Departamento de MicrobiologiaInsti tuto de Cincias BiolgicasUniversidade Federal de Minas Geraishtt p://www.icb.ufmg.br/mic

Colorao de Ziehl-Neelsen

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Introduo

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O estudo das micobactrias apresenta grande importncia em medicina humana e animal. No gne-ro Mycobacterium incluem-se os agentes da tuberculose (M. tuberculosis, M. bovis e M. avium) e da lepra (M. leprae), alm de outras espcies, algumas saprfi tas e outras de patogenicidade peculiar.

So caractersti cas do gnero: - Aerobiose estrita; - Reproduo lenta, mesmo em condies ti mas (seu perodo de duplicao de 12 a 18 horas enquanto outras bactrias podem se duplicar em 20 minutos); - Reaes ti ntoriais prprias que as fazem conhecidas com lcool-cido-resistentes (B.A.A.R.) evidenciadas pela colorao de Ziehl-Neelsen. Coram-se pela mistura fucsina mais cido fnico aquecido, que penetra no citoplasma e resistem descolorao com uma mistura de cido e lcool. - Grande resistncia ao dos agentes qumicos, o que permite o seu isolamento em mate-rial contaminado com outros microrganismos; - Exigncia nutriti va: nos meios comumente usados (Lowenstein-Jensen e Petragnani, base de ovo), o crescimento se d aps 12 a 15 dias, mas as culturas devem ser manti das em observao por at 6 a 8 semanas. Antes da semeadura do material, se contaminado com outras bactrias, deve-se proceder descontaminao. O isolamento do germe permite a sua ti pifi cao, quer pelo aspecto da colnia desenvolvida (eugnica ou disgnica), quer por provas bioqumicas ou fagoti pa-gem. Tambm o aspecto microscpico da colnia importante (fator corda). - Patogenia peculiar: o parasiti smo intracelular, levando a leses que tendem cronicida-de, com aparecimento de hipersensibilidade do ti po tardio. Os anti corpos parti cipam da imunidade que se desenvolve contra o microrganismo. M. leprae no culti vvel, sendo visvel apenas em material colhido de paciente, com a disposio t pica de globias (bacilos em forma de cachos, onde os bacilos se acham reunidos por uma substncia de concentrao no corvel, a glia). Entre as micobactrias at picas, algumas so patognicas para o homem.

- Lminas com esfregao de escarro bacilfero de paciente tuberculoso; - Bateria de corantes de Ziehl-Neelsen: - Fucsina: Dissolver 3g de fucsina bsica em 10 ml de etanol 90%-95%, em seguida adicionar 90 ml de uma soluo aquosa de fenol a 5% - lcool cido: Adicionar 3 ml de HCl concentrado em 97 ml de etanol a 90%-95%. - Azul de Meti leno: Dissolver 0.3 g de azul de meti leno em 100 ml de gua desti lada.

Material para colorao de ziehl-neelsen

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Execuo

- Cobrir a lmina, previamente fixada pelo calor, com fuscina fenicada. Aquecer at a emisso de vapores, sem deixar o corante secar, por 3 a 5 minutos; - Lavar em gua corrente; - Em seguida descorar completamente com lcool-cido; - Lavar em gua corrente novamente; - Contracorar com azul de metileno por 30 segundos; - Lavar em gua corrente novamente; - Examinar a lmina ao microscpio com objetiva de imerso.

Leitura e interpretao

Resultado InterpretaoAusncia de B.A.A.R. em 100 campos microscpicos (CM).Negativo

Exame a ser repetido 1 a 2 B.A.A.R. em 100 campos microscpicos.

Positivo

(+)(++)(+++)(++++)

Menos de 10 B.A.A.R. em 100 CM1 a 10 B.A.A.R. em 10 CM11 a 100 B.A.A.R. em 10 CMMais de 100 B.A.A.R. em 10 CM

A bacterioscopia do escarro pela colorao de Ziehl-Neelsen um mtodo simples, porm de extrema valia no diagnstico da tubercu-lose pulmonar. Este mtodo largamente utilizado para a deteco de novos casos da doena. O diagnstico da tuberculose est sendo feito pelos rgos de sade estaduais, atravs de diversos postos, estrategicamen-te distribudos e o tratamento, sempre que possvel, ambulatorial e somente feito em hospitais centrais.Vale ressaltar que o mto-do apresenta apenas valor presuntivo e no de certeza, isto , outras espcies de mico-bactrias podem se corar. Assim o resultado do B.A.A.R. positivo num escarro implica na ideia de que se trata do M. tuberculosis com margem grande de segurana, mas no deve ser encarado como um valor absoluto.

Figura 1: Bactrias do gnero Mycobacterium co-radas pela tcnica Ziehl-Neelsen. As bactrias se apresentam em forma de bacilos longos corados em vermelho.

Os B.A.A.R. apresentam-se como bastonetes finos, corados em vermelho, sobre fundo corado em azul (figura 01). O resultado do exame de escarro corado pelo Ziehl-Neelsen pode ser dado confor-me a seguinte tabela do Servio Nacional de Tuberculose.

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Contudo, isto no desvaloriza o mtodo e, quando executado por tcnico habilitado, permite o diag-nstico muitas vezes precoce. Atravs da diminuio do nmero de bacilos (por campo microsc-pico) e de modificaes da morfologia dos bacilos, o mtodo permite acompanhar a evoluo do tratamento.Alm do escarro, outros materiais biolgicos podem ser usados para o diagnstico da tuberculose pulmonar (lavado brnquico, lavado gstrico, swab da laringe) e de outros rgos (urina, lquor, peas de bipsia, etc.).

Leiteratura Sugerida

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MURRAY, P. R. et al. Microbiologia mdica. 5 ed. - Rio de Janeiro (RJ) Elsevier, 2006.

SIQUEIRA, L. F. de G.; BELDA, W.; ALMEIDA, R. G de. Modifi cao da colorao de fundo da tcnica de Ziehl-Neelsen na identi fi cao do Mycobacterium leprae. Hansenologia internati nalis; 7(2): 88-94, dez. 1982.