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1
UNIVERSIDADE FEDERAL DO CEAR
FACULDADE DE FARMCIA, ODONTOLOGIA E ENFERMAGEM - FFOE
MESTRADO EM CINCIAS FARMACUTICAS
Andra Bessa Teixeira
Avaliao das atividades antimicrobiana e antioxidante dos leos
essenciais das folhas dos quimiotipos I, II e III de
Lippia alba (Mill.) N. E. Brown
Fortaleza
2009
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ANDRA BESSA TEIXEIRA
Avaliao das atividades antimicrobiana e antioxidante dos leos
essenciais das folhas dos quimiotipos I, II e III de
Lippia alba (Mill.) N. E. Brown
Fortaleza 2009
Dissertao apresentada Coordenao do
Programa de Ps-Graduao em Cincias
Farmacuticas da Universidade Federal do
Cear para a obteno do Ttulo de Mestre em
Cincias Farmacuticas.
Orientadora: Profa. Dra. Ndia Accioly Pinto
Nogueira
Co-Orientadora: Profa. Dra. Luzia Kalyne
Almeida Moreira Leal
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3
ANDRA BESSA TEIXEIRA
Avaliao das atividades antimicrobiana e antioxidante dos leos
essenciais das folhas dos quimiotipos I, II e III de Lippia alba
(Mill.) N. E. Brown
Dissertao apresentada Coordenao do Programa de Ps-Graduao em
Cincias
Farmacuticas da Universidade Federal do Cear, para a obteno do
Ttulo de Mestre em
Cincias Farmacuticas.
Aprovada em ____/____/____
Banca Examinadora:
___________________________________________________________
Profa. Dra. Ndia Accioly Pinto Nogueira (orientadora)
Departamento de Anlises Clnicas e Toxicolgicas (UFC)
___________________________________________________________
Prof. Dr. Thalles Barbosa Grangeiro
Departamento de Biologia (UFC)
___________________________________________________________
Profa. Dra. Maria Goretti Rodrigues de Queiroz
Departamento de Anlises Clnicas e Toxicolgicas (UFC)
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DEDICATRIA
A Deus, meus pais e irms at o ltimo instante.
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5
AGRADECIMENTOS
A Deus, minha fonte inesgotvel de f e fora maior, que
proporcionou estes momentos de
felicidade, amor e cincia a minha pequena sabedoria.
Aos meus pais, Francisco Jos Tavares Teixeira e Maria Aparecida
Bessa Teixeira, e irms,
Luciana Bessa Teixeira e Janana Bessa Teixeira, pelo amor
incondicional, que sempre me
fortaleceu para realizao de todos os sonhos. Vocs so os maiores
exemplos de conduta que
seguirei at o fim dos meus dias e primordiais em todas as minhas
vitrias e assim, em tudo
que tenho e sou. Eu amo muito vocs.
As Tias Joseni Bessa e Tereza Bessa, que com seu to imenso amor
e dedicao me fazem
sentir como uma filha. Obrigada por sempre torcerem pelo meu
sucesso.
minha orientadora Profa. Dra. Ndia Accioly Pinto Nogueira, pelo
imprescindvel e valioso
apoio, pelos ensinamentos, tanto profissionais como pessoais,
pela confiana, dedicao e
pacincia, principalmente nos momentos mais delicados da minha
vida. Minha sincera
gratido e profundo reconhecimento.
Profa. Dra. Luzia Kalyne Almeida Moreira Leal, a quem coube a
co-orientao desta
dissertao, desejo manifestar os meus agradecimentos pela pronta
disponibilidade, sempre
que precisei de ajuda, e pelo encorajamento que naturalmente me
foi transmitido.
Dnya Bandeira Lima, minha excelente estagiria, pela ajuda, fora,
incentivo e total
dedicao. Trabalhamos, aprendemos, rimos, conversamos, choramos
enfim, tantos
momentos que serviram para o nosso crescimento. Continue sempre
assim. Voc ser um
exemplo de profissional.
minha amiga Ceclia Cmara por todo apoio, carinho, ateno, ajuda,
conselho e pela
grande amizade que se conserva e fortalece a cada dia que passa.
muito bom saber que
existem pessoas como voc, que se preocupam com minha felicidade.
Voc mesmo uma
pessoa especial e que eu adoro muito!
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6
minha amiga Maria Mirele, que apesar de um pouco distante, sei
que posso contar sempre
com voc e que o seu pensamento de energia me deu foras para mais
essa conquista. Nas
amizades verdadeiras o tempo nunca passa e as distncias nunca
existem. Eu te agradeo de
todo corao e tambm te adoro muito!
s minhas amigas Suzana Bezerra e Maria Cristina que juntas
trilhamos o mesmo caminho de
luta e vitria. A companhia de vocs foi um diferencial que me
motivou, principalmente nesta
fase final. Obrigada pela pacincia, pelas horas agradveis de
estudo e debate, pelos timos
momentos de desabafo e lgico, pelos grandes eventos de
descontrao. Continuaremos em
frente.
famlia de Souza Cavalcante a qual me deram a oportunidade de
conhecer, fazer parte e
proporcionar momentos felizes. Vocs me ajudaram muito. No
deixaram de me apoiar, de
torcer por mim e de me incentivar a seguir em frente com nimo,
mesmo em momentos
difceis. Guardarei para sempre vocs no meu corao.
As minhas amigas do Clube da Luluzinha, Sarah Rachel, Danielle
Oliveira e Lyanna
Ferreira, pelas to boas risadas, brincadeiras, pelos planos e
confidencias, pela partilha,
crescimento enfim, pelos vrios momentos alegres. Adoro fazer
parte deste Clube.
A toda famlia do LabMicro (Lvia, Mirlayne, Elieyde, Cssia,
Larissa, Eric, Felipe) que
sempre esteve disposta a colaborar e pelos momentos de alegria e
amizade. Sentirei saudades.
Aos meus queridos funcionrios de trabalho em Canind,
especialmente a Mayra Cavalcante,
que tanto ajudou quando precisei me ausentar. Obrigada amiga,
pela sua dedicao, fora,
torcida e pela pacincia e disponibilidade em me auxiliar nos
resultados.
Aos parceiros de trabalho, Eduardo Ribeiro, Jean Guilherme,
Mailson e Anderson Souza, pela
fundamental colaborao e empenho na realizao da atividade
antioxidante.
A Profa. Dra. Maria Goretti de Vasconcelos Silva que gentilmente
colaborou na realizao da
cromatografia dos leos essenciais e na anlise dos
resultados.
-
7
A secretria Raimundinha pelo valioso auxlio, pacincia e
amizade.
Aos meus amigos do mestrado pela agradvel parceria concedida
durante este perodo.
Aos membros da banca: Profa. Dra. Goretti Rodrigues e Prof. Dr.
Thalles Barbosa por terem
assumido a difcil tarefa de avaliar e contriburem na importante
fase de concluso do meu
trabalho.
Enfim, a todos que contriburam de alguma forma para a execuo
deste trabalho,
impulsionando minha vida profissional para caminhos cada vez
maiores, O MEU MUITO
OBRIGADO!
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8
Para realizar grandes conquistas, devemos
no apenas agir, mas tambm sonhar; no
apenas planejar, mas tambm acreditar. Nas
grandes batalhas da vida, o primeiro passo
para a vitria o desejo de vencer!
Mahatma Gandhi
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9
RESUMO
AVALIAO DAS ATIVIDADES ANTIMICROBIANA E ANTIOXIDANTE DOS LEOS
ESSENCIAIS DAS FOLHAS DOS QUIMIOTIPOS I, II E III DE Lippia alba
(Mill.) N. E. Brown. Aluna: Andra Bessa Teixeira. Orientadora:
Profa. Dra. Ndia Accioly Pinto Nogueira. Co-Orientadora: Luzia
Kalyne Almeida Moreira Leal. Dissertao de Mestrado. Programa de
Ps-Graduao Em Cincias Farmacuticas. Departamento de Anlises Clnicas
e Toxicolgicas e Departamento de Farmcia. Universidade Federal do
Cear. A espcie Lippia alba (erva-cidreira) muito usada na medicina
popular. A composio de seu leo essencial apresenta variaes
quantitativas e qualitativas, levando classificao de diferentes
quimiotipos. Um rico potencial farmacolgico est relacionado ampla
variao na composio qumica desses leos, o que desperta o interesse
de pesquisadores em estabelecer explicaes cientficas para tais
atividades. O objetivo do trabalho foi avaliar as atividades
antimicrobiana e antioxidante dos leos essenciais dos quimiotipo I,
II e III, de folhas, de L. alba, bem como investigar suas possveis
relaes com a composio qumica de seus leos essenciais. A
caracterizao qumica dos constituintes dos leos essenciais foi
realizada utilizando a CG-MS, determinando-se a porcentagem dos
constituintes presentes nas amostras. O potencial antimicrobiano
dos leos foi determinado pelo mtodo de difuso em gar, e as CIM e
CLM pelos mtodos da microdiluio em caldo de cultura e do
plaqueamento em gar, respectivamente. A atividade antioxidante foi
avaliada pela dosagem de TBARS e pela determinao da atividade de
remoo de radicais livres pelo DPPH. Os leos essenciais das folhas
de L. alba foram reconhecidos pela presena de seus constituintes
majoritrios em quimiotipo I (citral-mirceno); quimiotipo II
(citral-limoneno) e quimiotipo III (carvona-limoneno). Os trs leos
essenciais apresentaram atividade sobre S. aureus, mesmo as
multirresistentes, e C. albicans. Para as bactrias Gram-negativas,
os trs quimiotipos apresentaram ao sobre o A. lwoffi; os
quimiotipos II e III inibiram o crescimento do A. baumannii; e
apenas o quimiotipo II foi que teve ao sobre E. coli ATCC 10536. As
mais baixas CIM e CLM obtidas para os leos essenciais dos
quimiotipos I, II e III, foram de 0,312 e 0,625mg/mL, 0,312 e
0,312mg/mL e 0,625 e 0,625mg/mL, respectivamente. A tcnica de
difuso em gar serviu como uma etapa preliminar na determinao do
potencial antimicrobiano e a determinao da CIM por diluio em caldo
acompanhada de leitura das densidades ticas das culturas, mostrou
valores de absorbncias semelhantes ao grupo controle positivo at
uma determinada concentrao e ento aumentaram, indicando um maior
crescimento microbiano. Os trs quimiotipos do OELA reduziram a
peroxidao lipdica induzida no hipocampo e crebro de ratos, contudo
no apresentaram atividade seqestradora de radicais livres
mensuradas atravs do teste do DPPH. Assim, os resultados sugerem
que os leos essenciais dos quimiotipo I, II e III de L. alba,
possuem excelente atividade antimicrobiana, principalmente sobre
S.aureus e C. albicans; que o mtodo de difuso um excelente mtodo de
triagem; que o mtodo da diluio, por inspeo visual e leitura de
absorbncia, permite determinar alem da CIM, a CLM e avaliar a
cintica de inibio de crescimento microbiano; o potencial
antioxidante mostrado pelo OELA no hipocampo e crtex de rato, torna
esses produtos uma ferramenta farmacolgica em potencial no
tratamento de doenas neurodegenerativas, contudo, para isso estudos
adicionais so necessrios; e que as diferenas na composio do leo um
fator que deve ser considerado importante nos estudos
farmacolgicos. Palavras-chave: Lippia, leo essencial, atividade
antimicrobiana, atividade antioxidante.
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10
ABSTRACT
EVALUATION OF ANTIOXIDANT AND ANTIMICROBIAL ACTIVITIES OF
ESSENTIAL OILS OF LEAVES OF CHEMOTYPE I, II AND III OF Lippia alba
(Mill.) N. E. Brown. Author: Andra Bessa Teixeira. Advisor: Prof.
Dr. Ndia Accioly Pinto Nogueira. Co-Advisor: Luzia Kalyne Almeida
Moreira Leal. Dissertation. Post-Graduate in Pharmaceutical
Sciences. Department of Clinical and Toxicological Analysis and
Department of Pharmacy. Federal University of Cear.
The species Lippia alba (erva cidreira) is widely used in folk
medicine. The composition of essential oil varies quantitative and
qualitative, leading to the classification of different chemotypes.
A rich pharmacological potential is related to the wide variation
in chemical composition of these oils, which arouses the interest
of researchers in establishing scientific explanations for such
activities. The objective of this study was to evaluate the
antimicrobial and antioxidant activities of essential oils of
chemotype I, II and III, leaves of L. alba, and to investigate
their possible relationships with the chemical composition of their
essential oils. The chemical characterization of constituents of
essential oils was performed using GC-MS by determining the
percentage of constituents present in the samples. The
antimicrobial activity of oils was determined by agar diffusion,
and MIC and CLM methods by microdilution broth culture and plated
on agar, respectively. The antioxidant activity was assessed by
measurement of TBARS and by determining the activity of removal of
free radicals by DPPH. Essential oils from leaves of L. alba were
recognized by the presence of its major constituents in chemotype I
(citral-myrcene), chemotype II (citral-limonene) and chemotype III
(carvone-limonene). The three essential oils showed activity
against S. aureus, even resistant, and C. albicans. For
Gram-negative bacteria, the three chemotypes present action on the
A. lwoffi; the chemotypes II and III inhibited the growth of A.
baumannii, and only the chemotype II was that acted on E. coli ATCC
10536. The lowest MIC obtained for CLM and essential oils of
chemotypes I, II and III were 0,312 and 0,625mg/mL, 0,312 and
0,312mg/mL and 0,625 and 0,625mg/mL, respectively. The diffusion
technique in agar served as a preliminary step in determining the
antimicrobial activity and MIC determination by broth dilution
accompanied by reading of optical densities of cultures showed
absorbance values similar to the positive control group by a
certain concentration and then increased indicating a higher
microbial growth. Three chemotypes of OELA reduced lipid
peroxidation induced in the hippocampus and brain of rats, but
showed no scavenging activity of free radicals measured by the DPPH
test. Thus, the results suggest that essential oils of chemotype I,
II and III of L. alba, have excellent antimicrobial activity,
especially on S. aureus and C. albicans, whereas the diffusion
method is an excellent screening method, the dilution method, by
visual inspection and reading of absorbance, in addition to
determine the MIC, the CLM and evaluate the kinetics of inhibition
of microbial growth, the antioxidant potential shown OELA by the
hippocampus and cortex of rats makes these products a potential
pharmacological tool in the treatment of neurodegenerative
diseases, however, for that additional studies are needed, and that
differences in the composition of the oil is a factor to be
considered important in studies pharmacological. Key-words: Lippia,
essential oil, activity antimicrobial, antioxidant activity.
-
11
LISTA DE ABREVIATURAS
ATCC American Type Culture Collection
BHI Brain Heart Infusion
CIM Concentrao Inibitria Mnima
CLM Concentrao Letal Mnima
CLSI Clinical and a Laboratory Standards Institute
CG-MS Cromatografia gasosa com deteco por espectrometria de
massas
DPPH 2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl
EPM Erro Padro Mdio
HI Halo de inibio
MDA Malonildialdedo
OELA leo essencial de Lippia alba N.E.Brown
TBARS Substncias reativas do cido tiobarbitrico
ANOVA Anlise de Variao
-
12
LISTA DE FIGURAS
Figura 01: Fluxograma da tcnica de difuso em poo.
55
Figura 02: Fluxograma da tcnica de microdiluio em caldo para a
determinao da
CIM.
61
Figura 03: Fluxograma da tcnica de Pour-Plate para a determinao
da CLM.
63
Figura 04: Fluxograma da dosagem das substncias reativas de cido
tiobarbitrico.
65
Figura 05: Fluxograma da dosagem das substncias reativas de cido
tiobarbitrico
(continuao).
66
Figura 06: Fluxograma do ensaio do radical livre DPPH
68
Figura 07: Cromatograma do leo essencial das folhas de Lippia
alba N. E. Br.,
quimiotipo I, realizado atravs da cromatografia gasosa com
deteco por
espectrometria de massas (CG-MS) (ADAMS, 2001).
73
Figura 08: Cromatograma do leo essencial das folhas de Lippia
alba N. E. Br.,
quimiotipo II, realizado atravs da cromatografia gasosa com
deteco por
espectrometria de massas (CG-MS) (ADAMS, 2001).
74
Figura 09: Cromatograma do leo essencial das folhas de Lippia
alba N. E. Br.,
quimiotipo III, realizado atravs da cromatografia gasosa com
deteco por
espectrometria de massas (CG-MS) (ADAMS, 2001).
75
Figura 10: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
S. aureus ATCC 6538P
determinados pelo mtodo de difuso em gar.
82
Figura 11: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
C. albicans ATCC
-
13
10231 determinados pelo mtodo de difuso em gar.
82
Figura 12: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
E. coli ATCC 10536
determinados pelo mtodo de difuso em gar.
83
Figura 13: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
A. lwoffi determinados
pelo mtodo de difuso em gar.
85
Figura 14: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
A. baumannii
determinados pelo mtodo de difuso em gar.
85
Figura 15: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
S. aureus 1 determinados
pelo mtodo de difuso em gar.
86
Figura 16: Dimetro dos halos de inibio de crescimento microbiano
pelos leos
essenciais das folhas de L. alba, quimiotipos I, II e III sobre
S. aureus 2 determinados
pelo mtodo de difuso em gar.
86
Figura 17: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo I, sobre S. aureus ATCC 6538P.
91
Figura 18: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo I, sobre C. albicans ATCC
10231.
91
Figura 19: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo I, sobre de S. aureus 1.
92
Figura 20: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo I, sobre S. aureus 2.
92
-
14
Figura 21: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo I, sobre A. lwoffi.
93
Figura 22: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre S. aureus.
94
Figura 23: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre C. albicans.
94
Figura 24: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre de E. coli.
95
Figura 25: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre de A. lwoffi.
95
Figura 26: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre A. baumannii.
96
Figura 27: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre S. aureus 1.
96
Figura 28: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo II, sobre S. aureus 2.
97
Figura 29: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo III, sobre S. aureus.
98
Figura 30: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo III, sobre C. albicans.
98
Figura 31: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo III, sobre S. aureus 1.
99
-
15
Figura 32: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo III, sobre S. aureus 2.
99
Figura 33: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo III, sobre de A. lwoffi.
100
Figura 34: Cintica da inibio do crescimento microbiano do leo
essencial das
folhas de L. alba, quimiotipo III, sobre de A. baumannii.
100
Figura 35: Atividade antioxidante do leo essencial das folhas de
Lippia alba,
quimiotipo I, II e III determinado atravs da dosagem de
substncias reativas do
cido tiobarbitrico (TBARS) (AGAR et al., 1999).
102
Figura 36: Atividade antioxidante do leo essencial das folhas de
Lippia alba,
quimiotipo I, determinado pelo mtodo de DPPH (SAINT-CRICQ DE
GAULEJAC
et al., 1999).
103
Figura 37: Atividade antioxidante do leo essencial das folhas de
Lippia alba,
quimiotipo II, determinado pelo mtodo de DPPH (SAINT-CRICQ DE
GAULEJAC
et al., 1999).
104
Figura 38: Atividade antioxidante do leo essencial das folhas de
Lippia alba,
quimiotipo III, determinado pelo mtodo de DPPH (SAINT-CRICQ DE
GAULEJAC
et al., 1999).
104
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16
LISTA DE FOTOS
Foto 01: Espcie Lippia alba N.E. Brown cultivada no Horto de
Plantas Medicinais
Prof. Francisco Jos de Abreu Matos da Universidade Federal do
Cear: a: L. alba
quimiotipo I; b: L. alba quimiotipo II e c: L. alba quimiotipo
III
49
Foto 02: Semeadura das suspenses bacterianas na superfcie de gar
Mueller-Hinton.
56
Foto 03: Confeces de poos de 5mm de dimetro interno no gar com
auxlio de
um perfurador.
56
Foto 04: Remoo do gar com auxlio de uma pina para a formao dos
poos.
57
Foto 05: Aplicao de volumes de 25L dos leos essenciais de folhas
de L. alba em
diferentes concentraes.
57
Foto 06: Leitura das placas e interpretao dos resultados.
58
Foto 07: Ensaio de difuso em gar do leo essencial das folhas de
L. alba, quimiotipo II,
sobre a cepa de S. aureus.
78
Foto 08: Ensaio de difuso em gar do leo essencial das folhas de
L. alba, quimiotipo II,
sobre a cepa de P.aeruginosa.
78
Foto 09: Ensaio de microdiluio em caldo mostrando a CIM
detectado a olho nu
(ausncia de turvao visvel).
88
-
17
LISTA DE TABELAS
Tabela 01: Perfil de resistncia aos antibiticos das cepas de
origem hospitalar obtidas
de diferentes stios anatmicos.
52
Tabela 02: Rendimento mdio dos leos essenciais das folhas de
Lippia alba N.E.
Brown, quimiotipos I, II e III, extrado pela tcnica de destilao
com arraste de vapor
dgua.
71
Tabela 03: Porcentagens dos componentes qumicos dos leos
essenciais das folhas de
Lippia alba N. E. Br., quimiotipos I, II e III realizado atravs
da cromatografia gasosa
com deteco por espectrometria de massas (CG-MS).
76
Tabela 04: Potencial antimicrobiano dos leos essenciais de
folhas da Lippia alba N.E.
Brow, quimiotipos I, II e III, sobre cepas microbianas
originrias da ATCC,
determinado pela tcnica de difuso em gar (CLSI 2003).
79
Tabela 05: Potencial antimicrobiano dos leos essenciais de
folhas da Lippia alba
N.E. Brow, quimiotipos I, II e III, sobre cepas microbianas
multirresistentes de origem
hospitalar, determinado pela tcnica de difuso em gar (CLSI
2003).
80
Tabela 06: Concentrao Inibitria Mnima (CIM) e Concentrao Letal
Mnima
(CLM) dos leos essenciais de folhas de Lippia alba N.E. Brown,
quimiotipos I, II e III
da sobre cepas microbianas originrias da ATCC e cepas
microbianas multirresistentes
de origem hospitalar, determinado pela tcnica da microdiluio em
caldo de cultura
(CLSI, 2003) e de plaqueamento em meio slido (BARON et al.,
1994).
89
Tabela 07: Atividade antioxidante pelo mtodo de DPPH expresso em
percentagem de
inibio dos leos essenciais das folhas de L. alba, quimiotipo I,
II e III.
105
-
18
SUMRIO
1 INTRODUO 1.1 Consideraes Gerais 22 1.2 leos essenciais 24 1.3
Antimicrobianos e resistncia bacteriana 26 1.4 Antimicrobianos de
origem vegetal 29 1.5 Espcies Reativas de Oxignio e Estresse
Oxidativo 32 1.6 Estresse Oxidativo e Doenas Neurodegenerativas 34
1.7 A Famlia Verbanaceae e o gnero Lippia 36 1.8 A espcie Lippia
alba (Mill) N. E. Brown e seus quimiotipos 38
1.9 Aplicaes e propriedades biolgicas da Lippia alba 41
1.10 Plantas medicinais: a importncia e necessidade de
estudos
multidisciplinares
44
2 OBJETIVOS
2.1 Objetivo Geral 47
2.2 Objetivos Especficos 47
3 MATERIAIS E MTODOS
3.1 Material botnico 49
3.2 leo essencial 50
3.2.1 Extrao do leo essencial de folhas de L. alba 50
3.2.2. Anlise do leo essencial 50
3.2.3 Preparao das diluies seriadas dos leos essenciais de
folhas de L. alba 50
3.3 Cepas Microbianas 51
3.3.1 Cepas microbianas ATCC 51
3.3.2 Cepas microbianas multirresistentes isoladas de espcimes
clnicos 51
3.3.3 Manuteno das cepas microbianas 51
3.4 Determinao do Potencial Antimicrobiano dos leos Essenciais
de Folhas
da L. alba
53
3.4.1 Determinao da atividade antimicrobiana 53
3.4.2 Determinao da concentrao inibitria mnima CIM 59
3.4.2.1 Confirmao do tamanho do inoculo microbiano. 62
3.4.3 Determinao da concentrao letal mnima CLM 62
-
19
3.5 Avaliao da atividade antioxidante, in vitro, dos leos
essenciais de folhas
da L. alba
64
3.5.1 Avaliao do efeito dos leos essncias das folhas de L. alba,
quimiotipos
I, II e III, sobre a peroxidao lipdica induzida pelo choque
trmico em
crebro de ratos: dosagem de substncias reativas do cido
tiobarbitrico
64
3.5.2 Ensaio do radical livre DPPH 67
3.6 Anlise Estatstica 69
3.7 Comit de tica 69
4 RESULTADOS
4.1 Avaliao do rendimento mdio e caracterizao qumica dos
constituintes
dos leos essenciais das folhas de Lippia alba N.E.Brown,
quimiotipos I, II e III.
71
4.1.1 Rendimento mdio dos leos essenciais das folhas de Lippia
alba,
quimitipos I, II e III.
71
4.1.2 Composio qumica dos constituintes dos leos essenciais das
folhas de
Lippia alba, quimitipos I, II e III.
72
4.2 Avaliao do potencial antimicrobiano, determinao da
Concentrao
Inibitria Mnima (CIM) e da Concentrao Letal Mnima (CLM) dos
leos
essenciais das folhas de Lippia alba, quimiotipos I, II e
III.
77
4.2.1 Potencial antimicrobiano dos leos essenciais das folhas de
Lippia alba,
quimitipos I, II e III determinado pelo mtodo de difuso em gar
(CLSI,
2003).
77
4.2.2 Concentrao Inibitria Mnima (CIM) e Concentrao Letal
Mnima
(CLM) dos leos essenciais das folhas de Lippia alba, quimiotipos
I, II e III
determinadas pelos mtodos de microdiluio em caldo de cultura
(CLSI,
2003) e plaqueamento em meio slido (BARON et al., 1994).
87
4.3 Avaliao da atividade antioxidante dos leos essenciais das
folhas de
Lippia alba, quimiotipos I, II e III.
101
4.3.1 Atividade antioxidante dos leos essenciais das folhas de
Lippia alba,
quimiotipos I, II e III determinado atravs da dosagem de
substncias reativas
do cido tiobarbitrico (TBARS) (AGAR et al., 1999).
101
4.3.2 Atividade antioxidante dos leos essenciais das folhas de
Lippia alba,
quimiotipos I, II e III determinado pelo mtodo de DPPH
(SAINT-CRICQ DE
GAULEJAC et al., 1999).
103
-
20
5 DISCUSSO
5.1 Avaliao do rendimento mdio e caracterizao qumica dos
constituintes
dos leos essenciais das folhas de Lippia alba N.E.Brown,
quimiotipos I, II e III.
107
5.2 Avaliao do potencial antimicrobiano, determinao da
Concentrao
Inibitria Mnima (CIM) e da Concentrao Letal Mnima (CLM) dos
leos
essenciais das folhas de Lippia alba, quimiotipos I, II e
III.
110
5.3 Avaliao da atividade antioxidante dos leos essenciais das
folhas de
Lippia alba, quimiotipos I, II e III.
121
6 CONCLUSO 124
7 REFERNCIAS 127
-
21
INTRODUO
-
22
1 INTRODUO
1.1 Consideraes Gerais
A busca de novos medicamentos em plantas hoje a
esperana mais concreta para pacientes que possuem doenas
graves.
A alternativa mais rpida e barata so as plantas que produzem
substncias qumicas que podem ser usadas como medicamentos.
Partindo de vegetais, as chances de acertos so de uma para
cinco
mil tentativas (FERESIN et al, 2001).
A utilizao da fitoterapia no nova, se tem demonstrado factos que
indicam
que desde o ano de 2100 A.C. a civilizao mesopotmica utilizava
as plantas medicinais.
Hoje em dia, no existe dvida sobre a importncia das plantas e
apesar do desenvolvimento
alcanado pela sntese qumica, estas constituem um arsenal de
substncias biologicamente
ativas. As plantas medicinais tm um papel importante no cuidado
da sade das pessoas no
mundo. A sociedade humana, em todas as pocas, tem acumulado um
vasto arsenal e
conhecimento tradicional sobre o uso das plantas para fins
medicinais.
O homem moderno pode ser compreendido e diferenciado das demais
pocas por
seu elevado consumo de medicamentos e conseqentemente, a procura
do mercado mundial
por produtos de origem natural, em substituio aos sintticos,
aumenta consideravelmente.
O uso de produtos naturais como matria-prima para a sntese de
substncias
bioativas, especialmente frmacos, tem sido amplamente relatada
ao longo dos tempos
(SIMES, 2004). Essa importncia dos produtos naturais nas
formulaes de medicamentos
pode ser vista quando se considera que, mesmo nos pases
industrializados, 45% dos produtos
farmacuticos provm de produtos naturais e essa proporo ainda
maior nos pases
subdesenvolvidos (HOLTEZ et al, 2002).
Nos ltimos anos, inmeras pesquisas cientficas vm sendo
desenvolvidas nos
laboratrios de universidades e indstrias, em busca de explicaes
para usos populares de
plantas, assim como na esperana de encontrar novos compostos com
potenciais biolgicos
que possam ser utilizados na produo de novos medicamentos
(BOTELHO et al, 2007;
BARBOSA-FILHO et al, 2006; CAVALCANTI, 2006; ANDREGHTTI-FROHNER
et al,
2005; DUARTE, et al, 2005; PEREIRA, et al, 2004). A indstria
farmacutica tem buscado
-
23
incessantemente a descoberta de novas formulaes base de
extratos, leos ou mesmo
produtos sintticos.
O Brasil um pas com grande diversidade em sua flora, por isso
constitui um
grande campo de estudo e pesquisa, facilitando assim a
descoberta de princpios ativos
vegetais. Muitas espcies de vegetais so extensamente utilizadas
na medicina popular, com
diferentes finalidades teraputicas, levando-as a serem alvos
constantes e crescentes de
inmeros estudos, para o conhecimento de suas propriedades
qumicas e farmacolgicas, bem
como para a comprovao de sua segurana e do seu uso popular
(BARBOSA-FILHO et al,
2006; ROCHA et al, 2005).
Segundo a Organizao Mundial de Sade, 80% da humanidade no tm
acesso
ao atendimento primrio de sade, por estarem muitos distantes dos
centros de sade ou por
no possurem recursos para adquirir os medicamentos prescritos.
Para essa populao, as
terapias alternativas so as principais formas de tratamento, e
as plantas medicinais os
principais medicamentos (AKERELE, 1993).
Em muitas comunidades e grupos tnicos, o conhecimento sobre
plantas
medicinais simboliza geralmente o nico recurso teraputico. Nos
dias atuais, nas regies
mais pobres do Pas e at mesmo nas grandes cidades brasileiras,
plantas medicinais so
comercializadas em feiras livres, mercados populares e
encontradas em quintais residenciais.
MARTINS et al (1995) relatam um aumento acentuado do uso de
plantas
medicinais pela populao mundial e a tendncia de contnuo
crescimento. Segundo estudos
de SOUSA et al (1991) e MATOS (1998) o principal uso de plantas
medicinais no
tratamento das doenas respiratrias, seguido das inflamaes em
geral e das diversas formas
de doenas intestinais. Quanto a efetividades teraputicas dessas
plantas documentadas por
esses autores, muitas j possuem informaes farmacolgicas que
podem justificar o seu uso
popular. Assim, esse tipo de cultura medicinal desperta o
interesse de pesquisadores em
estudos para terapia natural envolvendo componentes de plantas
na rea farmacutica e as
pesquisas com esses produtos naturais assumem papel importante
para a sade humana.
No entanto, embora a Organizao Mundial de Sade reconhea que as
plantas
medicinais deveriam ser as melhores fontes para a obteno de uma
variedade de drogas, para
a utilizao de uma planta com finalidade teraputica, em nvel de
sade pblica,
fundamental o estabelecimento da segurana, eficcia e garantia de
qualidade das preparaes
(RATES, 2001).
-
24
1.2 leos essenciais
Desde muitos sculos atrs, os leos essenciais so relatados e
explorados.
Embora ainda hoje no se tenha documentado completamente o incio
exato, sabe-se que as
referncias histricas de obteno e utilizao desses leos esto
ligadas, originalmente, aos
pases orientais, com destaque para o Egito, Japo, China e ndia.
Acredita-se que os
primeiros usos dos leos essenciais tenham sido atravs de
blsamos, ervas aromticas e
resinas que eram usadas para embalsamar cadveres em cerimnias
religiosas a milhares de
anos atrs (SILVA-SANTOS, 2002; LAVABRE, 1992; BRAGA, 1971).
Aqui no Brasil, sua produo teve incio em 1927, tendo como base o
puro e
simples extrativismo de essncias nativas, como o pau-rosa (Aniba
rosaeodora). Sua
explorao foi tamanha que atualmente o Instituto Brasileiro do
Meio Ambiente e dos
Recursos Naturais Renovveis (IBAMA) colocou essa planta na lista
de espcies em perigo
de extino. No entanto, como atividade verdadeiramente
organizada, a produo de leos
essenciais no Brasil s foi consolidada basicamente na sua venda
voltada ao mercado externo,
com a obteno dos leos de menta, laranja, canela, eucalipto,
capim-limo e outros. Isto
ocorreu durante a Segunda Guerra Mundial, devido grande demanda
imposta pelas
indstrias do ocidente, que se viram privadas de suas
tradicionais fontes de suprimento, em
virtude da desorganizao do transporte e do comrcio (BRAGA,
1971).
O mercado internacional de leos essenciais corresponde
atualmente a US$ 1,8
bilhes, sendo que a participao do Brasil neste momento estimada
em apenas 1%,
principalmente em resposta exportao de leos de laranja, limo,
eucalipto, pau-rosa, lima
e alecrim-pimenta. As comunidades cientficas esto cada vez mais
organizadas e diversos
novos leos podem vir a contribuir para o quadro de exportao
(SILVA-SANTOS, 2002).
As denominaes leos essenciais ou leos etreos derivam de algumas
de suas
caractersticas fsico-qumicas, como por exemplo, a de serem
geralmente lquidos de
aparncia oleosa temperatura ambiente, advindo da, a designao de
leo; por serem
solveis em solventes orgnicos apolares, como ter, sendo por
isso, chamado de leos
etreos (SIMES, 2004). No entanto, a principal caracterstica a
sua natureza voltil, por
evaporarem rapidamente quando expostos ao ar temperatura
ambiente e diferenciando,
assim, dos leos graxos ou fixos, que so misturas de substncias
lipdicas (LAVABRE,
1992). Outra importante caracterstica o aroma agradvel e intenso
da maioria dos leos
volteis, por isso, so chamados, tambm, de essncias (SIMES,
2004).
-
25
Os leos essenciais apresentam composies complexas, algumas
vezes, de
centenas de diferentes compostos qumicos, com ao sinrgica ou
complementar entre si. De
forma geral, so misturas complexas contidas em diversos rgos
vegetais e constitudas
principalmente de terpenos, sesquiterpenos, steres, alcoois,
fenis, aldedos, xidos,
perxidos, cetonas e cidos orgnicos. Em sua composio tambm so
encontrados
antibiticos, vitaminas, hormnios e anti-spticos (SIANI et al,
2000). Nessa mistura, tais
compostos apresentam-se em diferentes concentraes, normalmente,
um deles o composto
majoritrio, existindo outros em menores teores e alguns em
baixssimas quantidades (traos).
Os estudos relatam que a constituio qumica do leo essencial nem
sempre
constante, podendo variar significativamente, de acordo com o
processamento de colheita e
ps-colheita (parte da planta coletada, hora da coleta, poca do
ano), do material gentico da
planta (variedade do vegetal), bem como das condies de cultura e
desenvolvimento do
vegetal (tipo de solo e clima) (SIMES, 2004; LAVABRE, 1992),
tendo como conseqncia,
influencia diretamente no potencial farmacolgico dessas plantas
(MATOS, 2001).
A ampla variao qumica do leo essencial permite a separao das
espcies em
quimiotipos (QT) ou raas qumicas. A ocorrncia de quimiotipos
freqente em plantas ricas
em leos volteis e um termo aplicado a plantas da mesma espcie,
com a mesma aparncia
externa (botanicamente idnticas), mas que diferem, s vezes
consideravelmente, na
composio qumica dos leos essenciais (SIMES, 2004; CASTRO, 2001).
Por exemplo,
para Chrysanthemum vulgare (L.) Berhn, popularmente conhecida
como catinga-de-mulata,
apenas na Hungria, foram caracterizados 26 quimiotipos, com
diferenas significativas na
composio de seus leos (TEUSCHER, 1990).
Atualmente grande o nmero de plantas conhecidas para a produo de
leos
essenciais, representando, assim, uma importncia econmica
crescente. Os diversos efeitos
de compostos extrados de leos essenciais de plantas levam sua
aplicao em vrias reas
comerciais. Tradicionalmente so empregados como matrias-primas
nas indstrias
farmacuticas, de alimentos, de cosmticos, perfumes e de higiene
pessoal, bem como na
aromatizao de alimentos e bebidas (SILVA-SANTOS, 2002). Embora a
utilizao maior
ocorra nas reas de alimentos (condimentos e aromatizantes de
alimentos e bebidas) e
cosmticos (perfumes e produtos de higiene), tambm em farmcias as
drogas vegetais ricas
em leos volteis so empregadas in natura para a preparao de
infuses e/ou sob a forma de
preparaes galnicas simples (SIMES, 2004).
-
26
Muitos estudos tm comprovado as propriedades farmacolgicas de
compostos
extrados de leos essenciais de plantas. Pode ser citada como
propriedades farmacolgicas
relativamente bem estabelecidas a ao carminativa do leo de
funcho, erva-doce, camomila,
menta; a ao sobre o Sistema Nervoso Central, como estimulante
(leos volteis contendo
cnfora), depressor (melissa, capim-limo) ou mesmo provocando
convulses em doses
elevadas (slvia, canela); a ao anestsica local do leo do
cravo-da-ndia pelo seu alto teor
em eugenol e a ao antiinflamatria do leo de camomila, que contm
azulenos (SIMES,
2004).
1.3 Antimicrobianos e resistncia bacteriana
As primeiras descries sobre o uso de antimicrobianos datam de
3.000 anos
atrs, quando mdicos chineses usavam bolores para tratar edemas
inflamatrios e feridas
infeccionadas, e os sumrios recomendavam um emplasto com uma
mistura de vinho, cerveja,
zimbro e ameixas (TAVARES, 2001).
No incio do sculo XX, surgiram os primeiro quimioterpicos de ao
sistmica.
Os esforos do cientista alemo Paulo Ehrlich, considerado pai da
quimioterapia, que
descobriu o salvarsan (sal do arsnico) usado no tratamento da
sfilis e da febre recorrente,
revolucionaram a teraputica das infeces e provocaram o
desenvolvimento da pesquisa,
objetivando a obteno de novas substncias medicamentosa
sintetizadas em laboratrios
(TORTORA, 2003).
Outro marco importante na histria dos antimicrobianos foi a
descoberta por
Alexander Fleming em 1928 da penicilina, o primeiro antibitico
de utilidade clnica. Fleming
estudando culturas de Staphylococcus aureus observou que uma das
culturas tinha sido
contaminada por bolores e em volta dessas colnias no havia mais
crescimento bacteriano.
Ento Fleming e seu colega, Dr. Pryce, descobriram que a
substncia responsvel pela
inibio do crescimento do S.aureus era produzida pelo fungo
Penicillium nonatum, a qual foi
denominada de penicilina (KONEMAN et al, 2001).
Vrias substncias de origem vegetal, animal e mineral foram
utilizadas na
Antiguidade e na Idade Mdia para o tratamento das conhecidas
pestes, que eram diversas
epidemias de origem microbiana. Esses produtos, usados de forma
emprica, sabe-se hoje que
apresentam propriedades teraputicas antiinfecciosas devido a
determinadas substncias
presentes em sua composio (TAVARES, 2001).
-
27
O advento dos antibiticos e dos quimioterpicos permitiu o
controle e cura das
doenas infecciosas, mudando a evoluo natural dessas doenas de
forma marcante. No
entanto, o uso indiscriminado de antimicrobianos, provocou a
partir da dcada de 70, um
processo de acelerao do aparecimento de cepas bacterianas
resistentes aos antimicrobianos,
principalmente nos ambientes hospitalares (LINARES-RODRIGUES et
al, 2005;
WAGENLEHNER et al, 2005).
O termo resistncia se refere aqueles microrganismos que tem a
capacidade de
crescer in vitro em presena das concentraes que esta droga
atinge no sangue. A resistncia
pode ser de dois tipos: natural ou intrnseca e adquirida
(TORTORA, 2003; KONEMAN et al,
2001; TAVARES, 2001;).
A resistncia natural ou intrnseca faz parte das caractersticas
biolgicas
primitivas dos microrganismos e observada regularmente em uma
determinada espcie
bacteriana em relao a diferentes antimicrobianos. Resulta de
genes cromossmicos que
codificam a existncia, na clula, de estruturas ou mecanismos que
impedem o antibitico de
agir em seu receptor ou que codificam a falta do sitio de ao da
droga ou que determinam a
existncia de receptores inadequados para a ligao com uma
substancia especifica
(TORTORA, 2003; KONEMAN et al, 2001; TAVARES, 2001).
A resistncia adquirida a uma determinado antimicrobiano aquela
que surge
em uma bactria primitivamente sensvel a este mesmo
antimicrobiano. Essa resistncia
acontece devido a mutaes que ocorrem no microrganismo durante
seu processo reprodutivo
e resulta de erros de cpia na seqncia de bases que formam o DNA
ou por meio de
transferncias do material gentico, em que consiste na importao
de genes causadores da
resistncia, pelos mecanismos de transduo, transformao e
conjugao, que,
freqentemente, envolve genes situados em plasmdios e transposons
(TORTORA, 2003;
KONEMAN et al, 2001; TAVARES, 2001).
Os diferentes mecanismos de resistncia podem tornar a cepa
microbiana capaz de
resistir parcial ou totalmente ao, no apenas de um antibitico,
mas de vrios,
pertencentes a uma mesma classe e s vezes a classes diferentes
(OTAIZA, 2002).
A resistncia das diversas espcies de microrganismos aos
antimicrobianos
extremamente varivel entre os pases, regies e origem hospitalar
ou comunitria das
estirpes. Algumas espcies apresentam resistncia amplamente
difundida em todo o mundo,
como o caso do Staphylococcus aureus (CARSON et al, 1995).
-
28
Os estafilococos vm mostrando crescente resistncia a
beta-lactmicos beta-
lactamase-resistentes, como o caso dos S. aureus resistente a
meticilina - MRSA (Methicilin
Resistant Staphylococcus aureus) ou a oxacilina (Oxacilin
Resistant Staphylococcus aureus)
ORSA, principalmente em hospitais de grande porte, com servios
de emergncia abertos ao
pblico e centros de referencias para pacientes infectados.
reconhecido como um dos mais
importantes patgenos causadores de infeces nosocomiais em todo o
mundo e o surgimento
e disseminao de cepas cada vez mais virulentas e
multirresistentes um fator preocupante
(TAVARES, 2001).
Um exemplo, dessa preocupao, que em 2002 j foram confirmados
nos
Estados Unidos da Amrica (EUA) tanto em laboratrio como em
clnica, linhagens mutantes
com sensibilidade reduzida vancomicina (FRIDKIN, 2002), como
tambm, nesse mesmo
ano, descreve o primeiro caso documentado de infeco causada por
S. aureus com resistncia
completa a vancomicina (VRSA) (Vancomicina MIC > 32mcg/mL)
(SIEVERT et al, 2002).
Alm do S. aureus, dentre os microrganismos que sofrem grandes
modificaes
na sensibilidade aos antimicrobianos com o correr dos anos,
destacam-se as enterobactrias,
como a Escherichia coli e Klebsiella pneumoniae, a Pseudomona
aeruginosa, o Acinetobacter
baumannii, os fungos e as leveduras do gnero Candida,
especialmente a Candida albicans
(KONEMAN et al, 2001, TAVARES, 2001 CHARTONE-SOUZA et al, 1998).
Esses
patgenos representam cada vez mais um desafio emergente ao
tratamento das infeces
causadas por eles.
Em um estudo feito por MENEZES e colaboradores em 2004,
determinando o
perfil de resistncia de A.baumannii a antimicrobianos nas
unidades de terapia intensiva e
semi-intensiva do Hospital Geral de Fortaleza, verificaram que
62 (14%) das 437 amostras
analisadas foram positivas para essa bactria, sendo o maior
nmero de isolados do aspirado
traqueal e sangue. Quanto ao perfil de resistncia observaram que
as cepas isoladas de
cateteres foram resistentes a quase todos os antimicrobianos,
com exceo das quinolonas e
imipenen (MENEZES et al, 2004).
Atualmente, o problema de resistncia tornou-se mais grave devido
s
dificuldades para a descoberta e o lanamento de novos
antimicrobianos no mercado, pois so
necessrios muitos anos e um custo altssimo para que um
antimicrobiano esteja disposio
no mercado, o que leva a esses produtos estarem cada vez mais
escassos e mais caros.
BAQUERO e BLZQUEZ (1997) relatam o perigo do retorno a uma era
pr-
antibitico, particularmente considerando que nenhuma nova classe
de antibitico foi
-
29
descoberta nos ltimos anos, apesar das intensas pesquisas das
indstrias farmacuticas e
CHARTONE-SOUZA (1998) confirma que uma das alternativas usadas
pelas indstrias
farmacuticas tem sido a modificao qumica da estrutura dos
antimicrobianos j existentes,
na tentativa de torn-los mais eficientes ou de recuperar a
atividade prejudicada pelos
mecanismos bacterianos de resistncia.
Dessa forma, esses dados antecipam os gravssimos problemas que
podero trazer
essas cepas microbianas resistentes, caso no surjam novos
antimicrobianos ou terapias
alternativas para combat-las.
1.4 Antimicrobianos de origem vegetal
O problema da resistncia microbiana crescente e a
perspectiva futura do uso de drogas antimicrobianas,
incerta.
(NASCIMENTO et al, 2000).
Como descrito anteriormente, um dos maiores problemas de sade
pblica
enfrentados nas ltimas dcadas consiste no agravamento da
resistncia a antimicrobianos em
populaes bacterianas e fngicas, principalmente em cepas de
origem hospitalar e que o
Brasil um rico ambiente para estudos com produtos naturais, os
quais constituem uma
importante fonte de novos compostos para serem utilizados na
teraputica. Nestes dois
aspectos, a busca por novas substncias antimicrobianas a partir
de fontes naturais vem
ganhando importncia e est cada vez mais intensificada.
Acredita-se que as plantas medicinais sejam as melhores fontes
de obteno
dessas novas drogas e muitos estudos tm sido conduzidos, em
diferentes partes do mundo
para comprovar sua eficincia. Muitas plantas so usadas por sua
atividade antimicrobiana, a
qual se deve a compostos sintetizados em seu metabolismo
secundrio (NASCIMENTO et al,
2000).
A atividade antimicrobiana de plantas medicinais tem sido
pesquisada em diversas
espcies e relatada em muitos pases como no Cuba, ndia, Mxico e
Malsia que possuem
uma flora diversificada e uma rica tradio na sua utilizao
(DUARTE et al, 2005, STASI et
al, 2002, NASCIMENTO et al, 2000).
No Brasil, essa realidade no diferente. especialmente um pas com
uma rica
biodiversidade e conhecimentos tradicionais abundantes, com
cultura comum do uso de
-
30
plantas medicinais, o que resulta no interesse da realizao de
importantes pesquisas sobre
atividade antimicrobiana de vegetais e o uso de componentes de
plantas nessa rea tem
aumentado gradualmente.
O uso de extratos vegetais e fitoqumicos com conhecida atividade
antimicrobiana
assume importante significado nos tratamentos teraputicos.
Muitas espcies vegetais so
reconhecidas por suas substncias ativas que apresentam atividade
antimicrobiana contra um
grande nmero de microrganismos, incluindo espcies resistentes a
antibiticos e antifngicos
(NASCIMENTO et al, 2000).
Em estudo realizado por SOUZA et al em 2004, foi avaliada a
atividade biolgica
de 49 plantas em farmcias comunitrias caseiras no Rio Grande do
Sul. De dezoito espcies
analisadas quanto a sua atividade antimicrobiana, onze
(Chaptalia mutans, Cordia
monosperma, Echinodorus grandiflorus, Eugenia uniflora, Leonurus
sibiricus, Luehea
divaricata, Malva sylvestris, Ocotea odorifera, Parapiptadenia
rigida, Pluchea sagittalis,
Psidium cattleyanum e Senna neglecta) inibiram no mnimo um dos
microrganismos testados.
Em outra pesquisa, foi analisada a atividade antimicrobiana do
extrato de 120
espcies de plantas de 28 diferentes famlias botnicas. Oitenta e
um desses extratos, obtidos
de 58 plantas, mostraram-se ativos contra S. aureus, enquanto
cinco extratos, de quatro
plantas, inibiram o crescimento de Pseudomonas aeruginosa
(SANTOS-FILHO et al, 1990).
BASTOS em 2007, estudando o uso de preparaes caseiras de plantas
medicinais
utilizadas no tratamento de doenas infecciosas, verificou que
das quarenta e cinco amostras
analisadas, 25 (55,6%) apresentaram atividade inibitria sobre o
crescimento de pelo menos
um dos microrganismos testados. Duas dessas amostras (rom e
cebolinha + pepaconha +
cumaru + beterraba + alho + mel de abelha) foram capazes de
inibir todas as cepas testadas;
as amostras de alfavaca + eucalipto e cebolinha branca +
eucalipto + aroeira + pepaconha
foram ativas contra Pseudomonas aeruginosa, microrganismo
bastante conhecido por sua
mltipla resistncia a drogas.
De um modo geral, um dos produtos vegetais que mais se destaca e
que se
apresenta como potencial fonte de compostos antimicrobianos so
os leos essenciais. J se
tem estabelecido cientificamente que 60% dos leos essenciais
possuem propriedades
antifngicas e 35% exibem propriedades antibacterianas (DAFERERA
et al, 2003). Neste
contexto, vrios estudos vm sendo conduzidos para avaliar e
comprovar cientificamente o
uso emprico para tal atividade, bem como para o desenvolvimento
de novos frmacos.
-
31
Em 2004, FARAGO e colaboradores analisaram a atividade
antibacteriana de
leos essenciais de Ocimum selloi Benth, conhecida popularmente
como alfavaca,
pertencentes s variedades estragol e eugenol. Os resultados in
vitro demonstraram que tanto
a variedade estragol como a eugenol inibiram o crescimento das
cepas de S.aureus ATCC
25923 e de E.coli ATCC 25922, mas que nenhuma teve ao contra
P.aeruginosa ATCC
27853.
PEREIRA e colaboradores (2004) analisaram a atividade
antibacteriana de leos
essenciais de Ocimum gratissimum L., Cybopogum citratus (DC)
Stapf. e Salvia officinalis L.
sobre 100 cepas de bactrias isoladas de indivduos da comunidade
com diagnstico de
infeco urinria. Os resultados mostraram ser a ao inibitria do
leo essencial de Salvia
officinalis L., superior as apresentadas pelos leos essenciais
extrados das outras ervas, tendo
eficcia de 100% sobre espcies dos gneros Klebsiella e
Enterobacter, 96% sobre
Escherichia coli, 83% sobre Proteus mirabilis e 75% sobre
Morganella morganii. Foi
verificado que os leos essenciais das outras duas espcies,
embora menos potentes que o leo
essencial de Salvia officinalis L., foram capazes de inibir o
crescimento de 16% das cepas
estudadas.
LIMA et al, 2006, avaliaram a atividade antifngica de leos
essenciais sobre
espcies de Candida (C. albicans, C. guilliermondii, C. krusei,
C. parapsilosis, C. stellatoidea
e C. tropicalis) e observaram que todos os leos essenciais
extrados de Cinnamomum
zeylanicum Blume, Citrus limon Risso, Eucalyptus citriodora HK,
Eugenia uniflora L.,
Peumus boldus Benth e Rosmarinus officinallis L. foram capazes
de inibir o crescimento de
pelo menos uma das cepas fngicas testadas e que os leos
essenciais de C. zeylanicum e P.
boldus inibiram o crescimento da maioria das cepas.
Muitos leos essenciais extrados apresentam atividade
antimicrobiana contra um
grande nmero de bactrias, incluindo espcies resistentes a
antibiticos e antifngicos,
podendo inibir tanto bactrias Gram-positivas quanto bactrias
Gram-negativas e ainda
leveduras e fungos filamentosos (CARSON et al, 1995). Segundo
DAFERERA et al (2003) o
uso de leos essenciais, como agentes antimicrobianos, oferece um
baixo risco de
desenvolvimento de resistncia microbiana, pois sendo misturas de
diferentes compostos, sua
atividade microbiana pode estar relacionada a diferentes
mecanismos de ao, o que dificulta
a adaptao dos microrganismos.
-
32
Nesse sentido, os leos essenciais assumem um importante papel no
combate ao
desenvolvimento de resistncia microbiana, levando a oportunidade
de serem encontrados
compostos com propriedades antimicrobianas, muitas vezes
superiores aos frmacos atuais.
1.5 Espcies Reativas de Oxignio e Estresse Oxidativo
O oxignio um composto essencial para os seres vivos. As molculas
de
oxignio diatmico na atmosfera terrestre so as maiores promotoras
de reaes nas clulas
vivas. Exceto aqueles organismos que so especialmente adaptados
para viver em condies
anaerbias, todos os animais e plantas requerem oxignio para uma
eficiente produo de
energia (HALLIWELL & GUTTERIDGE, 2000).
Cerca de 2% a 5 % do oxignio consumido, d origem a intermedirios
altamente
reativos, denominados Espcies Reativas de Oxignios (EROs). Estas
espcies incluem o
oxignio singlete (1O2), o radical nion superxido (O2--), o
perxido de hidrognio (H2O2),
radical hidroxila (OH ) entre outros (SALVADOR & HENRIQUES,
2004).
O Radical Livre qualquer tomo, molcula ou on que possui um ou
mais eltron
livre na sua orbita externa, o que caracteriza uma grande
instabilidade eltrica e capacidade
reativa, podendo reagir com qualquer composto que esteja prximo,
a fim de captar um
eltron desse composto para sua estabilizao. A maioria desses
radicais livres derivada do
metabolismo do O2 pelo organismo, pois em condies normais
inevitvel a produo das
EROs durante o processo de respirao celular que ocorre nas
mitocndrias das clulas, a fim
de gerar ATP. A mitocndria, que consome mais de 90% de oxignio,
a principal fonte de
espcies reativas de oxignio e de radicais livres (LEE et al,
2002).
Alm da respirao celular, as EROs tambm podem ser geradas pela
ativao dos
leuccitos, como parte da resposta imune, usadas contra bactrias
e fungos invasores do
organismo, produzindo ao lesiva a estes microrganismos, ou pela
oxidao exgena,
causada pela poluio, fumo, solventes orgnicos, pesticidas e
radiaes, por exemplo
(HALLIWELL, 2001; NISSEN et al, 2001).
Em concentraes fisiolgicas as EROs tem funes biolgicas
definidas, atuando
como mensageiros secundrios de sinalizao em mecanismos
celulares. Entretanto,
concentraes supra-fisiolgicas devem ser evitadas pelo organismo,
considerando que sua
reatividade traz conseqncias celulares deletrias, causando
oxidao de lipdios e protenas,
-
33
alteraes no DNA e a modificao nas bases e na modulao da expresso
gnica (SIES,
1991).
Para se defender da toxidade das EROs, as nossas clulas saudveis
apresentam
mecanismos especfico, que constituem o potencial biolgico
antioxidante. A condio
fisiolgica da clula exige equilbrio entre os sistemas
pr-oxidante e antioxidante. O
desequilbrio do estado estacionrio em favor do sistema
pr-oxidante promove injurias
celulares, sendo a condio denominada de estresse oxidativo
(SALVADOR &
HENRIQUES, 2004).
O estresse oxidativo pode ser definido como o acumulo
intracelular de nveis
txicos de espcies reativas de oxignio por meio de saturao do
sistema antioxidante,
causando danos moleculares s estruturas celulares, com
conseqente alterao funcional e
prejuzo das funes vitais (DROGE, 2002).
Da ao das EROs sobre cidos nuclicos, decorrem modificaes
estruturais da
molcula do DNA, implicando alteraes tais como mutaes mutagnicas;
sobre
carboidratos (principalmente em glicosaminoglicanos) so capazes
de provocar quebra nas
cadeias dos carboidratos resultando em alteraes no metabolismo
energtico celular e em
perda do reconhecimento do contato celular, podendo levar a
divises celulares no limitadas
pelo contato de clulas vizinhas; em protenas causam fenmeno
conhecido com peroxidao
protica, responsvel por quebra de cadeias polipeptdicas, perda
ou alterao de atividade
enzimtica, levando em alteraes funcionais e estruturais nas
clulas; sobre lipdeos resulta
em peroxidao lipdica, que principalmente responsveis por
alteraes da permeabilidade
da membrana celular. Desta forma, o resultado do estresse
oxidativo , com freqncia, a
morte celular (AUDDY et al, 2003, DROGE, 2002).
Dessa forma, o sistema de defesa antioxidante, mesmo presente em
baixas
concentraes em relao ao substrato oxidante, necessrio e capaz de
inibir ou retardar as
taxas de oxidao. Esse sistema antioxidante pode ser no enzimtico
ou enzimtico e no se
tornam radicais livres pela doao de eltrons, pois eles so
estveis em ambas as formas
(SIES, 1991).
Os antioxidantes enzimticos so compostos pelas seguintes
enzimas: superxido-
dismutase (SOD), catalase e glutationa-peroxidase (GSH-Px). A
catalase, que uma enzima
bastante abundante encontrada no sangue, medula ssea, rim e
fgado, tem a funo de reduzir
o H2O2 em H2O e O2 (HALLIWELL, 2001). A enzima
superxido-dismutase acelera a
dismutao do on superxido O2- em perxido de hidrognio (H2O2) na
presena do prton
-
34
H+. E o sistema glutationa, atua no combate da reduo do perxido
de hidrognio (H2O2),
convertendo a glutationa reduzida (GSH) em oxidada (GSSG). Essa
reao catalisada pela
enzima glutationa-peroxidase (GSH-Px). A recuperao da glutationa
reduzida feita pela
enzima glutationa-redutase (GSH-Rd) (DROGE, 2002).
Quanto ao sistema de defesa antioxidante no-enzimticos, os
principais so o -
caroteno (vitamina A), cido ascrbico (vitamina C), -tocoferol
(vitamina E), glutationa,
cido rico, bilirrubina, zinco, cobre e os bioflavonides,
derivados de plantas
(HALLIWELL, 2001).
O estresse oxidativo tem sido implicado como mediadores de vrias
patologias
tais como doenas cardiovasculares, cncer, artrite reumatide, a
distrofia muscular,
desordens neurolgicas e processos de envelhecimento (NORDBERG
& ARNR, 2001). Os
radicais livres correlacionados com essas doenas atuam, no como
agentes etiolgicos e sim
como fatores que participam diretamente dos mecanismos
fisiopatolgicos, os quais
determinam a continuidade e as complicaes de diversos estados
patolgicos (ROVER
JUNIOR et al., 2001).
1.6 Estresse Oxidativo e Doenas Neurodegenerativas
O estresse oxidativo um importante processo que vem sendo
relatado na
patognese de algumas condies que afetam o Sistema Nervoso
Central (SNC), contribuindo
para o desenvolvimento de doenas neurodegenerativas tais como
epilepsia, esclerose
mltipla, demncias e doenas de Alzheimer e de Parkinson (SALVADOR
& HENRIQUES,
2004) que esto entre as doenas neurodegenerativas mais
comuns.
Com a tendncia de aumento do tempo de vida mdio da populao, a
prevalncia
dessas doenas tambm tem aumentado. As causas das desordens
neurodegenerativas no
esto totalmente esclarecidas, e, com exceo da doena de
Parkinson, no existem
tratamentos que alterem significativamente a progresso dessas
patologias. As chances de
apresentar Alzheimer aumentam significativamente aps os 60 anos,
com uma prevalncia de
47% em pacientes com mais de 85 anos (EVANS et al, 1989). Dessa
forma, alm da idade as
disfunes mitocondriais e o estresse oxidativo possuem um papel
importante na morte
neuronal caracterstica dessas doenas (ESPOSITO et al, 2002).
De fato, isso se torna facilmente compreensvel, visto que o
Sistema Nervoso
Central altamente sensvel ao estresse oxidativo. O crebro
altamente dependente de
-
35
energia para seu funcionamento normal e a mitocndria a estrutura
intracelular responsvel
pela produo dessa energia. Para a produo eficiente de energia na
forma de ATP, a
mitocndria possui uma alta demanda por oxignio, j que utiliza
uma grande quantidade de
O2 em uma massa de tecido relativamente pequena, o que torna
esse tecido altamente
susceptvel ao das espcies reativas (HALLIWELL, 2001; HALLIWELL
&
GUTTERIDGE, 2000).
Outros fatores tambm contribuem para essa susceptibilidade como
o alto
contedo lipdico, principalmente de cidos graxos poliinsaturados,
os quais servem de
substratos para a peroxidao lipdica; os altos nveis de ferro
presentes no crebro, os quais
favorecem a lipoperoxidao; o baixo potencial antioxidante, sendo
os nveis de catalase
particularmente baixos em muitas regies cerebrais; e a presena
de neurotransmissores auto-
oxidveis, entre outros fatores (HALLIWELL & GUTTERIDGE,
2000).
Entre as evidencias que mostram o envolvimento de espcies
reativas em doenas
neurodegenerativas esto o aumento dos parmetros do estresse
oxidativo no crebro,
incluindo nveis aumentado de cido malonildialdedo (MDA),
4-hidroxinonenal (HME) e a
oxidao protica de grupos carbonil e 3-nitrotirosina, assim como
concentraes reduzidas
de antioxidantes no enzimticas GSH e ascorbato, e das enzimas
antioxidantes catalase e
glutationa peroxidase (GSH-PX) (JENNER & OLANOW, 1996; PERRY
et al, 1982).
Na doena de Alzheimer, a mais comum dentre as doenas
neurodegenerativas,
possvel que o estresse oxidativo tenha um papel chave na morte
neuronal. Estudos clnicos
mostraram nveis elevados de peroxidao lipdica e das enzimas
catalase, SOD e GSH-Px em
vrias regies do crebro de pacientes com Alzheimer. Por outro
lado, as concentraes
intracelulares de glutationa (GSH), apresentaram-se diminuda.
Nveis altos de nitrotirosina,
um aminocido oxidado, tm sido encontrados em neurnios de
pacientes com Alzheimer
(SALVADOR & HENRIQUES, 2004).
Na doena de Parkinson, foram observadas evidncias do aumento do
estresse
oxidativo em autpsias da substncia nigra do crebro, indicando
que esse tem papel
importante na degenerao de neurnios (PARASKEVAS et al, 2003).
Levantou-se a
possibilidade de que um estresse oxidativo induzido pela
dopamina possa ser base da
vulnerabilidade dos neurnios dopaminrgicos na Doena de
Parkinson. Na degradao da
dopamina, ocorre a produo de perxido de hidrognio (H2O2), que na
presena de Fe2+,
abundante nos gnglios da base, pode gerar radicais livres
hidroxil (OH-). Caso, os
mecanismos protetores fossem inadequados, esses radicais livres
poderiam levar a
-
36
degenerao de neurnios dopaminrgicos (GOODMAN & GILMAN,
1996). J RIOBO e
colaboradores (2002) propem um papel direto de xido ntrico, e de
seu produto,
peroxinitrito, na fisiopatologia da Doena de Parkinson.
Assim, devemos salientar que as EROs podem ser causa ou
conseqncia de
doenas humanas associadas ao estresse oxidativo. Por isso,
antioxidantes sintticos e naturais
tem sido recomendados para o alvio dos sinais e sintomas destas
doenas e, mesmo, para
bloquear sua evoluo. No entanto, muito deve ser investigado
acerca do benefcio desses
antioxidantes exgenos, para garantir a dose, a via de
administrao e qual o antioxidante
ideal para cada doena.
Neste contexto, a biodiversidade brasileira, em particular a
flora do Nordeste, tem
sido amplamente investigada quanto ao seu potencial teraputico
nas doenas neurolgicas.
De fato, os produtos naturais parecem ser uma fonte promissora
de substancias com atividade
antioxidante e pesquisas realizadas nos ltimos anos evidenciam
que o enriquecimento dos
sistemas orgnicos com antioxidantes naturais
1.7 A famlia Verbenaceae e o gnero Lippia
As Verbenaceae constituem uma famlia de plantas presentes em
praticamente
todos os ecossistemas terrestres, sendo uma das cinco mais
importantes entre as
eudicotiledneas dos campos rupestres (CASTRO, 2001; LORENZI
& MATOS, 2002).
A famlia Verbenaceae, subfamlia Verbenoideae, apresenta
aproximadamente 36
gneros e 1.305 espcies. Os gneros mais representativos so:
Verbena (200 spp.), Lippia
(150), Citharexylum (70), Stachytarpheta (70), Glandularia (60)
e Duranta (30)
(TRONCOSO, 1974).
O gnero Lippia, o segundo maior da famlia, foi primeiramente
descrito em 1.753
por Linnaeu (BRANDO, 2003) e rene um grande nmero de espcies.
Para TRONCOSO
(1974) e SALIMENA (2000), o nmero de espcies estimado de 160,
estando a maior parte
no Brasil, no Mxico, no Paraguai e na Argentina, com poucas
espcies endmicas na frica.
O Brasil apresenta a maior diversidade em espcies do gnero
Lippia, 111 espcies. Sendo os
principais centros de diversidade especfica do gnero Lippia
localizados na Cadeia do
Espinhao, em Minas Gerais e na Chapada Diamantina, na Bahia
(SALIMENA, 2000).
Alm de se destacar pela grande diversidade botnica e ampla
distribuio este
gnero vem recebendo importante ateno por apresentar espcies que
podem ser utilizadas
-
37
para os mais diversos fins. Tradicionalmente, usadas no
tratamento de infeces
gastrintestinais, respiratrias e cutneas.
Em geral, as espcies do gnero Lippia apresentam na composio
qumica de
seus tecidos, alguns compostos em comuns, encontrados em vrias
espcies diferentes, com
atividades farmacolgicas antimalrica, antiviral e citosttica. Em
muitos casos, as partes
usadas so as folhas e as flores, as quais so comumente
preparadas em infuso ou decoco,
mas tambm utilizadas oralmente ou atravs de emplastos e lavagens
para ferimentos
(LORENZI & MATOS, 2002; PASCUAL et al, 2001).
Alguns constituintes qumicos presentes em L. alba (Mill.) N. E.
Br. tem ao
sedativa, antiespasmdica e estomquica (GOMES et al, 1993). O
extrato aquoso de L.
sidoides dotado de acentuado efeito antissptico, antiinflamatrio
e cicatrizante (PASCUAL
et al, 2001).
FERNANDES-FILHO et al (1998) realizaram a preparao e a anlise
clnica de
um anti-sptico bucal base de leo essencial de L. sidoides Cham
(alecrim-pimenta). O
estudo que foi conduzido em 20 voluntrios demonstrou que o
anti-sptico bucal base de
leo essencial de L. sidoides reduziu em 6% a placa bacteriana
nos indivduos que fizeram seu
uso exclusivo por 7 dias, no sendo permitido durante este perodo
realizar a escovao ou
qualquer outro tipo de higienizao bucal.
O leo essencial de L. sidoides rico em timol e carvacrol,
apresentando atividade
bactericida e fungicida. Em virtude destas propriedades, esse
vegetal cultivado em horto de
plantas medicinais e faz parte do elenco de plantas selecionadas
pelo Governo do Estado o
Cear como fitoterpico. Na Faculdade de Farmcia UFC foi
desenvolvido um anti-sptico
bucal base de leo essencial de L. sidoides (alecrim-pimenta)
elaborado pelo setor de
Farmacotcnica com o objetivo de validar seu uso em programas
alternativos na preveno de
crie dental (BOTELHO, 2005).
MALLIE & BASTIDE (1995) mostram que o leo essencial de L.
multiflora
Moldenk preparado por hidrodestilao das folhas e caules,
apresentou atividade in vitro
sobre a cultura de Plasmodium falciparum, sendo dessa forma
eficaz contra malria. Esse leo
essencial inibiu o crescimento principalmente no passo trofozota
- esquizonte, indicando um
potencial efeito sobre a primeira diviso nuclear do parasito.
Tambm foi mostrado o efeito de
L. multiflora no tratamento da hipertenso (NOAMESI, 1977) e sua
eficcia no combate
sarna (OLADIMEJI et al, 2000).
-
38
A L. dulcis Trevir principalmente usada no tratamento da tosse e
bronquite
(COMPADRE et al, 1986). Alm de suas propriedades medicinais,
suas folhas so tambm
utilizadas na preparao de alimentos e apresenta como componente
principal a
hernandulcina, que um constituinte sesquiterpeno do leo
essencial extrado de flores e
folhas e que tem como caracterstica de ser bem mais doce que a
sacarose (KANEDA et al,
1992; COMPADRE et al, 1986)
L. citriodora e L. graveolens so utilizadas em preparaes
alimentar e tambm
como estimulador de apetite (PASCUAL, 2001; MORTON, 1981).
CAVALCANTI em 2006
mostrou que o leo essencial da L. gracillis Shauer apresentou
atividade tuberculosttica
sobre treze cepas de Mycobacterium tuberculosis, inclusive
quelas que resistentes
isoniazida.
Em vrias regies, algumas espcies do gnero Lippia tambm tm sido
utilizadas
como condimento culinrio e na produo de aromatizantes, cosmticos
e perfumes.
Apesar de muitas espcies apresentarem atividades biolgicas
comprovadas,
vrias outras ainda no foram estudadas, sendo provavelmente
bastante promissoras para o
isolamento de novas substncias qumicas com diferentes potenciais
farmacolgicos.
1.8 A espcie Lippia alba (Mill) N. E. Brown e seus
quimiotipos
L. alba (Mill.) N. E. Brown, umas das principais espcies do
gnero Lippia, um
arbusto com at dois metros de altura, bastante rstico e
vigoroso, perene, muito ramificado e
de morfologia varivel (BRAGA et al, 2005; MATOS et al, 2001). So
plantas que apresenta
ramos finos, esbranquiados, arqueados e quebradios. Folhas
opostas, elpticas, de largura
varivel, com bordos serreados e pice agudo. Flores reunidas em
inflorescncias
capituliformes de eixo curto (MATOS, 1998). Podem ser
encontradas em solos arenosos e nas
margens dos rios, audes, lagos e lagoas, em regies com clima
tropical e temperado, porm
preferencialmente em regies de clima tropical (BRAGA et al,
2005).
Muito usada como planta medicinal popularmente conhecida como
erva-
cidreira de arbusto, erva-cidreira do campo, alecrim do campo,
ch-do-tabuleiro, cidreira
brava, erva cidreira brasileira, cidr, cidro, falsa melissa,
salsa limo entre outros
(MATOS, 1996; MARTINS et al, 1995; BRAGA, 1976). comumente
confundida com a
verdadeira erva cidreira ou melissa, Melissa officinalis (JULIO
et al, 2003), devido
-
39
presena de substncia como o citral e o citronelal, os quais
conferem o odor ctrico
caracterstico da planta (PASCUAL et al, 2001).
Na comunidade cientfica, as diversas sinonmias que so conferidas
a Lippia
alba (Mill.) N. E. Brown tambm causam confuso e segundo a reviso
de PASCUAL et al
(2001), ela pode receber o nome de L. germinata, L. microphylla
Griseb, L. germinata H. B.
K., L. globiflora Kuntze, L. lantanoides Coult, Lantana alba
Mill e Phyla germinata H. B. K.
A L. alba possui um rico potencial farmacolgico que est
relacionado ampla
variao na composio qumica de seu leo essencial. Essa variao leva
a classificao
desta espcie em quimiotipos, que so denominados de acordo com o
componente qumico
majoritrio presente em seus leos essenciais (JULIO et al, 2003;
MATOS, 1996; BRAGA,
1976).
Alm da variao qumica em seus leos essenciais, os exemplares de
diferentes
quimiotipos de L. alba tambm apresentam variaes morfolgicas,
principalmente devido
sua grande plasticidade fenotpica (CORREA, 1992), ou seja, o
ambiente em que a planta se
encontra pode determinar seu hbito de crescimento, constituio
fitoqumica, forma e
colorao das folhas (TAVARES et al, 2003). Esta variao
morfolgica, muitas vezes, leva a
problemas e complexidades na taxonomia do gnero, gerando
dificuldades na correta
identificao da espcie.
Estudos da composio qumica do leo essencial da L. alba em
diferentes regies
vem apresentando variaes quantitativa e qualitativa dos
constituintes, o que realmente
comprova a existncia de muitos quimiotipos nesta espcie (CASTRO
et al, 2001). No
entanto, as pesquisas relatam que os principais constituintes da
composio qumica do leo
dessa planta, so os monoterpenides (borneol, cnfora, 1,8-cineol,
citronelol, geranial,
linalol, mirceno, neral, piperetona, sabineno, 2-undecanona) e
os sesquiterpenides (a-
muuroleno, b-cariofileno, b-cubebeno, b-elemeno, gcadieno,
alo-aromadendreno, xido de
cariofileno) (PASCUAL et al, 2001).
Na Argentina, por exemplo, so conhecidos cinco quimiotipos de L.
alba:
citral/linalol, d-limoneno/lippiona, d-piperitona, citral e
piperitona/limoneno+1,8 cineol,
encontrados em diversas regies com diferentes caractersticas
climticas, tipos de solos e
variado grau de umidade (PINO & ORTEGA, 1996)
Anlise da composio qumica do leo essencial de L. alba originada
de Cuba,
revelou a presena de quarenta e dois componentes e os principais
constituintes encontrados
-
40
foram: limoneno (6,5%), carvona (28,95%), piperitenona (6,35%) e
b-guaieno (11,53%)
(PINO & ORTEGA, 1996).
No Nordeste do Brasil, foi verificada a ocorrncia de quimiotipos
que diferenciam
seus leos essenciais principalmente em relao predominncia de
monoterpenos tais como
citral (55,1%), mirceno (10,5%) e limoneno (1,5%) (JULIO et al,
2003; MATOS, 1996).
No estado do Par, o estudo dos leos essenciais das partes areas
da L. alba
coletadas em trs municpios, permitiram a diviso desta espcie em
trs grupos segundo os
seus componentes: grupo A, caracterizado por alto teor de 1,8
cineol (34,9%) e carvona
(31,8%); grupo B, com 32,1% de limoneno e 31,8% de carvona e o
grupo C, caracterizado
com grandes quantidades de geranial (22,5%) e germacreno-D
(25,4%) (ZOGHBI et al,
1998).
Um estudo fitoqumico feito por MENDES (2001) classificou os
exemplares de L.
alba em oito formas, de acordo com os diferentes locais de
coleta: formas 1 e 4 Mato
Grosso do Sul, forma 2 Rio Grande do Sul, formas 3, 5 e 6 Acre,
forma 7 Paran e
forma 8 Gois. A anlise dos componentes principais dos leos
essenciais permitiu o
agrupamento das formas em quatro grupos distintos: nas formas de
1 e 7 foram encontrados o
linalol e 1,8 cineol; na forma 2, a cnfora, o xido de
cariofileno, o B-mirceno, o
transcariofileno, o linalol, o cafeno, e o p-cimeno; nas formas
4, 6 e 8, o citral; e nas formas 3
e 5, o D-limoneno, germacreno-D e a carvona.
No Cear, foi verificado a ocorrncia de trs quimiotipos de
cidreiras, que
apresentam diferenas quanto composio qumica de seus leos
essenciais e de seus
componentes majoritrios em relao aos teores de citral, carvona,
mirceno e limoneno. Os
quimiotipos receberam as designaes de acordo com os
constituintes majoritrios
encontrados: o quimiotipo I, com teores elevados de mirceno e
citral, mais raro no Cear; o
quimiotipo II, com teores elevados de limoneno e citral e o
quimiotipo III, com limoneno e
carvona e ausncia de citral (MATOS et al, 2001). Diferentes do
quimiotipo I, os quimiotipos
II e III so morfologicamente semelhantes.
Assim, a variabilidade na constituio qumica dos leos essenciais
dever ser
considerada em futuros estudos, para que se possa determinar que
influncia essa
variabilidade exerce sobre as diferentes atividades
farmacolgicas, com o objetivo de
potencializar determinada atividade e conseqentemente aumentar a
eficcia de um
fitoterpico preparado a partir desta espcie vegetal.
-
41
1.9 Aplicaes e propriedades biolgicas da Lippia alba
A Organizao Mundial de Sade estima que grande parte da populao
mundial
continue a depender de plantas medicinais para os cuidados
primrios da sade, sobretudo nas
regies mais desfavorveis. De fato, o consumo de produtos
caseiros base de plantas j
uma realidade assimilada no s pela indstria farmacutica, mas
tambm pelo poder pblico
(LORENZI & MATOS, 2002; STASI et al, 2002; AKERELE, 1993).
Tanto assim, que
prefeituras de vrios capitais, inclusive de Fortaleza, alm de
inmeras cidades do interior, j
distribuem gratuitamente estes medicamentos populao, nos postos
de sade (MATOS,
1998).
Segundo MING (1992), uma espcie muito promissora para as
indstrias
farmacutica, de aromas e perfumaria, a Lippia alba. De acordo
com a lista de espcies
elaboradas e publicadas pela Central de Medicamentos (CEME) para
o Programa de
Pesquisas em Plantas Medicinais (PPPM) do Ministrio da Sade, a
L. alba dita como uma
das espcies medicinais mais utilizadas pela populao brasileira
(SANTOS & INNECCO,
2004) e foi includa em projetos como Farmcias Vivas, da
Universidade Federal do Cear
(MATOS, 1998), que visa oferecer sem fins lucrativos, assistncia
farmacutica fitoterpica
s comunidades carentes.
Preparados a base de L. alba (erva-cidreira) so utilizados na
medicina popular
para o tratamento de diversos males. No Brasil, existem vrios
estudos que avaliam o uso de
plantas medicinais para fins teraputicos, os quais comprovam ser
a espcie L. alba bastante
mencionada pela populao.
Na cidade de Fortaleza, em um estudo realizado sobre o uso de
preparaes
caseiras de plantas medicinais, BASTOS (2007) mostrou que das 32
espcies utilizadas pelos
entrevistados, uma das plantas mais citadas para fins medicinais
a espcie Lippia alba (erva-
cidreira) (7,7%). De acordo com esse estudo, suas folhas so
usadas na forma de ch para dor
de barriga, calmante, gripe, febre, dor e diarria.
De acordo com OLIVEIRA & ARAJO (2007), a erva-cidreira
(Lippia alba N. E.
Brow) foi a segunda (14,6%) espcie de planta mais utilizada
pelos idosos na preveno ou
controle da elevao da presso arterial.
Um levantamento sobre as plantas medicinais cultivadas e usadas
pelos idosos na
Estratgia Sade da Famlia Santo Antnio do Municpio de Pedras de
Fogo Paraba (PB)
indicou as 10 plantas medicinais mais usadas. A erva-cidreira
foi a terceira planta mais citada
-
42
dentre os nove (45%) dos 20 entrevistados que usavam plantas
para fins teraputicos. Eram
usadas as folhas frescas, aps decoco, para dor de barriga, dor,
gases, hipertenso, ou como
calmante (SILVA et al, 2008)
Quanto ao rgo da planta utilizada e o modo de preparo como fonte
teraputica
dessa espcie, destacam-se as folhas e as razes sob a forma de
infuso, decoco, macerao,
compressas, banhos ou extratos alcolicos (JULIO et al,
2003).
Popularmente, suas folhas so empregadas como infuso ou decoco
no
tratamento de doenas gstricas, diarria, febre, asma, tosse e
tranqilizantes ou calmantes
(TAVARES et al, 2005; JULIO et al, 2003 MATOS, 1996). Tambm
podem ser usadas na
forma de compressas para combater hemorridas, macerada para uso
local contra dor de
dentes, e em forma de banhos, como febrfuga (CORREA, 1992).
Seu uso tambm relatado em casos de resfriado (STASI et al,
2002), no combate
a hipertenso (GAZOLA et al, 2004; STASI et al, 2002), como
sedativo (STASI et al, 2002),
analgsico (VALE et al, 2002), em distrbios hepticos, gripe,
bronquite, sfilis (BRAGA et
al, 2005), no tratamento de dores de cabea (DUARTE et al, 2005)
e para malria
(VIGNERON et al, 2005). Algumas pesquisas confirmam o potencial
farmacolgico da
espcie Lippia alba, o que podem explicar, pelo menos em parte,
alguns de seus usos
teraputicos na medicina popular, o que tambm leva ao interesse
de estudos, visando o
isolamento de compostos responsveis por tais atividades.
CORRE (1992) comprovou a atividade analgsica, espasmoltica,
antibacteriana e
peitoral a partir de suas folhas, sem que nenhum efeito txico
tenha sido verificado em
animais tratados com extratos das plantas. Misturas de leos
essenciais obtidas das folhas e
flores, com cremes biolgicos, comprovaram ser excelente para o
tratamento de peles
envelhecidas e secas, contribuindo para a coeso da clula da pele
e promovendo a formao
de uma barreira que regula a perda de umidade transepidrmica
(ELDER et al, 1997).
PASCUAL et al, 2001 demonstraram a atividade antiulcerognica em
ratos
tratados por via oral com infuso das folhas de L. alba. A infuso
foi efetiva na preveno da
ulcerao induzida por indometacina e, na dose testada, no causou
leso gstrica, nem
modificou o pH gstrico e a acidez total.
VALE (1999) realizou um estudo comparativo entre os leos
essenciais dos trs
quimiotipos de L. alba e conclui que seus leos essenciais
apresentaram atividade analgsica,
ansioltica, depressor central, relaxante muscular e diminuidoras
da temperatura retal. Dentre
os componentes qumicos dos leos essenciais, o citral, mirceno e
limoneno parecem atuar de
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maneira sinrgica, sendo responsveis pelos principais efeitos
desses leos. J em 2002, esses
mesmos autores estudando as substncias citral, mirceno e
limoneno isoladamente,
demonstraram seu efeito sedativo e miorrelaxante, porm essas
substncias no apresentaram
ao ansioltica, indicando que esta atividade deve ser de
responsabilidade de outros
componentes do leo essencial da planta.
Quanto a atividade antioxidante in vitro, o leo essencial obtido
por
hidrodestilao exibiu um efeito similar vitamina E e ao
2-(ter-butil)-4-methoxifenol
(BHA), pelo mtodo da oxidao do cido linolico em compostos
carbonlicos
(STASHENKO et al, 2004).
Em relao atividade antimicrobiana, o leo essencial extrado de
toda a planta
foi testado em bactrias de interesse clnico por ALEA (1997). O
leo essencial apresentou
atividade principalmente sobre bactrias Gram-positivas com
Concentrao Inibitria Mnima
(CIM) variando entre 0,3 e 0,63 mg/mL. De todas as bactrias
testadas apenas a Pseudomona
aeruginosa mostrou-se resistente s diferentes concentraes
testadas, enquanto a espcie
Gram-positiva Staphylococcus aureus teve seu crescimento inibido
pela a menor dose do
agente antibacteriano testada.
Um screening de 68 plantas foi realizado para verificao de
atividade
antimicrobiana sobre trs bactrias Gram-positivas (Staphylococcus
aureus, Streptococcus
pyogenes e Streptococcus pneumoniae) que causam infeces
respiratrias. Dessas 68 plantas,
usadas na Guatemala no tratamento de doenas respiratrias,
destacaram-se as espcies Lippia
alba e Lippia dulcis pela elevada atividade antibacteriana. A L.
alba inibiu principalmente o
crescimento do S. aureus e S. pneumoniae e moderadamente o S.
pyogenes (CACERES,
1991).
Quanto sua ao antifngica de L. alba, utilizando-se o mtodo de
microdiluio
em caldo, o leo essencial e o extrato hidroalcolico obtido por
macerao inibiram
moderadamente o crescimento da Candida albicans e da C. krusei,
quando nas CIM de 0,6
g/mL e 125 g/mL, respectivamente. No entanto, somente o extrato
hidroalcolico
apresentou atividade inibitria sobre C. parapsiolisis (100 g/mL)
(HOLTEZ et al, 2002).
Em relao ao seu efeito antiviral, a frao butanlica e acetato de
etila,
provenientes da extrao lquido-lquido do macerado etanlico da
L.alba, apresentou ao
contra o vrus Herpes simples tipo 1 resistente ao aciclovir e
contra o vrus da plio tipo 2,
respectivamente. O screening fitoqumico realizado com o macerado
etanlico detectou a
presena de compostos fenlicos e flavonides (ANDREGHETTI-FROHNER
et al, 2005)
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Ensaios da atividade citotxica da espcie L.alba tambm foram
alvos de
pesquisas. COSTA e colaboradores (2004) avaliaram o efeito
citotxico de extratos brutos e
concluram que o extrato etanlico da folha mostrou maior
citotoxidade frente s clulas HEp-
2 e o extrato clorofrmio das razes teve um efeito maior para as
clulas NCl-H292. Essas
clulas foram obtidas de carcinoma epidermide de laringe e
mucoepidermide de pulmo de
humano, respectivamente.
O uso adequado da espcie Lippia alba sugere ser muito promissor
e seu
extensivo uso emprico vem despertando o interesse de
pesquisadores em estabelecer
explicaes cientficas para tais atividades farmacolgicas, o que
tem resultado na
confirmao dessas atividades, bem como na deteco de outras
propriedades importantes.
1.10 Plantas medicinais: a importncia e necessidade de estudos
multidisciplinares
sabido que o Brasil, pais de maior biodiversidade do planeta,
possui uma
imensa flora medicinal nativa ainda desconhecida ou pouco
estudada. Tambm se sabe que
apesar de nossas condies privilegiadas de biodiversidade,
utilizamos, e muito, as plantas
medicinais exticas (LORENZI & MATOS, 2002). Isso torna mais
do que necessrio que se
invista em pesquisas em nossa flora nativa, pois o Brasil um
enorme potencial nesse campo.
fundamental que a comunidade mdica bem como outros profissionais
da rea
da sade ligados s universidades atente para esse potencial, para
que possamos lanar mo
dele. um momento de voltarmos nossos esforos para construir um
conhecimento mdico
baseado em nossos valores e adequado s nossas necessidades, em
vez de ficarmos atrelados a
um modelo cientfico exclusivamente internacional. Para tanto
devemos valorizar, estudar,
validar e utilizar terapeuticamente nossas espcies, antes que
outros o faam.
No Brasil, as plantas medicinais da flora nativa so consumidas
com pouca ou
nenhuma comprovao de suas propriedades farmacolgicas, propagadas
por usurios ou
comerciantes. Muitas vezes, entretanto, as supostas propriedades
farmacolgicas anunciadas
no possuem validade cientfica, por no terem sido investigadas,
ou por no terem tido suas
aes farmacolgicas comprovadas em testes cientficos pr-clnicos ou
clnicos (SOUZA et
al, 2004).
Comparada com as dos medicamentos usados nos tratamentos
convencionais, a
toxicidade de plantas medicinais e fitoterpicos pode parecer
trivial. comum ouvir de
pessoas referirem o uso de preparados a base de plantas por meio
de expresses
