PROF. MARCELO TEIXEIRA PACHECO

UNIVERSIDADE FEDERAL DO RIO GRANDE DO SULFACULDADE DE AGRONOMIA

DEPARTAMENTO DE PLANTAS DE LAVOURA

PARTE II

TRANSFERÊNCIA DOS GENES CLONADOS PARA A PLANTA

PRINCIPAIS MÉTODOS

Transformação via Agrobacterium tumefaciens

Biolística ou pistola de genes

Eletroporação (descarga elétrica)

VETOR (veículo) DE TRANSFORMAÇÃO DE TRANSGENES

GALHA DA COROA

Sintoma infecção por A. tumefaciens Plasmídeo Ti

A. tumefaciens

TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

Agrobacteriumtumefaciens

A. tumefaciens

Plasmídio Ti

T-DNADNAcromossômico

T-DNA

Célula vegetaltransformada

Tumor dagalha

Cromossomo

TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

Célula vegetal

Co-cultivo de células da planta com Agrobacterium

“desarmada”

Transferência para meiode cultura com antibiótico, herbicida ou outro método

de seleção

Regeneração da planta transgênica

Testes da planta transgênica em laboratório e mais tarde

a campo

PRINCIPAIS ETAPAS DA TRANSFORMAÇÃO VIA Agrobacterium tumefaciens

Bombardeamento de partículas ou Biolística

GENE DE INTERESSE

MICROPARTÍCULASDE OURO

DNA ADERE ÀSPARTÍCULAS

ACELERAÇÃODAS PARTÍCULAS

LIBERAÇÃODO DNA NO

NÚCLEO

SELEÇÃO DASCÉLULAS

TRANSFORMADAS

REGENERAÇÃODAS PLANTAS

TRANSGÊNICAS

TIPOS DE PISTOLAS DE GENES

PISTOLA DE GENES EM AÇÃO

CLICAR AQUI PARA VER ANIMAÇÃO

(após a animação recarregar a apresentação)

EXEMPLO DE TESTE A CAMPO

Milho transgênico Bt

(Resistente a diferentes insetos)

Milho não transgênico

Gene de seleçãoResistência a antibiótico,

Resistência a herbicida, …Gene Bt

CASSETE DO GENE Bt

UM GENE SIMPLIFICADO

Promotor Seqüência de terminação

Seqüência codificando gene Bt

Controla quando, como e quanto o

gene vai ser expresso

Contém a informação do que o gene faz

Diz onde termina o gene

GENES DEVEM SER “CONSTRUÍDOS” ANTES DE SEREM USADOS NA TRANSFORMAÇÃO DE PLANTAS

PROMOTOR, GENE E SEQÜÊNCIA DE TERMINAÇÃO PODEM VIR DE ORGANISMOS DIFERENTES

PORQUE A EFICIÊNCIA DE TRANSFERÊNCIA DO TRANSGENE É BAIXA (1 A 5%) É NECESSÁRIO USAR UM GENE MARCADOR PARA SELEÇÃO.

(RESISTÊNCIA A ANTIBIÓTICOS E A HERBICIDAS MAIS COMUMENTES USADOS, MAS EXISTEM OUTRAS TÉCNICAS)

NECESSÁRIOS VÁRIOS EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO PARA SELECIONAR UM TRANSGÊNICO COM AS CARACTERÍSTICAS DESEJADAS

NEM TUDO É TÃO SIMPLES

EXEMPLOS DE DIFERENTES EVENTOS DE TRANSFORMAÇÃO

BATATA RESISTENTE AO FUNGO Verticillium dahliae

Transgênico

Não-transgênico Transgênico

Transgênico