CONTROLE DE QUALIDADE

MICROBIOLÓGICO

CONTAMINAÇÃO MICROBIANA

• A contaminação microbiana é um evento

indesejável na produção de

medicamentos e ocasiona problemas

quando presente. Os microrganismos, por

metabolismo de via oxidativa ou

fermentativa, produzem produtos, em sua

maioria, de caráter ácido, que alteram o

pH do meio onde estão inseridos.

• Os excipientes de fármacos podem sofrer mudança de cor, como o corante amarelo de tartrazina utilizado em xaropes. Emulsões podem ser quebradas e suspensões podem precipitar, uma vez que agentes emulsificantes e suspensores atuam em valores de pH determinados. O mais importante é a hidrólise de conservantes, como os parabenos, cloretos de benzalcônio e formaldeídos, que perdem totalmente sua amplitude de ação quando em meios fora do pH ótimo.

• Os princípios ativos de fármacos podem

ser degradados por hidrólise também

devido à mudança de pH, ou devido ao

seu consumo como fonte de carbono

pelos microrganismos; os medicamentos

são meios inóspitos para microrganismos,

que devem portanto consumir todas as

fontes de carbono possíveis para

sobreviver. A conseqüência é,

independente do caso, a ineficácia

terapêutica ou cosmética.

• O produto constituído, de maneira geral,

quando na forma sólida ou semi-sólida,

apresenta colônias visualizadas a olho nu,

e quando na forma líquida, apresentam

turvação. A fermentação de bactérias,

além dos metabólitos ácidos e alcoólicos

usuais, libera gases (CO2 e H2S) que

produzem bolhas e odor desagradável na

maioria dos fármacos.

MEIOS DE PREVENÇÃO

• Bioburden = biocarga; carga microbiana

natural total (intrínseca; microrganismos

não patogênicos) de um item. Fatores de

influência na carga microbiana: nutrientes,

pH, atividade de água, substâncias

antimicrobianas.

• A estimativa da população microbiana é

determinada, em todo o mundo, de acordo

com a EN ISO 11737-1.

Matéria-prima e Princípios Ativos

• Matérias-primas de origem natural tiveram

contato direto com o meio ambiente, e por

isso possuem um bioburden muito mais

elevado que as de origem sintética. No

caso de fitoterápicos, por exemplo, o

bioburden dos componentes varia

conforme a área de coleta da matéria-

prima, e a planta produtiva (região de

produção).

Água

• Água potável – água clorada, bioburden de 500 UFC/mL; utilizada para limpeza de áreas produtivas e abastecimento do sistema de tratamento de indústria,pois é a partir desta água que os outros tipos são produzidos.

• Água purificada – PWTR, bioburden de 100 UFC/mL; utilizada na formulação de produtos não estéreis.

Processo Produtivo

• No processo produtivo, as tubulações, válvulas, mangueiras, tanques e reatores que conduzem ou armazenam os produtos devem sofrer assepsia e saneamento pois podem reter quantidades mínimas de substâncias e desenvolver colônias de microrganismos, contaminando toda uma produção (biofilme – forma de contaminação massiva).

Ambiente

• As paredes devem ser lisas, laváveis e

sanitizáveis, e os cantos das salas devem

ser arredondados, para evitar o acúmulo

de microrganismos.

Limpeza e Desinfecção

• A limpeza e desinfecção são feitas através

do tratamento diário, periódico ou de

choque de áreas com desinfetantes e

sanitizantes, com o objetivo de reduzir o

bioburden de ambientes.

Pessoal

• É a maior fonte de contaminação. São

necessários o treinamento e

monitorização do pessoal e sua condição

de saúde.

Material de Acondicionamento e

Embalagem

• Os materiais de acondicionamento e

embalagem (vidro, plástico, laminados,

moldados, etc.) devem ser lavados com

água de qualidade e armazenados de

forma adequada (caixas de papelão

geram fungos e esporos).

DEFINIÇÕES

Lote • Lote é definido como uma quantidade de

produto de mesma composição e

características físicas, químicas e

sensoriais, produzida e manuseada numa

mesma batelada, sob as mesmas

condições.

Amostra de lote e unidade de

amostra • Amostra de lote é uma fração do total

produzido, retirada ao acaso, para avaliar

as condições do lote. No caso de

medicamentos acondicionados em

embalagens individuais, é composta de n

embalagens individuais.

Planos de amostragem de lotes

• O plano de duas classes classifica os

lotes em duas categorias, aceitável ou

inaceitável, dependendo dos resultados

da análise das n unidades de amostra.

São os mais aplicados no caso de ensaios

de presença/ausência, como Salmonella,

por exemplo, em que ausência é aceitável

e a presença em qualquer das n unidades

de amostra é inaceitável.

• O plano de três classes classifica os

lotes em três categorias, aceitável,

qualidade intermediária mas aceitável e

inaceitável. São recomendados para

ensaios qualitativos, para os quais

opadrão não é ausência, mas sim, valores

dentro de uma faixa entrem e M.

Unidade analítica

• A unidade de amostra geralmente contém

uma quantidade de produto maior do que

a necessária para a análise, porque, ao se

coletar uma unidade de amostra, há

sempre o cuidado de se tomar

quantidades suficientes para estocagem

de contra-amostras e prevenção de

perdas por acidente.

Preparação de Amostras para

Análise • Assegurar-se de que a área de trabalho

está limpa, todos os instrumentos e

utensílios utilizados na abertura das

embalagens e retirada das unidades

analíticas (tesouras, pinças, facas,

espátulas, etc.) devem ser previamente

esterilizados (em autoclave ou estufa de

esterilização) ou mergulhados em etanol

70% e flambados no momento do uso.

INTRODUÇÃO ÀS BACTÉRIAS

• A coloração de bactérias (coloração de gram) é realizada da seguinte maneira: preparação de lâmina e adição de corantes básicos por um minuto (violeta genciana, cristal violeta, azul de metileno); adição de lugol (I2 + KI) para fixação do corante na célula durante um minuto; descoloração da célula com álcool 95oGL, e lavagem rápida da lâmina com álcool ou acetona; adição de floxina, corante ácido que colora em trinta minutos. Os resultados variam conforme a estrutura da parede celular bacteriana.

• As bactérias gram positivas possuem parede celular composta de uma camada espessa de peptidioglicanos que possui alta afinidade com os corantes básicos; as cores resultantes são: violeta para as culturas novas, e vermelho para as culturas antigas. As bactérias gram negativas possuem parede celular com camada bem mais fina de peptidioglicanos e presença de lipopolissacarídeos, que possuem alta afinidade com os corantes ácidos; a cor resultante é quase sempre vermelha

Bacilos gram positivos

Gram negativos

Placa de agar com bactérias

AGENTES BACTERIANOS

• Agentes bacteriostáticos: impedem a

multiplicação celular – possui ação

apenas enquanto em contato com as

bactérias; após ser retirado, a população

microbiana volta a se multiplicar sob

condições favoráveis. Como exemplo

temos a tetraciclina, o clorafenicol e os

novíssimos zyvox e synercidi.

AGENTES BACTERIANOS

• Agentes bactericidas: provocam danos

celulares que levam à morte da população

– possui ação definitiva, dependendo da

cepa de microrganismo; a população

microbiana é extinta do meio. Como

exemplo temos os antibióticos penicilina,

cefalosporina e vancomicina que atuam

sobre as enzimas responsáveis pela

síntese da parede.

Parabenos

• Os PARABENOS são agentes

conservantes que, ao longo dos anos, têm

provado sua funcionalidade como

preservante para formulações cosméticas.

São atóxicos, estáveis e efetivos em

baixas concentrações contra uma ampla

gama de microorganismos

• O METILPARABENO é solúvel em:

facilmente solúvel em água quente,

propilenoglicol e etanol

• O PROPILPARABENO é solúvel em:

pouco solúvel em água (mesmo a quente),

facilmente solúvel em propilenoglicol e

etanol

• Usados juntos na proporção de 4 partes

de metilparabeno p ra 1 parte de

propilparabeno em formulações orais e

cosméticas com até 0,1%.

Leveduras

• As leveduras, como os bolores e

cogumelos, são fungos.

• Como células simples, as leveduras

crescem e se reproduzem mais

rapidamente do que os bolores. São mais

eficientes na realização de alterações

químicas, por causa da sua maior relação

área/volume.

Placa agar com leveduras

Bolor

• O bolor ou mofo é uma designação

comum dada a fungos filamentosos que

não formam estruturas semelhantes a

cogumelos.

Placa agar com bolor

placa chromocult

Conceito de Atividade de Água

Faixa: 0 (completamente seco) — 1.0 (água pura)

Atividade de Água vs Umidade

• Umidade

• Valor quantitativo de água em uma

amostra em base seca ou base úmida.

• Propriedade que depende da quantidade

de amostra.

Atividade de Água vs Umidade

• Atividade de Água

• Medida do estado de energia da água em

um sistema (Qualitativo).

• Propriedade que não depende da

quantidade de material.

Atividade de Água fornece

informação sobre:

• • Crescimento microbiano

• • Migração da Água

• • Estabilidade Química e Bioquímica

• • Propriedades físicas

• • Vida útil

• Umidade não fornece estas informações

Valores de aw mínimos para

desenvolvimento de

microorganismos

• Microorganismos aw

• Item 1 Bactérias deteriorantes 0,90

• Item 2 Leveduras deteriorantes 0,88

• Item 3 Bolores deteriorantes 0,80

ÁGUA NOS MEDICAMENTOS

• ÁGUA LIVRE

• A água fracamente ligada ao substrato, e

que funciona como solvente, permitindo o

crescimento dos microorganismos e

reações químicas e que é eliminada com

relativa facilidade.

ÁGUA NOS MEDICAMENTOS

• ÁGUA COMBINADA

• A água está fortemente ligada ao

substrato, mais difícil de ser eliminada e

que não é utilizada como solvente e não

permite o desenvolvimento de

microorganismos e retarda as reações

químicas.

Aa vs Umidade