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Universidade Federal do Rio Grande do Sul

PPG em Ciências Farmacêuticas

Faculdade de Farmácia

Porto Alegre, RS

Brasil

Laboratório de Farmacognosia

Gilsane Lino von Poser

Ensaios realizados

Atividade acaricidaAtividade inseticida Atividade antibacterianaAtividade antifúngica Atividade antiprotozoária

Amostras: -LCCV (amostra fornecida por Dra. Morsyleide de Freitas

Rosa - EMBRAPA-Ceará- Brasil

-Tara (amostra fornecida por Dra. Patricia Basic (TANAGRO-Peru)

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Atividade AcaricidaBoophilus microplus

Teste de imersão de larvasAmostras:Extratos aquosos de Tara e LCCV

Concentrações: 5%, 2,5%, 1,25%

Tara: mortalidade na concentração de 5%LCCV: não foi observada mortalidade das larvas

Obs: os experimentos serão repetidos com ácaros de diferente procedência

Atividade inseticidaPiolhos de bovinos e equinosBovicola bovis e Bovicula equi

Teste de imersão de adultosAmostras:Extrato aquosos de Tara e LCCV

Concentrações: 5%, 2,5%, 1,25%

Tara e LCCV: não foi observada mortalidade dos insetos

Obs: os experimentos serão realizados com piolhos de humanos (uso tradicional de TARA no Peru)

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Atividade antibacteriana

Teste de difusão em ágar

Amostras:Extratos aquosos de Tara e LCCV

Concentrações: 1%, 0,5%, 0,25%

Microrganismos: Escherichia coliStaphylococcus aureus

Obs: serão realizados outros testes e também outras bactérias

LCCV: Escherichia coli

P

B

LCCV: Staphylococcus aureus

1%

0,25%

B= branco, P= cloranfenicol

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Tara: E. coli Tara: S. aureus

1%

0,5%

0,25%

Amostra Extrato alcoólico bruto de Tara

MicrorganismosCandida albicans, C. tropicalis, Saccharomyces cerevisiae, Cryptococcus neoformans,

Aspergillus flavus, A. fumigatus, A. niger, Trichophyton rubrum, T. mentagrophytes e Microsporum gypseum

Teste para avaliar a atividade antifungica

MIC determinada usando o teste de microdiluição em caldo

(National Committee for Clinical Laboratory Standards para leveduras e para fungosfilamentosos)

A amostra não inibiu o crescimento dos microrganismosem nenhuma das concentrações testadas

Atividade antifúngica

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Atividade antiprotozoária

Teste de inibiçao de trofozoitos de Trichomonasvaginalis e Trichomonas foetus

Amostra:Extratos aquosos de LCCV

Concentrações: 5%, 2,5%, 1,25%

Obs: contaminação do meio de cultivo. Provavelmente pela presença de açúcar

Calzada,F.; Yépez-Mulia, L.; Tapia-Contreras, A.Effect of Mexican medicinal plant used to treat trichomoniasis onTrichomonas vaginalis trophozoitesJournal of Ethnopharmacology, v. 113, p. 248-251, 2007.

AbstractCrude methanolic extracts from 22 Mexican medicinal plants were screened for antitrichomonal activity against Trichomonas vaginalis, which is the etiological agent oftrichomoniasis. Among the plants tested Carica papaya and Cocos nucifera showed the bestantitrichomonal activity with IC50 values of 5.6 and 5.8g/ml, respectively. The extracts ofBocconia frutescens, Geranium mexicanum, and Lygodium venustum showed moderateactivity with IC50 values ranging from 30.9 to 60.9 g/ml. All the other plant extracts wereinactive (IC50 > 100g/ml). All extracts tested were less active than metronidazole (IC50 0.037g/ml), an antiprotozoal drug used as positive control. The results of the antiprotozoalscreening support the popular uses of five of the plants tested for the treatment of some urogenital tract disorders in Mexican traditional medicine. However, seeds of Carica papayaand aerial parts of Bocconia frutescens should be used in herbal medicine with care to avoidtoxicity.

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Remoção de açúcares de LCCV

A presença de açúcares na amostra tem sido prejudicial a realização de determinados ensaios biológicos por favorecer o desenvolvimentode fungos e bactérias

Objetivo do ensaio: eliminar açucares sem reduzir o teor de compostos fenólicos

Método:Fermentação com Saccharomyces cerevisiaeem diferentes tempos (8h, 24h e 48h)

-Doseamento de aúcares (método de Somogyi – Nelson)

-Doseamento de compostos fenólicos (Folin-Ciocalteau)

-Liofilizaçao do extrato resultante para posterior avaliação biológica

99,9890,01140,07648h

99,9830,01650,11024h

99,9510,0490,32412h

02,651,060h

Redução teor (%)

Conc(mg%)

Conc(mg/mL)

00,5

11,5

22,5

3

0h 12h 24h 48h

Tempo de fermentação

Con

. A

çúca

r (g

%)

020406080

100120

0h 12h 24h 48h

Tempo de fermentação

Red

ção

dos

açúc

ares

(%

)

DeterminaDetermina çção do teor de aão do teor de a çúçú cares redutores em LCCVcares redutores em LCCV

Método de Somogyi – Nelson

7

aa a

b

05

10152025303540

0h 12h 24h 48h

Tempo de fermentação

EQ

DeterminaDetermina çção do teor de compostos fenão do teor de compostos fen óólicoslicos(expressos em equivalente de (expressos em equivalente de quercetinaquercetina ))

00,5

11,5

22,5

33,5

4

0h 12h 24h 48h

Tempo de fermentação

Teo

r fe

nólic

o (g

% d

e qu

erce

tina)

Sem tratamento= 3,13g%

Após 48 h= 1,53g%

Gretel Villanueva Ramos

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Trabajo experimental realizado en plantas que contienen taninosTrabajo experimental realizado en plantas que contienen taninos

Departamento de Farmacia de la Universidad Marta Abreu de las Villas

Estudios de los taninos presentes en las plantas

Capraria biflora, L y Boldoa purpurascens, Cav

Métodos de extracción de taninos

Se aplicaron varios métodos de extracción de taninos para ambas plantas, lo cual permitió, a través de la evaluación de las fracciones obtenidas por medio de cromatografía en capa delgada, espectrofotometría UV/VIS y rendimiento del proceso extractivo de las diferentes fracciones, establecer el método idóneo para la extracción de estos a partir de las hojas de Capraria biflora, L y Boldoapurpurascens, Cav. .

Estudios cromatográficos

Se realizaron estudios cromatográficos a los crudos de taninos para

determinar la naturaleza de estos metabolitos presentes en

Boldoa purpurascens Cav.

En el desarrollo cromatográfico aplicado a ambas plantas se encontró

como fase móvil adecuada para eluir los taninos la mezcla

tolueno-acetona-ácido fórmico (3:6:1),

pues aquí aparecen manchas mejor resueltas y con Rf similares

a lo informado en la literatura para los taninos.

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Por otra parte la fase móvil acetona-agua- ácido fórmico (9:0.5:0.5)

resultó ser también una buena fase móvil para eluir los taninos en Capraria

biflora donde aparecen manchas con Rf de 0.33, 0.48, 0.69 y Boldoa

purpurascens donde aparecen Rf de 0.32, 0.86, 0.58 similares a lo reportado

en la literatura para los taninos.

ReveladorEn todos los casos el revelador que mejores resultados ofreció fue la vainillina

al 1% con ácido sulfúrico que produjo un revelado color rojo vino tal cual

informa la literatura para este tipo de metabolito.

Del análisis de los resultados cromatográficos se puede

sugerir la presencia de taninos condensados para

Capraria biflora,

mientras que para

Boldoa purpurascens

los taninos hidrolizables preferentemente.

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Se realizó un análisis mediante la espectrofotometría UV/VIS a las

fracciones enriquecidas en taninos, lo cual contribuye a la selección del

método de extracción más adecuado para arrastrar los taninos presentes

en ambas especies.

Se evidenció que para las fracciones etanólicas se registraron máximos

De absorción a 266 nm para Boldoa purpurascens y 330 nm para

Capraria biflora.

Para esta misma especie se evidenció la presencia de estos compuestos

en la fracción acetona-agua (7:3) con su máximo de absorción en 265 nm

y para la fracción acuosa de Capraria Biflora a 265 nm. Los resultados

anteriores sugieren la presencia de este tipo de compuestos en ambas

plantas según los datos informados en la literatura.

Se evalúo de forma colateral la reacción colorimétrica con el

reactivo de Folin-Denis en el intervalo de 500-800nm para

las fracciones acetona-agua (7:3), etanólica y acuosa para

ambas especies, obteniendo máximos de absorción a

longitudes de onda de 646nm, 745nm, 663nm, 694nm,

745nm, 763nm lo cual no se correspondió con lo establecido

en la literatura consultada para los taninos donde de informa

un valor cercano a los 725nm.

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Del análisis de los resultados por espectrofotometría UV/VIS se

pudo sugerir la presencia de taninos hidrolizables para las hojas de

las plantas Capraria biflora y Boldoa purpurascens al aparecer picos

cercanos a 260 nm, reportados en la literatura para este tipo de

taninos.

Para el caso de Capraria biflora se sugiere además la presencia de

taninos condensados al aparecer en el espectro picos cercanos a 336

nm, reportados para los mismos.

Espectroscopia IR

Los resultados obtenidos en el IR indican la posible presencia de grupos

hidroxilos alcohólicos asociados, preferentemente secundarios y primarios

de acuerdo al ancho de la banda la cual sugiere una posible asociación

por puentes de hidrógeno intermoleculares; además, el hecho de que exista

una banda OH indica la presencia de un grupo C-O el cual puede ser asignado

a la señal que se registra en 1103.42 cm-1.

En el espectro aparece también una banda en 2925 cm-1 la cual puede ser

asignada a vibraciones de valencia de Csp3-H y que indica la presencia de una

porción saturada en la molécula.

Esto se complementa con la banda que aparece en 1380 cm-1 y que es

característica de CH3.

Estudios Espectroscópicos

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Espectrometría de masa

Después de analizar los valores de m/z+, resalta el valor de 112.894 como pico base destacándose además los valores de 326.815 y 340.833. Para el pico 340.8 se calculan las siguientes pérdidas de masa: M-(18), M-(20), M-(28), M-(132) y M-(12).

Teniendo en cuenta el valor del pico, las pérdidas de masa y lo reportado en la cartoteca del equipo se sugiere como posible estructura la del ácido digálico con uno de sus OH metilados.

Esto está de acuerdo con los resultados obtenidos en el espectro IR donde se suponía la presencia de un compuesto polisustituido, con un resto insaturado lo que se comprueba por la aparición de la banda del CH3.

Para el pico 326.8 se reportan las siguientes pérdidas de masa: M-(18), M-(168), M-(10). [La M-(18) representa una molécula de agua].

De acuerdo a los resultados obtenidos se sugieren como posibles taninos presentes en la planta los derivados del ácido gálico y digálico.

-Se validó una técnica analítica para cuantificar los taninos totales presentes en los extractos de las plantas evaluadas en base al ácido tánico, por espectrofotometría UV-VIS indirecta.

En el análisis cuantitativo se determinó que la planta presenta un 0.5% de taninos del total de componentes de la planta y en la fracción aislada se estima un 0.15% de esos metabolitos.

AplicacionesAtendiendo a las amplias aplicaciones farmacéuticas de los taninos, los

mismos pudieran estar asociados a las actividades terapéuticas anti-

inflamatoria, antidiarreico y diurética de estas plantas.

Adicionalmente se realizó un estudio de hemólisis a las fracciones de

taninos obtenidas a partir de Boldoa purpurascens, Cav, con vistas a ser

empleados como adyuvantes en vacunas antivirales.

El estudio resultó ser novedoso, por cuanto solamente las saponinas son

las, sustancias empleadas con estos fines, lo cual encarece el producto.

Posibles trabajos a continuarPurificación y caracterización de los taninos presentes en los crudos.

Evaluación farmacológica de los compuestos aislados