ANÁLISE INSTRUMENTAL CURSO DE ENGENHARIA …sistemas.eel.usp.br/docentes/arquivos/5840768/LOQ4001/FINAL HPLC ou... · tornam as análises executadas por CLAE mais precisas. Vários

1

ANÁLISE INSTRUMENTAL

CURSO DE ENGENHARIA QUÍMICA

• 2o SEMESTRE 2018

• Prof. Dr. Antônio Aarão Serra• Profa. Dra. Jayne Carlos de Souza Barboza

2

CROMATOGRAFIA

CROMATOGRAFIA LÍQUIDA DE ALTA EFICIÊNCIA

HPLC ou CLAE

3

CROMATOGRAFIA – GERAL

• A. Cromatografia Planar– A.1.Cromatografia em Papel (CP)– A.2.Cromatografia em Camada Fina (CCF).

• B.Cromatografia em Coluna– B.1.Cromatografia à Gás– B.2.Cromatografia Líquida

• B.2.1.Cromatografia Líquida Clássica (CLC)(em Vidro a Pressão Ambiental)

• B.2.2.Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE ou HPLC)

4

HPLC - COLUNA - INTRODUÇÃO

PRINCIPAIS TIPOS DE CROMATOGRAFIA

5


• PLANO DE AULA:– Introdução– Forças que atuam na HPLC– Mecanismo de Separação– Aplicação– CLC & CLAE– CG & CLAE– Técnicas de CLAE– Equipamento– Detalhamento

6


7

HPLC – COLUNA - INTRODUÇÃO• Cromatografia Líquida de Alta Pressão

(HPLC): colunas metálicas e pressões elevadas, com bomba de alta pressão (HPLC ou CLAE);

– FM = Líquida (solventes).– Ex.: Metanol, Hexano, etc... – FE = Sólido, líquido

– Ex.: Sílica Fundida recoberta (mais comum), entre outras.

8

HPLC – COLUNA - INTRODUÇÃO

• Cromatografia Líquida de Alta Eficiência (CLAE).

• O processo cromatográfico consiste na partição dos componentes de uma mistura entre a fase móvel e a fase estacionária.

• OBS.: No caso da cromatografia gasosa o fluido é um gás e na cromatografia líquida o fluido é um solvente.

9

HPLC – COLUNA - INTRODUÇÃO

• Na cromatografia líquida a fase estacionária é constituída de partículas sólidas empacotadas em uma coluna, a qual é atravessada pela fase móvel (solvente) .

• São as forças físicas e químicas que atuam entre os solutos e as duas fases são responsáveis pela retenção dos solutos sobre a coluna cromatográfica.

10

HPLC• Forças que atuam na HPLC• A diferença na magnitude dessas forças

que determina a resolução e portanto a separação dos solutos individuais.

• As forças elementares que agem sobre as moléculas são de cinco tipos :

• 1) Forças de dispersão de London ou forças• de Van der Waals;• 2) Interações de dipolo induzido;• 3) Ligações de hidrogênio;• 4) Interações dielétricas;• 5) Interações eletrostáticas e coulombianas.• OBS.: Alta Pressão e Solvente

11

HPLC • Mecanismo de separação• A separação cromatográfica é obtida a partir de

interações diferenciadas entre os analitoscomponentes da mistura, fase estacionária e fase móvel

12

HPLC• Aplicação:• Quais misturas podem ser separadas

por HPLC?• Qualquer substância que poder ser

“arrastada” por um fluxo de líquido. Desde que ela se dissolva total ou pelo menos parcialmente nesse líquido.

• DE FORMA GERAL: HPLC é aplicável a mistura de compostos como peso molecular altos e muito polares.

13

HPLC • APLICAÇÃO:• Agricultura (Pecuária, Veterinária)• Alimentícia• Cosméticos (Higiene, Perfumes)• Farmacêutica (Farmacos)• Medicina (Hospitais e Clinicas) • Meio Ambiente (Resíduos, Águas)• Petroquímica (Derivados)• Embalagens• Mineração• Produtos Naturais (fragâncias, essências, princípios

ativos)• Química (matéria-prima, catalisadores, aditivos)• Entre outros

14

HPLC

• CROMATOGRAFIA LÍQUIDA CLÁSSICA• (CLC & CLAE)

• Na Cromatografia Líquida Clássica (CLC) o recheio da coluna é utilizado geralmente uma só vez, porque parte da amostra usualmente se adsorve de forma irreversível. O enchimento da coluna deve ser repetido para cada separação.

• A vazão de eluente na CLC é promovida pela ação da gravidade e as frações individuais da amostra são coletadas manualmente ou através de um coletor de frações. As separações requerem, geralmente, várias horas e a detecção e a quantificação das frações são realizadas por análise manual.

15

HPLC

• CROMATOGRAFIA LÍQUIDA CLÁSSICA• (CLC & CLAE)

• Na CLAE emprega-se um coluna fechada , reaproveitável; portanto, até centenas de separações individuais podem ser realizadas com a mesma coluna. Essas colunas são muito eficazes, mas oferecem uma grande resistência à vazão da fase móvel, ou seja, ela sofre uma perda de carga. Por esta razão é necessário empregar sistemas de bomba de alta pressão (até 400 bars) que fazem a fase móvel migrar a uma velocidade razoável através da coluna.

16

HPLC

• CROMATOGRAFIA LÍQUIDA CLÁSSICA• (CLC X CLAE)

• A vazão da fase móvel é controlada facilmente, resultando em operações mais reprodutíveis, que tornam as análises executadas por CLAE mais precisas. Vários tipos de detectores, que podem ser colocados na saída da coluna, proporcionam uma identificação e quantificação continua dos componentes da amostra.

• A análise quantitativa pela CLAE pode atingir uma precisão superior a + 0.5%. Finalmente, separações em escala preparativa de miligramas de amostras são relativamente fáceis.

17

HPLC• CG & CLAE

• Na cromatografia gasosa (CG) é necessário que a amostra seja suficientemente volátil, a fim de que possa passar através da coluna na forma de vapor, e estável termicamente para não se decompor nas condições de separação.

• Os métodos de detecção utilizados em CGsão mais rápidos e sensíveis, a aparelhagem mais fácil de ser manipulada e em geral mais barata.

• A CLAE requer somente que a amostra seja solúvel na fase móvel.

18

HPLC

• CG & CLAE• Assim, a CLAE é um método ideal para a

separação de espécies iônicas ou macromoléculas de interesse biológico e produtos naturais lábeis, bem como uma imensa variedade de outros compostos de alta massa molecular e/ou baixa estabilidade térmica.

• A CLAE possui como vantagens adicionais: duas fases cromatográficas de interação seletiva com as moléculas da amostra, versus somente uma na CG e maior variedade de possíveis mecanismos de separação.

19

HPLC (HPLC - CG)

20

HPLCHPLC

Tipos e Tipos e

AplicaAplicaçções da ões da

Cromatografia Cromatografia

LLííquidaquida

Insolúvel em água Solúvel em água

Aumento de polaridadeAumento de polaridade

Polar não iônico

Apolar Iônico

Massa molecular

102

103

104

105

106

Troca iônica

Partição

PartiPartiçção ão em fase em fase reversareversa

PartiPartiçção ão em fase em fase normalnormal

ExclusãoPermeaPermeaçção ão em gelem gel

FiltraFiltraçção ão em gelem gel

Adsorção

Insolúvel em água Solúvel em água

Aumento de polaridadeAumento de polaridade

Polar não iônico

Apolar Iônico

Massa molecular

102

103

104

105

106

Troca iônica

Partição

PartiPartiçção ão em fase em fase reversareversa

PartiPartiçção ão em fase em fase normalnormal

ExclusãoPermeaPermeaççãoãoem gelem gel

FiltraFiltraçção ão em gelem gel

Adsorção

21

HPLC

• Vantagens e limitações da CLAE

22

HPLC

• TÉCNICAS DA CLAE• Os tipos principais de fases estacionárias

com diferentes mecanismos que regem as separações cromatográficas na CLAE. – CROMATOGRAFIA LÍQUIDO-SÓLIDO OU POR

ADSORÇÃO;– CROMATOGRAFIA LÍQUIDO-LÍQUIDO OU POR

PARTIÇÃO;– CROMATOGRAFIA LÍQUIDA COM FASE

LIGADA;– CROMATOGRAFIA LÍQUIDA POR TROCA

IÔNICA;– CROMATOGRAFIA LÍQUIDA POR EXCLUSÃO.

23

HPLC – EQUIPAMENTO

• HPLC

24


Componentes tComponentes t íípicos picos -- CLAECLAE

25

HPLC – EQUIPAMENTO• Diagrama de blocos HPLC

Solvente(s)

Bombas

Misturador

Injetor Pré-Coluna

Detector

Aquisição/Impressãode

Dados

Coluna

26


• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 1. Sistema de solventes/Filtros• 2. Bombas• 3. Misturador• 4. Injetor• 5. Pré-Colunas/Regulador de pressão• 6. Coluna• 7. Detector/Descarte• 8. Aquisição/Impressão de dados

27

HPLC – FM - DETALHAMENTO

• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• FASE MÓVEL:• 1. Sistema de solventes: Solvente puros ou Solvente puros ou

misturas de solventes de acordo com a polaridade misturas de solventes de acordo com a polaridade requerida na separarequerida na separaçção.ão.

• Solventes utilizados: água, acetonitrila, metanol, THF, hexano, etanol.

28

HPLC - FM - DETALHAMENTO• FASE MÓVEL: Solventes• CARACTERÍSTICAS DESEJÁVEIS DA FASE MÓVEL:

– Degaseificada (garante a reprodutibilidade de vazão e estabilidade da base);

– Alto grau de pureza ou fácil purificação;– Dissolver a amostra sem decompor;– Não decompor ou dissolver a fase estacionária.– Baixa viscosidade;– Compatível com o detector;– Polaridade adequada para permitir a separação dos

componentes da amastra.

29

HPLC - FM - DETALHAMENTO

• FASE MÓVEL:• MÉTODOS DE DEGASEIFICÃO:• Ultrassom: Muito lento, pouco eficiente, requer

agitação, em geral o pior método quando usado sozinho

• Vácuo + ultrassom: Rápido, eficiente, refazer a cada 12 hrs.

• Purga com Hélio: Contínuo, hélio é razoavelmente caro, leva a aumento de vazamentos, maior custo operacional.

• Degaseificador on-line: Contínuo, remove o ar logo antes de entrar na bomba, investimento alto inicial (melhor opção a longo prazo).

30

HPLC – BOMBAS - DETALHAMENTO

• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 2. BOMBAS: (Duplos Pistões)

– Podem ser (bombas isocráticas, binárias e quaternária).

– Pressão elevada até 6000psi (~400Bar)– Vazão continua sem pulsos (ou, se

pulsando, com amortecedor de pulsos) – Fluxo 0,1 a 10mL/minuto (Aplicações

analítica)– Controle de vazão e reprodutibilidade

melhor que 1 %

31

HPLC – MISTURADOR - DETALHAMENTO

• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 3. MISTURADOR OU CÂMARA DE MISTURA:

(misturas de solventes).• ELUIÇÕES DA FM PODEM SER:

– Eluição isocrática: Composição de FM éconstante (Capaz de separa um número limitado de analitos).

– Eluíção de gradiente: Composição da FM vária ao longo da análise (Separação de amostras complexas).

•• A A eluieluiççãoão com gradiente produz efeitos com gradiente produz efeitos similares aos produzidos pela programasimilares aos produzidos pela programaçção ão de temperatura na de temperatura na CGCG

32

HPLC – INJETOR - DETALHAMENTO• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 4. INJETOR: SISTEMA DE INJEÇÃO:• INJEÇÃO MANUAL (Septo - Limitado a 1600psi)• - As amostras são introduzidas com seringas. • - Após virar a alça, a amostra é carregada pela fase

móvel até o início da coluna. • AMOSTRADOR AUTOMÁTICO • - As amostras são postas em um frasco localizado • dentro do amostrador. • - O amostrador automático :• 1. Mede o volume correto para injeção. • 2. Injeta a amostra. • 3. Prepara o injetor para uma próxima amostra.

33

HPLC – COLUNAS - DETALHAMENTO

• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 5. PRÉ-COLUNAS:

– Localizada entre o injetor e a coluna– Colunas de 2 a 5 cm, i.d igual ao da

coluna. – Mesma FE da coluna de separação.

– Custo reduzido – Aumenta a vida útil da coluna– Remove partículas e contaminantes do

solvente.

34

HPLC – COLUNAS - EQUIPAMENTO• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 6. COLUNAS:• COLUNAS CROMATOGRÁFICAS (250mm)

35


• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 6. COLUNAS:• Colunas de aço padrões

36


• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 6. COLUNAS:• Condicionamento da Coluna

– Necessário para que haja um perfeito equilíbrio da FM e da FE.

– Coluna nova: 4- 8 horas– Coluna parada há alguns dias: 2 horas – Coluna de uso diário: 15 minutos.

• OBS.: Lembre-se: a coluna deve ser guardada em solvente orgânico.

37

HPLC – COLUNAS - DETALHAMENTO• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 6. COLUNAS: • Geralmente trabalha a temperatura ambiente

ou ligeiramente acima desta.• Maiores temperaturas maior degradação da

coluna.

• Para quantificação temperatura deve variar de mais ou menos 1º C.

• OBS.: Lembre-se: a coluna deve ser guardada em solvente.

38


• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 6. COLUNAS:

FN & FR• Colunas Fase Normal • FE não polar/FM polar – Soluto mais polar elui

primeiro.

• Colunas fase Reversa• FE polar/FM não polar – Soluto menos polar elui

primeiro. (Mais Utilizada > 70% das aplicações)

39

HPLC – ANÁLISE - DETALHAMENTO

• FASE NORMAL:

40

HPLC – ANÁLISE - DETALHAMENTO

• FASE REVERSA:

41

HPLC – FE - DETALHAMENTO

• CLASSIFICAÇÃO PELA POLARIDADE DA FASE ESTACIONÁRIA

• Cromatografia em FASE NORMAL : fase estacionária polar.

42


• FASE ESTACIONÁRIA• Desenho de uma partícula de sílica

43


• CLASSIFICAÇÃO PELA POLARIDADE DA FASE ESTACIONÁRIA (Cont.)

• Cromatografia em FASE REVERSA : estacionária de baixa polaridade

44


• FASE NORMAL: Fase estacionária polar• Derivados de sílica gel (fenila, ciano, amino, diol)

45


• Observações Importantes: • Quando se utiliza silica-gel derivatizada

com grupos polares (fenila, ciano, amino, diol), tais fases estacionárias podem ser utilizadas tanto para cromatografia em fase normal (fase estacionária polar àeluente apolar) ou em fase reversa (fase estacionária apolar à eluente polar).

46

HPLC – FE - DETALHAMENTO• FASE NORMAL: Fase estacionária polar• Eluem primeiro as substâncias apolares que

possuem uma menor interação com a fase estacionária polar.

• Aplicável a análise de substâncias insolúveis em água: óleos, gorduras, lipídios. Destaca-se na separação de isômeros.

47

HPLC – FE - DETALHAMENTO• Características das FASES NORMAIS• Vantagens:

– 1. Versatilidade na mudança de seletividade alterando fases móveis e estacionárias;

– 2. Colunas estáveis quando se utiliza solventes não aquosos;

– 3. Uma grande variedade de substâncias orgânicas são mais solúveis nos solventes usados em fase normal (útil em LC preparativa);

– 4. Decréscimo de pressão menor devido àbaixa viscosidade dos solventes;

– 5. Útil para amostras que possam se decompor em soluções aquosas.

48


• Características das FASES NORMAIS• Desvantagens:

– 1. Amostras iônicas são de difícil separação e são mais viáveis de se separar por fase reversa;

– 2. Controle da força de eluição menos previsível e mais demorado que em fase reversa;

– 3. Pior resolução;– 4. Ponto de ebulição reduzido pode gerar

bolhas;– 5. Alto custo dos solventes orgânicos.

49


• FASE REVERSA• Fase estacionária de baixa polaridade – C2, C4,

C8, C18.

50


• FASE REVERSA : Fase estacionária de baixa polaridade – C2, C4, C8, C18

51


• Cromatografia de Fase Reversa (FR)*: • Coluna Fase Reversa C18:• Aplicação quase universal (~ 70% das aplicações

na literatura). Permite análise desde substâncias hidrossolúveis e/ou iônicas até substâncias lipofílicas.

• *Vantagens:– Equilíbrio mais rápido– Menor adsorção irreversível– Água não influi na reprodutibilidade – Sítios de adsorção mais homogêneos– Eluição em gradiente facilitada

52


• Cromatografia de Fase Reversa (FR) : (FE menos polar que a FM)

• SOLVENTES MAIS COMUNS: Água; Acetonitrila(ACN), MeOH; THF.

• ORDEM DE ELUIÇÃO (crescente): POLAR→APOLAR.

53


• Aplicações das Principais Fases Estacionárias

54


• COLUNA & SOBRECARGA DE AMOSTRA• Para aproveitar de todos os pratos que uma colina

possui, não se deve injetar um volume maior que 1% do volume da coluna vazia.

• Vmax (µL) = π (raio)2(comprimento)(0,01)

55


• FASE ESTACIONÁRIA:• As colunas são “recheadas” com partículas porosas

com diâmetro de 1,8 – 5 µm. •

56

HPLC – FE - DETALHAMENTO• Tipos de Fase Estacionária

57


• PRINCIPAIS TIPOS DE COLUNAS EM HPLC:

58


• TIPOS DE CROMATOGRAFIA:• Adsorção : O mecanismo de separação:

competição entre moléculas da amostra e da fase móvel em ocupar os sítios ativos da fase estacionária, sólido. (Sílica) Fase estacionária (polar) é afetada com frequênciapela retenção de moléculas de alta polaridade como álcoois, água.

59

HPLC – COLUNAS - DETALHAMENTO• TIPOS DE CROMATOGRAFIA:• Partição: • O mecanismo de separação: baseia-se nas

diferentes solubilidades que apresentam os componentes da amostra na fase móvel e na fase estacionária.(sílica purificada) O maior inconveniente desta técnica é a solubilidade da fase estacionária na fase móvel.

•• A fase estacionária está imobilizada por meio

de ligações químicas. (Normal ou Reversa)

60


FN & FR

• Fase normal:– Fase estacionária polar ; – Fase móvel apolar (n-alcanos, clorofórmio,

acetato de etila);

– Solutos neutros; – Maior polaridade soluto maior tempo de

retenção;

– Mecanismo retenção: adsorção

61

HPLC – COLUNAS - DETALHAMENTOFN & FR

• Fase reversa:– Fase estacionária apola r;

– Fase móvel polar (tampões, água, metanol, acetonitrila, THF);

– Solutos apolares, não-iônicos;

– Maior polaridade da FM maior o tempo de retenção;

– Mecanismo retenção: interações apolares com radicais da coluna.

62


• TIPOS DE CROMATOGRÁFIA :• Iônica: A fase estacionária é, normalmente,

uma resina de poliestireno e divinilbenzeno, a qual são ligados grupos iônicos, como por exemplo,

• -SO-3 trocadores fortes de cátion;• -CO-2 trocadores fracos de cátion; • -NR+3 trocadores fortes de ânions;• -NH2R+ trocadores fracos de ânions.• Os grupos iônicos têm um contra-íon (com

carga oposta) que pode ser deslocado pelos íons da fase móvel de carga similar a ele.

63


• TIPOS DE CROMATOGRÁFIA :• Exclusão: A separação é efetuada de

acordo com o tamanho efetivo das moléculas. A coluna é recheada com matéria inerte cujos poros têm tamanho controlado. Onde, as moléculas menores penetram a maioria dos poros.

64

HPLC - DETECTOR

• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 7. DETECTOR• DETECTORES MAIS USADOS EM HPLC: • 1. UV/Vis• 2. Indice de Refração• 3. Fluorescência• 4. Condutividade• 5. Arranjo de diodos• 6. Eletroquímica• 7. Massa• 8. IV

65

HPLC – DETECTOR - DETALHAMENTO• 7. DETECTOR: (Cont.)• CARACTERÍSTICAS IDEAIS DE UM DETECTOR:

– Sensibilidade e seletividade adequada – Ampla faixa linear – Baixo volume interno (Vol. grande alargamento) – Resposta Rápida – Boa estabilidade e reprodutibilidade – Não destruir a amostra – Detector lento (pico baixo, largo e com calda

longa).– Boa estabilidade e reprodutibilidade

(confiabilidade)– Não destruir a amostra para (coletar o eluato)

66

HPLC – DADOS - DETALHAMENTO

• PRINCIPAIS PARTES DE UM HPLC• 8. Aquisição/Impressão de dados• Multiplicador de sinais/Computador/Impressora

67


• CROMATOGRAMA:

68


Ex.:Ex.:EluiEluiççãoão com gradientecom gradiente Coluna C18, 5 mm, fase reversa

Detector fluorescência: excit. 334 nm – emis. 425 nm

69

REFERÊNCIAS

• BIBLIOGRÁFIA• SKOOG, D. A., HOLLER, F. J., NIEMAN, T. A.

Princípios de análise instrumental . 5ª. Ed., 2002.

• COLLINS, C. H., BRAGA, G. L., BONATO, P. S.Introdução a métodos cromatográficos . 7ªEdição, Campinas-SP, Editora da UNICAMP, 1997.

• WESTON, A., BROWN, P. R. HPLC and CE -principles and practice . 1997.

70

REFERÊNCIAS

• HARRIS, D. C. . Análise Química Quantitativa , Sétima Edição, ltc (Livros Técnicos e Científicos Editora Ltda), Rio de Janeiro, (Tradução de 7th ed Quantitative Chemical Analysis), 2008.

• ARAÚJO, Julio M. A. Química de Alimentos : teoria e prática . 3ª ed. Viçosa: Editora UFV, 2004.

71

HPLC – QUESTÕES

HPLC/CGQUESTÕES

72

Para refletir e responder:Para refletir e responder:1)Duas substâncias diferentes com a mesma concentração apresentarão a mesma área sob suas bandas cromatográficas?

HPLC – QUESTÕES

73

1)Duas substâncias diferentes com a mesma concentração apresentarão a mesma área sob suas bandas cromatográficas?Resposta: Para um mesmo analito, a área ou altura aumentam com o aumento da concentração. A área sob a banda cromatográfica de duas substâncias diferentes dependerá da resposta do detector para aquele tipo de substância, independentemente do tipo de detector utilizado.

HPLC – QUESTÕES

74

Para refletir e responder:Para refletir e responder:2) A CG pode ser usada indistintamente para qualquer tipo de analito?

HPLC – QUESTÕES

75

Para refletir e responder:Para refletir e responder:2) A CG pode ser usada indistintamente para qualquer tipo de analito?Resposta: A CL é útil quando a CG não pode ser usada. Quais são os casos em que isto ocorre?Principalmente em compostos com peso moleculares altos (Polímeros) e compostos muito polares (Açucares) ou iônicos (Sais).

HPLC – QUESTÕES

76

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 3)Quais as principais partes de um HPLC?

77

HPLC – QUESTÕES• 3) Quais as principais partes de um HPLC?• Respostas:

• 1. Sistema de solventes/Filtros• 2. Bombas• 3. Misturador• 4. Injetor• 5. Pré-Colunas/Regulador de pressão• 6. Coluna• 7. Detector/Descarte• 8. Aquisição/Impressão de dados

78

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 4) O que é eluição isocrática e eluição

com gradiente em HPLC?

79

HPLC – QUESTÕES• 4) O que é eluição isocrática e eluição

com gradiente em HPLC?• Resposta:• Eluição isocrática: A composição de FM é

constante (Capaz de separa um número limitado de analitos).

• Eluição com gradiente: Composição da FM vária ao longo da análise (Separação de amostras complexas).

80

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 5) Quais os principais tipos de

mecanismos de separação em cromatografia?

81

HPLC – QUESTÕES•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 5) Quais os principais tipos de

mecanismos de separação em cromatografia?

• Respostas:• Os principais tipos de mecanismos são:

– 1. Adsorção– 2. Partição– 3. Iônico– 4. Exclusão– 5. Afinidade

82

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 6) De um exemplo de FM e FE para cada

tipo de cromatografia (Planar, CLC, CG, HPLC).

83

HPLC – QUESTÕES•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 6) De um exemplo de FM e FE para cada tipo de

cromatografia (Planar, CLC, CG, HPLC).• Resposta:• Panar (FM = Ex.: Heptano, AcOEt; FE= Ex.: Sílica

gel e papel)• CLC (FM = Ex: AcOEt, Hexano; FE = Silica Gel,

alumina)• CG (FM = Nitrogênio gás; FE = Coluna de sílica

fundida recoberta com poliamida) Ex.: Carbovax• HPLC = FM = Aceonitrila, Metanol; FE = Coluna

de aço recheada com sílica funcionalizada Ex.: C8) ou polímeros funcionalizados

84

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 7) Compare CG e HPLC?

85

HPLC – QUESTÕES• 7)Compare CG e HPLC?• Resposta:

86

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 8) Qual é pressão de trabalho do CCF, CLC, CG e

do HPLC? (Somente colocar: Baixa, ambiental, Media ou alta pressão).

87

HPLC – QUESTÕES•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 8) Qual é pressão de trabalho do CCF, CLC, CG e

do HPLC? (Somente colocar: Baixa, ambiental, Media ou alta pressão).

•• Resposta: Resposta: •• CCF = CCF = Pressão ambiental Pressão ambiental •• CLC = CLC = Pressão ambiental ou baixa pressãoPressão ambiental ou baixa pressão•• CG =CG = Pressão mPressão m éédia (~80psi)dia (~80psi)•• HPLC =HPLC = Pressão alta (6000psi)Pressão alta (6000psi)

88

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 9) Quais as principais forças que atuam

sobre as moléculas na HPLC ?

89

HPLC – QUESTÕES•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 9) Quais as principais forças elementares que

atuam sobre as moléculas na HPLC ?• As forças elementares que agem sobre as

moléculas são de cinco tipos :• 1) Forças de dispersão de London ou forças• de Van der Waals;• 2) Interações de dipolo induzido;• 3) Ligações de hidrogênio;• 4) Interações dielétricas;• 5) Interações eletrostáticas e coulombianas.

90

HPLC – QUESTÕES

•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 10) Explique o funcionamento de coluna

em fase normal e coluna em fase reversa? Exemplificar?

91

HPLC – QUESTÕES•• Para refletir e responder:Para refletir e responder:• 10) Explique o funcionamento de coluna em fase

normal e coluna em fase reversa? Exemplificar?• Resposta: • Colunas Fase Normal • FE não polar/FM polar – Soluto mais polar elui

primeiro.

• Colunas Fase Reversa• FE polar/FM não polar – Soluto menos polar elui

primeiro. (Mais Utilizada > 70% das aplicações)

92

HPLC – QUESTÕES• 10) O que é coluna em fase normal e coluna em

fase reversa? Exemplificar?• Resposta: (Cont.) Exemplo: Fase Normal

93

HPLC – QUESTÕES• 10) O que é coluna em fase normal e coluna em

fase reversa? Exemplificar?• Resposta: (Cont.) Exemplo: Fase Reversa

ERROR: syntaxerror

OFFENDING COMMAND: --nostringval--

STACK:

/Title

()

/Subject

(D:20181019115958-03’00’)

/ModDate

()

/Keywords

(PDFCreator Version 0.9.5)

/Creator

(D:20181019115958-03’00’)

/CreationDate

(jayne)

/Author

-mark-

Documents

ANÁLISE INSTRUMENTAL CURSO DE ENGENHARIA …sistemas.eel.usp.br/docentes/arquivos/5840768/LOQ4001/FINAL HPLC ou... · tornam as análises executadas por CLAE mais precisas. Vários