Materiais e Métodos para isolamento de fungos micorrizicos arbuscilares

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Materiais e Métodos para isolamento de fungos micorrizicos arbuscilares, técnica utilizada para o isolamento de esporos coletados em campo e peneiramento dos mesmos em peneiras de malhas destintas passando por duas centrifugações

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Materiais e MtodosIsolamentoO isolamento de esporos de fungos micorrzicos arbustulares FMAs ser feito atravs da separao dos mesmos contidos nas amostras de solos coletados no campo.Primeiramente ser realizado a mistura das amostras de solo coletadas e gua (no sei se destilada) , em seguida essa soluo peneirada consecutivamente em peneiras de diferentes malhas, inicialmente com malha de 0,42mm e posterior em malha de 0,053mm; o material remanescente transferido com o auxilio de uma pisseta para o tubo de centrifuga, no qual ir passar pela primeira centrifugao com durao de 3 minutos a 3000rpm; aps esse processo descarta-se gua sobrenadante e adiciona-se a soluo de sacarose (procurar a quantidade de sacarose a adicionar); a amostra passar pela segunda centrifugao com durao de 2 minutos a 2000rpm, deve ser misturado a soluo do tubo centrifuga a sacarose adicionada antes de ser submetida a segunda centrifugao; novamente o peneiramento feito em malha de 0,053mm e os esporos coletados devem ser transferidos para a placa de ptri.Montagem de LminasCom o auxilio da pipeta de Pasteur ser transferido pores da soluo que contenha os esporos coletados, essa soluo sera colocada em dois pontos da pipeta e ser aguardado a secagem sem que haja ressecamento dos esporos.Em seguida ser colocado sobre um dos pontos que contenham os esporos uma gota de Polivinil Lactoglicerol (PVLG); e no outro uma mistura de PVLG e Reagente de Meizer, o procedimento a seguir a sobreposio dos esporos com lamnulas, sendo necessrio um leve presso sobre a gota de PVGL + Reagente de Meizer para que os esporos sejam rompidos.As lminas devem secar por 5 dias em temperatura ambiente ou 2 dias em temperatura a 60C antes da selagem com esmalte incolor.