UNIVERSIDADE FEDERAL DO PARANAacute

ESTUDO DA OCORREcircNCIA DE INFECCcedilOtildeES TRANSMISSIacuteVEIS POR

VIA HEMATOGEcircNICA E RESPECTIVAS METODOLOGIAS DE

TRIAGEM E DIAGNOacuteSTICO EM HEMOBANCO DE CURITIBA

MONBIOWODZYNSKI Kely

CURITIBA

2007

KELY WODZYNSKI

ESTUDO DA OCORREcircNCIA DE INFECCcedilOtildeES TRANSMISSIacuteVEIS POR

VIA HEMATOGEcircNICA E RESPECTIVAS METODOLOGIAS DE

TRIAGEM E DIAGNOacuteSTICO EM HEMOBANCO DE CURITIBAMonografia apresentada agrave disciplina BP024

- Estaacutegio em Patologia Baacutesica do curso de

Ciecircncias Bioloacutegicas da UFPR sob a

orientaccedilatildeo da Prof Ida Cristina Gubert

UFPR

2007

SUMAacuteRIO

1 Introduccedilatildeo 01

2 Objetivo04

3 Revisatildeo da Literatura 05

31 HTLV 05

32 Siacutefilis06

33 Doenccedila de Chagas 08

4 Materiais e Meacutetodos11

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuterio Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas 12

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I

e HTLV - II) em soro ou plasma humano13

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para detecccedilatildeo de

Siacutefilis14

j 5 Resultados17

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas19

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll21

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis23

6 Discussatildeo25

7 Conclusatildeo 29

8 Referecircncias Bibliograacuteficas 30

LISTA DE TABELAS

1 Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano17

2 Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano 18

3 Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizadas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas 19

4 Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicada 20

5 Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas 21

6 Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada22

7 Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para HTLV lll 23

8 Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis24

RESUMO

Com o desenvolvimento da aacuterea de Medicina e Sauacutede hoje temos

conhecimentos para realizar praacuteticas ciruacutergicas antes inimaginaacuteveis Com isso a

aacuterea de Hematologia teve que se aprimorar pra acompanhar tais avanccedilos incluindo

a melhoria na triagem e seleccedilatildeo de doaccedilotildees e de bolsas de sangue Neste trabalho

foi realizado o levantamento do nuacutemero de casos reagentes para trecircs patologias de

importacircncia que possuem infecccedilotildees transmissiacuteveis por via hematogecircnica doenccedila

de Chagas devido ao endemismo do inseto transmissor HTVL lll por ser uma

patologia ainda natildeo muito bem divulgada e que causa danos irreversiacuteveis nos

portadores e Siacutefilis por ser uma moleacutestia que aflige a populaccedilatildeo mundial agrave

deacutecadas Foram analisadas 45578 amostras de doaccedilotildees num periacuteodo de 13 meses

que se estendeu de agosto de 2005 a agosto de 2006 no Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco da cidade de Curitiba-PR Os dados

encontrados mostram uma ocorrecircncia mensal de casos reagentes na triagem de

013 para a doenccedila de Chagas 010 para HTLV lll e 1 para Siacutefilis Com base

nestes dados conclui-se que ainda satildeo necessaacuterias campanhas de conscientizaccedilatildeo

ao voluntariado para doaccedilatildeo de sangue e principalmente agrave doaccedilatildeo com

responsabilidade

AGRADECIMENTOS

Ao Instituto Paranaense de Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco e

seus coordenadores por permitirem que eu utilizasse os dados para realizaccedilatildeo

desta pesquisa

Ao Setor de Patologia Baacutesica da Universidade Federal do Paranaacute e seus

docentes por me orientarem e me guiarem durante o trabalho

Aos meus pais por me mostrarem o caminho

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

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CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

KELY WODZYNSKI

ESTUDO DA OCORREcircNCIA DE INFECCcedilOtildeES TRANSMISSIacuteVEIS POR

VIA HEMATOGEcircNICA E RESPECTIVAS METODOLOGIAS DE

TRIAGEM E DIAGNOacuteSTICO EM HEMOBANCO DE CURITIBAMonografia apresentada agrave disciplina BP024

- Estaacutegio em Patologia Baacutesica do curso de

Ciecircncias Bioloacutegicas da UFPR sob a

orientaccedilatildeo da Prof Ida Cristina Gubert

UFPR

2007

SUMAacuteRIO

1 Introduccedilatildeo 01

2 Objetivo04

3 Revisatildeo da Literatura 05

31 HTLV 05

32 Siacutefilis06

33 Doenccedila de Chagas 08

4 Materiais e Meacutetodos11

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuterio Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas 12

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I

e HTLV - II) em soro ou plasma humano13

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para detecccedilatildeo de

Siacutefilis14

j 5 Resultados17

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas19

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll21

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis23

6 Discussatildeo25

7 Conclusatildeo 29

8 Referecircncias Bibliograacuteficas 30

LISTA DE TABELAS

1 Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano17

2 Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano 18

3 Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizadas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas 19

4 Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicada 20

5 Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas 21

6 Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada22

7 Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para HTLV lll 23

8 Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis24

RESUMO

Com o desenvolvimento da aacuterea de Medicina e Sauacutede hoje temos

conhecimentos para realizar praacuteticas ciruacutergicas antes inimaginaacuteveis Com isso a

aacuterea de Hematologia teve que se aprimorar pra acompanhar tais avanccedilos incluindo

a melhoria na triagem e seleccedilatildeo de doaccedilotildees e de bolsas de sangue Neste trabalho

foi realizado o levantamento do nuacutemero de casos reagentes para trecircs patologias de

importacircncia que possuem infecccedilotildees transmissiacuteveis por via hematogecircnica doenccedila

de Chagas devido ao endemismo do inseto transmissor HTVL lll por ser uma

patologia ainda natildeo muito bem divulgada e que causa danos irreversiacuteveis nos

portadores e Siacutefilis por ser uma moleacutestia que aflige a populaccedilatildeo mundial agrave

deacutecadas Foram analisadas 45578 amostras de doaccedilotildees num periacuteodo de 13 meses

que se estendeu de agosto de 2005 a agosto de 2006 no Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco da cidade de Curitiba-PR Os dados

encontrados mostram uma ocorrecircncia mensal de casos reagentes na triagem de

013 para a doenccedila de Chagas 010 para HTLV lll e 1 para Siacutefilis Com base

nestes dados conclui-se que ainda satildeo necessaacuterias campanhas de conscientizaccedilatildeo

ao voluntariado para doaccedilatildeo de sangue e principalmente agrave doaccedilatildeo com

responsabilidade

AGRADECIMENTOS

Ao Instituto Paranaense de Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco e

seus coordenadores por permitirem que eu utilizasse os dados para realizaccedilatildeo

desta pesquisa

Ao Setor de Patologia Baacutesica da Universidade Federal do Paranaacute e seus

docentes por me orientarem e me guiarem durante o trabalho

Aos meus pais por me mostrarem o caminho

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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SUMAacuteRIO

1 Introduccedilatildeo 01

2 Objetivo04

3 Revisatildeo da Literatura 05

31 HTLV 05

32 Siacutefilis06

33 Doenccedila de Chagas 08

4 Materiais e Meacutetodos11

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuterio Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas 12

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I

e HTLV - II) em soro ou plasma humano13

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para detecccedilatildeo de

Siacutefilis14

j 5 Resultados17

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas19

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll21

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis23

6 Discussatildeo25

7 Conclusatildeo 29

8 Referecircncias Bibliograacuteficas 30

LISTA DE TABELAS

1 Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano17

2 Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano 18

3 Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizadas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas 19

4 Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicada 20

5 Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas 21

6 Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada22

7 Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para HTLV lll 23

8 Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis24

RESUMO

Com o desenvolvimento da aacuterea de Medicina e Sauacutede hoje temos

conhecimentos para realizar praacuteticas ciruacutergicas antes inimaginaacuteveis Com isso a

aacuterea de Hematologia teve que se aprimorar pra acompanhar tais avanccedilos incluindo

a melhoria na triagem e seleccedilatildeo de doaccedilotildees e de bolsas de sangue Neste trabalho

foi realizado o levantamento do nuacutemero de casos reagentes para trecircs patologias de

importacircncia que possuem infecccedilotildees transmissiacuteveis por via hematogecircnica doenccedila

de Chagas devido ao endemismo do inseto transmissor HTVL lll por ser uma

patologia ainda natildeo muito bem divulgada e que causa danos irreversiacuteveis nos

portadores e Siacutefilis por ser uma moleacutestia que aflige a populaccedilatildeo mundial agrave

deacutecadas Foram analisadas 45578 amostras de doaccedilotildees num periacuteodo de 13 meses

que se estendeu de agosto de 2005 a agosto de 2006 no Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco da cidade de Curitiba-PR Os dados

encontrados mostram uma ocorrecircncia mensal de casos reagentes na triagem de

013 para a doenccedila de Chagas 010 para HTLV lll e 1 para Siacutefilis Com base

nestes dados conclui-se que ainda satildeo necessaacuterias campanhas de conscientizaccedilatildeo

ao voluntariado para doaccedilatildeo de sangue e principalmente agrave doaccedilatildeo com

responsabilidade

AGRADECIMENTOS

Ao Instituto Paranaense de Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco e

seus coordenadores por permitirem que eu utilizasse os dados para realizaccedilatildeo

desta pesquisa

Ao Setor de Patologia Baacutesica da Universidade Federal do Paranaacute e seus

docentes por me orientarem e me guiarem durante o trabalho

Aos meus pais por me mostrarem o caminho

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

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33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

LISTA DE TABELAS

1 Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano17

2 Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano 18

3 Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizadas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas 19

4 Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicada 20

5 Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas 21

6 Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada22

7 Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados novas amostras

coletadas para HTLV lll 23

8 Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis24

RESUMO

Com o desenvolvimento da aacuterea de Medicina e Sauacutede hoje temos

conhecimentos para realizar praacuteticas ciruacutergicas antes inimaginaacuteveis Com isso a

aacuterea de Hematologia teve que se aprimorar pra acompanhar tais avanccedilos incluindo

a melhoria na triagem e seleccedilatildeo de doaccedilotildees e de bolsas de sangue Neste trabalho

foi realizado o levantamento do nuacutemero de casos reagentes para trecircs patologias de

importacircncia que possuem infecccedilotildees transmissiacuteveis por via hematogecircnica doenccedila

de Chagas devido ao endemismo do inseto transmissor HTVL lll por ser uma

patologia ainda natildeo muito bem divulgada e que causa danos irreversiacuteveis nos

portadores e Siacutefilis por ser uma moleacutestia que aflige a populaccedilatildeo mundial agrave

deacutecadas Foram analisadas 45578 amostras de doaccedilotildees num periacuteodo de 13 meses

que se estendeu de agosto de 2005 a agosto de 2006 no Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco da cidade de Curitiba-PR Os dados

encontrados mostram uma ocorrecircncia mensal de casos reagentes na triagem de

013 para a doenccedila de Chagas 010 para HTLV lll e 1 para Siacutefilis Com base

nestes dados conclui-se que ainda satildeo necessaacuterias campanhas de conscientizaccedilatildeo

ao voluntariado para doaccedilatildeo de sangue e principalmente agrave doaccedilatildeo com

responsabilidade

AGRADECIMENTOS

Ao Instituto Paranaense de Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco e

seus coordenadores por permitirem que eu utilizasse os dados para realizaccedilatildeo

desta pesquisa

Ao Setor de Patologia Baacutesica da Universidade Federal do Paranaacute e seus

docentes por me orientarem e me guiarem durante o trabalho

Aos meus pais por me mostrarem o caminho

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

RESUMO

Com o desenvolvimento da aacuterea de Medicina e Sauacutede hoje temos

conhecimentos para realizar praacuteticas ciruacutergicas antes inimaginaacuteveis Com isso a

aacuterea de Hematologia teve que se aprimorar pra acompanhar tais avanccedilos incluindo

a melhoria na triagem e seleccedilatildeo de doaccedilotildees e de bolsas de sangue Neste trabalho

foi realizado o levantamento do nuacutemero de casos reagentes para trecircs patologias de

importacircncia que possuem infecccedilotildees transmissiacuteveis por via hematogecircnica doenccedila

de Chagas devido ao endemismo do inseto transmissor HTVL lll por ser uma

patologia ainda natildeo muito bem divulgada e que causa danos irreversiacuteveis nos

portadores e Siacutefilis por ser uma moleacutestia que aflige a populaccedilatildeo mundial agrave

deacutecadas Foram analisadas 45578 amostras de doaccedilotildees num periacuteodo de 13 meses

que se estendeu de agosto de 2005 a agosto de 2006 no Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco da cidade de Curitiba-PR Os dados

encontrados mostram uma ocorrecircncia mensal de casos reagentes na triagem de

013 para a doenccedila de Chagas 010 para HTLV lll e 1 para Siacutefilis Com base

nestes dados conclui-se que ainda satildeo necessaacuterias campanhas de conscientizaccedilatildeo

ao voluntariado para doaccedilatildeo de sangue e principalmente agrave doaccedilatildeo com

responsabilidade

AGRADECIMENTOS

Ao Instituto Paranaense de Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco e

seus coordenadores por permitirem que eu utilizasse os dados para realizaccedilatildeo

desta pesquisa

Ao Setor de Patologia Baacutesica da Universidade Federal do Paranaacute e seus

docentes por me orientarem e me guiarem durante o trabalho

Aos meus pais por me mostrarem o caminho

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

AGRADECIMENTOS

Ao Instituto Paranaense de Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco e

seus coordenadores por permitirem que eu utilizasse os dados para realizaccedilatildeo

desta pesquisa

Ao Setor de Patologia Baacutesica da Universidade Federal do Paranaacute e seus

docentes por me orientarem e me guiarem durante o trabalho

Aos meus pais por me mostrarem o caminho

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

DEDICATOacuteRIA

Aos meus amigos Luis Pukanski Tomaz Takeuchi Flaacutevia Fernandes

Fernanda Zanatta Yart Schultz Valeacuteria Gotildess e Ricardo Wodzynski e todos os

outros que natildeo tiveram seu nome aqui por sempre estarem ao meu lado nos bons

e maus momentos E principalmente a Amanda Wodzynski e Juliana Wigozz as

minhas amigas mais especiais

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

1

1 INTRODUCcedilAtildeO

Entre as atividades meacutedicas que permitem que hoje exista maior expectativa

de vida do que existia haacute alguns anos com conforto e bem estar estaacute a aacuterea de

Hematologia e Hemoterapia que serve de apoio para realizaccedilatildeo de cirurgias e

transfusotildees de sangue tendo como base a Imunologia Muitos dos conhecimentos

adquiridos que permitem tais avanccedilos foram obtidos atraveacutes das bases teoacutericas

desta e de outras aacutereas e infelizmente muitos outros somente atraveacutes de

tentativas e erros Com o objetivo de minimizar eventuais possiacuteveis reaccedilotildees

adversas das diferentes praacuteticas meacutedicas atualmente estas obedecem a regras

paracircmetros e procedimentos obrigatoacuterios

A Medicina sendo uma especialidade das Ciecircncias da Sauacutede natildeo eacute

completamente auto-suficiente pois para manter o corpo e a mente saudaacuteveis ou

seja para que haja a possibilidade de cura ou de melhora do quadro cliacutenico faz-se

necessaacuterio o diagnoacutestico das causas das moleacutestias As Ciecircncias Bioloacutegicas e suas

especializaccedilotildees em vaacuterios momentos constituem a base de apoio para o

desenvolvimento da Medicina e isto eacute claramente visiacutevel quando se considera o

sangue

A Imunologia eacute a Ciecircncia que estuda dentre outros os processos de

respostas celulares a patoacutegenos e corpos estranhos ao organismo soroterapia

vacinas reaccedilotildees de sensibilidade e respectivas regulaccedilotildees

Foi na aacuterea de Imunologia que se desenvolveu o mais utilizado meacutetodo

laboratorial de pesquisa de antiacutegenos e anticorpos o chamado ELISA ELISA

procede do inglecircs Enzyme Linked Immunosorbent Assay (JANEWAY 1997) que

traduzido para o portuguecircs significa Anaacutelise de Imunoabsorccedilatildeo por Ligaccedilatildeo

Enzimaacutetica (ABBAS1995) ou seja um conjunto especiacutefico de ligaccedilotildees natildeo

covalentes entre antiacutegenos e anticorpos em uma placa com o auxiacutelio de enzimas

para a verificaccedilatildeo colorimeacutetrica das reaccedilotildees Este meacutetodo diariamente aplicado em

muitos laboratoacuterios eacute de execuccedilatildeo relativamente faacutecil Atualmente com o

desenvolvimento da Biotecnologia alguns laboratoacuterios fornecem todo o material

necessaacuterio em kits comercialmente adquiridos restando ao laboratoacuterio que deseja

utilizaacute-lo alguns outros materiais e recursos humanos com conhecimento dos

fundamentos baacutesicos de Imunologia para realizar os testes e verificar e corrigir

eventualidades que possam ocorrer durante o procedimento

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

2

Embora pareccedila faacutecil estes procedimentos requerem uma seacuterie de cuidados

como definem portarias e legislaccedilotildees Como alerta RAMOS et al (2001) em seu

trabalho com hormocircnios tireoideanos ldquoem alguns casos ocorre a ligaccedilatildeo natildeo

especiacutefica com reagentes dos ensaios que vatildeo desta forma interferir com as

medidasrdquo Outras normatizaccedilotildees relacionadas agrave doaccedilotildees de sangue devem ser

seguidas como diz o Boletim da Sociedade Brasileira de Hematologia e

Hemoterapia atualmente eacute proibida a remuneraccedilatildeo a doadores de sangue ldquocomo

medida preventiva de interesse nacionalrdquo (RUIZ 2002) Sendo assim existem

normas estabelecidas normas para seleccedilatildeo coleta diagnoacutestico e tratamento dos

doadores de sangue e das bolsas de sangue coletado

Neste trabalho o foco principal estaacute na aacuterea da Sorologia ou seja na

triagem laboratorial de algumas doenccedilas transmitidas por via hematogecircnica que

satildeo obrigatoriamente testadas em bancos de sangue para que se possa utilizaacute-lo

com qualidade em cirurgias transfusotildees de sangue transplantes hemoterapias em

geral e procedimentos diversos

Segundo a ANVISA todas as amostras das doaccedilotildees devem ser testadas

para Hepatite B e C HIV-1 e HIV-2 (viacuterus da Imunodeficiecircncia Humana) doenccedila de

Chagas Siacutefilis HTLV-1 e HTLV-2 (protoviacuterus T-linfotroacutepico humano) sendo

opcionais os testes de Malaacuteria e Citomegaloviacuterus Ou ainda como melhor especifica

SAEZ-ALQUEacuteZAR (2007) para estabelecer um perfil soroloacutegico devem ser

realizados dois testes de princiacutepios diferentes para HIV-1 e -2 um teste anti-HTLV

lll um teste para o antiacutegeno Austraacutelia da hepatite B (AgHBs) um teste para o

anticorpo anti-hepatite B (Anti-HBc) um teste anti-HCV (pesquisa de anticorpos

contra o viacuterus da hepatite C) um teste para Siacutefilis e um teste para Doenccedila de

Chagas Todavia estes testes satildeo somente para triagem e quando ocorrer casos

positivos outros exames complementares devem ser realizados atraveacutes de um ou

mais testes especiacuteficos com metodologias diferenciadas para o diagnoacutestico

confirmatoacuterio destas patologias

Neste trabalho os estudos ficaram concentrados em apenas trecircs Doenccedila de

Chagas Siacutefilis e o HTLV

O principal motivo para a seleccedilatildeo de apenas estas trecircs patologias eacute a

caracteriacutestica tardia das manifestaccedilotildees cliacutenicas que na maior parte dos casos soacute

se revelam depois de semanas meses ou ateacute mesmo 15 ou 20 anos apoacutes o

contaacutegio

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

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modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

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CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

3

Para a Doenccedila de Chagas tambeacutem eacute importante ressaltar a aacuterea de

ocorrecircncia do inseto transmissor que eacute restrito agraves Ameacutericas (CRAIG 1974) e a

excelente adaptaccedilatildeo do inseto agrave regiatildeo peri-urbana principalmente nas regiotildees

rurais e de baixa renda (CIMERMAN 1999)

No caso da Siacutefilis por ter sido uma doenccedila controlada por muitos anos e hoje

apresentar um nuacutemero elevado de casos como resultado da epidemia HIVAIDS

Jaacute o viacuterus HTLV por ser causador de uma patologia ainda natildeo muito bem

divulgada e que causa danos irreversiacuteveis aos portadores e embora a literatura

ainda seja incipiente o mesmo natildeo se pode dizer acerca do nuacutemero de casos

mundiais

Para a descriccedilatildeo dos procedimentos e metodologias aplicados em triagens e

diagnoacutestico de algumas patologias faz-se necessaacuterio o conhecimento de estruturas

e de mecanismos do sistema imunoloacutegico para a melhor compreensatildeo do princiacutepio

dos ensaios imunoloacutegicos

A importacircncia para a triagem soroloacutegica em bancos de sangue eacute a siacutentese de

anticorpos especiacuteficos pelos doadores contra corpos estranhos ao organismo eou

a presenccedila de antiacutegenos na corrente sanguiacutenea uma vez os meacutetodos atualmente

empregados para anaacutelise das amostras coletadas tecircm como base a pesquisa da

presenccedila de antiacutegenos ou anticorpos nas amostras a serem analisadas

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

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oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

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CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

4

2 OBJETIVOS

Este trabalho teve como objetivo geral descrever os ensaios laboratoriais

utilizados atualmente para triagem e diagnoacutestico de patologias como Siacutefilis Doenccedila

de Chagas e HTLV em doadores voluntaacuterios de sangue do Instituto Paranaense de

Hematologia e Hemoterapia - Hemobanco - da cidade de Curitiba (PR) bem como

descrever alguns aspectos dos agentes causadores e dos portadores e realizar o

levantamento da frequumlecircncia de ocorrecircncia de sorologias positivas para estas

doenccedilas no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

Objetivos especiacuteficos

bull descrever aspectos morfofisioloacutegicos do agente causador

bull descrever aspectos sintomaacuteticos do portador do patoacutegeno

bull descrever as bases teoacutericas metodologias fundamentos e procedimentos

laboratoriais de testes obrigatoacuterios para um banco de sangue

bull realizar o levantamento da ocorrecircncia de casos reagentes para HTLV lll

Doenccedila de Chagas e Siacutefilis no periacuteodo de agosto de 2005 a agosto de 2006

especificamente no Hemobanco de Curitiba (PR)

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

5

3 REVISAtildeO DA LITERATURA

31 HTLV

O HTLV eacute um retroviacuterus da subfamiacutelia Oncoviridae denominado protoviacuterus T-

linfotroacutepico humano 2 As manifestaccedilotildees clinicas de acordo com os criteacuterios da

Organizaccedilatildeo Mundial de Sauacutede caracterizam-se por paraparesia espaacutestica com

sinais piramidais de evoluccedilatildeo lenta e progressiva graus variaacuteveis de distuacuterbios

esfincterianos e sensitivos e sorologia positiva para o viacuterus HTLV-I (CORAL 1998)

Segundo a pesquisa Desinformaccedilatildeo e medo ainda dominam pacientes de HTLVrdquo

publicada no site do Ministeacuterio da Sauacutede grande parte das pessoas infectadas com

o HTLV natildeo desenvolve doenccedila alguma poreacutem cerca de 3 dos infectados

apresentam alguns sintomas

O viacuterus da leucemia de ceacutelulas T infecta a mesma ceacutelula que o viacuterus da Aids

(HIV) e seu desenvolvimento eacute gradual o que faz com que a doenccedila soacute se

manifeste apoacutes vaacuterios anos Por isso os pacientes infectados enquanto satildeo jovens

tecircm maior probabilidade de desenvolver a doenccedila no futuro Outros sintomas

descritos por portadores do viacuterus HTLV I satildeo hipossensibilidade vibratoacuteria nos

membros inferiores incontinecircncia urinaacuteria dor lombar baixa com irradiaccedilatildeo para as

pernas sinais de atrofia difusa dos segmentos medulares dorsais e cone medular

sinais de atrofia na regiatildeo da medula toracolombar visualizados por ressonacircncia

magneacutetica natildeo se evidenciando anormalidades em outras estruturas O viacuterus do

HTLV tambeacutem estaacute relacionado a alveolites siacutendrome de CREST1 siacutendromes

vasculiacuteticas siacutendrome de Sjotildegren2 e outras manifestaccedilotildees cliacutenicas tais como

leucemia de ceacutelulas T humanas dermaiites infecciosas poliartrite e uveiacutetes

(GALDINO 2003)

Natildeo se pode esquecer que durante a fase inicial normalmente o portador

natildeo apresenta sinais cliacutenicos de infecccedilatildeo Em alguns casos os sintomas

1 A Siacutendrome de CREST (calcinose fenocircmeno de Raynaud alteraccedilatildeo da motilidade esofaacutegica esclerodactilia telangiectasias) eacute uma variante mas nem sempre uma forma benigna da esclerodermia A hipertensatildeo pulmonar eacute uma das complicaccedilotildees possiacuteveis (CARNEIRO 2004)2 A siacutendrome de Sjotildegren (SS) eacute doenccedila sistecircmica inflamatoacuteria crocircnica de provaacutevel etiologia auto- imune com distribuiccedilatildeo mundial Seu quadro cliacutenico eacute responsaacutevel por consideraacutevel impacto na qualidade de vida de seus portadores (FELBERG 2004)

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

6

aparecem cerca de um a vaacuterios anos apoacutes a infecccedilatildeo segundo relatos de

portadores

O primeiro caso reportado em seres humanos foi isolado no iniacutecio dos anos

1980 (SOARESA 2003) com casos diagnosticados desde 1985 no Brasil e triagem

soroloacutegica obrigatoacuteria em hemobancos desde novembro de 1993 As regiotildees

consideradas endecircmicas satildeo o Caribe a Aacutefrica e o sudoeste do Japatildeo Suspeita-se

que tenha sido trazido ao Brasil por intermeacutedio de imigrantes japoneses Os

primeiros diagnoacutesticos positivos forma notificados em 1986 em Campo Grande no

Estado de Mato Grosso do Sul

Os meios de transmissatildeo compreendem compartilhamento de agulhas contaminadas transfusotildees de sangue exposiccedilatildeo ao sangue contaminado

realizaccedilatildeo de tatuagens com agulhas contaminadas via sexual aleitamento

materno

32 Siacutefilis

A Siacutefilis eacute uma doenccedila sexualmente transmissiacutevel causada pelo agente

Treponema pallidum Historicamente a Siacutefilis passou a ser conhecida na Europa no

seacuteculo XV e haacute indicativos de que seria uma doenccedila trazida do ldquoNovo Mundordquo por

marinheiros Segundo o site oficial do Ministeacuterio da Sauacutede uma vez introduzida na

Europa a doenccedila teria se disseminado rapidamente devido a influecircncias religiosas

de controle moral e liberaccedilatildeo sexual No seacuteculo XX ateacute os anos 60 estava

praticamente desaparecida tendo seu ressurgimento coincidindo com a revoluccedilatildeo

sexual nos anos de 1960-1970 Segundo o mesmo site do Ministeacuterio da Sauacutede

brasileiro estudos apontam que atualmente somente entre gestantes cerca de

48000 estejam contaminadas problema este que quando comparado agrave ocorrecircncia

de casos de transmissatildeo vertical de HIV eacute alarmante pois o viacuterus do HIV tem uma

chance de transmissatildeo durante a gestaccedilatildeo de 25 enquanto que a probabilidade

de transmissatildeo da espiroqueta causadora da siacutefilis eacute de 70 a 100 na ausecircncia de

tratamento Neste mesmo estudo divulgado as estimativas apontam para 12000

casos novos todos os anos somente no Brasil Segundo a revista NewsLab (2007)

as estimativas apontam para cerca de 12 milhotildees de pessoas infectadas em todo

mundo sendo que 3 milhotildees destas estariam na Ameacuterica Latina

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

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legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

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CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

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Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

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CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

7

Os sintomas da siacutefilis manifestam-se em trecircs estaacutegios primaacuteria secundaacuteria e

terciaacuteria Os sintomas da siacutefilis satildeo descritos no adulto a curto e longo prazo

A curto prazo cerca de 2 a 3 semanas apoacutes a infecccedilatildeo os dois

primeiros estaacutegios apresentam as caracteriacutesticas mais marcantes como feridas nos

genitais iacutenguas nas virilhas e posteriormente manchas pela pele e alopeacutecia

(PASSOS 1995) Se natildeo tratada a doenccedila continua a progredir no organismo

silenciosamente ateacute o momento em que surgem complicaccedilotildees graves como

cegueira paralisia doenccedila cerebral aneurismas problemas cardiacuteacos podendo

inclusive levar agrave morte e se ocorrer em uma mulher gestante poderaacute causar aborto

ou maacute formaccedilatildeo fetal como deformaccedilatildeo oacutessea cegueira surdez retardo mental e

doenccedilas neuroloacutegicas (VERONESI 1991) Os sinais de siacutefilis para o bebecirc que

nasce portador podem aparecer logo apoacutes o nascimento mas na maioria dos

casos os sinais e sintomas estatildeo presentes jaacute nos primeiros meses de vida

(VERONESI 1991)

O tratamento inicial para siacutefilis no seacuteculo XV consistia de mercuacuterio arsecircnico

inorgacircnico e banhos sulfuacutericos posteriormente nos anos 1940 o tratamento foi

substituiacutedo por penicilina obtendo ateacute hoje oacutetimos resultados A curiosidade eacute que

este antibioacutetico era usado para tratar gripes e resfriados mas muitos sifiliacuteticos que

natildeo suspeitavam ter a doenccedila eram curados (PASSOS 1995) Os meios de

transmissatildeo da Siacutefilis satildeo o contato sexual direto enquadrando-a assim com uma

Doenccedila Sexualmente Transmissiacutevel (DST) de importacircncia pois a sua distribuiccedilatildeo eacute

mundial O meio de contaacutegio via transfusatildeo sanguumliacutenea tende a ser extinto devido

aos cuidados e testes realizados que detectam agente causai (PASSOS 1995) e a

transmissatildeo congecircnita pode ocorrer em qualquer fase da gestaccedilatildeo ou durante o

parto

Hoje em dia o diagnoacutestico da Siacutefilis eacute realizado por dois tipos principais de

testes os treponecircmicos e os natildeo-treponecircmicos Os treponecircmicos satildeo os testes de

Hemaglutinaccedilatildeo ELISA FTA-Abs (Fluorescent Treponemic Antibody Absorption) e

o Western Blot os natildeo treponecircmicos sQo o VDRL (do inglecircs Venerai Disease

Research Laboratory) o USR (do inglecircs Unheated Serum Reagin) o TRUST

(Toluidini Unheated Serum Test) e o PRP (Rapid Plasma Reagin)

8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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8

33 Doenccedila de Chagas

A doenccedila de Chagas recebeu esta denominaccedilatildeo devido aos estudos

realizados por Carlos Justiniano Ribeiro Chagas em 1907 pesquisador brasileiro

que descreveu o protozoaacuterio causador e como homenagem a seu amigo Oswaldo

Cruz denominou este agente de Trypanosoma cruzi Chagas foi o primeiro cientista

a estudar todos os estaacutegios da doenccedila

A importacircncia da triagem soroloacutegica para esta doenccedila em bancos de sangue

no Brasil reside em sua incidecircncia no Brasil Segundo dados da Organizaccedilatildeo

Mundial de Sauacutede (OMS) para novembro de 2007 as estimativas eram de que ateacute

18 milhotildees de pessoas infectadas e cerca de 100 milhotildees constituindo populaccedilatildeo

de risco A aacuterea de ocorrecircncia eacute extensa incialmente restringia-se agrave regiatildeo neo-

tropical poreacutem hoje em dia segundo a OMS distribui-se por 18 paiacuteses americanos

e com o crescimento populacional a expansatildeo dos ambientes urbanos e o tracircnsito

de pessoas pelo mundo acredita-se numa extensatildeo que vai desde o norte do

Meacutexico ateacute a regiatildeo noroeste da Argentina e norte no Chile Ainda segundo a OMS

dentre os indiviacuteduos infectados cerca de 20000 morrem todos os anos

A infecccedilatildeo pelo T Cruzi se daacute atraveacutes de um ciclo bioloacutegico bastante

extenso que inicia com um hospedeiro intermediaacuterio conhecido popularmente por

barbeiro que eacute propriamente o vetor da doenccedila de Chagas um inseto da ordem

Hemiacuteptera Segundo VINHAES (2000) das mais de 42 espeacutecies de triatomiacuteneos ateacute

entatildeo catalogados no Brasil trinta estavam presentes no ambiente domiciliar mas

natildeo mais do que cinco tinham participaccedilatildeo direta na transmissatildeo domiciliar da

doenccedila Triacuteatoma infestans Triatoma brasiliensis Triatoma pseudomaculata

Triatoma soacuterdida e Panstrongylus megistus Segundo BARNES (1990) na ordem

Hemiacuteptera os barbeiros especificamente satildeo hematoacutefagos em todas as suas fases

de vida indiferentemente de macho ou fecircmea Ateacute alguns anos atraacutes o habitat do

barbeiro era o meio ambiente silvestre poreacutem com a colonizaccedilatildeo e crescimento

populacional que destruiacuteram seu habitat natural o barbeiro adaptou-se muito bem

agraves regiotildees domiciliar e peridomiciliar instalando-se nas frestas das casas de

madeira e de ldquopau-a-piquerdquo (comuns nas regiotildees mais pobres e de zona rural) que

lhe proporcionam abrigo durante o dia e alimento de faacutecil acesso durante a noite

Sabe-se que o T cruzi natildeo causa efeitos no inseto vetor (BARNES 1990)

Existem vaacuterias formas evolutivas do T cruzi que em diferentes momentos e

hospedeiros tecircm sua morfologia modificada Nos insetos triatomiacutedeos existe a

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

9

forma epimastigota alongada com uma pequena membrana ondulante lateralmente

disposta encontrada na porccedilatildeo meacutedia do intestino e a tripomastigota metaciacuteclica

de aspecto alongado com flagelo que forma uma extensa membrana ondulante e

torna-se livre na porccedilatildeo anterior Esta eacute e forma caracteriacutestica infectante de T cruzi

que eacute encontrada na porccedilatildeo posterior do intestino e nas fezes do inseto (NEVES

1995) A forma esferomastigota (descrita somente por NEVES 1995) eacute

arredondada representando uma transiccedilatildeo entre a forma amastigota e as formas

flageladas que satildeo encontradas no estocircmago e intestino anterior

A forma tripomastigota metaciacuteclica eacute aquela que entra em contato direto com

a pele da viacutetima picada e consegue dar continuidade ao ciclo no interior do corpo

humano Aleacutem desta forma no homem ainda ocorre a forma amastigota que eacute a

forma encontrada na musculatura cardiacuteaca esocircfago e coacutelon intestinal causando

propriamente a doenccedila de Chagas e a forma tripomastigota sanguiacutenea que eacute a

forma comumente encontrada no sangue e de faacutecil diagnoacutestico

O hospedeiro definitivo neste ciclo eacute o homem e a infecccedilatildeo ocorre quando

alguns minutos apoacutes a picada o inseto barbeiro contaminado defeca sobre a pele

da pessoa e pela abertura escarificada do local da picada a forma infectante

tripomastigota metaciacuteclica adentra o organismo Uma vez no interior do corpo do

hospedeiro os macroacutefagos numa tentativa de proteger o organismo contra agentes

estranhos englobam os protozoaacuterios e estes se transformam em amastigotas e se

multiplicam agraveteacute o rompimento do macroacutefago caindo assim na corrente sanguumliacutenea

agora sob a forma de tripomastigota Assim atingem o tecido penetram na ceacutelula

se transformando novamente em amastigotas e se multiplicam por divisatildeo binaacuteria

formando um aglomerado de formas amastigostas chamado de ldquoninho de Gaspar

Viannardquo (CAMPOS 1994)

O fechamento do ciclo ocorre quando um inseto se contamina durante a

picada com o tripomastigota presente no sangue perifeacuterico do hospedeiro definitivo

no processo de alimentaccedilatildeo e digestatildeo no inseto a forma ingerida se transforma

em epimastigota no intestino meacutedio seguido de divisatildeo binaacuteria Na porccedilatildeo posterior

do intestino os epimastigotas se transformam em tripomastigotas novamente que

satildeo as formas presentes de fato nas fezes do inseto fechando entatildeo o ciclo com a

picada do inseto (NEVES 1995)

A transmissatildeo da doenccedila de Chagas natildeo ocorre somente atraveacutes do inseto

vetor mas pode tambeacutem se dar atraveacutes de transfusotildees sanguumliacuteneas e transplante de

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

10

oacutergatildeos transmissatildeo congecircnita manipulaccedilatildeo de sangue contaminado coleta de

mamiacuteferos silvestres os quais tambeacutem satildeo fonte de alimento para o barbeiro e ateacute

mesmo pela ingestatildeo acidental do inseto como foi divulgado na miacutedia haacute alguns

anos onde o inseto estava presente em caldo de cana e de accedilaiacute

Normalmente quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da mucosa ocular (fato

bastante frequumlente) ocorre uma inflamaccedilatildeo local conhecida como sinal de Romana

caracterizada por grande edema que regride naturalmente apoacutes alguns dias

Quando o protozoaacuterio entra atraveacutes da picada do triatomiacutedeo forma-se uma

pequena paacutepula na pele que natildeo doacutei e dificilmente eacute percebida A patogenia tem

como fundamento a multiplicaccedilatildeo das formas amastigostas no tecido infectado e os

sintomas descritos para a patologia satildeo divididos em fase aguda e fase crocircnica

A fase aguda pode ou natildeo apresentar sintomas e quando isso ocorre estes

compreendem febre de intensidade variaacutevel mal-estar (CIMERMAN 1999)

linfadenopatia anorexia miocardia e hepatoesplenomegalia (VERONESI 1991) A

fase crocircnica aparece depois de muitos anos e pode ser diagnosticada pelo teste de

ELISA e por pequenas alteraccedilotildees ao raio-X A doenccedila acomete principalmente a

musculatura cardiacuteaca mas pode tambeacutem ocorrer no trato digestoacuterio

O diagnoacutestico laboratorial da doenccedila de Chagas eacute realizado atraveacutes do

meacutetodo de esfregaccedilo de sangue pouco invasivo no qual uma gota do sangue do

paciente eacute dispensada entre lacircmina e lamiacutenula para visualizaccedilatildeo ao microscoacutepio

oacuteptico eventualmente satildeo utilizados corantes para melhor visualizaccedilatildeo na pesquisa

das formas tripomastigotas do protozoaacuterio Na ausecircncia das formas circulantes o

paciente eacute diagnosticado como falso negativo Ainda existem outras formas de

diagnosticar a presenccedila do parasita tais como bioacutepsia do tecido infectado cultura

de ceacutelulas sanguumliacuteneas ou de tecido que leva dias ateacute que o desenvolvimento dos

protozoaacuterios possa ser detectado inoculaccedilatildeo em cobaias que tambeacutem eacute um

processo lento xenodiagnoacutestico um meacutetodo bastante antigo que consiste em

deixar que triatomiacuteneos ldquolimposrdquo criados em laboratoacuterio piquem o suspeito da

doenccedila e observar o desenvolvimento dos protozoaacuterios no inseto (NEVES 1995) O

maior problema eacute que o desenvolvimento no inseto leva de 30 a 40 dias

E por fim os diversos testes imunoloacutegicos Guerreiro-Machado (reaccedilatildeo de

fixaccedilatildeo do complemento) reaccedilatildeo de imonufluorescecircncia indireta (IFI) Ensaio

imunoenzimaacutetico (ELISA) hemaglutinaccedilatildeo indireta (HAI) e moleculares como a

Reaccedilatildeo em Cadeia da Polimerase (PCR) entre outros

11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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11

4 MATERIAIS E MEacuteTODOS

Atualmente a legislaccedilatildeo vigente exige dos hemobancos a realizaccedilatildeo de

vaacuterios exames especiacuteficos nas amostras coletadas para doaccedilotildees de acordo com as

definiccedilotildees da ANVISA Poreacutem os testes realizados satildeo apenas de triagem de modo

que mediante resultados positivos exames complementares devem ser realizados

mas para cada patologia existe um ou mais testes especiacuteficos com metodologias

diferenciadas para o diagnoacutestico confirmatoacuterio

Este trabalho teve por objetivos estudar trecircs patologias importantes em hemobanco doenccedila de Chagas Siacutefilis e HTLV

Quando os potenciais doadores se apresentam ao hemobanco satildeo

realizados os exames soroloacutegicos das amostras coletadas e os resultados

diferentes de negativo satildeo analisados com mais cautela As amostras satildeo definidas

como reagentes (positivas ou indeterminadas) ou natildeo-reagentes (negativas) pelo

valor de ponto de corte determinado em um espectofotocircmetro Desta maneira

aquelas amostras que apresentam valores inferiores ao valor de corte satildeo

consideradas como natildeo-reagentes e as que apresentam valores muito proacuteximos

iguais ou superiores ao valor de corte satildeo repetidas em duplicata A partir do

resultado da repeticcedilatildeo eacute dado o status final da doaccedilatildeo que pode ser natildeo-reagente

ou reagente

O procedimento de anaacutelise dos resultados foi realizado com a observaccedilatildeo

direta das planilhas no registro impresso que eacute arquivado Este arquivo foi

consultado e todas as amostras foram analisadas uma a uma Durante o periacuteodo

de abrangecircncia que foi de 13 meses todas as amostras que apresentaram

reatividade para os marcadores da doenccedila de Chagas de HTLV I e II e de Siacutefilis

foram observados e revisados e os resultados das repeticcedilotildees foram rastreados nas

proacuteprias planilhas analisados comparados com o primeiro resultado da triagem e

conferidos pelo sistema informatizado da Instituiccedilatildeo Em alguns casos foram

observadas tambeacutem as novas amostras coletadas

Os nuacutemeros de doaccedilatildeo ou qualquer outro tipo de identificaccedilatildeo de amostra ou

de doador foram excluiacutedos deste trabalho primeiro pelo veto imposto pela ANVISA

na RDC ndeg153 que diz que ldquoo sigilo das informaccedilotildees prestadas pelo doador antes

durante e depois do processo de doaccedilatildeo de sangue deve ser absolutamente

preservadordquo Outro motivo pelo qual as identificaccedilotildees foram excluiacutedas foi para

preservar o anonimato dos doadores e o sigilo de suas informaccedilotildees

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

12

41 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) para auxiacutelio no

diagnoacutestico e triagem de portadores do protozoaacuteriacuteo Trypanosoma cruzi

causador da Doenccedila de Chagas

0 Ensaio Imunoenzimaacutetico para detecccedilatildeo de Anticorpos contra o

Trypanosoma cruzi em soro ou plasma humano foi realizado no Instituto

Paranaense de Hematologia e Hemoterapia (Hemobanco) com o kit Biozima

Chagas produzido por Polychaco SAIC Laboratoacuterio Lemos de Buenos Acircires

Argentina

Este ensaio eacute considerado um meacutetodo indireto heterogecircneo e natildeo

competitivo que pesquisa os anticorpos contra T cruzi em amostras de soro ou

plasma huniano e natildeo o agente causai ou seus produtos

O procedimento realizado segue estritamente uma sequumlecircncia que se inicia

com a obtenccedilatildeo de uma amostra de soro do doador Apoacutes a separaccedilatildeo o soro eacute

adicionado a uma placa de poliestireno previamente sensibilizada com antiacutegenos

purificados de T cruzi Em cada placa podem-se testar 92 amostras utilizando-se

dois controles negativos e um controle positivo e ainda no caso especiacutefico do

Hemobanco de Curitiba (PR) eacute utilizado mais um controle positivosomando um

total de quatro controles O uacuteltimo controle positivo eacute uma amostra devidamente

diagnosticada como positiva que eacute adicionada no uacuteltimo poccedilo disponiacutevel para fins

de controle interno Os controles positivos do kit satildeo uma amostra fornecida pelo

fabricante consistindo de uma diluiccedilatildeo do soro reagente de baixo tiacutetulo com

estabilizadores proteacuteicos pronto para uso Estes controles satildeo adicionados agrave placa

apoacutes terem sido adicionadas todas as amostras a serem testadas

Para a interpretaccedilatildeo dos resultados satildeo utilizados os controles como padratildeo

de comparaccedilatildeo O controle negativo eacute incolor ou pode apresentar uma coloraccedilatildeo

celeste suave O controle positivo que eacute de baixo tiacutetulo possui coloraccedilatildeo celeste

diferente do controle negativo As amostras incolores ou com coloraccedilatildeo celeste

suave semelhante ao controle negativo satildeo consideradas presumivelmente natildeo

reativas para anticorpos contra T cruzi As amostras que evidenciam uma

coloraccedilatildeo azul ou celeste claramente distinguiacutevel do controle negativo satildeo

consideradas presumivelmente reativas para anticorpos contra T cruzi Com o

emprego de soluccedilatildeo de parada e um espectrofotocircmetro para a leitura das amostras

as definiccedilotildees de amostras positivas e negativas satildeo dadas por um valor de corte ou

limite de decisatildeo - tambeacutem denominado de cut-off ou ponto de corte - que eacute

13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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13

calculado somando-se a densidade oacuteptica (DO) meacutedia do controle negativo +

0100

Com este caacutelculo a amostra seraacute considerada presumivelmente natildeo reativa

para anticorpos de T cruzi se seu valor de DO(densidade oacuteptica) for menor que o

valor limite do cut-off e uma amostra seraacute considerada presumivelmente reativa

para T cruzi se seu valor de DO for igual ou maior que o limite do cut-off

Para que esses valores de DO e cut-off sejam aceitos ou seja para que o teste

tenha criteacuterio de aceitabilidade devem ser preenchidos os seguintes criteacuterios

bull a DOmeacutedia do controle negativo deve ser menor que 250nm

bull a DO meacutedia do controle positivo deve ser maior ou igual ao cut-off

Se estas condiccedilotildees natildeo forem observadas os testes deveratildeo ser repetidos

para descartar uma possiacutevel falha operacional ou funcionamento inadequado do kit

Antes da emissatildeo dos resultados definitivos no caso de uma amostra positiva a

mesma deve ser testada novamente para confirmaccedilatildeo Se o resultado for negativo

no segundo teste a amostra eacute considerada natildeo reativa Se a amostra reproduzir o

resultado positivo recomenda-se nova coleta repeticcedilatildeo do teste de ELISA e ainda

a realizaccedilatildeo de um outro exame confirmatoacuterio

42 Descriccedilatildeo do meacutetodo de Enzima Imuno Ensaio (ELISA) qualitativo para

detecccedilatildeo de anticorpos contra o viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e

HTLV - II) em soro ou plasma humano

O Ensaio Imunoenzimaacutetico qualitativo para detecccedilatildeo de anticorpos contra o

viacuterus T-linfotroacutepico tipos I e II (HTLV - I e HTLV - II) em soro ou plasma humano eacute

realizado no Hemobanco de Curitiba (PR) com o kit Murex HTLV I + II produzido

por Murex Biotech Limited do Reino Unido

O princiacutepio do teste consiste na pesquisa de anticorpos na amostra estando

as microcavidades revestidas com peptiacutedeos sinteacuteticos representando regiotildees

imunodominantes das proteiacutenas do envelope do HTLV-I e HTLV-II e uma proteiacutena

transmembracircnica recombinante do HTLV-II (antiacutegenos) O conjugado eacute uma mistura

dos mesmos peptiacutedeos de antiacutegenos e da proteiacutena transmembracircnica recombinante

do HTLV-I ambos marcados com peroxidase de raacutebano

As amostras de teste e soros controles satildeo incubadas nas cavidades e

anticorpos contra HTLV-I ou contra HTLV-II presentes na amostra ou soro controle

ligam-se aos antiacutegenos das microcavidades Com a adiccedilatildeo do conjugado este se

14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

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14

liga a qualquer anticorpo especiacutefico jaacute ligado aos antiacutegenos nas cavidades formando

assim um complexo antiacutegeno-anticorpo-antiacutegeno A amostra que natildeo conteacutem

anticorpos especiacuteficos natildeo permite a formaccedilatildeo do complexo

Cada placa deve ser considerada separadamente ao calcular e interpretar os

resultados do teste Para a determinaccedilatildeo do valor de cut-off deve-se calcular a

meacutedia dos controles negativos Se uma das cavidades apresentar valor de

absorbacircncia 015nm acima da meacutedia de todas as outras trecircs esta deve ser

descartado e nova meacutedia deve ser calculada a partir das duas duplicadas remanescentes

O valor de corte para determinaccedilatildeo das amostras reagentes e natildeo-reagentes

deve ser calculado adicionando-se 02nm agrave meacutedia das replicatas do controle

negativo

A aceitaccedilatildeo do teste como confiaacutevel exige que sejam preenchidos os seguintes

criteacuterios

a absorbacircncia do controle negativo natildeo deve ultrapassar o valor de 02nm

a absorbacircncia do controle positivo deve ser maior que 08nm acima da

absorbacircncia meacutedia do controle negativo

Paraa interpretaccedilatildeo dos resultados utiliza-se os controles como padratildeo para

comparaccedilatildeo O controle negativo apresenta uma coloraccedilatildeo rosa devido agrave adiccedilatildeo do

substrato O controle positivo possui coloraccedilatildeo alaranjada depois da adiccedilatildeo da

soluccedilatildeo de parada Visualmente as amostras de cor rosa semelhantes agrave do

controle negativo satildeo consideradas natildeo reagentes para anticorpos contra HTLV l-ll

e as alaranjadas satildeo consideradas reagentes As amostras reagentes em primeiro

teste no caso especiacutefico do Hemobanco satildeo repetidas em duplicata Se elas

reproduzirem o resultado positivo eacute solicitada do doador uma nova amostra para

ser retestada Se ainda sim o resultado for positivo aconselha-se a realizaccedilatildeo de

um outro tipo de teste confirmatoacuterio como por exemplo Western Blot

43 Descriccedilatildeo do teste de floculaccedilatildeo em lacircmina para triagem de Siacutefilis

No caso especiacutefico do Hemobanco o teste utilizado para detecccedilatildeo de

anticorpos contra o agente causai da siacutefilis (Treponema pallidum) eacute o Immutrep

USR Antigen fabricado por Omega Diagnostics Ltd do Reino Unido

Este teste eacute baseado no meacutetodo de floculaccedilatildeo para detecccedilatildeo qualitativa ou

semi-qualitativa de anticorpos no soro ou plasma O Immunotrep USR eacute uma

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

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siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

15

modificaccedilatildeo do Immuntrep-VDRL Antigen do qual foi obtido um reativo estabilizado

e pronto para uso Os reagentes do kit contecircm material de origem humana

confirmadamente negativo para anticorpos contra HCV HIV I e HIV II e tambeacutem

HbsAg Quando se mistura o antiacutegeno com as reaginas contidas na amostra as

partiacuteculas produziratildeo uma floculaccedilatildeo visiacutevel ao microscoacutepio A ausecircncia de

floculaccedilatildeo indica um resultado negativo

O teste eacute realizado em uma lacircmina de vidro esmerilhada que possui 12

cavidades largas de cerca 2cm de diacircmetro e satildeo bastante rasas (cerca de 02-

03mm de profundidade) O procedimento de anaacutelise deve ser realizado com

amostras de soro ou plasma frescos natildeo hemolisados contaminados ou lipecircmicos

pois estes podem interferir no resultado As amostras natildeo devem ser diluiacutedas Os

reagentes devem ser armazenados entre 2 e 8degC mas no momento da realizaccedilatildeo

do teste devem estar agrave temperatura ambiente (20-25degC) e devem ser agitados antes

de serem utilizados mas sem produzir espuma O teste qualitativo segue o seguinte

procedimento

pipetar 50jjI de soro na cavidade da placa

adicionar 22|jl de antiacutegeno homogeneizado agrave cada amostra

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 100x

Para interpretaccedilatildeo dos resultados o kit fornece um controle positivo com

tiacutetulo de cerca de 14 que deve ser utilizado como paracircmetro de comparaccedilatildeo Caso

o controle positivo natildeo esteja dentro da especificaccedilatildeo ou dos niacuteveis de controle

toda a bateria de teste deve ser repetida Um resultado eacute considerado positivo se na

observaccedilatildeo ao microscoacutepio a amostra apresentar grumos (floculaccedilatildeo) Natildeo

apresentando ela eacute considerada natildeo reativa Caso a amostra apresente floculaccedilatildeo

o teste deve ser repetido e reproduzindo deve ser feita a diluiccedilatildeo (titulaccedilatildeo) como

descreve o procedimento abaixo

O teste semi-quantitativo preparar uma seacuterie de diluiccedilotildees do soro a ser

testado (12 14 18 112 132 164)

pipetar 50|jl de amostra de diferentes diluiccedilotildees em diferentes poccedilos na placa

pipetar 22pl de antiacutegeno homogeneizado a estas diluiccedilotildees

agitar a placa durante 4 minutos a 180 rotaccedilotildees por minuto

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

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siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

16

imediatamente apoacutes os 4 minutos observar o resultado ao microscoacutepio com

aumento de 10Ox

o tiacutetulo eacute a uacuteltima diluiccedilatildeo a produzir um resultado positivo (com grumos)

Alguns testes podem apresentar resultado falso-positivo quando o doador eacute

portador de outras infecccedilotildees aleacutem da Siacutefilis Se o teste apresentar um resultado

positivo recomenda-se a realizaccedilatildeo de testes confirmatoacuterios com uma nova

amostra

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

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siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

17

5 RESULTADOS

0 periacuteodo de abrangecircncia da pesquisa foi de agosto de 2005 a agosto de

2006 totalizando assim 13 meses num total de 52486 voluntaacuterios foram coletadas

44922 doaccedilotildees e 45578 amostras foram testadas Os nuacutemeros de voluntaacuterios e de

coletas natildeo satildeo os mesmos pois muitos dos potenciais doadores natildeo passam pela

triagem cliacutenica e o nuacutemero de sorologias realizadas natildeo eacute igual ao nuacutemero de

coletas realizadas devido aos procedimentos internos do laboratoacuterio

Natildeo soacute na triagem cliacutenica mas inclusive por outros motivos como natildeo portar

documentaccedilatildeo adequada muitos voluntaacuterios acabam por natildeo poderem doar sangue

e consequentemente natildeo tecircm amostra coletada para teste e estatildeo assim excluiacutedos do levantamento

A Tabela 1 mostra a diferenccedila entre o nuacutemero de voluntaacuterios e o nuacutemero de

amostras cccedilletadas e a partir destes dados o percentual de doadores que natildeo

realiza a doaccedilatildeo A Tabela 2 mostra o nuacutemero de coletas realizadas e o nuacutemero de

testes realizados

Tabela 1 Nuacutemero de voluntaacuterios amostras coletadas e percentagem de doadores

inaptos na triagem por mecircsano

Ano Mecircs

Nuacutemero de

doadores

voluntaacuterios

Nuacutemero de

coletas

realizadas

de inaptos na

doaccedilatildeo

2005 Agosto 5248 4362 1688

Setembro 3788 3355 1143

Outubro 3294 2794 1518

Novembro 3569 3250 894

Dezembro 4281 3846 1016

2006 Janeiro 3984 3594 979

Fevereiro 3162 2674 1543

Marccedilo 4467 4095 833

Abril 4056 3298 1869

Maio 3932 3271 1681

Junho 3962 3303 1663

Julho 4269 3693 1349

Agosto 4474 3387 2430

Total 52486 44922 1441

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

18

Analisando estes dados pode-se observar que em meacutedia 1441 dos

doadores natildeo realizam a doaccedilatildeo de sangue por inaptidatildeo na triagem

Tabela 2 Nuacutemero de coletas realizadas e nuacutemero de sorologias realizadas por

mecircsano

Ano MecircsNuacutemero de coletas

realizadas

Nuacutemero de sorologias

realizadas

2005 Agosto 4362 4405

Setembro 3355 3335

Outubro 2794 2890

Novembro 3250 3096

Dezembro 3846 3826

2006 Janeiro 3594 3636

Fevereiro 2674 2814

Marccedilo 4095 3949

Abril 3298 3451

Maio 3271 3202

Junho 3303 3371

Julho 3693 3726

Agosto 3387 3877

Total 44922 45578

Analisando os dados da Tabela 2 eacute perceptiacutevel a diferenccedila entre o nuacutemero

de coletas e o nuacutemero de testes realizados Isso se deve aos procedimentos

internos do laboratoacuterio muitas vezes impedem o teacutermino das anaacutelises e a liberaccedilatildeo

do resultado da amostra em um dia agraves vezes em dois dias Para facilitar o

levantamento dos dados foi usado como base o nuacutemero de sorologias realizadas

por periacuteodo de tempo

Nos meses de agosto de 2005 a 2006 foram coletadas 45578 doaccedilotildees que

foram testadas para HTLV lll doenccedila de Chagas e Siacutefilis entre outras patologias

totalizando 100 da amostragem pesquisada No ano de 2005 o mecircs de agosto

teve uma parcial de 966 do total das amostras pesquisadas setembro 732

outubro 634 novembro 679 e dezembro 839 As amostras do ano de 2006

tiveram percentuais de 798 em janeiro 617 em fevereiro 866 em marccedilo

757 em abril 703 em maio 740 em junho 817 em julho e 851 em

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

19

agosto Do total de amostras averiguadas 17552 (3851) foram testadas em 2005

e 28026 (6149) em 2006 como mostra a Tabela 3

Tabela 3 Nuacutemero de sorologias realizaacuteatildeas e seu respectivo percentual mensal

anual do total de amostras pesquisadas

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

das amostras

testadas por mecircs

das amostras

testadas por ano

2005 Agosto 4405 966 3851

Setembro 3335 732

Outubro 2890 634

Novembro 3096 679

Dezembro 3826 839

2008 Janeiro 3636 798 6149

Fevereiro 2814 617

Marccedilo 3949 866

Abril 3451 757

Maio 3202 703

Junho 3371 740

Julho 3726 817

Agosto 3877 851

Total 45578 10000 10000

Estes resultados permitem concluir que haacute uma certa estabilidade no volume

de amostras coletadas ao longo dos anos

51 Analise da ocorrecircncia de doenccedila de Chagas

Do total de 45578 amostras averiguadas no caso da doenccedila de Chagas 260

doaccedilotildees (057) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

foram re-testadas para o marcador Destas 201 (7731 das amostras reagentes

em primeira anaacutelise) apresentaram na repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo

reagente 33 (1269) resultado indeterminado e 26 (1000) se mostraram

positivas como mostra a Tabela 4

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

20

Tabela 4 Resultados de doenccedila de Chagas em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicada

Ano Mecircs Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero Nuacutemero

resultados de de

negativos indeter- positivos

minado

2005 Agosto 4405 31 27 2 2

Setembro 3335 22 21 0 1

Outubro 2890 37 34 3 0

Novembro 3096 20 16 0 4

Dezembro 3826 15 9 2 4

2006 Janeiro 3636 28 27 1 0

Fevereiro 2814 9 5 0 4

Marccedilo 3949 9 6 3 0

Abril 3451 8 4 3 1

Maio 3202 3 1 2 0

Junho 3371 7 6 1 0

Julho 3726 20 13 3 4

Agosto 3877 51 32 13 6

Total 45578 260 201 33 26

Ateacute o iniacutecio do ano de 2007 para o caso da Doenccedila de Chagas apoacutes a

repeticcedilatildeo em duplicata da primeira amostra coletada as amostras definidas como

reagentes (indeterminadas ou positivas) a rotina do Hemobanco tinha como

procedimento convocar o doador para coletar uma nova amostra visando a

confirmaccedilatildeo dos resultados Poreacutem das 59 amostras que apresentaram tais

resultados ateacute a data de 03 de dezembro de 2007 apenas 34 (5763) tiveram

realmente uma nova amostra coletada e um doador trouxe agrave Instituiccedilatildeo um laudo

com resultado realizado em outro laboratoacuterio

Destas novas amostras 24 confirmaram resultado anterior ou seja 5

repetindo o resultado positivo e 19 repetindo o resultado indeterminado Apenas 7

amostras negativaram sendo 1 de resultado positivo e 6 de resultado anterior

indeterminado E as trecircs amostras restantes que haviam apresentado resultado

indeterminado com a nova anaacutelise se mostraram positivas para doenccedila de Chagas

conforme indicado na Tabela 5 Para as novas amostras definidas como negativas

21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

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fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

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FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

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21

presume-se que no momento da doaccedilatildeo ou em algum momento antes da doaccedilatildeo

tenha ocorrido algum tipo de contaminaccedilatildeo tais como ingestatildeo de alimentos

gordurosos uso de alguns medicamentos ou ateacute mesmo partiacuteculas de poeira

presentes no ar ou na pele do doador entre outros As diversas possibilidades de

contaminaccedilatildeo em qualquer momento durante o processo em que a amostra pode

estar exposta podem alterar eou interferir nas ligaccedilotildees especiacuteficas das moleacuteculas

no teste

Tabela 5 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para doenccedila de Chagas

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 5

Positivo Negativo 1

Indeterminado 0

Positivo 3

IndeterminadoNegativo 6

Indeterminado 19

Resultado externo negativo 1

Total 35

lsquo Resultado de outro laboratoacuterio trazido pelo doador

52 Analise da ocorrecircncia de HTLV lll

Do total de 45578 amostras averiguadas para o caso de HTLV lll 143

doaccedilotildees (031) tiveram resultado diferente de negativo na triagem soroloacutegica e

destas 99 (6923 das amostras reagentes em primeira anaacutelise) apresentaram na

repeticcedilatildeo em duplicata resultado natildeo reagente 16 (1119) resultado

indeterminado e 28 (1958) se mostraram positivas conforma indicado na Tabela

6

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

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CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

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CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

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Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

22

Tabela 6 Resultados de HTLV lll em primeira anaacutelise e apoacutes a repeticcedilatildeo em

duplicada

Ano Mecircs

Nuacutemero de

sorologias

realizadas

Nuacutemero de

casos

reagentes

em

primeira

anaacutelise

Resultados obtidos apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata

Nuacutemero de Nuacutemero deNuacutemero de

resultados indetermi-positivos

negativos nados

2005 Agosto 4405 21 19 1 1

Setembro 3335 8 3 1 4

Outubro 2890 12 10 0 2

Novembro 3096 12 10 1 1

Dezembro 3826 10 5 3 22006 Janeiro 3636 8 6 0 2

Fevereiro 2814 11 7 3 1

Marccedilo 3949 20 10 4 6

Abril 3451 10 9 1 0

Maio 3202 10 7 2 1

Junho 3371 6 3 0 3

Julho 3726 11 9 0 2

Agostc 3877 4 1 0 3

Total 45578 143 99 16 28

Quando as amostras apresentam resultado reagente em primeira amostra

coletada para HTLV lll (indeterminadas ou positivas) o procedimento rotineiro no

Hemobanco eacute de convocar o doador para nova coleta visando a confirmaccedilatildeo dos

resultados Das 99 amostras com resultados positivos ateacute a data de 03 de

dezembro de 2007 somente 35 (3535) tiveram uma nova amostra coletada e

uma doaccedilatildeo teve um resultado realizado em outro laboratoacuterio para confirmaccedilatildeo do

resultado

Destas novas amostras 19 confirmaram resultado anterior sendo 12

repetindo o resultado positivo e 7 repetindo o resultado indeterminado Quinze

amostras negativaram sendo 6 de resultado positivo 6 de resultado anterior

indeterminado e 3 de confirmatoacuterio por Impnoblot (uma amostra que tinha resultado

indeterminado) e Western Blot (2 amostras que tinham resultados positivos) Uma

das amostras de resultado indeterminado foi constatada como positiva e uma

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

23

amostra que tinha status de positiva com a nova amostra ficou como resultado

indeterminado para HTLV lll conforme mostra a Tabela 7 Para as novas amostras

definidas como negativas presume-se que no momento da doaccedilatildeo tenha ocorrido

algum tipo de contaminaccedilatildeo

Tabela 7 Resultados das doaccedilotildees reagentes e resultados de novas amostras

coletadas para HTLV lll

Resultado da primeira

amostra coletadaResultado da nova amostra Nuacutemero de amostras

Positivo 12

Positivo Negativo 6

Indeterminado 1

Positivo 1

Negativo 6Indeterminado

Indeterminado 7

Resultado externo negativo 3

Total 36

Resultado de Western Blot e Imunblot realizado em outros laboratoacuterios

53 Anaacutelise da ocorrecircncia de Siacutefilis

No caso especiacutefico da triagem soroloacutegica para Siacutefilis as amostras que tecircm

resultado positivo em primeira anaacutelise satildeo repetidas no mesmo momento e eacute feita

ainda titulaccedilatildeo da amostra para definir semi-quantitativamente a positividade da

amostra Do total de amostras analisadas 240 tiveram resultados reagentes como

mostra a Tabela 8 variando na titulaccedilatildeo de 11 ateacute 1128

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

24

Tabela 8 Resultados de VDRL para Siacutefilis

Ano MecircsNuacutemero de sorologias

realizadas

Nuacutemero de casos

positivos para VDRL

2005 Agosto 4405 30

Setembro 3335 15

Outubro 2890 17

Novembro 3096 21

Dezembro 3826 30

2006 Janeiro 3636 17

Fevereiro 2814 14

Marccedilo 3949 20

Abril 3451 20

Maio 3202 12

Junho 3371 17

Julho 3726 12

Agosto 3877 15

Total 45578 240

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

25

6 DISCUSSAtildeO

Com base nos dados apresentados na Tabela 3 pode-se perceber que o

nuacutemero de doaccedilotildees realizadas ao longo dos anos tem uma certa estabilidade E

natildeo poderia ser diferente em funccedilatildeo da necessidade contiacutenua de sangue nos

Hemobancos para atender agrave demanda crescente por este elemento vital Todavia

haacute a necessidade da conscientizaccedilatildeo da populaccedilatildeo sobre a importacircncia da doaccedilatildeo

de sangue e de poliacuteticas governamentais eficazes de estimulaccedilatildeo ao voluntariado

Os resultados de enzimaimunoensaio realizados para triagem soroloacutegica

muitas vezes apresentam resultados falso-positivos ou falso-negativos por esse

motivo recomenda-se que para os casos de amostras reagentes em primeira

anaacutelise seja repetido o ensaio em duplicata e observados os valores de cut-off

mostrados A reprodutibilidade das amostras eacute um paracircmetro que deve ser

cuidadosamente observado mesmo para identificar problemas de procedimento

De acordo com dados internos do Hemobanco onde se sabe que em meacutedia

4 das doaccedilotildees realizadas todo mecircs apresentam sorologia positiva para alguma

das patologias testadas e comparando com os resultados aqui pesquisados pode-

se concluir que a ocorrecircncia de casos reagentes apoacutes nova anaacutelise da mesma

amostra coletada para doenccedila de Chagas representa aproximadamente 013 das

doaccedilotildees mensais reagentes Para HTLV lll a ocorrecircncia de casos representa

aproximadamente 010 e para Siacutefilis a ocorrecircncia representa aproximadamente

1 doaccedilotildees mensais As amostras que tem resultados reagentes apoacutes a repeticcedilatildeo

em duplicata tecircm os hemocomponentes descartados por medida de seguranccedila

assim como aqueles que apresentam resultados negativos mas com valores de

cut-off ligeiramente mais altos

Resultados de ELISA natildeo satildeo considerados definitivos ainda mais em se

tratando de triagem soroloacutegica Devido aordquo grande volume de testes realizados e

mesmo levando em consideraccedilatildeo a alta especificidade e sensibilidade dos testes

disponiacuteveis atualmente natildeo se pode diagnosticar uma patologia somente por estas

anaacutelises Consideraccedilotildees cliacutenicas e outros testes confirmatoacuterios satildeo recomendados

A respeito do nuacutemero de novas amostras o ideal seria que todas as doaccedilotildees

tivessem uma nova anaacutelise de uma nova amostra pois muitas vezes o que

acontece eacute a presenccedila de algum contaminante ou interferente tais como a ingestatildeo

de alimentos gordurosos que podem alterar o pH e agraves vezes a conformaccedilatildeo das

moleacuteculas que participam da reaccedilatildeo hemaacutecias hemolisaacutedas uso de alguns

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

26

medicamentos partiacuteculas de poeira ou de outras substacircncias que podem estar

presentes no ar na pele do doador ou no material indevidamente esterilizado

utilizados durante o processamento da amostra entre outros todavia o retorno do

doador agrave Instituiccedilatildeo para coleta de uma nova amostra eacute um fato que depende do

interesse pessoal do doador o que muitas vezes natildeo acontece ou o prazo de

retorno eacute muito longo o que explica muitos resultados sem confirmaccedilatildeo

No que se refere ao nuacutemero de coletas vale ressaltar que os resultados

analisados levaram em conta a data de realizaccedilatildeo dos testes soroloacutegicos o que

facilitou a coleta dos dados Poreacutem o uso desta metodologia implicou numa

disparidade na contabilizaccedilatildeo dos dados no que diz respeito ao nuacutemero de casos

em relaccedilatildeo ao nuacutemero de coletas usando como subgrupos os meses dos anos

investigados pois a partir da contagem das amostras principalmente de final e de

comeccedilo de mecircs estas muitas vezes eram computadas nas classes de meses

diferentes Por exemplo uma amostra de doaccedilatildeo do ultimo dia de um mecircs acabava

por entrar na contagem como sendo uma amostra do primeiro dia do mecircs seguinte

Isso aconteceu devido ao procedimento laboratorial de preparaccedilatildeo das

amostras uma vez que a amostra coletada natildeo eacute imediatamente processada Os

procedimentos recomendados para separaccedilatildeo do soro e dos elementos figurados

incluem um tempo de descanso das amostras antes mesmo de serem

centrifugadas permitindo a formaccedilatildeo do coaacutegulo uma vez que os tubos onde satildeo

depositadas as amostras natildeo possuem anticoagulante Desta maneira haacute uma

maior garantia de que as amostras estaratildeo com a menor quantidade possiacutevel de

interferentes pois com a retraccedilatildeo do coaacutegulo as substacircncias mais pesadas

presentes no sangue total seratildeo ldquoretidasrdquo no emaranhado formado pela proacutepria

coagulaccedilatildeo

Outro motivo para a demora na realizaccedilatildeo dos testes eacute o uso de

equipamentos com sistema simultaneidade restrita em que os vaacuterios testes satildeo

realizados por bateria Logo para formaccedilatildeo da bateria eacute necessaacuterio que as

amostras sejam acumuladas Na verdade este sistema eacute mais eficaz em niacutevel de

triagem soroloacutegica devido ao volume de amostras que eacute realizado pois assim eacute

possiacutevel fazer uma quantidade maior de testes em menos tempo

Devido a estes e outros motivos foi entatildeo realizada a contagem das

amostras somente pela data de realizaccedilatildeo dos ensaios com as amostras Existe um

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

27

sistema de conferecircncia implantado no Hemobanco que garante que todas as

amostras coletadas tenham a sorologia realizada

A agilidade no processo assegura que os resultados sejam mais rapidamente

liberados o que eacute extremamente necessaacuterio em se tratando de banco de sangue

pois haacute toda uma demanda de hemocomponentes que deve ser suprida

O nuacutemero de voluntaacuterios para doaccedilatildeo natildeo coincide com o nuacutemero de coletas

realizadas em funccedilatildeo de alguns criteacuterios de seleccedilatildeo estabelecidos na RDC ndeg 153

(BRASIL 2004) que impedem a doaccedilatildeo Estas medidas satildeo tomadas para evitar

riscos tanto aos receptores de hemocomponentes como aos proacuteprios doadores e

aos funcionaacuterios do banco de sangue Estas medidas ajudam a garantir a qualidade

dos hemocomponentes produzidos pois satildeo de extrema importacircncia para quem os

recebe

Fatores como anemia realizaccedilatildeo de tatuagens eou cirurgias uso de alguns

medicamentos peso abaixo dos 50 kg idade abaixo de 18 ou acima de 65 anos

praticas sexuais consideradas de risco frequumlecircncia de doaccedilotildees acima de 3 meses

para mulheres e 2 meses para homens histoacuterico de algumas doenccedilas (como

doenccedilas hematoloacutegicas cardiacuteacas renais pulmonares hepaacuteticas auto-imunes

diabetes hipertireoidismo entre outras) pulso anormal pressatildeo arterial alterada

gravidez evidecircncia de alcoolismo ou suspeita de uso de drogas entre outros satildeo

criteacuterios que natildeo permitem que a doaccedilatildeo seja realizada Desta maneira o doador

entra para o registro de voluntaacuterios mas natildeo tem seu sangue coletado nem mesmo

para anaacutelises soroloacutegicas

Em 057 dos casos potencialmente reagentes na triagem para Doenccedila de

Chagas foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de

procedimento Desta forma uma percentagem de 7731 de amostras falso-

positivas na triagem natildeo eacute um fato alarmante Haacute tambeacutem que se levar em

consideraccedilatildeo eventuais problemas com o kit utilizado com os materiais de

laboratoacuterio e com falha humana dentre outros A partir disso as amostras que

foram determinadas como reagentes na segunda anaacutelise teriam que apresentar

reprodutibilidade no caso de coleta de nova amostra Este dado pode ser verificado

na Tabela 5 em quecirc dos 35 casos reagentes que tiveram nova amostra 7714

reproduziram o resultado nos testes de ELToA

Em 031 de coletas potencialmente reagentes na triagem para HTLV os

resultados seguem o mesmo paracircmetro que a avaliaccedilatildeo para doenccedila de Chagas

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

28

foram incluiacutedas tambeacutem aquelas repeticcedilotildees devido a erros de procedimento Neste

caso obteve-se 6923 de amostras falso-positivas na triagem Observando a

Tabela 7 verifica-se uma reprodutibilidade de 5555

Para HTLV eacute recomendada a realizaccedilatildeo do Western Blot e do Imunobloting

Para doenccedila da Chagas satildeo tambeacutem utilizados o teste de Imunofluescecircncia indireta

e o teste de esfregaccedilo sanguumliacuteneo Poreacutem este uacuteltimo pode apresentar resultados

falso-negativos pois se presentes em pequeno nuacutemero na circulaccedilatildeo os parasitos

podem natildeo ser detectados no esfregaccedilo sanguumliacuteneo

Analisando os resultados para as amostras positivas para Siacutefilis por

exemplo recomenda-se a anaacutelise por outras metodologias O meacutetodo mais

comumente utilizado eacute o teste de Imunofluorescecircncia indireta conhecido tambeacutem

por FTA-Abs do inglecircs Fluorescent Treponemic Antibody Absorption no qual

pesquisa-se anticorpos IgM e IgG contra a espiroqueta no soro do doador Outro

teste bastante utilizado em conjunto eacute o de floculaccedilatildeo

Em trabalho publicado por MENDES (1996) realizado na cidade de Ribeiratildeo

Preto (SP) foram analisadas 16127 amostras por VDRL e confirmadas por FTA-Abs

resultando dentre outras conclusotildees em 90 de falso-positivos por VDRL na

triagem

Assim projetando este percentual e fazendo uma comparaccedilatildeo estima-se

que das 240 amostras reagentes para VDRL aproximadamente 20-22 apresentem

resultadas falso-positivos se testados pelo meacutetodo FTA-Abs

No momento de entrega dos resultados de triagem do Hemobanco os

profissionais da aacuterea meacutedica orientam que o doador realize o(s) teste(s) com

metodologias mais especiacuteficas para confirmaccedilatildeo do resultado como no caso das

doaccedilotildees reagentes para HTLV em que os doadores retornaram agrave Instituiccedilatildeo com

resultados de Imunoblot e Western Blot

No caso do exame externo trazido pelo doador para a doenccedila de Chagas

natildeo foi possiacutevel verificar a metodologia utilizada Devido ao volume de amostras

que satildeo triadas diariamente em bancos de sangue fica inviaacutevel a confirmaccedilatildeo de

todos os resultados por este motivo eacute indicado ao doador uma outra instituiccedilatildeo para

a realizaccedilatildeo do exame confirmatoacuterio

29

7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

BRASIL Agecircncia Nacional de Vigilacircncia Sanitaacuteria Resoluccedilatildeo da Diretoria

Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

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7 CONCLUSAtildeO

Comparando os dados obtidos neste trabalho com dados publicados do

Hemocentro de Satildeo Paulo pode-se verificar que a incidecircncia de casos reagentes

para HTLV doenccedila de Chagas e Siacutefilis eacute muito semelhante Em pesquisa realizada

no ano de 2001 (SALLES 2003) demonst[a que em relaccedilatildeo ao nuacutemero de casos

reagentes na triagem por testes de ELISA para HTVL e doenccedila de Chagas e por

VDRL para Siacutefilis e assim como os dados levantados nesta pesquisa foram

encontrados percentuais de 006 das amostras reagentes para HTLV 110 para

siacutefilis e 014 para doenccedila de Chagas

Conforme observaccedilatildeo do trabalho de SALLES (2003) a tendecircncia para os

resultados reagentes em triagem soroloacutegica eacute diminuir por diversos motivos como

a introduccedilatildeo de um sistema informatizado em rede que impede novas doaccedilotildees por

indiviacuteduos com sorologia anteriormente reativa e triagem cliacutenica em que doadores

em situaccedilotildees de risco satildeo impedidos de doar dentre outros

Desta maneira faz-se necessaacuteria uma conscientizaccedilatildeo dos doadores em

relaccedilatildeo a praacutetica segura da doaccedilatildeo de sangue pois ainda hoje em dia muitas

pessoas dirigem-se aos bancos de sangue natildeo pelo seu altruiacutesmo mas sim para

realizar os testes de maneira confiaacutevel e gratuita e certificar seu estado geral de

sauacutede Poreacutem o Sistema Puacuteblico de Sauacutede o faz sem comprometer o desperdiacutecio

de materiais funcionaacuterios e os receptores destas doaccedilotildees pois sabe-se que muitas

pessoas faltam com a verdade na avaliaccedilatildeo cliacutenica para poderem doar sem levar

em consideraccedilatildeo a janela imunoloacutegica e outros fatores que comprometem os

resultados dos testes

Existem vaacuterias situaccedilotildees em que um paciente necessita de uma transfusatildeo

de sangue desde um volume abaixo do normal ateacute uma ineficiecircncia de transporte

de oxigecircnio pelas ceacutelulas passando por uma deficiecircncia na coagulaccedilatildeo entre

outros Mas enfim quando haacute necessidade de uma transfusatildeo de um transplante

ou de uma cirurgia de grande porte a condiccedilatildeo jaacute debilitada do paciente natildeo o

permite que no caso de uma contaminaccedilatildeo por algum patoacutegeno o processo de cura

e de melhora do quadro cliacutenica seja aperfeiccediloado deixando este paciente numa

situaccedilatildeo certamente comprometida pois seu sistema imunoloacutegico tambeacutem estaacute

Desta maneira a veracidade das informaccedilotildees por parte do doador faz-se de extrema

importacircncia

30

8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

e Molecular Rio de Janeiro Revinter 1995

BARNES Robert D Zoologia dos Invertebrados 4aediccedilatildeo Satildeo Paulo Livraria Roca 1990

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Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

Universitaacuteria 1994

CARNEIRO Ana C BARBOSA Isabel P amp CARNEIRO CHAVES F Siacutendrome de

Crest e Hipertensatildeo Pulmonar Prognoacutestico sombrio Acta Meacuted Port 2004 17

409-414

CIMERMAN Benjamin CIMERMAN Seacutergio Parasitologia Humana e seus

fundamentos gerais Satildeo Paulo Atheneu 1999

CORAL Luiz Carlos QUEIROZ Luiz Paulo de GRZESIUK Anderson Kuntz

Paraparesia espaacutestica tropical mielopatia associada ao HTLV-I Arq

Neuropsiquiatria 199856(1) 120-122

CRAIG Charles Franklin amp FAUST Ernest Carroll Parasitologia Cliacutenica Rio de

Janeiro Editora Guanabara Waissman Koogan 1974

FELBERG Sergio DANTAS Paulo Elias Correcirca Diagnoacutestico e tratamento da

siacutendrome de Sjotildegren Arq Bras Oftalmol 200669(6)959-63

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8 REFEREcircNCIAS BIBLIOGRAacuteFICAS

ABBAS Abul K LICHTMAN Andrew H amp POBER Jordan S Imunologia Celular

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Colegiada - RDC ndeg153 de 14 de junho de 2004 Disponiacutevel em lthttpe-

legisanvisagovbrleisrefpublicshowActphpid=11662gt Acesso em 29nov2007

CAMPOS Carlos Alberto Moreira Roteiro Ilustrado de Parasitologia Estudo

esquemaacutetico de protozoaacuterios e helmintos da aacuterea Biomeacutedica Natal UFRN Ed

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lthttpwwwaidsgovbrmainaspViewlD=7BDA56F3742D128A2D40FB2D

B16F2DD08A1F5DD07B7Dampparams=itemlD=7B4ADE05AF2D2A5D2D4E

222D92AF2D2EF4F1E455DC7DampUIPartUID=7BD90F22DB2D05D42D

46442DA8F22DFAD4803C88987Dgt Acesso em 21 nov 2007

MINISTEacuteRIO DA SAUacuteDE Brasil 2007 Siacutefilis preocupa mais que H1V em

gestantes 26 de outubro de 2007

Disponiacutevel em

lthttpwwwaidsgovbrdataPagesLUMISDA56F374ITEMID0B3C92995F904437A

1091936187EED42PTBRIEhtmgt Acesso em 21nov2007

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Atheneu 1995

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25 nov 2007

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CARVALHO Gisah A Interferecircncia de Anticorpos em Testes de Funccedilatildeo

Tireoideana Relato de Caso SEMPR - Hospital de CliacutenicasUniversidade Federal

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SciELO - Brasil Revista Brasileira de Hematologia e Hemoterapia 2002 24(1) 3-

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SAacuteEZ-ALQUEacuteZAR Amadeo NEWSLAB A revista do laboratoacuterio moderno Triagem

soroloacutegica para Siacutelifis em doadores de sangue Ano XIV ndeg 82 junjul 2007

SAacuteEZ-ALQUEacuteZAR Amadeo NEWSLAB A revista do laboratoacuterio moderno Doenccedila

de Chagas Diagnoacutestico e triagem soroloacutegica Ano XIV ndeg 83 agoset 2007

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PROIETTI Fernando Augusto e GIPH (Grupo Interdisciplinar de Pesquisa do HTLV-

lll) HTLV-ill e doadores de sangue determinantes associados agravesoropositividade em populaccedilatildeo de baixo risco Revista Sauacutede Puacuteblica 2003

37(4)470-6

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Janeiro Guanabara Koogan 1991

33

VINHAES Maacutercio C DIAS Joatildeo Carlos Pinto Doenccedila de Chagas no Brasil

Cadernos de Sauacutede Puacuteblica vol16 suppl2 Rio de Janeiro 2000

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VINHAES Maacutercio C DIAS Joatildeo Carlos Pinto Doenccedila de Chagas no Brasil

Cadernos de Sauacutede Puacuteblica vol16 suppl2 Rio de Janeiro 2000