UNIME SALVADORCURSO DE FARMCIA RELAO MICRORGANISMO E HOSPEDEIRO II

ENSAIOS SOROLGICOSDiscentes: Elisama Andrade; Jamile Cirne; Joelma de Aquino; Steeven Gonalves; Tamires Ribeiro; Z Gilvan.

AGLUTINAO

Formao de agregados;

Ocorre com partculas naturais e com partculas inertes;

Se processa em dois estgios. Distingue-se em direta e indireta.

Aglutinao Direta

Antgenos livres + anticorpos especficos; Utilizam-se partculas antignicas insolveis; Sistema ABO e Rh; Diagnstico de salmoneloses, leptospirose, toxoplasmose, etc.

Aglutinao indireta ou passiva

Aglutinao em Ltex semelhante a aglutinao direta; O ltex a partcula carreadora mais utilizada; utilizada para deteco de vrus ou antgenos virais.

Vantagens e Desvantagens

Vantagens: Baixo custo; Boa especificidade; Leitura visual; Facilidade de execuo. Desvantagens: Baixa sensibilidade; Acessibilidade molecular para interao Ag-Ac.

HEMAGLUTINAO

Aglutinao de hemcias; No uma reao sorolgica; No se estende a todos os vrus; Tem grande importncia para deteco de vrus hemaglutinantes em laboratrio.Partculas viraisAusncia de interao vrus-hemcia

Hemcias

Interao vrus-hemcia

Partculas virais Hemcias

Partculas virais

Hemcias

INIBIO DA HEMAGLUTINAOPerda da capacidade de hemaglutinao; Ocorre em dois estgios; Aplicvel apenas para vrus hemaglutinantes; Utilizado tanto para identificao de vrus, quanto de anticorpos.

INIBIO DA HEMAGLUTINAO1 Estgio 2 Estgio

FIXAO DO COMPLEMENTO Sistema constitudo por mais de 30 protenas e

glicoprotenas plasmticas que participam da defesa inata e adquirida;

Este sistema funciona em cascata e possui trs vias: Via Clssica(patgenos e Ac), Alternativa e da Lectina. Os eventos inicias em todas as vias consistem em uma seqncia de reaes de clivagem.

* O teste fixao do complemento tem como base a via clssica.

FIXAO DO COMPLEMENTO

Funes biolgicas atribudas ativao do sistema complemento:Opsonizao: permite a fagocitose; Quimiotaxia: a ativao do SC atrai cel(s) para olocal da inflamao;

Anafilaxia: estimula o ac desencadeando aofarmacolgica na processo inflamatrio agudo;

FIXAO DO COMPLEMENTO

Elementos necessrios para a realizao do teste:

Soro teste; Sistema complemento; Sistema hemoltico ( hemcias recobertas com Ag); Estufa para incubao; Centrfuga

FIXAO DO COMPLEMENTO

Etapas da Fixao do Complemento:O teste fundamenta-se na capacidade de complexos Ag-Ac de fixar e inativar molculas de complemento presentes no soro.

realizado em duas etapas:Na 1; a amostra o Ag e o complemento so misturados; Na 2; adicionado o sistema indicador.

FIXAO DO COMPLEMENTO

Resultados :

Complemento fixado na 1 etapa

as hemcias ficaram intactas que Ag- Ac eram especficos um para o outro; Se, o Ac no for especfico para o Ag o complemento no ser fixado permanecendo livre e ativo;Quando o sistema revelador adicionado, o complexo ativo ir se fixar no complemento hemcia Ac, ativando a cascata e lisando as hemcias.

FIXAO DO COMPLEMENTO

Vantagens: Baixo

custo; Boa especificidade; Boa sensibilidade; Permite a realizao de um grande n de amostras simultaneamente.

FIXAO DO COMPLEMENTO

Desvantagens: Probabilidade para falso-negativo: Hemcias fragilizadas (velhas); Soro no-inativado; No adio do ag.

Probabilidade para falso-positivo: Perda da atividade do complemento; Diluies inadequadas; Contaminao de solues;

IMUNOFLUORESCNCIA

Caractersticas Bsicas:

Permite a deteco e localizao de antgenos em clulas e tecidos; Utiliza anticorpos especficos marcados com fluorcromos; Podem detectar e localizar anticorpos em fludos biolgicos, utilizando seu antgeno correspondente; Teste qualitativo/semi-quantitativo; Mtodo de alta sensibildade e alta especificidade.

IMUNOFLUORESCNCIA DIRETA

VantagensAlta especificiade e sensibilidade; Possibilidade de deteco de protenas intracelulares e de sua localizao

DesvantagensNecessidade de um conjugado para cada antgeno que se deseja identificar e localizar; Subjetividade da leitura; Equipamento de alto custo (microscpio).

Aplicaes

Deteco de microorganismos em fezes, urinas, secrees, cortes de tecidos, etc... Fenotipagem de clulas tumorais;

Bacteriologia: Streptococcus do tipo A.

IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETACaractersticas Limitada: utilizada para amplificar o sinal e aumenta a sensibilidade; Pode ser empregado para pesquisa de antgenos e anticorpos.

IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA

VantagensSensvel; Fcil de ser controlado.

Desvantagens

Necessita de mais tempo e mais reagente.

IMUNOFLUORESCNCIA INDIRETA

Antgeno T cruzi

Anticorpo (anti-T cruzi)

ELISA (Enzyme-Linked Immunosobent Assay)

ENGVALL E PERLMANN, EM 1971; Caractersticas Bsicas Imobilizao de um dos reagentes em uma fase slida, enquanto outro reagente pode ser ligado a uma enzima, com preservao tanto da atividade enzimtica como da atividade imunolgica do anticorpo; Principais tipos: Indireto : Ac Sanduche: Ag Competio: Ag molecular Captura: Acs (IgM)

ELISA

Vantagens Elevada sensibilidade e especificidade; Rapidez e baixo custo; Objetividade de leitura; Possibilidade de adaptao e diferentes graus de automao. Desvantagens Mo de obra especializada; Degradao de reagentes; Erros de pipetagem.

ELISA DIRETO OU SANDUCHEAnticorpo

Fonte de protenas estranhas ao sistema Lavagens

Conjugado anti

ELISA INDIRETOAntgeno Fonte de protenas estranhas ao sistema Soro anti Conjugado anti

Lavagens Lavagens

ELISA DIRETO OU SANDUCHEAnticorpo

Fonte de protenas estranhas ao sistema Lavagens

Conjugado anti

ELISA POR COMPETIOAc Fonte de protenas estranhas ao sistema Antgeno Conjugado

Lavagens

CAPTURA DE IgMAntgeno Ac IgG Fonte de protenas estranhas ao sistema

Conjugado anti-IgMAc IgM especfico

Lavagens

INTERPRETAO DOS RESULTADOS

Elisa Indireto: A intensidade da cor diretamente proporcional concentrao de Ac da amostra pesquisada Elisa Direto ou Sanduche: A intensidade da cor diretamente proporcional concentrao de Ag da amostra Elisa por Competio: A intensidade da cor inversamente proporcional concentrao de Ag da amostra.

INTERPRETAO DOS RESULTADOS

REFERNCIASManifestao Primria da Reao Ag-Ac Disponvel em: Acesso em: 27/03/2011

FERREIRA, Avila; Diagnstico laboratrial. 2 ed. RJ, 2001. WIGG, Marcia; et al; Introduo virolugia humana; 2 ed, RJ, 2008. ABBAA, Abul K. Et al. Imunologia. 5 ed. SP,1999