Dinâmica Intracelular2007/2008

Noções básicas de cultura de células

Culturas celulares

• Vantagens e limitações do uso de culturas celulares

• Tipos de culturas celulares

• Requisitos necessários para manutenção de células em cultura

• Considerações experimentais

• Culturas celulares: em que consistem?

Um tipo de cultura de tecidos que envolvem um conjuntode técnicas que permitem cultivar e/ou manter células

isoladas fora do organismo de origem

Desagregação do tecido original por forma a obter as células isoladas, podendo estas ser cultivadas em monocamada aderente ou em suspensão

Culturas celulares: em que consistem?

Vantagens e limitações do uso de culturas celulares

Vantagens

- Controlo das condições ambientais

- Análise independente de parâmetros

- Elevado número de testes num pequeno intervalo tempo

- Redução dos ensaios com animais

- Menos dispendiosas que a experimentação animal

Desvantagens

- Perda de características fenotípicas

- Sistema biológico fora do ambiente natural

- Ausência de sinais importantes

Tipos de culturas celulares

Culturas primárias Linhas celulares

HeLa

Células epiteliaisde carcinoma

cervical humano

HSB-2

Leucemia linfoblástica aguda T

Células ciliadas doepitélio nasal

Linfócitos humanos

Neurónios de rato(hipocampo)

COS-7

Células do epitélio renal de

símios transformadas

pelo vírus SV-40

- Obtidas directamente dos tecidos

- Culturas heterogéneas

- Mantêm-se pouco tempo em cultura

- Propicias ao desenvolvimento de contaminações

- Obtidas de culturas primárias

- Células imortalizadas (alteração genética)

- Crescimento rápido e contínuo

- Proliferação ilimitada ou limitada a um elevado número de passagens

Requisitos necessários para manutenção de células em cultura

� Instalações, equipamento e material

Instalações

- Zona de recepção de material

- Zona de trabalho (Sala de cultura)

- Zona de lavagens e tratamento de material

Equipamento(Sala de cultura)

- Câmaras de fluxo laminar

- Incubadoras

- Centrífugas, microscópio

Parâmetros ambientais(Incubadora)

- Temperatura

- Humidade

- Níveis de CO2

- pHMeios de Cultura

- Sais Inorgânicos

- Hidratos de Carbono

- Aminoácidos

- Vitaminas

- Proteínas e peptídeos

- Lípidos e ácidos gordos

- Soro

- Tampões

- Antibióticos

- Indicador de pH

� Condições de cultura (meios de cultura e parâmetros ambientais)

Requisitos necessários para manutenção de células em cultura

Considerações experimentais

� Preparação de meios de cultura e soluções estéreis

� Criopreservação e descongelamento

Descongelamento

- Rápido

- Meio de cultura

- Incubadora com parâmetros adequados

Congelamento

- Fase exponencial de crescimento

- Elevada viabilidade celular

- Maior concentração de soro

- Crioprotector

- Lento

- Armazenamento a baixas temperaturas

Considerações experimentais

� Subcultura (células em suspensão vs células aderentes)

Subcultura- Meio de cultura

- Meio de dissociação ou tripsina

- Meio de cultura

Hemocitómetro

Número de Células/ml = n x d x 10 4

(Células aderentes)

� Determinação da densidade celular (azul tripano)