7/24/2019 Medidas de Crescimento Das Amostras
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Medidas de crescimento das amostras
Contagem celular ao microscpio
Neste mtodo de medio do crescimento de microalgas necessrio ter
em ateno a
recolha da amostra da cultura, a sua homogeneizao, a cmara de
contagem, e omicroscpio utilizado. A contagem celular foi
concretizada num microscpio (Olmpus !"
#$% e utilizou&se um hemacitmetro, tipo de cmara de Neu'auer
de $, mm de
profundidade. A escolha da cmara de contagem te)e em ateno a
densidade das culturas,
o tamanho e a forma das clulas ou colnias a serem contadas, a
presena e *uantidade de
filamentos e+tracelulares, 'ainhas, ou mucilagem dissol)ida. ste
hemacitmero possui
duas cmaras nas *uais e+iste uma grelha de contagem com -
*uadrados de mm,
su'di)ididos em *uadrados de #$ /m, de $$ /m e #$ /m e em
rectngulos de #$ + $
/m. O )olume total em am'as as cmaras (0 *uadrados de mm% de
$,$$0 ml. 1e)ido a
estas caracter2sticas, neste hemacitmetro lida&se facilmente
com clulas cu3o tamanho )aria
entre e 4$ /m e *uando a densidade de cultura de $5&$6
clulas ml&.
7uando necessrio, as amostras a contar foram fi+adas com lugol,
de modo a preser)&lasat 8 sua contagem ao microscpio. Antes da
contagem, e+aminaram&se os conte9dos da
cmara so' 'ai+a ampliao no microscpio com o intuito de )erificar
se os padr:es de
distri'uio das clulas seriam os satisfatrios. m'ora no se3a
poss2)el a)aliar 20quando se encontra presente uma distribuio
aleatria das clulas, concebvel determinar quando esta no existe.
Uma vez avaliada a
distribuio das clulas no emacitmetro, a conta!em "oi e"ectuada
auma ampliao de 200x e#ou $00x. % n&mero total de clulas
contabilizadas nunca "oi in"erior a $00 clulas. %s resultados
obtidos"oram sempre expressos em n&mero de clulas por
mililitro. 's
conta!ens ao microscpio "oram realizadas diariamente e a taxa
de
crescimento "oi calculada por re!resso linear durante a
"aseexponencial de crescimento, de acordo com (uillard )*+-/
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Concentrao celular' concentrao celular das culturas "oi
re!istada no primeiro e no <imodia dos ensaios utilizando uma
cmara de 1eubauer. oi necess3riorealizar uma diluio de acordo com a
concentrao da cultura, demaneira que, por cada campo, contando com
* mm2, se encontrassementre -0 a -00 clulas. ' concentrao celular
"oi obtida atravs dase!uinte "rmula/4oncentrao celular )cel#ml 5 n6
clulas contadas x *0$ x diluio
Leitura da absorvncia
7aseia8se no uso de densidade optica para avaliar ocrescimento
de
microal!as atravs da obstruo 9sica da luz pelas clulas. :uanto
maisclulas estiverem presentes na amostra, maior ser3 a absoro de
luz e
menor sera a passa!em de luz pela amostra. ' densidade ptica
das
culturas determinada utilizando8se um espectro"otmetro.
Utilizaram8se cuvettes de vidro para a leitura da absorvncia
e"ectuada a ;$0 nm,
comprimento de onda que permite uma boa correspond
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Peso seco da amostra
@ara determinar o peso das amostras e"ectuou8se 9ltrao sob
v3cuo
atravs de 9ltros de 9bra de vidro tipo EatmanF (#4 )$ mm
dedimetro com poro irre!ular de G*,2 Hm. ' "iltrao "oi antecedida
pela
seca!em dos 9ltros na estu"a por cerca de 2$ a I064 e a pesa!em
dosmesmos. ' necessidade dos 9ltros serem submetidos a seca!em
antes
do processo de separao das clulas do meio advm da
possibilidadedestes poderem conter umidade. 'ps o periodo de
seca!em,
re!istaram8se novamente os valores do peso dos 9ltros
possibilitandodeterminar o peso seco da amostra al!al num
determinado volume
9ltrado. 's culturas "oram 9ltradas a cada dois dias.
;he 'iomass
