Boletim Informativo LabVitrus 1 · Para sua dosagem são necessários ensaios muito sensíveis e devido à semelhança estrutural dos esteroides, é necessário ainda, o uso anticorpos

Direitos Reservados a Dra.Clarice Luz

Neste informativo buscamos levar informações

especializadas e técnicas aos nossos médicos e parceiros

sobre análises hormonais na saliva.

Historicamente, as primeiras análises em fluidos

salivares foram realizadas em 1980, porém foram

deixadas de lado na prática médica passando a serem

mais comumente usadas em pesquisas clinicas. A partir

de 1995, juntamente com o conceito de medicina

preventiva, as análises salivares tornaram-se populares

nos USA e agora cada vez, no Brasil.

Logo, é fundamental que o médico ou pesquisador

sejam amplamente informados de suas aplicações e

cientes das possíveis diferenças geradas pelos diferentes

métodos analíticos para que possam interpretar

adequadamente os resultados de seus pacientes.

Introdução

Hormônios Esteróides na Saliva

Os Hormônios Esteróides são moléculas de baixo peso

molecular (250-350 Da) com estruturas químicas muito

semelhantes e não são espécies-específicas. São resistentes

ao calor e, portanto, estáveis à temperatura ambiente por

mais de 72 horas e refrigeradas por até 7 dias.

As concentrações destes hormônios na saliva são da ordem

de nanomoles (nmol/L) ou picomoles por litro (pmol/L).

Para sua dosagem são necessários ensaios muito sensíveis e

devido à semelhança estrutural dos esteroides, é necessário

ainda, o uso anticorpos monoclonais altamente específicos.

Nas análises na saliva são determinadas a fração livre e

biologicamente ativa dos hormônios (2-10%), isto é,

quantidade de hormônios disponíveis para as células

realizarem suas funções, diferentemente das análises no

sangue que determinam os hormônios totais (livres e

conjugados as proteínas de transporte).

Devido a este fator é que podem ser encontrados valores

dentro da normalidade nos exames de sangue e os

pacientes apresentarem inúmeros sintomas de deficiência,

sendo possível apenas serem diagnosticados pelo exame de

saliva

Nesta EdiçãoNesta EdiçãoNesta EdiçãoNesta Edição

Introdução

Hormônios Esteróides na Saliva

Coletas das Amostras Salivares

Métodos Analíticos para Hormônios Salivares

Diferenças Analíticas (Sangue x Urina x Saliva)

Hormônios dosados na Saliva

Envio de Amostras salivares ao Laboratório

Resultados & Laudos

As amostras de saliva são obtidas por procedimento simples,

não invasivo, livre de estresse da venopunção, podendo ser

realizadas por pessoas não treinadas ou na própria

residência do paciente (4-9).

Para coleta das amostras salivares, não é necessário jejum,

observando-se apenas o cuidado de não escovar os dentes

pelo menos 15 minutos antes da coleta ou ainda evitar a

coleta no dia em que o paciente se submeteu a tratamento

odontológico.

Faze-se importante salientar que algumas medicações

principalmente, corticoides podem interferir nos resultados

das análises e recomenda-se fazer o uso de medicações

somente após a coleta da saliva pela manhã.

Devido à praticidade da coleta das amostras salivares estas

podem ser coletadas várias vezes ao dia e a noite, o que

permite a avaliação dinâmica da secreção dos hormônios

livres.

As medidas dos esteróides salivares independem da taxa de

fluxo de saliva (2,3).

Como as amostras salivares são muito estáveis em

temperatura ambiente estas podem ser transportadas ao

laboratório pelo correio ou pelo portador, sem nenhuma

perda da atividade dos hormônios (10).

Julho 2012

Volume 1- Edição 1

Dra.Clarice Luz

Coleta das Amostras de Saliva

B O L E T I M

INFORMATIVO

A medida precisa da concentração dos hormônios na saliva

pode ser realizada por diferentes métodos analíticos uma vez

que estes apresentam boa correlação com as amostras de

sangue (Figura1). No entanto, alguns métodos ap

algumas restrições, principalmente relacionadas ao sua

sensibilidade e especificidade. O método mais comumente

utilizado é o Radioimunoensaio (RIE), devido a sua

sensibilidade e especificidade, o que permite determinar

com precisão hormônios de peso molecular muito baixo na

faixa de nanogramas (10-9) e picogramas (10

de Radioimunoensaio utilize-se anticorpos monoclonais

específicos conjugados com radioisótopos para quantificar os

ensaios. O isótopo mais utilizado é o Iodo 125,

requer do laboratório algumas medidas operacionais especiais

como: maior investimento em biossegurança,

altamente qualificados e registro na CNEN (Comissão Nacional

de Energia Nuclear) (Figura 2)

Devido a estes fatores operacionais muitos laboratórios optam

por técnicas que empregam métodos não isotópicos, como o

Enzimaimunoensaio (ELISA).


As análises hormonais salivares realizadas por

linked Immunosorbent Assay) baseiam-se na imobilização de

um dos componentes, em fase sólida, e na utilização de um

conjugado ligado a uma enzima. Como o substrato forma um

produto colorido, a alteração de cor é mon

visualmente ou por meio de espectrofotômetro que

relaciona a quantidade de substância dosada à intensidade

de cor.

Devido as caracteristicas do ensaio enzimático para as

análises de hormônios saliva, o método de ELISA traz

Análises Hormonais na Saliva

Figura 2– Radioimunoensaio (RIE) (Laboratório e Kit Analitico)


A medida precisa da concentração dos hormônios na saliva

pode ser realizada por diferentes métodos analíticos uma vez

que estes apresentam boa correlação com as amostras de

sangue (Figura1). No entanto, alguns métodos apresentam

algumas restrições, principalmente relacionadas ao sua

O método mais comumente

adioimunoensaio (RIE), devido a sua alta

sensibilidade e especificidade, o que permite determinar

de peso molecular muito baixo na

9) e picogramas (10-12). Na técnica

se anticorpos monoclonais

específicos conjugados com radioisótopos para quantificar os

ensaios. O isótopo mais utilizado é o Iodo 125, fator que

requer do laboratório algumas medidas operacionais especiais

investimento em biossegurança, profissionais

qualificados e registro na CNEN (Comissão Nacional

s muitos laboratórios optam

todos não isotópicos, como o


s salivares realizadas por ELISA (Enzyme-

se na imobilização de

um dos componentes, em fase sólida, e na utilização de um

conjugado ligado a uma enzima. Como o substrato forma um

alteração de cor é monitorada

ou por meio de espectrofotômetro que

substância dosada à intensidade

Devido as caracteristicas do ensaio enzimático para as

lises de hormônios saliva, o método de ELISA traz

Figura1.Correlação dos níveis de cortisol sérico e salivar

Figura 3 – Ensaio ELISA


algumas vantagens, porém

vantagens estão a simplicidade,

a possibilidade de automação. Contudo dentre as

desvantagens estão as reações cruzadas, possiveis

interferentes das amostras salivares (mucinas que

podem interferer na co

alguns reagentes e mais passivel a erros operacionais

(Figura 3).

Atualmente outros médodos analíticos estão sendo

testados para este tipo de análise como a

Imunofluorescencia e a Espectrometria de Massa.

MAPHERSON, R.A., P

(Laboratório e Kit Analitico)

Figura1.Correlação dos níveis de cortisol sérico e salivar

Ensaio ELISA (Enzyme-linked Immunosorbent Assay)

Página 2

porém muitas restrições. Dentre as

vantagens estão a simplicidade, rapidez , baixo custo e

a possibilidade de automação. Contudo dentre as

desvantagens estão as reações cruzadas, possiveis

interferentes das amostras salivares (mucinas que

podem interferer na cor da reação) a instabilidade de

alguns reagentes e mais passivel a erros operacionais

Atualmente outros médodos analíticos estão sendo

testados para este tipo de análise como a

Imunofluorescencia e a Espectrometria de Massa.

MAPHERSON, R.A., PINCUS, M. R. Henry's Clinical Diagnosis and

Management by Laboratory Methods

Diferenças AnalíticasSangue x Urina x Saliva

Hormônios no Sangue

Exames de sangue são comumente usados

os níveis de hormônios pela maioria dos m

hormonais no sangue determinam a quantidade total de

hormônios (livres e conjugados). Este

atualmente considerado como o menos precis

métodos disponíveis. Os testes sorológicos são incapazes de

distinguir os hormônios na forma ligada às proteínas

carreadoras (forma inativa do hormônio)

e biologicamente ativa. Os testes sorológicos representam

apenas uma estimativa aproximada dos níveis hormonais, o

pode levar o clinico ao diagnóstico inadequado, uma vez que

os níveis hormonais séricos, na maioria das vezes estão

dentro dos limites de normalidade, porém quando os níveis

de hormônios livres e ativos são testados e que as

deficiências são identificadas. Além disso, os resultados das

análises no soro refletem apenas a quantidade de

fora das células e não refletem os níveis

disponíveis para as células e tecidos alvos cumprir sua

função fisiologica.

Outro fator importante, é que ao monitorar os níveis

hormonais quando o paciente está em terapia

transdérmicos (creme/gel) as análises séricas não

precisas ainda, isto porque o hormônio ex

através da pele para corrente sanguinea.

se ligam às membranas dos glóbulos vermelhos, a fim de

minimizar as interações desfavoráveis com o meio aquoso

ligando assim a camada lipoproteica uma vez que

dos hormônios tem afinidades pelas gorduras.

coletada a amostra de sangue e o material é centrifugado

para liberação do soro ou plasma, ocorre a precipitação dos


“A técnica de Radioimunoensaio apresenta

precisão, alta sensibilidade e especificidade

para determinação de hormônios de baixo

peso molecular, na ordem de n

9) e picogramas (10-


Diferenças Analíticas

Figura 4. Estrutura química de

Exames de sangue são comumente usados para determinar

médicos. Os exames

quantidade total de

Este tipo de teste é

menos preciso de todos os

Os testes sorológicos são incapazes de

forma ligada às proteínas

(forma inativa do hormônio) da sua forma livre

estes sorológicos representam

s uma estimativa aproximada dos níveis hormonais, o

gnóstico inadequado, uma vez que

os níveis hormonais séricos, na maioria das vezes estão

dentro dos limites de normalidade, porém quando os níveis

de hormônios livres e ativos são testados e que as

Além disso, os resultados das

a quantidade de hormônios

refletem os níveis de hormonios

veis para as células e tecidos alvos cumprir sua

é que ao monitorar os níveis

hormonais quando o paciente está em terapia hormonal com

s séricas não menos

exógeno é absorvido

. Já no sangue estes

se ligam às membranas dos glóbulos vermelhos, a fim de

com o meio aquoso

ligando assim a camada lipoproteica uma vez que a maioria

gorduras. Assim, quando

o material é centrifugado,

para liberação do soro ou plasma, ocorre a precipitação dos


das células vermelhas e

removidos antes mesmo

descrito por Frank Z. Stanczyk. Isto ocorre principalmente

com a progesterona e em menor grau com os outros

hormônios. Nos testes sorológicos de progesterona

pacientes em terapia hormonal

observados o aumento nos níveis de progest

depois de semanas de aplicação, já nos testes de saliva

niveis aumentados de progesteron

após duas horas do seu uso. Estudos clínicos realizados pela

Academia Americana de Anti

pacientes demonstrou que todos os pacientes cujos níveis

hormonais foram considerados em níveis ótimos por testes

sangüíneos, apresentavam em níveis excessiv

progesterona com base nos testes de saliva.

utilizadas para alcançar ótimos níveis séricos foram muito

maiores do que as doses fisiológicas para atingir os níveis

ótimos nos testes de saliva.

pacientes foram reduzidas

ótimos pelo testes de saliva.

Figura 6. Amostras da coleta de sangu

ioimunoensaio apresenta

precisão, alta sensibilidade e especificidade

para determinação de hormônios de baixo

nanograma (10-

-12).” Figura 4. Estrutura química de estrógenos naturais e sintéticos.

Página 3

e desta forma os hormonios são

mesmo da análise. Este fenómeno foi

descrito por Frank Z. Stanczyk. Isto ocorre principalmente

e em menor grau com os outros

ônios. Nos testes sorológicos de progesterona nos

hormonal transdérmica, não são

observados o aumento nos níveis de progesterona mesmo

depois de semanas de aplicação, já nos testes de saliva,

niveis aumentados de progesterona podem ser detectados

após duas horas do seu uso. Estudos clínicos realizados pela

Academia Americana de Anti-Envelhecimento em mais de 300

pacientes demonstrou que todos os pacientes cujos níveis

hormonais foram considerados em níveis ótimos por testes

apresentavam em níveis excessivamente altos de

progesterona com base nos testes de saliva. As doses

utilizadas para alcançar ótimos níveis séricos foram muito

maiores do que as doses fisiológicas para atingir os níveis

ótimos nos testes de saliva. Em todos os casos as doses dos

foram reduzidas até que fossem atingidos os niveis

timos pelo testes de saliva.

Figura 6. Amostras da coleta de sangue e separação do soro

Hormônios na Urina 24 horas


Hormônios na Saliva

A determinação de hormônios em urina de 24 horas

métodos mais precisos, mais difíceis e mais caros.

os testes hormonais em urina de 24 horas apresentam uma

grande inconveniência que é a sua própria de coleta. Coletar

urina de 24 horas, implica recolher todas as urinas de todas

micções por um dia inteiro, sem que seja perdido

volume, sob risco de vieses nos resultados.

limitante é o armazenamento das coletas urinárias uma vez

que mesmas devem ser mantidas sob refrigeração (não é

pertimido uso de conservantes), durante todo periodo de

coleta, o que pode trazer certo desconforto e

constragimento ao paciente. Contudo, elimina

problemas com a coleta, o teste urinário permite monitorar

terapia hormonal bioidêntica através da obtenção de uma

média diária de seus níveis hormonais ao invés de um “ponto

específico” obtido no momento exato em que você fez a

coleta de sangue ou da saliva .

A análise hormonal na saliva mede a forma livre e,

biologicamente ativa de vários hormônios

saliva foi aprovado amplamente pela comunidade científica

por refletir de forma precisa os níveis hormonais presentes

no interior das células, onde a ação dos hormônio

enquanto que os exames de sangue medem os hormônios

fora das células.

A análise salivar hoje é considerada como

para hormônios pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e

são amplamente utilizados pela NASA em suas pesquisas

Apesar da recomendação da OMS, muitas vezes o método

ainda é criticado e negligenciado por muitos

sendo que muitos ainda se recusam a solicitar os

devido a falta de informação sobre as diferenças

testes de sangue e saliva, levando-os geralmente

criticas sobre a validação dos testes salivares.

“Os testes sorológicos são incapazes de

distinguir os hormônios na forma ligada às

proteínas carreadoras (forma inativa do

hormônio) de sua forma livre e

biologicamente ativa.


Urina 24 horas


Ao final deste informativo há uma

que comprovam que o teste de saliva

sangue e referências sobre a

Os exames salivares podem ser solicitados pelo médico de

forma isolada ou através de Perfis Ho

Feminino, Masculino, Menopausa, Andropausa, Envelhecimento,

Stress, Sono, entre outros, de acordo com

clinica.

O kit para coleta de saliva poderá ser retirado no laboratório

pelo paciente, familiar,amigo ou

casa, escritório ou empresa. O kit traz

impressas na sua embalagem, escritas de maneira didática e de

fácil compreensão.

Figura 5 – Kit de Coleta de Saliva

A determinação de hormônios em urina de 24 horas é um dos

e mais caros. Contudo,

s testes hormonais em urina de 24 horas apresentam uma

própria de coleta. Coletar

implica recolher todas as urinas de todas

seja perdido nada de

volume, sob risco de vieses nos resultados. Outro fator

limitante é o armazenamento das coletas urinárias uma vez

que mesmas devem ser mantidas sob refrigeração (não é

pertimido uso de conservantes), durante todo periodo de

coleta, o que pode trazer certo desconforto e

constragimento ao paciente. Contudo, eliminando estes

rmite monitorar a

s da obtenção de uma

média diária de seus níveis hormonais ao invés de um “ponto

específico” obtido no momento exato em que você fez a

mede a forma livre e,

nios. Os testes na

amplamente pela comunidade científica

os níveis hormonais presentes

hormônios ocorrem,

enquanto que os exames de sangue medem os hormônios

como padrão-ouro

pela Organização Mundial de Saúde (OMS) e

em suas pesquisas.

muitas vezes o método

muitos médicos,

solicitar os exames,

s diferenças sobre

geralmente a fazer

criticas sobre a validação dos testes salivares.

Os testes sorológicos são incapazes de

ma ligada às

proteínas carreadoras (forma inativa do

Como Solicitar os Exames de Saliva

Página 4

há uma lista de inúmeras publicações

o teste de saliva é superior aos exames de

validação do mesmo.

exames salivares podem ser solicitados pelo médico de

forma isolada ou através de Perfis Hormonais (Hormonal

Feminino, Masculino, Menopausa, Andropausa, Envelhecimento,

Stress, Sono, entre outros, de acordo com a necessidade

e saliva poderá ser retirado no laboratório

amigo ou ainda ser enviado, para sua

casa, escritório ou empresa. O kit traz as instruções de coleta

na sua embalagem, escritas de maneira didática e de

Kit de Coleta de Saliva

Como Solicitar os Exames de Saliva

As amostras de saliva deverão ser coletadas de

instruções do kit, salvo a necessidade de outra

específica. Para cada horário de coleta há um tubo

devidamente identificado em o paciente

horário da coleta e o nome. Após o término das

material deve ser enviado diretamente para o laboratório

para análise. Devem acompanhar as amostras de saliva o

Formulário de Identificação do Paciente, médico solicitante

e os exames ou perfil a serem realizados e o

Levantamento Indivudualizado de Sinais e Sintomas (LISS),

devidamente preenchido. Para o envio das amostras

necessário o envio das mesmas sob refrigeração, salvo

áquelas vindas de locais em que o SEDEX pode

de 72 horas. Nestes casos, as amostras

refrigeradas e enviadas acondicionadas em caixa de

com gelo em gel.

Figura 7 – Diferentes tipos de laudos salivares conforme os perfis solicitados


Envio das Amostras de Saliva

ao Laboratório


Muitos são os hormônios que podem ser

saliva tais como os hormônios esteróide

algumas aminas. Dentre os quais podemos destacar

Estrona (E1), Estradiol (E2), Estriol (E3),

Testosterona, DHEA (Dehidroepiandrosterona),

(Sulfato de DHEA, Androstenediona, 17OH

(17 OHP), DHT (Diidrotestosterona), Melatonina,

hGH, Grelina, PPY e Leptina, além de citocinas

IL2 e TNF-α, entre outras.


As amostras de saliva deverão ser coletadas de acordo com as

necessidade de outra orientação

específica. Para cada horário de coleta há um tubo

deverá anotar o

rmino das coletas o

para o laboratório

Devem acompanhar as amostras de saliva o

, médico solicitante

e os exames ou perfil a serem realizados e o Formulários de

Levantamento Indivudualizado de Sinais e Sintomas (LISS),

Para o envio das amostras não é

sob refrigeração, salvo

em que o SEDEX pode demorar mais

Nestes casos, as amostras devem ser

em caixa de isopor

Diferentes tipos de laudos salivares conforme os perfis solicitados

“Os laudos de exames salivares são

apresentados de forma descriti

também em gráficos de acordo com a

faixa etária do paciente


Envio das Amostras de Saliva

Resultados

Laudos

Os laudos para as análises salivares são elaborado

software específico que visam apresentar os resultados de

forma didática e de fácil interpretação. Cada resultado é

apresentado de forma descritiva e

acordo com a faixa etária do paciente

laudo permite ainda que o p

acompanhar a sua evolução

terapêutica, fato que muito auxilia a adesão ao tratamento


determinados na

esteróides, peptidicos e

destacar:

(E3), Progesterona,

(Dehidroepiandrosterona), SDHEA

17OH-Progesterona

Melatonina, Insulina,

citocinas como: IL6,

Os laudos de resultados dos exames salivares são liberados de

10 a 15 dias depois da chegada do material no Laboratório ou

conforme o seu grau de complexidade.

“Os laudos de exames salivares são

apresentados de forma descritiva e

também em gráficos de acordo com a

faixa etária do paciente.”

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Os laudos para as análises salivares são elaborados com

software específico que visam apresentar os resultados de

forma didática e de fácil interpretação. Cada resultado é

apresentado de forma descritiva e também gráfica de

a faixa etária do paciente. Este modelo de

o próprio paciente possa

acompanhar a sua evolução no tratamento ou na resposta à

, fato que muito auxilia a adesão ao tratamento.

Os laudos de resultados dos exames salivares são liberados de

depois da chegada do material no Laboratório ou

conforme o seu grau de complexidade.


Frank Z. Stanczyk, PhD, Richard J. Paulson, MD, e Subir Roy, MD. Administração percutânea da progesterona: Os níveis no sangue e de protecção do endométrio. Menopausa: The Journal of The American Menopause Society North Vol. 12, No. 2, pp 232-237

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Bibliografia

Documents

Boletim Informativo LabVitrus 1 · Para sua dosagem são necessários ensaios muito sensíveis e devido à semelhança estrutural dos esteroides, é necessário ainda, o uso anticorpos