes, indica uma resposta mais eficiente frente ao parasita em relação à B. glabrata, mais susceptível.

Esses dados abrem caminhos para novos estudos proteômicos que visem a criação de novos métodos de controle

da doença.

409


PREDIÇÃO COMPUTACIONAL DE GENES E NUTRACÊUTICOS MODULADORES DA RESPOSTA

DE LEISHMANIA BRAZILIENSIS À QUIMIOTERAPIA COM ANTIMONIAIS

Kaline Raiana da Silva Carvalho1; Davi Alvarenga Lima

1; Juliana de Carvalho Passos

2; Alexandra de Siqueira

Cajado Liarte3; Silvane Maria Fonseca Murta

4; Daniel Barbosa Liarte

5.


(1)Discente do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí - UFPI;

(2)Discente

do Curso de Bacharelado em Nutrição pela Universidade Federal do Piauí - UFPI; (3)

Médica Veterinária,

Residente na Área de Patologia Geral pela Universidade Federal do Piauí - UFPI; (4)

Pesquisadora do Laboratório

de Parasitologia Celular e Molecular do Centro de Pesquisas René Rachou/FIOCRUZ; (5)

Professor Adjunto I do

Departamento de Biologia da Universidade Federal do Piauí - UFPI

RESUMO Leishmanioses são um complexo de doenças relacionadas a parasitos do gênero Leishmania e negligenciadas por

autoridades públicas. Diferenças na resposta ao tratamento direcionam a busca por alternativas terapêuticas sendo

que certos nutracêuticos podem interagir com fármacos, modulando sua ação. Nosso grupo identificou

anteriormente genes associados à resistência de Leishmania a fármacos e, nesse trabalho, analisou

computacionalmente tais genes de L. braziliensis e identificou nutracêuticos potencialmente moduladores do seu

efeito. Proteínas moduladas por nutracêuticos, o transcriptoma e genes associados à resistência a fármacos em L.

braziliensis foram identificados por "data mining" e organizados em bancos de dados. A identificação de proteínas

alvo e nutracêuticos foi realizada por alinhamento local utilizando o programa BLAST (Basic Local Alignment

Sequence Tool) e anotação funcional. Os nutracêuticos identificados foram classificados de acordo com suas

propriedades bioquímicas. O transcriptoma de L. braziliensis contém 8505 transcritos, dos quais foram analisados

676 superexpressos e 536 subexpessos em uma população de L. braziliensis resistente à quimioterapia

(previamente identificados pelo nosso grupo de pesquisa). Esses 1232 transcritos possibilitaram a identificação de

42 nutracêuticos moduladores de 144 proteínas-alvo (80 proteínas superexpressas e 64 subexpressas). Dos 42

nutracêuticos identificados, 20 interagem com proteínas codificadas por genes super e subexpressos. Dos 22

nutracêuticos restantes, 14 são classificados como aminoácidos, precursores ou derivados; 3 são ácidos graxos e

fosfolipídios (curiosamente todos moduladores de proteínas subexpressas); 2 são vitaminas e 3 compostos

pertencentes a categorias bioquímicas diversas. A análise dos aminoácidos é particularmente importante, pois

metade destes modula exclusivamente a atividade de proteínas superexpressas e a outra metade as subexpressas,

facilitando o desenvolvimento de dietas específicas para potencializar a quimioterapia convencional. Não é do

nosso conhecimento qualquer estudo de interação destes nutracêuticos com fármacos leishmanicidas realizado por

outro grupo de pesquisa. A predição computacional da interação fármaco-nutrientes representa uma alternativa

promissora na pesquisa de novos tratamentos para diferentes patologias. Acreditamos que este trabalho contribui

para o desenvolvimento de novos esquemas terapêuticos que minimizam a necessidade de fármacos.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico(CNPQ) Washington University in St. Louis

Fundação Oswaldo Cruz Centro de Pesquisas René Rachou - Fiocruz Minas

410


PREDIÇÃO COMPUTACIONAL DE GENES E NUTRACÊUTICOS MODULADORES DA RESPOSTA

DE LEISHMANIA GUYANENSIS À QUIMIOTERAPIA COM ANTIMONIAIS

Davi Alvarenga Lima1; Kaline Raiana da Silva Carvalho

1; Juliana de Carvalho Passos

2; Alexandra de Siqueira

Cajado Liarte3; Silvane Maria Fonseca Murta

4; Daniel Barbosa Liarte

5.


(1)Discente do Curso de Graduação em Ciências Biológicas pela Universidade Federal do Piauí - UFPI;

(2)Discente

do Curso de Bacharelado em Nutrição pela Universidade Federal do Piauí - UFPI; (3)

3 Médica Veterinária,

Residente na Área de Patologia Geral pela Universidade Federal do Piauí - UFPI; (4)

Pesquisadora do Laboratório

de Parasitologia Celular e Molecular do Centro de Pesquisas René Rachou/FIOCRUZ; (5)

Professor Adjunto I do

Departamento de Biologia da Universidade Federal do Piauí - UFPI

RESUMO Leishmanioses são um complexo de doenças relacionadas a parasitos do gênero Leishmania e negligenciadas por

autoridades públicas. Diferenças na resposta ao tratamento direcionam a busca por alternativas terapêuticas sendo

que certos nutracêuticos podem interagir com fármacos, modulando sua ação. Nosso grupo identificou

anteriormente genes associados à resistência de Leishmania a fármacos e, nesse trabalho, analisou

computacionalmente tais genes de L. guyanensis e identificou nutracêuticos potencialmente moduladores do seu

efeito. Utilizando "data mining" e bancos de dados livres para uso acadêmico, proteínas moduladas por

nutracêuticos, o transcriptoma de L. braziliensis (organismo filogeneticamente mais próximo disponível) e genes

associados à resistência a fármacos em L. guyanensis foram organizados em bancos de dados. A identificação de

proteínas alvo e nutracêuticos foi realizada por alinhamento local utilizando o programa BLAST (Basic Local

Alignment Sequence Tool) e anotação funcional. Os nutracêuticos identificados foram classificados de acordo

com suas propriedades bioquímicas. O transcriptoma de L. braziliensis contém 8505 transcritos, dos quais 8451

têm homologia com L. guyanensis. Foram analisados 182 genes amplificados e 316 deletados em uma população

de L. guyanensis resistente à quimioterapia (previamente identificados pelo nosso grupo de pesquisa). Esses 498

genes possibilitaram a identificação de 13 nutracêuticos moduladores de 14 proteínas-alvo (6 proteínas codificadas

por genes amplificados, 6 deletadas e 2 proteínas com homologia a genes dos dois grupos). Cinco nutracêuticos

interagem com proteínas codificadas por genes amplificados e deletados. Dos 8 nutracêuticos restantes, 4 são

aminoácidos ou precursores, 2 são cofatores metabólicos, 1 hormônio e 1 nutracêutico correspondente a um

extrato vegetal. Esse último é particularmente importante, pois extraído de uma planta exótica, seu consumo pode

ser controlado a fim de avaliar seu potencial terapêutico em conjunto com a quimioterapia convencional. Não é do

nosso conhecimento qualquer estudo de interação deste nutracêutico com fármacos leishmanicidas realizado por

outro grupo de pesquisa. Os resultados alcançados nesse trabalho abrem espaço para melhoras no tratamento de

pessoas que não respondem satisfatoriamente ao tratamento com quimioterápicos através da mudança de hábitos

alimentares desses indivíduos, sendo assim uma metodologia acessória e sem efeitos colaterais para o paciente.

APOIO Conselho Nacional de Desenvolvimento Científico e Tecnológico(CNPQ) Washington University in St. Louis

Fundação Oswaldo Cruz Centro de Pesquisas René Rachou - Fiocruz Minas

411


PREDIÇÃO DE ALTERAÇÕES NA ESTRUTURA TRIDIMENSIONAL PROTEICA DO GENE FLOR

EM AEROMONAS HYDROPHILA

Joel Fonseca Nogueira1; Naedja Carla dos Santos Leite da Silva

2; Mateus Matiuzzi da Costa

3; João José de

Simoni Gouveia3; Gisele Veneroni Gouveia

3.


(1)Estudante de Graduação em Medicina Veterinária, Univasf, Petrolina-PE /Bolsista de Iniciação científica ,

FACEPE, Recife-PE; (2)

Estudante de Mestrado em Ciência Animal Univasf, Petrolina-PE; (3)

Docente, Colegiado

Acadêmico de Zootecnia, Univasf, Petrolina-PE

RESUMO As bactérias do gênero Aeromonas causam doenças em peixes, levando a perdas econômicas na piscicultura. O

tratamento de bacterioses em peixes é realizado com o florfenicol, único antimicrobiano liberado para uso na

piscicultura. A resistência de Aeromonas a drogas do grupo fenicol já foi descrita e o gene floR é apontado como

um dos responsáveis por tal resistência. Os objetivos do presente trabalho foram verificar em isolados de A.

hydrophila, a presença de polimorfismos único nucleotídeo (SNP) no gene floR, predizer a estrutura das proteínas

codificadas pelos diferentes haplótipos e avaliar os possíveis impactos de SNPs na estrutura e função proteica

utilizando-se de ferramentas de bioinformática. Inicialmente foram obtidas sequências do gene floR por

sequenciamento do tipo Sanger, a qualidade das sequências foi avaliada utilizando-se o programa Phred, onde

somente as sequências com bases com valor Phred acima de 20 foram utilizadas. As sequências foram alinhadas

no MEGA7 para identificação dos SNPs. Para predizer os possíveis impactos que esses SNPs poderiam causar na

estrutura e função das proteínas codificadas foram utilizados o SFIT e POLYPHEN2. Foi realizada a modelagem

por homologia utilizando-se o Modeller e, para isso, utilizada a sequência de uma proteína referência codificada

pelo gene floR de Aeromonas bestiarum (gi|148274163:9790-11004). A qualidade dos modelos gerados foi

avaliada pelo PROCHECK, WHATIF e VERIFY3D. O alinhamento estrutural foi realizado no TM-align entre a

proteína de referência e os haplótipos detectados para verificar possíveis alterações na estrutura proteica. Doze

sequências possuíram alta qualidade após triagem com o Phred e foram utilizadas nas análises. Foram

identificados três SNPs constituindo três haplótipos nesses isolados. Os resultados do SFIT e POLYPHEN2

mostraram que os SNPs provavelmente não levariam a alteração na estrutura e função das proteínas codificadas

pelos diferentes haplótipos. Resultado também comprovado pela modelagem e análises com TM-align, onde se

observou que os SNPs não levam a alterações significativas da estrutura da proteína e que provavelmente não

interferem na função. Portanto, as variações genéticas observadas nos isolados provavelmente não são capazes de

alterar a função da proteína codificada pelo gene floR sendo que todos os isolados que possuam esse gene tendem

a possuir resistência ao florfenicol.

APOIO FACEPE

412


PREDIÇÃO DE REDES DE INTERAÇÃO PROTEICA A PARTIR DE INFORMAÇÕES ESTRUTURAIS

DE PROTEÍNAS PREDITAS EM GENOMAS DE ESPÉCIES DE LEISHMANIA.

Crhisllane Rafaele dos Santos Vasconcelos1; Antonio Mauro Rezende

2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE);

(2)Fundação Oswaldo Cruz - Centro de Pesquisas Aggeu

Magalhães (FioCruz-PE CPqAM)

RESUMO As leishmanioses são um grupo de doenças infecciosas negligenciadas, mundialmente distribuídas, com incidência

de aproximadamente 2 milhões de novos casos registrados a cada ano. Nenhuma vacina eficaz foi desenvolvida e

os tratamentos disponíveis apresentam sérias desvantagens, desde elevada toxicidade até ineficácia causada pela

resistência desenvolvida por parte dos parasitas envolvidos. Assim, são necessárias aplicações utilizando

abordagens sistêmicas que proporcionem uma maior compreensão sobre os parasitas levando desta maneira a

descoberta de novos alvos para drogas e vacinas. Uma destas abordagens é o estudo de redes de interação proteica,

onde é possível obter informações sobre a formação dos complexos proteicos e o modo interação. Desta forma, o

objetivo principal deste trabalho é modelar redes de interação de proteínas para Leishmania

braziliensis e Leishmania infantum a partir de seus proteomas preditos com base em informação estrutural

proteica. Para isso, as sequências das proteínas dos organismos alvos foram obtidas do banco de dados TritrypDB

e suas estruturas preditas utilizando a metodologia de modelagem comparativa através dos pacotes de programas

Modeller, Modpipe, MHOLline e Phyre2. As estruturas obtidas foram então refinadas e avaliadas quanto a seus

parâmetros estereoquímicos e energéticos, obtendo assim 480 e 463 estruturas para Leishmania braziliensis e

Leishmania infatum, respectivamente, com parâmetros nos valores aceitáveis. Estas foram divididas por

localização subcelular e através do consenso entre os métodos de acoplamento de corpo rígido e acoplamento

baseado em molde, tiveram suas interações preditas. As redes resultantes se apresentaram biologicamente

consistentes com diferença significativa quando comparado às redes aleatórias. Através destas foi possível

selecionar proteínas com um elevado grau de importância para a estabilidade da rede, esta lista foi composta por

proteínas envolvidas no complexo de iniciação da tradução e da transcrição, enzimas de conjugação a ubiquitina e

proteassoma, proteínas cinases, proteínas hipotéticas, entre outras. Desta forma o presente estudo tornou

disponível além das redes de interação proteica, a estrutura predita das proteínas, sua localização subcelular e uma

lista com as proteínas mais importantes para a estabilidade da rede que poderão ser utilizadas em estudos futuros

no desenvolvimento de fármacos e vacinas.

APOIO Capes CNPQ

413


PROSPECÇÃO IN SILICO DE ELEMENTOS CIS-REGULATÓRIOS EM PROMOTORES DE GENES

DA FAMÍLIA DE FATORES DE TRANSCRIÇÃO DE ESTRESSE TÉRMICO (HEAT STRESS

TRANSCRIPTION FACTOR- HSF) EM PINHÃO MANSO (JATROPHA CURCAS L.)

George André de Lima Cabral1; Manassés Daniel da Silva

2; Nilton Rodrigues de Araújo Júnior

3; Ederson Akio

Kido4.


(1)Doutorando - Rede Nordeste de Biotecnologia - Renorbio. [email protected];

(2)Doutorando - Programa de

Pós-Graduação em Genética. [email protected]; (3)

Aluno de Graduação em Bacharelado em Ciências

Biológicas. [email protected]; (4)

Profº. UFPE. Departamento de Genética - CCB - UFPE - Laboratório de

Genética Molecular. [email protected]

RESUMO O pinhão manso (Jatropha curcas L.) é uma Euphorbiaceae cujas sementes apresentam teor de óleo entre 33-38%

e potencial para produzir acima de 1.200 kg/ha de óleo. As plantas desenvolveram ao longo da evolução uma série

de mecanismos a estresses abióticos que estão envolvidos na indução de genes responsíveis a diversos estímulos.

Nesta regulação, interações entre fatores de transcrição e elementos cis-regulatórios na região promotora dos genes

ocorrem como um conjunto de processos cruciais para a expressão gênica. Os fatores de transcrição de estresse

térmico (Hsf) são componentes finais nas vias de transdução de sinais que medeiam a ativação de genes que

respondem à tolerância ao calor. Neste trabalho, nós identificamos elementos cis-regulatórios na região promotora

de genes da família de transcrição de estresse térmico (Hsf). Sequências nucleotídicas (EST e genômicas) e

proteicas, provenientes das bases de dados públicos NCBI e UniProtKB/Swiss-Prot, foram baixadas via download,

além de sequências genômicas de J. curcas. 335 ESTs foram anotadas a partir da similaridade com proteínas

curadas (BlastX, e-value < e-10

) para fatores de transcrição (FT) e em seguida alinhadas via BlastN (e-value < e-20

)

contra sequências genômicas de J. curcas, onde foi possível anotar quatro genes da família Hsf (Hsf8, Hsf30,

HsfA2 e HsfC1). A partir do sítio inicial de transcrição (TSS) dos genes foi delimitado prováveis regiões

promotoras (1500 pb - 5'UTR). As sequências foram analisadas através da ferramenta de prospecção de elementos

cis-regulatórios PLACE. Foram identificados 82 elementos cis diferentes presentes no promotor dos quatro genes

Hsf. Deste montante, 19,7% dos elementos cis foram compartilhados entre os quatro genes, enquanto 15,9% dos

elementos cis foram exclusivos do promotor do gene HsfC1, e 9,8% do gene HsfA2. Já nos genes Hsf8 e Hsf30,

8,3% dos elementos cis identificados foram exclusivos. Os elementos cis-regulatórios mais detectados na região

promotora dos genes Hsf foram ARR1AT, ROOTMOTIFTAPOX1, GATABOX, DOFCOREZM,

CACTFTPPCA1, EBOXBNNAPA, MYCCONSENSUSAT e GT1CONSENSUS. Os elementos reguladores estão

associados com a regulação hormonal, resposta a estresse e desenvolvimento da planta. A melhor compreensão

desses elementos auxiliará no entendimento dos mecanismos que regulam a resposta para estes estímulos, além de

contribuir no desenho de promotores sintéticos mais eficientes na transcrição destes genes de interesse na

tolerância ao estresse térmico.

APOIO Capes, Propesq-UFPE.

414


PROSPECÇÃO DE DEFENSINAS IN SILICO PERTECENTES À SUPERFAMÍLIA KNOT-1 EM

DIVERSAS ESPÉCIES VEGETAIS

José Diogo Cavalcanti Ferreira1; Lívia Maria Batista Vilela


2.


(1)Docente do Instituto Federal de Pernambuco - IFPE;

(2)Laboratório de Genética e Biotecnologia Vegetal,

Departamento de Genética, UFPE, Recife, PE

RESUMO Os vegetais são afetados por fatores ambientais, entre eles os estresses bióticos, especialmente contra o ataque de

agentes patogênicos. Os mecanismos de defesa das plantas contra os patógenos são extremamente variáveis devido

à relação coevolutiva entre plantas e seus agentes danosos. Dentre os genes de defesa, destacam-se os da

superfamília knot-1, tendo como um dos representantes as defensinas que conferem resistência a fungos e

bactérias. O objetivo do presente trabalho foi identificar e caracterizar genes codificantes de defensinas

pertencentes à superfamília Knot-1, em diversas espécies vegetais, assim como inferir sobre a evolução desses

genes. Através de análises in silico utilizando como sonda uma defensina de Vigna unguiculata obtida no NCBI,

foram identificadas 36 sequências, de 18 espécies distintas distribuídas em quatro famílias, pelo BLASTp com e-

value mínimo de 1e-29

. As sequências candidatas foram anotadas e seus domínios identificados pela ferramenta

CD-Search no NCBI, selecionando-se aquelas que apresentavam o domínio knot-1 completo. Através do programa

MEGA 6, foram gerados alinhamentos múltiplos, e pelas ferramentas DIANNA 1.1 e DISULFIND, foi verificada

a presença dos oito resíduos de cisteína, com a formação de quatro pontes dissulfeto, responsáveis pela estrutura

tridimensional das defensinas knot-1. As sequências foram submetidas ao programa SignalP 4.1, confirmando a

presença de peptídeo sinal em todas, tratando-se de uma característica das defensinas, secretadas pelas células

vegetais, como confirmado pelo programa Wolf Psort, com ocorrência de 76,45% destes peptídeos no meio

extracelular. Estas sequências foram preditas em relação às propriedades físico-químicas, cujo peso molecular

variou de 8.27 a 8.88 kDa com ponto isoelétrico entre 6.07 e 9.29 para as sequências com o peptídeo sinal, exceto

no caso de um candidato de soja que teve peso molecular de 14.24 kDa. Através das análises fenética e

filogenética confirmou-se que as sequências utilizadas são inadequadas para reconstrução da ancestralidade dos

organismos analisados, visto que estas codificam proteínas altamente variáveis que atuam na adaptabilidade dos

organismos na proteção contra fitopatógenos, sofrendo inúmeras mutações a fim de manter um fenótipo adaptado.

As sequências analisadas representam potenciais candidatos, sendo necessárias análises in vivo para uso posterior

no desenvolvimento de vegetais transgênicos, assim como no desenvolvimento de novos fármacos.

APOIO CAPES, FACEPE e CNPq

415


PROSPECÇÃO E CLASSIFICAÇÃO IN SÍLICO DE AQUAPORINAS DE MANIHOT ESCULENTA

CRANTZ

Gisela Formiga Queiroz Nóbrega1; João Pacífico Bezerra Neto

2; Marx Oliveira Lima

2; Valesca Pandolfi

2; Ana

Maria Benko Iseppon2; Carlos Eduardo Alves Soares

3.



Graduação em Ciências Florestais, Patos, PB, Brasil.; (2)

Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de

Ciências Biológicas, Departamento de Genética, Recife, PE, Brasil.; (3)

Universidade Federal Rural do Semi-Árido

(UFERSA), Departamento de Ciências Animais (DCAN), Mossoró, RN, Brasil.

RESUMO As aquaporinas (AQPs), conhecidas como proteínas intrínsecas de membrana (MIP, Membrane Intrinsic Protein),

pertencem a uma superfamília conservada com função de transporte de água e outros solutos, importantes no

crescimento e desenvolvimento vegetal, bem como nos processos de tolerância a estresses abióticos. Neste

trabalho, foram identificadas e classificadas AQPs presentes no genoma da mandioca (Manihot esculenta Crantz),

uma Euphorbiaceae que apresenta boa produtividade sob seca e em solos pobres. Sequências de AQPs de

Arabidopsis thaliana foram usadas como sondas em alinhamentos (tBLASTn, e-value de 1e-10), contra o genoma

de M. esculenta (Phytozome database), visando a identificação de homólogos nesta cultura. Para os homólogos,

foi verificada a presença e integridade do domínio conservado via Batch CD-Search. Para os homólogos com

domínio completo, foi realizado um alinhamento múltiplo via programa Clustal W, visualizado e editado no

programa JalView. Com base no alinhamento foi gerado um fenograma pelo método Neighbor-Joining com

bootstrap de 1000 réplicas no pacote Mega 6. Após as análises, dentre as 42 sequências identificadas, cinco foram

descartadas, por não estarem de acordo com os critérios de qualidade estabelecidos. Para as 37 sequências

restantes foram localizados os motivos NPA e AEF, resíduos da região arginina/aromática (ar/R) e outras regiões

conservadas de AQPs. Para realização da análise fenética, além das sequências de mandioca foram utilizadas 68

sequências bem caracterizadas de cinco organismos de referência, incluindo 35 de A. thaliana, 16 de Zea mays, 11

de Gycine max, 5 de Populus trichocarpa e 1 de Lotus japonicus. Com o fenograma foi possível a classificação

das sequências em quatro das cinco subfamílias descritas para outros vegetais, distribuindo-se da seguinte forma

em M. esculenta: 13 PIPs, 12 TIPs, 8 NIPs e 4 XIPs. Nossos dados confirmam a alta conservação das APQs,

indicando ainda que a diversificação do grupo é anterior a separação das plantas vasculares, com homólogos

identificáveis desde a briófita Physcomitrella patens. Assim, a identificação de novas variantes alélicas de AQPs e

sua estrutura é importante para o entendimento dos mecanismos de transporte em plantas e outros eucariotos, com

possíveis aplicações biotecnológicas.


416


SELEÇÃO DE PRIMERS PARA VALIDAÇÃO POR PCR EM TEMPO REAL (RT-QPCR) DE

OSMOPROTETORES EM FEIJÃO CAUPI SUBMETIDOS À DESIDRATAÇÃO E SALINIDADE

Andreia Cristiny Cezarino de Araújo1; Roberta Lane de Oliveira Silva


1; Marcelo Tigre

Moura2; João Pacífico Bezerra Neto


1.



(2)UNIVERSIDADE FEDERAL RURAL DE

PERNAMBUCO

RESUMO O feijão-caupi [Vigna unguiculata (L.) Walp.], possui significativa importância socioeconômica para o sistema

agroindustrial brasileiro e tem adquirido destaque no âmbito científico e tecnológico com os resultados gerados

pelos sequenciamentos de nova geração e disponibilização de genes cujas funções biológicas vêm sendo foco de

estudos. A produção de solutos compatíveis é conhecida como um dos mecanismos para driblar os efeitos nocivos

causados por estresses abióticos, como seca e salinidade. No entanto, pouco se conhece a respeito da função desses

genes em V. unguiculata. O presente trabalho se propôs a desenhar primers relacionados às diferentes classes de

osmoprotetores presentes no transcriptoma do feijão-caupi em condições de seca e salinidade para validação por

RT-qPCR. Para tanto, foram selecionadas sequências sonda através de pesquisas no banco de dados PubMed,

utilizando as palavras-chave "osmoprotectants" e "plant stress". As sequências correspondentes aos genes

candidatos foram localizadas na literatura e comparadas via tBLASTn contra bancos de dados do feijão-caupi

(NordEST), adotando-se e-value de e-10

como cut-off (ponto de corte). Os primers foram desenvolvidos por meio

do programa Primer-BLAST, de acordo com os seguintes parâmetros: conteúdo de GC 50%, tamanho do

fragmento entre 70 e 200 pb, temperatura de Melting entre 40 e 60° e junção exon-exon, sendo posteriormente

confirmados via Primer-3Plus. As reações foram realizadas com desnaturação inicial de 5 minutos a 95° C e 35

ciclos de 95° C por um minuto, 58° C por um minuto, 72° C por um minuto, e 72° C por 10 minutos. Foram

desenhados 11 pares de primers (BADH 1, BADH 2, BADH-2, TPS, α TPS 2, α TPS1, P5CR1, P5CR2, P5CS,

INOSITOL1, INOSITOL2), com tamanho variando de 20 a 22 pb, para testes em cDNAs da espécie. Desse total,

10 pares (90,9 %) amplificaram e apresentaram bandas fortes entre 100 e 200 pb. Apenas no primer TPS não foi

visualizado produto de amplificação. A partir dos resultados obtidos constata-se uma alta eficiência no desenho

dos primers uma vez que aproximadamente 91 % amplificaram, envolvendo candidatos de todas as classes

(prolina, trealose, mio-inositol e glicina betaína), passíveis de aplicação em RT-qPCR. A identificação de genes e

enzimas envolvidas na síntese de osmoprotetores atuantes nas vias de tolerância aos estresses abióticos

compreende uma importante fonte de candidatos para uso no melhoramento de plantas cultivadas em áreas

acometidas por tais estresses.


417


SOJA VS MAMPS (MICROBE ASSOCIATED MOLECULAR PATTERNS): TRANSCRIPTÔMICA DE

QUINASES EM BANCO DE DADOS DE VALOR AGREGADO

Artemisa Nazaré Costa Borges1; José Ribamar Costa Ferreira Neto


1.



Recife, PE, Brasil.

RESUMO Em transcriptômica, bancos dados de valor agregado (BDVA) têm ganhado relevância por alocarem dados

públicos curados, processando-os e disponibilizando-os em versão acessível e informativa à comunidade

científica. Assim, grupos de pesquisa podem comparar seus resultados com outros e/ou minerar situações

específicas não investigadas em dados já publicados. Este trabalho enfoca a segunda alternativa. Diante disso, foi

executada uma mineração dos dados de expressão gênica de diferentes acessos (RIL-11272 e RIL-11268) de soja

submetidos a tratamento com MAMPs (especificamente, flg22 e quitina), abordado no manuscrito "Genotypic

variation of gene expression during the soybean innate immunity response", disponível no BDVA Expression

Atlas (código "E-GEOD-43463"). Objetivou-se investigar os transcritos codificadores de quinases induzidos,

evidenciando similaridades e diferenças transcricionais nos diferentes acessos. Na presente análise, foram

considerados como induzidos somente os transcrito que obedeceram aos seguintes critérios: Adjusted p-value

cutoff ≤ 0.05 e Log2-fold change cutoff ≥ 1,0. Desta forma, foram minerados 39 transcritos induzidos nos acessos

estudados. Destes, 39 foram induzidos na RIL-11272 e 25 na RIL-11268. Adotou-se a estratégia de "Gene

Set/Pathway Enrichment Analysis" (Fisher-exact, FDR < 0,01) para atribuir significado biológico ao conjunto de

transcritos identificados. Assim, constatou-se que as funções moleculares mais enriquecidas para as quinases

analisadas foram "tirosina quinases" (GO:0005516) e quinases que interagem de forma seletiva e não covalente

com calmodulina (GO:0005516), para ambos os acessos. No que tange às duas vias metabólicas mais

enriquecidas, os dados indicam que ambos os acessos induzem significativamente quinases associadas à ativação

dos hormônios jasmonato e ácido salicílico. Vale ressaltar que todas as vias metabólicas enriquecidas encontradas

no acesso RIL-11272 também o foram no acesso RIL-11268. Entretanto, esse último apresentou um número maior

de vias enriquecidas, apresentando a indução das vias de síntese e sinalização por ABA, como específica. Com o

exposto, nossa análise indica haver uma ativa participação de quinases na resposta imune de soja, destacando a

importância de vias hormonais nesse processo, uma vez que esses atores foram evidenciados em ambos acesos

escrutinados.

APOIO CAPES, CNPq

418

Genética Forense

DETERMINAÇÃO DA FREQUÊNCIA ALÉLICA DOS 20 MARCADORES STRS AUTOSSÔMICOS DO

CODIS ESTENDIDO, NO ESTADO DE PERNAMBUCO, BRASIL

José Bandeira do Nascimento Junior1; Abigail Marcelino dos Santos Silva

2; Anna Theresa de Souza Liberal

3;

Valdir de Queiroz Balbino3.


(1)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Recife-PE, Brasil;

(2) Universidade Federal de Pernambuco

(UFPE), Centro de Ciências Biológicas, Recife-PE, Brasil; (3)

Universidade Federal de Pernambuco (UFPE),

Departamento de Genética, Recife- PE, Brasil

RESUMO Através do estudo dos polimorfismos genéticos, foi possível a criação de vários tipos de marcadores genéticos,

entre eles os STRs (Short Tandem Repeat), que foram responsáveis por inúmeros avanços na área, como a

capacidade de individualizar as pessoas de forma rápida e confiável. Buscando auxiliar, ainda mais, o avanço da

genética forense no estado de Pernambuco e validar marcadores de identificação molecular para a população do

estado, foi executado a criação de um banco de dados, inédito para Pernambuco, com a análise da frequência dos

20 marcadores autossômicos indicados pelo sistema CODIS (Combined DNA Index System) que são: D3S1358,

D5S818, D7S820, D8S1179, D13S317, D16S539, D18S51, D21S11, CSF1PO, FGA, TH01, TPOX, D1S1656,

D2S441, D2S1338, D10S1248, D12S391, D19S433 e D22S1045. Foram realizados, também, os cálculos de uma

série de parâmetros populacionais. Para esse fim, foi fornecido pelo Laboratório de Bioinformática e Biologia

Evolutiva UFPE (LABBE-UFPE) amostras de sangue em papel FTA de 377 indivíduos que não possuíam

parentesco e que são naturais de Pernambuco. As coletas ocorreram durante os anos de 2014 a 2016, o DNA foi

amplificado utilizando os kits comerciais: Global Filler e Power Plex Fusion 6c, a genotipagem ocorreu no

sequenciador 3500 da Appiled Biosystems. Os alelos foram determinados usando o software OSIRIS Versão 2.7, e

os dados populacionais foram obtidos com o auxílio da planilha do Excel Microsoft e do software Arlequin versão

3.5.2. A interpretação dos resultados evidenciou que todos os marcadores estavam em equilíbrio de Hardy

Weinberg. O marcador que possui o maior valor relativo de Heterozigosidade Observada (HO) foi o D12S391, já

os marcadores com menor HO foram TPOX e D22S1045. O D2S1338 e o D12S391 foram os marcadores com

melhor Poder de Discriminação (PD) e Exclusão (PE), respectivamente, à medida que o TPOX foi o marcador que

obteve os menores índices tanto de PD como de PE. O marcador D2S1338 teve o maior valor de Conteúdo

informativo de polimorfismo, por outro lado o CSF1PO obteve o menor valor. Dado os valores acumulados, pode-

se afirmar que a criação de um banco de dados utilizando o conjunto dos 20 loci é representativo para essa

população. E esses marcadores podem individualizar, com alto valor de confiabilidade, qualquer indivíduo da

população.

APOIO CAPES

419

Genética Forense

MITOCHONDRIAL DNA ANALYSIS AND INFERENCE OF MATERNAL ANCESTRY IN ADMIXED

INDIVIDUALS FROM PERNAMBUCO, BRAZIL

Madson Allan de Luna Aragão1; Ronald Rodrigues de Moura

2; Anselmo Jiro Kamada

2; Heitor Horlando Sampaio

Araújo da Silva1; Tatiana Costa de Oliveira

3; Wlisses Henrique Veloso de Carvalho da Silva

2; Lucas André

Cavalcanti Brandao4; Sergio Crovella

2.


(1)Laboratory of Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE;

(2)Department of Genetics - UFPE, Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE; (3)

Laboratory of Research in Forensic Genetics, Scientific Police -

LPPFG/PE; (4)

Department of Genetics - UFPE, Department of Pathology - UFPE, Laboratory of

Immunopathology Keizo Asami - LIKA/UFPE

RESUMO In nowadays, various applications of ancestry information, such as in Forensic Genetics and Clinical Trials

studies, have been proposed. However, in highly admixed populations, such as in Brazil, this kind of information

cannot provide the same robust estimations as in less diverse populations. The Mitochondrial DNA (mtDNA) has

also proved to be a useful marker for inferring uniparental ancestry. The main purpose of this study was to analyze

the maternal genetic admixture of Pernambuco (PE) population by searching their mtDNA lineages. This

investigation may unravel the extent of the maternal genetic contribution of Europeans, Africans, Amerindians and

Asians to the mtDNA of PE individuals. Saliva samples were collected from 79 individuals born in PE, using

ORAGENETM

kits. The genomic DNA was extracted with ORAGENETM

prepIT-L2P kit according to the

manufacture's protocol. PCR amplification was performed to mtDNA's HVS-I region (between positions 15997

and 16395). The PCR products were purified by ExoSAP-IT® (Thermo Fisher Scientifi) and sequenced in the

ABI-3500 Genetic Analyzer (Applied Biosystems) using Big DyeTM

Terminator v3.1 Cycle Sequencing Ready

Reaction kit (Applied Biosystems). The mtDNA sequences obtained were aligned and the haplogroup assignment

was performed using MITOMASTER. We observed 32 different haplogroups. The most frequent haplotypes were

H2a, A2, L1c, L2a and L3e. The majority of the studied individuals 45.9% (n=34) belong to African mtDNA and

the remain were almost evenly distributed between Amerindian and European mtDNA, 28.5% (n=21) and 25.6%

(n=19), respectively. We also found the Asian haplotypes K (n=1) and F1b (n=4), those haplotypes are not

common among Latin American individuals. Our results showed the asymmetric mating in the colonial era and the

high level of genetic admixture among Africans, Amerindians and Europeans, reinforcing the historiography of the

predominance of European men colonizers over Africans slaves and Amerindian women. We have shown that

admixed individuals from PE has revealed a high matrilineal contribution of African and Amerindians. These

results will provide valuable information for future Forensic and Population Genetic analysis.

APOIO CAPES - Coordination for the Improvement of Higher Education Personnel; CNPq - National Council for

Scientific and Technological Development; FACEPE - Foundation for Science and Technology of Pernambuco.

420

Genética Forense

VALIDAÇÃO DO SOFTWARE OSÍRIS PARA GENOTIPAGEM DE STRS NO ESTADO DE

PERNAMBUCO, NORDESTE DO BRASIL

José Bandeira do Nascimento Junior1; Anna Theresa de Souza Liberal

2; Abigail Marcelino dos Santos Silva

1;

Valdir de Queiroz Balbino2.


(1)Universidade Federal de Pernambuco (UFPE), Centro de Ciências Biológicas, Recife-PE, Brasil;

(2)Universidade

Federal de Pernambuco (UFPE), Departamento de Genética, Recife- PE, Brasil

RESUMO A genética forense é uma área de estudo relativamente nova, sendo usada oficialmente em casos forenses por volta

da década de 80, na Inglaterra. Ela também é uma das ciências que mais avançou nos últimos anos e parte desse

avanço se deve a desenvolvimento em outras áreas do conhecimento, como a bioinformática que é crucial, nos dias

atuais, para realização de estudos forenses por dar uma maior segurança e rapidez na obtenção dos dados e

permitir um volume maior de análises simultâneas. Atualmente, existem uma enorme quantidade de Softwares,

contudo, para emissão de laudos oficiais de perícia forense, é necessário seguir um rígido Procedimento

Operacional Padrão (POP) para assegurar a reprodutibilidade dos resultados e minimizar a chance de erro. Devido

esse POP as polícias civis e a federal tendem a utilizar programas que já foram padronizados e validados. Em

consequência disso, foi realizada a validação do Software Osíris como método para genotipagem na população do

estado de Pernambuco, Brasil, como uma melhor alternativa para as soluções atuais. A partir de 200 indivíduos

que realizaram o teste de vínculo genético no Laboratório de Bioinformática e Biologia Evolutiva entre os anos de

2015 - 2016, foram feitas as genotipagens das amostras biológicas (sangue coletado em cartão FTA) utilizando o

software GeneMapper®, que é padronizado, validado e utilizado pela polícia federal em paralelo ao Osíris versão

2.7. Após a genotipagem ambos os outputs foram analisados e seus resultados comparados. A interpretação dos

resultados evidenciou que tanto o GeneMapper® quanto o Osíris obtiveram os mesmos valores para os alelos de

todas as genotipagem, além disso o Osíris possui mais funcionalidades como permitir a visualização de

marcadores genotipados por qualquer kit de amplificação seja comercial ou produzidos in-house, diferente do

GeneMapper® que só visualiza marcadores genotipados com kit comercializado pelas empresas parceiras ao

software, ser totalmente gratuito, permitir ao analista alterar as suas configurações padrões para adequar-se às

especificidades de cada laboratório desde nomenclaturas até POPs internos. Baseado nessas comparações podemos

afirmar que o software Osíris mostrou um ótimo desempenho na caracterização dos alelos de todos os genótipos

podendo, dessa forma, ser utilizado pelos laboratórios de forense como alternativa ao software utilizado

atualmente.

APOIO Capes

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ANAIS 2016 - engene-sbg.com.br · XXI Encontro de Genética do Nordeste UNIVERSIDADE DE PERNAMBUCO FIOCRUZ PERNAMBUCO SÍNTESE BIOTECNOLOGIA Biogene Promoção e Realização Apoio