Farmacogenética e Farmacocinética - P450

Relação Entre o Polimorfismo Genético do CYP2D6 e Farmacocinética do

Tramadol Em Voluntários Chineses(Seminário sobre o artigo científico)

CRISTIANO COTA BANDEIRA

Princípios da Farmacodinâmica e FarmacocinéticaProfessor Evanguedes Kalapothakis

Outubro de 2011

Universidade Federal De Minas Gerais - UFMGInstituto de Ciências Biológica - ICBMestrado em Inovação Biofarmacêutica

Artigo Original

Introdução

CYP2D6– Importante enzima da família do citocromo

p450– Responsável pela catálise de mais de 80

drogas (Ex. Antidepresivos tricíclicos, neurolépticos, beta bloqueadores, opióides e antiarítimicos)

Introdução

• Descoberta do polimorfismo da oxidação da debrisoquina(antihipertensivo)/esparteina(antiarrítimico)

(1970)

• Um grande número de estudos famacogenéticos tem sido realizados e variações etnicas entre grupos foram

observadas

Introdução

• 7% Caucasianos

• 1% Asiáticos

CYP2D6 pobres

Metabolizadores

Mutações nos AlelosCYP2D6*1CYP2D6*2CYP2D6*10

Genes CYP2D6(Asiáticos)

Redução na Atividade Catalítica da Enzima

IntroduçãoMutações nos Alelos

CYP2D6*1Formação de Pro34, Arg296 e Ser 486

CYP2D6*2Substituição Arg296Cys e Ser486Thr

CYP2D6*10Mutação em C/T 188 e G/C 4268 causando substituições em Pro34Ser e Ser486Thr

Redução na Atividade Catalítica da Enzima

Introdução

• TRAMADOL– Droga sintética– Agonista dos receptores µ (nociceptivos)– Usado para alivio da dor crônica severa e

aguda– Droga com menor eficáfia do que a morfina– Rapidamente absorvido por via oral– Apresenta picos de concentração plasmática

de 1-3h

Metabolismo do Tramadol

O-demetiltramadol

M1

M2

mono-N-demethyltramadol

Metabolismo do Tramadol

O-demetiltramadol

M1

M2

mono-N-demethyltramadol

O – desmetilação induzida por CYP2D6 (in vitro e in vivo)

Introdução

• Pelo Tramadol ser um analgésico bem tolerado, foi escolhido para realizar uma nova proposta de ensaio de fenotipagem para o CYP2D6.

Introdução

• Para detectar um conhecido polimorfismo nucleotídico (SNPs) do CYP2D6 foi utilizado a técnica de Microarray (Oligonucleotide microarray) para avaliar de forma mais simples a frequencia alélica de CYP2D6 na população Chinesa (Método rápido e confiável)

Objetivos

• Investigar a relação do polimorfismo genético do CYP2D6 e a farmacocinética do tramadol na saúde das pessoas Chinesas

• Se a correlação Genotípica e Fenotípica é importante para determinar se o tramadol é adequado para investigar drogas para medir a atividade de CYP2D6.

Materiais e Métodos

• Voluntários (Pacientes Chineses)– Protocolo aprovado pelo comitê de ética Chinese

People liberation Army General Hospital e conduzidos de acordo com o Guia de Boas Práticas Clínicas.

– Participaram da fase genotípica do estudo 312 voluntários

– 18 - 45 anos (33,8± 5,8)– 55 – 80 Kg (63,6 ± 8,4)– Não podiam ter feito uso de outro medicamento,

fumado e nem ter ingerido álcool, 4 semanas antes do estudo.


• Voluntários (Pacientes)– Todos os pacientes foram considerados

saudáveis, submetidos a histórico médico, exames físicos, laboratoriais e eletrocardiológicos

– Nenhuma insuficiencia renal ou hepática foi encontrada

– Durante os testes fenotípicos, nenhum uso de drogas, álcool ou bebidas com cafeína foi permitido.


• Genotipagem do CYP2D6– Amostras de DNA– Sintese dos Oligonucleotídeos– Reação em cadeia da Polimerase (PCR) e

eletroforese com gel de agarose– Construção do wild-type e do plasmídeo mutante

recombinante (PGEM T4-vector/Promega)– Preparação do MICROARRAY do DNA– Hibridização e detecção do sinal– Sequenciamento do DNA (DNA Sequencer)

Materiais e Métodos• Protocolo de Estudo

– De todos os voluntários que participaram dos estudos genotípicos 40 foram selecionados para os testes fenotípicos

– De acordo com seus genótipos, foram divididos em 4 grupos (10 em cada grupo)

Materiais e Métodos• Após um descando rápido, todos os

pacientes dos 4 grupos tomaram 100mg de Cloridrato de tramadol com 200mL de água.

• Duas alimentações padronizadas foram padronizadas de 4 e 10 horas após a administração da droga.


• Amostras de sangue venoso foram coletadas em tubos heparinizados imediatamente após 0,5 -1 – 1,5 – 2 – 3 – 4 – 6 – 8 – 12 – 16 – 24 – 32 horas após administração.

• O plasma foi separado e mantido a -20ºC até o momento da análise.

• A urina foi reservada e coletada nos tempos de 0-8, 8-16, 16-32 horas após a dosagem.


• Análise quantitativa de Tramadol e Metabólico (M1) usando HPLC – Detector de Fluorescência

• Detecção e quantificação desses componentes no plasma e na urina das amostras

Materiais e Métodos• Parâmetros Farmacocinéticos

– Utilizou-se o software DAS v 1.0 (Anhui Medical University, Wuhu, China)– Taxa de eliminação constante (k) foi estimada utilizando a inclinação da

concentração plasmática terminal– O tempo de meia vida (T1/2) foi calculado dividindo 0,693 por k.– A área total da curva concentração plasmática X tempo (AUC 0-32) foi calculado

seguindo a regra do trapezio simples– A AUC de 0 para infinito (AUCinf) foi calculada como AUC inf=AUC0-32 + Ct/k

(Ct é a última concentração plasmática medida)– Clearance de formação do tramadol e seu M1 foi calculado: CLform = AeM1(0–

32) ⁄AUCinf.– O Clearance oral do tramadol (CL0)foi determinado dividindo a dose do tramadol

pela AUCinf calculada– O Clearance renal (CLR) foi calculado dividindo a quantidade de tramadol

excretado sem mudança pela urina após as 32h [Ae 0-32] pela AUC 0-32 de tramadol no plasma (CLR = Ae 0-32 / AUC 0-32 )

– O Cmáx , concentração máxima da droga no plasma, foi obtido com a medida do valor.

– A taxa do metabolização (MR) do M1 urinário foi calculada (Aet/AeM1), de cada um dos voluntários (0-8, 8-16 e 16-32h)

Resultados

• Genótipos das 312 amostras de DNA

41CYP2D6*10/*10128

26,6CYP2D6*2/*1083

10,6CYP2D6*2/*233

13,5

8,3

%

CYP2D6*1/*242

CYP2D6*1/*126

GenótipoVoluntários

Resultados

• Características dos Voluntários– 40 selecionados (25 machos e 15 femeas) 10

por grupo

Resultados

Resultados

Resultados

Resultados

Resultados

• Parâmetros Farmacocinéticos Avaliados

Resultados


Resultados


Resultados• Parâmetros Farmacocinéticos Avaliados

Resultados

Conclusão• A atividade de CYP2D6 é importante para a

avaliação da farmacocinética do tramadol

• Voluntários CYP2D6*10 mostraram baixa redução da atividade mais que em 10* homozigoto do que 10* heterozigoto

• O metabolismo do tramadol foi prejudicado severamente em CYP2D6*10/*10 e em CYP2D6*2/*10 se comparados com CYP2D6*1/*1 e CYP2D6*2/*2

Conclusão• Por esses alelos serem os mais comuns nos voluntários

chineses, genótipos CYP2D6 podem ser um fator determinante fenótipo CYP2D6 dessa população

• Esses dados vem a elevar as prospectivas de estudos futuros que relacionam o polimorfismo genético de CYP2D6 e a farmacocinética do tramadol em pessoas Chinesas na busca de outros tratamentos mais específicos

• No entanto, genotipagem de CYP2D6*10 não é suficiente para predizer a disposição de tramadol no tratamento individual de pacientes

OBRIGADO!

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