Isospora belli e Cryptosporidium parvum

O oocisto imaturo contém um esporoblasto no seu interior, que e uma massa central representando o parasito.

Isospora belli

A maturação do oocisto depende das condições do meio ambiente (umidade, temperatura e oxigênio) e pode ocorrer em menos de 24 horas ou até em três dias, dando origem ao oocisto maduro

oocisto maduro contém dois esporocistos e quatro esporozoítos em cada esporocisto.

Isospora belli

ESQUIZOGONIA: divisão nuclear seguida de divisão do citoplasma, constituindo vários indivíduos isolados simultaneamente. Existem três tipos de esquizogonia merogonia (produz merozoíto), gametogonia (produz microgametas) e esporogonia (produz esporozoítos).

Ciclo de vida

Cryptosporidium parvum

Oocisto com 4 esporozoíto no seu interior

Ciclo de vida

Técnicas laboratoriais para coccídeosO exame de fezes é feito após utilização de métodos de concentração ou emprego de métodos especiais de coloração, como, por exemplo: (ver De Carli-229)

Método de Henriksen-PohlenzMétodo de Kinyoun modificado (a frio)Método modificado de Ziehl-Neelsen ( a quente)Método modificado de safranina (a quente) Método modificado de Ziehl-Neelsen-Dimetilsulfóxido (DMSO)Obs: Tricrômico e hematoxilina férrica (não apresentam bons resultados)

O diagnóstico pode, ainda, ser feito pela pesquisa de anticorpos circulantes e técnicas moleculares (PCR)

Coloração de Ziehl-Neelsen

Usado para corar o gênero Mycobacterium

M. tuberculosis, M. bovis e M. aviumM. Leprae

Reações tintoriais próprias – são conhecidas com “álcool-ácido-resistentes” (B.A.A.R.) evidenciadas pela coloração de Ziehl-Neelsen.

Coram-se pela mistura fucsina mais ácido fênico aquecido, que penetra no citoplasma e resistem à descoloração com uma mistura de ácido e álcool.

Procedimento

-Lâminas com esfregaço de escarro de paciente tuberculoso;

- Bateria de corantes de Ziehl-Neelsen: - Fucsina: Dissolver 3g de fucsina básica em 10 ml de etanol 90%-95%, em seguida adicionar 90 ml de uma solução aquosa de fenol a 5% - Álcool – ácido: Adicionar 3 ml de HCl concentrado em 97 ml de etanol a 90%-95%. - Azul de Metileno: Dissolver 0.3 g de azul de meti leno em 100 ml de água destilada.

-Fixar a lâmina pelo calor (colocar a lâmina contendo o material na estufa pelo menos 01 hora,fixar também pelo calor, deixando esfriar).

-Cobrir a lâmina com fuscina fenicada;-Aquecer até a emissão de vapores, sem deixar o corante secar, por 3 a 5 minutos; - Lavar em água corrente; - Em seguida descorar completamente com álcool-ácido; - Lavar em água corrente novamente; - Contracorar com azul de metileno por 30 segundos;- Lavar em água corrente novamente; -Secar ao ar;- Examinar a lâmina ao microscópio com objetiva de imersão.

Leitura e interpretação

-Os B.A.A.R. apresentam-se como bastonetes finos, corados em vermelho, sobre fundo corado em azul.

Método Modificado de Ziehl-Neelsen (a quente)para I. Belli e C. parvum

Procedimento:

-Preparar o esfregaço com fezes frescas ou preservadas; - Deixar secar a temperatura ambiente ou pelo calor (colocar a lâmina na estufa a 70°C por 10 minutos);-Corar com fuscina-fenicada, aquecendo a lâmina até a emissão de vapores, por 5 minutos, sem deixar o corante secar ; - Escorrer o corante e lavar em água corrente; - Em seguida descorar com solução aquosa de ácido sulfúrico a 5% por 30segundos; - Lavar em água corrente. Drenar; - Contracorar com azul de metileno a 0.3% por 1 minuto;- Lavar em água corrente novamente; -Secar ao ar;- Examinar a lâmina ao microscópio;

Oocisto de Isospora belli

Levar fezes para a próxima prática

-Trazer para próxima aula modelos de laudos de EPF

-Já tiveram????-Pesquisa de Trichomonas vaginalis (colheita da amostra masculina e feminina; preservação da amostra; meios de transporte; exame microscópico a fresco e lâmina corada, colorações)-Capítulo 8