Disciplina: MICROBIOLOGIA IDisciplina: MICROBIOLOGIA IAula: Crescimento BacterianoAula: Crescimento Bacteriano

Profa Dra Cristina L S Petrarolha Silva

FEA Fundação Educacional de AndradinaFISMA-FCCA

11--Considerações GeraisConsiderações Gerais

� Crescimento em bactérias:◦ Individual◦ populacional

� Crescimento é um somatório dos processos metabólicos progressivos, que normalmente conduz à divisão com concomitante produção de duas células-filhas a partir de uma.

http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/divisao/divisao.html#fissaohttp://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/divisao/divisao.html#fissao

http://vsites.unb.br/ib/cel/microbiologia/divisao/Mitose.jpg

www.youtube.com

� Tamanho bacteriano adulto◦ O que é?◦ Quem o influencia?◦ Quem o influencia?

� Idade bacteriana◦ O que é?

Termos para crescimento Termos para crescimento microbianomicrobiano

� Taxa de crescimento (velocidade específicade crescimento): é a variação no número oumassa de microrganismos por unidade detempo.

� Tempo de geração: é o intervalo de temponecessário para que uma célula se duplique.necessário para que uma célula se duplique.◦ O tempo de geração é variável para os diferentesorganismos, podendo ser de 10 a 20 minutos até dias,sendo que em muitos dos organismos conhecidos, estevaria de 1 a 3 horas.◦ O tempo de geração não corresponde a umparâmetro absoluto, uma vez que é dependente defatores genéticos e nutricionais.

IMPORTANTEIMPORTANTE

� Toda bactéria tem seu ambiente ideal onde encontra condições ótimas de crescimento.crescimento.

� Uma pop bacteriana é um SISTEMA DINÂMICO, com células se dividindo e células morrendo o tempo todo.

Tubo à direita, meio BHI sem semeadura; tubo àesquerda, meio BHI após crescimento bacteriano.Observar turvação indicativa de multiplicação microbiana

http://www.microbiologia.vet.br/ImagensBacteriologia.htm

Meio com crescimento bacteriano apresentando sedimento(deposição de bactérias).

22-- Métodos de medidaMétodos de medida

� Desenvolvimento da cultura bacteriana:

◦ Aumento da quantidade de protoplasma◦ Aumento do número de microorganismos

2.12.1-- Métodos para estimar Métodos para estimar massa ou aumento de massa ou aumento de protoplasmaprotoplasma◦ DIRETOS� Centrifugação� Peso Seco

◦ INDIRETOS◦ INDIRETOS� Nitrogênio� Colorimetria ou espectrofotometria� Consumo de Metabólito ou Acúmulo de

produto do metabolismo� Turbidimetria

� Turbidímetro� Leitura em 660nm

� Curva padrão

� Não destrutiva

Não diferencia céls viáveis� Não diferencia céls viáveis

das céls mortas

ColorímetroColorímetro

2.22.2-- Métodos para estimar o Métodos para estimar o número de microorganismosnúmero de microorganismos� DIRETOS◦ Contadores de partículas◦ Câmaras de contagem◦ Esfregaços corados◦ Esfregaços corados

� INDIRETOS (células viáveis)◦ Diluição Seriada ou do número mais

provável (NMP)◦ Plaqueamento em Meio Sólido (UFC)

Contagem direta Contagem direta

� Câmara de Neubauer

Contagem indiretaContagem indireta

http://mednt.jp/dilution%2Btechnique

Contagem IndiretaContagem Indireta

� Técnica da Diluição Seriada

http://bervieira.sites.uol.com.br/dilui.htm

Contagem em placas:Contagem em placas:

Contagem em placas:Contagem em placas:Técnica Técnica PourPour PlatePlate

http://www.practicalbiology.org/areas/advanced/health-and-disease/hygiene/making-a-pour-plate,98,EXP.html

http://biology.clc.uc.edu/fankhauser/Labs/Microbiology/Meat_Milk/Pour_Plate.htm

Técnica da membrana filtranteTécnica da membrana filtrante

Técnica número mais provávelTécnica número mais provável

� http://laboratoriodemicrobiologiadealimentos.blogspot.com/

33-- Curva de CrescimentoCurva de Crescimento� Utilizar apenas CULTURA PURA

� Representação gráfica do aumento do número de indivíduos em um determinado período de tempo

33-- Curva de CrescimentoCurva de Crescimento

� fases de desenvolvimento de uma cultura bacteriana

� adaptação, desenvolvimento (crescimento),

� extinção de nutrientes e morte

� Fases: lag, exponencial, estacionária e morte

Curva de Crescimento Sistema Curva de Crescimento Sistema FechadoFechado

Fase Fase LagLag ou Latenteou Latente

� Período de adaptação, intensa atividade metabólica

� Ausência de divisão

� Longa: inóculo pequeno, cultura velho, meio e T desfavoráveis

� Pode inexistir

Fase Fase logarítimicalogarítimica ou exponencialou exponencial

� Divisão máxima

� Progressão geométrica de razão 2� Progressão geométrica de razão 2

� Fatores determinantes do crescimento

Fase estacionáriaFase estacionária

� Escassez de nutrientes ou acúmulo de metabólitos

� Bactérias crescem muito lentamente ou número de mortes é igual ao de novas

Fase de declínio ou morteFase de declínio ou morte

� Morte das bactérias

� Lento ou exponencial

Curva de Crescimento Sistema Curva de Crescimento Sistema FechadoFechado

� Curva Diáuxia◦ duas fontes de carbono◦ após término da primeira, inicia-se uma

nova curva

Crescimento em culturas Crescimento em culturas contínuascontínuas

� Estes são respectivamente controlados pela concentração do nutriente limitante (fonte de C ou N) e pela taxa de fluxo (taxa de diluição).pela taxa de fluxo (taxa de diluição).

� Em baixas concentrações do nutriente limitante, a taxa de crescimento é proporcional à concentração do nutriente

� Se houvesse:◦ Suprimento ilimitado de nutrientes +◦ Ambiente inalterável +◦ Espaço ilimitado

QuimiostatoQuimiostato

http://www.ugr.es/~eianez/Microbiologia/12crecimiento.htm

Equações para determinação dosEquações para determinação dosparâmetros de crescimentoparâmetros de crescimento

� O tempo de geração pode ser calculado quando uma cultura encontra-se em fase exponencial, pela fórmula abaixo:

N=No.2nN=No.2n

� onde� N= número final de células� No= número inicial de células� n= número de gerações

n= log(N) - log(No)/0,301

G = t/n

� ondeG= tempo de geraçãot= tempo de crescimenton= determinado acima.

44-- Efeito dos fatores ambientais Efeito dos fatores ambientais no Crescimento Bacterianono Crescimento Bacteriano� 4.1-Temperatura

� Tipos de Bactérias em Relação a Temperatura

� 4.2- pH

� 4.3- Tensão de Oxigênio� 4.4- Água� 4.5- Pressão Osmótica

Fontes de ConsultaFontes de Consulta

� TRABULSI, L. R.; ALTERTHUM, F.; Microbiologia. 4. ed. rev. e atual. São Paulo: Atheneu, 2005. 718 p.

� Imagens: � Imagens: ◦ www.google.com.br