UNIVERSIDADE BANDEIRANTE DE SO PAULO CONSELHO DE PS-GRADUAO E PESQUISA

MESTRADO PROFISSIONAL EM FARMCIA

CAROLINA MONTOVAM MONTEIRO

DESENVOLVIMENTO FARMACOTCNICO E ESTUDO DE ESTABILIDADE DE UMA PREPARAO DE GEL DENTAL INFANTIL CONTENDO EXTRATO

DE PRPOLIS VERDE TIPIFICADA

So Paulo 2012

UNIVERSIDADE BANDEIRANTE DE SO PAULO CONSELHO DE PS-GRADUAO E PESQUISA

MESTRADO PROFISSIONAL EM FARMCIA

CAROLINA MONTOVAM MONTEIRO

DESENVOLVIMENTO FARMACOTCNICO E ESTUDO DE ESTABILIDADE DE UMA PREPARAO DE GEL DENTAL INFANTIL CONTENDO EXTRATO

DE PRPOLIS VERDE TIPIFICADA

Dissertao apresentada, como exigncia parcial Banca Examinadora da Universidade Bandeirante de So Paulo UNIBAN, para obteno do ttulo de Mestre em Farmcia, sob orientao do Prof. Dr. Niraldo Paulino.

So Paulo 2012

CAROLINA MONTOVAM MONTEIRO

DESENVOLVIMENTO FARMACOTCNICO E ESTUDO DE ESTABILIDADE

DE UMA PREPARAO DE GEL DENTAL INFANTIL CONTENDO EXTRATO

DE PRPOLIS VERDE TIPIFICADA

Dissertao apresentada, como exigncia parcial, para obteno do ttulo de

Mestre em Farmcia.

APROVADA EM 09 DE AGOSTO DE 2012.

So Paulo 2012

Dedico este trabalho e a minha vida ao Pedro Monteiro Beraldo, meu

filho, pois ele a pessoa que me permite realizar minhas conquistas com foco,

dedicao e principalmente amor.

Ao meu marido Ricardo Paulichi Beraldo por sempre me apoiar em

minhas escolhas e ser um grande companheiro que soube me ouvir, enxugar

minhas lgrimas e me confortar nos momentos difceis. Obrigada por no ter

desistido de mim e mais que isso, suprir com amor e carinho minhas ausncias

do convvio familiar, representando por muitas vezes, o papel de me, pai e at

mesmo dono de casa.

Aos meus pais por serem os maiores e melhores exemplos que me

espelho desde criana. minha me, Maria Cleusa Montovam Monteiro, pela

sua amizade, amor, carinho; uma mulher que no descansa nunca, sempre

disposta a ajudar, ensinar e aconselhar, uma grande profissional que eu

sempre quis ser igual quando crescesse, e quem sabe eu chego l. Ao meu

pai, Reinaldo Monteiro, batalhador, smbolo de honestidade, profissionalismo e

equilbrio, sua conduta inspiradora e sempre me faz querer ser melhor, tal

como ele. para mim um orgulho e uma grande alegria ser filha de vocs e v-

los, com o mesmo amor e carinho, me auxiliando a educar o Pedro, o que

fazem com maestria, no s com meu filho mas com os outros netos tambm.

Obrigada por fazerem de mim o que eu sou, sem jamais fazer nenhuma

exigncia e mostrarem continuamente o caminho a seguir.

Aos meus avs maternos, Verginia Neri Montovam e Renato Montovam,

que pela enorme simplicidade demonstram que no devemos reclamar e sim

lutar, sendo suas histrias vitoriosas vindas da roa um estmulo de vida.

Aos meus avs paternos, em memria, Maria Madalena Monteiro e

Domcio Monteiro, que mostraram muito mais da vida que podemos enxergar.

Aos meus sogros Mirian Paulichi Beraldo e Miguel Beraldo Filho, que

so como meus pais: atenciosos, carinhosos e amigos. Obrigada por

compartilharem todos nossos momentos juntos e serem excelentes avs.

Aos meus sobrinhos Reinaldo Netto, Natally, Luciana, Guilherme, Rafael

e querida Talita; que sejam estimulados a desvendar os mistrios da vida.

Dedico ainda este trabalho aos meus alunos das Faculdades Integradas

Torricelli de Guarulhos, cujo aprimoramento profissional faz com que eu

busque cada vez mais e constantemente, a investigao da cincia.

AGRADECIMENTOS

Ao Prof Dr. Niraldo Paulino pelo apoio, confiana e incentivo durante a

orientao, desde a elaborao, conduo e finalizao deste trabalho,

tornando possvel a realizao do mesmo.

Prof Dr Maria Cristina Marcucci, que sempre me recebeu com

entusiasmo e um grande sorriso inspirador, ensinando com brilho nos olhos as

maravilhas sobre a prpolis.

Ao Prof Dr. Camillo Anauate Netto por se disponibilizar em me auxiliar

desde o incio do projeto e sempre demonstrar solicitude em suas

colaboraes.

Prof Dr Cristina Eunice Okuyama, pelas excelentes sugestes e

disposio por diversas vezes em me ouvir, apoiar e orientar, sempre com uma

palavra amiga e elogios incentivadores.

Prof Dr Claudete Justina Valduga e ao Prof Dr. Sergio de

Mendona, que cederam seus laboratrios, materiais e conhecimentos para o

desenvolvimento do trabalho. Agradeo, em especial ao Prof Sergio pelas

valiosas orientaes e sugestes para o desenvolvimento da parte

microbiolgica deste trabalho, que contriburam sobremaneira para a execuo

do mesmo.

A todos os professores do Programa de Mestrado pelas elucidativas e

enriquecedoras aulas ministradas, que contriburam para meu crescimento

intelectual e profissional.

Prof Dr Marcia Regina dos Santos, coordenadora do Programa de

Mestrado, por saber orientar e conduzir as diversas dificuldades encontradas

no decorrer desta jornada e principalmente, por oferecer um ensino no qual a

relao docente-discente baseada na humanizao.

Aos tcnicos de laboratrio Oseraldo, Diogo, Rubens e Ivair por

auxiliarem em diversas fases do trabalho. Agradeo em especial, a primordial

contribuio do Issamu e o grande apoio e incentivo da Cristina dos Santos.

Ms. Cristina Freitas Nunes Tina, por preparar o extrato mole de

prpolis utilizado nas formulaes.

valiosa ajuda da amiga Andria Marques no desenvolvimento dos

testes de densidade, com a qual alm de dividirmos laboratrio, equipamentos

e materiais, compartilhamos angstias e conquistas.

Ao colega Cristiano Ricardo pelos ensinamentos, com sua vasta

experincia, no manuseio do equipamento viscosmetro e dicas diversas, em

torno do desenvolvimento do produto.

Aos colegas de turma Alessandra Fagioli, Sandra Scarano, Denilton

Costa, Tiago Endrigue, Virginia Barbeitos, Maria Aparecida, Mali Civa,

Janaina Romeiro, Letcia Casagrande, Alessandra Cappelaro, Daniel Freitas,

Fernando Scremin, Rosa Andra, Christian, Rafael, Cristine, Marcelo, Ana,

Rossi Van e todos os demais no citados, que de uma forma ou de outra

fizeram parte desse momento, dividindo aprendizados, dvidas, alegrias e

aflies.

farmacutica e amiga Carolina Uchyia pelo fornecimento de matrias-

primas e por disponibilizar o laboratrio de sua farmcia.

Aos farmacuticos da Pharmacea Frmulas e Cosmticos: Dr ngela

Keiko Gomi, Dr Irene, Dr. Rogrio, pelo fornecimento de matrias-primas; em

especial, minha querida amiga Dr Thais Machado Caetano que, em nossos

almoos me ouviu, apoiou, orientou e sempre me incentivou.

Aos farmacuticos da Farmcia Violeta: Dr Mrcia Feroldi Baakilini, Dr.

Leandro Bezerra e Dr Patrcia Mumme, pelo fornecimento de matrias-primas.

distribuidora de insumos farmacuticos e cosmticos Chemyunion,

representada por Thiago e Andria Souza, pelo envio da amostra do produto

Proteol OAT.

A todos que, direta ou indiretamente, contriburam para execuo deste

trabalho.

"Todo efeito tem uma causa. Todo efeito inteligente tem uma causa inteligente.

O poder da causa inteligente est na razo da grandeza do efeito."

Allan Kardec

RESUMO

A crie um problema de sade pblica que pode ser controlada a partir

da criao de hbitos de higiene oral desde o surgimento do primeiro dente. A

utilizao de dentifrcios fluoretados, principalmente em crianas menores de

cinco anos, pode levar a uma intoxicao crnica denominada fluorose, devido

ingesto do produto. A proposta desta pesquisa desenvolver e avaliar a

estabilidade fsico-qumica e microbiolgica de um gel dental infantil contendo

prpolis verde tipificada. Este componente ativo uma resina de origem natural

produzida pelas abelhas que demonstra, por diversas evidncias cientficas, ter

potencial teraputico a partir de suas propriedades biolgicas antibacteriana,

antifngica, anti-inflamatria, analgsica, cicatrizante e vrias outras. O objetivo

do desenvolvimento de uma formulao destinada ao pblico infantil foi de

oferecer um produto composto por ingredientes naturais, seguro e eficaz, sem

corante nem conservante, uma vez que a prpria prpolis assegura a

preservao da preparao. Para comprovar a qualidade do produto

desenvolvido, o mesmo passou por ensaios de estabilidade nos quais foram

avaliadas suas caractersticas organolpticas, precipitao, potencial

hidrogeninico, densidade, viscosidade e contagem microbiana. A formulao

desenvolvida e avaliada demonstrou ser capaz de manter-se estvel em todos

os parmetros avaliados, fsico-qumicos e microbiolgicos, durante os estudos

de estabilidade preliminar e acelerado, devendo ser submetida patente e

produzida industrialmente, contribuindo desta forma com a sade pblica,

atravs do controle de crie infantil sem riscos de intoxicao por flor.

Palavras-chave: Prpolis Verde Tipificada. Gel Dental Infantil. Estabilidade.

ABSTRACT

Caries is a public health problem that can be controlled from the creation

of oral hygiene habits from the emergence of the first tooth. The use of fluoride

toothpastes, especially in children under five years can lead to chronic

poisoning called fluorosis, due to the ingestion of the product. The purpose of

this research is to develop and evaluate the physico-chemical and

microbiological stability of a dental gel containing green propolis typed for

children. This active ingredient is a natural resin produced by bees that

demonstrates several scientific evidence, have therapeutic potential from their

biological properties, antibacterial, antifungal, anti-inflammatory, analgesic,

healing and many others. The goal of the development of a formulation

intended to children is to provide a product composed of natural ingredients,

safe and effective, colorless and preservative free, since the own propolis

ensures the preservation of the preparation. To prove the quality of the product

developed, the same passed stability tests which were evaluated in their

organoleptic characteristics, precipitation, hydrogen potential, density, viscosity

and microbial counts. The formulation developed and evaluated has been

shown to be stable in all parameters, physico-chemical and microbiological,

during the stability studies preliminary and stability studies fast, and should be

submitted to the patent and produced industrially, thus contributing to public

health by controlling caries child without risk of fluoride poisoning.

Key-words: Green Propolis Typed. Children's Tooth Gel. Stability.

LISTA DE QUADROS

Quadro 1 Parmetros fsico-qumicos e microbiolgicos avaliados de

acordo com a frequncia das anlises nas condies de

temperatura e luminosidade empregadas no estudo de

estabilidade preliminar ........................................................... 45

Quadro 2 Parmetros fsico-qumicos e microbiolgicos avaliados de

acordo com a frequncia das anlises nas condies de

temperatura e luminosidade empregadas no estudo de

estabilidade acelerado ......................................................... 46

Quadro 3 Critrios de classificao da amostra quanto s

caractersticas organolpticas aps comparao com a

especificao referencial ........................................................ 47

Quadro 4 Quantidade de placas microbiolgicas empregadas de cada

meio de cultura em cada fase do estudo para cada

concentrao da amostra ....................................................... 54

LISTA DE FIGURAS

Figura 1 Manifestao de fluorose em diferentes graus ...................... 25

Figura 2 Solubilidade de 10% do EMPV em Solventes

Hidroalcolicos de diversos teores ........................................ 55

Figura 3 Miscibilidade do EMPV em leo de casca de laranja, etanol

e LSS ..................................................................................... 56

Figura 4 Aparncia da F1 ..................................................................... 56

Figura 5 Placa contendo a bactria Fusobacterium nucleatum ........... 60

Figura 6 Placa contendo a bactria Porphyromonas gingivalis ........... 61

Figura 7 Placa contendo a bactria Actinomyces israelli ..................... 61

Figura 8 Placa contendo a bactria H. actinomycetemcomitans ......... 61

Figura 9 Comparao da S3 EEPV e da D1 EMPV ............................. 62

Figura 10 Aparncia da F12 ................................................................... 63

Figura 11 Equipamento utilizado na Centrifugao das amostras ......... 63

Figura 12 Aspecto da F12 aps a centrifugao, detalhando

sobrenadante e precipitado .................................................... 64

Figura 13 Aspecto da F13 aps a centrifugao, comparativamente

F12 ......................................................................................... 64

Figura 14 Peagmetro do Laboratrio de Ps Graduao em

Farmcia da Uniban ............................................................... 65

Figura 15 Aparncia da F25 imediatamente aps o preparo ................. 66

Figura 16 Aparelho de Ultrassom do Laboratrio de Ps Graduao

em Farmcia da Uniban ......................................................... 67

Figura 17 Aparncia da F25 aps 30 minutos no banho de Ultrassom ... 68

Figura 18 Estabilidade da amostra inicial da F25, selecionada para os

Testes de Estabilidade ........................................................... 68

Figura 19 Viscosmetro de Brookfield utilizado no estudo ..................... 70

Figura 20 Aparncia da formulao aps 15 dias do preparo, mantida

em Temperatura Ambiente Protegida da Luz ........................ 70

Figura 21 Colorao padro da formulao selecionada ....................... 71

Figura 22 Material de acondicionamento das amostras submetidas s

diferentes condies de temperatura durante o perodo de

90 dias do Teste de Estabilidade ...........................................

71

Figura 23 Amostras estveis aps serem submetidas centrifugao

ao trmino do Teste Preliminar ..............................................

73

LISTA DE GRFICOS

Grfico 1 Valores de pH da mdia da triplicata das amostras

armazenadas em diferentes temperaturas durante o Teste

de Estabilidade Preliminar ..................................................... 73

Grfico 2 Valores de densidade das amostras armazenadas em

diferentes temperaturas durante o Teste de Estabilidade

Preliminar ............................................................................... 74

Grfico 3 Valores de viscosidade das amostras armazenadas em

diferentes temperaturas durante o Teste de Estabilidade

Preliminar ............................................................................... 74

Grfico 4 Valores de pH das amostras armazenadas em diferentes

temperaturas durante 30 dias do Teste de Estabilidade

Acelerada ............................................................................... 80

Grfico 5 Valores de densidade das amostras armazenadas em

diferentes temperaturas durante 30 dias do Teste de

Estabilidade Acelerada .......................................................... 80

Grfico 6 Valores de viscosidade das amostras armazenadas em

diferentes temperaturas durante 30 dias do Teste de

Estabilidade Acelerada .......................................................... 81

LISTA DE TABELAS

Tabela 1 Teste de Solubilidade do EMPV em solues

hidroalcolicas de diferentes teor etanlico ........................... 55

Tabela 2 Soluo N 01 do EEPV a 25% (S1 EEPV) ........................... 56

Tabela 3 Soluo N 02 do EEPV a 25% (S2 EEPV) ........................... 57

Tabela 4 Soluo N 03 do EEPV a 25% (S3 EEPV) ........................... 57

Tabela 5 Componentes e concentraes utilizados no

desenvolvimento das Formulaes F1 a F13 ........................ 58

Tabela 6 Componentes e concentraes utilizados no

desenvolvimento das Formulaes F14 a F25 ...................... 59

Tabela 7 Disperso N 01 do EMPV no tensoativo (D1 EMPV) ........... 62

Tabela 8 Disperso N 02 do EMPV no tensoativo com etanol (D2

EMPV) .................................................................................... 63

Tabela 9 Anlise de pH de matrias-primas que compe a F15 do gel

dental ..................................................................................... 66

Tabela 10 Componentes e Concentraes da Formulao Selecionada

(F25) ....................................................................................... 67

Tabela 11 Especificaes do Gel Dental Infantil de Prpolis Verde

Tipificada ................................................................................ 69

Tabela 12 Resultado das Anlises Fsico-Qumicas do Teste de

Estabilidade Preliminar das amostras submetidas s

diversas condies de temperatura durante 15 dias ............. 72

Tabela 13 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura PCA, durante o Estudo Preliminar de

Estabilidade, aps 24h e 48h de incubao em estufa a

37C ....................................................................................... 75

Tabela 14 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura MacConkey durante o Estudo Preliminar de

Estabilidade, aps 24h e 48h de incubao em estufa a

37C ....................................................................................... 75

Tabela 15 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura Sabouraud durante o Estudo Preliminar de

Estabilidade, aps 24h e 48h de incubao em estufa a

30C .......................................................................................

76

Tabela 16 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura Sabouraud durante o Estudo Preliminar de

Estabilidade, aps 96h de incubao em estufa a 30C........ 76

Tabela 17 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura Sabouraud durante o Estudo Preliminar de

Estabilidade, aps 7 dias de incubao em estufa a 30C .... 78

Tabela 18 Resultado das Anlises Fsico-Qumicas do Teste de

Estabilidade Acelerada das amostras submetidas s vrias

condies de temperatura por 30 dias ................................... 79

Tabela 19 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura PCA, referente ao 30 dia do Estudo de

Estabilidade Acelerada, aps 24h e 48h de incubao em

estufa a 37C ......................................................................... 81

Tabela 20 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura MacConkey, referente ao 30 dia do Estudo de

Estabilidade Acelerada, aps 24h e 48h de incubao em

estufa a 37C ......................................................................... 82

Tabela 21 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura Sabouraud, referente ao 30 dia do Estudo de

Estabilidade Acelerada, aps 24h, 48h e 72h de incubao

em estufa a 30C ................................................................... 82

Tabela 22 Mdia das triplicatas das Anlises Microbiolgicas do meio

de cultura Sabouraud, referente ao 30 dia do Estudo de

Estabilidade Acelerada, aps 7 dias de incubao em estufa

a 30C .................................................................................... 83

LISTA DE ABREVIATURAS E SIGLAS

ABO Associao Brasileira de Odontologia

ANVISA Agncia Nacional de Vigilncia Sanitria

BHI Infuso de Corao e Crebro

CIC Ciclos de 24 horas de aquecimento em estufa a 45C 2C e

resfriamento em freezer a -5C 2C

CMC Carboxi Metil Celulose

CPO-D Dentes Cariados, Dentes Perdidos e Dentes Obturados

cPs Centipoise

D1 EMPV Disperso N 01 do Extrato Mole de Prpolis Verde

D2 EMPV Disperso N 02 do Extrato Mole de Prpolis Verde

EEPV Extrato Etanlico de Prpolis Verde

EMPV Extrato Mole de Prpolis Verde

EST Estufa a 45C 2C

F1 a F25 Formulao N 01 a N 25 do Gel Dental

FRE Freezer a -5C 2C

g Gramas

gt Gota

h Horas

L Litro

LSS Lauril Sulfato de Sdio

M molar

M0 massa do picnmetro vazio (g)

M1 massa do picnmetro com gua purificada (g)

M2 massa do picnmetro com a amostra (g)

mL Mililitros

L Microlitros

mm Milimetros

N Nmero

OMS Organizao Mundial de Sade

OPAS Organizao Pan-Americana da Sade

P.A. Puro para Anlise

PCA gar de Contagem de Placas

pH potencial hidrogeninico

p/p Peso/peso

ppm Partes por milho

qs Quantidade suficiente

qsp Quantidade suficiente para

RDC Resoluo da Diretoria Colegiada

rpm Rotaes por minuto

S1 EEPV Soluo N 01 do Extrato Etanlico de Prpolis Verde

S2 EEPV Soluo N 02 do Extrato Etanlico de Prpolis Verde

S3 EEPV Soluo N 03 do Extrato Etanlico de Prpolis Verde

SUS Sistema nico de Sade

TAE Temperatura Ambiente Exposta Luz

TAP Temperatura Ambiente Protegida da Luz

UFC Unidades Formadoras de Colnias

LISTA DE SMBOLOS

% Porcento

C Grau Celsius

Mais ou menos

+ Positivo

- Negativo

SUMRIO

1 INTRODUO ....................................................................... 18

2 REVISO DA LITERATURA ................................................. 21

2.1 CRIE .................................................................................... 21

2.2 FLOR ................................................................................... 24

2.3 PRPOLIS ............................................................................. 28

2.3.1 Prpolis Verde Tipificada ....................................................... 31

2.4 XILITOL .................................................................................. 34

2.5 ESTUDOS DE ESTABILIDADE ............................................. 35

3 JUSTIFICATIVA .................................................................... 37

4 OBJETIVOS ........................................................................... 38

4.1 OBJETIVO GERAL ................................................................ 38

4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS .................................................. 38

5 MATERIAIS E MTODOS ..................................................... 39

5.1 MATERIAIS ............................................................................ 39

5.1.1 Matrias-primas e Embalagens ............................................. 39

5.1.2 Produtos Industrializados de Referncia ............................... 41

5.1.3 Materiais de Laboratrio e Equipamentos ............................. 41

5.2 MTODOS ............................................................................ 42

5.2.1 Desenvolvimento Farmacotcnico das Formulaes ............ 42

5.2.2 Avaliao dos Parmetros de Qualidade da Formulao

Selecionada ........................................................................... 43

5.2.3 Estudo de Estabilidade Preliminar ......................................... 44

5.2.4 Estudo de Estabilidade Acelerada ......................................... 45

5.2.5 Anlises fsico-qumicas ......................................................... 46

5.2.5.1 Caractersticas Organolpticas: aspecto, cor, odor e sabor ... 46

5.2.5.2 Avaliao do aspecto aps Centrifugao ............................. 47

5.2.5.3 Determinao potenciomtrica do pH .................................... 48

5.2.5.4 Determinao da Densidade .................................................. 48

5.2.5.5 Determinao da Viscosidade ............................................... 49

5.2.6 Anlises Microbiolgicas ........................................................ 50

5.2.6.1 Preparo do meio de cultura PCA ........................................... 51

5.2.6.2 Preparo do meio de cultura gar MacConkey ....................... 52

5.2.6.3 Preparo do meio de cultura gar Sabouraud ......................... 53

5.2.6.4 Semeadura das amostras nos meios de cultura .................... 53

6 RESULTADOS E DISCUSSES .......................................... 55

6.1 DESENVOLVIMENTO DA FORMULAO ........................... 55

6.2 ESPECIFICAES DA FORMULAO SELECIONADA ..... 69

6.3 ESTUDO DE ESTABILIDADE PRELIMINAR ........................ 71

6.4 ESTUDO DE ESTABILIDADE ACELERADA ......................... 78

7 CONCLUSES ...................................................................... 84

8 PERSPECTIVAS ................................................................... 85

REFERNCIAS ............................................................................................ 86

18

1 INTRODUO

O hbito de higiene oral na infncia possibilita que a criana tenha menor

incidncia de crie na adolescncia e fase adulta (PERES et al., 2003). O dente que

est em processo de erupo fornece condies mais favorveis para o acmulo

bacteriano, o que acentuado pela falta de escovao deste dente pela criana,

devido erupo ser acompanhada de sangramento gengival. Desde o incio da

erupo at a erupo completa parece ser o perodo mais importante para qualquer

dente, sendo considerado crtico para o desenvolvimento da crie o tempo desde o

estabelecimento da dentio decdua at a transio para a dentio permanente

(THYLSTRUP e FEJERSKOV, 1994).

Os dentifrcios so associaes de substncias que, usadas na escovao

diria, limpam ou removem depsitos exgenos aderidos aos dentes, tornando-os

mais resistentes ao ataque das bactrias. Alm disso, reduzem a microbiota bucal

anormal, eliminam manchas dos dentes e auxiliam na remoo da placa dental e do

trtaro, controlando os odores bucais (APPEL e RUS, 2005).

A fluoretao de cremes dentais uma das medidas preventivas de crie

disseminadas pela Organizao Mundial de Sade (OMS). Entretanto, para a faixa

etria infantil, at em torno dos 6 anos de idade, pode ocorrer a ingesto do creme

dental com consequente absoro sistmica de flor.

O flor ingerido absorvido principalmente pela mucosa gstrica e distribudo

por todo o organismo se fixando nos tecidos em mineralizao - ossos e dentes. A

toxicidade crnica desenvolvida denominada fluorose e manifesta-se nos dentes

que esto em processo de formao do esmalte, tornando-o opaco em diferentes

graus (CURY e TENUTA, 2010).

O aumento na incidncia de fluorose dentria tem sido constatado em vrias

cidades do mundo e a ingesto de dentifrcios contendo flor por crianas tem sido

apontada como uma das causas desta alterao.

Dentre as opes de creme dental infantil disponveis no mercado foram

encontradas, basicamente, variaes com flor, xilitol, xilitol associado ao flor e,

ainda uma opo natural indicada para proteo do dente de leite contendo

Calndula. Embora haja excees, de um modo geral, os cremes dentais contendo

flor, apresentam uma concentrao de 1.100 ppm, e so indicadas para crianas

acima dos 6 anos de idade; aqueles contendo xilitol so indicados para bebs e

19

crianas de at 5 anos de idade; e, nas associaes de xilitol e flor, este ltimo

apresenta-se em menor concentrao (500 ppm ou 750 ppm), sendo sinrgica a

unio dos dois ativos e indicada para crianas, com a recomendao de que as

menores de 6 anos de idade sejam supervisionadas por um adulto durante a

escovao e usem quantidade pequena.

H uma real necessidade de implementao de outras estratgias para

minimizar os ndices de crie em crianas abaixo de 6 anos de idade, objetivando

inclusive melhores ndices no decorrer de sua vida. Alm de evitar a intoxicao por

flor, que pode ocorrer por ingesto a cada escovao, mesmo quando utilizado

um dentifrcio de baixa concentrao de flor (CURY e TENUTA, 2010).

A ingesto de flor deve ser rigorosamente controlada, principalmente em

crianas menores de 5 anos. Desta forma, torna-se necessria a busca por agentes

com atividade bactericida eficiente contra micro-organismos cariognicos e que no

acarretem efeitos indesejveis (NOGUEIRA et al., 2007).

Uma alternativa importante para eliminar os riscos da toxicidade crnica pelo

flor o desenvolvimento de formulaes dentifrcias com componentes eficazes

contra a crie, preferencialmente de origem natural, destinadas s crianas com

dentes decduos.

Um componente natural com potencial antibacteriano contra micro-

organismos causadores da crie a prpolis, que agrega valor por no oferecer

risco de toxicidade por ingesto do produto, fato muito comum para faixa etria

estabelecida no estudo.

A proposta da formulao reduzir a concentrao da prpolis de modo a

facilitar o mascaramento do sabor e odor, porm mantendo sua eficcia. Para tanto,

sugere-se a adio do xilitol, com dupla funo: melhorar o sabor da preparao por

ser um edulcorante e atuar como co-ativo, em sinergia com a prpolis visando

diminuir a populao de Streptococcus mutans na cavidade bucal. O delineamento

da formulao foi realizado com a inteno de usar excipientes biocompatveis e que

no oferecem riscos, mesmo se ingeridos pela criana, classe alvo do estudo. O uso

de corantes foi desconsiderado, devido possibilidades de reaes de

hipersensibilidade, que so indesejadas. Optou-se, portanto, o emprego de

flavorizantes harmnicos com a colorao natural da formulao obtida. Ainda com o

objetivo de idealizar um produto seguro para o pblico infantil, no foi utilizado

nenhum tipo de preservante; sendo investigado o potencial da prpria prpolis,

20

utilizada como princpio ativo, em atuar paralelamente como conservante

antimicrobiano durante a estabilidade da formulao.

A estabilidade da formulao foi avaliada atravs da submisso do produto s

condies extremas de temperatura com anlises frequentes de suas caractersticas

organolpticas, precipitao, potencial hidrogeninico, densidade, viscosidade e

contagem microbiana.

21

2 REVISO DA LITERATURA

2.1 CRIE

A crie dental uma das doenas mais antigas e de maior prevalncia

(RODRIGUES et al., 2008), sendo considerada um problema de sade pblica

(OLIVEIRA et al., 2008) comum em todo o mundo, ocorrendo entre 50% e 99% das

pessoas na maioria das comunidades (FERRO et al., 2011).

Caracteriza-se por ser uma doena crnica, complexa e multifatorial (BRETZ

et al., 2005), que se inicia pela infeco por bactrias que fermentam carboidratos e

produzem cidos no biofilme dentrio, alterando o equilbrio entre a superfcie dental

e o fluido do biofilme, levando como consequncia, perda de mineral e da matriz

orgnica dentinria (RODRIGUES et al., 2008).

Para o desenvolvimento da leso de crie necessrio que o hospedeiro seja

susceptvel e, apresente dieta e microbiota cariognicas, segundo postulado por

Keyes em 1968. Porm, outros fatores tais como a qualidade e a quantidade de

saliva, a virulncia dos micro-organismos, a higiene bucal do indivduo e seu

conhecimento e comportamento frente doena, podem influenciar diretamente a

progresso do desenvolvimento dessa doena (RODRIGUES et al., 2008).

A cavidade oral possui uma microbiota natural e harmnica, porm em

condies desfavorveis, um desequilbrio pode ocorrer e a doena prevalecer

(RODRIGUES et al., 2008), sendo os micro-organismos encontrados nesta regio de

maior interesse: Enterococcus faecalis, Streptococcus salivarius, Streptococcus

sanguinis, Streptococcus mitis, Streptococcus mutans, Streptococcus sobrinus,

Candida albicans, Lactobacillus casei (BRUSCHI et al., 2006), Actinomyces sp,

Streptococcus oralis, Streptococcus gordonii, Fusobacterium nucleatum e

Capnocytophaga ochraceae (RODRIGUES et al., 2008).

O principal fator etiolgico local da crie o biofilme com caracterstica de

acidogenicidade, onde esto presentes bactrias, principalmente Streptococcus sp e

Lactobacillus sp, correlacionando estes micro-organismos ao desenvolvimento da

doena (ZANELA et al., 2002 apud GONDIM, 2011).

Atualmente, existem considerveis evidncias de que os estreptococos do

grupo mutans desempenham um papel preponderante na crie em humanos

(JAWETZ et al., 1998; RODRIGUES et al., 2008). So altamente acidognicos e

22

acidricos e o seu potencial cariognico bem estabelecido em animais (APPEL e

RUS, 2005).

A presena constante de carboidratos fermentveis, especialmente a

sacarose, contribui para o desenvolvimento da placa cariognica, com caracterstica

cida devido grande quantidade de cido lctico produzidos pela fermentao da

sacarose. Essa acidez responsvel pelo desequilbrio da microbiota oral,

contribuindo para a manifestao da crie, atravs do aumento de espcies

intensamente acidognicas e acidricas, como Streptococcus mutans,

Streptococcus sobrinus e Lactobacilus, e da reduo severa do nmero de

Streptococcus sanguinis e de outras espcies indicadoras do estado de sade da

regio (RODRIGUES et al., 2008).

Os estreptococos do grupo mutans colonizam preferencialmente os dentes,

sendo encontrados em altas propores nos sulcos, nas fissuras, reas de contato e

outras zonas retentivas, de maneira que o seu padro de colonizao ocorre

paralelamente com as reas susceptveis crie (APPEL e RUS, 2005).

O perodo aps a erupo dos primeiros dentes considerada a fase de

maior risco para desenvolvimento da doena (RODRIGUES et al., 2008). Em

pesquisa realizada com crianas de 8 a 60 meses em Joinville, no estado de Santa

Catarina, foi encontrada prevalncia de 99,25% de estreptococos do grupo mutans

na placa dentria dos dentes decduos ntero-superiores (PERES et al., 2003).

Para medir a incidncia dessa doena no planeta foi criado um mtodo de

avaliao que aceito por toda a comunidade internacional como indicador do perfil

da sade bucal: o ndice de Dentes Cariados, Dentes Perdidos e Dentes Obturados

(CPO-D). Esse ndice CPO-D descrito por um valor que representa numericamente

a prevalncia de crie dental no indivduo, sendo calculada a partir da quantidade de

dentes em cada uma das situaes, ou seja, cariados, perdidos ou obturados; sendo

que a apresentao de menores nmeros de CPO-D reflete em melhores nveis da

doena (Organizao Pan-Americana da Sade OPAS/OMS - Brasil -

http://www.opas.org.br/sistema/fotos/bucal.pdf).

Embora os levantamentos epidemiolgicos venham demonstrando reduo

significativa, ainda possvel observar, entre a populao infantil, alta prevalncia

da doena crie, a qual responsvel pelo desenvolvimento de morbidades alm do

comprometimento da sade sistmica da criana (FERRO et al., 2011).

http://www.opas.org.br/sistema/fotos/bucal.pdf

23

Detalhada anlise da situao dessa doena em muitos pases mostram que

h uma distribuio assimtrica da prevalncia de crie - o que significa que aos 12

anos de idade ainda tem altos valores de CPO-D, embora uma parte seja totalmente

livre de crie. O valor mdio de CPO-D nem sempre reflete com preciso essa

distribuio assimtrica que leva errada concluso de que a situao da crie para

toda a populao controlada, quando na realidade, muitas pessoas ainda tm crie

(Who Oral Health Country/ Area Profile Programme http://www.whocollab.od.mah.

se/sicdata.html).

Em uma pesquisa com a populao do distrito de Mosqueiro em Belm do

Par, a prevalncia de crie aos 18-36 meses de idade foi de 31,68%, progredindo

com o aumento da idade, chegando a acometer 63,69% das crianas de 12 anos. O

ndice de CPO-D em dentes decduos aos cinco anos foi de 3,57 e o ndice CPO-D

em dentes permanentes aos 12 anos foi de 1,80 (PINHEIRO et al. 2006).

Para o ano de 2010 foi estabelecida pela OMS uma meta para sade bucal,

supondo que se tenha 90% de pessoas sem crie na idade de 5 a 6 anos e que o

ndice CPO-D seja menor que 1 aos 12 anos de idade (Organizao Pan-Americana

da Sade OPAS/OMS - Brasil - http://www.opas.org.br/sistema/fotos/bucal.pdf).

Sobre este estudo epidemiolgico aplicado em base nacional e realizado em

177 municpios brasileiros, constatou-se para o grupo de crianas de 5 anos,

reduo de 17% de crie em dentes decduos, entre os anos de 2003 e 2010. Os

ndices encontrados em 2003 foi de 2,8 e em 2010 foi de 2,3. Neste mesmo estudo

para a faixa etria de 12 anos obteve-se uma reduo de 26% no ndice CPO-D,

obtendo os valores de 2,8 em 2003 e 2,1 em 2010 (Pesquisa Nacional de Sade

Bucal Brasil Sorridente Sistema nico de Sade (SUS) 2010 -

http://189.28.128.100/dab/docs/geral/ apresentacao_ SB2010.pdf). Ou seja, apesar

de obter diminuio nos ndices de CPO-D em ambos os grupos, ainda no foi

possvel atingir a meta proposta pela OMS para aquele ano de 2010.

Diversos estudos demonstram que o risco de crie nos dentes decduos pode

ser reduzido se for evitada a colonizao por estreptococos do grupo mutans desde

o incio at a completa erupo de todos os dentes decduos. Esse controle nesta

fase imprescindvel, uma vez que a variedade de espcies da cavidade bucal da

criana ainda pequena e instvel, o que facilita a colonizao dos micro-

organismos (RODRIGUES et al., 2008).

http://www.opas.org.br/sistema/fotos/bucal.pdfhttp://189.28.128.100/dab/docs/geral/%20apresentacao_%20SB2010.pdf

24

Uma das medidas preventivas disseminadas pela OMS a fluoretao de

cremes dentais. A aplicao de flor em crianas pode reduzir, significativamente, o

risco de crie (OLIVEIRA et al., 2008). No entanto, sabe-se que para a faixa etria

em questo, o ndice de ingesto de creme dental e consequente absoro

sistmica de flor alta e possui riscos de intoxicao.

2.2 FLOR

Os efeitos colaterais da ingesto do on flor dependem da dose absorvida e

do tipo de exposio. Ao ser ingerido, em 30 a 45 minutos, 90% cai na corrente

sangunea, pois sua absoro ocorre principalmente no estmago devido o pH cido

facilitar o transporte do fluoreto, na forma de cido fluordrico, atravs das clulas da

mucosa gstrica. O flor solvel cai no sangue, distribudo por todo o organismo

se fixando nos tecidos em mineralizao - ossos e dentes (CURY e TENUTA, 2010).

Se este aumento excessivo de flor na corrente sangunea ocorrer no perodo

de odontognese, pode ocasionar a fluorose dental (OLIVEIRA et al., 2008). A

fluorose dental um efeito sistmico e ocorre pela toxicidade crnica. Apenas os

dentes em processo de formao do esmalte dental esto sujeitos a fluorose (CURY

e TENUTA, 2010). Esta doena afeta um grande nmero de crianas, principalmente

as menores de cinco anos de idade pela ingesto de produtos fluoretados, seja no

processo de escovao, dieta ou gua fluoretada de abastecimento pblico

(OLIVEIRA et al., 2008).

Em estudo retrospectivo, Buzalaf et al. (2002) observaram que a relao entre

fluorose e o consumo de suplementos infantis ou de leite em p no foi

estatisticamente significante. J, a utilizao de dentifrcio fluoretado apresentou

uma correlao positiva com a prevalncia de fluorose dentria. Em outro estudo,

concluiu-se que, dentre as formas pesquisadas de acesso ao flor, inclusive a

utilizao de gua de abastecimento pblico fluoretada para consumo e preparo de

alimentos, a escovao dentria com dentifrcio fluoretado foi o fator mais relevante

e altamente frequente nas crianas portadoras de fluorose dentria, principalmente

pelo fato delas engolirem o dentifrcio durante a escovao (MARTINS et al., 2002).

Tefilo et al. (2004) estimaram que 50% das crianas ingerem flor alm da

dose limite de segurana, levando concluso que o dentifrcio fluoretado pode

25

contribuir sozinho para uma ingesto excessiva de flor e determinar um maior risco

de fluorose nos dentes permanentes.

O esmalte no fluortico translcido e a fluorose se manifesta atravs de

diferentes graus de aumento de opacidade do esmalte, caracterizados atravs de

linhas brancas transversais (Figura 1-A) que podem se fundir tornando o dente todo

branco (CURY e TENUTA, 2010). Nos casos mais graves, o dente adquire uma

colorao acastanhada ou marrom (Figura 1-B), com perda de estruturas dentais

(OLIVEIRA et al., 2008).

Figura 1 Manifestao de fluorose em diferentes graus.

Legenda: (A) Esmalte opaco com linhas brancas transversais. (B) Dente com esmalte fluortico apresentando colorao acastanhada.

Fonte: http://odontobloggers.blogspot.com.br/2011/02/fluorose-dentaria.html.

O principal problema quanto ao uso de flor est na incorporao deste em

formulaes de gel dentifrcio infantil, pois nestas formulaes esto presentes

essncias que promovem sabor e odor agradvel fazendo com que as crianas

menores de cinco anos que no possuem total controle dos msculos da deglutio

ingiram em mdia 50% de gel dentifrcio por escovao (OLIVEIRA et al., 2008).

Aps estudo clnico, Lima (2007) recomenda reduo do teor de flor dos

dentifrcios infantis e a remoo do seu sabor agradvel para no favorecer a maior

ingesto pela criana. Anzai (2003) sugere, para reduzir o risco de fluorose, que o

uso de dentifrcios com as maiores concentraes de flor por crianas pr-

escolares seja evitado. Somente pequenas quantidades devem ser colocadas na

escova pelos pais ou com a superviso deles. O desenvolvimento e a avaliao de

dentifrcios com menores concentraes de flor uma alternativa para crianas

pequenas que esto sob risco de desenvolver fluorose. As embalagens dos

dentifrcios podem apresentar um pequeno orifcio que dispensem pequenas

quantidades, evitando a ingesto inadequada. necessrio cautela quando aromas

A B

26

especiais ou estratgias de marketing so utilizadas, de modo que possam encorajar

a ingesto de dentifrcios fluoretados.

O aumento na incidncia de fluorose dentria tem sido constatado em vrias

cidades do mundo e a ingesto de dentifrcios com flor por crianas tem sido

apontada como uma das causas desta alterao. Em anlise comparativa de

dentifrcios destinados s crianas, disponveis no mercado brasileiro, observou-se

que o tamanho do orifcio dos tubos no padronizado, com motivos infantis e com

sabores agradveis s crianas. Foi observado que no so todos os dentifrcios

que apresentam a indicao de idade sendo evidente a falta de padronizao na

apresentao dos produtos, concluindo-se que as mudanas so necessrias no

sentido de aumentar os esclarecimentos fornecidos aos consumidores, por

profissionais e fabricantes, sobre as caractersticas e utilizao dos dentifrcios

(SANGLARD-PEIXOT et al., 2004).

Recentemente, foi publicada a Resoluo da Diretoria Colegiada (RDC) N 16

(BRASIL, 2011), de 12 de abril de 2011, que traz as seguintes condies de uso e

advertncias que devem constar no rtulo para cremes dentais contendo de 0,1% a

0,15% de flor, exceto se j constar que contra-indicado para crianas (por

exemplo "Somente para uso adulto"), deve constar obrigatoriamente a seguinte

advertncia: "Crianas at 6 anos: use uma quantidade do tamanho de uma ervilha,

com superviso de um adulto durante a escovao para minimizar a deglutio. Se

estiver ingerindo flor proveniente de outras fontes, consulte seu mdico ou

dentista".

A Resoluo que trata sobre a categorizao de cosmticos a RDC 79

(BRASIL, 2000), de 28 de agosto de 2000 atualizada pela RDC 211 (BRASIL, 2005),

de 14 de julho de 2005, que revoga os Anexos I, VII, VIII, IX, X, XI, XII, XIII, XIV, XV,

XVII, XVIII, XIX, XX e XXI da Resoluo n 79/00. A lista de substncias que os

produtos de higiene pessoal, cosmticos e perfumes no devem conter, exceto nas

condies e com as restries estabelecidas, consta na RDC 16/11.

A legislao em vigor autoriza a concentrao mxima no produto final de

0,15% de flor, correspondente a 1.500 ppm.

Para garantir o fornecimento de flor pelo dentifrcio necessrio que esteja

na forma solvel (inica como fluoreto de sdio ou ionizvel como monofluorfosfato

de sdio). Mas a legislao no inclui o termo solvel na especificao, permitindo

que exista o risco de um dentifrcio ser completamente ineficaz para interferir na

27

progresso da crie dentria. Quando o abrasivo dos dentifrcios a slica, pode ser

usado na forma inica de fluoreto de sdio, porm quando contm clcio, o flor

deve estar necessariamente na forma ionizvel de monofluorfosfato de sdio para

garantir uma compatibilidade qumica (COSTA, 2009).

No se recomenda o uso de creme dental fluoretado em crianas de at 2

anos de idade. Entre 3 e 6 anos de idade, indica-se o creme dental com

concentrao reduzida de flor 500 ppm. A quantidade de creme dental utilizada

deve ser pequena (FERELLE et al., 2008).

Em um estudo in vitro avaliando dentifrcios contendo 500 e 1.100 ppm de

flor concluiu-se que apresentaram concentraes inibitrias mnimas similares e

atividade antimicrobiana para todos os micro-organismos, independente da

concentrao de flor (VIEIRA et al., 2008).

Crianas que ingerem uma grande quantidade de dentifrcio a cada

escovao continuam sob risco aumentado de desenvolver fluorose, mesmo

utilizando um dentifrcio de baixa concentrao de flor (CURY e TENUTA, 2010).

H necessidade que a normatizao seja mais especfica para o grupo de

produtos destinados higiene dental e bucal da classe infantil, iniciando pela

classificao, restrio de dosagem e publicidade, com o objetivo de garantir o

acesso ao produto mais apropriado para a faixa etria em questo e minimizar

agravos sade, seja pela falta de um componente ativo, seja pelo excesso de dose

do ativo que pode vir a causar toxicidade.

Como na RDC 79 (BRASIL, 2000) cita uma categoria especfica denominada

Produto de uso Infantil, todos os produtos destinados a esta faixa etria devem ser

enquadrados em tal categoria, ou ainda, se enquadrar na classificao proposta pela

RDC 211 (BRASIL, 2005): Dentifrcio Infantil, classificada como grau de risco 2, ou

seja possui indicaes especficas, cujas caractersticas exigem comprovao de

segurana e/ou eficcia, bem como informaes e cuidados, modo e restries de

uso (BRASIL, 2005, p. 4).

O que no ocorre na prtica, pois h dentifrcios destinados para crianas

notificados como Grau de risco 1, que no tem necessidade de comprovar

segurana e/ou eficcia e no apresentam informaes detalhadas quanto ao seu

modo de usar nem mesmo restries de uso (BRASIL, 2005). Um exemplo,

disponvel para consulta no banco de dados da ANVISA o Creme Dental U Smile

para Crianas (apresentaes Tiens e Morango), fabricado por Tiens do Brasil e

28

com vencimento do registro apenas em 14/09/2014

(http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/Notificado/ Rnotificado.asp).

H dentifrcios infantis registrados como dentifrcio anticrie como, por

exemplo Tandy Sabor Morangostoso e Gel Dental Colgate Jnior Bob Esponja,

ambos fabricados por Colgate-Palmolive Indstria e Comrcio Ltda.

(http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/consulta_produto/Rconsulta_produto_detalhe_

cosmtico.asp?NU_PROCESSO=2), inclusive com nomenclaturas e propagandas

que estimulam o interesse da criana favorecendo a possibilidade de ingesto do

produto contendo flor.

E ainda h dentifrcios registrado como infantil, como o caso do Baby

Colgate Barney, fabricados por Colgate-Palmolive Indstria e Comrcio Ltda.

(http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/consulta_produto/Rconsulta_produto_detalhe_

cosmtico.asp?NU_PROCESSO=2), porm contm flor e indicado para crianas

menores de 2 anos.

H a possibilidade de estar sendo comercializados dentifrcios contendo flor

de acordo com as especificaes, porm na forma insolvel e, portanto, ineficazes

no controle da crie, como por exemplo, as formas fluoreto de alumnio, fluoreto de

magnsio e fluoreto de clcio, conforme consta nas listas de substncias que os

produtos de higiene pessoal, cosmticos e perfumes no devem conter, exceto nas

condies e com as restries estabelecidas constantes do anexo da RDC 16,

recentemente publicada em 12 de abril de 2011.

2.3 PRPOLIS

A prpolis um produto resinoso produzido pelas abelhas, quimicamente

complexo, contendo material coletado a partir de gemas ou exsudatos de plantas,

substncias volteis e cera de abelha (TEIXEIRA et al., 2005; DOTA, 2011). Essa

complexa mistura de substncias usada na colmia para revestir as paredes

internas, protegendo a entrada contra invasores, e tambm para inibir o crescimento

de fungos e bactrias (GHISALBERTI, 1979; BURDOCK, 1998 apud ARAUJO et al.,

2012).

prpolis so atribudas diversas atividades biolgicas, sendo a mesma

utilizada na terapia de vrias doenas infecciosas (DOTA, 2011).

http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/Notificado/%20Rnotificado.asphttp://www7.anvisa.gov.br/datavisa/consulta_produto/Rconsulta_produto_detalhe_%20cosmtico.asp?NU_PROCESSO=2http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/consulta_produto/Rconsulta_produto_detalhe_%20cosmtico.asp?NU_PROCESSO=2http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/consulta_produto/Rconsulta_produto_detalhe_%20cosmtico.asp?NU_PROCESSO=2http://www7.anvisa.gov.br/datavisa/consulta_produto/Rconsulta_produto_detalhe_%20cosmtico.asp?NU_PROCESSO=2

29

A composio e anlise para determinao qumica da prpolis muito

dificultada por se tratar de uma mistura de produtos que varia de acordo com a flora

caracterstica de cada regio e pode sofrer mudanas sazonalmente em uma

mesma localidade (MENEZES, 2005; NASCIMENTO et al., 2008). Alm desses

fatores, h ainda influncia pelas caractersticas genticas das abelhas (SOUSA et

al, 2007).

A composio qumica das prpolis europeias bastante similar, devido

seletividade das abelhas na coleta das resinas, principalmente das espcies de

Populus. J a composio qumica das prpolis produzidas na Amrica do Sul, onde

rara a ocorrncia de Populus, observada diferena na composio de compostos

fenlicos de prpolis de mesma origem floral de algumas regies brasileiras

(AGUIAR et al. 2003).

Quatro compostos foram isolados da prpolis brasileira. Eles so identificados

como: cido 3-prenil-4-hidroxicinmico, 2,2-dimetil-6-carboxietenil-2H-1 benzopirano,

3,5-diprenil-4-hidroxicinmico e 2,2-dimetil-6-carboxietenil-8-prenil-2H-1-benzopirano

(MARCUCCI et al., 2001).

O Brasil o segundo maior produtor de prpolis, estando atrs apenas da

China (LUSTOSA et al., 2008 apud CAMPOS et al., 2011) sendo que os apicultores

no nosso pas utilizam para produo da prpolis, quase que exclusivamente a

abelha da espcie Apis mellifera, trazida ao Brasil pelos europeus, mesmo tendo

mais de 400 espcies de abelhas nativas identificadas (KERR et al., 1996.;

MENEZES et al., 2007 apud CAMPOS et al., 2011).

As prpolis de origem brasileira, bem como de outros pases so estudadas

paralelamente aos compostos de interesse farmacolgico isolados a partir delas, tais

como o Artepilin C, o cido cafico fenetil ster, o cido p-cumrico, o cido cafico,

a quercetina, a crisina e a naringenina, demostrando uma reduo de tumores em

animais e efeitos citotxicos em cultura de clulas de tumor humano (DORNELAS et

al., 2012).

Em recente investigao, Mouse et al. (2012) avaliaram o potencial

antitumoral de um extrato de prpolis marroquina in vitro, verificando atividade

citotxica dose-dependente.

A prpolis brasileira uma rica fonte de substncias fenlicas, sendo estes

compostos identificados como responsveis pelas aes anti-inflamatria,

antimicrobiana e antifngica (DOTA, 2011). A presena de flavonides e derivados

http://lattes.cnpq.br/1101846438208893

30

de cido p-cumrico est relacionada com a atividade antioxidante (DORNELAS et

al., 2012).

A maioria das amostras de prpolis de abelhas nativas brasileiras no

demonstram inibio do crescimento bacteriano, no entanto naquelas produzidas por

Frieseomelitta varia (CAMPOS et al., 2011), foi identificado o cido 3,5-diprenil-4-

hidroxicinmico, cido tambm conhecido como Artepillin C. Neste estudo, os

pesquisadores reconheceram o Artepilin C como componente antibacteriano na

prpolis produzida por esta abelha, e comprovaram sua eficcia antibacteriana in

vitro contra as bactrias Aeromonas hydrophila, Pseudomonas aeruginosa, Bacillus

subtilis e Staphylococcus aureus.

Para produzir a prpolis, as abelhas adicionam suas enzimas salivares

resina coletada da planta e este material em seguida, parcialmente digerido,

seguido pela adio de cera tambm produzido pelas abelhas (ARAUJO et al.,

2012).

Um passo adicional observado no grupo de abelhas sem ferro da

subfamlia Meliponinae, no qual resina, saliva e cera so misturados com solo, para

formar a chamada geoprpolis, armazenada em grandes quantidades dentro das

colmias e empregada como as demais (LIBERIO et al., 2011). Essas espcies so

nativas da Amrica do Sul (BANKOVA et al., 1998 apud ARAUJO et al., 2012).

Liberio et al. (2011) investigaram a atividade antimicrobiana contra patgenos

orais deste tipo distinto de prpolis chamado geoprpolis, produzida por abelhas

nativas Melipona fasciculata. No estudo observaram ao antimicrobiana contra S.

Mutans e C. albicans, com atividade inibitria significativa contra biofilmes de S.

mutans. A maior atividade antimicrobiana foi verificada no extrato contendo maior

concentrao de flavonide e, o teste num modelo animal da preparao do gel

contendo o geoprpolis demonstrou efeito anti-inflamatrio e ausncia de toxicidade.

Estudos recentes com prpolis demonstram resultados promissores, os quais

podem facilitar a aplicao profiltica (URUSHISAKI, 2011), alm da maioria dos

resultados obtidos com a aplicao da prpolis produzida por Apis mellifera

demonstram que sua utilizao relativamente segura, pelo fato de apresentar

baixa toxicidade (BURDOCK, 1998; MORENO et al., 2005 apud LIBERIO et al.,

2011).

Esse ativo de origem natural adicionado aos cremes dentais como um

componente de profilaxia para as doenas periodontais. O creme dental mostra

31

muito boa limpeza e efeito inibidor da placa, alm de efeito anti-inflamatrio

pronunciado (BOTUSHANOV, GRIGOROV et al., 2001).

Num estudo com pacientes com periodontite crnica tratados com prpolis

observou-se uma diminuio na contagem de bactrias anaerbicas viveis totais,

um aumento na proporo de stios com nveis baixos de Porphyromonas gingivalis,

e uma diminuio no nmero de locais com presena de leveduras detectvel

(GEBARAA, 2003).

Em experincia realizada na Hungria considerou-se bem aplicvel o uso de

um creme dental funcional contendo prpolis aps a cirurgia na cavidade oral, pois

promove a cicatrizao de feridas, em casos que envolvam processos na cavidade

oral que cicatrizam com dificuldade, e durante a cicatrizao de queimaduras (por

exemplo, aps a cirurgia a laser). Ela protege a gengiva, e seu uso recomendado

em casos de doenas da mucosa oral (SZABO E NEMETH, 2010).

Muitas propriedades biolgicas tm sido atribudas a vrios tipos de

prpolis, dentre elas: anti-inflamatria, antioxidante, antimicrobiana, antitumoral,

cicatrizante, atividades imunomoduladoras (ARAUJO et al., 2012) e antiviral

(URUSHISAKI, 2011).

A atividade anti-inflamatria da prpolis foi associada aos compostos

polifenis tais como flavonides, cidos fenlicos e seus steres, terpenides,

esterides e aminocidos (ARAUJO et al., 2012).

A especificao do tipo e origem da prpolis, bem como o gnero das

espcies de abelhas produtoras, fundamental na pesquisa deste complexo produto

natural, uma vez que os vrios tipos de prpolis podem ter composies qumicas

diversas e aes variadas de acordo com esses fatores (ARAUJO et al., 2012).

2.3.1 Prpolis Verde Tipificada

A tipificao da prpolis classifica de forma quantitativa os marcadores de

acordo com suas concentraes, favorecendo a industrializao de medicamentos,

cosmticos e produtos de higiene oral utilizando um tipo conhecido de prpolis, com

quantidades estabelecidas de componentes bioativos e, passvel de serem

realizados controles de qualidade (MARCUCCI, 2006).

32

Os pices da popularmente conhecida como alecrim-do-campo, cuja espcie

cientfica Baccharis dracunculifolia (famlia Asteraceae) tm sido apontados como

fontes da resina para a prpolis verde (TEIXEIRA et al., 2005).

Ao se comparar a prpolis com a composio de extratos dos pices

vegetativos da Baccharis dracunculifolia, observa-se grande concordncia, sendo

confirmado por Marcucci et al. (2008) atravs de espectrometria de massa e por

Nascimento et al. (2008) atravs de cromatografia a gs que o alecrim-do-campo a

fonte vegetal mais importante para a preparao da prpolis verde e que as abelhas

so muito seletivas na busca deste vegetal.

Em localidades onde h predominncia de mata nativa caracterstica de

cerrado e, em havendo a presena dessa espcie, a abelha da espcie Apis

mellifera, produz principalmente a prpolis verde, seja em qualquer poca e estgio

de crescimento da planta (SOUSA et al, 2007).

A prpolis verde do sudeste do Brasil muitas vezes referida como "Prpolis

brasileira", mas existem vrios outros tipos de prpolis brasileira, sendo identificados

por Marcucci et al. (2008) a prpolis vermelha proveniente do nordeste do Brasil, a

prpolis marrom do sul e a prpolis verde da regio Sudeste.

A composio de cada tipo de prpolis, assim como sua cor, diretamente

relacionada regio geogrfica e a vegetao predominante. A tipificao tem por

finalidade definir os principais compostos marcadores para cada uma das prpolis,

bem como mostrar as especficas concentraes de cada um dos marcadores para,

finalmente, estabelecer padres de qualidade para prpolis, direcionando a

aplicao teraputica de maneira apropriada (MARCUCCI et al., 2008).

A prpolis verde proveniente dos estados de So Paulo e Minas Gerais

pertence ao tipo chamado BRP/SP/MG. Os principais compostos que foram

considerados marcadores e quantificados neste tipo de prpolis so: cido cafico,

cido p-cumrico, cido 3-prenil-4-hidroxicinmico, cido 3,5-diprenil-4-

hidroxicinmico e cido 2,2-dimetil-8-prenil-2H-1-benzopirano-6-propenico

(MARCUCCI et al., 2008).

A prpolis verde brasileira, coletada em Minas Gerais contm principalmente

compostos polifenlicos, tais como flavonas, flavanonas, cidos fenlicos, e steres

de cidos fenlicos; composio da qual permanece relativamente constante

(URUSHISAKI, 2011).

33

O tipo BRP/PR a prpolis verde do Paran que apresenta muitos compostos

em comum com BRP/SP/MG, sendo seus marcadores: cido cafico, cido 3,5-

diprenil-4-hidroxicinmico, cido 2,2-dimetil-8-prenil-2H-1-benzopirano-6-propenico,

cido 2,2-dimetil-8-prenil-2H-1-benzopirano-6-propenico, cido 3-prenil-4-

hidroxicinmico, cido p-cumrico e cido 2,2-dimetil-2H-1-benzopirano-6-

propenico (MARCUCCI et al., 2008).

Devido ampla variao na concentrao dos marcadores e sua importncia

econmica, a prpolis BRP/SP/MG foi ainda classificada em quatro subtipos de

composio qualitativa semelhante, no qual BRPX tem a mais alta concentrao de

compostos bioativos, seguido por BRP1, BRP2 e por fim BRP3 (MARCUCCI et al.,

2008).

Conforme Marcucci (2006) props ANVISA atravs de Nota Tcnica de 14

de setembro de 2005, a prpolis do tipo BRP1 deve apresentar para cada marcador

as seguintes concentraes: cidos 3-prenil-4-hidroxicinmico (mnimo de 1,0%),

3,5-diprenil-4-hidroxicinmico (mnimo de 2,7%), 2,2-dimetil-8-prenil-2H-1-

benzopirano-6-propenico (mnimo de 2,3%), cafico (mnimo de 1,8%) e p-cumrico

(mnimo de 1,6%). As indicaes teraputicas antibacteriana, anti-inflamatria,

analgsica, antialrgica, cicatrizante e antioxidante para esta tipificao, j foram

comprovadas atravs de estudos cientficos. Sugere-se ainda que se, a sub-tipagem

da prpolis apresentar quantidades menores dos marcadores, a concentrao da

mesma, empregada na formulao, dever ser maior, a fim de se obter uma

proporcionalidade.

O cido 3,5-diprenil-4-hidroxicinmico, denominado de Artepilin C o principal

marcador da prpolis brasileira (MARCUCCI, 2006), sendo identificado como

caracterstico da prpolis verde (NASCIMENTO et al., 2008) e apresenta-se como

um composto majoritrio que demonstrou efeito anti-inflamatrio (PAULINO et al.,

2008) e empregado na forma de p pelos japoneses para tratamento de tumores

(MARCUCCI, 2006).

Dota (2011) avaliou in vitro a atividade antifngica do extrato etanlico de

prpolis contra Candida albicans, constatando que o extrato de prpolis estudado foi

capaz de inibir todas as leveduras testadas. A amostra de prpolis analisada

classificada como tipo BRP e foi coletada de colmias localizadas dentro de uma

reserva de eucaliptos cercada por mata nativa com predominncia de Baccharis

dracunculifolia.

34

Os efeitos da prpolis verde extrada em LLisina foram recentemente

determinados por Dornelas et al. (2012) como sendo quimiopreventiva contra a

carcinognese de bexiga se administrada 30 dias antes do incio da induo por N-

Butil-N-[4-hidroxibutil] nitrosamina.

A anlise da atividade do extrato aquoso de prpolis verde brasileira

demonstrou fortes indcios que possui um efeito anti-influenza e a avaliao de seus

componentes demonstrou que os cidos cafeoilqunicos so os ativos anti-viral,

sugerindo que no tem impacto direto sobre o vrus da gripe, mas pode ter uma

atividade citoprotetora afetando o processo celular interno. No entanto, os

componentes cido p-cumrico, Artepillin C, baccharin, drupanin, e kemferide no

apresentam atividade anti-influenza (URUSHISAKI, 2011).

A prpolis produzida por Apis mellifera demonstra propriedades

antibacterianas contra bactrias Gram negativas (Aeromonas hydrophila e

Pseudomonas aeruginosa) e Gram positivas (Bacillus subtilis e Staphylococcus

aureus), no entanto o potencial de atividade varia de acordo com a localizao

geogrfica da colmia (CAMPOS et al., 2011).

indicada como adjuvante no controle ou profilaxia da crie dentria e outras

doenas infecciosas da cavidade oral, devido seus efeitos inibidores sobre micro-

organismos cariognicos, tais como Streptococcus mutans e Lactobacillus sp, e

ainda sobre as glucosiltransferases, ou seja, enzimas bacterianas envolvidas no

processo cariognico (IKENO et al., 1991; SAWAYA, et al., 2004 apud LIBERIO et

al., 2011). Inibe ainda o crescimento de outras bactrias de interesse odontolgico

tais como: Streptococcus salivarius, Streptococcus mitis e Lactobacillus casei

(GONDIM, 2011).

2.4 XILITOL

O xilitol, encontrado em vrios vegetais, um edulcorante com poder

adoante semelhante sacarose, tendo o grande diferencial de ser no cariognico.

Ele reduz o ndice de crie devido ao seu poder estimulante de salivao, o que

contribui para o aumento do pH da placa e promove a remineralizao (APPEL e

RUS, 2005).

Bastos et al. (2005) tambm descreveram essas e outras propriedades

anticariognicas do xilitol que esto relacionadas reduo na adeso de placa,

35

comprometimento do crescimento de bactrias cariognicas, sendo especfico para

Streptococcus mutans (GONALVES et al., 2001) e remineralizao, com a

observao desta ocorrer em leses iniciais da crie.

Em um estudo com meninos de 8 a 16 anos, foi constatado que solues de

fluoreto de sdio a 0,05% contendo 2,5% ou 12,5% de xilitol apresentaram melhores

resultados em relao diminuio do nmero de estreptococos do grupo mutans

presentes na saliva quando comparadas soluo de fluoreto de sdio a 0,05%. A

associao de flor e xilitol promove um efeito adicional na reduo do nmero de

estreptococos do grupo mutans, embora esse efeito no apresente alteraes com o

aumento da concentrao de xilitol (GONALVES et al., 2001).

Uma alternativa para explicar como o xilitol age impedindo o crescimento de

bactrias cariognicas, que ele no fermentado pelo S. mutans e S. sobrinus

(ROBERTS et al., 2002). Tambm no fermentado pela maioria dos micro-

organismos bucais e, portanto, considerado no cariognico, por no promover a

formao de produtos finais cidos pelas bactrias da placa dental (GONALVES et

al., 2001).

2.5 ESTUDOS DE ESTABILIDADE

O estudo da estabilidade, segundo o Guia de Estabilidade de Produtos

Cosmticos (ANVISA, 2004a) tem por objetivo indicar o grau de estabilidade relativa

do produto em anlise, submetendo-o a vrias condies que possa estar sujeito

desde sua fabricao at o fim de sua validade. Essa estabilidade relativa, pois

varia com o tempo e em funo de fatores que aceleram ou retardam alteraes nos

parmetros do produto, tais como temperatura, umidade, luminosidade, presena de

oxignio, incompatibilidades fsico-qumica entre os componentes da formulao ou

entre a formulao e o material de acondicionamento.

As vrias condies impostas nos ensaios de estabilidade, tais como:

temperatura, presena de luz e tipo de material de acondicionamento; so

essenciais para assegurar a estabilidade da preparao (ALLEN JR. et al., 2007).

Os produtos que no so estreis, devem ser submetidos aos controles da

contaminao microbiana, pois esta pode levar no somente sua deteriorao,

com mudanas fsicas e qumicas associadas, mas tambm, ao risco de infeco

para o usurio (BRASIL, 2010).

36

Antes de submeter a formulao aos ensaios de estabilidade, necessrio

realizar o teste de centrifugao, cujo objetivo apontar possvel instabilidade na

preparao, demonstrando a necessidade de reformulao. Apenas o produto que

permanece estvel poder ser submetido aos testes de estabilidade (ANVISA,

2004a).

As amostras devem ser armazenadas em quantidade suficiente para as

anlises necessrias, nunca completando o volume total da embalagem, permitindo

possveis trocas gasosas num espao de um tero da capacidade do frasco

(ANVISA, 2004a).

No teste de estabilidade preliminar, a amostra ser submetida a condies

extremas de temperatura e diversos parmetros sero analisados (ISAAC et al.,

2008), consistindo na fase inicial do desenvolvimento do produto (ANVISA, 2004a).

J o teste de estabilidade acelerada, emprega condies no extremas (ISAAC et

al., 2008) e pode ser usado para estimar o prazo de validade da formulao, sendo

considerado um estudo preditivo, pois alm da vida til do produto, prev a

estabilidade e compatibilidade da formulao com o material de embalagem

(ANVISA, 2004a).

37

3 JUSTIFICATIVA

Proporcionar criana o hbito de higiene oral possibilita uma menor

incidncia de crie na adolescncia e na fase adulta. O uso de dentifrcios contendo

flor a oferta mais comum para preveno desta doena. No entanto, a ingesto

desses produtos por crianas com idade inferior a 6 anos favorecida pelo fato de

no possurem total controle dos msculos da deglutio, aliada apresentao dos

dentifrcios ser colorida e com temas infantis, alm de possurem aroma e sabor

agradveis.

Essa ingesto de dentifrcios com flor tem sido apontada, em todo o mundo

como a responsvel pelo aumento da incidncia de fluorose dentria.

Torna-se, portanto, necessria a implementao de outras estratgias para

minimizar os ndices de crie em crianas com idade inferior a 6 anos, com a

utilizao de uma opo eficaz e segura, evitando a intoxicao por flor.

Como alternativa sugere-se o desenvolvimento de dentifrcios com

componentes seguros e eficazes contra a crie, preferencialmente de origem

natural, destinadas s crianas com dentes decduos.

Dessa forma, o emprego da prpolis verde, cujas evidncias cientficas

apontam grandes benefcios sade bucal, dar origem a um gel dental associado a

outros excipientes, entre eles o xilitol, objetivando oferecer uma opo de higiene

oral palatvel para o pblico infantil, sem corante nem preservante, eficaz na

preveno contra crie e segura, no oferecendo risco de desenvolvimento de

fluorose.

38

4 OBJETIVOS

4.1 OBJETIVO GERAL

- Desenvolver e avaliar a estabilidade de uma formulao de gel dental

contendo prpolis verde tipificada para uso infantil.

4.2 OBJETIVOS ESPECFICOS

- Desenvolver farmacotecnicamente a formulao de acordo com a

compatibilidade entre os insumos.

- Determinar as especificaes do produto formulado atravs de anlises para

verificao das caractersticas organolpticas, pH, densidade, viscosidade e

contagem microbiana.

- Avaliar a estabilidade fsico-qumica e microbiolgica do produto atravs de

estudos preliminares e testes de estabilidade acelerada.

39

5 MATERIAIS E MTODOS

5.1 MATERIAIS

5.1.1 Matrias-primas e Embalagens

Foram utilizadas matrias-primas e embalagens fabricadas por empresas

qualificadas dos ramos farmacutico e cosmtico, adquiridas mediante laudo de

anlise. Segue abaixo listagem contendo o nome do material, fabricante, origem,

procedncia, nmero de lote, datas de fabricao e validade, conforme a

disponibilidade das informaes.

- gar MacConkey Fabricado por: Himedia Laboratories PVT Ltda. Origem:

ndia Lote: 110500 Data de Fabricao: 06/2011 Data de Validade:

30/03/2016.

- gua Destilada Produzida por: Laboratrio da Uniban.

- lcool Etlico Absoluto P.A. Fabricado p: Synth Lote: 148224 Data de

Fabricao: 24/10/2011 Validade: 24/10/2014.

- Aroma de Banana em P Fabricado por: Aromax Procedncia: Brasil Lote:

100103511 Data de Fabricao: 02/2010 Data de Validade: 02/2012.

- Aroma de Baunilha Extrato Natural em P Fabricado por: Aromax

Procedncia: Brasil Lote: 111036966 Data de Fabricao: 10/2011 Data de

Validade: 10/2013.

- Aroma de Chocolate em P Fabricado por: Aromax Procedncia: Brasil

Lote: 110932367 Data de Fabricao: 09/2011 Data de Validade: 09/2013.

- Aroma de Morango em P Fabricado por: Aromax Procedncia: Brasil Lote:

111141449 Data de Fabricao: 11/2011 Data de Validade: 11/2013.

- Bisnagas de Alumnio de 15g Distribudo por: Vip Embalagens Lote: 465

Data de Fabricao: 31/12/2009.

- Bisnagas de Alumnio de 120g Distribudo por: Vip Embalagens Lote: 68

Data de Fabricao: 25/04/2010.

- Carboxi Metil Celulose (CMC) Distribudo por: Deg Origem: Nacional

Procedncia: Nacional Lote: 0000104569 Data de Fabricao: 05/01/2011

Data de Validade: 05/01/2012.

40

- Cloreto de Sdio P.A. Fabricado por: Chemco Lote: 24855 Data de

Fabricao: 07/2011 Data de Validade: 07/2013.

- Dixido de Silcio Coloidal (Tixosil 333) Fabricado por: Rhodia Distribudo por:

Via Farma Origem: Brasil Procedncia: Brasil Lote: 081010 Data de

Fabricao: 08/2010 Data de Validade: 08/2011.

- Extrato Mole de Prpolis Verde Tipificada (EMPV) sub-tipo BRPX Data de

Fabricao: 10/06/2010; cedido gentilmente pela Prof Dr Maria Cristina

Marcucci Ribeiro, coordenadora do Laboratrio de Qumica de Produtos Naturais

da Universidade Bandeirante de So Paulo.

- Glicerina Distribudo por: Casa Americana Lote: GF000111 Data de

Fabricao: 15/08/2011 Data de Validade: 15/08/2014.

- Hidrxido de Sdio 4M Produzido por: Laboratrio da Uniban

- Lauril Sulfato de Sdio (LSS) - Distribudo por: Pharma Nostra Origem: China

Procedncia: Hong Kong Lote: IF-LA-100723 Data de Fabricao: 07/2010

Data de Validade: 07/2013.

- Meio de Cultura BHI Sangue Produzido por: Laboratrio da Uniban Data de

Validade: 03/03/2012.

- Meio de Cultura Miller Hinton Produzido por: Laboratrio da Uniban Data de

Validade: 03/03/2012.

- leo de Casca de Laranja (Citrol) Produzido por: Biodinmica Qumica e

Farmacutica Ltda. Lote: 322/11 Data de Validade: 05/2014.

- leo Essencial de Menta Piperita Produzido por: WNF Ind. Com. Ltda. Lote:

074/11 Data de Fabricao: 09/2011 Data de Validade: 09/2014.

- Plate Count gar (PCA) Fabricado por: Himedia Laboratories PVT Ltda.

Origem ndia Lote: 97816 Data de Fabricao: 02/2011 Data de Validade:

01/10/2015.

- Proteol OAT (Lauroato de sdio e aminocidos de aveia) Distribudo por:

Chemyunion Origem: Frana Lote: 1008500011 - Da ta de Fabricao:

26/03/2010 Data de Validade: 25/03/2013.

- Sabouraud Dextrose gar Fabricado por: Himedia Laboratories PVT Ltda.

Origem ndia Lote: 112111 Data de Fabricao: 06/2011 Data de Validade:

30/04/2014.

- Sach de Alumnio Tamanho 70x100mm Distribudo por: Ely Martins Lote:

031611 Data de Validade: 31/03/2014.

41

- Sach de anaerobiose Data de Validade: 09/2012.

- Soluo Tampo pH 4,01 Produzido por: Laboratrio da Uniban Data de

Fabricao: 22/06/2011.

- Soluo Tampo pH 6,86 Produzido por: Laboratrio da Uniban Data de

Fabricao: 22/06/2011.

- Tampo Fosfato pH 7,0 Produzido por: Laboratrio da Uniban.

- Xilitol Fabricado p: Zhejinag Huakang Distribudo por: Via Farma Origem:

China Procedncia: Brasil Lote: XC10120801 Data de Fabricao: 12/2010

Data de Validade: 12/2013.

5.1.2 Produtos Industrializados de Referncia

Como critrio de referncia, algumas anlises fsico-qumicas e

microbiolgicas foram baseadas nos seguintes produtos comercializados:

- Gel Dental Cocoric Bitufo Sabor Tutti-Frutti Fabricado por: IPH&C Lote:

067970 Validade: 05/08/2014.

- Gel Dental Prophyto Formulado e Distribudo por: Pharmacosmtica

Fabricado por: Yakult S.A. Lote: PHYPE001 Validade: 05/2011.

5.1.3 Materiais de Laboratrio e Equipamentos

Para o desenvolvimento do presente estudo foi necessria a utilizao dos

seguintes materiais de laboratrio e equipamentos:

Ala de Drigalski, Barbante, Basto de vidro, Bquer de vidro, Erlenmeyer, Esptula

de silicone, Esptula metlica, Estante para tubo de ensaio, Jarra de anaerobiose,

Pipeta graduada, Pipetador automtico, Pisseta, Ponteiras para micropipeta, Placa

de petri estril 90mmx15mm lisa Lote: 101028/1-2 Data de Fabricao:

28/10/2010, Proveta de vidro, Tampo de gaze para erlenmeyer, Termmetro, Tubo

de ensaio, Tubo Falcon, Vidro de relgio, Agitador magntico com aquecimento

Fisatom modelo 752A n srie 0935678, Autoclave vertical modelo 415 Fanem,

Balana analtica Shimadzu modelo AY220 n srie D452203375, Balana semi-

analtica Marte Modelo AS 1000 C (n Srie 282618), Banho de Ultrassom Maxiclean

42

1600 A Unique, Bico de bunsen, Centrfuga Excelsa II modelo 206 MP Fanem,

Estufa Quimis modelo 142 n de srie 704.074, Estufa de cultura Orion modelo

502A Fanem (002CB), Estufa de cultura Revco modelo RCO3000TVBB, Fluxo

Laminar Vertical Pachane, Freezer do refrigerador Continental modelo Elegance RC

26, Palitos de fsforo, Papel absorvente descartvel, Peagmetro digital Alpax

modelo APA200 n de srie 6041/307, Picnmetro metlico de alumnio Universal

capacidade de 25 mL, Ultrapurificador de gua Master System Gehaka n srie

05072703001001, Seladora Barbi modelo TC-260, Viscosmetro rotacional

Brookfield RVT (n Srie 107625).

5.2 MTODOS

5.2.1 Desenvolvimento Farmacotcnico das Formulaes

O desenvolvimento das formulaes envolveu a elaborao de diversas

preparaes, sempre veiculadas em gel, utilizando como princpio ativo a prpolis

verde tipificada e como excipientes insumos com ao edulcorante, flavorizante,

espumante, espessante e umectante. Essas funes farmacotcnicas foram

selecionadas com a finalidade de se obter a formulao mais apropriada de Gel

Dental Infantil contendo Prpolis Verde Tipificada.

Antes do desenvolvimento da formulao necessrio avaliar e considerar as

caractersticas qumicas e fsicas particulares de cada substncia, afim de preparar

da melhor forma o produto final que ser aprovado para comercializao (ALLEN

JR. et al., 2007).

Para o preparo das diferentes formulaes desenvolvidas foi requerida

inicialmente a compatibilidade do ativo e excipientes. Isso fundamental para

obteno de um produto estvel, eficaz, atrativo, fcil de administrar e seguro

(ALLEN JR. et al., 2007).

A prpolis verde do tipo BRPX utilizada neste estudo foi fornecida pela

empresa Novo Mel e utilizada na forma de Extrato Mole, com resduo slido de

93,5%, preparado pela pesquisadora Ms. Cristina Freitas Nunes e cedido

gentilmente pela Prof Dr Maria Cristina Marcucci Ribeiro, coordenadora do

Laboratrio de Qumica de Produtos Naturais da Universidade Bandeirante de So

Paulo. As concentraes apresentadas de seus principais marcadores foram de:

43

cidos 3-prenil-4-hidroxicinmico (mnimo de 1,3%), 3,5-diprenil-4-hidroxicinmico

(mnimo de 3,6%), 2,2-dimetil-8-prenil-2H-1-benzopirano-6-propenico (mnimo de

3,5%), cafico (mnimo de 2,6%) e p-cumrico (mnimo de 2,2%), conforme

especificao de tipificao proposta por Marcucci et al. (2008).

A incorporao deste ativo foi feita atravs de testes de solubilidade e

compatibilidade com os excipientes das formulaes.

Os excipientes utilizados foram selecionados inicialmente pela sua

biocompatibilidade. Tiveram suas concentraes de uso adaptadas de acordo com o

desejado. Eventualmente foram substitudos, seja por incompatibilidade na

formulao, ou ainda por no atender s necessidades do produto.

Para cada formulao desenvolvida foram feitas observaes e traadas

medidas corretivas para as prximas formulaes. As caractersticas organolpticas

foram avaliadas a cada desenvolvimento sendo o fator inicial para a tomada de

decises para futuras preparaes.

A escolha da embalagem para armazenamento da formulao foi feita com

base na avaliao de seu aspecto, funcionalidade, compatibilidade e interao com

a frmula, proteo ao vapor dgua e luminosidade (ANVISA, 2004a).

5.2.2 Avaliao dos Parmetros de Qualidade da Formulao Selecionada

Segundo o Guia de Controle de Qualidade de Produtos Cosmticos (BRASIL,

2008), os ensaios de Controle de Qualidade cujos objetivos so avaliar as

caractersticas fsicas, qumicas e microbiolgicas das matrias-primas, embalagens,

produtos em processo e produtos acabados, so uma exigncia regulatria, ou seja,

esses dados obtidos nos ensaios, atravs de mtodos pr-determinados, so

caracterizados como especificaes no ato da regularizao do produto. A

verificao da conformidade dessas especificaes um requisito necessrio para

garantir a qualidade, a segurana e a eficcia do produto.

A formulao selecionada foi preparada e mantida em repouso por 24h para

atingir a consistncia final (ISAAC et al., 2008), aps este tempo foram analisados e

definidos os parmetros de qualidade para servirem de especificao durante todas

as etapas do estudo. Os critrios avaliados foram: caractersticas organolpticas,

centrifugao, pH, densidade, viscosidade e contagem microbiana.

44

A compatibilidade com o material de acondicionamento foi verificada ao longo

do estudo, considerando sua integridade e da formulao, avaliando-se a vedao,

funcionalidade (ANVISA, 2004a), compatibilidade e preservao do produto.

5.2.3 Estudo de Estabilidade Preliminar

A formulao selecionada ser submetida s condies de estresse com o

objetivo de acelerar o surgimento de possveis sinais de instabilidade (ANVISA,

2004a).

As amostras sero armazenadas na embalagem primria dimensionada como

material de acondicionamento final (bisnagas de alumnio) ou semelhante a ela

(sachs de alumnio), de forma a ocupar no mximo dois teros de sua capacidade.

As condies extremas que as amostras sero submetidas so: temperaturas

de 45C 2C, -5C 2C e a ciclos de 24 horas alternados de aquecimento e

resfriamento. Paralelamente, tambm sero avaliadas amostras armazenadas

temperatura ambiente em duas situaes de luminosidade diferentes, ou seja,

protegida da luz e exposta luz.

O Guia de Estabilidade de produtos Cosmticos sugere que o estudo de

estabilidade preliminar tenha durao de 15 dias, exceto o ciclo de aquecimento a

45C 2C e resfriamento a -5C 2C, que deve durar 12 dias, equivalentes 6

ciclos (ANVISA, 2004a). No entanto, foi optado por realizar 7 ciclos durante 14 dias

nestas temperaturas.

A tomada de amostra do gel embalado em bisnaga de alumnio foi feita

descartando-se a primeira alquota do produto. No caso das amostras embaladas

em sachs de alumnio, a camada superficial foi eliminada e o restante foi

homogeneizado para ento tomar a amostra para ensaio (BRASIL, 2008).

Os parmetros fsico-qumicos avaliados neste estudo foram: caractersticas

organolpticas (aspecto, cor, odor e sabor), precipitao, valor de pH, densidade e

viscosidade, cujos detalhes esto descritos no item 5.2.5.

Os produtos classificados como cosmticos no precisam ser estreis, mas

devem ser adequadamente protegidos da contaminao microbiana (GEIS, 2006),

por isso a necessidade de realizar anlises microbiolgicas. Os detalhes da

contagem microbiana esto esclarecidos no item 5.2.6.

45

O resumo das condies empregadas e a frequncia das anlises est

exposto no Quadro 1.

Quadro 1 Parmetros fsico-qumicos e microbiolgicos avaliados de acordo com a

frequncia das anlises nas condies de temperatura e luminosidade empregadas

no estudo de estabilidade preliminar.

Anlises Frequncia das Anlises

Caractersticas Organolpticas Diria

Precipitao 15 dia

pH 7 e 15 dias

Densidade 15 dia

Viscosidade 15 dia

Contagem Microbiana 15 dia

Fonte: Acervo pessoal.

5.2.4 Estudo de Estabilidade Acelerada

Neste caso a formulao selecionada ser submetida s condies menos

extremas que o teste anterior, com o objetivo de prever a estabilidade do produto,

estimar o prazo de validade e avaliar a compatibilidade com o material de

acondicionamento (ANVISA, 2004a). Portanto, as amostras sero armazenadas na

embalagem primria dimensionada como material de acondicionamento final

(bisnagas de alumnio) ou semelhante a ela (sachs de alumnio), de forma a ocupar

no mximo dois teros de sua capacidade.

As condies que as amostras sero submetidas durante 30 dias so:

aquecimento em estufa a 45C 2C, resfriamento em freezer a -5C 2C e

exposio temperatura ambiente protegida da luz.

Da mesma forma que no estudo de estabilidade preliminar, a amostragem do

gel embalado em bisnaga de alumnio foi feita descartando-se a primeira alquota do

produto e, no caso das amostras embaladas em sachs de alumnio, a camada

superficial foi eliminada e o restante foi homogeneizado para ento tomar a amostra

para ensaio (BRASIL, 2008).

Os mesmos parmetros fsico-qumicos e microbiolgicos avaliados no estudo

de estabilidade preliminar sero verificados neste estudo, estando o resumo das

condies empregadas e a frequncia das anlises exposto no Quadro 2.

46

Quadro 2 Parmetros fsico-qumicos e microbiolgicos avaliados de acordo com a

frequncia das anlises nas condies de temperatura e luminosidade empregadas

no estudo de estabilidade acelerado.

Anlises Frequncia das Anlises

Caractersticas Organolpticas 1, 7, 15 e 30 dias

Precipitao 1, 15 e 30 dias

pH 1, 7, 15 e 30 dias

Densidade 1, 15 e 30 dias

Viscosidade 1, 15 e 30 dias

Contagem Microbiana 1, 15 e 30 dias

Fonte: Acervo pessoal.

5.2.5 Anlises fsico-qumicas

As anlises abordadas nesta parte do estudo foram os ensaios organolpticos

e fsico-qumicos da forma cosmtica preparada, com a finalidade de obter um

produto dentro dos padres de qualidade, verificando desta forma se a formulao

desenvolvida apresenta-se em conformidade s especificaes estabelecidas.

Conforme sugesto do Guia de Controle de Qualidade de Produtos

Cosmticos (BRASIL, 2008) os ensaios organolpticos e fsico-qumicos para

dentifrcios so: aspecto, cor, odor, sabor, pH, densidade e viscosidade.

A centrifugao tambm um parmetro de anlise fsico-qumica (Brasil,

2010) aplicado para avaliar a estabilidade da formulao.

5.2.5.1 Caractersticas Organolpticas: aspecto, cor, odor e sabor

Essa anlise detectvel pelos rgos dos sentidos (BRASIL, 2008) foi

realizada ao longo do desenvolvimento das formulaes, servindo como aspecto

base para seleo de formulaes a serem submetidas aos testes posteriores.