Estabilidade física e metodologia analítica para formulações

UNIVERSIDADE DE SO PAULO FACULDADE DE CINCIAS FARMACUTICAS

Programa de PsGraduao em Frmaco e Medicamentos rea de Produo e Controle Farmacuticos

ESTABILIDADE FSICA E METODOLOGIA ANALTICA PARA FORMULAES FARMACUTICAS CONTENDO

CETOCONAZOL

ANDRIA CRICCO PERARO

Dissertao para obteno do grau de

MESTRE

Orientadora: Profa. Titular Erika Rosa Maria Kedor - Hackmann

SO PAULO 2001

Ficha CatalogrificaElaborada pela DivisA0 de Biblioteca e

Documentao do Conjunto das Qumicas da USP.

Peraro, Andria CriccoP427 e Estabilidade fsica e metodologia anaHtica para formulaes

farmacuticas contendo cetoconazol / Andria CriccoPeraro. -- So Paulo, 2001.

116p.

Dissertao (mestrado) Faculdade de CinciasFarmacuticas da Universidade de So Paulo. Departamentode Farmcia.

Orientador: Kedor-Hackmann, Erika Rosa Maria

1. Medicamento: Controle de qualidade 2. Formulaesfarmacuticas 3. Estabilidade: Medicamento: Anlise farmacuticaI. T. 11. Kedor-Hackmann, Erika Rosa Maria, orientador.

615.19015 CDD

ANDRIA CRICCO PERARO

ESTABILIDADE FSICA E METODOLOGIA ANALTICA PARA FORMULAES FARMACUTICAS CONTENDO

CETOCONAZOL

Comisso Julgadora

Dissertao para obteno do grau de MESTRE

Profa Titular Erika Rosa Maria Kedor Hackmann

Orientadora/ Presidente

Profa Titular Maria Ins Rocha Miritello Santoro

1 Examinador

Profa Dra Magali Benjamin de Arajo

2 Examinador

So Paulo,27 de junho de 2001

O Senhor o meu rochedo, e o meu lugar forte , a minha fortaleza , em quem confio Salmo 18

No basta saber, preciso aplicar. No basta querer, preciso fazer

Goethe

Aos meus avs maternos Paulo Cricco e

Maria Riberti Cricco e paternos Alcino Peraro e

Alcinda Rogatto Peraro pela existncia de meu

melhor presente: meus pais .

profa Dra Magali Benjamin de Arajo , pela amizade

e pelo primeiro grande incentivo para a realizao deste trabalho

AGRADECIMENTOS

Profa Titular Erika Rosa Maria Kedor Hackmann, pela orientao, amizade e

colaborao.

Coordenadoria do Programa de Ps-Graduao em Frmaco e

Medicamentos do Departamento de Farmcia da Faculdade de Cincias

Farmacuticas da Universidade de So Paulo.

Aos meus pais Ademar Peraro e Durvalina Cricco Peraro, pelo amor, incentivo

e fora.

Ao meu irmo Luciano Cricco Peraro, pela amizade, auxlio e incentivo. Ao Adilson Cornlio dos Reis, pelo apoio, incentivo, fora e determinao.

profa Titular Maria Ins Rocha Miritello Santoro, pela amizade, incentivo e

sugestes.

profa Dra Maria Amlia Barata da Silveira pelo apoio e ateno.

s amigas Ftima Cristina Franco e Silva, Fernanda Pereira Ribeiro, Maria Rita

Rodrigues, Roberta Ribeiro Gonalez, pelo apoio, companheirismo e pacincia.

Aos amigos e colegas de graduao Adalberto Tsutsumi, Diogo Teixeira

Carvalho, Flvia Garcia, Irany Mesquita Coelho Moraes, Magda Damares de

Oliveira, Monica Silva Coelho Caracillo, Paula Marie Gardino Timmer, Oswaldo

Miguel Jnior e Roberto Parise Filho, pelo apoio e companheirismo.

Ao amigo e colega Dr Martin Steppe, pelas sugestes, apoio, companheirismo e

colaborao.

Aos colegas do Laboratrio de Controle de Qualidade Fsico- Qumico Adriana

Osrio, Aldo Adolar Maul, Andria Montoro Taborianski, Anil Kumar Singh,

Beatriz Resende Freitas, Daniella Almana G. C. Oliveira, Elizngela Abreu

Dutra, Ixis Ivette Taymes Hidalgo, Maria Gabriela de Arajo, Maria Segunda

Aurora Prado e Njla Mohamed Kassab, pelo auxlio, compreenso, amizade e

colaborao.

Dra Ins de Almeida Gonalves pelos espectros no infravermelho.

funcionria Iria Raimunda da Silva pelo carinho, compreenso e colaborao.

Ao prof.Titular Joo Fernandes Magalhes pelo apoio e incentivo.

s profas Dra Eliane Orsine e Dra Elizabeth Ap. Gianoto pelas correes e

sugestes.

Ao prof Dr Jorge Seferin Martins pelo apoio.

s funcionrias Luzanira Maciel e Regina Maura Rojas, pela colaborao.

s colegas Bianca Fedriz de Carvalho e Celina Y. Motizuki pelo auxlio na

execuo deste trabalho.

Ao colega do Laboratrio de Farmacotcnica Marcelo Guimares, pelo auxlio

no estudo das formulaes.

profa Dra Maria Valria Velasco, pela colaborao e correes.

s funcionrias do Laboratrio de Farmacotcnica Claudinia e Carla, pelo

fornecimento de matrias-primas.

Elizabete C. S. Paiva, secretria do Programa de Ps-Graduao em

Frmaco e Medicamentos, pela ateno e colaborao.

s funcionrias da Biblioteca do Conjunto das Qumicas Adriana de Almeida

Barreiros e Leila Aparecida Bonadio, pela reviso das referncias bibliogrficas.

Aos funcionrios da Secretaria de Ps-Graduao da Faculdade de Cincias

Farmacuticas da Universidade de So Paulo Benedita E. S. Oliveira, Elaine M.

Ychico e Jorge de Lima, pela ateno e colaborao.

Aos Laboratrios ISP, Chemy Union, EMS, pelo fornecimento de matrias-

primas.

Fundao de Amparo Pesquisa de So Paulo ,FAPESP, pelos recursos

financeiros que possibilitaram a realizao deste trabalho.

Ao Senhor(a) assessor(a) da FAPESP pelas sugestes e correes realizadas

durante a execuo deste trabalho.

A todos que direta e indiretamente colaboraram pela realizao deste trabalho.

RESUMO

O cetoconazol um derivado imidazlico com atividade antifngica,

empregado no tratamento de grande variedade de infeces cutneas.

O objetivo deste trabalho foi a padronizao e a validao dos mtodos

analticos empregando-se a espectrofotometria no ultravioleta ( UV ) por

derivada de primeira ordem e a cromatografia lquida de alta eficincia ( CLAE )

para a determinao do cetoconazol em formulaes farmacuticas sob a forma

de creme obtidas no comrcio e formuladas em laboratrio. O estudo da

estabilidade fsica das formulaes obtidas em laboratrio foi realizado aps o

armazenamento sob diferentes condies de tempo, temperatura e umidade.

O mtodo espectrofotomtrico no UV por derivada de primeira ordem foi

padronizado a 257nm , no intervalo de concentrao de 5,0 a 30,0 g/mL em

metanol. O coeficiente de correlao linear foi de 0,9997, o percentual de

recuperao foi de 100,24%. A mdia do desvio padro relativo foi de 0,56%

para a amostra simulada e 0,41% para a amostra comercial.

A determinao de cetoconazol por CLAE foi realizada empregando-se

uma coluna LiChrospher 100 RP- 18 ( 5m ) e fase mvel constituda por uma

mistura de trietilamina em metanol( 1:500 ) e soluo de acetato de amnio em

gua (1:200 ) na proporo de 75 : 25 v/v, com vazo de 1,0 mL/min e

deteco no UV a 225 nm. O terconazol foi utilizado como padro interno. O

coeficiente de correlao linear foi de 0,9981, o percentual de recuperao foi

de 100,88%, a mdia do desvio padro foi de 2,13% para a amostra simulada e

1,25% para a amostra comercial.

A amostra simulada apresentou comportamento pseudoplstico e

tixotropia em decorrncia das medidas reolgicas obtidas experimentalmente.

ABSTRACT

Ketoconazole is an imidazole antifungal agent used in the treatment of

great variety of skin infectious diseases.

The aim of this research was the standardization and the validation of two

analytical methods, first derivative ultraviolet ( UV ) spectrophotometry and

high performance liquid chromatography( HPLC ) to determine ketoconazole in

commercial and simulated cream dosage forms preparations. The validated

methods were used to study the stability of the simulated cream after storage

under high temperatures and high percentage of humidity.

First derivative UV spectrophotometry was standardized at 257 nm, in a

range of concentration from 5.0 to 30.0 g/mL in methanol. The coefficient of

correlation was 0.9997 and the recovery average was 100.24%. The average

relative standard deviation ( RSD ) was 0.56% for simulated preparation and

0.41 % for commercial preparation.

The determination of ketoconazole by HPLC was performed using a

LiChrospher 100 RP-18(5m ) column, a mobile phase consisting of

triethylamine in methanol (1:500) and ammonium acetate solution in water(1:200

) 75:25 ( v/v ), a flow rate of 1.0 mL/min and UV detection at 225nm.

Terconazole was used as internal standard. The coefficient of correlation was

0.9981, the recovery average was 100.88%, the average relative standard

deviation ( RSD ) was 2.13% for the simulated preparations and 1.25% for the

commercial preparations.

The rheological measurements showed that the simulated preparation

presented pseudoplastic and thixotropic behavior.

SUMRIO

1 INTRODUO 2

2 REVISO DA LITERATURA 4

2.1 GENERALIDADES 4

2.2 ANTIFNGICOS 5 2.2.1 Antifngicos derivados dos imidazis 6

2.3 CETOCONAZOL 8 2.3.1 Aspectos gerais 8 2.3.2 Sntese 11 2.3.3 Estereoisomeria do cetoconazol 14 2.3.4 Mtodos de anlise de formulaes contendo cetoconazol 15

2.4 EMULSES 17 2.4.1 Definio 17

2.4.1.1 Componentes da emulso 18 2.4.2 Estudo de estabilidade de emulses 18

2.4.2.1 Reologia 21 2.4.2.2 Tamanho das partculas 22 2.4.2.3 Mtodos qumicos utilizados no estudo da estabilidade 23

3 OBJETIVOS 26

4. MATERIAL E MTODOS 27

4.1 Material 27 4.1.1 Solventes e Solues 27 4.1.2 Frmacos empregados como substncias de referncia 27 4.1.3 Matrias-primas 28 4.1.4 Equipamentos e acessrios 28 4.1.5 Formulaes estudadas 29

4.1.5.2 Obteno do creme com cetoconazol a 2% 35 4.1.6 Amostras 36

4.2 Mtodos 37 4.2.1 Identificao do cetoconazol matria-prima 37

4.2.1.1 Ponto de fuso 37 4.2.1.2 Cromatografia em camada delgada 37 4.2.1.3 Espectroscopia no infra - vermelho 37 4.2.1.4 Estudos Termoanalticos 38

4.2.2 Ensaios espectrofotomtricos preliminares 38 4.2.6 Ensaios cromatogrficos preliminares 39

4.3 Validao da metodologia analtica 40 4.3.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico 40

4.3.1.1 Construo da curva de calibrao 41

1

4.3.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes 41 4.3.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme 42

4.3.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico 44 4.3.2.1 Construo da curva de calibrao 45 4.3.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes 45 4.3.2.3 Determinao do limite de deteco e limite de quantificao 47 4.3.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme 47

4.4 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme 49 4.4.1 Caractersticas organolpticas 50 4.4.2 Anlise de pH 50 4.4.3 Comportamento reolgico 51

5 RESULTADOS 52

5.1 Identificao do cetoconazol matria-prima 52 5.1.1 Ponto de fuso 52 5.1.2 Cromatografia em camada delgada 53 5.1.3 Espectroscopia na regio do infravermelho 54 5.1.4 Estudos Termoanalticos 55 5.1.5 Ensaios preliminares com as diferentes formulaes 56 do creme com cetoconazol a 2% 56

5.6 Validao da metodologia analtica 59 5.6.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico por derivada de 1 ordem 59

5.6.1.1 Construo da curva de calibrao 59 5.6.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes 61 5.6.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme 62

5.6.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico 66 5.6.2.1 Construo da curva de calibrao 67 5.6.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes 69 5.6.2.3 Determinao dos Limites de Deteco e Quantificao 70 5.6.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme 70

5.7 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme 73 5.7.1 Caractersticas organolpticas 73 5.7.2 Anlise de pH 74 5.7.3 Comportamento reolgico 75

6 DISCUSSO 93

7 CONCLUSES 101

8 REFERNCIAS BIBLIOGRFICAS 103

2

1 INTRODUO

O cetoconazol um derivado imidazlico com atividade antifngica. Foi

lanado no Brasil sob a forma de comprimidos, contendo 200 mg de

cetoconazol, creme tpico e xampu na concentrao de 20 mg/g. O

cetoconazol na forma de comprimidos vem sendo substitudo por outros

antifngicos administrados por via oral por apresentar alguns efeitos

colaterais indesejveis, como a hepatotoxicidade 82; 96. O cetoconazol creme

a 2% continua sendo muito utilizado no combate de diversas infeces

cutneas. ainda eficaz no combate dermatite seborrica e vrias

infeces causadas por diferentes espcies de fungos. Recentemente tem

sido usado contra acantomebase disseminada 88; 91. O cetoconazol xampu a

2% muito utilizado no combate caspa 44.

No incio do sculo os medicamentos tinham como origem fontes

magistrais e oficinais e no havia problema com a estabilidade, pois alm do

nmero reduzido de matrias-primas, as frmulas farmacuticas eram

preparadas e imediatamente fornecidas ao paciente o que implicava em

pouco ou nenhum tempo de armazenamento. Aps a 2a Guerra Mundial

muitos frmacos de origem natural foram isolados, suas frmulas qumicas

elucidadas e obtidos por sntese qumica. Novos frmacos foram sendo

sintetizados em nmero cada vez maior resultando em novas formulaes

farmacuticas. O processo da industrializao veio favorecer o arsenal

teraputico, mas trouxe problemas como: mudana na escala de trabalho

acarretando tempo de exposio fatores ambientais, risco de interao

fsica, qumica e microbiolgica. Houve mudanas na comercializao

trazendo problemas com o transporte e armazenamento dos produtos

farmacuticos.

3

A estabilidade de um produto farmacutico fator relevante e crtico,

principalmente em pases de clima variado. Nesse sentido, marcante a

influncia do excipiente, principalmente nos medicamentos de uso tpico 34.

A estabilidade definida como sendo o perodo de tempo em que um

produto mantm sua vida til, preservando as mesmas propriedades e

caractersticas que possua na ocasio de sua fabricao. Dentre os tipos de

estabilidade temos a estabilidade:- qumica, onde cada ingrediente ativo

mantm sua integridade e potncia declarada, entre os limites

especificados;- fsica, em que as propriedades fsicas originais incluindo

aparncia, uniformidade e suspendibilidade so conservadas; -

microbiolgica, na qual a esterilidade ou resistncia ao crescimento

microbiolgico mantida de acordo com os requisitos especificados; -

teraputica, em que deve permanecer inalterada a atividade farmacolgica

do produto e - toxicolgica, onde no pode ocorrer aumento significativo da

toxicidade97.

A degradao de princpios teraputicos durante o armazenamento e

o transporte o maior problema, principalmente em pases de clima tropical.

O prazo de validade, que em pases de clima temperado funciona como uma

maneira adequada de prever degradaes, pode no ser o mesmo nos

pases tropicais, mesmo que o medicamento seja armazenado em materiais

de acondicionamento apropriados 78.

Diante disto, temos que a introduo constante de novos frmacos na

teraputica, com estruturas qumicas das mais variadas, impe o estudo da

estabilidade dos medicamentos visando a garantia de prazos de validade

compatveis com o tempo necessrio para a comercializao e com as

exigncias da legislao.

4

2 REVISO DA LITERATURA

2.1 GENERALIDADES

As micoses so classificadas em superficiais e profundas ou

sistmicas. As micoses superficiais so predominantes e apresentam

distribuio universal. So manifestaes tegumentares causadas por

diferentes espcies e gneros de fungos que possuem em comum o

tropismo para invaso do tegumento cutneo. Caracterizam-se por produzir

leses na pele, mucosa, plos, unhas, dobras periungueais, conduto auditivo

externo zonas cutneo-mucosas, entretanto no invadem os tecidos mais

profundos 24, 26. As micoses profundas ou sistmicas so causadas por

organismos que vivem livremente na natureza ou em materiais orgnicos

em decomposio. Estas infeces esto freqentemente limitadas a certas

reas geogrficas. Podem ser assintomticas, desenvolver sintomatologias

brandas e em alguns casos podem evoluir para doenas graves ou fatais 55.

As micoses superficiais podem ser reunidas em trs grandes grupos:

dermatofitoses, ceratofitoses e candidase04 .

A disseminao de micoses superficiais tem aumentado

significativamente por fatores como: convivncia em certos ambientes

coletivos, reaes climticas(calor, umidade), vesturios(tecidos sintticos,

sapatos apertados) que acumulam o calor e a umidade corporal. Contribuem

tambm para a disseminao destas micoses o emprego, em larga escala,

de contraceptivos orais, antibiticos de amplo espectro de ao e, at

mesmo, o excesso de higiene com o favorecimento de proliferao de

fungos oportunistas 26.

As micoses profundas ou sistmicas so raras, porm seu ndice tem

aumentado nos ltimos anos devido a infeces por fungos oportunistas92.

5

Os fungos so abundantes na natureza, podendo tambm estar

presentes no organismo humano.Espcies de Candida podem estar

presentes na mucosa digestiva, no trato respiratrio e genital. Outros, como

Cryptococcus e Aspergillus podem ser aspirados pelo homem e no causar

doena, devido ao sistema imune celular que o protege 45, 54. Entretanto,

estados subnutricionais, organismos debilitados (aidticos, cancerosos,

diabticos), modificaes fisiolgicas (gravidez), longo tempo de

hospitalizao e, principalmente, avanos mdicos na teraputica

imunossupressora, como a quimioterapia do cncer, ou o tratamento de

transplantados renais, contribuem para aumentar o nmero de pacientes

vulnerveis. Estes estados propiciam o desenvolvimento de infeces por

fungos oportunistas e so causas freqentes de morbidade e de morte 45, 55.

De uma maneira geral, o homem acometido pelas micoses,

independente de sexo, cor e idade. Somente as micoses superficiais so

transmitidas de homem para homem45.

2.2 ANTIFNGICOS

Por muitas dcadas, o desenvolvimento de substncias antimicticas

foi ofuscado pelo grande impulso dado bacteriologia95.

Antes de 1950, no existia tratamento confivel ou seguro para

micoses profundas e a teraputica das micoses superficiais dependia de

preparaes tpicas empricas51.

O tratamento de infeces por fungos iniciou-se com a descoberta

dos antibiticos polinicos representados pela nistatina e anfotericina B51. A

nistatina foi isolada por HAZEN e BROWN36 do Streptomyces noursei em

1949, estando disponvel comercialmente desde 195151. A anfotericina B foi

isolada do fungo Streptomyces nodosus, em 1956, por GOLD e

colaboradores26.

6

Apesar de suas desvantagens, como administrao intravenosa lenta

e efeitos adversos, tais como febre, nuseas e toxicidade renal, a

anfotericina B foi o nico antimictico fidedigno de amplo espectro de ao

at 1970.27;28;51

OXFORD e colaboradores70 isolaram, em 1938 a griseofulvina.

Entretanto sua ao antifngica s se tornou conhecida em 195827;51.

Em 1944, WOOLLEY103 constatou a atividade antifngica e

antibacteriana do benzimidazol. Esta informao foi, no entanto, ignorada,

uma vez que as infeces micticas no eram muito notadas na poca.

Uma nova gerao de substncias antifngicas iniciou-se com

produtos sintticos tais como, a flucitosina, sintetizada por DUSCHINSKY e

colaboradores39 em 1957, disponvel no comrcio desde 1963, e o tolnaftato

que foi preparado por MIYASAKI e colaboradores63 em 1963, cuja ao

antifngica foi estudada em 196851

JERCHEL e colaboradores revisando as observaes de

WOOLLEY103 verificaram, em 1952, que alguns compostos benzimidazlicos

substitudos apresentavam notvel atividade antifngica. Este fato despertou

interesse em outros pesquisadores, iniciando-se, em 1969, com os

derivados imidazlicos, uma nova classe de antimicticos muitos dos quais

vm sendo introduzidos com xito nas ltimas dcadas23.

2.2.1 Antifngicos derivados dos imidazis

Em 1969, houve um grande avano no tratamento de micoses, com a

introduo dos derivados imidazlicos: o clotrimazol, o miconazol, o

econazol e em seguida o isoconazol101.

Estes compostos foram as primeiras substncias com atividade

teraputica contra um grande nmero de leveduras, dermatfitos, fungos

dimrficos e algumas bactrias gram-positivas95.

O cetoconazol foi sintetizado em 1978 e introduzido na teraputica em

1981 por HEERES e colaboradores38. Seu desenvolvimento significou um

avano na quimioterapia antifngica27.

7

Outros avanos na terapia antifngica foram representados pelo

terconazol de uso tpico, fluconazol, de uso oral e parenteral e itraconazol,

de uso oral. A terbinafina, alilamina sintetizada em 1978, utilizada na

teraputica de infeces dermatofticas.

Recentemente surgiu um novo antifngico tpico da classe dos

imidazis, o nitrato de sertaconazol, particularmente ativo contra espcies de

Candida15. Outro derivado imidazlico o voriconazol, que mostrou

melhores resultados contra Candida sp do que a anfotericina B, fluconazol e

itraconazol 09;22.

Recentes pesquisas com outros novos derivados imidazlicos tm

mostrado bons resultados: eberconazol apresenta maior eficcia contra

espcies de Candida e Cryptococcus neoformans, comparando-se com

clotrimazol e cetoconazol 96; o SCH 5659205, mostrou melhor atividade

antifngica in vitro do que o fluconazol, itraconazol e cetoconazol. Outro

imidazlico o AFK-108, tem mostrado melhor atividade antifngica in vitro,

em relao a outros imidazlicos40.

8

2.3 CETOCONAZOL

2.3.1 Aspectos gerais

O cetoconazol um derivado imidazlico com atividade antifngica.

Quimicamente denominado cis-1-acetil-4-{4-[2-(2,4-diclorofenil)-2-

(1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxilanil-4-metoxi]fenil}piperazina. Sua frmula

molecular C26H28Cl2N4O4 e seu peso molecular 531,4451:

CH3CON N OCH2O

O

CCl

CH2 NN

Cl

Figura 1- Estrutura qumica do cetoconazol

Consta da Farmacopia Americana 24a edio e apresenta-se como

p branco, levemente amarelado, inodoro, facilmente solvel em

diclorometano, solvel em cidos e em metanol, parcialmente solvel em

etanol e praticamente insolvel na gua 06, 11, 98.

No Brasil, o cetoconazol, foi lanado no comrcio sob a forma de

comprimidos, contendo 200mg de cetoconazol, creme tpico contendo

20mg/g e xampu tambm na concentrao de 20mg/g 16, 50.

9

As principais formulaes farmacuticas contendo cetoconazol

comercializadas no Brasil esto relacionadas no quadro abaixo 17, 50:

Quadro 1 - Principais formulaes farmacuticas contendo cetoconazol comercializadas no Brasil

Nome comercial Forma farmacutica Laboratrio

Candiderm creme Ach

Candoral comprimidos Ach

Cetoconazol comprimidos Bergamo

Cetoconazol comprimidos, creme, xampu Neo-Qumica

Cetonax comprimidos, creme, xampu Janssen-Cilag

Cetonil comprimidos, creme, xampu Stiefel

Cetozol comprimidos, creme, xampu Cazi

Ketocon comprimidos Cibran

Ketonan comprimidos, creme, xampu Marjan

Miconan comprimidos, creme, xampu Ativus

Nizoral comprimidos creme, xampu Janssen-Cilag

Noriderm comprimidos, creme EMS

Cetoconazol comprimidos Davidson

Cetoconazol comprimidos Ducto

Cetoconazol Bunker comprimidos creme xampu Bunker

Cetozan comprimido creme xampu Royton

Cetoconazol creme (Medicamento Genrico Lei 9.787/99)

Teuto Brasileiro

Cetoconazol comprimidos Teuto Brasileiro

Cetoconazol comprimidos, creme Green Pharma

Cetoconazol comprimidos, creme, xampu Honorterpica

Fungoral comprimidos, creme, xampu Farmion

Cetoconazol comprimidos, xampu Luper

Arcolan creme Galderma

10

As associaes com cetoconazol mais comercializadas no Brasil so:

Candicort (cetoconazol, betametasona) e Novacort (cetoconazol,

betametasona, sulfato de neomicina) ambas produzidas por Ach

Laboratrios S/A e Cetocort(cetoconazol, betametasona) de Laboratrio

Teuto Brasileiro 16, 17, 50.

O cetoconazol foi o primeiro antifngico ministrado por via oral.

Apresenta amplo espectro de atividade que inclui Candida sp, Cryptococcus

neoformans, Coccidioides immitis, Histoplasma capsulatum, Blastomyces

dermatitides e diversos dermatfitos29. O cetoconazol tambm tem sido

testado em pacientes portadores de cncer de prstata 89.

O cetoconazol creme a 2% tem sido usado topicamente no tratamento

de diversas infeces cutneas.

O cetoconazol um agente fungicida contra Pityrosporum ovale, um

importante fator etiolgico na dermatite seborrica. Diversos estudos clnicos

tm demonstrado a eficcia do tratamento antifngico com cetoconazol

tpico em dermatite seborrica 21, 93 . A eficcia do creme com cetoconazol

equivalente ao cetoconazol de uso sistmico, sem a desvantagem da

hepatotoxicidade, causada pelo uso sistmico repetido 30.

Vrios estudos provaram uma maior eficcia e segurana do

cetoconazol creme a 2% contra dermatite seborrica do que a hidrocortisona

creme a 1%, que tambm usada para essa finalidade 47, 68, 73.

Tinea pedis, Tinea cruris, Tinea corporis so infeces fngicas muito

comuns. So causadas por uma variedade de organismos e mostram uma

resposta muito varivel ao tratamento. Estudos demonstraram que o

cetoconazol creme a 2% tem sido eficaz e seguro no tratamento dessas

infeces . O cetoconazol atua contra as espcies de fungo Trichophyton,

Microsporum e Epidermophyton causadores dessas infeces56.

Para a Tinea pedis, conhecida como p de atleta, nem sempre os

dermatologistas indicam um tratamento tpico, mas estudos provaram que o

cetoconazol creme a 2% muito eficaz contra essa infeco31.

SAVIN e HORWITZ82 estudaram formulaes contendo cetoconazol

creme a 2% e creme placebo e ainda compararam com o cetoconazol usado

11

por via oral contra Tinea versicolor. Os resultados mostraram que o

cetoconazol realmente eficaz quando comparado com seu creme placebo,

e em comparao com cetoconazol via oral tambm mostrou maior eficcia

contra Tinea versicolor. Esses autores verificaram, nesse mesmo trabalho,

atravs de autoradiografia que a penetrao do cetoconazol se restringe ao

estrato crneo e estrato granuloso, no havendo absoro percutnea.

O cetoconazol creme a 2% mostrou maior eficcia quando comparado

com a mesma formulao contendo miconazol72.

Diversos estudos foram feitos para o tratamento eficaz de doenas de

pele de vrias origens e foram conseguidos bons resultados utilizando

combinaes com dipropionato de beclometasona(0,025%),

cetoconazol(2%) e fusidato de sdio(2%)85. Combinaes de fusidato de

sdio, butirato de clobetasona e cetoconazol, foram usadas no tratamento de

superinfeco por fungos e por bactrias 13;18;71.

Outro uso recente do cetoconazol creme a 2% est sendo no combate

a acantomebase disseminada, doena causada por uma ameba da espcie

Acanthomoeba sp, que causa infiltraes na pele podendo levar morte,

atacando principalmente pacientes imunocomprometidos 88;91 .

2.3.2 Sntese A sntese do cetoconazol demonstrada no Esquema 1.

A 2,4 dicloroacetofenona submetida a uma ciclizao com glicerol

na presena do benzeno-1-butanol e do cido p-toluenossulfnico(1), levando formao do produto (2); este pela ao do bromo, transforma-se em cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-bromometil-4-hidroximetil-1,3-dioxolano(3), o qual benzoilado com cloreto de benzoila, resultando o cis-2-(2,4-

diclorofenil)-2-bromometil-4-benzoiloximetil-1,3-dioxolano(4). A condensao deste com 1-H-imidazol produz o cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-(1-H-imidazol-

1metil)-4-benzoloximetil-1,3-dioxolano(5), o qual, em meio bsico, debenzoilado, dando cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-(1H-imidazol-1-metil)-4-

hidroximetil-1,3-dioxolano(6). A reao do (6) com cloreto de metanossulfonila produz o cis-2-(2,4-diclorofenil)-2-(1H-imidazol-1-metil)1,3-

12

dioxolano-4-metilmetanossulfonato(7). Finalmente, este composto condensado com 1-acetil-4-(4-hidrofenil)piperazina, por meio de hidreto de

sdio em benzeno-dimetilssulfxido, produzindo o cis-1-acetil-4-{4-[2-(2,4-

diclorofenil)-2-(1H-imidazolil-1-metil)-1,3-dioxilanil-

4metoxi]fenil}piperazina(cis I) 38.

Esquema 1- Sntese do cetoconazol(cis I)

14

2.3.3 Estereoisomeria do cetoconazol O cetoconazol um antifngico com amplo espectro de ao. A base de sua atividade antifngica o bloqueio da converso de lanosterol em

ergosterol, necessrio para manter a integridade da membrana dos

organismos celulares. O ponto especfico da interveno qumica parece

envolver a inibio da enzima do citocromo P-450.

O cetoconazol tem mostrado um efeito inibitrio similar na enzima

correspondente responsvel pela converso de lanosterol em colesterol em

humanos80. Em adio a isso, o cetoconazol tem mostrado inibio em

inmeras outras enzimas do citocromo P-450, envolvendo esteroidogneses

e metabolismo de frmacos. Um exemplo bem conhecido a diminuio de

nveis de andrognios em pacientes masculinos que usam cetoconazol por

um longo perodo. O cetoconazol tambm tem mostrado bloqueio adrenal na

esteroidognese e tem apresentado interferncia no metabolismo da

testosterona08, 47 . Essas propriedades tm levado o cetoconazol a ser

utilizado no tratamento contra o cncer de prstata e a sndrome de

Cushing80 .

Essa variedade de aes do cetoconazol, esto relacionadas com

seus ismeros, pois estes se diferenciam quanto s propriedades

farmacolgicas.

O cetoconazol uma mistura racmica de cis(2S,4R) e cis(2R,4S)

enantimeros. So numerosas as diferentes propriedades farmacolgicas

entre esses estereoismeros.

Os quatro estereoismeros do cetoconazol agem inibindo as enzimas

do citocromo P450. Os ismeros cis(2S,4R) e (2R,4S) so mais potentes

inibidores da 14-dimetilase do lanosterol de mamferos do que os

diasteroismeros trans (2R,4R) e (2S,4S), por isso os ismeros cis possuem

atividade antifngica superior. O ismero cis(2S,4R) trs vezes mais

potente que seu similar cis (2R,4S)80

Diversos estudos buscam a sntese dos 4 estereoismeros do

cetoconazol, para a obteno de compostos mais puros08, 80 .

15

2.3.4 Mtodos de anlise de formulaes contendo cetoconazol Para comprimidos contendo cetoconazol, ABOUNASSIF e EL-SHAZLY01, sugeriram o uso de duas tcnicas rpidas e quantitativas. A

primeira foi uma titulao potenciomtrica em meio no-aquoso, onde o

ponto de equivalncia foi detectado graficamente por potenciometria

diferencial. A segunda tcnica foi a ressonncia nuclear magntica,

envolvendo a integrao dos sinais de prton do grupo metila do

cetoconazol, usando benzocana como padro interno.

DAS14 props para anlise de cremes e pomadas contendo

cetoconazol, uma rpida identificao e quantificao atravs da

cromatografia em camada delgada e densitometria. O cetoconazol foi

separado dos excipientes utilizando uma mistura de propores iguais de

clorofrmio e lcool isoproplico. Em seguida foi aplicado em placa de slica

gel F254, utilizando como fase mvel n-hexano : clorofrmio : metanol :

dietilamina(50:40:10:1) e quantificado por densitometria.

A espectrofluorimetria foi o mtodo de anlise para xampu utilizado

por EL-BAYOUMI e colaboradores20. Usou-se um gel-xampu com

cetoconazol a 2%.

Para a anlise de cremes e comprimidos contendo cetoconazol, foi

proposto por EL-SHABOURI e colaboradores19, a espectrofotometria,

baseada na formao de complexo de carga de transferncia. Esse

complexo foi formado pelo frmaco(cetoconazol) como doador de eltrons e

o iodo como receptor. O mtodo apresentou rapidez, simplicidade e

sensibilidade.

SADEGHII e SHAMSIPUR81 , sugeriram a extrao do cetoconazol

contido em creme e comprimido, utilizando uma mistura de 1:1 de um

complexo formado por cido pcrico em pH 2,5 e clorofrmio, e analisados

por espectrofotometria em 410nm.

A Farmacopia Americana 24a edio98, preconiza para comprimidos

a cromatografia lquida de alta eficincia, utilizando como fase mvel uma

mistura de diisopropilamina em metanol 1:500/soluo de acetato de amnio

16

em gua 1:200 na proporo de 7:3, coluna C-18 de 30cm x 3,9 mm e

detector UV a 225nm.

HACKMANN e colaboradores 48, 67, propuseram para a anlise de

cetoconazol em comprimido e creme , a espectrofometria direta no

ultravioleta, usando como solvente o cido clordrico 0,01mol/L e leitura em

222 e 269nm; no mesmo trabalho foi proposta a cromatografia liquida de alta

eficincia(CLAE), utilizando como fase mvel uma mistura de

diisopropilamina em metanol 1:500/ soluo de acetato de amnio em gua

1:200 na proporo a 8:2 e coluna LiChrospher 100RP-18(5m) Merck

medindo 12,5 cm x 4mm, detector a 225nm e terconazol como padro

interno.

LOW e WANGBOONSKUL 57 descreveram um mtodo para anlise

de cetoconazol comprimido, creme e xampu, utilizando a CLAE. Os autores

utilizaram uma coluna de octadecilslica medindo 200 x 4,6 mm. A fase

mvel foi constituda por acetonitrila 60% e ortofosfato dissdico

hidrogenado a 20 mM e 0,2% de dietilamina v/v, em pH 4,0., vazo de 1,5

mL/min e detector UV a 232nm

ARRANZ e colaboradores03 pesquisaram recentemente uma nova

metodologia de anlise para o cetoconazol, aplicando a eletroforese capilar,

uma tcnica moderna e que apresenta vantagens em comparao com

outros mtodos, como a alta eficincia em separaes, curto tempo de

anlise, uso de pequenos volumes de amostras e reagentes, alta

versatilidade e completa automao. Nesse trabalho os autores conseguiram

atravs da eletroforese capilar, a separao de uma mistura contendo

cetoconazol, econazol e clotrimazol. Essa tcnica tambm foi utilizada para

a anlise de medicamentos que contm esses antifngicos separadamente,

obtendo-se bons resultados, podendo essa tcnica ser utilizada no controle

de qualidade de amostras que contenham esses antifngicos.

17

2.4 EMULSES 2.4.1 Definio

Emulses so preparaes farmacuticas obtidas pela disperso de

duas fases lquidas imiscveis ou praticamente imiscveis.74

As emulses so o tipo mais comum de sistemas de liberao usados

em produtos cosmticos. Elas permitem que ampla gama de ingredientes

sejam liberados de maneira rpida e conveniente nos cabelos e na pele. Os

tipos de emulses usados so normalmente materiais semi-slidos formados

por uma poro aquosa(hidrfila) e uma poro oleosa(lipoflica). Essas

duas pores constituem as fases interna e externa da emulso. A fase

interna composta pelos materiais que formam as minsculas partculas

dispersas(ou emulsificadas). Normalmente, a fase externa(tambm chamada

de fase contnua) a mais abundante das duas.84

Emulso O/A e A/O: a mais tpica das emulses aquela na qual o

leo est disperso na gua. Compreensivelmente, ela chamada de

emulso leo-em-gua(O/A). Um outro tipo de emulso simples a emulso

gua-em-leo(A/O), na qual a gua torna-se emulsificada. Se uma emulso

do tipo O/A ou A/O depende de vrios fatores, entre os quais a

concentrao de cada um dos materiais no sistema, o tipo de emulsificante e

a tcnica empregada no processamento de criao da emulso.

Emulses mltiplas: alm da emulso simples, de duas fases,

podem ser desenvolvidos sistemas mais complexos. Essas emulses podem

ter vrias fases internas e so conhecidas como emulses mltiplas. So

verdadeiras emulses dentro de emulses. Por exemplo, a gua pode ser

dispersa num leo que, posteriormente, disperso numa outra fase aquosa.

Essa a chamada emulso gua/leo/gua(A/O/A). Outras emulses

mltiplas podem apresentar mais trs, quatro ou mais fases internas.

18

2.4.1.1 Componentes da emulso Fase oleosa: esta fase formada por compostos no polares,

tipicamente incompatveis com a gua. Entre tais compostos podemos citar

gorduras, leos e cra e todos os seus derivados, inclusive alcois graxos,

cidos graxos, steres, hidrocarbonetos, glicerdeos e silicones.

Fase aquosa: esta parte da emulso formada pela gua e demais materiais hidrfilos do sistema. Podem ser materiais umectantes, como

glicerina ou propilenoglicol, polmeros hidrossolveis que do espessamento

ou do condicionamento, conservantes, corantes,eletrlitos ou ingredientes

caractersticos, como extratos vegetais ou protenas hidrolisadas.

Emulsificantes: so os compostos que possibilitam a emulsificao,

estabilizando a disperso da fase interna na fase contnua. So tensoativos

que reduzem a tenso superficial entre as fases. Os emulsificantes tpicos

so molculas com uma poro hidrfila e uma poro lipoflica. So

classificados como aninicos, catinicos, no-inicos ou anfteros,

dependendo da natureza de seu principal grupo hidrossolvel. Ao serem

colocados na gua, os emulsificantes tm a tendncia de alinhar-se de modo

a minimizar a interao entre suas extremidades hidrfilas e lipfilas.

Havendo quantidade suficiente de emulsificante, podem formar-se estruturas

esfricas chamadas micelas. Essas estruturas so agregados nos quais as

caudas lipoflicas orientam-se para o centro da micela e as cabeas

hidroflicas formam a superfcie externa.84 As emulses so usadas oralmente, parenteralmente e

topicamente(cremes,por exemplo)07.

2.4.2 Estudo de estabilidade de emulses

Os sistemas emulsificados leo em gua ou gua em leo so

considerados termodinamicamente instveis79 . O uso do agente

emulsificante indispensvel para a formao da emulso, pois exibe a

19

habililidade de baixar a tenso superficial da gua ou de reduzir a tenso

interfacial entre duas substncias imiscveis 102 .

As preparaes farmacuticas e cosmticas so planejadas seguindo

as orientaes tcnicas e bsicas de boas normas de fabricao e devem

permanecer estveis por vrios meses aps a sua produo, mesmo quando

sujeitas s mais variadas espcies de agresses do meio ambiente, como

por exemplo: luz(radiaes ultravioleta, visvel e infravermelho), altas e

baixas temperaturas, oxignio do ar, estresse mecnico em funo do

transporte, reaes qumicas e contaminao microbiana 10, 42, 76, 77, 79.

A emulso dever manter suas caractersticas originais de forma

aceitvel por um perodo finito, o qual normalmente denominado prazo de

validade 10, 42, 49, 76, 77, 79.

O estudo da estabilidade tem por objetivo prever se o produto

suportar as condies adversas do ambiente por determinado tempo, em

condies normais de armazenamento.Para isso, procede-se ao teste de

envelhecimento acelerado do produto. Este teste poder fornecer

antecipadamente uma indicao dos problemas, que podero ocorrer nas

formulaes e dizer se o produto ou no estvel 10, 42, 49, 64, 69, 76, 77, 79.

Dentre os fatores que afetam o tempo de vida e merecem ateno

especial num planejamento do estudo de estabilidade envolvendo emulses,

destacam-se a temperatura, luz, umidade, efeitos mecnicos, tamanho das

partculas, comportamento reolgico e eficcia de conservantes 46, 77, 102 . Os estudos sobre a desestabilizao das emulses mostraram que existem quatro mecanismos principais que so a cremagem ou cremeao,

a floculao, a coalescncia e a inverso. Esses mecanismos, embora

explicados separadamente, ocorrem simultaneamente na emulso.

Cremagem: as gotculas em uma emulso possuem diferentes

densidades e esto, portanto, propensas a passar por um processo de

desestabilizao conhecido como cremagem. Trata-se de um processo

segundo o qual as partculas menos densas tendem a ir para o topo. A

emulso fica com duas sees, uma delas tendo maior quantidade da fase

20

interna e outra com maior quantidade da fase externa. A formao da

cremagem representa um problema pouco grave para a estabilidade porque

nenhuma das partculas realmente se combina. Esse fenmeno pode ser

revertido por agitao.

Floculao: durante este processo as gotculas da fase interna

formam uma associao fraca e reversvel. O fenmeno tipicamente

causado por uma carga inadequada sobre as micelas, o que reduz a fora

de repulso entre elas. As duas partculas permanecem distintas e no h

alterao nas dimenses. Isso pode ser demonstrado por meio de duas

bolas de bilhar e fazendo-as tocar uma na outra. Enquanto elas se tocam,

forma-se uma associao. No entanto, essa associao pode ser facilmente

rompida pela remoo de uma das bolas. Da mesma forma a floculao em

uma emulso pode ser revertida por meio da agitao do sistema. Por esse

motivo, a floculao um problema de pouca gravidade para a estabilidade

da emulso.

Coalescncia: quando duas gotculas da fase interna se aproximam

o suficiente, elas se unem para formar uma gotcula maior. Esse processo

representa um problema srio para a estabilidade, por ser irreversvel.

Quando um nmero grande de partculas coalesce, o resultado uma

separao completa das duas fases. Existe um fenmeno semelhante

chamado amadurecimento Ostwald segundo o qual as partculas da fase

interna tendem a combinar-se em dimenses iguais. Ele tambm pode levar

separao das fases.

Inverso: a separao uma das conseqncias do processo de

desestabilizao da emulso e a inverso de fase outra conseqncia.

Quando ocorre a inverso de fase, a fase externa torna-se fase interna e

vice-versa. Uma alterao dessas normalmente indesejvel porque as

caractersticas fsicas da emulso resultante sero diferentes da original. A

inverso e a separao de fases promovem a inutilizao de uma emulso.

21

medida em que as emulses se tornam instveis, sua composio

fsico-qumica pode variar. Podem-se usar diferentes mtodos para

determinar o grau de desestabilizao. O mtodo mais simples o da

observao direta, e verificaes de viscosidade e de pH. Outros mtodos

mais sofisticados envolvem tcnicas de disperso de luz, medio de

condutividade, avaliao microscpica e at ressonncia magntica

nuclear(RMN).64, 69, 84 As caractersticas reolgicas observadas no estudo da estabilidade

fsica das emulses so viscosidade da fase interna, viscosidade da fase

externa, proporo fase-volume, emulsificantes usados e sua quantia,

efeitos eletroviscosos, distribuio das partculas. Outros testes realizados

so aparncia e velocidade de sedimentao07.

As razes que podem levar a disperso e coalescncia so a

incompatibilidade qumica entre emulsificante e outro componente, a escolha

imprpria do tensoativo, a alta concentrao de eletrlitos, a baixa

viscosidade e a temperatura07.

2.4.2.1 Reologia

A reologia estuda as condies de fluidez e de deformao da

matria, que so influenciados por foras externas. O comportamento

reolgico do material pode ser medido como resultado dessas foras. Esse

estudo envolve a determinao de caractersticas complexas das

substncias, como a viscosidade, a consistncia, a plasticidade e a

elasticidade. A viscosidade definida como a resistncia para o fluxo e

medida pela proporo da fora de cisalhamento(fora aplicada) e pelo

gradiente de velocidade(movimento). Se o gradiente muda durante a

aplicao, a mudana da fora pode ser descrita por uma curva de fluxo em

funo do aumento ou diminuio do gradiente de velocidade. Dividindo-se a

fora de cisalhamento pelo gradiente de velocidade, para cada ponto,

resultar a curva de viscosidade 53;66;86

A consistncia a propriedade apresentada pelos corpos de

resistirem s deformaes permanentes que uma dada carga tende a

22

provocar-lhe. No caso dos corpos fludos(gases ou lquidos newtonianos)

esta resistncia deformao depende da viscosidade do fluido, grandeza

fsica e mensurvel. Considerando o oposto destas condies tem-se os

corpos slidos, cuja resistncia deformao s pode ser avaliada

empiricamente pela dureza. Tem-se tambm os lquidos no-newtonianos e

os corpos semi-slidos, como as emulses. A consistncia desse tipo de

material deriva da soma e da interferncia de fatores como as foras de adeso e de coeso, elasticidade, viscosidade, tixotropia e estrutura

micelar.76

Os lquidos no-newtonianos e os corpos semi-slidos podem

classificar-se quanto s suas propriedades reolgicas em trs grupos

fundamentais, estabelecidos de acordo com o tipo de escoamento que

apresentam quando submetidos a uma fora externa: plsticos,

pseudoplsticos e dilatantes76.

As emulses so consideradas lquidos no-newtonianos, pois no

seguem a lei de Newton de fluidos viscosos, ou seja, no mostram

proporcionalidade direta entre fora de cisalhamento e gradiente de

velocidade. Nesse caso, a viscosidade varia em funo de gradiente de

velocidade 53, 62, 90. Tambm so consideradas pseudoplsticas, pois

mostram uma diminuio na viscosidade quando o gradiente de velocidade

aumenta 99, 100 .

A tixotropia a capacidade de um sistema em apresentar baixa

viscosidade quando sofre cisalhamento e a capacidade de recuperar sua

estrutura aps determinado perodo de tempo66.

2.4.2.2 Tamanho das partculas As partculas que compem a fase interna da emulso so

polidispersas(isto , apresentam dimenses variveis), e suas dimenses

mdias que so usadas na classificao da emulso. Por exemplo, se seu

dimetro mdio for menor do que 100 ela passa a ser referida como

emulso micelar. Com o dimetro de partculas cuja mdia esteja situada

entre 100-2000 a emulso passa a ser chamada de microemulso.

23

Partculas com dimetro mdio maior formam uma macroemulso, que o

tipo mais comum utilizado na formao de produtos cosmticos84.

Dentre os mtodos para avaliar a estabilidade de emulses, est o

exame microscpico, que determina o tamanho, a forma e a distribuio das

gotculas da fase dispersa das emulses.

A distribuio irregular do tamanho e a agregao de partculas, so

sinais de alerta quando se avalia o comportamento de um dado sistema em

funo de seu agente emulsificante 99,102. Conseqentemente, deve-se optar

pelas emulses que forneam gotculas menores, quando tratadas em

condies semelhantes, visto que estas tornam-se mais estveis quanto

menores e mais uniformes forem o tamanho de suas partculas 49 .

A distribuio do tamanho de partculas determina a estabilidade ou

instabilidade da emulso, em funo do aumento do tamanho das partculas,

desde que estejam dentro dos padres especificados pela literatura de 0,5

10 m 25 .

2.4.2.3 Mtodos qumicos utilizados no estudo da estabilidade

A instabilidade das emulses tambm pode ser resultado da

instabilidade qumica (principalmente hidrlise de tensoativos), destruio

microbiana de um componente crtico da emulso, ou por processos

fotoqumicos.79

Os ensaios qumicos devem estabelecer se as substncias contidas

nas amostras, conservadas em condies adequadas, permanecem

inalteradas ou se parcial ou totalmente alteradas. Para isso necessrio

identificar a substncia e verificar se no h formao de produtos que

inicialmente no existiam; em seguida necessrio a determinao

quantitativa das substncias em ensaio e, se possvel, seus produtos de

alterao. Uma tcnica insubstituvel para identificao completa das

substncias inalteradas e de seus possveis produtos de alterao a

cromatografia em camada delgada. Os mtodos de anlises quantitativas

devem ser, por sua vez muito especficos de maneira a poderem distinguir

entre frmaco inalterado e produto de degradao: um mtodo que no

24

garante esta diferenciao no serve para estabelecer se um medicamento

estvel. Mtodos de anlise especficos podem ser conseguidos

empregando-se tcnicas como cromatografia em papel ou coluna,

cromatografia preparativa em camada delgada, cromatografia gasosa,

cromatografia lquida de alta eficincia, espectrofotometria no ultravioleta,

espectroscopia no infravermelho e ressonncia magntica nuclear 12.

sempre recomendvel, antes de se tirar concluses sobre a

estabilidade fornecida pelos dados experimentais de laboratrio, determinar-

se a preciso dos mtodos atravs da estatstica. Diversos fatores podem

alterar a estabilidade de um produto farmacutico. Cada componente quer

terapeuticamente ativo ou inativo, pode afetar a estabilidade. Outros fatores,

chamados extrnsecos como a temperatura, luz, ar (especificamente o

oxignio, dixido de carbono e vapores de gua), umidade, local de

acondicionamento tambm alteram a estabilidade. H tambm os fatores

intrnsecos como: incompatibilidade, pH, hidrlise, racemizao e

oxidao61,97.

O controle da estabilidade pode ser feito atravs de estudos

preliminares e acelerados. De acordo com a resoluo GMC 53/96 do

Mercosul 41, 65 o programa de estudo de estabilidade deve levar em

considerao o mercado para o qual est destinado o produto e as zonas

climticas em que ser utilizado. O Brasil se enquadra na zona climtica

IV32, 33, 41 que definida como quente e mida, portanto as condies de

armazenamento so 30C- 70% de Umidade Relativa(UR) para estudos

preliminares e para estudos acelerados as condies foradas de

armazenamento so 40C-75% UR para 6 meses ou 50C-90% de UR para

3 meses. O estudo preliminar da estabilidade pode ser realizado a partir de

uma exposio, por breve tempo, em condies drsticas como:

autoclavao sucessiva, alta temperatura, luz solar direta, uso de agentes

oxidantes e redutores, umidade e centrifugao. Todos esses ensaios

devero ser feitos com produtos do mesmo lote ou lotes diversos, mas com

substncias obtidas pelo mesmo processo de sntese. Esses ensaios podem

dar informaes sobre a vida mdia e possveis alteraes, permitindo a

25

seleo de melhores formulaes. No entanto, o estudo acelerado da

estabilidade deve ser baseado em: seleo de ensaios de envelhecimento,

de acordo com a forma farmacutica em exame; subdiviso das amostras

em material de acondicionamento de diversos tipos para selecionar o mais

adequado; esquema de verificao bem definido e o mais especfico

possvel, para conseguir em tempo mais breve e de forma mais segura, a

coleta de dados essenciais para avaliao da forma em exame 34, 35, 37 . O

objetivo do estudo acelerado verificar a necessidade de aumentar a dose

do princpio ativo e determinar o prazo de validade da substncia

analisada37, 97.

26

3 OBJETIVOS

-Seleo de mtodos analticos para a determinao do cetoconazol

em formulaes farmacuticas sob a forma de creme obtidas no comrcio e

simuladas em laboratrio;

-Validao e padronizao da metodologia analtica

espectrofotometria derivada no ultravioleta, utilizada para a determinao do

cetooconazol em creme;

--Validao e padronizao da metodologia analtica cromatografia

lquida de alta eficincia, tambm utilizada para a determinao do

cetooconazol em creme;

-Estudo de estabilidade acelerada de formulaes farmacuticas

creme contendo cetoconazol;

-Estudo da estabilidade fsica do cetoconazol em preparaes

farmacuticas creme obtidas em laboratrio, sob diferentes condies de

armazenamento.

-Estudos reolgicos das amostras de creme obtidas em laboratrio e

armazenadas sob diferentes condies de temperatura e umidade em

tempos determinados.

27

4. MATERIAL E MTODOS

4.1 Material

Todos os reagentes utilizados foram de grau analtico e as matrias-

primas de grau farmacutico.

4.1.1 Solventes e solues

-acetato de amnio(Merck)

-acetato de etila(Merck)

-acetato de sdio(Merck)

-cido actico glacial(Merck)

-cido clordrico(Merck)

-clorofrmio(Merck)

-diisopropilamina(Merck)

-etanol 96%(Merck)

-metanol para cromatografia(Merck)

-n-hexano(Merck)

-trietilamina(Merck)

4.1.2 Frmacos empregados como substncias de referncia

-cetoconazol padro (United States Pharmacopeia)

- terconazol matria-prima(Janssen-Cilag)

28

4.1.3 Matrias-primas -Butilidroxitolueno B.H.T.(Galena)

-Cetiol V oleato de decila(Galena)

-Cetoconazol (Americhem-Laboratrios Prieto S/A(Panam-Panam)) teor : 99,73%

-Cetoconazol (Laboratrios Ach) teor : 100,92%

-Cetoconazol (Laboratrios EMS) teor : 99,5%

-Chemynol I imidazolidiniluria(Chemy Union)

-EDTA (Merck)

-Germal II diazolidiniluria(ISP do Brasil)

-Isocil PC metilcloroisotiazolinona e metilisoclorotiazolinona(Chemy

Union)

-Lanette Nlcool cetoestearlico; cetoestearilsulfato de sdio(Galena)

-Merguard 1200 metilbromoglutaronitrila e fenoxietanol (Calgon-

Galena)

-Nipagin metilparabeno(Galena)

-Nipazol propilparabeno(Galena)

-Polawax cera autoemulsionante(Galena)

-Propilenoglicol(Galena)

-Vaselina liquida(Galena)

4.1.4 Equipamentos e acessrios

-Agitador mecnico com hlice adaptvel- tica

-Balana analtica- OHAUS

-Balana eletrnica BG 200 GEHAKA

-Banho ultrasnico Thornton T14

-Clula DSC50 acoplada com acessrio para resfriamento

automtico(LTC50) IQ-USP

-Coluna cromatogrfica Merck LiChrospher 100RP 18(5m)

-Cromatgrafo lquido modelo CG 480, munido de injetor de loop fixo

de 20L

29

-Detector ultravioleta, modelo CG 435

-Espectrofotmetro infravermelho Bomem, com transformador de

Fourier

-Espectrofotmetro UV/Visvel Beckmann-DU srie70, acoplado a

computador e impressora, com cubeta de quartzo de 1cm de caminho tico

-Estufa tica regulada a 40C

-Estufa Fanem regulada a 50C

-Integrador modelo CG-200

-Manta aquecedora

-Medidor de ponto de fuso (Melting Point SMP1 Stuart Scientific)

-Membrana Millipore

-Milli Q Plus Milipore obteno de gua

-Placas de slica gel 60 F 254(Merck)

-pHmetro DM 21 Digimed TE 901

-Potes de plstico de poliestireno capacidade de 30 g

-Potes de vidro tipo III capacidade de 30 g

-Refrigerador Tropical Peabody, mantido a 10C

-Termobalana Shimadzu modelo TGA-50 IQ-USP

-Termo-higrmetro

-Viscosmetro rotacional Brookfield RVT com dispositivo

para pequenas amostras Spindle SC4-29

4.1.5 Formulaes estudadas As formulaes do creme base 58, 59 para incorporar cetoconazol a 2% preparadas em laboratrio e submetidas a estudos preliminares, foram as

seguintes:

30

Formulao 1

Nome comercial Nome qumico Funo

Fase aquosa(A) %p/p

Propilenoglicol 5,00 Propilenoglicol Umectante

Nipagin 0,15 Metilparabeno Conservante

gua destilada q.s.p. 100,0 Veculo

Fase oleosa(B) %p/p

Polawax 15,00 Cera auto-emulsionante Cera auto-emulsionante

no inica

Vaselina lquida 5,00 Vaselina lquida Emoliente

Nipazol 0,05 Propilparabeno Conservante

Formulao 2


Fase aquosa(A) %p/p



gua destilada q.s.p. 100,0 Veculo

Fase oleosa(B) %p/p Polawax 20,00 Cera auto-emulsionante Cera auto-emulsionante

no inica



Fase C %p/p cido ctrico 4,00 cido ctrico Solubilizante

Trietanolamina 5,00 Trietanolamina Neutralizante de pH

31

Formulao 3


Fase aquosa(A) %p/p



EDTA dissdico 0,20 EDTA dissdico Quelante

gua destilada q.s.p.100,0 Veculo


no inica



B.H.T. 0,05 Butilidroxitolueno Antioxidante

Fase C %p/p Merguard 1200 0,30 Metildibromoglutaronitril e

fenoxietanol

Conservante

Formulao 4


Fase aquosa(A) %p/p





Fase oleosa(B) %p/p Lanette N 15,00 Disperso coloidal de

alcois graxos e sulfato de

cetil-estearila

Base auto-emulsionante

Cetiol V 3,00 Oleato de decila Emoliente




32

Formulao 5


Fase aquosa(A) %p/p





no inica



Fase C %p/p Merguard 1200 0,30 Metildibromoglutaronitril e

fenoxietanol

Conservante

Formulao 6


Fase aquosa(A) %p/p





no inica



Fase C %p/p Chemynol I 0,50 Imidazolidiniluria Conservante

33

Formulao 7


Fase aquosa(A) %p/p





no inica



Fase C %p/p Germal II 0,50 Diazolidiniluria Conservante

Formulao 8


Fase aquosa(A) %p/p


EDTA 0,20 EDTA dissdico Quelante



no inica



Fase C %p/p

Chemynol I 0,50 Imidazolidiniluria Conservante

Isocil PC 0,05 Mistura de isotiazolinonas Conservante

34

Formulao 4A


Fase aquosa(A) %p/p






cetil-estearila





Formulao 4B


Fase aquosa(A) %p/p






cetilestearila





35

Formulao 4C


Fase aquosa(A) %p/p





cetilestearila




As fases A e B foram aquecidas em manta aquecedora temperatura

de 70C. A fase aquosa(A) foi vertida sobre a oleosa(B) sob constante

agitao, com o auxlio de um agitador mecnico com hlice, at atingir

consistncia. Os componentes da fase C, juntamente com o cetoconazol

foram adicionados a uma temperatura em torno de 45C.

4.1.5.2 Obteno do creme com cetoconazol a 2% Em um gral de porcelana triturou-se at p fino o cetoconazol,

exatamente pesado, a fim de se obter concentrao de 2%, e adicionou-se

uma pequena quantidade de propilenoglicol para solubiliz-lo. Acrescentou-

se aos poucos o creme base ao gral contendo cetoconazol e misturou-se

para obter uma formulao homognea.

Na Formulao 2 foi usado o cido ctrico para solubilizar o cetoconazol, e trietanolamina para corrigir o pH.

Todas as formulaes foram acondicionadas em frascos de plstico e

de vidro com capacidade de 30g e submetidas a estudos preliminares em

diferentes condies de armazenamento.

36

4.1.6 Amostras A formulao que se mostrou mais adequada para os estudos de

estabilidade e seleo de mtodos de anlise foi a Formulao 6(amostra simulada): Formulao 6


Fase aquosa(A) %p/p





no inica


B.H.T. 0,05 Butil hidrxitolueno Antioxidante

Fase C %p/p Chemynol I 0,50 Imidazolidiniluria Conservante

Cetoconazol 2,00 Cetoconazol Antifngico

Dentre as vrias amostras de creme com cetoconazol que so

comercializadas no Brasil, a amostra utilizada foi o creme com cetoconazol a

2% do Laboratrio Teuto(Medicamento Genrico Lei 9.787/99):

Cetoconazol.............................................................................................20 mg

Excipiente( Metilparabeno, propilbarabeno, lcool etlico, EDTA dissdico,

Polawax , polissorbato 80, propilenoglicol) q.s.p. ......................................1 g

37

4.2 Mtodos 4.2.1 Identificao do cetoconazol matria-prima

A identificao do cetoconazol matria-prima foi realizada de acordo

com as monografias encontradas nas Farmacopias Americana98 e

Britnica06. Para o ensaio de identificao da matria-prima cetoconazol em

cromatografia em camada delgada foram utilizadas as amostras de trs

diferentes laboratrios( Ach, Americhem, EMS )e nos demais ensaios

utilizou-se a matria prima cetoconazol do laboratrio Americhem.

4.2.1.1 Ponto de fuso

Foi determinado o ponto de fuso da amostra de cetoconazol

utilizando o aparelho Melting Point SMP1 Stuart Scientific.

4.2.1.2 Cromatografia em camada delgada

Para a identificao atravs da cromatografia em camada delgada

foram preparadas solues de amostras de cetoconazol matria prima de

trs laboratrios diferentes na concentrao de 10mg/mL em clorofrmio e

aplicadas em cromatoplacas em vidro 20 X 20 cm recobertas com Silica gel

60 F254 Merck e comparadas com uma aplicao do cetoconazol padro,

tambm na concentrao de 10mg/mL. A fase mvel utilizada foi composta

pela mistura de n-hexano: acetato de etila: metanol: gua: cido actico

glacial( 27: 40: 30: 2: 1) . Para a revelao das manchas foi utilizado vapor

de iodo 97, 98 .

4.2.1.3 Espectroscopia no infravermelho

A amostra foi identificada por espectroscopia na regio do

infravermelho(IV). Primeiramente foi transformada em pastilha de KBr, e

38

determinada de acordo com as recomendaes da literatura11. O espectro

obtido foi comparado com um espectro relatado na literatura.

4.2.1.4 Estudos termoanalticos Calorimetria exploratria diferencial (DSC)

Condies experimentais: cadinho de alumnio(parcialmente

fechado), massa de amostra em torno de 1,9mg, atmosfera de

nitrognio(50mL/min), programao de aquecimento desde temperatura

ambiente at 600C, razo de aquecimento de 10C/min.

Termogravimetria (TG)

- calibrao do instrumento com padro de oxalato de clcio.

- condies experimentais: cadinho de platina, massa de amostra

em torno de 4,5 a 5 mg, atmosfera dinmica de

nitrognio(50mL/min), programao de aquecimento desde

temperatura ambiente at 900C, razo de aquecimento de

10C/min. 4.2.2 Ensaios espectrofotomtricos preliminares Para a anlise do cetoconazol matria-prima e do cetoconazol creme

a 2% por espectrofotometria no UV, foram obedecidas as seguintes

condies experimentais: velocidade de 300nm/min, limite de absorbncia

de 0,000 a 1,000; cubeta de quartzo de 1 cm de espessura.

Os parmetros utilizados para a anlise do cetoconazol matria-prima

foram os seguintes:

- solvente metanol ; concentrao de 25g/mL de cetoconazol

matria-prima; comprimento de onda mximo( max) 244 nm;

39

- solvente metanol ; concentrao de 220g/mL de cetoconazol

matria-prima; max de 296 nm;

- solvente cido clordrico 0,01 mol/L; concentrao de 270g/mL de

cetoconazol matria-prima; max 269nm.

Todas essas anlises foram efetuadas por espectrofometria direta no

UV e por espectrofometria derivada no UV.

As amostras de cetoconazol creme a 2% foram analisadas seguindo

os parmetros abaixo:

- solvente cido clordrico 0,01 mol/L; concentrao 200g/mL de

cetoconazol ; max 269nm espectrofotometria direta no UV;

max 218,5nm espectrofotometria derivada no UV;

- solvente cido clordrico 0,01 mol/L; concentrao 200g/mL de


concentrao 25g/mL; max 218,5nm espectrofotometria

derivada no UV;

- solvente metanol; ; concentraes 20g/mL e 5g/mL de


max 257nm espectrofotometria derivada no UV.

4.2.6 Ensaios cromatogrficos preliminares Escolha do solvente

Foram testados os solventes cido clordrico 1mol/L ; mistura de

diclorometano e metanol(1:1) e metanol.

40

Fase mvel

Foram testados os seguintes tipos de fase mvel:

- mistura de trietilamina em metanol(1:500) e soluo de acetato de

amnio em gua(1:200) nas propores de 7:3 e 75:25;

- diisopropilamina em metanol(1:500) e soluo de acetato de amnio

em gua(1:200) nas propores 7:3 e 8:2.

Colunas cromatogrficas empregadas

- coluna cromatogrfica Nova Pack C18 300 mm x 3,9mm;

- coluna cromatogrfica: Merck LiChrospher 100 RP-18 (5m) em

LiChroCART medindo 4mm x 12,5mm.

4.3 Validao da metodologia analtica

4.3.1 Padronizao do mtodo espectrofotomtrico Aps terem sido realizados os ensaios preliminares, foram estabelecidos os seguintes parmetros:

- Intervalo de leitura dos espectros de absoro: 211 295 nm.

- mximo para o cetoconazol: 244 nm em espectrofotometria

direta no UV e 257 nm em espectrofotometria derivada no UV de

primeira ordem.

- Velocidade de varredura dos espectros de absoro: 300 nm/min

41

- Solvente: metanol para cromatografia

- Cubeta de quartzo de 1 cm.

- Assentamento das ordenadas: 0,500

- Delta lambda ( ):2 nm

- Mtodo quantitativo: zero pico

- Ordem da derivada: 1a

Verificou-se que a derivatizao dos espectros no UV direto melhora a

visualizao dos mesmos. Padronizou-se como mtodo de anlise a

espectrofotometria derivada no UV. 4.3.1.1 Construo da curva de calibrao

Foram pesados 25,0 mg de cetoconazol padro e transferidos para

balo volumtrico de 100,0 mL, completando-se o volume com metanol,

obtendo-se uma soluo final de 250,0 g/mL.

Desta soluo a 250,0 g/mL foram transferidas alquotas de 0,5; 1,0;

1,5; 2,0; 2,5 e 3,0 mL para bales de 25 mL e completou-se o volume com

metanol, obtendo-se concentraes de 5,0; 10,0; 15,0; 20,0; 25,0 e 30,0

g/mL de cetoconazol em cada balo volumtrico.

As derivadas das leituras das absorbncias destas solues foram

efetuadas a 257 nm, empregando-se metanol como branco.

4.3.1.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes Especificidade

a) Preparao da soluo padro


balo volumtrico de 100,0 mL, completou-se o volume do balo com

metanol, desta soluo transferiu-se uma alquota de 5,0 mL para balo

volumtrico de 25,0 mL, completou-se o volume com metanol e obteve-se

uma soluo de concentrao final de 20,0 g/mL.

42

b) Preparao da soluo da amostra creme simulada(formulao 6) Foram pesados 500,0 mg de creme de cetoconazol a 2%,

equivalentes a 10,0 mg de cetoconazol e transferidos para balo volumtrico

de 100,0 mL, dissolvendo-se o creme com metanol, levou-se a soluo 15

minutos em ultrassom e depois completou-se o volume com metanol.

A soluo foi filtrada em papel de filtro quantitativo, rejeitando-se os

primeiros 10,0 mL e do filtrado transferiu-se uma alquota de 5,0mL para

balo volumtrico de 25,0 mL, completou-se o volume com metanol,

obtendo-se uma concentrao final correspondente a 20,0g/mL.

c) Preparo da soluo da amostra creme comercial

Essa soluo foi preparada conforme item 4.3.1.2b., utilizando a

amostra creme comercial de cetoconazol a 2%.

d) Preparo da soluo da amostra placebo

Pesou-se 500,0 mg de creme base sem cetoconazol, procedendo-se

conforme o preparo da soluo amostra de creme com cetoconazol (item

4.3.1.2 b).

e) Preparo da mistura de soluo padro e soluo da amostra

placebo


balo volumtrico de 100,0 mL, completou-se o volume do balo com

metanol, desta soluo transferiu-se uma alquota de 5,0 mL para balo

volumtrico de 25,0 mL, e nesse mesmo balo transferiu-se uma alquota de

5,0mL da soluo placebo concentrada, completou-se o volume do balo

com metanol.

Todas essas solues foram analisadas por espectrofotometria

derivada no UV.

4.3.1.3 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme Desvio padro relativo - Preciso

43


Foi utilizada a mdia aritmtica das leituras de 3 solues padro de

20 g/mL preparadas como descrito no item 4.3.1.2.

b) Preparao da soluo amostra creme simulada(formulao 6) Foram preparadas 10 solues de amostra creme simulada de

acordo com o descrito no item 4.3.1.2. Todas as solues com concentrao

final de 20,0 g/mL , foram analisadas por espectrofotometria derivada no

UV.

c) Preparao da amostra creme comercial

Foram preparadas 10 solues de amostra creme comercial de

acordo com o descrito no item 4.3.1.2. Todas as solues com concentrao

final de 20,0 g/mL, foram analisadas por espectrofotometria derivada no

UV.

Teste de recuperao - Exatido

a) Preparo da soluo padro

Foram pesados 25,0 mg de cetoconazol e transferidos para balo

volumtrico de 100,0 mL, completando-se o volume com metanol, obtendo-

se uma soluo de concentrao final de 250,0 g/mL.

b) Preparo da soluo amostra creme comercial

Foi pesado 1,25 g da amostra creme comercial, equivalente a 25,0 mg

de cetoconazol e transferiu-se para balo volumtrico de 100,0 mL,

dissolvendo-se com metanol em banho de ultrassom por 15 minutos.

Completou-se o volume com metanol, obtendo-se soluo a 250,0 g/mL.

Filtrou-se essa soluo, rejeitando-se os primeiros 10,0 mL, desse

filtrado foram coletadas alquotas para o teste de recuperao.

44

c) Procedimento

Alquotas de soluo padro e de amostra creme foram transferidas

para balo volumtrico de 25,0 mL, conforme o procedimento

seguinte:

Amostra creme

250,0 g/mL

Padro

250,0 g/mL

Concentrao final

1 1,0 mL ________ 10,0 g/mL

2 ________ 1,0mL 10,0 g/mL

3 1,0 mL 1,0mL 20,0 g/mL

4 1,0 mL 1,5 mL 25,0 g/mL

5 1,0 mL 2,0 mL 30,0 g/mL

Essas solues foram analisadas por espectrofotometria derivada no

UV.

4.3.2 Padronizao do mtodo cromatogrfico

Aps vrios experimentos, foram fixados os seguintes parmetros:

Fase mvel: mistura de trietilamina em metanol 1:500 e soluo de

acetato de amnio em gua 1:200 na proporo de 75:25.

A fase mvel foi filtrada em membrana para filtrao Millipore de

0,5m e desgaseificada antes de ser utilizada.

Vazo: 1,0 mL/min

Deteco no UV: 225 nm

Atenuao: 7 A.U.F.S.

Temperatura ambiente( 25C 1C)

Volume de injeo: 20 L

Coluna: LiChrospher 100RP-18(5mm) Merck

45

Solvente: metanol

As solues foram filtradas em unidades filtrantes HV MILLEX

0,45 m, antes de serem injetadas no cromatgrafo.

4.3.2.1 Construo da curva de calibrao


Foram pesados exatamente 10,0 mg de cetoconazol e transferidos

para balo volumtrico de 100,0 mL, dissolvendo-se e completando-se o

volume com metanol, obtendo-se soluo de concentrao final de 100,0

g/mL de cetoconazol .

b) Preparo da soluo de padro interno

Foram pesados exatamente 25,0 mg de terconazol e transferidos

para balo volumtrico de 100,0 mL, dissolvendo-se e completando-se o

volume com metanol, obtendo-se soluo de concentrao final de 250,0

g/mL de terconazol .

c) Procedimento

Alquotas de 2,0; 3,0; 4,0; 5,0; 6,0; 7,0 e 8,0 mL da soluo padro

foram transferidos para balo volumtrico de 10,0 mL e em cada balo de

10,0 mL foi acrescentado uma alquota de 2,0 mL da soluo de padro

interno a 250,0 g/mL, completou-se o volume de cada balo com metanol,

obtendo-se solues com concentraes de 20,0; 30,0; 40,0; 50,0; 60,0;

70,0 e 80,0 g/mL de cetoconazol e 50,0g/mL de terconazol. 4.3.2.2 Pesquisa de interferentes a partir de excipientes

Especificidade

46


Foram pesados 10,0 mg de cetoconazol e transferidos para balo

volumtrico de 100,0 mL, completando-se o volume com metanol. Desta

soluo transferiu-se uma alquota de 4,0 mL para balo volumtrico de

10,0mL e uma alquota de 2,0 mL da soluo de padro interno a

250,0g/mL, completou-se o volume com metanol e obteve-se uma

concentrao final de 40,0 g/mL de cetoconazol e 50,0g/mL de

terconazol.

b) Preparao da soluo amostra creme simulada(formulao 6)

Foi pesado 1,0 g da amostra creme simulada, equivalente a 20,0 mg

de cetoconazol e transferido para balo volumtrico de 100,0 mL, adicionou-

se cerca de 80,0 mL de metanol e submeteu-se a soluo ao banho de

ultrassom por 15 minutos e completou-se o volume com metanol. Filtrou-se

esta soluo, rejeitando-se os primeiros 10,0 mL, do filtrado transferiu-se

uma alquota de 2,0 mL para balo volumtrico de 10,0 mL e uma alquota

de 2,0 mL de soluo de padro interno a 250,0 g/ml, completou-se o

volume com fase mvel e obtendo-se uma concentrao final de 40,0 g/mL

de cetoconazol e 50,0 g/mL de terconazol.

c) Preparo da soluo amostra placebo

Foi pesado 1,0 g de creme base sem cetoconazol e procedeu-se

conforme o preparo da soluo amostra creme, sem adicionar padro

interno, descrito anteriormente.

47

4.3.2.3 Determinao do limite de deteco e do limite de quantificao

Procedimento:

Foram preparadas solues contendo 20,0; 30,0; 40,0; 50,0 e 60,0

g/mL de cetoconazol e em cada soluo foi acrescentado 50 g/mL de

padro interno terconazol. Foram efetuadas trs determinaes para cada

concentrao e calculado o desvio padro entre os resultados obtidos a

partir das razes entre as reas de padro e padro interno.

O clculo para o limite de deteco(LD) e limite de quantificao(LQ)

foi realizado pelas frmulas94:

LD = Desvio Padro mdio X 3,3

Inclinao da curva de calibrao

LQ = Desvio Padro mdio X 10

Inclinao da curva de calibrao

4.3.2.4 Aplicao do mtodo padronizado s amostras creme Desvio padro relativo - Preciso


Foram preparadas trs solues padro conforme item 4.3.2.2a.e

efetuadas trs leituras de cada soluo padro. Utilizou-se a mdia

aritmtica dessas leituras como valor do padro.

48

b) Preparao da soluo de amostra creme simulada(formulao 6)

A soluo de amostra creme simulada foi preparada conforme

descrito no item 4.3.2.2b. Foram realizadas 10 determinaes para cada

amostra e os resultados foram analisados estatisticamente.

c) Preparao da soluo de amostra creme comercial

A soluo de amostra creme comercial foi preparada conforme

descrito no item 4.3.2.2b. Foram realizadas 10 determinaes para cada

amostra e os resultados foram analisados estatisticamente.

Teste de recuperao - Exatido



balo volumtrico de 100,0 mL, dissolvendo-se e completando-se o volume

com metanol, obtendo-se uma soluo de 250,0 g/mL.

b) Preparao da soluo de amostra creme comercial

Foi pesado 1,0 g da amostra creme, equivalente a 20,0 mg de

cetoconazol e transferiu-se para balo volumtrico de 100,0 mL, adicionou-

se cerca de 80,0 mL de metanol e submeteu-se essa soluo ao banho de

ultrassom por 15 minutos, depois completou-se o volume com metanol.

Filtrou-se esta soluo contendo 200,0 g/mL de cetoconazol. Esse filtrado

foi utilizado para preparar as solues diludas para realizar o teste de

recuperao.

49

c) Preparao da soluo de padro interno

Foram pesados 25,0 mg de terconazol padro e transferidos para

balo volumtrico de 100,0mL, dissolvendo-se e completando-se o volume

com metanol, obtendo-se uma soluo de 250,0g/mL.

Procedimento:

Alquotas de soluo padro e de amostra creme foram transferidas

para balo volumtrico de 25,0 mL, conforme procedimento que segue:

Amostra creme

250,0 g/mL

(filtrado)

Padro

250,0 g/mL

Concentrao

final de cetoconazol

1 4,0 mL ________ 40,0 g/mL

2 ________ 4,0mL 40,0 g/mL

3 4,0 mL 1,0 mL 50,0 g/mL

4 4,0 mL 2,0 mL 60,0 g/mL

5 4,0 mL 3,0 mL 70,0 g/mL

Em todos os bales volumtricos foram transferidas alquotas de 5,0

mL da soluo de padro interno a 250,0 g/mL, sendo a concentrao final

de terconazol(padro interno) em cada balo 50,0 g/mL

4.4 Estabilidade fsica do cetoconazol em creme

a) Condies de armazenamento das amostras

50

Aps o preparo de um lote de 3 kg da Formulao 6(amostra simulada), este foi dividido em amostras acondicionadas em frascos de vidro

tipo II e frascos plsticos de poliestireno com capacidade de 30 g. Foram

feitas coletas dessas amostras aps 48 horas do preparo e analisadas

quanto s caractersticas fsicas.

Em seguida, as amostras foram armazenadas em trs condies

diferentes: 10C, 40C e 75%U.R.(umidade relativa)* e 50C e 90%U.R.**.

*Para atingir a umidade de 75%U.R. e temperatura de 40C, as

amostras foram armazenadas em dessecador contendo soluo saturada de

acetato de sdio e armazenado em estufa a 40C. A umidade de 75% foi

medida atravs de termo-higrmetro.

** A umidade de 90%U.R. e temperatura de 50C foram atingidas

adicionando-se gua destilada em dessecador e armazenando- o em estufa

a 50C. A umidade de 90%U.R., tambm foi medida atravs de termo-

higrmetro.

b) Anlise das amostras de cetoconazol creme

As amostras a 50C e 90%U.R. foram coletadas e analisadas nos

tempos 7, 14, 28, 42 dias, as amostras a 40C e 75%U.R. nos tempos 7 e 28

dias e as amostras a 10C foram analisadas aps 1 ms de armazenamento.

As caractersticas fsicas foram analisadas atravs de sua aparncia,

pH e comportamento reolgico.

4.4.1 Caractersticas organolpticas

As amostras armazenadas temperaturas diferentes foram

observadas em relao a cor e odor em tempos pr determinados.

4.4.2 Anlise de pH

51

O pH das amostras foi analisado nos tempos e temperaturas

determinados. Foram preparadas solues a 10% da amostra creme76. O pH

inicial dessa formulao foi de 5,6.

4.4.3 Comportamento reolgico

As anlises foram realizadas temperatura ambiente utilizando-se

13,0 g da amostra, em viscosmetro rotacional Brookfield e spindle SC4-29.

As amostras foram submetidas aos seguintes gradientes de velocidade:

0,125; 0,25; 0,625; 1,25; 2,50; 5,00; 12,50 e 25,00 1/s. O tempo

estabelecido para cada leitura do torque foi de 2 minutos.

52

5 RESULTADOS

5.1 Identificao do cetoconazol matria-prima 5.1.1 Ponto de fuso

Cetoconazol Faixa de fuso C

Matria-prima 148 154

Padro USP 148 152

53

5.1.2 Cromatografia em camada delgada

Figura 5 - Cromatografia em camada delgada do cetoconazol 1- Padro cetoconazol

2- Matria-prima (Laboratrio EMS) 3- Matria-prima (Laboratrio Ach) 4- Matria-prima (Americhem)

O sistema eluente composto pela mistura de n-hexano; acetato de

etila; metanol; gua; cido actico glacial(27:40:30:2:1) permitiu a

identificao das manchas do cetoconazol padro e das amostras de

matria-prima cetoconazol. Os Rfs podem ser observados na Tabela 1.

54

Tabela 1 - Valores de Rf do cetoconazol padro e das amostras de matria-prima

Amostra Rf

Padro cetoconazol 0,67

Matria-prima EMS 0,66

Matria-prima Ach 0,67

Matria-prima Americhem 0,66

5.1.3 Espectroscopia na regio do infravermelho

Figura 6- Espectro infravermelho do cetoconazol matria - prima

55

5.1.4 Estudos termoanalticos

Figura 7 - Curva DSC do cetoconazol. Condies: cadinho de alumnio com massa de amostra em torno de 1,9mg,sob atmosfera dinmica de N2(50 mL), da temperatura ambiente a 600C, com razo de aquecimento de 10C/min.

Figura 8 Curvas TG/DTG do cetoconazol Condies: cadinho de platina com massa de amostra entre 4,5-5 mg, sob atmosfera dinmica de N2(50 mL), da temperatura ambiente a 900C, com razo de aquecimento de 10C/min.

56

5.1.5 Ensaios preliminares com as diferentes formulaes

do creme com cetoconazol a 2%

Todas as amostras de creme com cetoconazol a 2%, inicialmente possuam colorao branca. Para cada amostra com cetoconazol submetida

diferentes temperaturas, preparou-se uma amostra de creme sem

cetoconazol e submeteu-se s mesmas condies. Todas as amostras de

creme base sem cetoconazol, submetidas diferentes temperaturas, no

sofreram alterao de cor.

As tabelas abaixo, indicam quais amostras sofreram alterao de cor,

pela influncia do tempo e temperatura:

Tabela 2 - Formulaes contendo cetoconazol a 2% submetidas a temperatura de 10C Tempo(dias) 7 15 30 45 60 Amostras Formulao 1 S A S A S A S A S A Formulao 2 S A S A S A S A S A Formulao 3 S A S A S A S A S A Formulao 4

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Estabilidade física e metodologia analítica para formulações